INMUNOLOGA

Semestre VI, 2013.

Mara Victoria Garrido Rasmussen
TEMA 1: Introduccin al funcionamiento del sistema inmune
CLASE 1, 7/10/2013.

La integridad de las barreras fsicas es crtica para evitar la infeccin. La superficie de las mucosas es equivalente a una
cancha de tenis. A diferencia de la piel, esta capa es ms fina y est especializada en intercambiar nutrientes y
compuestos de descarte, lo cual la hace ms susceptible a ser invadida por patgenos.
Las superficies mucosas representan la principal va de entrada de los patgenos. Son superficies que abarcan en
conjunto un rea mayor que la superficie corporal; algunas son estructuras con epitelios
monoestratificados que cumplen funciones fisiolgicas de absorcin e intercambio gaseoso. Por estos motivos, las
superficies mucosas tienen rganos linfoides asociados que tienen estructuras y funcionalidad particulares para
garantizar la mxima proteccin del organismo sin alterar la funcin del rgano expuesto.

Qu ocurre cuando las barreras fsicas y qumicas son superadas?

Elementos bsicos del sistema inmune: Arquitectura del SI que se compone por clulas (como linfocitos, granulocitos y
dems) y componentes solubles (como molculas de reconocimiento, citoquinas,, quimioquinas, defensinas etc).

Distintas clulas generadas a partir de un precursor comn en la mdula sea participan en el funcionamiento del sistema
inmune. Adems de estas, otras clulas, como las endoteliales y vasculares participan en el funcionamiento de este
sistema.
Tanto los glbulos rojos, como las plaquetas y los distintos leucocitos (glbulos blancos) comienzan su desarrollo en la
mdula sea a partir de un progenitor comn pluripotente, la clula madre hematopoitica. A partir de esta se
diferencian los precursores de la tres grandes lneas de clulas sanguneas, el progenitor eritroide que dar lugar a las
plaquetas y eritrocitos; el progenitor mieloide del que se derivarn los neutrfilos, eosinfilos, basfilos y monocitos, y
finalmente el progenitor linfoide que da lugar a los linfocitos B y T, y las clulas natural killer (NK).

El porcentaje normal de estas clulas en la circulacin sangunea es bastante variable como se anota en la figura. Como
veremos, las clulas derivadaS de la lnea mieloide y las clulas NK tienen un importante rol en el funcionamiento en la
respuesta innata contra patgenos, mientras que los linfocitos B y T dan lugar a respuestas adaptadas a cada infeccin
particular y forman parte de los que se considera como respuesta inmune adaptativa.

Algunas de estas clulas migran normalmente a los tejidos, donde se diferencian y permanecen como clulas
centinelas, entre estas se encuentran los mastocitos que circulan como precursores en la sangre y completan su
maduracin cuando transvasan a periferia, y los macrfagos y clulas dendrticas los cuales se diferencian, a partir de los
monocitos circulantes, en distintas subcategoras dependiendo del tejido en que residan. Otros leucocitos tambin
pueden migrar a los tejidos si son reclutados a los mismos en situaciones de infeccin.

Qu seales permiten la activacin de la inmunidad? El ingreso de patgenos dispara la respuesta inmune innata a
travs de seales de peligro. La aparicin de componentes de patgenos o el dao celular que aparecen cuando se
vencen las barreras fsicas constituyen seales de peligro que activan la respuesta inmune. En esta activacin juegan un
rol muy importante las clulas residentes de los tejidos, macrfagos, clulas dendrticas, y mastocitos.

Estrategia de reconocimiento del SI innato: PAMPs. El SI innato funciona sobre la base de receptores de membrana o
solubles que estn codificados en el ADN de la lnea germinal y que evolucionaron para reconocer estructuras de
patgenos altamente conservadas (PAMPs, Patogen-Associated Molecular Patterns). Estos receptores se denominan PRR:
Pattern Recognition Receptors.
Los PAMPs corresponden a estructuras qumicas del patgeno que por ser vitales para el mismo son altamente
conservados y compartidos entre varias especies. Por ejemplo los lipopolisacaridos (LPSs) que forman la cara externa de
la membrana exterior de las bacterias gram negativas, es uno de los PAMPs comnmente reconocido por los PRRs. En
forma similar los pptidoglicanos, que dan rigidez a la pared bacteriana, y que aparecen como una espesa capa exterior
en los gram positivos y una ms fina por debajo de la membrana exterior en los gram negativos, son tambin importante
blanco de reconocimiento de los PRRs. Otros componentes de la pared bacteriana tambin son reconocidos por PRRs.
Otros PRRs reconocen las estructuras de carbohidratos ricas en mananos y glucanos, caractersticas de la pared de
levaduras. En el caso de los virus, existen receptores PRRs que en la membrana celular, vesculas o en el citoplasma
reconocen estructuras que solo se encuentran en estos patgenos, como por ejemplo, regiones ricas en C y G de DNA no
metilado, y RNA de doble cadena.

El reconocimiento de PAMPs da lugar al inicio de la respuesta inmune.

El sistema inmune innato funciona sobre la base de receptores que estn distribuidos estratgicamente en distintos
compartimentos celulares y tambin existen en forma soluble. Estos receptores estn codificados en el DNA de la lnea
germinal y evolucionaron para reconocer estructuras de patgenos altamente conservadas (PAMPs: Patogen-Associated
Molecular Patterns ).
Estos receptores se denominan PRRs (Pattern Recognition Receptors). Dependiendo del PRRs, la unin de los PAMPs
puede provocar distintos efectos. Por ejemplo en el caso de los TLR (Toll Like Receptors), un grupo de aproximadamente
10 receptores transmembrana con similitud estructural y
variado de reconocimiento de motivos de patgenos, la unin del ligando especfico produce la sealizacin intracelular
que activa la clulas dando lugar a la secrecin de citoquinas proinflamatorias, la secrecin de sustancias con actividad
antimicrobiana, y la expresin de molculas coestimulatorias que son necesarias para el curso posterior de la respuesta
inmune. En forma similar actan otros PRRs, como los NODs y RIGs que se encuentran en el citoplasma.

En el caso de los receptores endocticos, estos promueven la unin e internalizacin de microorganismos o partculas
(fagocitosis) que son destruidos en el interior celular. Estos reconocen estructuras ricas en manosa (receptores para
manosa) o glucanos (receptores para glucanos) y estn presentes en todas las clulas fagocticas. En estas clulas
tambin existen receptores scavenger
que reconocen distintos ligandos en patgenos. Muchos de estos receptores para patgenos, responden tambin a
ligandos propios que no deberan encontrarse en un tejido sano. Por ejemplo, algunas protenas de shock trmico (HSP),
fragmentos de degradacin de hialunoranos (polmeros de la matriz extracelular que son degradados en caso de dao
celular), ATP extracelular (como puede ocurrir cuando hay actividad plaquetaria en caso de heridas), cristales de c. rico,
la presencia de clulas apoptticas (clulas que han muerto en forma programada), etc.
El reconocimiento de productos derivados del dao celular o de la matriz celular (DAMPs) tambin contribuye a controlar
el inicio y finalizacin de la respuesta inmune.
Adems de los PAMPs, muchos de los receptores para patgenos PRRs, pueden tambin unir ligandos resultantes del
dao celular (DAMPs) que normalmente se encuentran en el ncleo o el citosol. Adems de los PRRs, otros receptores
especficos para DMAPs participan en el proceso. La unin de los DAMPs a el conjunto de estos receptores da lugar a
seales inflamatorias similares a las generadas por la activacin PAMPs-PRRs.

La arquitectura del sistema inmune es crtica para que las clulas y componentes solubles acten en forma coordinada.
Las clulas residentes de los tejidos, macrfagos, clulas dendrticas, y mastocitos, pueden reconocer estructuras en los
patgenos que disparan la respuesta inmune y la destruccin de los microorganismos invasores. Como resultado aparece
un foco inflamatorio que recluta clulas y plasma de los capilares sanguneos, y a su vez, provoca el flujo de linfa con
clulas, citoquinas y antgenos hacia los ganglios. En los ganglios comenzar la respuesta inmune adaptativa.
Los rganos linfoides secundarios captan antgenos de todos los tejidos a travs de la linfa (ganglios) directamente de
la sangre (bazo). Tambin hay rganos linfoides asociados a las mucosas, que tienen mecanismos de muestreo
particulares para las cavidades expuestas.
Las clulas diferenciadas en el tejido linfoide secundario circulan y se distribuyen segn su funcin. Alguna de las clulas
efectoras generadas salen del ganglio por va linftica y llegan al sitio de infeccin por va sangunea donde ejercen su
accin.

SISTEMA INMUNE INNATO: Principio de funcionamiento.

Las distintas especies de seres vivos comparten un gran nmero de elementos de defensa en comn: sistema inmune
innato. El sistema inmune adaptativo es caracterstico de los vertebrados. Si bien existen ortlogos de muchas
molculas del sistema inmune innato que son compartidas (por ejemplo los Toll-Like Receptors o pptidos
antimicrobianos (defensinas), que se han encontrado desde plantas a mamferos), hay una serie de macromolculas que
son caractersticas del sistema inmune de los vertebrados con mandbulas. Estas macromolculas, que iremos viendo a lo
largo del curso, incluyen: los
anticuerpos, el receptor de
los linfocitos T y Molculas
del Complejo Mayor de
Histocompatibilidad. En
particular los anticuerpos y el
receptor de los linfocitos T,
son las molculas que
confieren al sistema inmune
adaptativo la capacidad de
reconocer especficamente
virtualmente cualquier
estructura qumica que pueda
ingresar al organismo, y sobre
esta base montar una
respuesta inmune adaptada
al patgeno en cuestin.

El sistema inmune adaptativo es activado por la respuesta inmune innata y da a lugar a poderosos mecanismos efectores
y memoria inmunolgica.
Linfocitos T y B son los elementos crticos del funcionamiento del SI adaptativo: A diferencia del sistema inmune innato
donde todas las clulas de un mismo tipo tienen copias idnticas de los mismos receptores, la especificidad de
reconocimiento de los receptores de los linfocitos T y B
se generan en forma aleatoria durante el desarrollo de estas clulas, y por tanto tienen una distribucin clonal. De esta
forma cada clon de linfocitos B o T reconocer un antgeno nico, ms precisamente una regin o sitio de unin que se
denomina eptope.
Los linfocitos B, una vez activados, proliferan aumentando en nmero y se diferencian secretando anticuerpos, que son
glicoproteinas con dos sitios de unin al epitope y una regin constante denominada Fc. Una vez que los anticuerpos se
unen al antgeno, muchas de las funciones efectoras (funciones por las cuales se logra la eliminacin del patgeno) estn
determinadas por como el Fc interaccin con receptores en otras clulas o activa el sistema complemento.
En el caso de los linfocitos T, estos reconocen su epitope, que es siempre un pptido derivado de una protena del
patgeno, el cual se encuentra asociado a un tipo especial de receptores de membrana (las molculas del MHC) de la
clula blanco. De esta interaccin depender la activacin (proliferacin y diferenciacin) de los linfocitos T vrgenes (que
no han tenido contacto previo con el antgeno), y tambin sus funciones efectoras. Estas funciones efectoras,
dependiendo del tipo de linfocito T involucrado, pueden resultar en la muerte de la clula blanco, o por el contrario en su
activacin o regulacin.

El reconocimiento por los linfocitos B y T:

- El concepto de antgeno: Un antgeno es un microorganismo, fragmentos del mismo, molculas o fragmentos de las
mismas que son reconocidas por los linfocitos B y T.
- El concepto de eptope: Los receptores de las clulas B y T reconocen regiones discretas del antgeno, esta regin se
denomina determinante antignico o eptope.
Mientras que los receptores de los linfocitos B (BCR) o su forma secretada (anticuerpos), reconocen cualquier tipo de
estructura qumica, el reconocimiento del receptor de los linfocitos T (TCR) est restringido a pptidos asociados a un tipo
particular de receptores celulares propios, las molculas del MHC.

El sistema inmune adaptativo funciona sobre la base de la seleccin clonal:

El sistema inmune adaptativo funciona sobre la base de una distribucin clonal de receptores vinculados al
reconocimiento especfico. Qu significa esto? Que en el proceso de generacin de los linfocitos, se produce en forma
aleatoria un receptor de membrana con una determinada especificidad, es decir con la capacidad de reaccionar con
una nica estructura qumica. De este modo, en cada clula hay una nica especificidad. Ntese que este proceso
conlleva el riesgo de producir clones reactivos contra componentes propios. Es por esta razn que existen mecanismos
de tolerancia para eliminar los clones autoreactivos. Una vez que se ha generado el repertorio de linfocitos, opera un
mecanismo de seleccin clonal por el cual los clones con especificidad por componentes propios son eliminados,
mientras que los clones con especificidad por componentes no propios o alterados (como los de las clulas tumorales)
son estimulados por el antgeno para proliferar (aumento de nmero) y diferenciarse (cambios fenotpicos). Los cambios
fenotpicos dan lugar a la aparicin de clulas que van a contribuir a la destruccin de la agresin (por ejemplo capaces de
secretar anticuerpos) mientras que otras se convierten en clulas de memoria, que aseguran una rpida respuesta en
caso de que vuelva a producirse la infeccin.
Las clulas protagonistas del sistema inmune adaptativo son el linfocito B y el linfocito T.
La funcin principal del linfocito B es la secrecin de anticuerpos. Los anticuerpos o inmunoglobulinas son glicoprotenas
que tienen sitios de unin al antgeno y una regin constante vinculada a las funciones efectoras de los mismo. Se
encuentran como receptores de membrana formando complejos con otras protenas (BCR) o como productos solubles
secretados por linfocitos B diferenciados en plasmocitos. A travs de su unin los anticuerpos
a) bloquean o neutralizan directamente al antgeno que reconocen,
b) opsonizan patgenos favoreciendo su fagocitosis por clulas como los macrfagos y neutrfilos, los cuales tienen
receptores que se unen a la regin constante de los anticuerpos,
c) disparan la va clsica del complemento al unirse al patgeno, y
d) median la actividad de citotoxicidad celular de las NK y eosinfilos al unirse a los antgenos expresados en clulas
infectadas o tumorales, o a la superficie de parsitos.
Los linfocitos T tiene una funcin central en la regulacin de la respuesta inmune y participan adems directamente en la
destruccin de los agentes agresores. Reconocen al antgeno a travs de su receptor de membrana (TCR) que no se
secreta. Hay dos tipos de receptores: ALFA-BETA y GAMMA-DELTA. La funcin de los linfocitos T con receptores GAMMA-
DELTA es menos comprendida y nuestro conocimiento principal es sobre los linfocitos T con receptores ALFA-BETA. A
diferencia de las inmunoglobulinas que pueden unirse a un amplio espectro de estructuras qumicas, los linfocitos T con
receptores ALFA-BETA solo reconocen pptidos asociados a receptores de membrana (denominadas molculas del
complejo mayor de histocompatibilidad, MHC) presentes en clulas propias del individuo. Cuando un linfocito T virgen
reconoce a su antgeno (si se cumplen una serie de condiciones) es estimulado a proliferar y diferenciarse. Esta
diferenciacin puede dar lugar a tres tipos de clulas efectoras:
a) linfocitos T citotxicos (CTL) que actan por ej. en las infecciones virales destruyendo la clula infectada,
b) linfocitos T inflamatorios (TH1) que colaboran con el macrfago aumentando su capacidad de destruir los patgenos
fagocitados,
c) linfocitos T colaboradores (TH2) que colaboran con l los linfocitos B en la produccin de anticuerpos, favoreciendo los
procesos de maduracin de la afinidad, cambio de clase y generacin de linfocitos B de memoria.

La respuesta inmune adaptativa se inicia cuando las clulas dendrticas activan a los linfocitos T.
La mayora de los estudios iniciales sobre las DC se hicieron a partir de las clulas de Langerhans (las clulas de
Langerhans son clulas dendrticas presentadoras de antgeno (clulas inmunes) de la piel y la mucosa). Estas clulas se
encuentran en la epidermis y cumplen tpicas funcin de centinelas. Estas clulas estn equipadas con receptores para
reconocer diferentes PAMPs (TRLs, NODs, RIGs, C-type lectins), quemoquinas y citoquinas inflamatorias. La activacin por
estos receptores, por ejemplo en una infeccin, promueve la migracin de la DC a los rganos linfoides secundarios y su
activacin, para que puedan participar el la activacin de otras clulas, particularmente los linfocitos T vrgenes. Esta
visin inicial del modo de funcionamiento de estas clulas se ha ido complicando, por ejemplo, algunas veces la
maduracin y activacin, conduce, no a la activacin de la inmunidad, si no a la activacin de clulas que regulan
negativamente la inmunidad, como las clulas T reguladoras. En otros casos, por ejemplo en ausencia de infeccin, las
clulas pueden madurar sin activarse, y en este caso el resultado es principalmente la anergizacin de los linfocitos T con
especificidad por los pptidos (propios del tejido normal en este caso) que presenta. Ms an el panorama adquiri un
grado mayor de complejidad al descubrirse la existencia de otros tipos de DCs, mostrando que el trmino Clulas
Dendrticas implica en realidad una red de clulas de alta heterogeneidad.

Los linfocitos T se diferencian en distintos tipos de linfocitos efectores dependiendo del patgeno causante de la
infeccin.
Durante su proliferacin las clulas T CD4 o las TC8 se dividen a una alta velocidad (cada 6-8 h) y la cromatina es
modificada para activar la expresin de determinados grupos de citoquinas y/o reprimir la expresin de otros. Esa
modificacin de la expresin se da a travs de cambios epignicos, es decir cambios que no afectan la secuencia del DNA
pero si el acceso a los distintos genes. Durante el tiempo que la clulas T completan su diferenciacin, estos cambios
epignicos de la cromatina son estabilizados, y transmitidos a las clulas hijas, de forma que una futura activacin de la
clula T efectora dar lugar a la expresin del conjunto de citoquinas caracterstico. Ese patrn de citoquinas sirve para
definir distintas poblaciones de linfocitos T efectores, y determina el tipo de inmunidad mediada por los distintos tipos de
linfocitos T efectores.
As, por ejemplo, la secrecin de IFN-gama por las clulas T TH1 coordina la respuesta inmune que facilita la destruccin
de varios tipos de patgenos, como muchos virus, bacterias y protozoarios , al activar macrfagos, clulas NK, y linfocitos
T CD8, y colaborar con las clulas B vrgenes para que estas produzcan subclases de anticuerpos como IgG1 e igG3. Por su
lado las linfocitos T TH2, que caractersticamente secretan IL-4, IL-5 e IL-13, coordinan la accin de eosinfilos, basfilos y
mastocitos, que tpicamente actan contra gusanos parsitos y larvas de insectos en sitios epiteliales, a la vez que
aumenta las secreciones mucosas y favorece la produccin de IgE. Los linfocitos T TH17, son un grupo de caracterizacin
reciente que se tpicamente secreta interleukinas de la familia de IL-17. Estas clulas actan rpidamente al inicio de la
respuesta adaptativa y promueven la secrecin por parte clulas del estrma, epitelio o macrfagos de IL-6, quemoquinas
inflamatorias y factores de crecimiento, que estimulan la produccin y reclutamiento agudo de neutrfilos que actan
rpidamente fagocitando los patgenos en el sitio de infeccin. Luego las citoquinas secretadas por la polarizacin de una
respuesta hacia TH1 o TH2.

Los linfocitos T reguladores son crticos para controlar la tolerancia a lo propio y la intensidad de la respuesta inmune.
A mediado de los noventa se demostr que la eliminacin de la fraccin de clulas CD25+ de una poblacin de linfocitos T
aumentaba la incidencia de enfermedades autoinmune en ratones. De esta forma comenz a definirse una poblacin de
clulas con capacidad de regular la respuesta inmune. Estas resultaron serlinfocitos T, que se diferencian en el timo o en
la periferia a un fenoti regulador (clulas T reguladoras, Tregs) y que funcionan controlando la respuesta inmune. Estas
clulas han mostrado tener un rol central en la induccin y mantenimiento de la tolerancia, lo cual ha sido demostrado en
numerosos experimentos de transferencia adoptiva en modelos animales en los
que han mostrado su capacidad para prevenir o curar enfermedades mediadas por cluals T como, alergia, asma,
enfermedades autoinmunes, rechazo de injertos.
Generalmente las Tregs se activan con su antgeno especfico, a travs de su TCR, y mediante citoquinas y contactos
celulares controlan la actividad de distintas clulas, por ejemplo los linfocitos T effectores (TH1, TH2, TH17) modificando
la actividad, y la clase de anticuerpos, que secretan los linfocitos B, suprimiendo la activacin de las clulas de la
respuesta inmune innata como basfilos, eosinofilos y mastocitos, y generando un fenotipo supresor en las clulas
dendrticas.

Adems del reconocimiento de los no propio el SI puede activarse por alteracin de lo propio.
Otra de las formas que existen en el funcionamiento del SI para denotar peligro est relacionado con el nivel de expresin
de molculas propias.
As por ejemplo las clulas denominadas natural killer (NK) que son clulas citotxicas (capaz de eliminar otras clulas)
tienen dos tipos de receptores que envan ya sea seales de activacin, o de inhibicin de la actividad citotxica, del
balance de esas seales depender que la clula se active. En el caso de una clula normal, estas expresan un importante
nmero de molculas denominadas MHC 1, la unin de estas molculas a los receptores inhibitorios en la clula NK,
hacen que esta no se active y no ocurre nada (como se muestra esquemticamente en la parte izquierda de la figura). Por
otro lado, en el caso de que la clula blanco este infectada por un virus, por ejemplo, el virus puede limitar la expresin
del MHC 1, a la vez que promueve la expresin de molculas propias de estrs (molculas que solo se expresan en
condiciones anormales). En este caso, la interaccin inhibitoria se perdi (por no estar presente MHC 1) y si aparece una
seal de activacin al interaccionar las molculas de estrs con los receptores correspondientes en la clula NK, lo cual da
lugar a la activacin de esta ltima que determinan la eliminacin de la clula blanco infectada.

La activacin de los linfocitos T vrgenes depende de la estimulacin que reciben de clulas dendrticas activadas en un
contexto inflamatorio.
La activacin de las clulas T vrgenes en respuesta al antgeno, y su subsiguiente proliferacin y diferenciacin constituye
una respuesta primaria de inmunidad celular. Como resultado de esta respuesta a) aumenta el nmero de clulas que
pueden responder contra ese antgeno (proliferacin), b) gran parte de las clulas se diferencian equipndose para
adquirir nuevas funciones efectoras (participar directa o indirectamente en la destruccin de patgenos) y c) otro
conjunto de clulas se diferencian dando lugar a clulas de memoria lo cual asegura una mejor respuesta en un segundo
encuentro con el mismo patgeno.

La tolerancia de los linfocitos contra componentes propios se establece durante su desarrollo (tolerancia central) y su
trnsito por periferia (tolerancia perifrica).

La circulacin celular es muy dinmica durante la respuesta, y est coordinada por la expresin de molculas de adhesin
y quemoqunas.
Por ejemplo: Linfocitos vrgenes transvasan hacia los ganglios a travs de la interaccin con molculas de adhesin de la
las vnulas del alto endotelio.

La inmunidad debe activarse con el patgeno y DESACTIVARSE con su eliminacin. Las faltas en el funcionamiento del SI
se traducen en enfermedad.
- Inmunodeficiencias: Deficiencia en la capacidad para eliminar el patgeno. Pueden ser genticas o adquiridas (VIH).
Provoca infecciones recurrentes.
- Defectos en la inmunorregulacin: Es la deficiencia en los mecanismos de regulacin. Puede provocar alergias, es decir
una respuesta exacerbada contra un alergeno, o autoinmunidad.
La autoinmunidad puede ser definida como la prdida de la auto-tolerancia. Puede surgir de lesiones genticas,
mimetismo molecular, o el estrs ambiental que prevalece sobre las salvaguardias del sistema inmune contra auto-
ataque (Christen y Herrath, 2004). Una vez que se superan estas medidas de proteccin, las acciones de la respuesta
inmune de auto muchas caractersticas con la respuesta inmune no-auto, incluyendo restringida a MHC especificidad de
antgeno y la generacin de memoria inmunolgica. Estos defectos en la inmunorregulacin generan dao tisular, cuya
gravedad depende de la intensidad del dao y del rgano afectado.
TEMA 2 y 3: Inmunidad Innata
CLASE 2, 9/10/2013.

SISTEMA INMUNE INNATO: Defensas comunes a especies de invertebrados y vertebrados.

En el reino animal, desde los organismos ms sencillos con ms de una clula, hasta los mamferos, hay elementos de
defensa que forman el SI. Como ocurre en otros ejemplos en biologa, el Sistema Inmune (SI) de los organismos
superiores se construy sobre la base de las estructuras que funcionan en organismos inferiores. Por ejemplo, la
fagocitosis (endocitosis de patgenos y posterior destruccin de los mismos en vesculas intracelulares) es un mecanismo
importante en la defensa de organismos simples como las esponjas, y que est conservado a lo largo de todo el reino
animal. Las clulas fagocticas (cito = clula, fago = que come) son los primeros elementos que aparecen como
elementos de defensa. Adems, hay un conjunto de molculas que actan como receptores de estructuras conservadas
de patgenos que tambin se encuentran ampliamente distribuidas en este rbol (complemento, receptor lectinas tipo C
y protena C-receptiva). A esa plataforma comn de respuesta a los patgenos se le conoce como Sistema Inmune
INNATO, debido a que involucra mecanismos de reconocimiento y respuesta, que son heredados como tales y estn
prontos para funcionar rpidamente.
Los receptores moleculares que participan en la respuesta Inmune Innata para detectar a los agentes agresores estn
codificados a nivel de la lnea germinal y han sido seleccionados en el proceso evolutivo. En los organismos vertebrados
(solo el 1% de los seres vivos del planeta), adems de este sistema inmune innato se desarrollaron mecanismos
adicionales de defensa que dan lugar al Sistema Inmune ADQUIRIDO o ADAPTATIVO. La caracterstica principal de este
sistema es que, por un lado, funciona sobre la base de receptores de reconocimiento, que se expresan en un tipo celular
especial (linfocitos) y que tienen distribucin clonal, es decir que en cada clon de linfocitos los receptores tienen una
especificidad nica. Por otro lado el SI Adaptativo se caracteriza por tener un sistema que memoriza la forma de
responder a un dado patgeno, y de esta manera las respuesta posteriores (un segundo encuentro con el patgeno) son
ms rpidas y eficientes.
En esta clase vamos a profundizar sobre los mecanismos de la Inmunidad Innata, analizando cules son los componentes
involucrados y los mecanismos moleculares que explican cmo stos reconocen y destruyen a los agentes agresores.
Adems, explicaremos cmo la respuesta innata globalmente induce y condiciona la respuesta adaptativa. La inmunidad
innata controla y/o limita el progreso de la infeccin e instruye a la inmunidad adaptativa.

Generalidades de la Inmunidad Innata

La Inmunidad Innata incluye a aquellos mecanismos de defensa que actan en forma inmediata al ingreso de un
patgeno (virus, bacteria, gusano helminto, etc) o al dao tisular. Esto es as porque los componentes que participan son
constitutivos o rpidamente (horas) inducidos luego del reconocimiento del agente agresor. Los componentes
constitutivos actan como centinelas que estn ubicados en las puertas de entrada del organismo, y es su interaccin con
el patgeno la que induce una respuesta rpida e inductora de la sntesis y movilizacin de otros componentes del
sistema desde la sangre al sitio del dao. Le llamamos inflamacin a esa respuesta local, disparada por los componentes
constitutivos, que modifica la microvasculatura de forma de aumentar la permeabilidad y facilitar la extravasacin
celular, permitiendo la llegada al tejido de molculas y clulas de la inmunidad innata capaces de reforzar las defensas.
En conjunto los mecanismos de defensa de la respuesta innata limitan la entrada, proliferacin y diseminacin de los
patgenos. En la mayora de los casos, son suficientes para erradicarlo y evitar la enfermedad; esto es notorio si
pensamos que en los individuos sanos, es decir con un sistema inmune normal, la frecuencia de infecciones es muy baja.
Cuando las defensas innatas son sobrepasadas por la infeccin, el proceso inflamatorio generado por la respuesta innata
dispara la activacin de la respuesta adaptativa. Esta ltima involucra la activacin de los linfocitos en rganos
especializados y requiere das o semanas para que sus efectos sean notorios. Si bien existen diferencias en el tiempo,
lugar anatmico y componentes que participan en las respuestas de la Inmunidad Innata y Adaptativa, esta divisin es
artefactual ya que los dos sistemas estn estrechamente vinculados; la respuesta innata es esencial para el desarrollo de
la respuesta adaptativa, y las clulas y factores solubles generados en esta ltima hacen ms eficientes los mecanismos
efectores innatos.
Por ltimo, recordemos que a diferencia de la Inmunidad adaptativa, la inmunidad innata no genera memoria, sus
componentes no tienen capacidad de adaptarse a los agentes patgenos con que entran en contacto; las molculas y
clulas de la inmunidad innata cuentan con un patrn de reconocimiento definido y limitado.
Por lo tanto decimos que la respuesta innata frente a la infeccin tiene dos consecuencias importantes: la primera es la
de desencadenar lo que llamamos mecanismos efectores (mecanismos que son efectivos para eliminar a los patgenos).
La segunda consecuencia de la respuesta innata es que lleva a la activacin de un proceso que conocemos como
inflamacin (coloracin roja por la llegada de ms sangre, hinchazn por la acumulacin de clulas y lquido, dolor por la
liberacin de componentes que activan las terminaciones nerviosas y tambin por la compresin de estas por la
hinchazn, aumento de la temperatura debido al metabolismo energtico aumentado).

Como ya se mencion en la primer clase, los componentes del Sistema Inmune incluyen componentes solubles que
circulan por la sangre y se encuentran en l lquido intersticial y una variedad de clulas incluyendo clulas de origen
mieloide (i.e. neutrfilos, eosinfilos, basfilos, monocitos/macrfagos, mastocitos y clulas dendrticas) y clulas de
origen linfoide (linfocitos B, linfocitos T y clulas asesinas naturales o linfocitos NK, del ingls Natural Killer).
Las clulas de origen mieloide forman parte del sistema Inmune Innato y se localizan en los tejidos perifricos,
particularmente en aquellos sitios que son puerta de entrada para los patgenos. Los linfocitos B y linfocitos T se
encuentran en estructuras altamente organizadas, conocidas como ganglios linfticos, que estn distribuidos en todo el
organismo.

Para que el sistema inmune sea eficiente es necesario que sus componentes cumplan con una serie de funciones que
incluyen:
- Limitar la entrada de agentes patgenos al medio interno (barreras de contencin)
- Poseer mecanismos para detectar (reconocer) potenciales patgenos; notar que dada la diversidad de los patgenos
este mecanismos debera garantizar una amplia diversidad de reconocimiento.
- Acoplar el reconocimiento a mecanismos efectores adecuados, capaces de destruir al patgeno que fue detectado.
- No provocar dao en el tejido propio, lo cual implica un estricto control a nivel del reconocimiento de los motivos que
disparan las respuestas (especificidad), as como tambin de la intensidad que stas alcanzan, ya que las molculas
txicas asociadas a la muerte de los patgenos no son especficas. Si la intensidad de una respuesta es desmedida, sus
efectos pueden perder especificidad y alcanzar a las clulas vecinas.
Adems, debemos recordar que la tarea del Sistema Inmune es compleja porque involucra no slo la eliminacin del
agente sino tambin la reparacin del tejido que result daado por su presencia, paso fundamental para mantener la
homeostasis. Estos mecanismos de reparacin tambin se desencadenan cuando hay dao tisular en ausencia de
infeccin, como puede ocurrir en el caso de un traumatismo estril.
Homeostasis es el estado de equilibrio dinmico que permite a los seres vivos lograr estabilidad
en las propiedades de su medio interno composicin de sus lquidos, clulas y tejidos-.

Barreras que limitan la entrada de los patgenos al medio interno

La prevencin de la entrada de patgenos al medio interno es producto de un conjunto de barreras, de tipo fsico,
qumico y microbiolgico, que forman parte de la inmunidad innata.
Las barreras fsicas que separan nuestro organismo del medio ambiente son epitelios de revestimiento como la piel y las
mucosas, caracterizados porque las uniones entre las clulas son muy fuertes, lo cual evita que los patgenos puedan
llegar al medio interno atravesando espacios intracelulares. Generalmente se intuye que la piel es la principal barrera, sin
embargo esto es una equivocacin: la piel cubre un rea de aproximadamente 2 m2 mientras este valor es de 400 m2
para las mucosas. Estos epitelios de revestimiento poseen adems elementos accesorios de defensa: pelos en la piel,
cilias en el epitelio respiratorio que a travs de su movimiento impiden la unin directa de patgenos al epitelio.
Por otro lado, estos epitelios secretan una variedad de molculas potencialmente antimicrobianas, como la lisozima,
enzimas proteolticas, y pptidos capaces de intercalarse en las membranas bacterianas y ocasionar la muerte de la
bacteria (por ej defensinas). Los epitelios tambin secretan mucus, componente que evita la unin de los patgenos al
epitelio y facilita el arrastre y eliminacin de los agentes extraos. En conjunto, estos productos sintetizados por los
epitelios constituyen barreras qumicas que limitan la entrada de patgenos. El pH cido del estmago tambin
constituye una barrera qumica, ya que no todos los microorganismos pueden resistir ese pH. Por ltimo, la flora
microbiana natural en el lumen de los tractos digestivo y gnitourinario es una barrera microbiolgica porque controla la
instalacin y el crecimiento de patgenos al competir con ellos por los sitios de unin al epitelio y nutrientes.
Pptidos antimicrobianos que impiden el ingreso de patgenos:
- Defensinas: familia de pptidos catinicos de vertebrados con actividad microbicida frente a una amplia variedad de
microorganismos, y distintos miembros de la familia muestran actividad sobre diferentes agentes. La expresin de
defensinas es inducida por el reconocimiento del patgeno. Son secretadas por las clulas de Paneth, ubicadas en la base
de las criptas del intestino, las cuales tienen receptores sensibles al entorno. El mecanismo microbicida se basa en que al
ser aninica la pared de los microorganismos, estos polipptidos catinicos se insertan en la membrana causando as una
prdida de la actividad de la membrana, ya que se forma un canal que permite la salida de clulas pequeas.

Principales mecanismos de eliminacin de bacterias extracelulares en una respuesta innata

El inicio de la respuesta innata involucra la activacin de sus componentes; en condiciones de salud stos estn en un
estado inactivo o de reposo. Los principales protagonistas que encienden la respuesta son clulas residentes en el sitio
de la infeccin, la puerta de entrada, como son las clulas dendrticas (inmaduras aquellas que todava no sufrieron
cambios por el reconocimiento de un patgeno) y macrfagos (tpico ejemplo de clula fagocitica); y molculas que
componen sistemas enzimticos presentes en el lquido intersticial (sistema complemento y de la coagulacin). La
activacin de estos componentes implica el reconocimiento de seales de peligro, entendiendo por tales estructuras
conservadas en patgenos (patrn molecular asociado a patgenos, PAMPs) o componentes propios que no estn
presentes en condiciones de salud o resultan modificados por la infeccin o el dao tisular.
Uno de los principales sistemas enzimticos que participa en respuesta a la presencia de una seal de peligro es el
sistema complemento; ste es un conjunto de protenas que circulan en forma inactiva en el plasma y su activacin
involucra secuencias de reacciones entre sus componentes cascadas enzimticas que se conocen como vas de
activacin.
En este terico vamos a estudiar dos mecanismos por lo cuales el sistema se puede activar en el marco de la inmunidad
innata, conocidas como va alterna y va de las lectinas.
El resultado de la activacin de las clulas de la inmunidad innata residentes en el tejido o del complemento es la
generacin de productos con capacidad txica que median la eliminacin del agente. En el caso de las bacterias
extracelulares, los principales mecanismos de muerte son la lisis celular y la fagocitosis.
Las protenas del complemento se unen a la superficie del patgeno y algunas de ellas son capaces de generar poros en
la membrana plasmtica, conduciendo a la lisis de la bacteria.
Las clulas fagocticas pueden ingerir y degradar a las bacterias extracelulares en compartimentos especializados
(fagolisosomas). Las principales clulas fagocticas son los macrfagos y los neutrfilos. El macrfago de alguna manera se
aproxima a la bacteria a la cual reconoci previamente, la engloba, y la internaliza dentro de la vescula; ese es el proceso
de fagocitosis. Este proceso luego se acompaa de otra serie de acotnecimientos que cumplinan con la muerte de la
bacteria (veremos ms adelante).
Como los macrfagos residen en el tejido son los primeros fagocitos en contener la infeccin. Por otro lado, la activacin
de los macrfagos inducida por el reconocimiento de la bacteria conduce a la produccin de molculas capaces de dirigir
la entrada de clulas de la sangre al tejido. Las primeras clulas sanguneas en alcanzar los tejidos son los neutrfilos, por
su capacidad de respuesta a los estmulos provenientes del sitio inflamatorio y porque se encuentran en mayor nmero
en la sangre que los monocitos, eosinfilos y basfilos. Los neutrfilos son clulas efectoras potentes, especializadas en
fagocitar microorganismos y clulas muertas.
La inflamacin viene dada por molculas que son vasoactivas y quimiotcticas. Vasoactivas quiere decir que tienen accin
sobre las paredes de los vasos. Quimiotcticas significa que son quimio atrayentes; hay clulas que tienen receptores
para esas molculas que hacen que sean atradas esas clulas en direccin de ese gradiente de concentracin que se
genera por la presencia de esas molculas. Como consecuencia de la fagocitosis y como consecuencia de la lisis, se
secretan componentes que generan ese tipo de componentes: molculas vasoactivas y quimiotcticas que contribuyen a
desencadenar la inflamacin. La llegada de las clulas sanguneas se da como consecuencia de los eventos que ocurrieron
en el sitio; o sea, por el hecho de que las clulas residentes y los factores solubles reconocieron la presencia de las
bacterias, no solo se desencadenan mecanismos efectores como la lisis y la fagocitosis sino que a su vez, esos
mecanismos generan componentes que actan sobre las paredes de los vasos y permiten que algunas de las clulas que
circulan en esos vasos, los atraviesen y se dirijan a donde esta el dao.

Qu componentes son reconocidos por el SI innato?

Los receptores de la inmunidad innata reconocen estructuras que sealizan situaciones de peligro. Estas estructuras se
agrupan en dos clases: i) derivadas de patgenos y ii) derivadas del dao tisular.

Los ligandos derivados de patgenos son estructuras que estn conservadas en los patgenos porque ellas tienen
funciones vitales para stos y por tanto no han podido variar sustancialmente a lo largo de la evolucin. As, estos
ligandos constituyen un patrn molecular asociado a los patgenos, y se los nombra como PAMPs (del ingls, Pathogen
Associated Molecular Pattern). No cualquier estructura de un patgeno es reconocida por los receptores de la inmunidad
innata.

Los ligandos derivados del dao tisular son componentes del organismo que slo se generan o son liberados al medio
extracelular cuando ocurre un dao en los tejidos. Colectivamente estas estructuras se conocen como DAMPs (del ingls,
Damage Associated Molecular Pattern).

Como ya se mencion, el sistema inmune innato funciona sobre la base de receptores, presentes en clulas o en fluidos,
que estn codificados en el DNA de la lnea germinal y que evolucionaron para reconocer estructuras de patgenos
altamente conservadas PAMPs, o inducidas por la infeccin
DAMPs. Estos receptores se denominan PRRs (del ingls Pattern Recognition Receptors).
Los PAMPs corresponden a motivos del patgeno que por ser vitales para el mismo son altamente conservados y
compartidos entre varias especies. Por ejemplo los lipopolisacridos (LPS) que forman parte de la pared de las bacterias
gram negativas, estn expuestos a los componentes de la inmunidad innata y son uno de los PAMPs comnmente
reconocidos por los PRRs. En forma similar los peptidoglicanos, que dan rigidez a la pared bacteriana (aparecen como una
espesa capa exterior en los gram positivos y una ms fina por debajo de la membrana exterior en los gram negativos), son
tambin un blanco importante de reconocimiento de los PRRs. Hay otros componentes de la cubierta externa de
patgenos que tambin pueden ser reconocidos por PRRs, por ejemplo estructuras de carbohidratos ricas en mananos y
glucanos, caractersticas de la pared de levaduras. Para la deteccin de los virus, existen receptores PRRs que reconocen
regiones de ADN no metilado ricas en dinucletidos con citosina y guanina (CpG) o motivos de ARN de doble cadena, que
son estructuras de cidos nucleicos no presentes en los vertebrados.
Seales de peligro endgenas: PATRONES MOLECULARES ASOCIADOS AL DAO - DAMPs:
Algunos ejemplos de motivos endgenos inducidos por trauma estril o derivado de una infeccin que constituyen
ligandos de receptores de la Inmunidad Innata son:
- Componentes derivados de degradacin de la matriz extracelular: cido hialurnico y fragmentos de fibronectina.
Aparecen cuando hay dao de la clula, ya sea por politraumatismo o por accin de bacterias
- Componentes derivados de clulas necrticas: ATP (extracelular), cristales de cido rico
- Componentes derivados de la inflamacin generada: Protenas de shock trmico; Defensinas.
- Componentes modificados por productos txicos: lipoprotenas oxidadas. Muchos de los mecanismos lticos estn
asociados a la generacin de oxidantes que pueden oxidar los componentes propios.

Es importante tener en cuenta que la presencia de muchos de estos componentes no son una seal de dao en si, pero la
presencia de fragmentos de ellos, o la presencia en lugares inadecuados si es una seal de dao.

Receptores del sistema inmune innato; PRR:

A tener en cuenta: aqu al

referirnos a receptores no
solo hablamos de
receptores unidos a
membranas, sino que
hablamos en un sentido
ms genrico, como
molculas capaces de
reconocer los PAMPs y
DAMPs.

Por un lado como ejemplo

de un receptor
extracelular, soluble,
estudiaremos las colectinas
que incluyen la lectina de
unin a manosa (MBL, del
ingls mannosebinding
protein). Lectina es un
nombre genrico que
quiere decir un protena que reconoce carbohidratos. Como receptores celulares (estos si unidos a membranas)
analizaremos tres familias de receptores recientemente descriptos: TLRs (del ingls, Tolllike receptors), NLRs (del ingls,
NODlike receptors) y RLRs (del ingls, RIGI likereceptors), receptores tipo lectina (es decir que tambin hay receptores
para carbohidratos en la membrana) y los receptores barrenderos (que en general reconocen productos de desecho).
Las funciones que pueden mediar estos receptores estn influenciadas por su localizacin. Como se ilustra en las figuras
un receptor presente en la membrana plasmtica de una clula es capaz de interaccionar con ligandos presentes en el
medio extracelular, mientras que un receptor presente en vesculas endosomales slo podr unir componentes que sean
internalizados por la clula y resistan los procesos de degradacin que ocurren en estos compartimentos celulares.
Por esta razn, cada familia de receptores tiene que ser analizada en relacin con el tipo de patgeno, ya que la
localizacin del patgeno (i.e. extracelular, citoslico) determinar qu receptores el sistema inmune innato son
capaces de censar su presencia y qu efectos txicos pueden ser desencadenados. Decimos entonces que la localizacin
de los receptores influye en su funcin centinela.
Qu significa que estn codificados a nivel de la lnea germinal? Tiene que ver con el hecho de que sea innato. La lnea
germinal es el material, el ADN que est presente en los gametos, por lo tanto es el ADN que heredamos de nuestros
padres, y no se modifican luego a lo largo de la vida. Esta es una diferencia clara con los receptores de la inmunidad
adaptativa.
Recordar que el reconocimiento siempre va seguido de una activacin para luego desencadenar los mecanismos
efectores.
Receptores en sangre y fluidos intersticiales: Colectinas y Ficolinas.

Colectinas y ficolinas tienen una

estructura similar con varios
dominios tal como se ilustra en la
figura. La regin Nterminal de
estas protenas es rica en
cistenas que participan en la
formacin de puentes disulfuro
intercatenarios. Esta regin se
contina con un dominio tipo
colgeno (asociado a la formacin
de multmeros) y un dominIo con
estructura de alfahlice que
participan en la oligomerizacin
de la protena. Finalmente, el
dominio Cterminal es responsable de la unin del ligando, el cual es siempre un carbohidrato. En el caso de las
colectinas este dominio tiene una estructura compartida con otras glicoprotenas conocidas como lectinas que tambin
unen azcares (dominio Ctype lectin). En el caso de las ficolinas el dominio de unin al ligando es tipo fibringeno.
La colectina mejor caracterizada es la lectina de unin a manosa (MBL, del ingls, mannosebinding lectin). Como todas
las colectinas, la MBL es una protena oligomrica (podramos comparar su estructura con la apariencia de un puado de
flores; los tallos corresponderan a los dominios tipocolgeno y las flores a los dominios lectina); cada subunidad
reconoce manosa con una Kd del orden de 103M. Sin embargo, cuando la MBL forma oligmeros la fuerza de unin a
ligandos polivalentes aumenta notoriamente, alcanzando valores de Kd del orden de 109M (similar a la fuerza con la
cual los anticuerpos unen sus ligandos).
As slo cuando la MBL reconoce motivos ricos manosa en un oligosacrido que muestre estas monosas en una
distribucin espacial adecuada, se formar un complejo estable. Los mananos son glcidos complejos, de cadenas
ramificadas ricas en manosa; en ellos la distribucin espacial de estas manosas conduce a la unin estable de la MBL.

Funciones efectoras de las Colectinas y Ficolinas:

La unin de la MBL a un ligando polivalente dispara dos mecanismos efectores:
- Opsonizacin de las bacterias: Esto es cuando la MBL se une a una bacteria y facilita la fagocitosis porque los fagocitos
poseen receptores que reconocen el dominio colgeno de la MBL. Las opsoninas son molculas coadyuvantes de la
fagocitosis y los macrfagos tienen receptores para opsoninas.
- Activacin del sistema complemento: La MBL une, a nivel del dominio colgeno, proteasas de tipo serina, llamadas
MASP (del ingls, MBLassociated serin proteases). Estas proteasas estn inactivas (proenzimas). Cuando la MBL se une en
forma estable a su ligando, se producen cambios conformacionales en la molcula que conducen a la activacin de las
proteasas MASP.
Existen circulando en la sangre y en los fluidos intersticiales un conjunto de protenas estrechamente relacionadas desde
el punto de vista funcional que se denominan sistema complemento. Algunos de los componentes del complemento son
susceptibles a la protelisis por las MASP. Esta protelisis genera fragmentos de las protenas del complemento, algunos
de los cuales tienen capacidad de unirse a membranas biolgicas y disparar efectos nocivos para la clula donde se
depositaron. En sntesis, la protenas del complemento que estaban inactivas en circulacin, adquieren propiedades
biolgicas tras su activacin desencadenada por la unin de la MBL a su ligando. Esta forma de activacin del
complemento se conoce como va de las lectinas.

El Sistema Complemento: Nomenclatura y sntesis.

- Consiste de aprox. 30 protenas solubles y de membrana, constitutivamente expresadas y ampliamente distribuidas en
los tejidos.
- La mayora de las protenas plasmticas se definen como componentes Ci (i =1, 2, 3 a 9). Otras se llaman factores
(factores H, I, P).
- Algunos de los componentes de membrana celular son receptores para productos del complemento (ej: CR1, CR2).

Es un conjunto de protenas
plasmticas que estn relacionadas
desde el punto de vista estructural y
funcional. Muchos de sus
componentes son proenzimas que
circulan en la sangre y estn
presentes en el lquido intersticial
en forma inactiva. Cuando estas
proenzimas entran en contacto con un agente patgeno se activan y desencadenan una serie de reacciones en forma de
cascada que se conocen con el nombre de vas de activacin del complemento. Durante la activacin de estas vas se
generan mediadores txicos e inflamatorios que contribuyen a controlar y/o eliminar al patgeno.
Las protenas del complemento son mayormente sintetizadas en el hgado, pero algunas de ellas tambin son producidas
en tejidos perifricos por clulas endoteliales, epiteliales, fibroblastos y macrfagos.

La activacin del complemento involucra una cascada proteoltica cuyo paso central es la proteolisis limitada del
componente C3

La unin de la MBL a su ligando induce la activacin de las MASPs

asociadas a la MBL. Estas enzimas hidrolizan la molcula de C4
generando dos fragmentos, y el mayor de ellos llamado C4b, adquiere la
capacidad de unirse a la superficie del patgeno. El C4b depositado
muestra ahora sitios para la unin del componente C2 del complemento,
que circula en sangre como una proenzima. Cuando la unin de C2
ocurre en la proximidad del complejo MBLMASP, el clivaje por MASP de
un fragmento pequeo de la molcula de C2 genera la enzima activa
C2a, que se mantiene unido a la molcula de C4b. El complejo C4bC2a es
una enzima capaz de activar al componente C3 del complemento, por lo
cual se la denomina convertasa de C3.
El componente C3 del complemento consiste en dos cadenas
polipeptdicas, y , unidas por puentes disulfuro. La molcula posee un grupo tioster, altamente reactivo con
nuclefilos, ubicado en la cadena . En la molcula de C3 nativa, este enlace no est expuesto.
La activacin del componente C3 del complemento implica la escisin de la molcula en dos fragmentos: C3b (el de
mayor tamao), y C3a (un pptido de 77 aminocidos).
Esta escisin es mediada por la convertasa de C3. El fragmento C3b contiene el grupo tioster expuesto; la reaccin de
este grupo con nuclefilos presentes en componentes de la superficie de patgenos permite anclar en forma covalente la
molcula de C3b al patgeno. Este paso es fundamental para la activacin del sistema complemento, confinando los
efectos biolgicos del sistema a la superficie donde se une el C3b.
A ese evento de proteolisis de C3, y ese depsito de C3, es decir, su unin covalente a la superficie donde esta el
nuclefilo que hace el ataque nucleoflico, se lo denomina activacin del complejo C3.

Existen TRES vas de activacin del complemento

Las tres son cascadas proteolticas durante las cuales se generan productos biolgicamente activos. Estas vas difieren en
los pasos iniciales, es decir que utilizan diferentes mecanismos para generar las
convertasas de C3.
La va de las lectinas se dispara por la unin de la MBL a patgenos que exponen mananos (polisacrido rico en manosa)
en su superficie. Las ficolinas tambin pueden activar la va de las lectinas, pero la va de activacin por la MBL es la mejor
estudiada.

La va clsica se activa por complejos antgenoanticuerpo o a travs de otras molculas conocidas como pentraxinas, que
son inducidas durante procesos inflamatorios. (no la vemos ahora)
Se inicia de una forma parecida a como se inicia la va de las lectinas pero que en lugar de involucrar el reconocimiento
por la MBL, involucra reconocimiento por molculas de anticuerpo.

Finalmente la va alternativa es un mecanismo que se dispara por la interaccin directa del complemento con la superficie
de algunos patgenos, es decir que no requiere de la participacin ni de las colectinas ni de los anticuerpos. Si bien existe
la posibilidad que la va clsica se active tambin durante una respuesta innata, luego de la sntesis de pentraxinas o si
existen anticuerpos naturales especficos para el patgeno, la va de las lectinas y la va alterna son los mecanismos de
activacin innata ms estudiados. Estas dos son las que ocurren fundamentalmente en el contexto de la inmunidad
innata.

Independientemente de cual sea la va por la cual se generan los complejos enzimticos que dan lugar a la hidrlisis de
C3, siempre se da la escisin de C3 por una C3 convertasa. Adems cualquiera sea la va de activacin, ocurren una serie
de procesos en comn.
La activacin del complemento conduce a pasos finales comunes a las vas durante los cuales se generan molculas con
actividades biolgicas:
i) se generan pptidos con capacidad de inducir la inflamacin porque se generan molculas quimioatrayentes (C3a, C5a).
ii) el C3b depositado sobre una superficie acta como una opsonina, es decir que se produce una induccin de la
fagocitosis.
iii) se forma un complejo molecular capaz de insertarse en membranas biolgicas y conducir a la lisis celular. Este
complejo se denomina Complejo de ataque de la membrana (MAC) y mediante la generacin de poros en lugares
especficos produce la lisis celular.
iv) la unin de C3b a componentes del patgeno contribuye a la activacin de las clulas de la inmunidad adaptativa
favoreciendo la produccin de anticuerpos.
Vas de activacin del complemento

Existen dos vas para la activacin del complemento, llamadas va alternativa y va de las lectinas.
La activacin de la va alternativa (VA) y la va de las lectinas (VL) si bien difieren en sus pasos iniciales, generan enzimas
homlogas para la activacin del componente central del sistema, C3, y del componente C5, convergiendo finalmente
en la secuencia terminal de la cascada o va ltica del complemento. A lo largo de la activacin se forman productos
biolgicamente activos que median los mecanismos directos (disrupcin de membranas celulares, eventualmente, lisis
osmtica) e indirectos (opsonizacin e induccin de la inflamacin) a travs de los cuales el complemento contribuye a la
eliminacin de patgenos. Adems, la activacin del complemento colabora en la eliminacin de complejos inmunes y en
la regulacin de la respuesta inmune adaptativa.

La reaccin central de la cascada de activacin del complemento es la conversin del componente C3 en sus fragmentos
activos C3b y C3a. Esta reaccin es mediada por complejos enzimticos denominados convertasas de C3. El C3b generado
expone un enlace tioster altamente reactivo con grupos nuclefilos. En el plasma, un alto porcentaje de las molculas de
C3b formadas son inactivadas tras la reaccin de su enlace tioster con el agua. Sin embargo, una pequea proporcin de
estas molculas, reaccionan a travs de su grupo tioster con grupos amino o hidroxilo presentes en macromolculas de
la superficie del agente que origin la activacin del C3, resultando en la unin covalente de C3b a dicho agente. El C3b
unido a la superficie genera un nuevo complejo enzimtico, capaz de convertir el componente siguiente de la cascada,
C5, en sus componentes C5a y C5b y, consecuentemente, disparar la activacin de la va ltica. Si el agente que dispar la
activacin expone una superficie celular, el disparo de la va ltica conduce al ensamblaje sobre dicha superficie de un
complejo macromolecular, formado por los componentes C5b, C6, C7, C8 y mltiples cadenas de C9, capaz de provocar
dao a membranas biolgicas; este complejo se conoce con el nombre de complejo de ataque a la membrana: MAC (del
ingls, membrane attack complex).

Cualquiera de las dos vas genera una convertasa de C3, con nombres distintos (C3bBb vs. C4b2a), es decir que hay
componentes del complemento distintos que intervienen en la generacin de una convertasa o de la otra, pero las dos
hacen lo mismo: toman C3 para generar C3b y C3a. A su vez, una molcula de C3b se asocia con la convertasa de C3 de la
va que corresponda y genera lo que se llama una convertasa de C5 que es igual a la de C3 solo que esta tiene un C3b
unido. Este complejo enzimtico escinde C5 (otro componente del complemento) en un fragmento grande C5b y uno
pequeo C5a. Es el fragmento grande el que queda unido a la pared de la superficie de activacin y all se inicia lo que se
llama la Va ltica, que es la va que termina en la formacin del complejo de ataque a la membrana MAC.
Va de las lectinas se activa porque la MBL reconoce carbohidratos conservados en los patgenos y eso hace que la MBL
que esta asociada con una serie de proteasas de serina, se activen dichas proteasas lo cual escinde a los componentes C4
y C2 en dos fragmentos cada uno, C4a, C4b, C2a y C2b, formando as la convertasa de C3 de la va de las lectinas: C4b2a.
Va alternativa, la convertasa es un poco distinta, est formada por el fragmento C3b y por un fragmento de el factor B
(Bb), formando as la convertasa de C3 de la va alternativa: C3bBb. Vemos que involucra a C3b, es decir que involucra al
producto de la propia convertasa, por lo tanto se genera un Asa de amplificacin o amplification loop. Ese paso est
muy regulado, y existen una serie de inhibidores para dicho finalidad.
RECORDAR: Todos los fragmentos de complemento se llaman a y b, y en general se lo llama b al fragmento grande
que queda unido a la superficie y a al ms pequeo y que queda libre. La nica excepcin de esta regla es con C2, ya
que vemos que en la C3 convertasa de la va de las lectinas el fragmento que queda unido es el C2a (en bibliografa puede
encontrarse como C4b2b para no incumplir la regla general).

La activacin de la va alternativa ocurre en la ausencia de inhibidores sobre la superficie de los patgenos; El mecanismo
de activacin de la VA:
Esta va utiliza una convertasa de C3 particular, C3bBb, donde uno de sus componentes (C3b) es producto de la accin de
la convertasa sobre su sustrato. En condiciones fisiolgicas C3 es activado en solucin lentamente, generando molculas
de C3b capaces de actuar como iniciadores de la VA. Sin embargo, la va es solamente activada si el C3b generado
espontneamente forma una convertasa de C3 estable capaz de convertir ms molculas de C3 y, por ende, amplificar la
generacin de C3b. La convertasa C3bBb se forma solamente si el C3b se une covalentemente, a travs de su enlace
tioster, a macromolculas (por ejemplo, glicoprotenas o carbohidratos de membranas biolgicas). En el plasma y sobre
la superficie de las clulas de mamferos, el C3b unido a macromolculas se inactiva (interfiriendo con su unin al factor
B) y/o la convertasa formada resulta inestable, por la accin de reguladores negativos (el factor H del plasma y
protenas de membrana). A diferencia, superficies celulares que carecen de estos reguladores y sobre las cuales el factor
H no resulta retenido, permiten la formacin de convertasas de C3 estables, amplificando el depsito inicial de C3b. As la
activacin de la VA es consecuencia de la prdida del funcionamiento de los mecanismos de autorregulacin del
complemento que mantienen la va inactiva sobre los tejidos sanos.
Finalmente, en este mecanismo de activacin la convertasa C3bBb formada puede ser estabilizada por un componente
llamado factor P o properdina; la unin de P a la convertasa aumenta notoriamente su vida media.
No es como la activacin de la VL, la cual requiere un reconocimiento, sino que es una va que se activa siempre, salvo
que haya algo que la inhibe.
Cmo es que eso ocurre? Habamos visto que la convertasa de C3 de la VA est formada tambin por C3b, o sea, C3b
forma la primera unidad de la convertasa. Hay un cierto nivel de hidrlisis en condiciones normales fisiolgicas, del C3
que esta circulando en el plasma, por lo tanto decimos que hay un nivel basal de generacin de fragmentos C3b.
Entonces esos fragmentos que se generan espontneamente, al encontrarse cerca de lo que llamamos superficie
activadora del patgeno, es decir, una superficie (ejemplo clsico: pared de una bacteria) en la cual hay grupos
nuclefilos capaces de atacar nucleoflicamente a ese enlace tioster y unirse covalentemente a C3b, puede haber
ataque, quedar unidos covalentemente. La vida media de este C3b es muy breve, 60 mseg, ya que el grupo tiol ester
puede ser hidrolizado por el agua (nuclefilo ms abundante que tenemos). Es por esto que para que ocurra el ataque y
el anclaje a la superficie activadora del patgeno, el C3b generado debe encontrarse cerca de esta. Y el factor B? El
factor B, que circula tambin en el plasma es degradado por una proteasa del complemento que es el factor D, quedando
unido el fragmento Bb.
Esta convertasa de C3 generada, escinde C3 a C3b y C3a y el C3b se puede seguir uniendo a la superficie activadora pero
adems tambin se puede asociar con ms factor B, es decir, se puede generar ms convertasa: amplificacin.
Con esto decimos que la activacin del complemento por la VA es muy eficiente como mecanismo activador, ya que se da
un consumo muy importante de C3 porque la enzima genera una de las subunidades que forman parte de s mismo.
El C3b depositado sobre la superficie tambin es hidrolizado por el factor I, cuyo cofactor es el factor H (ambas protenas
del complemento).
Ahora bien, si decimos que para activarse necesita un ataque nucleoflico de una superficie activadora, Por qu esto no
ocurre en la superficie de una clula? Debe estar muy finamente regulado. Qu pasa en la superficie de nuestras clulas
para que esto no ocurra?

Existen inhibidores sobre las membranas de las clulas que detienen la activacin de la va alternativa; Paso de
regulacin:
En el plasma y sobre la superficie de las clulas de mamferos, el C3b unido a macromolculas se inactiva (interfiriendo
con su unin al factor B) y/o la convertasa formada resulta inestable, por la accin de reguladores negativos (el factor H
del plasma y protenas de membrana).
Los mismos eventos que ocurren en la superficie activadora de un patgeno, tambin se pueden dar en la clula del
hospedero. El factor H y el factor B compiten por unirse a C3b. En la superficie de los patgenos, gana el factor B. Sin
embargo, en la superficie de nuestras clulas, quin gana es el factor H.
Cuando el factor H se une a C3b, entonces ah se inhibe la formacin de la convertasa ya que sta unin interfiere con la
unin del factor Bb.
Otra cosa que puede ocurrir es que, si ya se form la convertasa, lo que hace es, desplazar el fragmento de B, y all se
acelera el decaimiento de la convertasa, desensambla la convertasa, interfiere.
El factor I, degrada el fragmento C3b, al fragmento C3d el cual no puede seguir con la activacin, ya que el factor B no se
une a ste. A esto se lo llama inactivacin de C3b por parte del factor I.
Existen otras protenas inhibidoras, como el factor acelerador del decaimiento (DAF), CR1, etc.
Este paso es de suma importancia ya que impide que se forme el complejo de ataque a la membrana en las clulas
propias.

Por qu C3b se une con mayor afinidad al factor H sobre la superficie de clulas eucariotas?

El factor H tiene varios dominios de unin a polianiones que son capaces de mediar su unin
a glicosaminoglicanos (GAGs), componentes caractersticos de las membranas plasmticas
de clulas eucariotas (ms habitual en vertebrados que en invertebrados), pero ausente en
procariotas. De esta manera las clulas eucariotas pueden unir y concentrar este regulador
negativo sobre su superficie, impidiendo la activacin de la VA.
El mecanismo de activacin de la VA funciona en base a que el C3b tiene ms afinidad por el
factor B que por el factor H, por lo cual cuando B y H estn en concentraciones similares se
favorecer la formacin del complejo C3bB, con la consecuente formacin de la convertasa
de C3, la activacin de toda la va. Sobre la superficie del patgeno, carente de GAGs se da
esta situacin. En cambio, sobre
la superficie de una clula eucariota, los GAGs favorecen la interaccin de C3b con el factor H, al proveer sitios
adicionales para su interaccin con la superficie. Esto determina la inhibicin de la formacin de la convertasa o bien
acelera su disociacin; ambos fenmenos llevan a la inhibicin de la activacin de la va.
Los GAGs son azcares polianionicos.

La activacin del complemento y la VA LTICA:

- La activacin de la VA ocurre cuando se logran evitar los mecanismos de

control de la va que funcionan muy eficientemente sobre las clulas propias.
- La activacin de la VL requiere que la MBL reconozca motivos mananos;
esto dispara cambios en la estructura de la colectina que permiten su
interaccin con la proteasa. MASP y la activacin de esta proteasa permite
posteriormente activar los componentes C2 y C4 del complemento para
generar la convertasa de C3 de la VL; el complejo C4bC2a.
- La activacin de la va ltica es comn a las dos vas de inicio de la cascada
del complemento y genera un complejo potencialmente ltico (MAC) que
media la muerte de la clula sobre la cual se activ el complemento.

El complejo C5b-9 (MAC) se ensambla en membranas celulares conduciendo a la lisis celular

Las reacciones que llevan a la formacin de este complejo se muestran de modo esquemtico en la imagen. El resultado
final es un poro en la membrana de bicapa lipdica, que destruye la integridad de la membrana. Esto es lo que se llama
complejo de ataque a la membrana o de la sigla en ingls, MAC.
Este proceso tambin puede ser inhibido. La protena de membrana, Cb59, interfiere con la formacin del MAC al
interferir con el sitio donde se polimeriza C9. No se forma el poro.
Los complejos C5b-9 tienen aspectos de poros que perforan las membranas celulares
La susceptibilidad a la lisis por complemento depende de la estructura de la pared bacteriana
Lisis por complemento:
Para que el mecanismo ltico ocurra los complejos C5b7 deben de insertarse en la membrana plasmtica. Una vez que
esto ocurre la molcula de C8 y C9 se unen a esos complejos en forma secuencial, y se genera una estructura con forma
de poro cuando C9 polimeriza formando el complejo C5b(9)n (MAC).
Si la membrana plasmtica de la clula blanco (i.e. bacteria) est muy protegida por estructuras compactas, el complejo
C5b7 no logra insertarse en la membrana y por consiguiente no hay formacin del MAC, ni lisis. As las bacterias gram
positivas son en general ms resistentes a la va ltica del complemento que las bacterias gram negativas.
Los complejos C5b7 en solucin interaccionan con C8 y C9 y llegan a formar un complejo C5b9 que no tienen actividad
ltica porque ya no se puede insertar en una bicapa lipdica. La presencia de estos complejos en el lquido intersticial y en
la sangre evidencia la activacin del complemento.
Las bacterias gram positivas pueden presentar, adems de una cubierta ms gruesa de peptidoglicano, una cpsula. Las
bacterias encapsuladas son resistentes a la lisis por complemento, lo cual sera un ejemplo de un mecanismo de virulencia
en bacterias.

Productos generados por activacin del complemento

- Los fragmentos C3b y C4b son opsoninas que favorecen la fagocitosis de partculas sobre las que se activaron las vas del
complemento. La MBL y los fragmentos C3b, iC3b y C4b son opsoninas; varios fragmentos derivados de la activacin del
complemento actan como opsoninas facilitando la fagocitosis de patgenos extracelulares.

- Los fragmentos C3a, C4a y C5a son los principales mediadores de la inflamacin generados por la activacin del
complemento.
C3a, C4a y C5a son molculas vasoactivas y quimiotcticas. Este tipo de mediadores son muy importantes para contribuir
a la respuesta inflamatoria.
Vemos en la imagen como estas molculas actan generando modificaciones en el endotelio (pared de los vasos
sanguneos) en particular de capilares, ya que estos estn recubiertos por una monocapa de clulas. Dichas
modificaciones llevan a que aumente la permeabilidad del endotelio y que a su vez se expresen molculas que en
ausencia de estas componentes inflamatorios no estn expresadas (molculas de adhesin celular), las cuales veremos
que son muy importantes para mediar el ingreso al tejido de las clulas que venan circulando por sangre.Hay una
contraccin de las clulas y desaparecen las uniones entre clulas del endotelio para poder dejar pasar, no solo molculas
sino tambin otras clulas.
CLASE 3, 11/10/2013.

Tipos de receptores y efectos inducidos por el reconocimiento de seales de peligro;

1 - LA INFECCIN POR BACTERIAS

- Receptores fagoctocos
Median internalizacin a la
clula

Algunos de los PRR son capaces

de mediar la fagocitosis de
patgenos extracelulares como
por ejemplo bacterias.
Recordemos que la fagocitosis
es un mecanismo, dependiente
del reconocimiento por un
receptor, mediante el cual la
clula internaliza un elemento
particulado (puede ser una
bacteria, una clula muerta o
una partcula) y lo digiere en
vesculas especializadas. La
necesidad de la participacin de
un receptor es lo que diferencia
la fagocitosis de la macropinocitosis (internalizacin de elementos presentes en el medio extracelular a travs de la
emisin de pseudpodos; sin mediacin de receptor). En ambos casos, la vescula formada se puede fusionar con
grnulos o con lisosoma. El destino dentro de la clula es el mismo.

La fagocitosis de las bacterias puede ser mediada por dos vas diferentes:

1) A travs de receptores para PAMPs, que promueven la unin e internalizacin de microorganismos o partculas. Estos
receptores reconocen estructuras ricas en manosa o glucanos (receptores lectina de tipo C) y estn presentes en todas las
clulas fagocticas.
En estas clulas tambin existen receptores barrenderos o scavenger que reconocen motivos PAMPs y tambin son
importantes para la remocin de otros productos de desecho (productos oxidados, cuerpos apoptticos).

2) A travs de molculas solubles que actan como receptores de patgenos (ej: MBL), facilitando la fagocitosis por un
mecanismo denominado opsonizacin. Este mecanismo funciona porque el receptor unido al patgeno acta como un
condimento (opsonina) que hace mas apetecible la ingestin del patgeno por la clula fagoctica. La clave est en
que la clula fagoctica posee receptores para estas opsoninas.
Los receptores fagocticos pueden inducir tambin otro tipo de seales en las clulas, por ejemplo seales que generen la
produccin de citoquinas capaces de contribuir al desarrollo de la inflamacin. En general, estas seales no son tan
intensas como las disparadas por otros PPRs.

Como consecuencia de la fagocitosis, a la clula le ocurren cambios, se activa. Por ejemplo, la llegada al ncleo de
molculas, mediadores, factores de transcripcin, que hacen que la clula empiece a expresar genes que codifican para
cosas que antes no se estaban sintetizando, como por ejemplo citoquinas, lo cual lleva a que se desencadene la
inflamacin. La palabra citoquina es un trmino genrico que engloba a molculas que son mediadores solubles de la
comunicacin entre las clulas. En general se sintetizan lo que se llaman citoquinas proinflamatorias, es decir, las que
llevan a la inflamacin.

Receptores asociados a la fagocitosis; unen directamente patgenos o componentes propios alterados:

En la figura se muestran los principales receptores involucrados en la fagocitosis de agentes extracelulares.
Observar que estos receptores poseen dominios repetidos, lo cual refleja que requieren la unin a travs de ms de uno
de ellos para lograr la formacin de un complejo receptorligando estable. Los motivos que reconocen de naturaleza
carbohidratos en general se encuentran en forma polimrica en las estructuras de patgenos. As cuando estos
receptores se unen por varios dominios a estas
estructuras polivalentes se logra el disparo de la fagocitosis. Cada una de las interacciones entre un dominio y una
subunidad de motivo es de baja afinidad, pero el reconocimiento de muchas aumenta mucho la efectividad de la
interaccin. Esta propiedad del reconocimiento por estos receptores tambin funciona como un mecanismo de control;
es decir que no cualquier motivo monovalente va a poder desencadenar la fagocitosis.
Adems, estos receptores tienen en su cola intracitoplasmtica protenas asociadas. Hay determinados motivos en esas
secuencias proteicas, que, una vez que el receptor interacciona con su ligando, hay una fosforilacin, una modificacin
del llamado dominio activador. Es esto lo que en el interior de la clula es reconocido como seal que indica que algo
fue reconocido afuera, y se desencadenan una serie de eventos, los cuales llevan a la activacin de los factores de
transcripcin que migran al ncleo y determinan que la clula empiece a transcribir genes, por ejemplo, genes para
citoquinas, etc.

La MBL y fragmentos derivados de la activacin del complemento son opsoninas

- Si las bacterias son capaces de activar el sistema complemento por la va de las lectinas y/o la va alterna, se depositarn
sobre su superficie varios fragmentos derivados de la activacin del complemento que actan como opsoninas facilitando
la fagocitosis de patgenos extracelulares.
- Existen varios receptores del complemento con esta capacidad. CR1, CR3 y CR4
- Suma de las seales que recibe la clula a travs de los receptores fagocticos y de otros receptores es lo que define el
potencial txico y de destruccin.
Lo que ocurre en la fagocitosis es la fusin del fagosoma con lisosoma y la degradacin del contenido del fagosoma en el
fagolisosoma. A su vez, a veces las clulas fagocticas pueden adquirir un potencial ltico, una capacidad agresora mayor,
al recibir otras seales adems de las que recibieron a travs del receptor que media la fagocitosis.

MECANISMO DE LA FAGOCITOSIS

Adems de la degradacin por fusin del fagosoma con el lisosoma, la fagocitosis puede llevar a otros eventos que son
todava ms txicos. En la imagen esta representado para neutrfilos. Sabemos que los neutrfilos no son clulas
residentes, pero son ms eficientes en la fagocitosis que los macrfagos.
El neutrfilo fagocita, por ejemplo, una bacteria. Se forma un fagosoma y un fagolisosoma. En el fagolisosoma, adems
de que actan las enzimas hidrolticas, ocurre lo que se llama un estallido respiratorio. En la membrana de ese
fagosoma se ensambla un complejo multienzimtico: NADPHox.

La activacin de la enzima NADPH oxidasa (NADPHox) tiene dos consecuencias:

1) Generacin del in superxido, por reduccin del O2 molecular, en un proceso dependiente de 1 electrn. Estas
especies reactivas del O son muy txicas y contribuyen a reforzar la accin toxica y ltica de las enzimas hidroliticas.

2) Acidificacin del pH en el fagosoma, porque la translocacin del electrn va acompaada de consumo de protones, por
lo cual hay activacin de una ATPasa que media el movimiento de protones al endosoma, generando entonces un pH ms
cido. (Protones al interior del fagosoma)
Este pH contribuye a la activacin de enzimas proteolticas que se encuentran en los grnulos primarios asociadas a
proteoglicanos. El descenso del pH las libera, promoviendo la degradacin del contenido del fagosoma. En neutrfilos
estos procesos son ms intensos que en clulas dendrticas (DC), donde la NADPH oxidasa se ensambla en forma estable
(establizada por una GTPasa) por lo cual predomina la translocacin de electrones y el consumo de protones no logra ser
balanceado por la entrada de protones. As en las DC el pH es menos cido que en neutrfilos y el proceso de
degradacin menos intenso, lo cual tiene importancia como veremos ms adelante en la participacin de estas clulas en
la presentacin del antgeno a las clulas T.
A su vez ocurre la activacin de una enzima citoplasmtica, la xido ntrico sintetasa inducible, INOs, que genera xido
ntrico, el cual difunde a travs de la membrana del lisosoma y reacciona con las especies reactivas del O, en particular
con el superxido, generando el peroxinitrito (mucho ms txico) y otras especies reactivas del nitrgeno.
Tanto las especies reactivas del O (generadas por activacin de la NADPHox) como aquellas derivadas del N (generadas
por induccin de la xido ntrico sintasa, INOS) son altamente oxidantes y nitrantes; modifican protenas y lpidos en
forma irreversible alterando funciones de molculas vitales para el patgeno y contribuyendo a su muerte.

La contribucin de la NADPHox a la destruccin de las bacterias fagocitadas se evidencia porque los defectos genticos en
componentes de esta enzima se asocian con infecciones bacterianas recurrentes y la formacin de granulomas focos
inflamatorios donde se acumulan macrfagos y linfocitos que contienen pero no logran eliminar al patgeno
(enfermedad granulomatosa crnica). No es una enfermedad incompatible con la vida, pero si genera muchas
infecciones.
Estos grnulos van al fagosoma o excretan su interior hacia afuera? Cuando se forma el fagosoma en la membrana del
fagosoma se ensambla la enzima NADPHox, y esta acta liberando el superxido al interior del fagosoma, lo cual es muy
importante ya que sino estaramos liberando superxido en el citoplasma lo cual podra daar todas las protenas de la
clula, el ADN y dems. La compartimentacin en este proceso es de suma importancia. El NO se forma en el citoplasma,
pero difunde hacia adentro y la formacin del extremadamente txico ONOO- es dentro de la vacuola.
Estos grnulos que tienen los neutrfilos tambin se vierten en los fagosomas para contribuir a la capacidad destructiva.

Esta claro entonces que la sola internalizacin de la bacteria no es suficiente para la fagocitosis. Se necesitan las proteasas
y de ser posible toda esta batera ltica (la tiene el neutrfilo muy eficiente, la tiene el macrofago cuando es activado y no
la tiene la DC ms all que sta tambin fagocita, no es una clula especializada en matar)

- Receptores NO fagocticos

La unin de los PAMPs a

receptores no
fagocticos provoca la
activacin celular,
generando molculas
txicas y con actividad
proinflamatoria, e
induciendo la expresin
en la membrana celular
de receptores
involucrados en la
migracin y en la
comunicacin clula
clula.
Un ejemplo de estos PRR
son los receptores de
tipo Toll, TLR (del ingls,
Toll Like Receptors), que
constituyen un grupo de
aproximadamente 10 receptores transmembrana con similitud estructural y funcional. Los miembros de esta familia
difieren en el patrn de reconocimiento, pero la unin del ligando especfico produce cascadas de sealizacin
intracelular similares que activan la clula dando lugar a la secrecin de citoquinas proinflamatorias, sustancias con
actividad antimicrobiana, y a la expresin de enzimas y molculas coestimulatorias en la membrana plasmtica que son
necesarias para el curso posterior de la respuesta inmune.
Veremos que hay distintos tipos:
1) En membrana. Tanto en la membrana citoplasmtica como en las membranas de los endosomas. Luego de reconocer
un ligando, un PAMP, manda seales al ncleo (desencadena transc. de genes de citoquina, pept. antimicrob., etc.).
Tambin hacen que en las membranas de las clulas se expresen receptores que van a dirigir la migracin e interaccin
de estas clulas con otras, esto es muy importante para la relacin entre la respuesta innata con la respuesta adaptativa.
2) En el citosol. Reconocen componentes de la bacteria pero slo si stos ingresaron a la clula. La interaccin de estos
receptores con sus ligandos tambin desencadenan seales al ncleo.

Receptores no fagocticos: TIPO TOLL (TRLs):

OJO! Esta imagen esta mal!!!!!!! Ver clase

La familia de los receptores tipo Toll (TLRs) incluye
un conjunto de protenas que participan en el
reconocimiento de PAMPs. Los miembros de esta
familia tienen:
- Un dominio extracelular de unin al ligando
(reconocimiento). Dominio LRR (leucine-rich
repeats), es decir, repetidos grupos (residuos)
leucina. Diverge entre diferentes TLRs y entre
homlogos de diferentes especies, ya que hay Tolls
especializados en el reconocimiento de distintos
patgenos. Los ligandos incluyen PAMPs y DAMPs.
- Un dominio transmembrana que ancla el receptor a la membrana plasmtica o de una vescula intracelular (endosoma).
Tiene una estructura de -hlice.
- Un dominio citoplasmtico caracterizado por la presencia de un dominio globular que comparte homologa con el
dominio del receptor de IL1 y se le conoce con el nombre de dominio TIR (Toll/IL1R domain). El TIR interacciona con
protenas citoslicas involucradas en la activacin de reacciones intracelulares que conducen a la liberacin/activacin de
factores de transcripcin, que dirigen y regulan la expresin gnica (El dominio citoplasmtico es el dominio activador del
TRL). Une protenas adaptadoras: MyD88, Tirap (Mal), TRIF y TRAM (distintas protenas segn la va de sealizacin que
usen) y estas protenas lo que hacen es activar vas de sealizacin.
Cuando se compara la estructura primaria de los miembros de esta familia, se observa que existen notorias diferencias en
el dominio extracelular; esto est de acuerdo con el hecho de que cada miembro de la familia reconoce en forma
especfica un ligando diferente. En contraste, existe una alta homologa en la estructura primaria del dominio activador, lo
cual refleja que los procesos de sealizacin mediados por diferentes TLRs conducen a similares cambios a nivel de la
expresin gnica.

Distribucin y ligandos de diferentes miembros de la familia TLR

Algunos ejemplos de TRL
- Receptores en membrana plasmtica: TLR2 se asocia con TLR1 y TLR6 - TLR4 y TLR5. Interaccionan con motivos (LPS,
lipoprotenas, flagelina, etc.) que estn expuestos cuando la bacteria est intacta en el exterior celular.
- Receptores en vesculas de la va endoctica (membrana de endosomas): slo TLR9 relevante en la infeccin bacteriana.
Recientemente se vi que TLR4 y TLR2 tambin sealizan desde endosomas. Estos reconocen cosas cuando la bacteria
que se endocit es degradada, reconocen en particular cidos nucleicos. Es un refuerzo del reconocimiento, ya que si por
alguna razn los receptores de membrana no detectaron dicha bacteria, una vez que fue degradada los receptores
endocticos si lo hacen.
El dominio extracelular de unin al ligando est enfocado hacia la luz del endosoma ya que alli estaran los ligandos.
Recordar que desde el punto de vista de la topologa de las clulas, el interior de las vesculas es similar al exterior de las
clulas.

Vas de sealizacin desencadenadas por TLRs

Lo importante es que estos llevan a una serie de eventos dentro de la clula. No median la fagocitosis. Siempre
intervienen quinasas, siempre hay eventos de fosforilacin que hacen que hayan protenas que estn en el citoplasma
que van al ncleo y activan la transcripcin de determinados genes. Lleva a la expresin de:
- citoquinas (proinflamatorias) IL-1, IL-6, TNF-,
- quimioquinas (molculas quimioatrayentes) IL-8, MCP-1
- enzimas oxidantes (como xido ntrico sintetasa inducible, INOs)

Receptores que inducen activacin celular e inflamacin;

Receptores de la familia NOD (NLRs)
Receptores tipo NOD (NODLike Receptors, NLRs)

Receptores citoslicos importantes en el reconocimiento

tanto de bacterias intracelulares como de componentes de
bacterias extracelulares pero una vez que ingresan a la clula.
Constituyen una familia de PRR recientemente descrita, que contiene ms de 20 miembros en mamferos. Aunque los
ligandos y las funciones de estos receptores no se conocen an completamente, ellos intervienen en el reconocimiento
de motivos derivados de patgenos citoplasmticos y/o de seales de peligro (DAMPs, como ATP o cristales de cido
rico).
Los NLRs se caracterizan porque estn formados por tres dominios:
i) un dominio central conservado, conocido como nucleotide binding oligomerization domain (NOD), que interviene en la
oligomerizacin del receptor en respuesta a la unin del ligando (nucletidos).
ii) un dominio Ct, que posee repetidos ricos en leucina (LRR, del ingls, leucinerich repeats) y que est involucrado en la
unin del ligando, al reconocimiento (similar a TLRs).
iii) un dominio Nt que comprende el motivo efector de la molcula, con homologa con dominios capaces de mediar
interacciones con protenas accesorias de sealizacin intracelular (dominios CARD, Pyrin or BIR).
Expresados en clulas dendritas (DC), macrgfagos y algunos tambin en epitelios.

Hay dos conjuntos: Los nodosomas y los inflamasomas. Una vez que el dominio de reconocimiento del ligando lo
reconoce, se desencadena un evento de oligomerizacin (esos oligmeros se llaman nodosomas en el caso de NOD1 y
NOD2, o inflamasomas en el caso de NALP y NLRC4) y eso genera un cambio conformacional que provoca que esos
dominios Nt puedan interaccionar con las protenas adaptadoras que estn dentro de la clula y eso es lo que
desencadena la cascada de eventos que llevan las seales al ncleo. Las protenas estn presentes de manera
monomrica en el citosol, pero el reconocimiento del ligando desencadena su oligomerizacin.
NOD1 y NOD2
Los primeros NLRs de mamferos que fueron descriptos en relacin con su capacidad de reconocer PAMPs fueron NOD1
(tambin llamado CARD4) y NOD2 (tambin llamado CARD15), los cuales contienen uno y dos dominios CARD en su
porcin Nt, respectivamente. Ambos reconocen un componente esencial de la pared bacteriana, el peptidoglicano
(PGN), pero detectan motivos diferentes dentro del mismo. NOD1 une el DglutamilmesoDAP, que se encuentra
principalmente en el PGN de las bacterias gramnegativas, mientras que NOD2 reconoce el motivo muramildipptido
(MDP) presente en casi todas las bacterias. As, NOD2 acta como un sensor ms general del PGN mientras que NOD1
tiene un perfil de reconocimiento ms restringido a un grupo de bacterias. Estos motivos deben de alcanzar el citosol
para poder ser detectados, ya que son receptores citoslicos; esto sera posible en el caso de bacterias que se establecen
directamente en el citosol (Shigella) o en aquellas que poseen mecanismos (por ej. porinas) que permiten el pasaje de
componentes desde el medio extracelular o desde vesculas intracelulares al citosol (Salmonella, Legionella).

Efectos inducidos a travs de la sealizacin por NLRs:

Sealizacin por NLRs
La unin del ligando al receptor NLR conduce a la oligomerizacin del receptor, paso que es esencial para que el motivo
efector de la molcula pueda interaccionar con las protenas accesorias y enviar seales dentro de la clula.
NOD1 y NOD2 sealizan va la serina/treonina quinasa RIP2 (RICK,CARDIAK), mediante interacciones CARDCARD. Una vez
activada RIP2 media la ubiquitinacin de NEMO/IKK conduciendo a la activacin de NFB y a la produccin de citoquinas
inflamatorias como ser TNF e IL6. Adems de la activacin de la va de NFB, la estimulacin de NOD1 y NOD2 induce
la activacin de quinasas de la familia MAPKs.
La importancia fisiolgica de estos receptores resulta evidente ya que mutaciones en ellos se han asociado a
enfermedades inflamatorias en humanos; variacin gentica en NOD2 se asocia con la enfermedad de Crohn, mientras
que varios polimorfismos en NOD1 se han relacionado con el desarrollo de asma y eczema atpico.

INFECCIN VIRAL; mediadores de la respuesta inflamatoria.

Se describen los
principales mecanismos
de defensa durante una
infeccin viral, en
relacin con la
localizacin del virus.

a) Fase extracelular: la
fagocitosis, mecanismo
de eliminacin estudiado
para bacterias
extracelulares es
tambin potencialmente
capaz de remover las
partculas virales del
medio, pero esta
remocin es poco eficiente en trminos de la eliminacin del virus. La importancia de la internalizacin de partculas
virales por macrfagos y DCs est en la activacin de estas clulas a travs de los TLRs y RLRs, lo cual inicia una respuesta
inflamatoria y conduce a la sntesis de IFN de tipo I ( y , fundamentales en la proteccin temprana de clulas
infectadas, y de clulas vecinas en las que inducen resistencia a la infeccin).

b) Fase intracelular: las clulas asesinas naturales NK (del ingls natural killer) son las principales clulas efectoras de la
inmunidad innata. La inflamacin disparada por activacin de macrfagos y DCs atrae clulas NK al sitio de la infeccin.
Las clulas NK pueden reconocer clulas infectadas por virus e inducir su muerte por apoptosis.

En el tejido tenemos las clulas residentes (DC, macrfago y mastocito) y tenemos un vaso sanguneo que irriga el sitio,
por el que circulan clulas, entre ellas los monocitos (precursor en sangre de macrofagos y DC una vez que ingresan al
tejido), los neutrfilos y los NK (primer diferencia frente a infeccin bacteriana; no es que no estuvieran, es que no
participaban). Tambin hay componentes del complemento.
Al ingresar el virus a la clula, puede ser reconocido por ejemplo por los macrfagos. A diferencia de lo que habamos
visto antes, aqui el macrfago no comienza la fagocitosis en seguida, sino que lo reconoce y genera sustancias que
difunden, como sealizacin. Lo mismo puede ocurrir con DC. Estas molculas que liberan los macrofagos o DC, son las
que llamamos molculas antivirales, que de alguna manera van a contribuir a la defensa del tejido frente a ese virus.
Tambin secretan molculas vasoactivas y quimiotcticas (respuesta inflamatoria; promoviendo intravasacin de
molculas solubles y otras clulas que ingresan al tejido).
Es importante notar que el virus entra al tejido, pero tenemos tambin partculas virales dentro de la clula, ya que los
virus son patgenos intracelulares que para poder replicarse y propagarse necesitan la maquinaria de una clula.
Al entrar al tejido la NK, se dirige a reconocer las clulas infectadas e inducir la apoptosis en dicha clula.

APOPTOSIS: Mecanismo de muerte celular. Es ordenada, una serie de mecanismos llevan a que ocurra. Es programada, es
decir que hay una seal que lleva a que la clula se suicide y los mecanismos que llevan a estos procesos son mecanismos
que forman parte de la propia clula suicida. Programadas como parte del ciclo de vida de la clula. No es que una
segunda clula le trasfiere algo, sino que la clula induce que se desencadene el mecanismo de apoptosis. Es importante
notar que no se libera hacia el exterior nada del interior de la clula al medio externo.
ver animacin en pgina
Como resumen: En el marco de la infeccin viral, lo importante es: el reconocimiento del virus por parte de las clulas
residentes, la activacin de las clulas residentes como consecuencia de ese reconocimiento, la generacin de
mediadores como consecuencia de esa activacin (generacin de molculas antivirales y ademas molculas
inflamatorias), el ingreso de las clulas que se encontraban en los capilares, la induccin de la muerte (apoptosis) por
parte de las NK.

Tipos de receptores y efectos inducidos por el reconocimiento de seales de peligro;

1 - LA INFECCIN VIRAL
Si observamos la imagen, en la esquina inferior izquierda, vemos que se representa una DC y un macrfago. En la imagen
anloga para infeccin por bacterias, tambin haba un neutrfilo. En el caso de infeccin viral el neutrfilo no esta; son
protagonistas muy importantes de reconociemiento y combate a bacterias pero no tanto contra virus.
En relacin con la fagocitosis de partculas virales; la opsonizacin por complemento favorecera el reconocimiento e
internalizacin de las partculas virales por clulas fagocticas; sin embargo no todos los virus son capaces de activar el
complemento. En este caso, el ingreso del virus tanto a los macrfagos como a las DC, se da fundamentalmente por una
macropinocitosis (mecanismo de internalizacin NO mediado por receptores). Esto indica que los receptores fagociticos
no son muy importantes en el caso de infeccin viral. Cundo puede haber fagocitosis? Cuando la cubierta del virus
tiene la capacidad de activar el complemento, es decir, si la partcula viral puede opsonizarse.
En relacin con la activacin de vas de sealizacin celular, los principales PRR que participan en el reconocimiento de
motivos virales son los TLRs (TLR3, TLR7, TLR8 y TLR9) y los RLRs (receptores de la familia de RIGI). Estos receptores
reconocen especficamente molculas como ARN (simple y doble hebra) y ADN viral.

Distribucin y ligandos de miembros de la familia TLR involucrados en el reconocimiento de motivos virales

TLR3 y TLR7
TLR3 y TLR7 son receptores presentes en vesculas de la va endosomal que reconocen motivos de RNA viral de doble y
simple hebra, respectivamente.
En el caso de los virus, los TLR que participan fundamentalmente son los TLR que estn en los endosomas, porque los
PAMPs virales son por excelencia los cidos nucleicos (material gentico), aunque tambin puede haber reconocimiento
por componentes de la cubierta.
Estos receptores disparan vas de sealizacin que se asocian a la produccin de citoquinas proinflamatorias e
interferones de tipoI.

Vas de sealizacin desencadenadas por TLR9 y TLR3

En este caso adems de la produccin de citoquinas proinflamatorias (IL1, TNFalfa) se secretan interferones de tipo I
que tienen actividad antiviral.

Efectos antivirales inducidos por los IFN del tipo I

Los interferones de tipo I producidos por las clulas infectadas o por clulas del sistema inmune innato en un tejido
infectado actan sobre las clulas vecinas para inhibir la replicacin viral por una multiplicidad de mecanismos,
actuando virtualmente a cualquier paso del ciclo de vida viral.
Hay 3 mecanismos mejor caracterizados:

1. Inhibicin de la traduccin: En muy bajos niveles las clulas expresan una protena quinasa PKR que acta como un
receptor soluble distinguiendo ARN de doble hebra viral de ARN celular (principalmente lo distingue de ARNt). La
activacin por interfern de tipo I aumenta la expresin de PKR, y solo en estos niveles puede afectar la replicacin
viral. Esto es consecuencia de que PKR fosforila un factor que interviene en la maquinaria de la traduccin de ARNm y de
esa manera inhibe en forma indiscriminada la sntesis proteica en la clula infectada.

2. Degradacin del ARNm: Tambin la activacin por el receptor de interfern tipo I conduce a la sntesis de una
oligoadenilato sintetasa. Esta enzima slo sintetiza los oligonucletidos oligoA si se une a ARN de doble hebra. Estos
oligos activan una RNAsa L que es capaz de degradar ARNm, y ARN ribosomal inhibiendo as la sntesis proteica.

3. Inhibicin de la transcripcin; Inhibicin del ensamblaje del virus: Las protenas Mx, son GTPasas que forman
estructuras multimricas y pueden desensamblar partculas virales. Todas sus funciones no se comprenden an en
profundidad. Se frena la maquinaria que lleva a la sntesis de los componentes del virus (y tambin de los componentes
celulares)

Receptores que inducen activacin celular e inflamacin; Receptores de la familia RIG (RLRs)

Receptores RLRs (RIGI like receptors)

Son receptores citoslicos, importantes en el
reconocimiento de virus. Expresados en DC,
macrfagos, fibroblastos y clulas epiteliales.
Poseen dominios CARD, helicasa y un dominio Ct
llamado represor (RD). En RIG-I, el dominio RD
estara involucrado en el reconocimiento del
ligando.
Los receptores RIGI, Mda5, y LGP2 pertenecen a la superfamilia de helicasas 2 o ATPasas. Ellos comparten motivos
helicasa conservados que median la unin a ATP y cidos nucleicos, y se ha comprobado que tienen actividad helicasa. La
hidrlisis de ATP es tpicamente estimulada por el enlace de cidos nucleicos y resultara en cambios conformacionales
del complejo protenaARN.
RIGI y Mda5 reconocen diferentes tipos de virus. RIGI se une a una variedad de motivos virales (virus de la Hepatitis C,
Sendai virus, Influenza virus, virus de la estomatitis vesicular, rabia y encefalitis japonesa). Mda5 parece detectar slo
picornavirus.
Estudios recientes sugieren que RIGI distingue ARN viral de ARN de origen eucariota porque reconoce modificaciones en
los extremos 5 del ARN (une grupos 5 trifosfatos) que son tpicas de los virus. Adems, RIGI podra unir ARN de doble
hebra.
Mda5 se activa por unin a ARN de doble hebra y a anlogos de polmeros ricos en inosina e citosina (poly[I:C]); sin
embargo el motivo determinante de la unin no se ha descrito.
LGP2 es una protena que muestra homologa con RIGI y Mda5, pero pierde el dominio efector CARD y por esa razn se
postula que podra actuar como un inhibidor.

Efectos inducidos por la activacin a travs de RLRs: induccin de IFN de tipo I (/) e ILs proinflamatorias

Sealizacin por RIGI

RIGI es un receptor intracelular para ARN viral. Posee un dominio helicasa de unin a ARN viral y dos dominios en
tandem CARD en el extremo Nt.
El enlace del ARN al dominio helicasa induce un cambio conformacional que expone el dominio CARD e inicia una cascada
de sealizacin intracelular.
IPSI es una protena mitocondrial que tambin posee un dominio CARD y puede mediar la activacin de factores de
transcripcin como NFB e IRF3, debido a que activa IKK and TBK1/IKK. Una vez activados, NFB e IRF3 se translocan al
ncleo y participan en la transcripcin de citoquinas proinflamatorias e IFN de tipo I, respectivamente.
La localizacin de IPSI en la mitocondria parece ser crucial para la activacin ya que se ha comprobado que el virus de la
Hepatitis C evade la sealizacin por RIGI por medio de una proteasa que libera a IPS1 de la mitocondria.
Los efectos del reconocimiento por parte de estos receptores RLRs son anlogos que las que vimos para TLRs. Se
sintetizan interferones del tipo I y citoquinas proinflamatorias; una vez que se reconocen los componentes se generan
una serie de seales que activan la transmisin de este mismo conjunto de molculas.

Mecanismo de activacin de linfocitos NK

Las clulas NK poseen una variedad de receptores que utilizan

para cumplir su funcin centinela, buscando detectar
alteraciones asociadas a infecciones o transformaciones
malignas. Muchos de sus receptores de las clulas NK no estn
completamente caracterizados, pero se conocen dos grandes
grupos:
1 Receptores capaces de inducir seales que activan a la clula
(esquematizadas con flechas rojas), y colectivamente se los ha
llamado KAR (del ingls, Killer Activating Receptor).
2 Receptores que disparan seales de inhibicin de la
activacin celular, llamados colectivamente KIR (del ingls,
Killer Inhibiting Receptor). Entre los ligandos de estos
receptores, el ms conocido es la molcula del complejo mayor
de histocompatibilidad de clase I, MHCI (sistema de molcula
que muestra al exterior lo que se sintetiza dentro)
El balance entre estas seales determina si la NK se activa o no.
Cuando una clula NK interacciona con una clula sana (panel
izquierdo, figura central), las seales recibidas a travs del KIR
predominan y la clula NK no se activa.
Por el contrario, cuando una clula NK interacciona con una
clula infectada o transformada, las seales provenientes del
KIR desaparecen (panel izquierdo, arriba) o bien las seales
mediadas por el KAR se hacen mucho ms fuertes (aumento de
las seales de estrs). El balance en cualquier caso es la
activacin y el desencadenamiento de un mecanismo txico que
mata a la clula blanco por apoptosis.
Por ser una clula de la inmunidad innata, sabemos que las NK tienen un reconocimiento de patrones de cosas, pero no
reconocimiento fino y especfico. Adems, como los TLRs y RLRs son receptores de clulas residentes (por ejemplo
macrfagos, DC), sabemos que los NK no tienen TLRs ni RLRs, reconocen mediante el mtodo recin explicado.

NK destruyen clulas MHC-I que expresan seales estimuladoras o clulas que no expresan MHC-I. Muchos virus como
parte de sus mecanismos de evasin, inducen una disminucin de la expresin de los complejos de MHC-I, pero el
linfocito NK sensa eso como algo que induce su inactivacin y provoca la apoptosis.

La clula que est activada induce la muerte de la clula infectada

por apoptosis. La clula blanco, una vez que contacta con la clula
NK y la NK se activa por reconocimiento, desencadena el
mecanismo de apoptosis. La serie de pasos es muy caracterstica. Se
achica, se condensa su cromatina, hay cambios en el ncleo, el
ncleo se fragmenta y genera lo que se denomina cuerpos
apoptticos. Todo queda siempre encerrado por una membrana,
no hay liberacin del medio interna al externo. Los cuerpos
apoptticos son luego removidos por los fagocitos.

La calidad e intensidad de la respuesta innata determinan el tipo e intensidad de la respuesta adaptativa

En el esquema presentado, de lo que puede haber pasado en el tejido por la consecuencia de la presencia de un antgeno
(o patgeno). Sabemos que pas algo por la presencia de clulas como macrfagos (que en un tejido sano no estaran
presentes); hay un proceso inflamatorio. El hecho de que el tejido est inflamado y que se hayan expresado determinadas
molculas en los vasos tambin tiene la informacin necesaria para que los protagonistas de la inmunidad adaptativa que
se van a generar despus sepan donde tienen que ingresar.
La influencia de la inmunidad innata en el desarrollo de la inmunidad adaptativa
Como ya vimos la respuesta innata es fundamental para dirigir el trnsito de las clulas y molculas acumuladas en el sitio
de la infeccin a los rganos donde se encuentran los linfocitos, capaces de iniciar la respuesta adaptativa.
Adems de actuar como fuerza que impulsa este transporte al ganglio, la respuesta innata imprime su sello a la respuesta
adaptativa a travs del mensaje que llevan el conjunto de molculas sintetizadas localmente que son transportadas al
ganglio.
Las citoquinas y las molculas sintetizadas durante la respuesta innata actan como estmulos importantes para la
activacin de los linfocitos en el ganglio. Cada tipo de patgeno es censado a travs de un conjunto particular de PPRs,
que inducir la sntesis de un conjunto determinado de interleuquinas y quimioquinas, que podr variar en calidad y
cantidad respecto al inducido por otro patgeno. As, este conjunto de mediadores llevan al ganglio una informacin
particular que es descifrada de alguna manera por las clulas de la respuesta inmune adaptativa para desarrollar
mecanismos efectores adecuados para eliminar ese patgeno. La respuesta innata influencia la calidad de la respuesta
adaptativa.
Tipicamente, la DC (tambin macrofagos pero ms las DC) pierde su tropismo por el tejido y adquiere un tropismo para
migrar al tejido linftico (ganglios). Por el vaso linftico aferente llega al ganglio linftico ms cercano y ah lo que hace es
interaccionar con las clulas presentes en dicho ganglio. La DC es el mensajero que lleva la informacin de lo que
sucedi en el sitio, al ganglio linftico, que es dnde se activan los protagonistas de la inmunidad adaptativa. Esta
informacin depende de lo que reconoci. En el ganglio se activan linfocitos T y B generando clulas efectoras y de
memoria, y las clulas efectoras llegan a travs de la sangre porque salen por la linfa y luego llegan a la sangre, al sitio
inflamatorio y cooperan con las clulas de la inmunidad innata. As vemos como la respuesta se adapta al patgeno y de
ah viene el nombre: Inmunidad Adaptativa.
Los linfocitos efectores, especficos para el patgeno, generados en el ganglio salen del ganglio a travs de la linfa y son
volcadas en la sangre. Cuando estos linfocitos alcanzan el sitio inflamatorio pueden extravasar porque a diferencia de los
linfocitos vrgenes (no activados por el antgeno) presentan las molculas de adhesin necesarias para unirse al endotelio
y atravesarlo. As, los componentes efectores generados en la inmunidad adaptativa se suman a la accin de las clulas
efectoras de la inmunidad innata para eliminar al patgeno.

El ganglio linftico es el sitio donde entran en contacto los linfocitos con los componentes de la inmunidad innata
Los linfocitos B y T maduros, que expresan los receptores BCR y TCR respectivamente pero nunca han entrado en
contacto con el antgeno, no tienen capacidad para ingresar en los tejidos perifricos, pero s en los ganglios. Los ganglios
son el punto de encuentro de estas clulas con los componentes de la inmunidad innata. Son estructuras a las que llegan
vasos sanguneos que presentan sitios de entrada para los linfocitos circulantes; es decir hay lugares especficos en el
endotelio de estos vasos que permiten el pasaje de los linfocitos al ganglio. Por otro lado, los ganglios colectan el lquido y
las clulas del tejido perifrico a travs de la circulacin linftica; llegan al ganglio vasos linfticos aferentes y salen de l
vasos linfticos eferentes.
Al observar un esquema de la circulacin sangunea (dirigida por las contracciones del corazn) y la circulacin linftica, se
puede observar cmo el endotelio de los capilares linfticos es una monocapa de clulas delgadas que interaccionan en
forma laxa con sus vecinas, permitiendo el pasaje de lquido y clulas a la luz del vaso.
La circulacin linftica, a diferencia de la circulacin sangunea, no tiene un fuerza impulsora porque no tiene un rgano
de bombeo como es el corazn. El flujo de la linfa se da fundamentalmente por diferencias de presin.

Cmo est dirigido el transporte del antgeno y las clulas presentadoras al ganglio linftico?
Para que los linfocitos B y T puedan activarse los antgenos en su forma nativa y clulas presentadoras de antgeno deben
de ingresar al ganglio linftico. Este transporte es facilitado por la respuesta inflamatoria generada durante la respuesta
innata. A continuacin vamos a analizar a travs de qu mecanismos ocurre la inflamacin y cmo esta respuesta
contribuye a la activacin de los linfocitos en el ganglio.

Cmo se desarrolla la inflamacin durante una respuesta innata?

La inflamacin puede ser inducida por la activacin del complemento o de las clulas residentes
Recordemos que en el caso de una infeccin bacteriana hay varios mecanismos que pueden conducir a la formacin de
mediadores inflamatorios.
Las bacterias son potencialmente capaces de activar el complemento; en general la activacin de la va alterna es
posible dada la ausencia de molculas de regulacin de esta va en la mayora de las bacterias. La activacin de la va de
las lectinas depende de la capacidad de unir a las colectinas (MBL o ficolinas), que puede variar entre diferentes
microorganismos. La activacin del complemento genera pptidos vasoactivos como ser C3a, C4a, C5a.
Por otro lado, las bacterias pueden ser reconocidas por PRRs, especialmente de la familia Toll, presentes en los
macrfagos y clulas dendrticas. Este reconocimiento conduce a la secrecin de citoquinas de tipo inflamatorio como IL
1, el factor de necrosis tumoral alfa (TNFalfa), IL8. Estas molculas actan en forma concertada para promover cambios
en la microcirculacin que permiten aumentar la permeabilidad de los capilares sanguneos y promueven la extravasacin
de clulas desde la sangre. Finalmente, la estimulacin de mastocitos por los componentes C3a, C4a y C5a y de las
citoquinas, conduce a la desgranulacin de estas clulas y la liberacin de histamina y otros componentes con
propiedades vasoactivas.

La inflamacin puede ser inducida por la activacin del complemento o de las clulas residentes
En el caso de la infeccin viral, los mediadores inflamatorios tambin pueden derivar de la activacin del complemento o
de las clulas residentes, especialmente dendrticas y macrfagos.

Cules son los efectos de los mediadores de la inflamacin sobre los vasos sanguneos?

A nivel de los vasos capilares y

vnulas postcapilares se pierde
la capa de msculo liso que
rodea al endotelio de las
arterias y arteriolas. Esto
permite la extravasacin celular
a esta altura, ya que las clulas
slo encuentran como barrera
una monocapa celular.
Los mediadores
proinflamatorios contribuyen al
aumento del flujo sanguneo, a
la vasodilatacin y al aumento
de la permeabilidad de los
vasos. Estos dos ltimos
fenmenos se asocian con la contraccin de la clula endotelial (observar la figura superior de la izquierda); la
vasodilatacin aumenta el dimetro del vaso y las clulas se contraen y separan, facilitando el pasaje de lquido y clulas
hacia el tejido.
Los mediadores inflamatorios tambin contribuyen a la detencin de las clulas sanguneas en esta zona de la
vasculatura porque inducen la expresin de molculas de adhesin en el endotelio para las cuales los leucocitos de la
sangre poseen receptores.

La inflamacin media el reclutamiento de los leucocitos de la sangre al sitio de la infeccin

Esquema de los cambios que ocurren en la expresin de molculas de adhesin celular en el endotelio durante una
respuesta inflamatoria inducida por la presencia de bacterias.

Cmo ocurre el ingreso de las clulas que vienen circulando en sangre? En la imagen podemos ver un neutrfilo que
viene circulando en sangre, y vemos una serie de protenas en la superficie de dicho neutrfilo que son importantes para
participar en el proceso de atravesar el endotelio. Hay tres tipos de receptores:
1- Un receptor de quimioquina
2- Un ligando de selectina (molculas de adhesin)
3- Un 2-integrina
Si en ese tejido tenemos un foco inflamatorio, por ejemplo una inflamacin derivada de una infeccin bacteriana, vemos
que las DC, macrfagos y mastocitos se activan generando molculas proinflamatorias (IL-1, TNFALFA) y esto hace que el
endotelio se active. Qu quiere decir que el endotelio se active? Significa que se expresan molculas que en el
endotelio no estn presentes cuando no hay inflamacin.
Primero, el ligando de selectinas interacciona con la selectina del endotelio, un proceso llamado rodamiento, el
neutrfilo se detiene, encuentra el lugar. Luego, el receptor de quimioquinas interacciona con un proteoglicano
(quimioquina) del endotelio mediante un proceso que llamamos activacin, el cual induce un cambio de conformacin
en la 2-integrina, lo cual permite la adhesin fuerte, por la interaccin de dicha integrina con otra protena del
endotelio. Es as que la clula logra la trasvasacin . Una vez que lleg al tejido, el neutrfilo se debe orientar y llegar al
sitio adecuado. Para esto intervienen las quimioquinas, que mediante quimiotaxis median la orientacin del neutrfilo.
http://bcs.whfreeman.com/immunology6e/content/anm/kb01an01.htm Ver animacin en pgina

Concepto importante: Todo el movimiento de las clulas del sistema inmune est ligado y dirigido por interacciones
entre ligandos y receptores. Solo ingresan a determinado lugar las clulas que poseen determinados receptores para algo
que se est produciendo en ese lugar.

Una vez en el tejido, las clulas migran bajo la direccin de molculas quimioatrayentes: C5a, C3a y quimioquinas
Quimiotaxis
Llamamos quimiotaxis al movimiento de las clulas dirigido por un gradiente de concentracin de una molcula
atrayente, que la clula censa mediante receptores de membrana. Las sustancias que generan dicho gradiente pueden
ser exgenas (por ejemplo, toxinas bacterianas) o endgenas, entre las que se encuentran diferentes mediadores
qumicos como ser:
- citoquinas de la familia de las quimioquinas (como IL8, MCP1);
- componentes del sistema del complemento, sobre todo C5a;
- metabolitos del cido araquidnico, principalmente el leucotrieno B4 (LTB4).

C5a es una molcula con actividades pleiotrpicas.

- Es el mediador proinflamatorio ms potente generado por activacin del complemento. En cuanto a su actividad
anafilctica, C5a es alrededor de 20 y 2000 veces ms potente que C3a y C4a respectivamente; mientras que como
molcula quimioatrayente (quimiotaxina) es la nica molcula capaz de inducir directamente la migracin de clulas de
todos los linajes mieloides (monocito/macrfago, neutrfilos, eosinfilos y basfilos) a concentraciones subnanomolares
a nanomolares.
- La comparacin de C5a con otros mediadores inducidos por patgenos o por dao tisular, tambin muestra que C5a es
una molcula proinflamatoria excepcional; las aminas vasoactivas, como la histamina, son muy potentes como
anafilatoxinas pero no tienen propiedades quimiotcticas, mientras que las quimioquinas, por ejemplo IL8, MCP1,
RANTES, tienen una actividad mucho ms selectiva que C5a; como su nombre lo dice, las quimioquinas inducen
quimiotaxis, pero generalmente su accin es eficiente sobre un reducido grupo de tipos celulares. La capacidad de las
quimioquinas de inducir anafilaxis no se ha estudiado en todos los casos.

Cul es el destino final del lquido y las clulas que se acumulan en el sitio de la infeccin?
Consecuencias de la inflamacin
El aumento de lquido en la zona inflamada conduce al aumento de la presin local. Esta presin dirige el trnsito de las
clulas, a travs de la linfa, desde el sitio de inflamacin a los ganglios linfticos prximos, sitios en donde se encuentran
los linfocitos B y T, capaces de reconocer especficamente componentes extraos. As la respuesta inflamatoria resulta
fundamental para conectar los componentes de la inmunidad innata y adaptativa.

La inflamacin aumenta el drenaje a los ganglios del lquido y las clulas que se acumulan en el sitio de la infeccin
La circulacin sangunea y linftica
Nuestros tejidos se nutren a partir de los componentes de la sangre que atraviesan la red capilar; el filtrado continuo de
la sangre constituye el lquido extracelular. Este lquido no est estancado, circula a travs de los vasos linfticos, y
retorna a la circulacin sangunea. A diferencia de la circulacin sangunea, que es dirigida por la contraccin del corazn,
la circulacin linftica es dirigida por diferencia de presin y por la contraccin muscular, siendo este trnsito ayudado
por una serie de vlvulas unidireccionales que impiden el retorno del lquido al tejido. El lquido que circula por esta red
de vasos linfticos se denomina linfa. La linfa se vierte nuevamente en la sangre pero en su trayecto atraviesa una red de
rganos ganglios linfticos en donde se ubican entre otras clulas los linfocitos B y T.
La migracin de las clulas inflamatorias por los vasos linfticos est facilitada por quimiotaxis

La migracin de las clulas inflamatorias, presentes en el sitio

de la infeccin, hacia el ganglio es un proceso que est
facilitado por quimiotaxis. En la diapositiva se muestra que en
el ganglio se expresan en forma constitutiva molculas
quimioatrayentes, CCL19 y CCL21, que participan en dirigir la
migracin de las clulas. El receptor para estas quimioquinas
es CCR7 que es expresado en algunas
clulas inflamatorias, principalmente clulas dendrticas y
monocitos inflamatorios, las cuales por tanto migrarn en
respuesta al gradiente de concentracin generado por CCL19 y
CCL21.
En la imagen tenemos un esquema de una clula dendrtica
residente en la periferia con sus receptores. Nos referimos con
periferia a cualquier tejido que sea puerta de entrada de
patgenos. A esta DC la llamamos clula inmadura ya que
todava no le ocurri nada. Esta clula est expresando varios
receptores, tipo lectina, tipo Toll, etc. Esta haciendo
macropinocitosis activamente, como muestreo del contenido
del lquido extracelular. Tambin tiene receptores para
quimioquinas y varios ms.
Al madurar, esta clula cambia. Cambia su fenotipo y las cosas
que expresa, sus receptores. A este proceso se le llama maduracin. El nuevo fenotipo de la DC le permite migrar a los
ganglios gracias a que esta DC madura expresa un receptor, CCR7, para quimioquinas que se expresan en el ganglio. Slo
se expresa cuando migra, cuando es madura.
IMPORTANTE: La migracin al ganglio de las clulas dendrticas maduras es parte del funcionamiento normal del sistema
inmune, ocurre en ausencia de inflamacin. Este es un mecanismo de vigilancia basal, mediante muestreo de lo que
ocurre en el tejido.
Si adems hay sealizacin por receptores PRR, el nivel de CCR7 es mucho mayor, la capacidad de la clula de migrar al
ganglio se ve reforzada. (ver siguiente)
En ausencia de estmulos inflamatorios, las clulas dendrticas inmaduras residentes en los tejidos adquieren la
capacidad de expresar CCR7. Esto es parte del proceso de maduracin normal de las clulas inducido por estmulos
propios del tejido. Por tanto, en los tejidos perifricos las clulas dendrticas actan como centinelas, utilizando un
abanico de PPRs para censar la presencia de patgenos o de clulas daadas. Una vez que maduran, migran al ganglio
donde pueden interactuar con las clulas T para transmitir informacin sobre la presencia de seales de peligro.

La sealizacin por PRR incrementa la expresin de CCR7 favoreciendo la migracin de las DC al ganglio linftico
La unin de los PAMPs a PPRs de tipo no fagocticos conduce a la activacin celular, generando no slo molculas txicas
y con actividad proinflamatoria, sino adems induciendo la expresin en la membrana celular de receptores involucrados
en la migracin y en la comunicacin clulaclula. En particular, los receptores de tipo Toll (TLR, del ingls, Toll Like
Receptors), son capaces de mediar estos cambios en la expresin de receptores de membrana.
Entre los receptores de membrana que son expresados, CCR7 es muy importante porque como ya mencionamos dirige
la migracin al ganglio linftico. Los ligandos para CCR7 son las quimioquinas CCL19 y CCL21 que son expresadas
constitutivamente por las clulas del estroma de los ganglios linfticos y del endotelio de los vasos linfticos.
La sealizacin por PRR permite que las DC adquieran un fenotipo activado necesario para activar a los linfocitos T

Los estmulos que reciben las clulas dendrticas a travs de los TLRs no slo incrementan la expresin de CCR7 en la
membrana plasmtica, sino que tambin inducen la expresin de otras molculas en la superficie de la clula que
participan en el dilogo con el linfocito T. Estas molculas llamadas coestimuladores son fundamentales para que ocurra
la activacin de un linfocito T vrgen. Cuando la clula dendrtica expresa CCR7 y molculas coestimuladoras, decimos
que adquiri un fenotipo maduro y activado.
O sea que podemos tener:
- DC inmadura, en tejidos perifricos
- DC madura, que migra a ganglio
- DC madura y activada. Esta, adems de expresar receptores para las quimioquinas del ganglio, tambin expresa
molculas coestimuladoras, necesarias para activar a los linfocitos T.
Cundo ocurre la activacin del linfocito T virgen?
Las clulas dendrticas son las principales clulas de la inmunidad innata capaces de inmunoestimular a los linfocitos T
vrgenes. Esto es as por varias razones. Por un lado, actan como clulas presentadoras del antgeno porque portan
pequeos pptidos en molculas de MHC de clase I y/o MHC de clase II. Sin embargo, la presentacin de estos complejos
MHCpptido en la superficie de las clulas no es suficiente para que puedan activar a los linfocitos T vrgenes. La
activacin de estos linfocitos requiere de otras seales, disparadas por las molculas coestimuladoras, que slo estn
presentes en las clulas dendrticas activadas (a travs de la sealizacin por TLRs y receptores para algunas citoquinas
inflamatorias). As, la activacin de las clulas dendrticas durante la respuesta Innata es fundamental para la activacin
de la respuesta adaptativa.
Tema 4: Molculas de Reconocimiento de la respuesta inmunolgica adaptativa
CLASE 5, 16/10/2013.

SI INNATO:
- En diferentes formas est presente en plantas, hongos y desde organismos multicelulares primitivos hasta los
vertebrados.
- En estos organismos se encuentran desde pptidos antimicrobianos como defensinas, a molculas del tipo Toll, que
reconocen motivos conservados de patgenos PAMPs y clulas fagocticas.
- Provee una primer defensa frente a patgenos de forma de prevenir y erradicar infecciones
- Acta de forma inmediata frente a la presencia de patgenos
- Los receptores de la inmunidad innata presentan una baja capacidad de reconocimiento de estructuras diferentes; se
dice que tiene una diversidad de reconocimiento de estructuras qumicas muy restringida.
- Frente a sucesivos encuentros con patgenos reacciona con la misma eficiencia e intensidad (no tiene memoria)

SI ADAPTATIVO:
- Est presente slo en vertebrados con mandbulas (superiores)
- Presenta receptores con capacidad de reconocimiento de una enorme diversidad de estructuras qumicas.
- Acta en forma lenta, lleva varios das en desarrollar una respuesta inmunolgica.
- Frente a sucesivos encuentros con el patgeno acta de forma rpida y eficiente (memoria)
- De esta forma da lugar a una respuesta inmune adaptada al patgeno en cuestin.

El sistema inmune adaptativo es caracterstico de los vertebrados:

Si bien existen ortlogos de muchas molculas del sistema inmune innato que son compartidas (por ejemplo los Toll Like
Receptors o pptidos antimicrobianos (defensinas), que se han encontrado desde plantas a mamferos), hay una serie de
macromolculas que son caractersticas del sistema inmune de los vertebrados con mandbulas. Estas macromolculas,
que iremos viendo a lo largo del curso, incluyen: los anticuerpos, el receptor de los linfocitos T y Molculas del Complejo
Mayor de Histocompatibilidad. En particular los anticuerpos y el receptor de los linfocitos T, son las molculas que
confieren al sistema inmune adaptativo la capacidad de reconocer especficamente virtualmente cualquier estructura
qumica que pueda ingresar al organismo, y sobre esta base montar una respuesta inmune adaptada al patgeno en
cuestin.

Descubrimiento del SI adaptativo:

- 430 AC Tucydids: los que se recuperaban de la plaga (patgeno?) no volvan a tener la enfermedad (castigo de los
dioses)
- 400 AC China e India: primeros registros de variolizacin (2% vs 25-40% mortalidad)
Variolizacin: tomar secreciones de individuo infectado e inocular a individuos sanos con el propsito de que el segundo
individuo genere una respuesta inmune. Ya que no era como una vacuna inocua, se corra el riesgo de que el segundo
individuo no logre desarrollar una respuesta necesaria para generar inmunidad, y enfermara.
- 1700 variolizacin entra en Europa (King George I)
- En 1796 Jenner desarrolla la primer vacuna segura contra la viruela. Inocul al hijo de su jardinero con viruela bovina
(menos virulenta que la viruela humana). Posteriormente lo inocul con viruela humana y no desarroll ningn sntoma.

La inmunoglobulinas son las molculas responsables de la inmunidad humoral:

Cmo comenz la
identificacin de los
componentes que mediaban la
proteccin?
- En 1890 se realiz un trabajo en
el que se inyectaron ratones con
preparaciones de Clostridum
tetani, luego de unas semanas se
transfirieron 2 ml de sueros de
los mismos (ratones
previamente inoculados con CT
sobrevivientes) a un nuevo
grupo de ratones. Cuando estos
ltimos se infectaron con la bacteria sobrevivieron (haban adquirido resistencia a travs del suero de los ratones que ya
haba tenido la enfermedad), mientras que murieron los ratones del grupo control que no recibi suero. Esto demostr
que el contacto con componentes del patgeno induca la produccin de sustancias que conferan proteccin y que
estas se encontraban en el suero.
- En 1939 Tiseliu y Kabat, demostraron en que fraccin del suero se encontraban estas sustancias. Para esto inmunizaron
ratones con ovoalbumina (OVA). Luego de algunos das extrajeron el suero, y lo adsorbieron con OVA (con lo cual
eliminaron del suero los componentes reactivos). Comparando por electroforesis ambos sueros se concluy que la
sustancia responsable del reconocimiento especfico estaba en la fraccin gamma. De ah el nombre inmunoglobulinas
que utilizamos como sinnimo de anticuerpos.
La manipulacin del sistema inmune para producir anticuerpos que confirieran proteccin a las enfermedades (vacunas)
o para utilizarlos en la inmunizacin pasiva (por ejemplo sueros como el antitetnico que neutralizaban toxinas) le dio
gran impulso a la denominada inmunidad humoral. Esta domin el escenario de la inmunologa hasta mediados del siglo
pasado, donde comenz a hacerse evidente el rol que cumplan los componentes celulares del sistema inmune, lo que
culmin con el descubrimiento del papel de los linfocitos T, que tambin posee un receptor de reconocimiento en su
membrana (TCR), de caractersticas similares a los anticuerpos, que determina la especificidad de las importantes
funciones que esta clula juega en el funcionamiento del sistema inmune

Molculas de reconocimiento del sistema inmune adaptativo:

En el sistema inmune adaptativo hay tres tipos de molculas que intervienen en el reconocimiento del antgeno.

- Los anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig) que se presentan como receptores de membrana (BCR) en los linfocitos B, o
son secretados por estos una vez que se han transformado en plasmocitos.

- El receptor T (TCR) de los linfocitos T, que segn el tipo de cadena que lo forme puede ser o . Mientras que la
funcin de estos ltimos es compleja y alguna de ellas todava quedan por entender. Los linfocitos con receptores
reconocen pptidos unidos a molculas del complejo mayor de compatibilidad (MHC) que son receptores de membrana
presentes en un variado nmero de clulas. La interaccin TCR con el pptido MHC media importante funciones
reguladoras y efectoras de estos linfocitos.

- Las molculas de MHC son el tercer tipo de estructura que participan en el reconocimiento del antgeno y su funcin
principal es formar un complejo con pptidos derivados de patgenos y de esta forma reclutar la accin de los
correspondientes linfocitos T especficos. Mientras que el reconocimiento en el caso de las Igs y los TCRs es de muy alta
especificidad, las molculas de MHC interactan con el antgeno con baja especificidad, de esta forma un nmero
limitado de molculas de MHC pueden presentar una elevado nmero de pptidos. Existen dos tipos de molculas de
MHC, MHC de clase I y clase II. Mientras que los primeros estn presentes en todas las clulas nucleadas, los ltimos
estn restringidos a un nmero limitado de clulas del sistema inmune.

El sistema inmune adaptativo funciona sobre la base de una distribucin clonal:

El sistema inmune adaptativo

funciona sobre la base de una
distribucin clonal de
receptores vinculados al
reconocimiento especfico.
Qu significa esto? Que en
el proceso de generacin de
los linfocitos, se produce en
forma aleatoria un receptor
de membrana con una
determinada especificidad, es
decir con la capacidad de
reaccionar con una nica
estructura qumica. De este
modo, en cada clula hay una
nica especificidad. Ntese
que este proceso conlleva el
riesgo de producir clones reactivos contra componentes propios. Por esta razn que existen mecanismos de tolerancia
para eliminar los clones autoreactivos.
Una vez que se ha generado el repertorio de linfocitos, opera un mecanismo de seleccin clonal por el cual los clones con
especificidad por componentes propios son eliminados (si esto falla tenemos un ejemplo de causa de enfermedad
autoinmune), mientras que los clones con especificidad por componentes no-propios o alterados (como los de las clulas
tumorales) son estimulados por el antgeno para proliferar (aumento de nmero) y diferenciarse (cambios fenotpicos).
Los cambios fenotpicos dan lugar a la aparicin de clulas que van a contribuir a la destruccin de la agresin (por
ejemplo capaces de secretar anticuerpos) mientras que otras se convierten en clulas de memoria, que aseguran una
rpida respuesta en caso de que vuelva a producirse la infeccin.

Estructura bsica de anticuerpos y TCR (receptor de linfocitos T):

El dominio de inmunoglobulina es una estructura de plegamiento tridimensional que adquiere un polipptido en el
espacio. Este dominio se repite uno detrs del otro (como los vagones de un tren)
en las molculas de reconocimiento de la inmunidad adaptativa (Anticuerpos y TCR). Est formada por 2 hojas beta
antiparalelas enfrentadas entre s conectadas por un puente disulfuro (de ah que esta estructura se conoce tambin
como sndwich beta). Los bucles que conectan las cadenas beta que forman parte de las hojas beta estn conectadas por
pequeas vueltas de la cadena polipeptdica denominadas loops o bucles (mostradas en rojo y amarillo). Dentro de las
hojas beta las cadenas beta que la forman, adquieren una estructura estirada en la cual cada cadena o hebra interacta
con una porcin adyacente intracatenaria estableciendo puentes de hidrgeno.

Las clulas protagonistas del sistema inmune adaptativo son el linfocito B y el linfocito T.
La funcin principal del linfocito B es la secrecin de anticuerpos. Los anticuerpos o inmunoglobulinas son glicoprotenas
que tienen sitios de unin al antgeno y una regin constante vinculada a las funciones efectoras de los mismo.
Se encuentran como receptores de membrana formando complejos con otras protenas (BCR) o como productos solubles
secretados por linfocitos B diferenciados en plasmocitos. A travs de su unin los anticuerpos ejercen una serie de
funciones efectoras:
a) Bloquean o neutralizan directamente al antgeno que reconocen (por ejemplo si se unen al la regin de un virus que
interacta con la clula que va a infectar, se bloquea la infeccin)
b) Opsonizan patgenos favoreciendo su fagocitosis por clulas como los macrfagos y neutrfilos, los cuales tienen
receptores que se unen a la regin constante de los anticuerpos
c) Disparan la va clsica del complemento al unirse al patgeno a travs de la activacin del componente C1q del
complemento
d) Median la actividad de citotoxicidad celular de las NK y eosinfilos al unirse a los antgenos expresados en clulas
infectadas o tumorales, o a la superficie de parsitos.

Si tenemos un anticuerpo que reacciona

con un antgeno A y otro que reacciona con
un antgeno B (A B, y asumiendo que
estos anticuerpos son de la misma clase o
isotipo, ver ms adelante), veremos que
hay dominios que son iguales
(denominados dominios de
Inmunoglobulinas constantes, mostrados
en azul) entre estos anticuerpos, y
dominios que son diferentes entre estos
dos anticuerpos que reconocen diferentes
antgenos (denominados dominos de
inmunoglobulinas variables, mostrados en
blanco). La estructura bsica de los
anticuerpos es la que se representa en la
diapositiva y consta de 2 cadenas pesadas
idnticas entre s y 2 cadenas livianas
tambin idnticas entre s, unidos todos
por puentes disulfuro.
La cadena pesada consta de 1 dominio variable y 3 o 4 dominios constantes (dependiendo de la clase de anticuerpo, ver
ms adelante). La cadena liviana consta de 2 dominios de inmunoglobulina, 1 variable y 1 constante.
Recordar que cada uno de estos dominios, que en la imagen se ven como elipses, corresponden a la estructura qumica ya
mencionada, de sandwich beta con 2 hojas beta antiparalelas enfrentadas entre s conectadas por un puente disulfuro.

La estructura bsica de las inmunoglobulinas:

La estructura bsica de los anticuerpos consiste de dos cadenas

pesadas idnticas (aprox 50 kDa c/u para IgG), y dos cadenas
livianas tambin idnticas de (aprox 25 kDa).
Ambas estn constituidas por dominios de aprox. 110
aminocidos, estos dominios tienen un plegamiento (estructura
terciaria) caracterstico constituido por dos hojas beta
antiparalelas conectadas por un puente disulfuro y unidas por una serie bucles.
En el caso de la regin variable, es en estos bucles o loops que se encuentran los residuos que interactan con el ligando
(antgeno).
La combinacin de los dominios N-terminales de las cadenas livianas y pesadas (denominado dominios variables VH y
VL) da lugar al sitio de unin al antgeno (denominamos antgeno a la molcula que reacciona con un anticuerpo). Hay
dos sitios de unin al antgeno por molcula, que tambin se llaman paratopes. El partope interacta con el eptope del
antgeno. La existencia de dos partopes permite reforzar la interaccin con antgenos multivalentes, as como la
formacin de agregados que permiten la eliminacin final del antgeno. Los anticuerpos se pueden cortar con proteasas y
se puede cortar de forma de que queda solo la regin Fab, formada por cuatro dominios: dos variables (pesada y liviana)
y dos constantes (pesada y liviana).
En los loops de los dominios variables de las inmunoglobulinas de las cadenas pesadas y livianas se encuentran los
aminocidos que van a hacer contacto con el EPTOPE del antgeno, estos aminocidos varan en anticuerpos especficos
para diferentes antgenos. Estos loops de las hojas beta de los dominios variables de las Inmunoglobulinas se denominan
CDRs.
Para facilitar la unin de ambos partopes, existe una regin bisagra que adapta el ngulo que forman los dos brazos
de la Ig al unirse al antgeno. Esta caracterstica estructural ha sido explotada por algunos patgenos que desarrollaron
proteasas capaces de digerir estas regiones y privar al anticuerpo unido de sus funciones efectoras.
Los dominios de las cadenas pesadas ms cercanos al C-terminal, forman la regin denominada Fc. No todos los
anticuerpos son idnticos en esta regin y estas diferencias dan lugar a la existencias de distintas clases de
inmunoglobulinas. All se encuentran los sitios de unin al componente C1q del complemento, y en distintas clulas como
macrfagos, neutrfilos, NK, existen receptores (de distintos tipos) para esta regin. Por esta razn, la regin Fc est
asociada con muchas de las funciones efectoras de las Ig.
La regin Fc se encuentra fuertemente glicosilada en las distintas clases.
Qu diferencia hay entre un dominio inmunoglobulina variable y uno constante?

La variabilidad y la estructura primaria

Descubrimiento de cmo el SI crea un anticuerpo para reconocer una cosa y otro para reconocer otra.
Las primeras evidencias sobre los factores estructurales que determinan la especificidad de las Ig se obtuvo a travs de
la secuenciacin de un nmero elevado de Ig monoclonales obtenidas a partir de mielomas. La comparacin de
secuencias mostr que en la regin variable existan posiciones que variaban con una frecuencia mucho mayor. Estas
posiciones se acumulaban en tres regiones de la cadena pesada y tres de la liviana. Dichas regiones se denominaron
regiones determinantes de la complementariedad (CDR). El conocimiento de estructura de Ig obtenido a travs de
cristalografa de rayos X mostr que los 6 CDR se agrupan en una misma regin del espacio formando el partope.
Lo que se fue haciendo fue secuenciar anticuerpos que tenan diferentes eptopes de diferentes antgenos, para ver
donde estaba la diferencia de aminocidos. Se representa la variabilidad entre varios anticuerpos en funcin de los
residuos de aa de la regin variable y lo que se ve es que si bien hay variabilidad en toda la secuencia de Ig, hay regiones
hipervariables, a las cuales denominamos CDR. Aqu estn los aa responsables de la variabilidad entre dos anticuerpos.
Esto ocurre en la liviana y en la pesada.
Las cadenas pesadas y livianas contienen tres regiones de hipervariablidad (CDR)que resultan agrupadas especialmente
por el plegamiento de las cadenas de Igs.
El dominio de inmunoglobulina
es una forma de plegamiento
de protenas ampliamente
distribuido en la naturaleza;
muchas de las molculas del
sistema inmune contienen
dominios de este tipo, y forma
la superfamilia de las
inmunoglobulinas.
En el caso de la regin variable
de las cadenas pesadas y
livianas, este tipo de
plegamiento aproxima en el
espacio los respectivos CDRs.
Muchas de las molculas del SI
que participan en los procesos
de reconocimiento, adhesin y
unin, contienen el dominio de
Ig en su estructura.

La tipologa del sitio de unin del anticuerpo es distinta para los distintos tipos de antgenos
La estructura de la molcula de inmunoglobulina presenta gran variacin a nivel del sitio de unin al antgeno. En los
distintos ejemplos lo que se observa es una tendencia a maximizar la superficie enterrada en la unin, que por otra parte
asegura el mayor contacto posible y por tanto la mayor afinidad de unin. Ntese que estructuras pequeas como los
haptenos (a), se acomodan en partopes que presentan cavidades, mientras que en el caso de macromolculas como se
muestra en (c y d) hay una importante regin del partope que reacciona con el antgeno. El caso (b) corresponde a un
pptido que en general se acomodan en ranuras.
Dependiendo del tipo de eptope es la forma del partope.

La combinacin de la regin variable de las cadenas livianas y pesadas forma el paratope

La asociacin de las cadenas livianas y pesadas combina los 6 CDRs conformando el partope. Los CDR3 de cada cadena
(liviana y pesada) ocupan la porcin central del partope y tiene un papel fundamental en la interaccin con el antgeno.
Los CDR3, son los ms diversos dentro de las inmunoglobulinas.

La reaccin antgeno-anticuerpo es una reaccin de equilibrio resultante de la cooperacin de un alto nmero de

interacciones dbiles:

La reaccin antgeno (Ag) - anticuerpo (Ac) es una reaccin de equilibrio

que est gobernada por la ley de accin de masas. Ka=AgAc/AgAces la
constante de absorcin (en la consideracin terica de un nico
partope de la molcula que reacciona con un antgeno univalente). El
inverso de Ka es la constante de disociacin: Kd=1/Ka y es la forma que
se usa genricamente para cuantificar la afinidad de los anticuerpos.
Los valores de la afinidad de los anticuerpos van desde bajas afinidades
(Kd del orden a la menos 6 M) a altas afinidades (kd del orden a la
menos 10 M). La alta afinidad de los anticuerpos, que se optimiza en el
transcurso de la respuesta inmune tiene una gran relevancia
biolgica. As por ejemplo, se requieren anticuerpos de alta afinidad para que el complejo AgAc se forme a bajas
concentraciones de anticuerpo (tal como ocurre en el caso de un segundo encuentro con el patgeno, o en sitios de difcil
acceso), tambin es importante que el complejo AgAc se forme a bajas concentraciones de antgeno. Por ejemplo una
sola molcula de la toxina diftrica puede eliminar una clula y por tanto an a muy bajas concentraciones es necesario
neutralizarla rpidamente.
Muchas veces no es la bacteria que nos infect la que provoca la enfermedad mortal, sino que es las toxinas que sta
libera. Estas toxinas pueden ser muy potentes, por lo que unas pocas molculas de dicha toxina nos pueden matar. Lo
importante es que si tenemos un anticuerpo con mucha afinidad se va a asociar con el antgeno para dar el complejo
AgAc con concentraciones muy bajas (toxinas). Cuando se une, el anticuerpo neutraliza a la toxina y no la deja actuar
sobre las clulas blanco; no se produce efecto.
La afinidad alta tiene otra gran importancia. Cuando ha pasado mucho tiempo desde una infeccin, la cantidad de Ac que
tenemos circulando en sangre baja hasta niveles muy pequeos. Si el anticuerpo tiene alta afinidad, se necesitar poco
para reconocer al antgeno.
Las fuerzas que determinan la unin son las que se observan en otras interacciones entre macromolculas. Estas fuerzas
dbiles dependen fuertemente de la orientacin y la distancia, y por tanto de la complementariedad de la interfase de
unin. La alta exigencia de complementariedad es la razn ltima de la especificidad de los anticuerpos, que a veces se
asimila al concepto de llave-cerradura.
La regin del antgeno con la que reacciona el anticuerpo se denomina eptope. En el caso de antgenos proteicos se
pueden distinguir los eptopes continuos o discontinuos. Mientras que en los primeros los principales residuos de
contacto provienen de un regin de la secuencia primaria de la protena, en los segundos los residuos involucrados son
aproximados en el espacio por el plegamiento de la protena. Los eptopes discontinuos pueden perderse por
desnaturalizacin de la protena.
En el caso de uniones multivalentes (cuando al menos dos de los sitios de unin del anticuerpo se unen a un antgeno
multivalente), la unin se ve reforzada por el aumento de nmero de contactos como se discute en la lmina siguiente.

La afinidad y especificidad de los anticuerpos son conceptos distintos

Los conceptos de Afinidad y Especificidad tienden a confundirse. Un anticuerpo de mayor afinidad por un antgeno NO
NECESARIAMENTE es ms especfico. La especificidad es un concepto relativo y depende de con que otras molculas
pueda o no presentar reactividad cruzada.
Ejemplo de una llave: Si asimilamos una llave a un anticuerpo, diramos que la llave es especfica para una dada cerradura
(antgeno), pero si por casualidad o por similitud abre otras cerraduras, entonces eso sera el equivalente a la reactividad
cruzada.
Otro punto importante es el de la alta afinidad de los anticuerpos. Durante la respuesta inmune la afinidad de los
anticuerpos mejora, hasta alcanzar valores muy altos.

El significado biolgico de la afinidad:

- Neutralizar virus o toxinas cuando estos antgenos estn en baja concentracin.
- Combatir la re-infeccin ha pasado mucho tiempo del primer encuentro y el anticuerpo est en baja concentracin.
- Asegurar la formacin de complejos antgeno-anticuerpo estables.

Afinidad: fuerza de unin entre el sitio del Ac (partope) y el eptope.

Especificidad: Concepto que define el grado de reactividad cruzada que presenta un anticuerpo o como este anticuerpo
distingue al antgeno respecto al resto de las molculas.
Reactividad cruzada: Propiedad por la cual un anticuerpo generado contra un determinado antgeno reacciona con otro,
no necesariamente relacionado. Ej: vacuna de Jenner contra la viruela.

Afinidad vs. Avidez

Afinidad: fuerza de unin entre el sitio del Ac (partope) y el eptope.
Avidez: Sumatoria de la fuerza de unin anticuerpo-eptopes mltiples.
Mientras que la afinidad representa la fuerza de unin de un partope con un eptope, la avidez representa la fuerza
global de la interaccin cuando intervienen varios sitios de unin.
La avidez aumenta geomtricamente respecto a la afinidad, a medida que aumenta el nmero de sitios de unin
involucrados, y tiene por tanto una importante consecuencia biolgica cuando se dan uniones multivalentes, como
veremos, ocurre con ciertas clases de anticuerpos.
Adems de la reaccin antgeno - anticuerpo, el fenmeno de avidez se manifiesta en muchas otras interacciones que
ocurren en el sistema inmune, como en la activacin de la va clsica del complemento por la agregacin de IgG, o
cuando dos clulas interaccin a travs de la unin de sus receptores de superficie como cuando ocurre la activacin de
clulas NK, donde slo a travs de la unin de mltiples receptores de baja afinidad se logra la intensidad de unin
(avidez) necesaria para promover la accin citotxica de estas clulas.

Diferencias en la regin constante de la cadena pesada dan lugar a la existencia de distintas clases de Igs con
especializacin funcional.
No todas las molculas de Ig tienen la misma composicin en las regiones constantes y hay distintos tipos de cadena
pesadas, lo que determina la existencia de distintas clases de inmunoglobulinas. Existen diferencias de secuencias e
incluso algunas poseen un dominio adicional. En los humanos existen 5 clases, IgA, IgD, IgE, IgG e IgM. A su vez, dentro de
las IgA hay dos subclases, y cuatro dentro de las IgG.
Las diferencias estructurales de las cadenas pesadas confieren distinta funcionalidad a las clases y subclases de Ig, que
en definitiva se vinculan a diferencias en cuanto a su interaccin con los distintos receptores para la regin Fc, con los
componentes del complemento, con la flexibilidad de la molcula, su grado de poilmerizacin, etc.
Tambin hay dos tipos de cadenas livianas, y , pero a diferencia de lo que ocurre con las cadenas pesadas, estas
diferencias no se relacionan con la funcionalidad de la molcula.
Todas tienen diferencias en su regin Fc. IgG tiene dos dominios de inmunoglobulina mientras que la IgM tiene tres
dominios de inmunoglobulinas. En la imagen, las partes de color celeste son glicosilaciones que varan entre tipos de Ig.
Dentro de cada clase tambin hay subtipos, tambin con diferencias en la regin Fc.

Los linfocitos B participan en la respuesta inmune mediante la secrecin de anticuerpos.

Las clulas protagonistas del sistema inmune adaptativo son el linfocito B y el linfocito T.
La funcin principal del linfocito B es la secrecin de anticuerpos. Los anticuerpos o inmunoglobulinas son glicoprotenas
que tienen sitios de unin al antgeno y una regin constante vinculada a las funciones efectoras de los mismo.
Se encuentran como receptores de membrana formando complejos con otras protenas (BCR) o como productos solubles
secretados por linfocitos B diferenciados en plasmocitos. A travs de su unin los anticuerpos ejercen una serie de
funciones efectoras:

a) Bloquean o neutralizan directamente al antgeno que reconocen (por ejemplo si se unen al la regin de un virus que
interacta con la clula que va a infectar, se bloquea la infeccin).
Video neutralizacin
Se presenta un virus que por lo general va a infectar un tejido en especial, ya que tiene en su superficie molculas que
reconocen receptores de la clula blanco a travs de la cual unindose a dicho receptores va a infectarla. O sea que la
condicin normal es que el virus difunda encuentre su receptor, infecte a la clula y empiece a replicarse dentro de
ella. Si tenemos anticuerpos especficos para la regin del virus que interacta con el receptor que est en la clula,
ese anticuerpo interrumpe la interaccin clula-virus y no permite la infeccin. Esto es lo que se conoce entonces
como neutralizacin.
Si por ejemplo, nos vacunamos contra ese virus, lo que nos vacunamos fue el fragmento del virus que se usa para
interactuar con el receptor de la clula y generaremos anticuerpos contra esto.
Lo mismo se cumple para toxinas.
Neutralizacin es una de las funciones de los anticuerpos y es llevada a cabo por la regin Fab.

b) Opsonizan patgenos favoreciendo su fagocitosis por clulas como los macrfagos y neutrfilos, los cuales tienen
receptores que se unen a la regin constante de los anticuerpos.
Video Opsonizacin
Las clulas de la inmunidad innata, como los macrfagos, los neutrfilos, tienen receptores que reconocen estructuras
de la pared de la bacteria que le permiten fagocitarla para eliminarla. Hay muchas bacterias que tienen mecanismos
de evasin para no ser fagocitadas, entonces la presencia de estos receptores que reconocen carbohidratos en la
superficie de la bacteria no dan lugar a una fagocitosis eficiente.
Si hay un anticuerpo que puede reconocer estructuras que estn sobre la pared de la bacteria, se puede dar entonces
lo que se conoce como Opsonizacin. Cuando varios anticuerpos se depositan sobre la superficie de la bacteria, le
indican a la clula fagoctica que esta clula debe ser fagocitada. Por qu la clula puede fagocitar a la bacteria
cubierta por anticuerpos? Porque tiene receptores en su superficie, que son especficos para la regin Fc de ciertos
tipos de anticuerpos. Se puede dar a cabo entonces una fagocitosis ms eficiente, llevando a la destruccin de la
bacteria.

c) Disparan la va clsica del complemento al unirse al patgeno a travs de la activacin del componente C1q del
complemento, y d) median la actividad de citotoxicidad celular de las NK y eosinfilos al unirse a los antgenos expresados
en clulas infectadas o tumorales, o a la superficie de parsitos.
Video Activacin del complemento
Se presentan bacterias. Podemos tener anticuerpos de reconozcan estas bacterias, los cuales se unen sobre la
superficie de esa bacteria y una vez que hay varios anticuerpos unidos cercas entre si, vienen las protenas del
complemento: CV1q, CV1r y CV1s que una vez que se ensamblan sobre los anticuerpos, pueden disparar la activacin
del complemento, lo cual lleva a la formacin de poros sobre la superficie de la clula y esta muere.
Esta es la que se conoce como va clsica del complemento; iniciada por anticuerpos.
Funciones efectoras de los anticuerpos: ADCC (Citotoxicidad mediada por anticuerpos)

Si un virus est replicando en cierto tejido, algunas protenas virales (por ejemplo las de la cpside viral) se van a
encontrar insertadas en la membrana celular para comenzar el proceso de ensamblado viral. Si hay anticuerpos
especficos para estos antgenos, estos van unirse marcando a la clula infectada para que sta sea eliminada por
clulas Natural Killer que poseen receptores para IgG1 e IgG3.
Una vez que la clula natural Killer se uni a la clula marcada por anticuerpos a travs de sus receptores para Fc, sta
libera grnulos que contienen granzymas y perforinas las cuales inducen la muerte celular programada o apoptosis de
forma que la clula muere y de esta forma impide la propagacin del virus. Cabe destacar que la clula apopttica muere
pero no se rompe, de forma que el contenido viral permanece dentro de ella, sin poder infectar a otras clulas.

Los anticuerpos actan como sondas especficas, dirigiendo la accin efectora de diferentes tipos de clulas que
actan sobre el patgeno sobre una clula propia infectada o alterada.
Los receptores para la regin Fc de las inmunoglobulinas median la interaccin entre la clula efectora y el blanco.
Este grupo de mecanismos efectores se definen como Citotoxicidad mediada por anticuerpos (abreviado en ingls como
ADCC), aunque algunos autores reservan esta denominacin al citotoxicidad por clulas NK.

- TIPOS DE INMUNOGLOBULINAS -

La IgM es la primer Ig que aparece en la respuesta inmune y tiene estructura pentamrica

La IgM es el receptor de membrana de los linfocitos B vrgenes, y la primer clase de

inmunoglobulina secretada luego de su activacin. En esta situacin, cuando an no se ha
producido la mejora de su afinidad por el proceso conocido como hipermutacin
somtica, los 10 sitios de unin de la molcula pentamrica de IgM pueden unir
simultneamente varios determinantes antignicos y de esta forma reforzar la interaccin
(fenmeno de avidez). No tiene mucha afinidad pero esto lo compensa gracias a su forma
pentamrica aumentando as su fuerza de interaccin (avidez).
Como ventaja adicional, la interaccin con antgenos multivalentes como las superficies microbianas, fuerza un cambio
estructural que expone sitios en su Fc, que resultan ahora accesibles al componente C1q del complemento, iniciando as
la va clsica de activacin del complemento, que se ver en detalle ms adelante en el curso.

La IgM es un indudable ejemplo en el cual se refleja claramente la relacin entre las caractersticas estructurales y la
funcionalidad de la molcula. Por otro lado su gran tamao impide su difusin en los tejidos y esto limita la accin de la
IgM en estos sitios. Su accin principal es en la sangre y la linfa. La IgM tambin es secretada en la cavidad peritoneal y
pleural, principalmente por linfocitos B especiales (clulas B-1 y BZM que se vern ms adelante), los cuales son
fcilmente estimulables por antgenos T independientes.
La IgM tiene una alta capacidad de activar el complemento por va clsica

La unin de C1q a la IgM unida al patgeno permite la activacin C1s y C1r, C1s es una serine proteasa que al activarse
puede cortar C4 liberando el componente C4a con actividad anafilatoxina y C4b que ahora expone un grupo tioester
reactivo que reacciona con nuclefilos en la superficie del patgeno. Luego C2 es tambin procesado dando lugar a C2b
que se une al C4b en la superficie del patgeno formando el complejo C4b2b que acta como una convertasa de C3, que
procesa C3 en C3a y C3b, el resto de la va sigue como se ha visto para las vas alternativa y de las lectinas.

La IgG es el principal tipo de inmunoglobulina encontrada en el suero y la ms verstil

- Neutralizacin (todas)
- Opsonizacin (IgG1, IgG3)
- Activacin del complemento (IgG1, IgG3)
- Citotoxicidad mediada por anticuerpos (IgG1, IgG3)
- Transferida por la placenta al feto (IgG1, IgG3)
- Presenta la mayor vida media en plasma (aprox. 3 semanas, 20 veces ms que IgM)

La IgG es la clase ms abundante en suero, y existen cuatro subclases que en los humanos son: IgG1,
IgG2, IgG3 e IgG4. Hay importante diferencias estructurales que se reflejan en diferencias de funcionalidad. Las subclases
con actividades efectoras ms potentes (en cuanto a activacin de complemento, opsonizacin, etc.) son la IgG1 e IgG3,
siendo la IgG1 la subclase ms abundante de IgG (60-70%). Generalmente las IgG1 y IgG3 reaccionan contra antgenos
proteicos, y son los principales isotipos o subclases que median las reacciones de activacin de complemento y
fagocitosis. La IgG2, por otro lado, se caracteriza por ser producida principalmente contra carbohidratos, como los de las
cpsulas bacterianas, y muchas veces se produce en forma T independiente (en ausencia de colaboracin de los linfocitos
T). Los nios hasta aproximadamente los 5-7 aos, no producen eficientemente respuestas contra antgenos T
independientes y los niveles de IgG2 son comparativamente mucho ms bajos que en adultos, por esta razn son
susceptibles a infecciones por bacterias capsuladas, con recurrentes infecciones de odos por ejemplo. El isotipo IgG4 que
es muy poco abundante en condiciones normales no tiene una clara funcionalidad, su regin Fc es ineficiente en la
activacin de complemento o en facilitar la fagocitosis, y por lo tanto no tiene una componente inflamatoria asociada. Su
funcin principal es probablemente la neutralizacin, en particular vinculada la regulacin por competencia de la IgE, y se
ve un notable aumento de IgG4 (entre 100 y 1000 veces) en los tratamientos de desensitizacin de alergia, o en
apicultores que estn expuestos regularmente al veneno de abejas.
Por su tamao y abundancia algunos isotipos de IgG de alta afinidad son la clase principal de anticuerpos que difunden a
los tejidos, donde llevan a cabo la neutralizacin de toxinas o microorganismos, o bien se unen a estos ltimos dando
lugar a las funciones efectoras que estn asociadas a su regin Fc.

La IgA es la clase predominante en las secreciones de mucosas

 La IgA, en forma monomrica, se encuentra en el suero en concentraciones de
1-3 mg/ml y acta fundamentalmente en la neutralizacin de patgenos o sus
productos dado que no fija complemento. Existen dos cadenas pesadas de
tipos , que dan lugar a los isotipos IgA1 e IgA2. El segundo es
aproximadamente el 10% del total de IgA en suero.
La IgA tiene una funcin principal es en la proteccin de las mucosas, donde se
encuentra formando un dmero (IgA secretora) unido por un polipptido denominado cadena J, y actuando en la
neutralizacin de toxinas y adhesin de patgenos. La IgA secretora aparece en las lgrimas, mucus, saliva, leche y
secreciones intestinales. En estas ltimas, la subclase IgA2 (dimrica) es el isotipo dominante.
Mediante un proceso de transitosis mediada por un receptor conocido como receptor-poli-Ig, la IgA dimrica sintetizada
en la lmina propia atraviesa las clulas del epitelio. Una vez que la IgA lleg a la luz del lumen, el receptor es
fragmentado por protelisis, y parte del mismo (denominado pieza secretoria) protege la IgA dimrica de la protelisis. La
IgA es resistente a las condiciones del tracto digestivo y es transferida al recin nacido con la leche materna.

La IgE tiene un rol principal en la respuesta contra parsitos

- Dirige la accin de los eosinfilos contra parsitos y larvas de insectos

- Degranulacin de mastocitos en presencia de antgenos especficos
- Es la principal mediadora del proceso de alergia
La IgE que aparece en niveles bajsimos en plasma en condiciones normales, puede aumentar
mucho su concentracin en el caso de infecciones por parsitos. Ejerce sus funciones debido a la
existencia de receptores para su Fc. En los mastocitos (clulas que se encuentran en los sitios de
entrada de patgenos, mucosa y piel y que contienen grnulos de histamina y puede secretar
poderosos agentes pro inflamatorios como lpidos y citoquinas) y en su equivalente en
circulacin (basfilos), as como en los eosinfilos activados, en los que existen receptores de alta afinidad (Fc RI) para
esta Ig, que le permiten mediar sus funciones. Dada la alta afinidad de estos receptores, an a las bajas concentraciones
a las que ocurre la IgE, los mastocitos se encuentran armados con molculas de IgE que pueden mediar su activacin
por componentes parasitarios.
La diferenciacin de linfocitos B a un fenotipo secretor de IgE ocurre por la presencia de IL4 e IL5 resultante de la
colaboracin con clulas T especficas para pptidos derivados del parsito, que en el contexto de la infeccin parasitaria
desarrollaron a su vez ese fenotipo.
La alergia se da en individuos, que por razones que no se conocen claramente, tienden a producir IgE contra antgenos
ambientales inocuos. Estos antgenos, cuando ingresan al organismo entrecruzan las IgE unida a la superficie de los
mastocitos dando lugar a su degranulacin con la consiguiente liberacin de agentes proinflamatorios como la
histamina.

Distintos receptores para la porcin Fc de los anticuerpos dirigen la accin de las distintas clases de anticuerpos
Esta tabla muestra toda la gama de receptores Fc que hay para esta serie de anticuerpos, que se encuentran en
diferentes tipos celulares.

La regin Fc determina la funcionalidad y la distribucin de los anticuerpos

En este cuadro se observan algunas propiedades de las inmunoglobulinas, ntese que los tipos IgG1 e IgG3 dominantes
en la mayora de las infecciones bacterianas y virales tienen una gran versatilidad de accin. Esto junto a su larga vida
media y concentracin le da mucho sentido al hecho de que las IgG sean las Igs transferidas al feto. Obsrvese tambin
que no existe una funcin particular detectada para la IgD, cuya principal funcin es la de ser junto a la IgM las Igs de
superficie en los linfocitos vrgenes maduros.

Anticuerpos policlonales y monoclonales

Los anticuerpos producidos en la respuesta

inmune a un antgeno sea por una
infeccin o por inmunizacin con ese
antgeno es de naturaleza policlonal. Esto
es el resultado de que distintos clones de
clulas B son activados y se diferencian en
clulas plasmticas productoras de
anticuerpos. Cada uno de estos clones de
clulas plasmticas producir un
determinado isotipo o subclase de
anticuerpo, con una dada afinidad por el
eptope que reconoce, y habr tambin
clones que reaccionan contra distintos eptopes en el mismo antgeno.
Existen desde hace aos distintas tecnologas para fabricar anticuerpos mucho ms definidos, con una nica especificidad
y la misma afinidad, lo cual representa una ventaja para muchas aplicaciones prcticas de los anticuerpos, tales con su
uso como herramientas analticas o su aplicacin como molculas teraputicas.
La tecnologa ms comn para fabricar estos anticuerpos es la tecnologa de hibridomas en la cual se logra la
inmortalizacin y el clonado del clon de linfocitos B de inters. La lnea celular as establecida secretar anticuerpos
monoclonales, que son bsicamente la misma molcula (aunque suelen presentar diferencias en el grado de
glicosilacin).
Cuando nos infectamos con un patgeno, muchos linfocitos B van a tener receptores que van a reconocer las molculas
de patgeno, se van a activar, van a proliferar y van a sintetizar anticuerpos. Esto hace que tengamos una mezcla de Ac
con diferentes eptopes con diferentes afinidades; tenemos una poblacin heterognea de Ac (mostrado en imagen con
diferentes colores). Para muchas aplicaciones, no es bueno tener tanta variedad; si usamos Ac como herramienta es
mucho mejor tener una nica molcula de Ac que se une a un nico eptope. Esto se puede lograr a travs de un mtodo
in vitro que se llama desarrollo de anticuerpos monoclonales.

Algunas aplicaciones de los anticuerpos monoclonales

- Teraputicas: como frmacos en enfermedades inflamatorias y Cncer
- Analticas: deteccin de molculas pequeas as como macromolculas (inmunoensayos). Por ejemplo el test de
embarazo utiliza anticuerpos monoclonales contra la hormona Gonodotrofita Corinica Humana.
- Herramientas en investigacin: deteccin de protenas de inters, purificacin de macromolculas, inmunohistoqumica,
citometra de flujo, western blot, etc.

Anticuerpos monoclonales Cmo se hace?

La inmortalizacin se logra a travs de la fusin de los linfocitos B con clulas de mieloma modificadas. Estas ltimas,
por su naturaleza tumoral, tienen la capacidad de crecer indefinidamente en cultivo celular, y han sido modificadas para
que no secreten anticuerpos por si mismas. El resultado de la fusin es una lnea celular que puede crecerse en cultivo y
que secreta los anticuerpos codificados por los genes del linfocito B con la cual se fusion. La lnea de mieloma utilizada
en la fusin es deficiente en las enzimas implicados en la sntesis 'de novo' del DNA como la timidina kinasa (TK) o la
hipoxantina guanina fosforibosil transferasa (HGPRT). Los productos de la fusin celular (hibridomas) son cultivados en
medio HAT (de hipoxantina, aminopterina y timidina), dado que en este medio solo pueden sintetizarse DNA por la va de
novo, las clulas de mieloma que no se fusionaron no pueden reproducirse y mueren, sobreviviendo solo aquellas que
se fusionaron con los linfocitos. Las clulas hbridas obtenidas tras el proceso de fusin son heterocariontes y contienen
un nmero elevado de cromosomas (72 del mieloma y 40 del linfocito B) que en las sucesivas divisiones se irn
perdiendo hasta oscilar entre los 70 y los 80 cromosomas. Como consecuencia de dicho proceso algunas clulas pierden
la capacidad de secrecin de anticuerpos o bien funciones bsicas para la viabilidad celular. Por ello tan pronto como se
identifica como positivo un pocillo se somete a un proceso de clonacin para evitar el crecimiento de clulas no
productoras que al ser metablicamente ms eficientes acabaran por dominar el cultivo.

Una tecnologa adicional para la obtencin de anticuerpos monoclonales es la creacin de bibliotecas de anticuerpos en
fagos filamentosos (phage display). Estas bibliotecas se preparan clonando los genes de inmunoglobulinas del animal
inmunizado, en un vector que puede ser empacado en la envoltura viral del fagos del tipo M13. Estas bibliotecas pueden
luego ser seleccionadas por la afinidad del anticuerpo expresado por la molcula selectora de inters (generalmente el
antgeno usado en la inmunizacin). El o los clones seleccionados pueden utilizarse para producir el anticuerpo en forma
recombinante expresandolo en bacterias (fragmentos sFV o Fab) o en clulas eucariotas (molcula completa de Ig).
El receptor T (TCR)

El receptor del linfocito T o TCR est

compuesto por 2 cadenas que contienen 2
dominios de inmunoglobulina cada una.
Estas cadenas pueden ser del tipo o .
Cada una de estas cadenas est compuesta
por un dominio de Inmunoglobulina
variable (en blanco) y por otro constante
(en azul).
El receptor T (TCR) de los linfocitos T es el
componente de reconocimiento de
antgeno de los linfocitos T. Acta
exclusivamente como receptor de
membrana; de esta forma confiere
especificidad al linfocito T al cual
pertenecen. SIEMPRE como receptor de
membrana
Los TCR alfa-beta solo reconocen pptidos
que estn formando complejos con
molculas de MHC
La estructura de reconocimiento del TCR tiene una estructura similar al fab de las Igs
Estructuralmente, el receptor y el fragmento Fab de las inmunoglobulinas son muy similares. Cada cadena del receptor T
consta de dos dominios uno constante y otro variable, pero adems ambas cadenas tienen un dominio transmembrana
y una extensin citoplasmtica, que se vincula a su funcin como receptor de membrana.

Los linfocitos T participan en la respuesta inmune a travs de variados mecanismos que implican el reconocimiento
celular
Los linfocitos T tiene una funcin central en la regulacin de la respuesta inmune y participan adems directamente en la
destruccin de los agentes agresores. Reconocen al antgeno a travs de su receptor de membrana (TCR) que no se
secreta. Hay dos tipos de receptores: y . La funcin de los linfocitos T con receptores es menos comprendida y
nuestro conocimiento principal es sobre los linfocitos T con receptores . A diferencia de las inmunoglobulinas que
pueden unirse a un amplio espectro de estructuras qumicas, los linfocitos T con receptores solo reconocen pptidos
asociados a receptores de membrana (denominadas molculas del complejo mayor de histocompatibilidad, MHC)
presentes en clulas propias del individuo. Cuando un linfocito T virgen reconoce a su antgeno (si se cumplen una serie
de condiciones) es estimulado a proliferar y diferenciarse. Esta diferenciacin puede dar lugar a tres tipos de clulas
efectoras:
a) linfocitos T citotxicos (CTL) que actan por ej. en las infecciones virales destruyendo la clula infectada,
b) linfocitos T inflamatorios (TH1) que colaboran con el macrfago aumentando su capacidad de destruir los patgenos
fagocitados,
c) linfocitos T colaboradores (TH2) que colaboran con l los linfocitos B en la produccin de anticuerpos, favoreciendo los
procesos de maduracin de la afinidad, cambio de clase y generacin de linfocitos B de memoria.

Los receptores de clula B (BCR)y de la clula T (TCR) se presentan como complejos de membrana con componentes que
participan en la transmisin de la seal

Tanto la Ig como el TCR se presentan como

complejos de membrana con componentes que
participan en la transmisin de la seal. En el caso
de las inmunoglobulinas en los linfocitos B vrgenes,
el receptor IgM (que como se observa no es
pentamrico como la IgM secretada) est
acompaada de dos cadenas con dominios de
inmunoglobulinas Ig e Ig que participan en la
sealizacin. El TCR es an ms complejo.
Cmo es posible mantener la estructura bsica que da a lugar a la funcionalidad de la molcula de inmunoglobulina, a la
vez que se vara la estructura primaria de forma prcticamente ilimitada?
Las molculas de Ig que proviene de un mismo clon de linfocitos B son idnticas, pero debido a las diferencias en el
paratope las molculas de Ig que provienen de distintos clones de linfocitos B son en realidad distintas protenas. An as,
en todos los casos se conserva la estructura bsica necesaria para su funcionalidad. La pregunta que plantea esta
diapositiva, trae la atencin sobre el diseo evolutivo que gener una molcula con la capacidad de variar
ilimitadamente la regin de unin al antgeno sin afectar la estructura global de la molcula. Una solucin nada obvia.
Tema 5: Mecanismos de generacin de diversidad de la molculas de reconocimiento
de la respuesta inmunolgica adaptativa
Clase 6, 18/10/2013

REPASO:
- El linfocito se genera en la mdula sea. Tenemos linfocitos B, con anticuerpos en su superficie que estn formando un
receptor BCR junto con otras protenas que participan en la sealizacin. En determinadas condiciones, en un contexto
inflamatorio, el linfocito reconoce al antgeno y se puede activar, pasando as el linfocito virgen a proliferar y desarrollarse
en una forma en la cual pasa a secretan anticuerpos. Por otro lado tenemos al receptor T, molcula de reconocimiento
restringido, que reconoce pptidos asociados a molculas propias (MHC).
- En la clase pasada vimos la estructura de los Ac, que tienen una regin constante y hay dominios variables tanto en la
cadena liviana como en la pesada. Es aqu donde se har nfasis en la generacin de diversidad para que estos dominios
varen su secuencia de aminocidos. La cadena de aa que se acumulan en el partope (sitio de unin al antgeno) se
llaman regiones determinantes de la complementariedad (CDR) y son regiones hipervariables. Sabemos que hay 3 CDRs
por cada dominio: 3 CDR en el dominio pesado y 3 en el dominio liviano. Si vemos el partope de arriba vemos ubicados
los CDRs. Los CDR3 de las cadenas pesada y liviana ocupan un sitio central en el partope, y por lo tanto son los que
mayor diversidad generada.
- Hay un precursor a partir del cual hay una diversificacin enorme que da lugar a todo el pool. El nmero de la diversidad
9 10 9
de linfocitos es del orden de 10 -10 (miles de millones) logrado a partir de un genoma de 3.3x10 pares de bases, lo cual
indica que debe haber un mecanismo por el cual el nmero discreto de genes (informacin restringida) se puede
generar un numero enorme de elementos (linfocitos).

En el curso de la respuesta inmune los anticuerpos aumentan su afinidad por el antgeno y cambian de clase
Los anticuerpos producidos en la respuesta inmune a un antgeno, sea por una infeccin o por inmunizacin con ese
antgeno, es de naturaleza policlonal. Esto es el resultado de que distintos clones de clulas B son activados y se
diferencian en clulas plasmticas productoras de anticuerpos. Cada uno de estos clones de clulas plasmticas producir
un determinado isotipo o subclase de anticuerpo, con una dada afinidad por el eptope que reconoce, y habr tambin
clones que reaccionan contra distintos eptopes en el mismo antgeno.
Existen desde hace aos distintas tecnologas para fabricar anticuerpos mucho ms definidos, con una nica
especificidad y la misma afinidad, lo cual representa una ventaja para muchas aplicaciones prcticas de los anticuerpos,
tales con su uso como herramientas analticas o su aplicacin como molculas teraputicas. La tecnologa ms comn
para fabricar estos anticuerpos es la tecnologa de hibridomas en la cual se logra la inmortalizacin y el clonado del clon
de linfocitos B de inters.
La lnea celular as establecida secretar anticuerpos monoclonales, que son bsicamente la misma molcula (aunque
suelen presentar diferencias en el grado de glicosilacin).

La recombinacin somtica

Por un lado tenemos una clula embrionaria, a la cual podemos considerar de la lnea germinal, es decir, una clula que
tiene su ADN compartido, no lo tiene modificado.
Por otro lado la imagen muestra una clula de
mieloma, un linfocito B, ya diferenciado y que
produce cierto Aa.
En el experimento se modific el mensajero de estas
clulas, los marcaron y vieron como reaccionaban con
el ADN de la clula germinal o el ADN de la clula del
mieloma. Para esto se realiz una digestin, que corta
en forma aleatoria. Seguramente, si la parte variable
de la inmunoglobulina estaba lejos de la regin
constante (el caso de las clulas de lnea germinal) lo
que iba a pasar es que los fragmentos iban a quedar
separados. En cambio, si haba habido un proceso por el cual se haban recombinado y ahora estaban prximos (es el caso
de la lnea de clulas diferenciadas), se iban a ver juntos (muy difcil que el sitio de escisin estuviese entre estos dos
segmentos).
En 1976 Tonegawa et al. demostraron que la estructura de los genes de inmunoglobulinas en las clulas de tumores
productores de anticuerpos, mielomas, es diferente de la que se encuentra en los tejidos embrionarios. Estas diferencias
aparecen durante el desarrollo de la linfocitos B (un proceso similar ocurre en los linfocitos T), en la cual se produce la
recombinacin del DNA en las regiones que codifican el receptor del linfocito.
La recombinacin somtica es un proceso caracterstico de los linfocitos B y T, y no se conocen otros ejemplos de este
tipo en clulas eucariotas. Mediante este proceso se eliminan regiones del genoma germinal, combinndose segmentos
gnicos para formar exones que no existen en la lnea germinal y que son distintos para cada linfocito B o T maduro.
Los receptores de antgenos (inmunoglobulinas y receptores T) se producen por un proceso de recombinacin aleatoria
de segmentos gnicos que no es influenciada ni dirigida por el antgeno.
En la medida en que las clulas B o T se desarrollan codifican el ADN de la lnea germinal. En la mayora de nuestras
clulas diferenciadas, el ADN sigue siendo bsicamente el mismo, pero las clulas linfocito B o T son nicas en el sentido
de que durante el proceso de desarrollo modifican su ADN. Si bien se modifica una pequea porcin, conceptualmente es
un ADN distinto al germinal.
En 1976, S. Tonegawa y N. Hozumi encontraron la primera prueba directa indicativa de que genes separados codificaban
las regiones V y C de las inmunoglobulinas y que los genes se reordenaban en el curso de la diferenciacin de la clula B.
Tonegawa y Hozumi seleccionaron DNA de clulas embrionarias y clulas de mieloma adultas (clulas en etapas muy
diferentes de desarrollo), y utilizaron varias endonucleasas de restriccin para generar fragmentos de DNA. Despus
separaron estos fragmentos por tamao y analizaron su capacidad de hibridarse con una sonda de mRNA radiomarcada.
Dos fragmentos de restriccin separados procedentes del DNA embrionario se hibridaron con el mRNA, en tanto que solo
un fragmento de restriccin aislado procedente del DNA del mieloma adulto lo hizo con la misma sonda. Tonegawa y
Hozumi sugirieron que, durante la diferenciacin de los linfocitos desde la etapa embrionaria hasta la etapa de clula
plasmtica del todo diferenciada (representada en su sistema por las clulas de mieloma), los genes V y C experimentan
reordenamiento. En el embrin, los genes V y C estn separados por un segmento grande de DNA que contiene un sitio
de endonucleasa de restriccin; durante la diferenciacin, los genes V y C se acercan entre si y se elimina la secuencia
intermedia de DNA.

La diversidad de las inmunoglobulinas se genera durante el desarrollo y diferenciacin de los linfocitos B

Los linfocitos B se originan en la mdula sea a partir de un

precursor comn. Durante el proceso de maduracin que ocurre
en la mdula sea, se genera el receptor de inmunoglobulina
especfico de estos linfocitos, como consecuencia del
correspondiente rearreglo de los genes que lo codifican. Este
rearreglo consiste en la recombinacin de segmentos gnicos que
da lugar a la formacin de los exones que codifican las cadenas
pesadas y livianas de las inmunoglobulinas. Luego de este proceso
el linfocito expresa el correspondiente receptor en su membrana
y recircula a travs de los rganos linfoides secundarios donde
podr producirse el encuentro con el antgeno que en el contexto
adecuado dar lugar a su proliferacin y diferenciacin, dando
lugar a clulas que secretan anticuerpos (Plasmocitos) y linfocitos
B de memoria (clulas de larga vida que aseguran una rpida
respuesta en un segundo encuentro con el antgeno).
El dominio variable de las cadenas pesadas y livianas de los anticuerpos es generado por la recombinacin de segmentos
gnicos

V, D y J en el caso de las pesadas y V y J en el caso de las livianas.

En la imagen tenemos la molcula de inmunoglobulina, el dominio variable en amarillo, verde y rojo. Este dominio
variable es el resultado de la traduccin del ARNm, que antes era un trascripto primario, que antes fue un ADN que se
rearregl y que originalmente la lnea precursora inicial los tenia separados en fragmentos gnicos. En esta figura
simplificada, se muestra el proceso de recombinacin somtica correspondiente a la cadena pesada. Esta se forma por
recombinacin de segmentos gnicos VDJ, para dar un exn que codifica el dominio variable de la cadena pesada. La
recombinacin del DNA fija la especificidad del linfocito B, pues la recombinacin posterior est inhibida por el rearreglo
productivo que se produjo.
Como veremos en las lminas que siguen existen distintas variantes de estos segmentos V, D y J, cuya combinacin da
lugar a distintas regiones variables en las cadenas pesadas. Similarmente, la combinacin de distintos segmentos V y J (no
D es este caso) da lugar a la diversidad de las cadenas livianas.
El VDJ se forma a partir de un pedazo de gen grande, el segmento V, y segmentos D y J. Esta imagen est simplificada y
muestra un solo segmento de cada tipo, pero en verdad hay muchos (aprox. 50 V, decenas de D y J).
La recombinacin somtica depende de:
a) La existencia de regiones conservadas en los intrones que separan los segmentos V, D y J y que guan el proceso de
recombinacin.
b) La existencia de recombinasas especficas (RAG1, RAG2) que solo se expresan en los linfocitos B y T.

Vemos los segmentos V, D y J as

como tambin, en forma
abreviada, los rectngulos azules,
que codifican para la cadena
pesada, representados como un
bloque pero ya vimos que se
compone por exones (un exn
para cada uno); codifica para la
IgM, para la IgD, para una IgG
y as sigue.
 La clula pro-B empieza a hacer su
rearreglo y en forma aleatoria se acerca
alguno de los segmentos. Inicialmente
comienza con unir segmentos D con J. Es
al azar cul de los D y de los J se une. En
el caso de la imagen se une el D2 con el
J3.

Los segmentos son aproximados. Intervienen

los intrones que hay entre ambos segmentos
gnicos. Las regiones palindrmicas
(secuencia de nucletidos de un cido
nucleico que da igual si lo leemos de 5 a 3
en una hebra o de 3 a 5 en su hebra
complementaria) de complementariedad,
permiten que se forme una horquilla y a su
vez esa horquilla y las regiones palindrmicas
forman sitios de reconocimiento de
recombinasas.

En los intrones que separan los

segmentos V, D, y J existen regiones
conservadas que guan el proceso de
recombinacin. Estas regiones estn
constituidas por heptmeros y
nonameros palindrmicos (opuestos y
complementarios). La
complementariedad de estas regiones
permite la formacin del bucle de DNA
que se elimina, notar el papel de los
nonmeros (de color obscuro en la
figura) que al aparearse cierran el
bucle. Lo mismo ocurre con los
heptmeros, aunque
lamentablemente no est claro en la
figura.
Como las regiones palindrmicas estn
en el 3 de los segmentos V y en el 5
de los J, esto asegura que no se recombinen segmentos V con V, o J con J.

Las recombinasas mostradas, RAG1 y RAG2,

solo se expresan en los linfocitos B. Si uno
expresa estas recombinasas en una lnea
celular con regiones palindrmicas, como
estas recombinasas recombinan todo lo que
pueden, sera un problema.
Estas recombinasas lo primero que hacen es
cortar el bucle, sacan el pedazo de ADN (no
va a tener la informacin completa como
una cmo una clula de la lnea germinal).
 Despus el proceso sigue y (luego
veremos qu pasa con ese ADN
cortado) se terminan uniendo D2 y
J3 en este caso.

Vuelve a pasar un evento aleatorio en el cual

ahora se combinan DJ con alguno de los
segmentos V (en la imagen es con V2).

Se vuelve a formar un bucle con regiones

palindrmicas involucradas, vuelven a intervenir las
recombinasas.

El resultado es que el ADN de

un linfocito que rearregl su
cadena pesada haya generado
un exn que codifica para el
dominio variable de la cadena
pesada.
 Eso luego se transcribe, en un
transcripto primario que luego es
procesado y se genera el mensajero
que da lugar a la produccin de Ig.

Ac se muestra tambin el splicing

alternativo del trascripto, que puede
dar lugar tambin a un mensajero para
la IgD, lo cual ocurre en algn perodo
de desarrollo de la clula D que expresa
tanto IgM como IgD (ver ms adelante
en clase de tolerancia; clase 9).

Como resumen: Lo que ocurre es que segmentos gnicos (hay tres tipos para la cadena pesada, V, D y J) se rearreglan en
forma aleatoria y eso termina provocando que cada evento de recombinacin provoca una DIVERSIDAD COMBINATORIA.

Diversidad combinatoria
Gran parte de la diversidad de las Igs proviene de la recombinacin de distintas copias de los segmentos gnicos V, D y
J.

Combinacin de segmentos:
: 30v x 4j = 120
:40v x 5j = 200
: 40v x 25D x 6j = 6000 posibles rearreglos en la cadena pesada
Estos son todava nmeros bajos, pero si consideramos la combinacin de cadena liviana con pesada:
Combinacin de cadenas:
6
(120 + 200) x 6000 = 2000000 (2 x 10 ; orden del milln)

En el caso de los genes de la cadena pesada, la recombinacin somtica combina en forma aleatoria segmentos gnicos
V, D, J, que son un importante fuente de diversidad de las Ig. Similarmente en la cadena liviana, sea sta o , tambin
hay segmentos V y J (en este caso no hay segmentos D; vemos en la imagen que en las livianas no hay partes verdes) que
se recombinan dando lugar a una importante fuente de diversidad en estas cadenas. La diversidad combinatoria en el
proceso de rearreglo de las recombinaciones hace que a partir de estos 150 segmentos gnicos (nmero discreto) sea
6
posible obtener hasta 2 x 10 paratopes diferentes.

Cuando los segmentos gnicos se unen se genera diversidad, la cual se llama diversidad de unin. A continuacin
explicamos cmo es la diversidad de unin.

El proceso que une los segmentos V con D, y D con J, es un elemento adicional de generacin de diversidad al introducir
en forma aleatoria nucletidos adicionales que no estn codificados en la lnea germinal
Durante la unin de segmentos V, D, J, se producen variaciones introduccin de codones debido a:
a) La flexibilidad en el corte del bucle terminal que introduce nucletidos denominados P
b) La accin de la enzima TdT (deoxinucleotidil transferasa terminal) que incorpora nucletidos (N) en el extremo 3.

Volvemos a considerar la unin

del J3 con el D2. Vemos en la
imagen que las recombinasas ya
cortaron el loop o bucle.

Lo primero que pasa es que

cuando los extremos quedan
libres hay una formacin de
enlace covalente entre los
extremos 5 y 3 de cada una
de las cadenas.

Esto provoca la formacin de una

pequea horquilla.
 Aqu aparece una nueva
oportunidad de generar
diversidad ya que se puede cortar
en distintos puntos, indicado con
flechas. Dependiendo de dnde se
corte termina dando las
terminaciones mostradas en la
parte inferior de la imagen.

Suponemos que se corta en los lugares

indicados en la imagen, quedando los
extremos que se muestran en la prxima
imagen.

En este momento aparece una enzima

especial, que al igual que las recombinasas
anteriores, solo aparece en estas clulas B.
La enzima es la TdT, deoxinucleotidil
transferasa terminal, y su funcin es la de
agregar nucletidos en el extremo 3 (de
ambos lados) sin molde.

Lo que ocurre es una adicin de nucletidos

al azar, lo que provoca que no sean
necesariamente complementarios.
Despus de que acta la TdT hay una etapa
de bsqueda de mxima compatibilidad por
prueba y error.
Los nucletidos que no son complementarios terminan siendo removidos por una endonucleasa y luego una polimerasa
termina rellenando los huecos.

El resultado es que cada vez que se juntan dos segmentos gnicos, no importa si D con J o DJ con V, pasa este evento en
forma aleatoria, o sea que aunque se junten los mismos segmentos (D2 con J3) igual no va a ser lo mismo ya que los
nucletidos entre ellos tienen altas probabilidades de ser distintos. Esta regin es entonces una importante contribucin
a la generacin de diversidad; contribuyendo en un aumento de opciones de 10 veces en el caso de la cadena liviana y
3
100 veces en la cadena pesada, es decir que la diversidad de unin o ligacin contribuye en 10 nuevos posibles
rearreglos.

Qu puede fallar de este mecanismo?

Como se agregan nucletidos al azar, puede aparecer un codn de stop, pero se lee como un codn de stop? Depende
de cmo viene el marco de lectura. Usando la imagen como ejemplo: si el marco de lectura termina junto con la
terminacin del segmento D2 y luego se lee CAT y luego TAG, lo que provocara la terminacin de la lectura. Tambin
puede pasar que se corra el marco de lectura ya que los nucletidos agregados no son (en el caso de la imagen) mltiplo
de 3, provocando as que el segmento J3 se lea desfasado. En este ltimo caso, se aborta la traduccin ya que no se
sintetiza la cadena pesada.

Los nucletidos N se insertan en las uniones entre los segmentos gnicos de las regiones V de la cadena
pesada del receptor de clula T y de inmunoglobulina. Estas regiones N no estn codificadas en uno u otro
segmento gnico, sino que son insertadas por la enzima desoxinucleotidiltransferasa terminal (TdT).
Incrementan de manera notoria la diversidad de estos receptores.

Los nucletidos P son molculas que se encuentran en las uniones entre los segmentos gnicos de los genes
reordenados de la regin V de los receptores de antgeno. Son una repeticin inversa de la secuencia
localizada al final del segmento gnico adyacente; se generan a partir de una horquilla intermedia durante la
recombinacin y, por ende, se llaman nucletidos palindrmicos o P.

La diversidad combinatoria y de ligacin concentran la diversificacin en el CDR3.

Veremos cmo se correlaciona donde se dio la

diversidad respecto a dnde estn los CDR en la Ig,
formando el partope.
En la imagen vemos la protena desarmada
quedando simplemente su estructura primaria. Si lo
correlacionamos con el exn que codifica para esta
parte de la protena, vemos que el segmento gnico V
abarca tanto el CDR1 como el CDR2, mientras que el
sitio donde se dio la recombinacin afecta el CDR3, es
por esto que decimos que es muy importante notar
que la mayor diversidad combinatoria y de ligacin se produce en la regin correspondiente al CDR3 tanto para la
cadena pesada como liviana. Por combinatoria podemos tener distintos D y J, pero adems gracias a la diversidad de
unin. CDR3 sufre ms diversidad que los otros CDR. Esto tiene un claro sentido biolgico dado que los aminocidos que
componen los CD3 de ambas cadenas se ubican en la regin central del partope y resultan por tanto cruciales en la
interaccin con el antgeno.
Exclusin allica: solo uno de los alelos de la cadena pesada y de la liviana se expresa

El proceso de recombinacin sigue un orden preciso comenzando por un alelo de la cadena pesada.
Si se da una recombinacin productiva (aquella que permite la sntesis exitosa de la cadena), la cadena formada se
expresa entonces intracelularmente y en la superficie de la clula pre-B junto con un substituto de la cadena liviana
(compuesta por dos cadenas) formando el receptor de las clulas pre-B (pre-B receptor). A travs de este receptor la
clula recibe seales que bloquean el rearreglo de la cadena pesada en el segundo cromosoma (exclusin allica), y se
induce la recombinacin de la cadena liviana comenzando por la .

Sin embargo, los mecanismos que dan lugar a la diversidad de ligacin conducen muchas veces a cambios en el marco de
lectura que generan codones de terminacin, lo que conduce a que el rearreglo de la cadena pesada no sea productivo.
En esos casos se produce el rearreglo del segundo alelo y si este tambin falla (lo cual en forma combinada ocurre en
aprox. El 50% de los casos!! Debido a que la diversidad de unin es muy peligrosa) la clula entra en un proceso de
apoptosis y muere.

Cuando se ha producido un rearreglo productivo para la cadena pesada, comienza el rearreglo de la cadena , donde
operan mecanismos similares de regulacin. El rearreglo productivo bloquea el rearreglo posterior de para cadenas y
. Por el contrario la falta de rearreglo productivo en la cadena , promueve el rearreglo en el locus de la cadena lambda,
primero en un alelo y luego en el otro. De no producirse ningn rearreglo productivo de cadena liviana se produce la
muerte celular.
En el caso de la cadena liviana, a diferencia de lo que ocurre en la pesada: Si el rearreglo inicial no es productivo, pueden
utilizarse nuevos segmentos V o J de los que flanquean el VJ recombinado.
Solo si luego de realizar varios intentos no se consigue el rearreglo productivo se pasa al siguiente alelo, o a la siguiente
cadena.

Cmo leo el organigrama? Si el rearreglo es productivo (amarillo +) sigo leyendo. Recordar que el rearreglo comienza en
uno de los alelos. Si el rearreglo que se intent hacer con el primer alelo falla, es decir que no se pudo sintetizar una
cadena (rojo -) entonces la clula reprograma la recombinacin y rearregla el siguiente alelo, alelo complementario de la
cadena pesada (hacia abajo en el organigrama). Si el rearreglo es improductivo, entonces la clula no tiene destino, entra
en apoptosis.

Cmo se entera la clula si el rearreglo es productivo o no? Si logra generar una cadena pesada,
entonces fabrica un primer receptor que gua a la superficie, pero sin cadena liviana. En esa etapa
del desarrollo, hay una cadena liviana sustituta que es siempre igual, que se produce para que
pueda _____ un receptor (imagen al costado). Si la clula logra censar un receptor de este tipo en
la superficie, entonces pasa a la etapa siguiente y empieza a rearreglar la cadena liviana. Lo
veremos ms adelante, pero es importante destacar que antes de pasar a rearreglar la cadena
liviana, la clula prolifera.
Desarrollo de linfocitos B
El proceso de recombinacin somtica que hemos visto hasta ac ocurre en la mdula sea, y resulta en la expresin del
BCR (inmunoglobulina de membrana, junto con las molculas accesorias y ).
La inmunoglobulina de superficie en este momento es una IgM y si en estas condiciones la especificidad aleatoria que se
gener en el linfocito hace que esta interaccione con antgenos propios presentes en la mdula, entonces el linfocito B
puede recibir seales para reactivar la actividad de las recombinasas RAG 1 y 2, y reeditar la cadena liviana. En este
proceso, nuevos segmentos gnicos V (hacia el 5 del segmento usado inicialmente) y J (hacia el 3 del segmento utilizado
originalmente) pueden ser usados realizndose un nuevo proceso de recombinacin para producir una nueva cadena
liviana que al combinarse con la cadena pesada original de la clula en desarrollo puede revertir el reconocimiento del
antgeno propio.
En caso de no haber reconocimiento de antgenos propios, el linfocito B sigue su desarrollo saliendo a circulacin para
finalizar su maduracin en los rganos linfoide secundarios donde, por splicing alternativo del RNA primario, coexpresa
IgM e IgD en su superficie. Este linfocito maduro contina recirculando a travs de los rganos linfoides secundarios
donde eventualmente podr encontrarse con su antgeno especfico.
El encuentro con el antgeno, y en muchos casos la colaboracin con las clulas T que se ver ms adelante en el curso,
har que el linfocito B se active, prolifere y se diferencie. En este proceso ocurrirn nuevos cambios que afectarn la
afinidad con que el receptor de superficie del linfocito reconoce el antgeno (maduracin de afinidad) y cambios en los
exones que codifican para la cadena pesada (cambio de clase) que afectarn la funcionalidad de los anticuerpos
secretados

La forma de membrana (BCR) o secretada de los anticuerpos se controla a travs del splicing alternativo del trascripto
primario del ARN.

Aunque hay pequeas diferencias para cada gen, en general, existen una serie de exones para cada dominio de la regin
constante, y un exn para la regin bisagra si la clase en cuestin la posee.
Adems de estos en el extremo 3 puede utilizarse un exn correspondiente a la forma secretada (SC), como ocurre en
los plasmocitos; o bien una regin transmembrana (MC) por ejemplo en linfocitos B vrgenes o en clulas B de memoria.
La forma de membrana o secretada se producen a partir de un transcripto primario de RNA comn por procesamiento
post-transcripcional.

Si termina transformndose en una clula secretora de Ac, tiene que darse otro cambio, mostrado en la imagen
(secretada vs. no secretada). Depende de si tiene una cola de anclaje o no. Una vez que se gener el trascripto primario
de la cadena pesada, se puede dar un splicing por el cual se agregan elementos (en amarillo) en la cadena pesada, los
cuales son los que codifican para el anclaje a la membrana.
Esto pasa en linfocitos B vrgenes.
Si la clula se estimul, deja de hacer el splicing en este sentido y utiliza un segmento gnico adyacente al final de la
cadena pesada (naranja) y pasa a ser secretada, no tiene zona de anclaje.
Por qu libera Ac?
La forma que sirve de los anticuerpos es la secretada, por lo que en algn momento, el linfocito B debe secretarlos.
Primero los debe tener en la membrana, ya que el estmulo tiene que estar asociado a la clula. Si hay un antgeno A, y
el linfocito lo puede reconocer, hay un vnculo fsico entre la clula y el reconocimiento porque est el Ac en la superficie.
Al activarse el linfocito, se diferencia y prolifera. Esto implica que adems de aumentar el nmero, cambia el fenotipo.
Uno de los cambios fenotpicos, si se convirti en una clula plasmtica, es secretar Ac.

El proceso de recombinacin somtica es central al funcionamiento del sistema inmune adaptativo

- Porque es el mecanismo bsico de generacin de diversidad, que produce el repertorio inicial de anticuerpos
- Porque el fenmeno de exclusin allica, genera linfocitos mono especficos, lo cual es necesario para que ocurra el
proceso de seleccin clonal. Si rearreglara dos alelos (sin exclusin allica) tendra cuatro tipos distintos de
inmunoglobulinas, no es monoespecfico. Eso va en contra del principio del funcionamiento clonal.
- Porque la regulacin de la expresin de anticuerpos est determinada por el proceso de recombinacin.

Adems, de ser el proceso de generacin de diversidad y de produccin de linfocitos monoespecficos, el proceso de

recombinacin somtica es un importante evento para la regulacin de la transcripcin de los genes recombinados, y
por ende la secrecin de anticuerpos. El rearreglo de genes aproxima el promotor (P) que se encuentra en el intrn 5 del
segmento Vn con el potenciador (enhancer; E) que est en el intrn 5 de los exones de la regin constante promoviendo
la transcripcin.
La accin de los factores de transcripcin sobre el enhancer aumenta enormemente la velocidad de transcripcin, pero
para que ocurra, debe estar fsicamente prximo al promotor correspondiente, lo cual ocurre al producirse la
recombinacin.

En el curso de la respuesta inmune aumenta la afinidad de los anticuerpos y cambian las clases de inmunoglobulinas

Ante el estmulo de la infeccin o la inmunizacin,

los linfocitos B de especificidad adecuada son
seleccionados, proliferando y diferencindose. En
este proceso, ocurren etapas adicionales de
generacin de la diversidad que permiten
aumentar la afinidad de los anticuerpos. Tambin
ocurren cambios en los genes de la cadena pesada
que dan lugar al cambio de clase.

En esta grfica se representa el cambio de clase

que se da en el anticuerpo. Se representa cmo es
la respuesta de Ac en un animal que se inmuniz.
Si el antgeno que estamos utilizando es una protena, en una primera dosis la respuesta va a ser una secrecin de
anticuerpos moderada que va allegar a un pico en algn momento hasta que desaparezca el estmulo y va a comenzar a
bajar hasta quedar en un nivel basal. Si hay una segunda dosis lo que ocurre es que lleva mucho menos tiempo alcanzar
niveles altos de anticuerpos y adems, al principio de la respuesta los anticuerpos son IgM y la afinidad es baja y al final
de la respuesta vamos a ver que predominan las IgG y la afinidad es alta. La alta afinidad se consigue porque a partir de
las clulas que se activaron en la primera respuesta, estas se diversifican a posteriori y sobre esas se hace un proceso de
sobreseleccin, seleccionndose las de mayor afinidad. En ese proceso es que se da adems el cambio de clase.

La hipermutacin somtica es un elemento adicional de generacin de diversidad

Recombinacin somtica: (mdula sea)
Hipermutacin somtica: (rganos linfoides secundarios) Proceso de introduccin de mutaciones puntuales en la regin
variable de los genes de las cadenas livianas y pesadas que expresa el linfocito B. Es un proceso que ocurre cuando los
linfocitos estn proliferando. Es decir que, las clulas vrgenes se encuentran con su antgeno en un contexto de
activacin, y ah empiezan a proliferar. Cuando empiezan a proliferar forman un ___________ en el ganglio, all
interaccionan con las clulas T y como consecuencia se activa un programa por el cual al replicar el ADN se intruducen
mutaciones.
6
La tasa de mutacin es 10 superior a la que ocurre en otras clulas, y no afecta la regin constante de las Igs.
Mientras que los mecanismos de recombinacin somtica son similares para los linfocitos B y T, la hipermutacin
somtica es exclusiva de las clulas B. Solo ocurre en los linfocitos B activados a travs de la colaboracin con linfocito T.
Hipermutacin somtica: introduce mutaciones puntuales en las regiones V de genes codificadores de inmunoglobulinas
reordenados en clulas B activadas, lo que produce algunas variantes que se unen con mayor fuerza al antgeno.
La diversificacin se logra por medio de tres mecanismos, hipermutacin somtica, conversin gnica, y cambio de clase
o recombinacin de cambio de clase, que alteran de distintos modos la secuencia de la inmunoglobulina secretada (fi g.
4-21). La recombinacin de cambio de clase solo involucra a la regin C: reemplaza la regin C de la cadena pesada C
original por una regin C alternativa, lo que aumenta la diversidad funcional del repertorio de inmunoglobulinas. La
hipermutacin somtica y la conversin gnica afectan la regin V. La hipermutacin somtica diversifica el repertorio de
anticuerpos al introducir mutaciones puntuales en las regiones V de ambas cadenas, lo que altera la afinidad del
anticuerpo por el antgeno. La conversin gnica diversifica el repertorio de anticuerpos primario en algunos animales;
reemplaza bloques de secuencias de las regiones V por secuencias derivadas de las regiones V de seudogenes.

Al igual que la recombinacin V(D)J mediada por RAG, estos procesos involucran eventos de mutacin somtica delos
genes que codifican inmunoglobulinas, pero al contrario de la recombinacin V(D)J, todos inician mediante una enzima
llamada desaminasa de citidina inducida por activacin (AID), que se expresa de manera especfica en las clulas B; no
ocurren en genes de receptores de clula T.

La hipermutacin somtica est mediada por la enzima desaminasa de citidina inducida por activacin (AID).

1. Mutacin directa
2. Mutacin uracil ADN glicosidasa (sitio
absico)
3. Reparacin mismatch (exonucleasa +
error prone polymerase; tambin
sustituciones AT)

El proceso de hipermutacin somtica

as como el de cambio de clase estn
bajo el control de un mismo gen, el gen
de activacin inducida de la citidina
deaminasa (AID). Esta enzima puede
deaminar el grupo amino de la citidina
(C) convirtindola en uridina (U). Esto
puede dar lugar a tres enmenos:
1) El cambio U:G es replicado en una de
las especies hijas consolidando la
mutacin U:G correspondiente.
2) Tambin puede ocurrir que la uridina
sea removida por la Uracil DNA Glicosilasa resultando en la desaparicin de una base, este sitio absico, si es replicado,
es reemplazado aleatoriamente en el proceso de replicacin dando lugar a una mutacin al azar.
3) Pero tambin el cambio U:G puede ser reconocido por la maquinaria de reparacin de apareamiento incorrecto
(mismatch), lo que resulta en el procesamiento del DNA a travs de una actividad exonucleoltica que expone una simple
hebra de DNA, seguida de una actividad polimerasa proclive a errores que rellena la porcin faltante. Esta actividad
introduce mutaciones adicionales aleatorias a travs del gap de DNA, lo que permite que tambin ocurran mutaciones a
nivel de pares AT.
4) Finalmente, el cambio U:G puede dar lugar a la ruptura y religacin del DNA, y este ltimo caso es el que se vincula con
la recombinacin somtica.
La deaminacin se da en regiones determinadas denominadas puntos calientes o hot spots que tienen sequencias de
WRCY segn se muestra en la figura, y est dirigida por los enhancers de transcripcin que se encuentran entre los
dominios V y C. De hecho si un gen heterlogo con un promotor activo se inserta prximo al enhancer este se convierte
en blanco de la AID.

La hipermutacin somtica seguida de la seleccin por el antgeno, dan lugar al proceso de maduracin de la afinidad.
La hipermutacin somtica es el proceso por el cual se introducen mutaciones puntuales en la regin variable de los
genes de las cadenas livianas y pesadas que expresa el linfocito B, y es de naturaleza aleatoria.
6
La tasa de mutacin es 10 superior a la que ocurre en otras clulas, y no afecta la regin constante de las Igs, ni el resto
de los genes del linfocito B. Mediante el mecanismo de hipermutacin somtica, se producen clones mutantes derivados
del clon original de linfocito B especfico por el antgeno. En estos clones se han introducido en forma aleatoria
modificaciones en el paratope que harn que su BCR reconozca con mayor o menor afinidad al antgeno. La posterior
seleccin por el antgeno, rescata los clones de mayor afinidad, y es responsable del fenmeno de MADURACIN DE LA
AFINIDAD que se observa a medida que transcurre la respuesta inmune (este proceso se ver en detalle ms adelante en
el curso).
En la figura se muestra la respuesta a la inmunizacin con un hapteno mostrando cmo a lo largo del proceso se fueron
analizando los genes de las cadenas pesadas y livianas de clones de linfocitos B especficos para el hapteno. Ntese que a
lo largo de la respuesta, se acumulan mutaciones en las regiones correspondientes a los CDRs, a la vez que se produce un
cambio en la cadena pesada (inicialmente IgM pasando a IgG al final).
Es decir, la figura muestra como se observa experimentalmente la hipermutacin somtica. Si uno mira animales que son
inmunizados y se va observando cmo va cambiando la secuencia. Se ve que se comienzan a acumular en los CDRs
mutaciones a medida que avanza el proceso. Las mutaciones ocurren todo a lo largo del dominio variable pero como hay
un proceso de seleccin (que vemos a continuacin) se reflejan sobre todo en los CDRs.

Recordemos que esto ocurre en los ganglios secundarios, aqu no son todava clulas que secretan anticuerpos ni
tampoco clulas de memoria. Estn proliferando, estn en camino. Cada vez que prolifera mete una mutacin distinta,
por lo tanto cada clon termina con una mutacin distinta. Ya haban sido pre-elegidas porque tenan afinidad por el
antgeno X. La mutacin provocara que el anticuerpo se una mejor al antgeno X, pero para que esto funcione debe
haber un mecanismo de seleccin de afinidad.

La hipermutacin somtica seguida de la seleccin por el antgeno, dan lugar al proceso de maduracin de la afinidad.

El mecanismo de seleccin lo volvemos a

ver en clase del tema 9.
En la imagen vemos una clula B que se
activ. Va a un centro germinal. En el
centro germinal empieza a proliferar. En
la imagen esta simbolizado con
tonalidades distintas de azul, lo cual
muestra las pequeas variaciones que
surgieron por la hipermutacin
somtica. Estos clones, la mayora van a
haber mejorado su afinidad, otros van a
quedar ms o menos igual. Si no pasa
nada en cuanto a aumento de afinidad,
la clula muere por apoptosis. Necesitan
un estmulo que las rescate del
programa de muerte. Cmo consiguen
ese estmulo? En el entorno hay unas
clulas, las DC foliculares, que no son las
DC que ya vimos. Estas tienen en su superficie inmunocomplejos; ese antgeno que capturaron a travs de receptores
para el complemento o para FC de los anticuerpos que se produjeron al principio de la respuesta, es decir, tiene
capturados antgenos en su superficie, y estas clulas B se encuentran con las DC foliculares. Van a haber clulas B que
van a interactuar con las DC foliculares y van a ser capaces de arrancar el Ag. El hecho de que puedan arrancar el AG y
puedan presentar pptidos en su MHC, hace que reciban la ayuda de clulas T, lo que provoca que cambie su programa
de muerte. Es rescatada y puede pasar a ser una clula secretora de Ac o de memoria. Pero las otras clulas que no logran
interactuar con la DC folicular (debido a que tienen menos fuerza de unin) no reciben estimulo, por lo tanto estas si
siguen el programa de muerte. Este es el proceso que se llama seleccin por afinidad y conjuntamente con la
hipermutacin somtica, conforman la maduracin de la afinidad.
Cul es la inmunoglobulina que los linfocitos B comienzan a secretar cuando se activan? La IgM.
Cmo compensa la IgM la baja afinidad que tiene por el antgeno? Por su alta avidez.
Pero si quiero tener clulas al final que secreten IgG tenemos que haber mejorado la afinidad del sitio de unin. Para esto
est el proceso de maduracin de la afinidad.

Cmo producen los linfocitos B distintas clases de inmunoglobulinas?

Los segmentos que codifican para los dominios constantes de las cadenas pesadas se encuentran hacia el extremo 3 de
los segmentos J. Durante el proceso de cambio de clase, la regin VDJ que codifica para el dominio variable del
anticuerpo puede recombinarse con distintos segmentos constantes dando lugar al cambio de clase.
En el mismo sitio, el centro germinal, tambin hay un proceso nuevo de recombinacin en la cadena pesada, a nivel del
ADN, y se modifica el segmento gnico que se estaba usando. Al principio, como es el que tiene al lado, la clula B
comienza usando el segmento C el cual codifica para la IgM. Luego, ese dominio puede ser eliminado y sigue con
secuencias de recombinacin que permite acomodar una secuencia seriante de recombinacin con una 3 por ejemplo,
y si pasa eso se forma un bucle (ver imagen siguiente) el cual se puede remover, y da a lugar a una nueva unin. Ahora
cuando se hace la transcripcin se copia un nuevo dominio constante, la clula va a producir otra Ig, en el caso de ser con
una 3 como habamos dicho, va a producir una IgG3.

El switch de clases permite la secrecin de distintos isotipos de la Ig a medida que transcurre la respuesta inmune.

Debido a que se encuentra situado hacia el 3 del rearreglo VDJ, el gen de la cadena pesada es el primero en expresarse
en el linfocito B inmaduro como receptor de membrana. En la etapa siguiente ocurre la co-expresin de IgM e IgD
(contigua a la anterior) en el locus de la cadena pesada de Ig.
Esta coexpresin se produce por splicing alternativo a nivel del transcripto de RNA, que incluye la regiones
correspondientes a las cadenas pesadas y . La coexpresin de estas cadenas corresponde con un linfocito B maduro,
que est listo para salir a la circulacin perifrica.
El encuentro con el antgeno y los eventos que se suceden, particularmente la colaboracin con el linfocito T, promueven
una nueva recombinacin del DNA del linfocito B, y dan lugar al proceso de cambio de clase. Esta recombinacin est
guiada por secuencias de switch presentes en los intrones que separan las regiones correspondientes a las distintas
cadenas pesadas. Por estar en los intrones en este caso el rearreglo es siempre productivo.
A partir de que se produce un evento de recombinacin, no es posible volver atrs al isotipo anterior, pero si llevar a
cabo un nuevo switch hacia regiones que estn hacia el 3. Es decir que es posible que la clula haga otro cambio ms,
ms adelante.
El isotipo hacia el cual se produce el cambio de clase est gobernado por los mediadores qumicos (citoquinas) que estn
presentes en el microambiente donde se encuentra el linfocito B, y que son secretados por el linfocito T colaborador.

Esta es la forma entonces de pasar de un isotipo de inmunoglobulina a otro tipo. Es importante notar que este rearreglo
NO es aleatorio, sino que est condicionado por citoquinas que se secretan en los linfocitos T que estn interactuando en
el centro germinal.
Desarrollo de linfocitos B (RESUMEN)

Los linfocitos B se originan en

la mdula sea a partir de un
precursor comn. Durante el
proceso de maduracin se
genera el receptor de
inmunoglobulina especfico.
Primero se produce el
rearreglo de genes
correspondiente a la cadena
pesada, y posteriormente el
de los genes de la cadena
liviana. Este rearreglo se
produce a travs del proceso
de recombinacin somtica,
por el cual distintos segmentos
gnicos se unen eliminndose
irreversible los intrones que los
separaban. Mediante este
proceso se generan en forma
aleatoria los exones que
codifican la regin variable de
las cadenas pesadas y livianas
de las inmunoglobulinas, y es este el mecanismo de generacin de diversidad de estos receptores.
El rearreglo productivo de los exones de las cadenas pesada y liviana, permite al linfocito, a travs de distintas etapas,
desarrollarse como linfocito B inmaduro. Este linfocito est ahora en condiciones de ser exportado a la periferia donde
en los correspondientes rganos linfoides primero madura y luego puede encontrarse con su antgeno especfico.
El eventual encuentro con este antgeno va a producir la activacin del linfocito, su proliferacin y diferenciacin en
plasmocitos y clulas de memoria. Este proceso de diferenciacin implica una nueva instancia de generacin de
diversidad, por hipermutacin somtica, que permite aumentar la afinidad del anticuerpo. As mismo, va a cambiar el
tipo de cadena pesada que sintatetiza la progenie del linfocito en cuestin, dando lugar al cambio de clase de los
anticuerpos secretados.

Distintas especies de vertebrados generan la diversidad de sus anticuerpos de formas distintas

Con la excepcin de los vertebrados sin mandbulas, el resto de los vertebrados presentan los elementos bsicos que
caracterizan el funcionamiento del sistema inmune humano. En efecto, se han encontrado en estos organismos
evidencias de la existencia de RAGs, TCR, BCR, y MHC, y otros rganos caractersticos de la respuesta inmune como el
timo y el bazo, y son capaces de hacer hipermutacin somtica. Sin embargo la estructura de genes de las
inmunoglobulinas que hemos visto para los humanos y ratones, no es exactamente la misma que se encuentra en otras
especies. Por ejemplo, en muchos tiburones, los genes se encuentran en formas de tandem que contienen un segmento
gnico V y algunos segmentos D y J que permiten la generacin de cierta diversidad, asociados a los exones que codifican
para la regin constante, incluso en algunos casos dichos tandems tienen segmentos VDJ ya recombinados, y estos
pueden ser hasta el 50%. Otros ejemplo peculiar es el de las aves, y as el pollo tienen un nico segmento gnico V
funcional (el adyacente a los segmentos D o J) tanto en la cadena pesada como en el nico tipo de cadena liviana
(lambda) que expresan. Este segmento V se recombina dando un sustrato VDJ el cual es sometido a un proceso de
conversin gnica, en el cual se transfiere un nmero limitado de nucletidos desde pseudogenes V (carente de la seales
de recombinacin) a la regin VDJ recombinada.

La forma de generacin de diversidad del receptor T (TCR)

Hay algunas pequeas diferencias en el proceso de generacin de diversidad de los linfocitos T con respecto a los B.
La organizacin de los genes del TCR (recordemos que tenemos TCR ) tiene la cadena (inferior en la imagen) esta
en un cromosoma, la cadena (centro de la imagen) esta en otro cromosoma y las cadenas y estn en un mismo
cromosoma, distintos a los anteriores dos mencionados (superior en la imagen). Adems, todo el loci esta dentro del
loci , entonces: Qu pasa si se recombina el loci , es decir un V con un J? Todo el loci se pierde, se elimina. Esto
implica que cuando una clula va hacia el destino , nunca podr ser una . Esto es una forma que utiliza nuestro
sistema para promover la generacin de linfocitos T .
La recombinacin somtica en los linfocitos T se produce una vez que el precursor correspondiente abandona la mdula
sea y entra en el timo. All ocurre el proceso de diferenciacin donde el linfocito combina segmentos gnicos en forma
similar a lo que ocurre para las inmunoglobulinas.
Los factores que dan lugar a un rearreglo de un TCR se conocen solo parcialmente y se discutirn en la clase sobre
desarrollo de linfocitos T (tema 8). En la etapa fetal predomina la produccin de los primeros, y en la vida adulta, la gran
mayora de linfocitos T tienen receptores . Como veremos al estudiar el desarrollo de los linfocitos T, en las primeras
etapas de diferenciacin se rearreglan simultneamente los locus b y ; si el linfocito termina derivando hacia el
proceso de recombinacin se congela (regulacin a la baja de RAG 1 2), por el contrario si recibe seales para
desarrollarse como , entonces se recombina el locus .
Ntese que dado que el locus delta est entre los segmentos V y J del , al recombinarse este ltimo se elimina el locus
consolidando el destino del linfocito como .
A diferencia de las inmunoglobulinas donde la exclusin allica es absoluta, la recombinacin productiva en el locus de la
cadena no inhibe el rearreglo posterior de la misma cadena o del segundo alelo. De esta forma aumenta la
probabilidad de que ese linfocito puede pasar el exigente proceso de seleccin positiva y negativa en el timo. Para este
proceso el locus es particularmente adecuado dado que contiene un alto nmero de segmentos J (61) y V (42) por lo
que las primeras recombinaciones dejan todava disponibles un alto nmero de segmentos gnicos. An as, ms del 90%
de los timocitos no superan este proceso de seleccin.
El proceso de hipermutacin somtica no opera para los linfocitos T, esto es muy importante porque como se ver ms
adelante en el curso, la introduccin aleatoria de mutaciones en el TCR podra dar lugar a la prdida de reconocimiento
del MHC propio (prdida de restriccin), o hacer que este reaccione con pptidos propios con el consiguiente riesgo de
reaccionar con los propios.
Tema 6: Presentacin de antgeno a los linfocitos T
Clase 7, 21/10/2013

Vamos a ver la comunicacin que hay entre los linfocitos T y la clula que presenta el antgeno. A diferencia de lo que
vimos con los anticuerpos, que eran molculas secretadas y que as localizan antgenos, a los linfocitos T siempre los
vamos a ver actuando en comunicacin con otra clula. El nexo que se da entre el linfocito T y la clula con la cual
interacta, ya sea que el linfocito se est activando o que est dando lugar a funciones secretoras, ese nexo se da a travs
de lo que llamamos presentacin de antgeno.

En general los patgenos extracelulares son eficientemente eliminados a travs de su reconocimiento por los
anticuerpos.

Como hemos visto en las clases anteriores, los anticuerpos son un importante componente del sistema inmune para
eliminar patgenos extracelulares a travs de distintos mecanismos como:
a) la neutralizacin (que impide por ejemplo la interaccin de patgenos o txinas con receptores celulares).
b) la opsonizacin que promueve la fagocitosis (al facilitar el reconocimiento del patgeno por clulas como los
neutrfilos o los macrfagos a travs de sus receptores para Fc) de forma ms eficiente
c) la eliminacin del patgeno mediante la activacin del complemento por la va clsica (donde la unin de la IgM o de
algunos isotipos de IgG, promueve la activacin del complemento a travs de la unin de su componente C1q).
d) la citotoxicidad mediada por anticuerpos cuando hay una clula por ejemplo infectada con virus, y en su superficie
expresa molculas del virus, al unirse los anticuerpos a stos esa clula se convierte en un blanco.
En el caso de patgenos intracelulares es importante contar con un sistema de muestreo del interior celular que de una
seal de alerta.
Esta seal promueve el contacto de la clula en cuestin con linfocitos T, lo que a su vez moviliza mecanismos que
conducen a la destruccin del patgeno.
Los anticuerpos tambin pueden ayudar a combatir patgenos intracelulares como ocurre en el caso de la citotoxicidad
mediada por anticuerpos (ADCC). En uno de los mecanismo de ADCC, por ejemplo, los anticuerpos reconocen antgenos
virales expresados en la membrana de clulas infectadas por virus, lo que lleva al reclutamiento de las clulas NK, dado
que estas reaccionan con la regin Fc de los anticuerpos unidos a la clula infectada, lo que a su vez, permite
desencadenar la maquinaria citotxica de la clulas NK que conduce a la destruccin de la clula infectada.
Si bien el mecanismo de ADCC juega un importante rol en la eliminacin de patgenos que alcanzan el interior celular, el
sistema inmune adaptativo cuenta con un poderoso sistema de vigilancia de lo que ocurre en el interior celular, y a
partir del mismo lograr dirigir el accionar de los linfocitos T. El ejemplo ms claro es la eliminacin de las clulas
infectadas por virus que presentan en su superficie, pptidos virales asociados a receptores especializados (las molculas
del complejo mayor de histocompatibilidad, MHC). En este caso el reconocimiento del complejo MHC-pptido por el
receptor especfico del linfocito T (TCR) conduce a la destruccin de la clula infectada por el linfocito T (en este caso, se
trata de un linfocito T citotxico, veremos ms adelante que hay otro tipo de linfocitos T, con otras funciones).

Algunas de las funciones efectoras que llevan adelante los linfocitos T:

La expresin de pptidos provenientes de patgenos, en asociacin con molculas de MHC en la superficie celular se
denomina PRESENTACIN DE ANTGENO. Este proceso es fundamental para promover el contacto celular que conducen
a la activacin del linfocito T. Una vez que el linfocito T se activado proliferando y diferencindose en linfocitos T
armados, es tambin el mecanismo por el cual se dirigen las acciones efectoras del mismo. Ya sea en:
a) la eliminacin de clulas infectadas por virus o clulas malignizadas, linfocito T citotxico (CTL), mediante la induccin
de apoptosis
b) la activacin de macrfagos, linfocito T inflamatorio, (TH1). El macrfago pasa a un estado de mayor actividad,
aumentando la produccin de especies reactivas del oxgeno y del nitrgeno.
c) la colaboracin con el linfocito B para la eficiente produccin de anticuerpos, linfocito activador (TH1 y TH2) ,
mediante una activacin de los linfocitos B. La mayora de los linfocitos B se activan de esta forma (la otra forma es la
intependiente de linfocitos T)

En todos los casos, adems de la interaccin TCR-pptido-MHC, se producen otras interacciones moleculares a travs de
una serie de molculas accesorias cuya contribucin es esencial para la sealizacin. Entre estas se tienen las molcula
CD8, que se encuentra en el linfocito T citotxico, y determina que ste interaccione exclusivamente con MHC de clase I;
y la molcula CD4 que es expresada por los linfocitos T inflamatorios y colaboradores, y que hace que stos slo
interaccionen con MHC de clase II.

Los linfocitos T son crticos en el funcionamiento del SI: el ejemplo del SIDA

Adems de mediar la accin de los

linfocitos T citotxicos como se vio en la
lmina anterior, el reconocimiento del
complejo MHC-pptido por el TCR media
tambin la accin de linfocitos con otras
funciones efectoras o reguladoras que
son sumamente crticas para el
funcionamiento del sistema inmune. Esto
se ve claramente en el caso del SIDA.
El virus del SIDA (HIV) tiene especial
tropismo por clulas claves del sistema
inmune, como la clulas dendrticas, los
macrfagos y los linfocitos T. Como se
muestra en la figura, al comienzo de la
infeccin, hay un importante aumento de
la carga viral. Sin embargo, en esta etapa
el sistema inmune logra montar una
respuesta que detiene la expansin viral y permite la disminucin de la carga viral, pero no su eliminacin. Se ingresa
entonces en una etapa en la que el HIV contina el proceso de infeccin, particularmente afectando los linfocitos T que
contienen el correceptor CD4. Dado que estos linfocitos cumplen un importante rol en la activacin de macrfagos y la
diferenciacin de los linfocitos B, el ataque a estas clulas constituye un importante debilitamiento del sistema inmune
del individuo. Finalmente cuando el nmero de linfocitos T CD4 disminuye notablemente, el sistema colapsa, el
individuo pierde su inmunocompetencia y se convierte en blanco de una serie de patgenos oportunistas que producen
las infecciones caractersticas de las etapas finales de la enfermedad.
El ejemplo del SIDA nos da entonces una idea de la importancia que tienen los linfocitos T en el funcionamiento del
sistema inmune.
Cuando los linfocitos T bajan de cierta proporcin, cualquier enfermedad que antes era benigna o virus que tenemos
normalmente controlados, puede pasar a ser letal.

Qu es la presentacin de antgeno?
La presentacin de antgeno hace referencia al fenmeno por el cual los antgenos proteicos son procesados, generando
pptidos que bajo la forma de complejos con el MHC se expresan en la superficie celular, lo que promueve la interaccin
con el linfocito T.

Hay dos clases de MHC que presentan pptidos de distintos compartimentos celulares y promueven la interaccin con
distintos tipos de linfocitos T

A diferencia de las inmunoglobulinas que

ejercen su accin como productos de secrecin
del linfocito B neutralizando o marcando
patgenos, los linfocitos T reconocen
fragmentos de patgenos (ms
especficamente pptidos) generados en la
clula blanco y asociados a receptores de
membranas de las mismas. Dichos fragmentos
peptdicos pueden derivar de patgenos
intracelulares como bacterias o virus, o pueden
provenir de patgenos o sus productos que la
clula internaliz.
El receptor de reconocimiento del linfocito T, se
denomina TCR y estructuralmente presenta una gran similitud con el fragmento Fab de las Inmunoglobulinas. El TCR
reconoce pptidos solamente si estos se encuentran asociados a ciertas glicoprotenas de superficie que estn
codificadas en un gran conjunto de genes, que inicialmente se identificaron por su papel en el rechazo de transplantes,
los genes del complejo mayor de histocompatibilidad o MHC.
La expresin de pptidos provenientes de patgenos, en asociacin con molculas de MHC en la superficie celular se
denomina PRESENTACIN DE ANTGENO. Este proceso es fundamental para promover el contacto celular que conducen
a la activacin del linfocito T. Una vez que el linfocito T se activado proliferando y diferencindose en linfocitos T
armados, es tambin el mecanismo por el cual se dirigen las acciones efectoras del mismo. Ya sea en:
a) la eliminacin de clulas infectadas por virus o clulas malignizadas, linfocito T citotxico (CTL), mediante la induccin
de apoptosis
b) la activacin de macrfagos, linfocito T inflamatorio, (TH1). El macrfago pasa a un estado de mayor actividad,
aumentando la produccin de especies reactivas del oxgeno y del nitrgeno.
c) la colaboracin con el linfocito B para la eficiente produccin de anticuerpos, linfocito activador (TH1 y TH2) ,
mediante una activacin de los linfocitos B. La mayora de los linfocitos B se activan de esta forma (la otra forma es la
intependiente de linfocitos T)
En todos los casos, adems de la interaccin TCR-pptido-MHC, se producen otras interacciones moleculares a travs de
una serie de molculas accesorias cuya contribucin es esencial para la sealizacin. Entre estas se tienen las molcula
CD8, que se encuentra en el linfocito T citotxico, y determina que ste interaccione exclusivamente con MHC de clase I;
y la molcula CD4 que es expresada por los linfocitos T inflamatorios y colaboradores, y que hace que stos slo
interaccionen con MHC de clase II.

Lo que determina que un TCR interaccione con una MHC-I o MHC-II es el correceptor de ese linfocito T. Por ejemplo, la
poblacin CD4 interactua con MHC-II asi como los linfocitos T que expresan CD8 tienen un correceptor que esta
preparado para interaccionar con un MHC-I.

Las molculas de MHC de clase I presentan pptidos provenientes del citosol

Las molculas de MHC de clase I estn en todas las clulas nucleadas. Por qu no en las no nucleadas? A un virus no le
va a interesar una clula sin ncleo, ya que no tienen la maquinaria necesaria para que se reproduzca.
En caso de infeccin intracelular, la clula infectada se convierte en blanco de los linfocitos T citotxicos. Lo cual es lo
mismo que decir que: Los patgenos intracelulares que desarrollan su ciclo en el citosol celular son combatidos por el
sistema inmune a travs de los linfocitos T citotxicos.
Existe un mecanismo de muestreo continuo del contenido citoslico a travs de la asociacin de fragmentos peptdicos
originados en el citosol con molculas de MHC de clase I, que son as expresados en la superficie celular. El complejo
MHC-pptido puede entonces mediar la accin citotxica de los linfocitos CTL.
Hay una serie de organelos que nosotros vamos a considerar como espacio extracelular, asi como tambin a las vesculas.
Por ejemplo los virus, que tpicamente se reproducen en el interior de las clulas, en su citosol, terminan siendo
presentados en el MHC-I. Tambien algunas bacterias, parasitos unicelulares y dems.
Cmo se generan los pptidos que se unen a la MHC-I? La cadena pesada de la molcula del MHC I se sintetiza en el
retculo endoplsmico y en su plegamiento intervienen una serie de molculas chaperonas. Ms adelante en este
proceso se asocia la betaglobulina y finalmente el complejo del MHC I chaperonas, se asocia al TAP (complejo de dos
protenas que transportan pptidos desde el citoplasma al retculo endoplasmtico). Simultneamente, en el citoplasma
el proteosoma, genera los pptidos que podrn unirse al MHC I una vez que sean transportados por el TAP. El
proteosoma es un complejo multienzimtico, donde unas 28 subunidades se arreglan en 4 anillos apilados formando un
tubo en cuyo interior se aloja el sitio activo de las distintas proteasas que lo componen. El proteosoma es parte de la
maquinaria celular para reciclar protenas mal plegadas o no funcionales, sin embargo, en condiciones de activacin de la
respuesta inmune que resultan en la produccin de interferones, algunas de la subunidades del proteosoma pueden ser
substituidas por nuevas subunidades (como bli y b5i) sintetizadas bajo el influjo de estos interferones formando el
denominado inmunoproteosoma, el cual promueve la protelisis de la protenas despus de residuos hidrofbicos, lo que
genera pptidos con residuos hidrofbicos en su extremo C-terminal, lo cual resulta beneficioso para su unin posterior al
MHC. El INF (interfern gamma) en particular, puede dar lugar a una nueva modificacin del proteosoma, induciendo la
sntesis de protenas activadoras del proteosoma que se unen a los extremos del mismo, lo que resulta en un aumento en
la velocidad con que los pptidos se liberan, contribuyendo adems a que los pptidos no se degraden a nivel de
aminocidos.
Los pptidos as generados pueden ser transportados al retculo endoplasmticos por el TAP, en cual en general muestra
preferencia por el transporte de pptidos de entre 8 y 16 aminocidos, y en particular la de aquellos con residuos
bsicos o hidrofbicos en su C-terminal. Recurdese que los interferones promueven cambios en el proteosoma que
tienden a generar este tipo de pptidos.
La molcula del MHC adquiere su plegamiento final cuando se le une el pptido adecuado. Una vez sintetizada entra al
retculo y se asocia a distintas molculas chaperonas, calnexina inicialmente, y luego de asociarse a la b2-microglobulina,
con la calreticulina, ERp57; este complejo est entonces pronto para la asociacin del pptido pero hasta que esto ocurra,
se mantiene asociada al TAP a travs de la tapasina. En estas condiciones el MHC parcialmente plegado, se enfrenta al
conjunto de pptidos que transport el TAP, aqu los pptidos compiten por la unin al MHC (mediante un proceso de
prueba y error) y solamente aquellos que den lugar a una unin suficientemente estable inducirn el cambio
conformacional que ancla el pptido en la ranura del MHC dando lugar a la formacin de un complejo estable lo que a su
vez produce la liberacin del MHC-pptido de su unin al TAP y sealiza el comienzo de la migracin del complejo MHC-
pptido que da lugar a su expresin en la superficie celular. Ntese la significacin de este proceso de seleccin de
pptidos que den una unin estable, dado que tanto en este caso, como en la presentacin por el MHC de clase II es
muy importante que el complejo MHC-pptido tenga una alta estabilidad (pptido queda como embebido en la
molcula de MHC), que asegure que los pptidos que estn asociados al MHC de una dada clula provengan de su
interior.
La exposicin del complejo pptido-MHC-I en la superficie celular permite al linfocito T citotxico la eliminacin selectiva
de la clula infectada.
Las molculas del MHC de clase I muestrea continuamente el contenido de la clula. De esta forma, pptidos derivados
de protenas virales, de bacterias intracelulares, o protenas de tumores acceden la superficie celular. Nada impide que
pptidos propios sean expresados de esta manera. De hecho en las clulas normales las molculas de MHC estn
asociadas con pptidos propios, sin embargo no son destruidas porque los linfocitos T que pudieran reconocerla fueron
eliminados en los procesos que dan lugar a la tolerancia a los componentes propios (lo veremos ms adelante cmo, clase
9).
Si una clula normal tiene muy bajo MHC-I, vimos en las clases de inmunidad innata que la clula se convierte en un
blanco de la NK.

Las molculas de MHC-II presentan pptidos provenientes de las vesculas intracelulares

Mientras que el muestreo de los patgenos intracelulares corresponde a las molculas de MHC de clase I, las molculas
de MHC de clase II se encargan del muestreo del contenido de las vesculas intracelulares. En la mayora de los casos
estas vesculas (endosomas o fagosomas) contienen a su vez un muestreo del contenido extracelular, y se produce as la
presentacin de pptidos derivados de patgenos o toxinas extracelulares. En otros casos estas vesculas contienen
patgenos adaptados a reproducirse all, y la presentacin de pptidos derivados a linfocitos T inflamatorios contribuye a
promover la eliminacin de los mismos.
En el caso de linfocitos B tambin va a haber expresin de MHC-II de pptidos, y el origen del pptido es el antgeno que
reconocen. Supongamos un BCR de linfocito B que esta unindose a un antgeno. Si dicho antgeno es una protena o si de
alguna manera el eptope que reconoce el anticuerpo est unido a una protena entonces ese complejo se ingresa y esas
protenas vinculadas al reconociemiento terminan siendo procesada en pptidos y expresada. O sea, que el linfovito B
termina expresando un MHC-II. Para qu? Porque de esa forma ahora puede tener la colaboracin de un linfocito T.
Notar que esta es una presentacin mucho mas especializada. No tiene como fin la destruccin de la clula que presenta.

IMPORTANTE: Macrfagos y linfocitos B como tienen ncleo tambin tienen MHC-I adems de MHC-II. No es excluyente.

Las molculas de MHC-II presentan pptidos provenientes de vesculas endocticas

En algunos casos la fuente de pptidos puede ser bacterias o parsitos que se adaptaron a sobrevivir en las vesculas
intracelulares. En otros casos puede ocurrir que al clula fagocite patgenos o sus productos, la vescula endoctica es
entonces asociada con un lisosomas, donde la disminucin de pH y la degradacin proteoltica genera los fragmentos.
Paralelamente en el retculo endoplasmtico, una protena denominada cadena invariante (Ii) se asocia con una
molcula de MHC de clase II que ha sido recientemente sintetizada, previniendo que se alojen en la hendidura de la
molcula de MHC pptidos o protenas parcialmente plegadas, es como que la tiene tapada, por lo que los pptidos que
se encuentran en el retculo no se pueden cargar en el MHC-II. La cadena Ii dirige la exportacin de la molcula de MHC
a la va endosomal luego de su pasaje por el aparato de Golgi, conduciendo a la fusin con el endolisosoma, donde se
encuentran los fragmentos peptdicos generados a partir de bacterias residentes o protenas extracelulares endocitadas.
All la cadena Ii se degrada gracias a la acidificacin del medio, pero queda un pptido tapando la hendidura (azul en la
imagen). Comienzan a activarse proteasas que digieren las protenas, liberando pptidos. En el estadio final, esos
pptidos compiten con el pptido que estaba tapando la hendidura del MHC-II, que vena de la cadena invariante. Asi, hay
una oportunidad de que la molcula de MHC-II se abra, gracias a varias chaperonas que particpan del proceso,
abrindola y cerrndola, provocando que los distintos pptidos tengan la oportunidad de ver si encajan bien o no,
mediante un prueba y error. Cuando un pptido tiene suficiente afinidad, el MHC-II se cierra. La etapa final es el
transporte a la superficie celular.
Qu pasa si la unin con el pptido no es muy estable, en cualquiera sea el tipo de MHC? Una vez presentado en la
superficie, podra soltarse el pptido de baja afinidad, y el MHC buscara tomar otro pptido. Esto es crtico que no
ocurra porque el linfocito T podra terminar matando una clula sana, en el caso de que antes hubiese un pptido propio
y luego un virus extracelular, por ejemplo. La unin debe ser estable, y eso es lo que se observa en la realidad. Tiene una
velocidad de disociacin muy baja.

La expresin de molculas de MHC-II est restringida a unos pocos tipos celulares

A diferencia de lo que ocurre con las

molculas del MHC de clase I que se
expresan en todas las clulas
nucleadas, las molculas de clase II se
presentan en unos pocos tipos
celulares. Estas clulas,
presentadoras profesionales, son
las clulas dendrticas, los
macrfagos, y los linfocitos B.
De stas clulas, los macrfagos son
los ms activos en la eliminacin de
patgenos, fagocitanto a estos o sus productos y presentados pptidos derivados de los mismo en asociacin con
molculas de MHC de clase II. Sin embargo no expresan constitutivamente niveles importantes de estas molculas. Las
clulas dendrticas si poseen poseen una importante nivel de expresin de molculas de MHC de clase II y otras molculas
coestimuladoras, y por lo tanto son excelentes presentadoras, particularmente en lo que refiere a la activacin de
linfocitos T vrgenes. Las clulas dendrticas, que son particularmente susceptibles a las infecciones virales, son tambin
fundamentales para la presentacin pptidos virales en molculas del MHC de clase I, activando los linfocitos T
citotxicos.
Finalmente los linfocitos B, debido a la especificidad de su inmunoglobulina de superficie se destacan por su capacidad de
presentar pptidos derivados de componentes solubles extracelulares, como las toxinas bacterianas.

La expresin de las molculas de MHC II est fuertemente regulada. Por ejemplo las clulas dendrticas no las expresan
en su estado inmaduro, pero s cuando maduran y se activan; en esta condicin expresan adems molculas
coestimuladoras y pueden as activar a los linfocitos T vrgenes. Los macrfagos que son los ms activos en la eliminacin
directa de los patgenos, fagocitando a estos o sus productos y presentando pptidos derivados de los mismos en
asociacin con molculas de MHC de clase II. La presentacin de estos pptidos les permite reclutar la colaboracin de
linfocitos T CD4+ inflamatorios, con TCRs especficos de ese complejo MHC-pptido, lo que le permite aumentar el poder
de destruccin de sus fagolisosomas. Finalmente los linfocitos B, capturan antgenos que son procesados y presentados
en el MHC II, en alta densidad en la superficie celular, y de esta forma pueden reclutar linfocitos T CD4+ colaboradores
que tienen especificidad los pptidos derivados del antgeno y presentados en el MHC II. Esta interaccin da lugar a la
activacin de los linfocitos B, induciendo la formacin del centro germina y participando en los procesos de maduracin
de la afinidad y cambio de clase.

La importancia de la coestimulacin en la presentacin de antgeno

Para que la presentacin sea eficiente,

adems de la interaccin antgeno (pptido)
especfica entre el TCR y el MHC-pptido,
deben producirse otras interacciones que
dan una segunda seal. Esto es
absolutamente esencial en el caso de la
activacin de linfocitos vrgenes, y la
expresin de las molculas coestimuladoras
correspondientes en las clulas dendrticas
(como B7.1 y B7.2 que interactan con las
molculas CD28 del linfocito T) que dan
esta segunda seal son reguladas a la alta
durante el proceso inflamatorio que se
produce en el sitio de infeccin donde se
encontraban las clulas dendrticas antes de
migrar al tejido linfoide secundario, que es
sitio de activacin de los linfocitos vrgenes.
La coestimulacin como segunda seal es tambin importante en otras instancias de presentacin, como en la accin de
los linfocitos T CD4+ colaboradores, cuando su receptor reacciona con complejos pptido-MHC expresados por ejemplo
por macrfagos o clulas B. En estos casos es necesaria una segunda seal provista por la interaccin entre el ligando
(CD154) para CD40 con la molcula coestimuladora CD40. La expresin del ligando para CD40 es una caracterstica de
activacin de estos linfocitos T efectores.
Siempre vamos a ver que la interaccin entre el TCR y el MHC-pptido da la especificidad. Pero luego debe haber otra
serie de contactos para que se de la activacin.

La importancia de la coestimulacin: El proceso inflamatorio (respuesta innata) es crucial para la expresin de molculas
coestimuladoras

DC residentes en los tejidos, donde no expresan la molcula B7. Si ingresan PAMPs por ejemplo, activando la respuesta
inmune innata, a las DC se les reprograma el fenotipo y comienzan a expresar molculas coestimulatorias, migran al
ganglio y all pueden hacer activacin de linfocitos T vrgenes.

El nmero de molculas de MHC distintas que hay en cada clula presentadora es pequeo- Cul es la estrategia de
reconocimiento de las molculas de MHC que les permite presentar miles o millones de pptidos diferentes?
Ya vimos en generacin de diversidad que se generan miles, millones de distintos linfocitos T, pero al MHC, le pasa lo
mismo?tenemos un mecanismo equivalente de generacin de diversidad? Es la especificidad lograda por creas miles y
millones de molculas de MHC solo unas pocos pero con un mecanimso especial que les confiere especificidad?
Los anticuerpos y el TCR reconocen los distintos antgenos debido al elevado nmero de especificidades que componen
sus respectivos repertorios. En el caso de las molculas de MHC, unas pocas variantes (menos de 10 en cada clase) son
capaces de presentar una enorme diversidad de pptidos. Si bien la unin al pptido es de baja especificidad, debido a la
particular estructura de las molculas de MHC, una vez que se produce la unin es muy estable y la vida media del
pptido en la superficie celular es igual al de la propia molcula de MHC.
Las dos clases de MHC tienen distintas subunidades pero estructura 3D similar

Las molculas de MHC tienen estructura tridimensional

similar. El sitio de unin al pptido consiste en una
hendidura formada por dos alfa hlices sobre una
plataforma constituida por hojas beta antiparalelas.

Este sitio est formado en el caso del MHC de clase I, por

una nica cadena que tiene tres dominios: 1, 2 y 3. Los
dos primeros dominios de la cadena alfa y presentan
pptidos de entre 8 y 10 aminocidos. Existen dificultades
para acomodar pptidos ms largos debido a que la
hendidura est cerrada en los extremos. El tercer dominio, el
3, contiene el sitio de unin para el ligando CD8, que
determina la interaccin con linfocitos T citotxicos. Esta
protena est anclada a travs de una regin transmembrana
en la membrana plasmtica.

En el caso del MHC de clase II, el sitio de unin al pptido

est formado por la combinacin de los primeros dominios
de la cadenas alfa y beta que la forman, decimos entonces
que esta formado por dos cadenas: cadena y cadena . El
sitio de unin para CD4 que determina la interaccin con
linfocitos T inflamatorios o colaboradores est situado en el
segundo dominio de la cadena . En este caso la hendidura
no est cerrada en los extremos por lo que es posible la acomodacin de pptidos de mayor longitud, es ms tolerante.

Vemos que las estructuras se parecen mucho entre si asi como tambin el sitio donde acomodan al pptido.

Cada molcula de MHC puede acomodar muchos pptidos distintos

La unin del pptido se produce por la interaccin

con bolsillos de cargas o hidrofbicos que se
encuentran en la hendidura del MHC. La
interaccin con esas regiones del MHC est dada
por unos pocos residuos claves del pptido, de
modo distintos pptidos con similitud respecto a
los residuos claves pueden tambin unirse. El
cambio conformacional que acompaa la unin
del pptido lo envuelve asegurando la estabilidad
del complejo.

Con el MHC no tenemos infinito nmero de molculas, sino que todas las clulas que los presentan tienen el mismo
conjunto de molculas de MHC. Ya lo vamos a ver ms adelante.
No siempre es posible presentar todos los pptidos.

Unos pocos residuos del pptido determinan la unin

El alineamiento de la secuencia de pptidos eludos de un mismo tipo de molcula de MHC permite identificar los
residuos que resultan claves para la unin.
Solo cuando el receptor (TCR ) del linfocito T reacciona con residuos de MHC y del pptido se alcanza la fuerza de unin
que tiene sentido biolgico.

A diferencia de las inmunoglobulinas que

ejercen su accin como productos de
secrecin del linfocito B neutralizando o
marcando patgenos, los linfocitos T
reconocen fragmentos de patgenos (ms
especficamente pptidos) generados en el
cuerpo celular de la clula blanco, asociados a
receptores de membranas de las mismas.
Dichos fragmentos pueden derivar de
patgenos intracelulares como bacterias o
virus, o pueden provenir de patgenos o sus
productos que la clula internaliz.
El receptor de reconocimiento del linfocito T,
se denomina TCR y estructuralmente presenta
gran similitud con el fragmento Fab de las
Inmunoglobulinas. El TCR reconoce pptidos
solamente si estos se encuentran asociados a
ciertas glicoprotenas de superficie que estn codificadas en un gran conjunto de genes, que inicialmente se identificaron
por su papel en el rechazo de transplantes, los genes del complejo mayor de histocompatibilidad o MHC.
Qu es lo que reconoce el receptor T? Reconoce no solo al pptido (rojo en imagen), sino tambin al MHC. Se necesita la
combinacin de ambas cosas. No alcanza con solo reconocer al pptido o solo reconocer el MHC.

Las zonas de contacto entre TCR y MHC se seleccionaron ya en el timo, durante el desarrollo y son los contactos
adicionales que va a aportar el pptido los que van a determinar la afinidad que dar a lugar a la activacin del linfocito.

Estructura de los genes de MHC

El MHC es polignico y codominante: es cada individuo existen varias copias de cada gen y todas se expresan. No hay
exclusin allica

Los genes del MHC estn en un loci muy grande. Hay tres genes correctivos para MHC-I (mostrados en rojo en la imagen)
y hay un conjunto de genes para el MHC-II, con la cadena y , de los cuales los que son funcionales son los marcados
con prpura: DQ, DR y DP. Esto es lo que hay en cada cromosoma, de los cuales tenemos dos alelos. Recibimos cada alelo
de nuestro padre y nuestra madre.
Del punto de vista de MHC-I, nos termina dando 6 molculas que pueden ser distintas y desde el punto de vista del MHC-
II, por cada loci tenemos los pares maternos y paternos y se puede combinar un materno con un paterno y
viceversa, por lo tanto de cada alelo se generan 4 y as terminamos teniendo 12 posibles MHC-II. Este es el patrimonio de
MHC que tiene cada individuo para presentar pptidos. Por qu no todos tenemos el mismo conjunto de genes de MHC?
Si fuese as, no habra casos de rechazo en la donacin de rganos, ya que esto se da por los MHC diferentes. Esta gran
diferencia entre individuos existe para evitar que los patgenos evolucionen y generen protenas de resistencia, que no
seran compatibles con ningn MHC, lo que hara que estos no los puedan presentar. En lo que ms nos diferenciamos
unos de otros es en el MHC. Dicho esto, concluimos que es ms fcil hacer trasplantes entre hermanos que entre padres e
hijos, ya que los hermanos heredaron de los padres y puede ser que compartan varios genes. Hasta podran tener MHC
idnticos.

El MHC contiene 3 versiones de cada uno de los genes de las respectivas cadenas y por lo tanto hablamos de poligenia. A
su vez es polimrfico, es decir existen un enorme nmero de alelos en la poblacin. Como hay codominancia ambos
alelos se expresan y por tanto el efecto combinado de la poligenia y el polimorfismo da lugar a la expresin de 6
molculas de MHC de clase I por clula, y entre 10 y hasta 20 molculas distintas de MHC de clase II. En este ltimo caso
el nmero es mayor que 6 dado que existen 2 cadenas beta para el alelo DR, y es posible la combinacin de cadenas
provenientes de distintos segmentos.
El segmento DM codifica un anlogo de la molcula de clase II que cataliza la remocin de los fragmentos de la cadena
invariante una vez que ha sido digerida.
Otros genes relacionados con las molculas de MHC se encuentran presentes en el MHC, por ejemplo los genes para las
protenas TAP de transporte de pptidos desde el citosol, y las protenas del proteosoma se encuentra en el locus del
MHC de clase II.
En el locus denominado MHC de clase III, se encuentran algunas citoquinas como el TNF, y la linfotoxina, y varias
protenas del complemento.

La poligenia y codominancia determinan la expresin de 6 variantes del MHC-I y cerca de una decena de variantes de
MHC-II

La poligenia y codominancia aseguran la expresin de

distintas molculas en la superficie celular, que sumado a la
baja especificidad de las misma determina la capacidad
potencial de un individuo de presentar un alto nmero de
pptidos. En el caso que un patgeno lleve a cabo
mutaciones que le permitan escapar a la presentacin (los
pptidos derivados del mismo no se uniran a ninguna de las
molculas de MHC del individuo), el resultado podra ser
fatal. Sin embargo el elevado polimorfismo de la especie (el
MHC es el loci ms polimrfico de las distintas especies
estudiadas), asegura que habr individuos que puedan
expresar los pptidos mutados, permitiendo la supervivencia
de la especie. Ms an existen mecanismo que generan
nuevos alelos y por tanto existe la capacidad de reponer la
diversidad allica.
En la parte inferior de la lmina se muestra el nmero de alelos detectados en la poblacin para el MHC de clase 1 y 2. A
medida que se siguen caracterizando se hace evidente que el nmero de alelos es sumamente elevado en la poblacin en
su conjunto.

El polimorfismo y la poligenia contribuyen con la diversidad de las molculas del MHC expresadas por un individuo. El gran
polimorfismo de los loci del MHC clsicos asegura una diversidad en la expresin gnica del MHC en la poblacin en conjunto. No
obstante, sin importar qu tan polimrfi co sea un gen, ningn individuo puede expresar ms de dos alelos en un solo locus gnico. La
poligenia, la presencia de varios genes diferentes, relacionados y con funciones similares, garantiza que cada individuo produzca varias
molculas del MHC diferentes. El polimorfismo y la poligenia se combinan para producir la diversidad de las molculas del MHC que se
observan dentro de un individuo y en la poblacin total.
La expresin de los alelos del MHC es codominante. El MHC es tan polimrfico que en la mayora de los individuos tiende a ser
eterocigtica en cada locus. Los alelos se expresan a partir de ambos haplotipos del MHC en cualquier individuo y los productos de todos
los alelos se encuentran sobre todas las clulas que los expresan. En cualquier apareamiento, pueden encontrarse cuatro posibles
combinaciones de haplotipos en la descendencia; de este modo, los hermanos tambin tienen probabilidad de diferir en los alelos del MHC
que expresan; hay una probabilidad de uno en cuatro de que un individuo comparta ambos haplotipos con un hermano. Una consecuencia
de esto es la dificultad para encontrar donadores idneos para los trasplantes de tejidos.

El MHC individual determina la respuesta inmune individual

Resistencia a la enfermedad:
Individuo: poligenia y codominancia
Poblacin: polimorfismo.
La poblacin es polimrfica, sobre todo en algunos alelos en especial. Vemos que el alelo B del MHC-I (ver grafica de
imagen) tiene como 600 distintos tipos de alelos en la poblacin. Dicho polimorfismo afecta las regiones donde est
ubicado el pptido pero tambin afecta un poco la zona donde contacta con el TCR. (ver siguiente tr)

Existen algunos MHC que promueven el desarrollo de algunas enfermedades autoinmunes.

Los residuos polimrficos se encuentran en la hendidura y determinan la unin de distintos pptidos y la interaccin con
el TCR.
Las variaciones allicas ocurren fundamentalmente en la hendidura de la molcula de MHC, en el caso de MHC de clase
II se concentran en la regin correspondiente a la cadena . Los residuos afectados son los correspondientes al piso de la
cavidad o la parte interior de las paredes de la misma. De esta forma las distintas variantes allicas pueden unir distintos
pptidos.
La presentacin de lpidos por CD!
Los antgenos presentados por el CD1 incluyen una amplia gama de lpidos derivados de la pared bacteriana
(microbacterias) y lpidos propios.

Adems de las molculas de MHC de clase I y II que presentan pptidos a

los linfocitos T , existen adems otro tipo de receptores celulares de
estructura similar a las molculas del MHC. Estos receptores
denominados CD1a-e cumplen funciones de presentacin de antgenos
lipdicos, y tienen alta similitud con las molculas del MHC de clase I y
expresndose tambin asociadas a la 2 microglobulinas. Estn
codificadas fueras del locus del MHC, y a diferencia de los genes del
MHC no presentan polimorfismo en la poblacin. La cavidad equivalente al sitio de acomodacin del pptido es en las
molculas CD1 mucho ms hidrofbicas y ms profundos, y el sitio donde se une la cabeza apolar del antgeno lipdico,
quedando la regin polar expuesta para que sea reconocida por el TCR.

En algunos casos dicha presentacin convoca a clulas T convencionales, como los que hemos visto, incluso pueden
convocar linfocitos T .
La ms interesante, y que cada vez toma ms importancia en las etapas iniciales de la respuesta, de las convocatorias es la
presentacin a travs de las molculas de CD1d que presentan lpidos, porque estas estn acopladas a una clulas
especiales que se llaman NKT, que son como un hbrido entre las clulas NK y los linfocitos T. Tienen muchas
caractersticas de las clulas NK como receptores de activacin y de inactivacin, pero tienen tambin un TCR. Dicho TCR
no es un TCR cualquiera, tambin se selecciona en el timo y esta seleccionado para interactuar especficamente con estas
molculas, y reconocen lpidos (tanto de patgenos pero tambin propios). Los lpidos propios que puede reconocer no es
un lpido propio comn. Es un lpido propio que la clula moviliza cuando hay una infeccin o cuando hay una fuerte
estimulacin a travs de los receptores para PAMPs; son lpidos que solo aparecen en determinadas condiciones.
Estas clulas responden con secreciones de INF sobre todo.

Mientras que los lpidos aislados de las molculas CD1a, b y c son muchas veces lpidos derivados de microorganismos, los
lpidos aislados del CD1d corresponden tanto a lpidos propios o endgenos, como a lpidos derivados de patgenos.
Durante la infeccin con bacterias Gram-negativas como Salmonella typhimurium, las clulas estimuladas por TLR4
aumentan la expresin del lpido endgeno iGb3 en CD1d, En contrate, en la infeccin por bacterias Gram-negativas que
no 94tienen LPS convencional (como sphingomonas) la clulas expresan glicoceramidas derivada de la bacteria en CD1d.
Por tanto la presentacin de CD1d tiene dos vas de presentacin en la cual el antgeno puede ser propio o del patgeno.
La presentacin por CD1 a-c transcurre en forma similar a la presentacin de pptidos por el MHC, mediando la
interaccin con linfocitos T (que en este caso pueden ser tanto CD8+ como CD4+, o incluso CD4, CD8 doble positivos).
La presentacin por CD1d involucra la participacin de un tipo particular de linfocitos T caracterizados por la coexpresin
de marcadores caractersticos de las clulas NK, por lo que estas clulas se refieren muchas veces como clulas NKT. Estas
clulas se diferencian en el timo y all son seleccionadas positiva y negativamente por clulas que expresan CD1d. El grado
de diversidad del TCR es mucho menor que en otras poblaciones de linfocitos T, dado que la cadena alfa es invariante,
utilizando, por ejemplo en el caso del ratn, los segmentos gnicos V14J18, y esta cadena se aparea generalmente con
cadenas beta que usan los segmentos gnicos V8 V7 o V2 (la situacin es similar para los TCR humanos restringidos a
CD1d). Las clulas NKT contribuyen a la respuesta antibacteriana y antitumoral, y tambin contribuyen al balance entre
tolerancia y autoinmunidad.
La activacin de clulas NKT a travs de CD1d, a diferencia de la activacin clsica de clulas T vrgenes, da lugar a la
produccin en minutos de citoquinas como INF que activan clulas T y NK, y citoquinas como IL-4 o IL-13 que estimulan
los linfocitos B, y por tanto esta va de presentacin tienen un importante papel en la regulacin de la respuesta
inmune. Adems de promover la rpida secrecin de citoquinas, la activacin a travs de CD1d desata la potencia
citotxica de los, liberandose perforinas y granzimas, y la expresin del ligando para FAS. La accin citotxica de estas
clulas es aumentada por la IL-12, y tendran una importante funcin en respuesta inmune antimicrobiana y antitumoral.
Tema 7: Desarrollo de linfocitos T y B; y mecanismos de tolerancia
Clase 9, 25/10/2013

Las distintas clulas que componen la sangre se generan en la mdula sea a partir de un progenitor comn.
Tanto los glbulos rojos, como las plaquetas y los distintos leucocitos (glbulos blancos) comienzan su desarrollo en la
mdula sea a partir de un progenitor comn pluripotente, la clula madre hematopoitica. A partir de esta se
diferencian los precursores de la tres grandes lneas de clulas sanguneas, el progenitor eritroide que dar lugar a las
plaquetas y eritrocitos; el progenitor mieloide (sistema inmune innato) del que se derivarn los neutrfilos, eosinfilos,
basfilos y monocitos (estos ltimos a su vez se podrn diferenciar a macrfagos y clulas dendrticas); y finalmente el
progenitor linfoide (sistema inmune adaptativo e innato) que da lugar a los linfocitos B y T, y las clulas natural killer, y
del cual se piensa que se desarrollan tambin las clulas dendrticas plasmacitoides (un tipo especial de clula dendrtica
con un importante rol en las infecciones virales).

La tolerancia de los linfocitos contra componentes propios se establece durante su desarrollo (tolerancia central) y su
trnsito por periferia (tolerancia perifrica)

Hay dos tipos de tolerancia. Una

tolerancia central, en los rganos
linfoides primarios (mdula sea y
timo) cuando se producen los
receptores. Es decir que una vez
maduros ya se pueden eliminar o
anergisar. Si al rgano linfoide
primerio se le escapa una clula
que debera haber eliminado o
anergizado, acta la tolerancia
perifrica. Por qu se puede
escapar una clula que reconoce lo
propio? Para saber si reconoce algo
propio se le debe mostrar a la
clula eptopes propios y no todo
estn en los rganos linfoides primarios. La tolerancia perifrica ocurre en el resto del organismo (por ejemplo ganglios,
tejidos, etc.)

ANERGIA: Estado no funcional de la clula. Si bien la clula tiene su receptor y reconoce su epitope, no se activa. Es una
delecin funcional.

Diferentes tipos de linfocitos se diferencian a partir de un progenitor comn

A partir de un mismo progenitor

linfoide se desarrollan tres tipos
principales de linfocitos, los linfocitos
B y T, y las clulas natural killer (NK).
Los linfocitos B y T tienen receptores
de alta diversidad (BCR y TCR
respectivamente) generados por
recombinacin somtica, y son los
dos tipos celulares sobre los que se
construye la respuesta inmune
adaptativa. Por otro lado, las clulas
NK carecen de estos receptores y su
rol principal es en la respuesta
inmune innata actuando como clulas
reguladoras o citotxicas que actan
al inicio de la respuesta, o bien
destruyendo clulas infectadas que
han sido recubiertas por anticuerpos.

Mientras que las clulas NK generadas en la mdula sea pasan directamente a circulacin y de all pueden ser reclutadas
a los tejidos, los linfocitos T y B sufren distintos procesos de desarrollo que involucran otros rganos. De esta forma las
clulas maduras que expresan TCRs pueden ser linfocitos T o T segn el uso de cadenas en el TCR, o linfocitos NKT
que expresan adems del TCR, receptores tpicos de las clulas NK. Por su lado existen tres tipos de linfocitos B, las clulas
B foliculares (o B2), y los linfocitos B1 y B de la zona marginal (ZM) que solo se localizan en la zona marginal de las
vnulas en el bazo. Cul es el fin del bazo? Filtrar la sangre. Toda la sangre pasa por el bazo. No tiene linfa. Si tenemos
algn antgeno o patgeno en sangre, en teora el bazo lo debera retener.
Los linfocitos B1 los producen en el hgado fetal en la etapa fetal y en la etapa adulta se pueden producir en la mdula
sea pero colonizan las mucosas y tienen la capacidad de responder al antgeno rpidamente, y luego autogenerarse. No
estn esperando a que sean activados.

Los distintos tipos de linfocitos actan en distintos momentos en el curso de la respuesta inmune
Los linfocitos tpicos de la respuesta inmune adaptativa son los linfocitos T alfa/beta y los linfocitos B foliculares
(recuadro amarillo). Estos linfocitos pueblan los rganos linfoides secundarios y expresan receptores que pueden
reconocer el universo de formas antignicas presentes en los patgenos. Sin embargo la activacin de su proliferacin y
diferenciacin necesita de mucho tiempo, y sus acciones efectoras se manifiesta varios das o semanas despus de
producida la infeccin (demoran ms pero son los que generan ms memoria). Estos linfocitos se estudiarn en detalle a
lo largo del curso. Los otros linfocitos (no convencionales) tienen un papel intermedio entre la respuesta inmune innata y
adaptativa, y sus acciones efectoras requieren de un menor tiempo para comenzar a manifestarse. A continuacin se
provee una breve descripcin de los mismos.

Las clulas NK carecen de TCR y BCR, y su activacin est determinada por la suma de seales de inhibicin y activacin
producida por receptores especializados que reaccionan tanto a) con el MHC clsico (MHC clase I que puede estar poco
expresado en clulas infectadas) y b) con molculas de MHC especiales que aparecen en clulas bajo estrs. Son
reclutadas por interferones de tipo I ( y ), IL15 e IL12 y proveen una proteccin temprana contra infecciones virales,
resultando citotxicas para la clulas infectadas. Dado que disponen de receptores para Fc, tambin pueden ejercer su
accin citotxica al ser reclutadas por los anticuerpos (tpicamente IgG1 y 3) unidos a componentes del patgeno
expresados en clulas infectas (por ej. virus)

Las clulas NKT poseen receptores caractersticos de las clulas NK, y expresan tambin TCR en forma clonal. El grupo
ms importante de clulas NKT es el de las llamadas cannicas. En estas, la restriccin de su TCR no es con MHC de clase I
o II, si no con molculas de MHC similares a las de clase I denominada CD1d (ver clase de presentacin de antgenos). El
CD1 no presenta pptidos si no lpidos, y la activacin de estas clulas requiere del reconocimiento de lpidos, que pueden
ser a) propios (que aparecen por degradacin lisosomal por ejemplo en macrfagos activados por LPS-TLR4), o b) de
origen bacteriano, particularmente en el caso de bacterias que contienen lpidos distintos a LPS, como Sphingomonas y
Mycobacterias. Su TCR es seleccionado durante el desarrollo de estas clulas en el timo y caractersticamente presenta
una alta restriccin al uso de segmentos gnicos de la cadena alfa (solo el V14 y el J18 se recombinan en ratn y V24 y J18
en humanos). Su activacin (minutos) conduce a la rpida secrecin de INF gama, y tienen por tanto un importante rol en
la rpida regulacin de la respuesta inmune.

Linfocitos T : Estas clulas son minoritarias en la circulacin sangunea (1-5% de las clulas T), pero un alto nmero de
clulas T gama delta se alojan selectivamente en los epitelios (>50% de las clulas T) donde contribuyen al proceso
inflamatorio en caso de dao epitelial, as como a la reparacin del mismo. Aunque potencialmente podran tener una
alta diversidad de TCRs, la diversidad real de estos es limitada. De hecho la expresin de alguno de los segmentos V est
programada durante el desarrollo fetal, y como ocurre con los linfocitos B1, ver ms abajo, los segmentos V expresados
durante este perodo estn limitados, y todo indica que fueron seleccionados evolutivamente para el reconocimiento de
ciertos patgenos ubicuos. Luego del nacimiento, comienzan a predominar los rearreglos en las cadenas alfa y beta, y los
linfocitos gama/delta que se siguen generando en el timo pasan a tener una mayor diversidad. La activacin y el tipo de
antgenos que reconocen los linfocitos gama/delta todava es controversial, pero se ha demostrado el importante rol
proinflamatorio en etapas tempranas de la infeccin, as como su importancia en la finalizacin de la misma. En algunas
infecciones su nmero aumenta dramticamente (tuberculosis, salmonelosis, malaria, toxoplasmosis, y otras) llegando en
algunos das a superar en nmero a los dems linfocitos en conjunto. En este caso se sabe que hay una sub-poblacin que
es responsable de esta respuesta, que usa los segmentos gnicos V-gama 9 y V-delta 2 en humanos, el cual reconoce un
intermediario metablico que no est presente en vertebrados.

Linfocitos B1: Estas clulas se desarrollan en la etapa fetal (en el hgado) o en los primeros meses de vida y esta primer
poblacin se auto-renueva en los sitios que pueblan (peritoneo y cavidad pleural principalmente) a lo largo de la vida del
individuo. Estas clulas secretan los denominados anticuerpos naturales. Estos anticuerpos presentan relativamente poca
diversidad, particularmente en la cadena pesada, como resultado de que usan solos los segmentos gnicos V iniciales, y
de que no expresan la enzima Terminal Deoxinucleotidil transferasa por lo cual tienen adems muy restringida diversidad
de unin de segmentos. Los segmentos gnicos V utilizados han sido seleccionados evolutivamente para reconocer
epitopes presentes en patgenos comunes, y por tanto estos anticuerpos naturales presentan una proteccin cuasi
innata contra los mismos. La secrecin de anticuerpos naturales, aparentemente (existe cierta controversia), se da sin
contacto previo con el antgeno; pero adems las clulas B1 resultan activadas especficamente por algunos antgenos
con epitopes repetitivos (antgenos T independientes), dando lugar a la rpida produccin de IgM, IgA e IgG3 en ratn
(probablemente IgG2 en humanos) que cumplen un rol fundamental en la contencin de muchas infecciones bacterianas
y virales. Hasta el 40% de la secrecin de IgA en mucosas depende de linfocitos B1. Las clulas B1 responden tambin
fuertemente a la estimulacin por receptores TLRs. En las clulas B1 no hay diferenciacin hacia clulas de memoria.

Linfocitos B MZ: Los linfocitos B de la zona marginal (ZM) son un tipo especializado de clulas B que se encuentran en la
MZ del bazo en donde tienen un intenso contacto con la circulacin sangunea. Esta ubicacin y su fenotipo, les permite
responder rpidamente contra agentes infecciosos que puedan aparecer en sangre. Los linfocitos B MZ son responsables
de la produccin T independiente de anticuerpos IgM y parcialmente IgG3 en ratn (probablemente IgG2 en humanos),
contra polisacridos de la cpsula bacteriana de distintos patgenos. Dado que estas clulas, a diferencia de las B1, son
escasas hasta los 1 o 2 aos de edad, los infantes responden pobremente a las vacunas contra polisacridos y es por esta
razn que se han introducido vacunas conjugadas que permiten estimular los linfocitos B foliculares a travs de una
respuesta T dependiente.
Adems de la tpica respuesta T independiente, la fuerte estimulacin por el antgeno, o la co-estimulacin por PAMS a
travs de los TLRs, hace que las clulas B MZ expresen B7 y migren a las zonas T del bazo. En caso de que el antgeno
reconocido posea epitopes T, pude darse entonces una respuesta T dependiente con cambio de clase y parcial
maduracin de la afinidad (las clulas B MZ con alta expresin de B7 pueden estimular linfocitos T vrgenes en el bazo).
Este proceso es muy rpido y puede ocurrir a las pocas horas de producida la estimulacin inicial de las clulas B MZ.

Los linfocitos T y B generan su diversidad en forma aleatoria y deben someterse a controles para evitar que reaccionen
con lo propio.
Durante su desarrollo, los linfocitos B foliculares y T pasan por varios estados donde se produce la recombinacin
somtica que genera su receptores BCR o TCR, respectivamente. El proceso, que se inicia a partir de un progenitor
linfoide comn en la mdula sea, ocurre en distintas etapas e involucra distintos rganos. En este proceso, el receptor
generado es sometido a un riguroso control de calidad que garantiza la funcionalidad del receptor y elimina los clones
que reaccionan fuertemente con componentes propios. Este ltimo proceso se conoce como tolerancia central y es una
primer etapa para asegura que el conjunto de linfocitos B y T vrgenes que se generan no resulten en una agresin del
tejido propio. Veremos que a pesar de su sofisticacin, la tolerancia central no es suficiente para asegurar la ausencia de
clones autorreactivos, y por esta razn han evolucionado distintos mecanismos de control de esta autorreactividad que
conjuntamente se denominan tolerancia perifrica.

La generacin de los distintos linfocitos est fuertemente regulada y su proporcin puede variar en el curso de
infecciones.

Los linfocitos se generan a partir de clulas

hematopoiticas pluripotentes en la mdula sea y
la decisin de convertirse en clulas B, T o NK se
da por la interaccin con las clulas y citoquinas
que all se encuentran. En condiciones normales,
estas seales se manifiestan como mecanismos
homeostticos que hacen que se mantenga una
composicin ms o menos constante de los
distintos linfocitos con los valores que se muestran
en la figura. Sin embargo, estas seales pueden
variar en el curso de una infeccin, y por tanto
dando lugar a cambios en la proporcin relativa de
los distintos linfocitos. Aunque no todos los
mecanismos se comprenden cabalmente, est
claro que la interaccin con ligandos para la
familia de receptores Notch (receptores
comnmente involucrados en la diferenciacin celular) son determinantes para que los precursores se diferencien hacia
linfocitos T, y por tanto los precursores que abandonen la mdula con tropismo por el timo, terminarn diferencindose
en linfocitos T dado que en el timo hay una importante expresin de ligandos para notch.
La diferenciacin de las clulas B est determinada por la expresin de factores reguladores de la transcripcin y la
expresin de las RAG1 y RAG2.

El microambiente especializado de la mdula sea provee las seales para el desarrollo de los distintos precursores
linfoides a partir de las clulas madres hematopoieticas, as como para su posterior diferenciacin en clulas B. Esta
diferenciacin, est determinada por la expresin de factores reguladores de la transcripcin (como E2A y
posteiormente EBF) que a su vez determinan la expresin de molculas de superficie, como el receptor para IL-7 (la IL-7
es secretada por el estroma de la mdula sea y es necesaria promover la sobrevivencia de la clula B en desarrollo) y el
receptor para el stem-cell factor (SCF) una citoquina de
superficie de las clulas del estroma. La diferenciacin hacia
clulas B es reforzada por la ausencia de ligandos para los
receptores notch que determinan el destino de las clulas T,
y la carencia de expresin de molculas que determinan el
destino hacia NK. Tambin es importante la expresin de las
RAGs 1 y 2, que permiten que comience el proceso de
recombinacin, la cual empieza con el rearreglo DJ en el
estado temprano de las clulas pro-B, y VDJ en el tardo.
Paralelamente comienza la expresin los otros componentes
del BCR, las molculas Ig e Ig.
La diversidad de unin al generarse el rearreglo de los
segmentos VDJ, que es un importante factor de generacin de diversidad, tiene como contrapartida que muchas veces se
corre el marco de lectura dando lugar a un rearreglo improductivo. La forma de control de que esto no ha ocurrido es la
expresin en la superficie de la clula B en desarrollo, de la cadena pesada formada junto con una cadena liviana
sustituta o invariante (ver imagen) compuestas por las molculas V- y VpreB (similares a los dominios constantes y
variables de la cadena liviana ) y los coreceptores Ig e Ig. Las seales generadas por este pre-BCR con ligando de la
mdula an no totalmente identificado, hacen que se detenga el rearreglo de la cadena pesada y que la clula pre-B
responda al estmulo de la IL7, prolifere y siga su diferenciacin. Esta proliferacin es importante para amplificar el
rearreglo productivo de la cadena pesada, dado que solo el 50% de las clulas lo logran.
Todos los primeros pasos se generan en la mdula sea y es importante destacar que lo que ocurre es al azar y no hay
antgenos.
Vemos en la imagen siguiente que: comienza con la expresin de la TdT (recordar de clase de generacin de diversidad) y
tambin el receptor de la interleuquina 7. Este receptor en importante para la sobrevida del linfocito, ya que en el
estroma de la medula sea se secreta IL-7 para que la clula sobreviva. Este es el que llamamos progenitos de linfocito B.
Luego comienza a expresar las RAG 1 y 2 (recombinasas de segmentos gnicos), molculas Ig e Ig (no son
inmunoglobulinas! Se llaman asi porque tienen dominios inmunoglobulina, responsable de la sealizacin hacia el ncleo
de reconocimiento) y V- y VpreB . Recordemos que cuando un precursor de linfocito B decide que ser linfocito B,
comienza recombinando la cadena pesada (VDJ) y no la liviana, no gasta energa en recombinarlo todo de una. Si esa
recombinacin de cadena pesada es productiva (hay una protena funcional y completa; puede ser no productiva por
haberse generado un codn de stop o un cambio en el marco de lectura) se asocia a la simil de cadena liviana y va hacia la
membrana con Ig e Ig. Esto hace que se sealice a la clula B para que sepa que se tiene un producto de
recombinacin de VDJ satisfactorio, una cadena pesada correcta. Entonces, el linfocito B prolifera, lo que nos da muchas
copias de una clula que expresa esa cadena pesada productiva. Cada una de estas, independientemente comienza a
expresar la cadena liviana.

El rearreglo productivo de la cadena pesada permite la proliferacin de la clula pre-B y la continuacin de su programa
de desarrollo.
Las clulas pre-B al proliferar dejan de expresar la cadenas livianas sustitutas y la cadena del receptor para IL-7, por lo
cual dejan de responder a la IL7. Estas clulas que han proliferado estn ahora en condiciones de rearreglar el locus de la
cadena liviana, comenzando por la . El rearreglo productivo de alguno de estos locus permite la combinacin de la
cadena liviana con la cadena pesada y por tanto la expresin del BCR. La expresin del BCR controla la expresin de las
recombinasas RAG-1 y RAG-2 y el posterior desarrollo de la clula B a travs de la intensidad de la seal transmitida.
Cmo se da la sealizacin por el BCR est poco claro, pero parece que la propia expresin, an en ausencia de ligando,
da lugar a una seal tnica de baja intensidad que es responsable de este efecto. De esta forma se generan el pool de
clulas B inmaduras, que expresan IgM en su superficie y que abandonan la mdula sea (como linfocito B inmaduro)
para completar su maduracin en la periferia, dando lugar a los tres tipos principales de linfocitos B. Sin embargo si la
seal es intensa, como ocurre cuando la especificidad del BCR generado est dirigida contra componentes propios,
entonces el linfocito B recibe seales para entrar en un proceso de apoptosis, en lo que veremos constituye el principal
mecanismo de tolerancia central.
Aunque en la figura las clulas B1 se muestran como parte de los linfocitos B producidos por la mdula, la produccin
principal de estas clulas ocurre durante la etapa fetal en el hgado, y esta poblacin se mantiene luego por
autoreplicacin en la periferia. Durante su desarrollo en la etapa fetal, tambin se dan algunos cambios, respecto a la
figura, por ejemplo no se expresa la enzima TdT (que como vimos participa en el agregado de nucletidos en forma
aleatoria durante el proceso de recombinacin aumentando la diversidad de unin). La falta de expresin de TdT, hace
que la recombinacin, que en esta clula ocurre siempre con los segmentos V ms cercanos, de lugar a especificidades
preseleccionadas durante la evolucin para el reconocimiento de patgenos.

Durante su desarrollo y circulacin, la autorreactividad de las clulas B es controlada mediante mecanismos de tolerancia
central y perifrica.

Durante su ltima
etapa de desarrollo
en la mdula sea,
si el BCR del
linfocito inmaduro
reacciona
fuertemente con los
antgenos all
presentes (es decir
que reconoce
componentes
propios), se detiene
su maduracin y se
reactiva la
expresin de la
RAGs (No se elimina
todava, primero se
intenta no perder
toda la energa
invertida). De esta
forma se habilitan
nuevos eventos de
recombinacin en los loci de la cadena liviana (reedicin del receptor; cadena liviana), utilizando los segmentos V y J
adyacentes al VJ recombinado. Esto no se puede hacer con la cadena pesada, ya que como se recombinaron tres
segmentos (V, D y J) y al unirse no quedan D extras o adyacentes. Este proceso de edicin del receptor puede generar
un nuevo BCR en el cual desaparezca la autorreactividad, y en este caso se retoma el programa de maduracin y el
linfocito abandona la mdula. Si sucesivos intentos de edicin no revierten la auto-reactividad, la clula B sufre apoptosis
y por tanto eliminacin clonal, siendo este el principal mecanismo de tolerancia central para las clulas B. Adems de
este mecanismo que opera generalmente con antgenos de superficie que entrecruzan fuertemente el BCR, otros
antgenos, sobretodo solubles, que generan una sealizacin menos potente por parte del BCR, inducen en la clula B un
estado de anergia clonal, por el cual el linfocito no es destruido por apoptosis, pero adquiere un fenotipo que no le
permite activarse en un segundo encuentro con el mismo antgeno.
El proceso de reedicin cambia al partope.
Para qu puede servir una clula en estado de anergia? Esta clula reconoce algo propio, pero no es capaz de activarse.
Si por algn tipo de error, hay clulas que tambin reconocen al mismo componente propio pero que si con capaces de
activarse, la clula anergizada sirve como competencia por el eptope. Es importante para la regulacin. De todas formas,
es importante recordar que la unin antgeno-anticuerpo es un equilibro, por lo que no est unido al eptope todo el
tiempo.

Las clulas B inmaduras deben recibir seales adicionales en la periferia para madurar y construir el repertorio de clulas
B vrgenes

Las clulas B inmaduras que dejan la mdula sea tienen corta vida (vida media aprox. 3 das), y para madurar y constituir
el pool de linfocitos B vrgenes maduros deben recibir seales de sobrevivencia en los rganos linfoides secundarios.
Estos linfocitos que maduraron se caracterizan por la coexpresin de IgM (baja expresin) e IgD (alta expresin) y
poseen una vida media de 2 a 3 semanas. Sin embargo, este proceso implica una competicin por sitios limitados en los
folculos con el pool de linfocitos B maduros y de esta manera no todas las clulas logran sobrevivir. Los folculos proveen
la seales que aseguran la supervivencia de los linfocitos B inmaduros, particularmente a travs del Factor de Activacin
de Clulas B de la familia TNF (BAFF: B cell-activating factor of the TNF family) para el cual existen receptores especficos
en los linfocitos B. En esa ventana de tiempo en la cual los linfocitos B inmaduros circulan antes de logra ingresar en los
folculos, los mismos son
particularmente sensibles a la
eliminacin clonal o la anergizacin
en caso de encontrar antgenos
propios con los cuales reaccionan
fuertemente, como veremos a
continuacin.

En la clase de generacin de
diversidad vimos que cuando se recombina la cadena, se acercan los promotores y potenciadores a los segmentos
gnicos, lo que hace que se empiece a expresar. Qu se va a expresar primero? La . Por lo tanto siempre el BCR de una
clula B inmadura virgen (es decir que todava nunca vio un antgeno, nunca se activ) va a tener , la cual codifica para
IgM.
Esa clula B inmadura sale a periferia y va a los rganos linfoides secundarios a competir por el acceso a los folculos de
dichos rganos linfoides secundarios (nichos) los cules tienen clulas que secretan BAFF (ver imagen para
consecuencias).
Qu quiere decir que una clula B madura? Que va a expresar en su membrana tanto IgM como IgD, con el mismo VDJ,
lo cual se hace a nivel del transcripto primario ARN (no a nivel de ADN). Qu similitudes tienen dichas IgM e IgD de esa
cadena pesada? El VDJ y a nivel del receptor de membrana tienen el mismo partope, porque tienen la misma cadena
_________. Qu cambia? Las regiones constantes. IgD tiene tres dominios constantes.
Por lo tanto cuando hablamos de un linfocito B maduro virgen, sabemos que tiene IgM e IgD (teniendo ms IgD que
IgM) pero reconocen el mismo eptope, ya que tienen el mismo partope.

Tolerancia perifrica: Dado que muchos antgenos no se expresan en la mdula sea, existe la posibilidad de que salgan a
la periferia clones de clulas B inmaduras con capacidad de reaccionar con componentes propios expresados en otros
tejidos. Si estas clulas se encuentran en periferia con el antgeno, su destino depender de la intensidad de la seal, y
en forma similar a lo que ocurre en la mdula sea, una seal fuerte causada por antgenos multivalentes o eptopes de
superficies celulares (Despus de un linfocito B reconoce con su receptor endocita. Por lo tanto si reconoce una molcula
que est en la membrana y lo intenta endocitar, es incapaz) induce la eliminacin clonal, mientras que en el caso de
seales dbiles la clulas resulta anergizada. Como se ha mencionado, en el estado inmaduro, donde el linfocito B en
desarrollo expresa nicamente IgM, el linfocito es particularmente susceptible a experimentar eliminacin clonal o
anergia si reacciona con componentes propios. Esta susceptibilidad no es la misma en el caso de los linfocitos B que han
madurado en los folculos y ahora tienen una alta expresin de IgD. En este caso, el principal elemento que determina la
ausencia de reaccin contra lo propio (imaginemos antgenos que solo aparecen en algunos tejidos o hormonas que
aparecen a distintas edades) es la ausencia de linfocitos T que reaccionen con los eptopes T de esos antgenos, y por
tanto la ausencia de colaboracin para su activacin. En este caso el resultado ms probable es la anergia clonal.

Los linfocitos T se desarrollan en el timo donde generan su TCR y reciben seales de supervivencia o muerte segn cmo
reaccionan con componentes propios.
A diferencia de las inmunoglobulinas que ejercen su accin como productos de secrecin del linfocito B neutralizando o
marcando patgenos, los linfocitos T reconocen fragmentos de patgenos (ms especficamente pptidos) generados
en la clula blanco y asociados a receptores de membranas de las mismas. Dichos fragmentos peptdicos pueden derivar
de patgenos intracelulares como bacterias o virus, o pueden provenir de patgenos o sus productos que la clula
internaliz.
El TCR reconoce pptidos solamente si estos se encuentran asociados a ciertas glicoprotenas de superficie que estn
codificadas en un gran conjunto de genes, que inicialmente se identificaron por su papel en el rechazo de trasplantes, y
que constituyen los genes del complejo mayor de histocompatibilidad o MHC.
Durante su desarrollo, los linfocitos T son seleccionados instruidos para reaccionar con complejos de pptidos y el
MHC propio. Por ejemplo, las clulas T trasplantadas de un animal a otro no producen respuestas por que no han sido
instruidas para reconocer complejos con el nuevo MHC, y si funcionan normalmente clulas T obtenidas de un donante
con el mismo MHC.
Sale de la mdula sea el progenitor de linfocito T gracias a que tienen la capacidad de tener receptores para Notch (est
ms adelante) lo que le da afinidad por el timo. El precursor queda en el timo, donde empieza a expresar su receptor,
madura y sufrir un mecanismo de tolerancia.
Las dos clases de MHC tienen estructura 3D similar, pero interactan con distintos correctores y cargan pptidos de
distinto origen.
Las molculas de MHC tienen estructura tridimensional similar. El sitio de unin al pptido consiste en una hendidura
formada por dos alfa hlices sobre una plataforma constituida por hojas beta antiparalelas.
Este sitio est formado en el caso del MHC de clase I, por una nica cadena que tiene tres dominios: 1, 2 y 3. Los dos
primeros dominios de la cadena alfa y presentan pptidos de entre 8 y 10 aminocidos. Existen dificultades para
acomodar pptidos ms largos debido a que la hendidura est cerrada en los extremos. El tercer dominio, el 3, contiene
el sitio de unin para el ligando CD8, que determina la interaccin con linfocitos T citotxicos. Esta protena est anclada
a travs de una regin transmembrana en la membrana plasmtica.
En el caso del MHC de clase II, el sitio de unin al pptido est formado por la combinacin de los primeros dominios de
la cadenas alfa y beta que la forman, decimos entonces que est formado por dos cadenas: cadena y cadena . El sitio
de unin para CD4 que determina la interaccin con linfocitos T inflamatorios o colaboradores est situado en el
segundo dominio de la cadena . En este caso la hendidura no est cerrada en los extremos por lo que es posible la
acomodacin de pptidos de mayor longitud, es ms tolerante.

El desarrollo de los linfocitos T comienza en la mdula sea pero los eventos ms importantes ocurren en el timo.

Los progenitores linfoides con tendencia a transformarse en clulas T

dejan la mdula sea y migran hacia el timo. El timo es junto a la mdula
uno de los rganos linfoides primarios, y es una estructura
especializada en el desarrollo de clulas T. De hecho la falta de timo por
defectos genticos (sndrome de DiGeorge) o timectoma experimental
da lugar a individuos prcticamente carente de clulas T.
Hasta que no lleguen al timo no van a rearreglar sus genes.

Un subgrupo de linfocitos T reacciona con molculas CD1 que presentan

compuestos hidrofbicos derivados de patgenos o propios.
Mientras que los lpidos aislados de las molculas CD1a, b y c son
muchas veces lpidos derivados de microorganismos, los lpidos aislados
del CD1d hasta el presente, corresponden a lpidos propios o
endgenos (aunque no se descarta que tambin puedan presentarse
lpidos no propios por estas molculas). La presentacin por CD1 a-c
transcurre en forma similar a la presentacin de pptidos por el MHC,
mediando la interaccin con linfocitos T (que en este caso pueden ser
tanto CD8+ como CD4+, o incluso CD4, CD8 doble positivos).
La presentacin por CD1d involucra la participacin de un tipo particular
de linfocitos T caracterizados por la coexpresin de marcadores
caractersticos de las clulas NK, por lo que estas clulas se refieren
muchas veces como clulas NKT. Estas clulas se diferencian en el timo y
all son seleccionadas positiva y negativamente por clulas que expresan
CD1d. El grado de diversidad del TCR es mucho menor que en otras poblaciones de linfocitos T, dado que la cadena alfa es
invariante, utilizando, por ejemplo en el caso del ratn, los segmentos gnicos V14J18, y esta cadena se aparea
generalmente con cadenas beta que usan los segmentos gnicos V8 V7 o V2 (la situacin es similar para los TCR
humanos restringidos a CD1d). Las clulas NKT contribuyen a la respuesta antibacteriana y antitumoral, y tambin
contribuyen al balance entre tolerancia y autoinmunidad.
La activacin de clulas NKT a travs de CD1d, a diferencia de la activacin clsica de clulas T vrgenes, da lugar a la
produccin en minutos de citoquinas como INF que activan clulas T y NK, y citoquinas como IL-4 o IL-13 que estimulan
los linfocitos B, y por tanto esta va de presentacin tienen un importante papel en la regulacin de la respuesta inmune,
pudiendo ser una de las formas de iniciacin de una respuesta TH2. Adems de promover la rpida secrecin de
citoquinas, la activacin a travs de CD1d desata la potencia citotxica de las NK, liberndose perforinas y granzimas, y la
expresin del ligando para FAS. La accin citotxica de estas clulas es aumentada por la IL-12, y tendran una importante
funcin en respuesta inmune antimicrobiana y antitumoral.

Durante el desarrollo los linfocitos adquieren los receptores de caractersticos y se diferencian en distintos tipos de
clulas T
Durante su estada en el timo las clulas T en desarrollo, denominadas timocitos, van adquiriendo las caractersticas
fenotpicas de los distintos linfocitos T, y son sometidos a sucesivos controles de acuerdo a la intensidad con que
reaccionan con las molculas del MHC.
La primer decisin que deben tomar los timocitos en desarrollo es entre su diferenciacin hacia linfocitos T o

Los precursores ingresan al timo a travs

de los capilares sanguneos
(aproximadamente en la zona crtico-
medular) y de all se dirigen a la zona
cortical. En ese camino reciben el
estmulo inicial para ingresar en un
programa de clulas T, esto es, la
interaccin con los ligandos Notch
caractersticos del timo (si estos
precursores se transfieren a otro tejido
donde no hay expresin de estos
ligandos, los mismos se desarrollan en
clulas B o NK). En la corteza tmica los
timocitos comienzan simultneamente el
rearreglo de las cadenas , , y (la
comenzar ms tarde). Es como una
competencia para ver cul se rearregla
primero.
Dependiendo de cul de los dos TCR loci
se rearregla exitosamente, el timocito
terminar siendo o . En el caso de
rearreglo productivo de la cadena , esta
se aparea (en forma similar a lo que
ocurre con el pre-BCR) con una cadena
sustituta o invariante pT , generando el
receptor pre-TCR. Dado que en este caso
no se requiere el rearreglo productivo de
dos cadenas a la vez, este evento es ms
probable y la mayora de los timocitos
(95%) terminaran siendo T . En caso de
ocurrir, la sealizacin por el TCR
apaga el gen de la cadena y lleva a la
generacin de un linfocito . Por el
contrario la sealizacin por el pre-TCR
apaga los genes y , promueve la
proliferacin del timocito (aprox. 100
veces), la coexpresin de CD8 y CD4 (nico momento en que se expresan ambos a la misma vez, cuando decidi ser ; la
que le sirve ms es la que sobrevive), y la recombinacin del locus . En este caso dado que el locus , en su totalidad,
est contenido entre los segmentos V y J , la recombinacin VJ elimina el locus delta asegurando el destino de ese
timocito como un linfocito T .
Ntese que como se ha discutido en las lminas anteriores, en el timo fetal, la produccin de linfocitos T est muy
aumentada y se produce en oleadas en las cuales se usan segmentos gnicos determinados en la cadena . Estas
oleadas de clulas , a su vez, pueblan especficamente, distintos epitelios que son por su parte posibles rutas de
entrada de patgenos.

SELECCIN POSITIVA: En el estado doble positivo, la cadena del TCR del timocito experimenta sucesivos rearreglos
hasta ser seleccionada positivamente para reaccionar con el MHC-pptido propio o morir.
Doblemente positivo significa que tiene CD8 y CD4.
El timocito en desarrollo ha proliferado en la corteza tmica, coexpresa CD4 y CD8 y comienza a recombinar el locus .
La recombinacin comienza con los segmentos gnicos V y J ms cercanos de modo de posibilitar futuros rearreglos. Esto
es as debido a que en este estado el timocito ser seleccionado en la corteza tmica para reaccionar con el MHC-pptido
que expresan las clulas corticales de la mdula (tanto MHC I como MHC II), y este evento tiene baja probabilidad de
ocurrir. Por esta razn, adems, a diferencia de lo que ocurre con la cadena liviana de los anticuerpos, no hay exclusin
allica en la cadena y comnmente se rearreglan ambos alelos a la vez. En estas condiciones el timocito rearregla su
cadena liviana probando distintos rearreglos durante 2 o 3 das. Durante este tiempo hay tres posibilidades (ver tabla):

a) en caso de que no presente una reactividad moderada con complejos del MHC-pptidos propios, morir.
b) el mismo destino tendr si la interaccin con las clulas epiteliales es de alta afinidad (aunque como veremos ms
adelante, en esta situacin puede haber otro destino para el linfocito en desarrollo, adquiriendo un fenotipo regulador).
c) si por el contrario el TCR formado interacciona con el complejo MHC-pptido con moderada afinidad, entonces recibe
seales de supervivencia y prosigue su desarrollo.

Si se gener un linfocito T que no reconoce la molcula de MHC propio, ya no me sirve, no ser funcional. Si reconoce la
molcula de MHC propio con muy alta afinidad tampoco me sirve, sera muy reactivo. Por lo tanto se seleccionan los
linfocitos T que reconozcan los MHC propios con una intensidad moderada, intermedia. Cmo se percibe la fuerza de
avidez? Por el tiempo de contacto. Mucho tiempo implica autorreactividad. Poco tiempo no le da para darle seales de
sobrevida.

Si bien en teora en este proceso el timocito puede expresar dos TCRs distintos (con dos cadenas distintas) es poco
probable, dado que 2/3 de los rearreglos en la cadena sern improductivos. Adems aunque sea productivo, es poco
probable que reaccione con el MHC y por tanto la probabilidad de un linfocito con dos especificidades es baja.
Dependiendo de que la interaccin se da con molculas de MHC de clase I o II, o con molculas con CD1d, los timocitos
siguen distintos programas de desarrollo. La interaccin con CD1d es poco comn y se da solo cuando se recombinan
determinados segmentos gnicos en la cadena del TCR (V14 y el J18 en ratn y V24 y J18 en humanos) y por tanto el
porcentaje de clulas NKT generadas es baja, particularmente en humanos. No obstante, la mayora de las timocitos
llevan adelante la seleccin positiva a travs de la interaccin con afinidad moderada con complejos MHC I-pptido o
MHC II-pptido. La interaccin con una u otra de estas molculas, coordina la expresin de su correceptor hacia CD8 o
CD4, respectivamente, dejando de ser doble positivos.
Notese que durante este proceso de seleccin positiva, el TCR formado tiene la oportunidad de reconocer alguno de los
complejos formados por las hasta 6 molculas del MHC que se expresan por la polignica y codominancia del MHC, y
similarmente, hasta cerca de una docena de complejos del MHC-II.

SELECCIN NEGATIVA: Los timocitos que reaccionan con alta afinidad con complejos MHC-pptido propios mueren
rpidamente.

Si bien la fuerte interaccin con los complejos

de MHC-pptido presentados por las clulas
endoteliales de la corteza tmica induce la
apoptosis de los timocitos doble positivos en
desarrollo, el proceso de eliminacin de clones
autorreactivos tiene mayor especializacin en la
mdula tmica donde se da la seleccin
negativa. A la mdula llegan los timocitos
expresando el TCR y un nico correceptor CD4
o CD8 dependiendo de qu tipo de MHC
produjo su seleccin positiva; aqu comienzan a
interactuar con clulas epiteliales pero
tambin con macrfagos y clulas dendrticas
que tienen caractersticas especiales. Si la
interaccin con los complejos MHC-pptidos es
de alta afinidad, entonces se induce la
apoptosis en los timocitos. De esta forma se asegura que las clulas T en desarrollo no respondan ms adelante contra
pptidos propios. Pero, qu tan representado est el conjunto de componentes propios en los pptidos presentados
por estas clulas?, es decir, cual es la garanta de que los pptidos derivados de componentes del hgado o del pncreas,
por ejemplo, puedan ser presentados por ests clulas en el timo. Aqu aparece un hecho bien interesante. Por un lado,
los pptidos que ms frecuentemente encontraran las clulas T en la periferia son los de las propias clulas
presentadoras, y por esta razn tiene mucho sentido que los macrfagos y las clulas dendrticas participen de la
seleccin negativa. Por otro lado, las otras clulas participantes, las clulas epiteliales de la mdula tmica, tienen activado
un gen particular, el gen AIRE (Autoimmune Regulator), que por un mecanismo poco comprendido, promueve la
expresin en estas clulas de un enorme conjunto de protenas tejido-especficas que de otra forma no podran ser
mostradas en el timo. La importancia de este mecanismo se pone de manifiesto en la enfermedad Sndrome
autoinmune poliglandular de tipo I. En estos pacientes defectos (mutacin) en el gen AIRE, hacen que abandonen el timo
un gran nmero de clulas T potencialmente autorreactivas que dan lugar a respuesta inmune contra rganos propios, y
el deterioro es particularmente manifiesto en el sistema endcrino.
Una cuestin central en el desarrollo de linfocito T es como los timocitos pueden distinguir complejos MHC-pptidos
que inducen la seleccin positiva de la negativa. Aunque la seleccin negativa a menudo ocurre luego de la positiva,
tambin, como hemos visto en la lmina anterior, la seleccin negativa puede ocurrir en el estado doble positivo si la
reaccin con el MCH-pptido es muy fuerte. Por tanto el timocito debe recibir seales distintas en los distintos casos.
Dado que los distintos pptidos pueden expresarse en distintos niveles no alcanzara con una distincin basada en el
avidez de la interaccin determinada por la cantidad de receptores que estn involucrados. No hay hasta el momento una
respuesta clara, pero la diferencia principal parece estar dada por la k off de la reaccin, esto es interacciones TCR-
pptido-MHC que demoran en disociarse daran lugar a una sealizacin adicional que inducira el programa de muerte
caracterstico de la seleccin negativa.

La exigente seleccin que ocurre en el timo durante el desarrollo de los linfocitos T determina que solo un pequeo
porcentaje termine siendo exportado a periferia.

Solo un 2 a 3 % de los precursores que ingresan al timo logran completar

su desarrollo y salir como linfocitos T a la periferia, lo que refleja la
dificultad de instruir los precursores a reconocer pptidos asociados al
MHC propio (seleccin positiva) y a su vez que este reconocimiento,
conocido como restriccin por el MHC propio, no sea, per se, de muy alta
afinidad para que no respondan contra componentes propios.
Como se ha mencionado, durante el proceso de seleccin positiva, el TCR
formado tiene la oportunidad de reconocer alguno de los complejos
formados por las hasta 6 molculas del MHC que se expresan por la
polignica y codominancia del MHC, y similarmente, hasta cerca de una
docena de complejos del MHC-II. Pero por otro lado, el alto nmero de
posibles complejos pptidos-MHC hace que haya muchas oportunidades
para la seleccin negativa de los timocitos en desarrollo.

TOLERANCIA PERIFRICA: Los linfocitos T vrgenes que abandonan el timo se vuelvan anrgicos si reaccionan con alta
afinidad con MHC-pptidos propios.

Luego de su ingreso al timo los timocitos permanecen all por aprox. una semana donde son expuestos a la seleccin
negativa y completan su maduracin. Estos linfocitos vrgenes abandonan el timo y comienzan a recircular por los
rganos linfoides perifricos. Alguno de estos linfocitos pueden haber escapado a los mecanismos de tolerancia central,
por ejemplo debido a que el antgeno no se expres en las clulas epiteliales de la mdula, en ese caso, estos clones
autorreactivos de linfocitos T vrgenes, normalmente, terminarn siendo desactivados en la periferia a travs de
mecanismos de tolerancia perifrica. Esta ocurrir porque en ausencia de infeccin, algunas de las clulas dendrticas
residentes en los tejidos, abandonan los mismos y acceden a los rganos linfoides secundarios donde llegan expresando
en su MHC pptidos propios derivados del tejido original. Sin embargo, (como veremos en la prxima clase) estas clulas
dendrticas no provienen de un sitio de inflamacin y por tanto no han sido activadas para expresar las molculas
coestimuladoras B7 (ya sea B7.1 o B7.2) ni citoquinas como IL12. En estas condiciones, en caso de presentar estos
pptidos (propios) a un linfocito T que los reconozca, no dan lugar a la activacin del mismo y por el contrario inducen
un estado de anergia en el mismo. En estado anrgico los linfocitos no mueren pero si vuelven a encontrar el antgeno
nuevamente, aun cuando sea presentado con coestimulacin (por ej. B7) no se activarn. Por qu simplemente no se
eliminan las clulas en lugar de inducir la anergia? Se piensa que las clulas anrgicas tienen como rol el competir con las
clulas autorreactivas cuando hay presentacin de antgenos propios en un contexto inflamatorio.
Si el linfocito T autorreactivo sale a periferia y reconoce una molcula propia (no expresada por gen AIRE por ejemplo, lo
que causa que haya salido ese Linfocito T autorreactivo) este no se activa. Por qu? Porque dicho reconocimiento TCR-
MHC-pptido es solamente la primera seal, y con una sola seal no se activa. Le falta la segunda seal (lo vemos la clase
que viene), con un coestimulador B7. Entra en anergia.
Si dicho linfocito migra a un ganglio en condiciones de inflamacin, si obtendr la segunda seal, lo que le permitir
activarse, por tanto proliferar y diferenciarse, lo cual en ese caso sera peor.

Las clulas T reguladoras (Treg) son un mecanismo adicional de control de la tolerancia a lo propio.

Las Treg inhiben la respuesta de las clulas T

CD4 o CD8 a travs de la secrecin de IL-10,
TGF-b y contactos celulares de forma antgeno
especfica.
La IL-6 producida por la respuesta innata
contrarresta su efecto impidiendo que inhiban la
respuesta en la infeccin.

Adems de los procesos que hemos vistos de

tolerancia central y perifrica para linfocitos B y
T, existe adems un mecanismo activo de
supresin de la autorreactividad llevada
adelante por un tipo especial de linfocito T CD4,
denominados linfocitos T reguladores. Estas
clulas T reguladoras inhiben la respuesta T en
mltiples instancias, incluyendo la expansin
inicial de los linfocitos T vrgenes en los tejidos
linfoides secundarios, y las funciones efectoras
de los linfocitos T en el sitio de accin. La IL-10 y el TGF han sido implicados como las citoquinas secretadas cuando una
Treg es activada, aunque tambin parece que median receptores celulares que dan lugar a contactos clula-clula con
efectos tambin inhibitorios. Mientras que la IL-10 ejercera su accin inhibitoria sobre la clula presentadora
impidiendo su maduracin y activacin, el TGF actuara ms bien sobre el linfocito T que resultar inhibido. La
activacin de la Treg requiere del reconocimiento por su TCR de un pptido especfico presentado por el MHC II de la
clula presentadora, por ej. de una clula dendrtica, y requiere adems de molculas coestimulatorias para su activacin.
Un rasgo diferencial es que como consecuencia de su activacin, las Treg no producen IL-2 y por tanto no son capaces de
producir su auto-expansin. En condiciones aspticas, las Tregs contribuyen a mantener bajo control los clones
autorreactivos de linfocitos T. Este efecto, que en principio podra evitar una respuesta a la infeccin, es desactivado
cuando la clula dendrtica es activada por los receptores de la respuesta inmune innata (como los TLRs) que inducen la
secrecin de IL6 que resulta inhibitoria para la accin de las Tregs.

Hay dos tipos de Treg: Una que sale del timo, Treg natural, que se produjo en la seleccin negativa cuando se tiene mucha
afinidad (muere en apoptosis, entra en anergia o se convierte en esta Treg) por lo tanto decimos que son las que nos
protegen de las reacciones autoinmunes. El otro tipo de Treg se generan luego en periferia en la respuesta inmune
(balance para que la respuesta no se exacerbe).
Las clulas Treg se generan en timo y alternativamente en la periferia

Las clulas Treg se generan en el timo (Treg naturales) y alternativamente en la periferia donde se presentan como un
grupo heterogneo que incluye Treg inducidas o iTreg, las TH3 y las TR1. Treg naturales expresan CD25 (la cadena del
receptor para IL-2) en su superficie y son de larga vida. Su diferenciacin, as como la de las Treg inducidas, requiere la
expresin del regulador transcripcional FoxP3, y el mismo se usa como marcador para identificar estas clulas. Las TH3 y
TR1 no expresan FoxP3
Aunque el destino principal de los timocitos que reaccionan con alta afinidad con complejos MHC-pptidos en el timo es
la eliminacin clonal, alguno de estos clones autorreactivos reciben seales alternativas (no entendidas al presente) y se
desarrollan como TREG naturales que salen a la circulacin. Las Treg naturales constituyen la mayora de las TREG
circulantes y llegan a ser el 10-15% de los linfocitos T CD4 en circulacin. Por otro lado, otra poblacin de TREG, las iTreg
(clulas T reguladoras) se generan en el tejido linfoides secundario a partir de clulas T CD4 vrgenes o en los sitios de
inflamacin a partir de clulas efectoras. Las iTreg se diferencian in vivo en condiciones de elevadas cantidades de
antgeno crnica, como ocurre en las infecciones persistentes (como tuberculosis o schistosomiasis). En estas condiciones
se piensa que la accin principal de las iTreg as como las de las TREG naturales que tambin se expanden bajo esas
condiciones, es la de limitar el dao que causa la prolongada activacin de las clulas T efectoras. Las clulas TH3 se
encuentran en el sistema inmune de mucosas y tras activacin producen IL-10, IL-4 y TGF-beta (difieren de las TH2 que
veremos en otras clases en que producen la citoquina antiinflamatoria TGF-beta). Estas clulas controlan la intensidad de
la respuesta inmune en las mucosas y se entiende que son esenciales para mantener la tolerancia contra la flora normal y
los alimentos, su ausencia da lugar a enfermedades autoinmunes. Las clulas TR1, se generan in vitro en altas
concentraciones de IL-10, secretan TGF-beta pero no IL-4, lo que las distingue de las TH3.
La IL-10 secretada por las distintas Treg suprime la respuesta de las clulas T circundantes al reducir la produccin de IL-2,
TNF y IL-5, a la vez que inhibe la presentacin de antgeno en las presentadoras al disminuir la expresin de MHC y
molculas coestimuladoras. Por su lado, el TGF-beta tambin bloquea la produccin de citoquinas en las clulas T, su
capacidad de proliferar y su citotoxicidad. Su accin combinada de ambas citoquinas es la de suprimir la respuesta
inmune.
Ms y ms evidencia indica que la tolerancia perifrica reposa en gran medida en las clulas TREG. La importancia de las
TREG en el control de la tolerancia queda de manifiesto en circunstancias en las cuales aparecen defectos en FoxP3. La
disfuncionalidad de FoxP3 resulta, tanto en humanos como en modelos animales, en una severa enfermedad autoinmune
caracterizada por la inflamacin en varios rganos. En humanos esta enfermedad est ligada a defectos en el cromosoma
X, y es conocida como IPEX (Immunodisregulation, polyendocrinopathy, enteropathy, X-linked syndrome)
Tema 8: Activacin y diferenciacin de linfocitos T
Clase 10, 28/10/2013

Este evento es considerado como el inicio de la respuesta inmune adaptativa.

Diferentes tipos de linfocitos T se diferencian a partir de un progenitor comn

A partir de un mismo progenitor

linfoide se desarrollan tres tipos
principales de linfocitos, los
linfocitos B y T, y las clulas
natural killer (NK). Los linfocitos
B y T tienen receptores de alta
diversidad (BCR y TCR
respectivamente) generados por
recombinacin somtica, y son
los dos tipos celulares sobre los
que se construye la respuesta
inmune adaptativa. Por otro
lado, las clulas NK carecen de estos receptores y su rol principal es en la respuesta inmune innata actuando como clulas
citotxicas que funcionan al inicio de la respuesta, o bien destruyendo clulas infectadas que han sido recubiertas por
anticuerpos.
Mientras que las clulas NK generadas en la mdula sea pasan directamente a circulacin, los linfocitos T se desarrollan
en el timo. Esta diferenciacin da lugar a clulas que expresan TCRs y que pueden ser de tres tipos principales, la gran
mayora corresponde a linfocitos T (que usan las cadenas alfa y beta en su TCR), el segundo grupo es el de los
linfocitos T , y el tercero corresponde a los linfocitos NKT que expresan adems del TCR, receptores tpicos de las
clulas NK.
Funciones efectoras de alguno de estos tipos celulares:
NKT son clulas intermedias entre la respuesta inmune innata y la respuesta inmune adaptativa. Tienen TCR, pero fue
seleccionado para reaccionar sobre todo con la molculas del CD1 (las al final de clase de presentacin de antgenos), las
cuales presentan lpidos.
Los linfocitos T tienen un receptor especial, el TCR , que tiene ms diversidad de ligandos, puede reaccionar con
molculas no convencionales de presentacin de lpidos (CD1) pero tambin con MHC. Casi siempre funcionan en clulas
citotxicas, y tienen un rol muy importante en la regulacin de la respuesta.
De las distintas clulas T que genera el timo, los linfocitos T son los ms relevantes para el desarrollo de la respuesta
inmune adaptativa, tanto por su rol regulador como por sus funciones efectoras. En esta clase nos concentraremos en los
elementos que dan lugar a la activacin de los linfocitos T vrgenes, y a estudiar las seales y mecanismos que permiten
su diferenciacin en linfocitos T efectores y clulas de memoria. La poblacin de linfocitos T vrgenes.

La activacin de los linfocitos T vrgenes depende de la estimulacin que reciben de clulas dendrticas activadas en un
contexto inflamatorio.
Recordar que la activacin de los linfocitos T ocurre
en los tejidos linfoides secundarios (ganglios, baso,
placas de Peyer) y tiene como elemento central la
comunicacin entre dos clulas: las DC que vienen
del sitio de infeccin (tpicas activadoras de
linfocitos T) y las poblaciones de linfocitos T
vrgenes, con CD8 o CD4. De alguna forma se
terminan encontrando en el tejido linfoide
secundario.
Para la activacin vamos a ver que hay dos seales:
- Primera seal de activacin, una seal especfica
que tiene que ver con el TCR reconociendo el
complejo MHC-pptido (vlido tanto para CD8
como para CD4).
- Segunda seal de activacin, vinculada a
molculas de coestimulacin, en el caso de la
imagen la molcula de B7 que se expresa en la
clula presentadora (es este caso la DC).
Esto da lugar a un ciclo por el cual aumentan en nmero, o sea que la especificidad original se multiplica ya que prolifera
en forma clonal y se va a diferenciar.
La activacin de las clulas T vrgenes en respuesta al antgeno, y su subsiguiente proliferacin y diferenciacin constituye
una respuesta primaria de inmunidad celular. Como resultado de esta respuesta:
a) aumenta el nmero de clulas que pueden responder contra ese antgeno (proliferacin)
b) gran parte de las clulas se diferencian equipndose para adquirir nuevas funciones efectoras (participar directa o
indirectamente en la destruccin de patgenos)
c) otro conjunto de clulas se diferencian dando lugar a clulas de memoria lo cual asegura una mejor respuesta en un
segundo encuentro con el mismo patgeno.

Tras su activacin los linfocitos T se diferencian en distintos tipos de linfocitos efectores

Tras su activacin los linfocitos T pueden diferenciarse en distintos tipos de clulas efectoras que participan tanto en la
inmunidad celular como en la inmunidad humoral. En lo referente a la inmunidad celular, esta tiene gran relevancia en la
eliminacin de patgenos intracelulares. En este sentido los ejemplos ms claros son los linfocitos T CD8 citotxicos, que
pueden actuar directamente contra las clulas infectadas por virus destruyndolas si presentan pptidos virales asociados
al MHC de clase I, o la destruccin de patgenos intracelulares en macrfagos activados por linfocitos T CD4 TH1. Los
linfocitos T citotxicos, los CD8+, detectan clulas que tienen infecciones en el citoplasma o cuando un proceso que hace
que se generen protenas anmalas desde el citoplasma. O sea que clulas infectadas o clulas tumorales pueden ser
reconocidas por lis linfocitos T citotxicos. Es una poblacin heterognea de clulas pero su funcin es esa: la eliminacin
de clulas infectadas.
Las clulas T con CD4 al activarse pasan a ser helpers. Son clulas que colaboran con otras clulas aumentndoles su
poder de destruccin. El caso tpico es la interaccin con macrfagos por parte de los TH1. Cuando el macrfago toma un
patgeno, ste puede vivir en sus vesculas o en su interior (virus). Como ya vimos en la clase de presentacin de
antgenos, los pptidos presentados en el MHC convoca la colaboracin de estos linfocitos T colaboradores. De qu sirve
que un linfocito T colabore con un macrfago? La secrecin de INF por el linfocito hace que el macrfago aumente la
sntesis de especies reactivas del oxgeno y por lo tanto aumente su destruccin del patgeno (lo vemos en tema 11
mejor). Los TH2 estn ms orientados a la interaccin con parsitos multicelulares; tpicamente sus clulas evolucionaron
para reaccionar contra helmintos. Hoy en da la poblacin parsita intestinal en los humanos est muy controlada, es por
esto que esta rama de la inmunidad esta como desempleada. Esto hace que muchas veces sean estas las clulas
responsables de la alergia (no solo ellas igual), ya que no tienen otra cosa que hacer. Muchas enfermedades autoinmunes
tambin estn vinculadas con este hecho, ya que los parsitos inclinaban al sistema inmune hacia la baja, y al sacar a
estos qued a la alta, lo cual a veces hace que sea sper sensible. Los linfocitos T CD4 TH1 as como los linfocitos T CD4
TH2 contribuyen tambin a la inmunidad humoral colaborando con las clulas B en la produccin de anticuerpos, e
influyendo (dependiendo de cuan de stos participe) en las clases de inmunoglobulina que secretar linfocito B. De esta
poblacin de linfocitos, TH1 y TH2, hay algunos que tienen afinidad por el ganglio, convirtindose en linfocitos foliculares
(por qu van a los folculos) y son los que dan la ayuda a las clulas B. A diferencia de los casos anteriores, la produccin
de anticuerpos, tiene como blanco principal a los patgenos extracelulares. Por su lado los linfocitos T CD4 TH17 son
importantes en el inicio de la respuesta adaptativa por su rol en el reclutamiento de neutrfilos y tambin tienen como
blanco principal los patgenos extracelulares. Tcnicamente lo que hacen las TH17 es promover que otras clulas que
estn reconociendo a su antgeno secreten citoquinas que reclutan neutrfilos. Finalmente, un grupo de linfocitos T CD4,
las clulas T reguladoras, pueden adquirir un fenotipo especial de desactivacin de la respuesta en contacto con el
antgeno, siendo importantes en el control de la magnitud de la respuesta inmune y de la autoinmunidad. En algunas
circunstancias, en sitios donde hay tendencia a generar tolerancia (tejido cercano a la mucosa intestinal por ejemplo) se
activan clulas T y terminan adquiriendo un fenotipo regulador. A diferencia de las otras clulas, que tenan como
funcin encontrar un antgeno y a partir de all actuar, las Treg secretan interleuquinas anti-inflamatorias que se
contraponen a la activacin exagerada de linfocitos T.

Los linfocitos T que maduraron en el timo circulan como linfocitos vrgenes a travs del tejido linfoide en la bsqueda del
antgeno

Cmo es la vida de un linfocito T que acaba de nacer en el timo?

Una vez que completaron su desarrollo en el timo, los linfocitos entran en la corriente sangunea y al llegar a los rganos
linfoides perifricos, abandonan la circulacin a travs de las venas del alto endotelio (HEV), proceso que veremos en
ms detalle ms adelante. Una vez en el rgano linfoide, migran a travs del mismo saliendo por los vasos linfticos
eferentes y retornando al la circulacin general para repetir el patrn de circulacin. El proceso contina hasta que el
linfocito T virgen encuentra el antgeno para lo cual puede sobrevivir mucho tiempo (aos).
Si en este recorrido encuentra una clula presentadora que expresa un MHC-pptido que puede reconocer, y el
encuentro se da en un contexto inflamatorio (como el que presentara un ganglio que drena un sitio de infeccin),
entonces el linfocito virgen puede activarse proliferando y diferencindose en un linfocito efector.
En la imagen se ven dos circuitos: el circulatorio y el linftico (blanco). Los ganglios tienen acceso al material de la sangre
que a travs de capilares lo recorre y luego vuelve a salir a circulacin, y hay tambin un compartimiento que es parte del
ganglio que recibe linfa de los sitios perifricos, y esa linfa drena a travs de conductos que van juntndose y terminan
drenando en el conducto torcico donde vuelve a la circulacin sangunea por la vena subclavia.
Los linfocitos salen del timo y eventualmente pueden salir de la circulacin de un ganglio. Cmo? Debido a que hay una
serie de molculas que estn expresadas en el endotelio vascular (ver imagen siguiente).
Las molculas de adhesin del linfocito virgen determinan su patrn de migracin al tejido linfoide secundario.

Como hemos vistos para otras clulas del sistema inmune, la interaccin de las molculas de adhesin del linfocito T
virgen y los receptores para quimioquinas determinan su patrn de migracin durante su circulacin por el torrente
sanguneo y la linfa. En esta figura, se muestran los componentes que permiten su pasaje selectivo, a travs de las
vnulas del alto endotelio (HEV), donde abandonan el torrente sanguneo e ingresan al tejido linfoide. En una primer
instancia hay una interaccin de la L-selectina del linfocito que reconoce patrones de glicosilacin (residuos sialil-lewis
sulfatados en las molculas CD34 y GlyCAM-1) caractersticos de las clulas de las HEV. Esto frena al linfocito que empieza
a rodar sobre la vasculatura. Esto permite que el receptor para quimioquinas del linfocito T (CCR7) interacte con las
quimioquinas locales, tales como CCL21 que estn retenidas en superficie de proteoglilcanos en el interior de la
vasculatura. Esta interaccin que se muestra en el cuadro central, activa el receptor para integrinas (LFA-1) en el linfocito
T (por un mecanismo poco entendido) lo que le permite al unirse a ICAM-1, y de esta forma adherirse al epitelio y
comenzar el proceso de diapdesis. Como ocurre en la migracin de neutrfilos, por ej., la presencia de metaloproteasas
en la superficie del linfocito permite la digestin de la membrana basal para ingresar al tejido.
Estamos viendo en la imagen lo que pasa dentro de los tejidos linfoides secundarios, en el HEV.
El pool de linfocitos T que van saliendo del timo es renovado, y tienen la capacidad de auto-replicarse en la periferia. Los
linfocitos vrgenes son clulas de corta vida media. Cuando el timo involuciona a lo largo de la vida ya no produce tantos
linfocitos T.

Las clulas dendrticas son clulas presentadoras de antgenos con una crtica funcin de regulacin de la respuesta
inmune adaptativa

La mayora de los estudios iniciales sobre las DC se hicieron a partir de las clulas de
Langerhans. Estas clulas se encuentran en la epidermis y cumplen tpicas funcin de
centinelas. Estas clulas estn equipadas con receptores para reconocer diferentes
PAMPs (TRLs, NODs, RIGs, C-type lectins), quemoquinas y citoquinas inflamatorias.
La activacin por estos receptores, por ejemplo en una infeccin, promueve la
migracin de la DC a los rganos linfoides secundarios y su activacin, para que
puedan participar en la activacin de otras clulas, particularmente los linfocitos T
vrgenes. Esta visin inicial del modo de funcionamiento de estas clulas se ha ido
complicando, por ejemplo, algunas veces la maduracin y activacin, conduce, no a
la activacin de la inmunidad, si no a la activacin de clulas que regulan
negativamente la inmunidad, como las clulas T reguladoras. En otros casos, por ejemplo en ausencia de infeccin, las
clulas pueden madurar sin activarse, y en este caso el resultado es principalmente la anergizacin de los linfocitos T con
especificidad por los pptidos (propios del tejido normal en este caso) que presenta. Ms an el panorama adquiri un
grado mayor de complejidad al descubrirse la existencia de otros tipos de DCs, mostrando que el trmino Clulas
Dendrticas implica en realidad una red de clulas de alta heterogeneidad.
En el recorrido que hace el linfocito T puede ser que se encuentre con DC que vinieron desde la periferia. Las DC son una
poblacin muy heterognea, pero nosotros la tratamos como ms reducida. Las DC mieloides son las que se encuentran
en la periferia y cada tanto se renueva a partir de precursores en la sangre, y estn un formato que llamamos inmaduro, a
la espera. Que este en un estado inmaduro no significa que no sea una clula activa. Cuando madura, decimos que
cambia el fenotipo y migra, adquiere atraccin por los rganos linfoides secundarios. Si hay infeccin, el proceso de
maduracin esta acelerado y no solo madura sino que adems se activa, lo cual est relacionado con la expresin de
molculas coestimulatorias.

TOLERANCIA PERIFRICA: Los linfocitos T vrgenes que abandonan el timo se vuelvan anrgicos si reaccionan con alta
afinidad con MHC-pptidos propios.

Luego de su ingreso al timo los timocitos permanecen all por aprox. una semana donde son expuestos a la seleccin
negativa y completan su maduracin. Estos linfocitos vrgenes abandonan el timo y comienzan a recircular por los
rganos linfoides perifricos. Alguno de estos linfocitos pueden haber escapado a los mecanismos de tolerancia central,
por ejemplo debido a que el antgeno no se expres en las clulas epiteliales de la mdula, en ese caso, estos clones
autoreactivos de linfocitos T vrgenes, normalmente, terminarn siendo desactivados en la periferia a travs de
mecanismos de tolerancia perifrica. Esta ocurrir porque en ausencia de infeccin, algunas de las clulas dendrticas
residentes en los tejidos, abandonan los mismos y acceden a los rganos linfoides secundarios donde llegan expresando
en su MHC pptidos propios derivados del tejido original. Sin embargo, estas clulas dendrticas no provienen de un sitio
de inflamacin y por tanto no han sido activadas para expresar las molculas coestimuladoras B7 (ya sea B7.1 o B7.2) ni
citoquinas como IL12. En estas condiciones, en caso de presentar estos pptidos (prpios) a un linfocito T que los
reconozca, no dan lugar a la activacin del mismo y por el contrario inducen un estado de anergia en el mismo. En
estado anrgico los linfocitos no mueren pero si vuelven a encontrar el antgeno nuevamente, an cuando sea
presentado con coestimulacin (por ej. B7) no se activarn. Por qu simplemente no se eliminan las clulas en lugar de
inducir la anergia? Se piensa que las clulas anrgicas tienen como rol el competir con las clulas autoreactivas cuando
hay presentacin de antgenos propios en un contexto inflamatorio.
La va verde mostrada en la imagen representa la situacin fisiolgica en la cual las DC simplemente maduraron, no hay
infeccin. Cuando llega al ganglio puede ser que por casualidad se encuentre la DC con un linfocito T que reacciona con
algn componente que est mostrando en su MHC. Como no hay infeccin, los pptidos que tiene en MHC la DC son de
origen propio. Esto hace que no solo no se active, sino que adems un linfocito virgen que se encuentra con una DC sin
capacidad coestimuladora (capacidad de tener molculas para el ligando correspondiente, ligando CD28 expresado por
los linfocitos vrgenes) recibe seales de convertirse en una clula anrgica. La clula anrgica sigue reconociendo a sus
ligandos por sus TCR, pero si se vuelve a encontrar con una clula que le presenta el antgeno y que tiene capacidad
coestimuladora, igual no pasa nada, no se activa. Recordar que esto sirve como competencia a otros linfocitos T que
reconocen pptidos propios.

La va roja mostrada en la imagen representa la activacin de los linfocitos T. El tejido se encuentra infectado. La DC
migra desde dicho tejido al ganglio. En esta migracin la DC adquiere capacidad coestimuladora, por eso ahora expresa la
molcula B7 (en naranja en la imagen). Ahora si aparece un linfocito T virgen que viene desde el timo, y encuentra un
ligando ahora si se activa. Al activarse prolifera. Si esta clula vino de un sitio de infeccin el pptido puede ser propio o
de un microorganismo. Es aqu donde las clulas anrgicas pasan a tener sentido.

En condiciones de infeccin, las dendrticas maduran y SE ACTIVAN. Estas clulas dendrticas activadas presentan
capacidad coestimuladora y sern crticas en la activacin de los linfocitos T vrgenes.

La funcin principal de la DC es presentar antgenos a las clulas T vrgenes

Las clulas dendrticas (DC) tienen como funcin principal el muestrear el tejido en el que se encuentra y transportar la
informacin al tejido linfoide circundante. ltimamente, esto permitir en caso de infeccin activar clulas vrgenes en
los tejidos. En el tejido, la clulas dendrticas estn en un estado denominado de inmadurez (que no debe confundirse
con un estado no funcional) por el contrario son clulas activas que muestrean el tejido en una forma intensa,
fagocitando partculas, endocitando molculas, e ingresando por macropinocitosis todo lo que est alrededor. Estas
DC inmaduras, tambin llamadas residentes, tienen una alta expresin de receptores para PAMPs, como dectinas y TLRs,
y receptores para distintas citoquinas inflamatorias y componentes del complemento. Luego de unos das en el tejido, o si
son activadas por seales vinculadas a una infeccin local, entran en un proceso de maduracin en el cual aumentan la
expresin de complejos pptidos-MHC, y cambian su tropismo, abandonando el tejido y migrando hacia los ganglios por
los vasos linfticos aferentes bajo el influjo del gradiente de quimioquinas proveniente del ganglio, que es detectada por
la expresin del receptor CCR7. A esta altura ya han adquirido su forma estrellada, con dendritas. Cuando madura, la DC
deja de hacer macropinocitosis, porque no se busca expresar qu hay en el ganglio, sino que queremos que exprese lo
que haba en el sitio de infeccin del que proviene. Deja de expresar tantos receptores para PAMPs.

La maduracin y migracin de las DC a los ganglios es un proceso constante que no requiere de la presencia de un
proceso infeccioso. Las DC que maduraron en un proceso libre de infeccin, transportarn complejos pptidos-MHC que
representan componentes propios de los tejidos y como comentamos en la lmina anterior, se piensa que ayudan a
mantener la tolerancia a lo propio, al presentar estos antgenos sin coestimulacin. Esta maduracin espontnea no
capacita a la DC para la activacin de los linfocitos T vrgenes; para activar a estos ltimos son necesarios cambios ms
dramticos en la DC que solo ocurren en un ambiente inflamatorio donde ha habido reconocimiento de componentes
microbianos. Bsicamente los cambios son los mismos, salvo que adems de presentar todas las cosas que expresa una
DC madura, expresa adems molculas de B7 y tiene por lo tanto la capacidad de inducir la activacin de linfocitos T.

NOTA: Hay dos tipos principales de clulas dendrticas, convencionales y plasmacitoides. Las primeras, tienen origen
mieloide y son las que tpicamente participan en la activacin de linfocitos T vrgenes, y son a las que nos referimos en
esta lmina. Expresan un gran arreglo de receptores para PAMPs aunque no expresan TLR9. Por otro lado, las
plasmacitoides, de origen linfoide (surgen del progenitor comn con los linfocitos y las NK) funcionan principalmente
como centinelas de la infecciones virales, y expresan principalmente TLR7 y TLR9 que participan en el reconocimiento de
cidos nucleicos. Su activacin da lugar a la secrecin de grandes cantidades de interferones de tipo alfa y beta
favoreciendo en combate de las infecciones virales. No se les reconoce un rol importante en la activacin de linfocitos T.

El reconocimiento de la infeccin convierte a las DC en eficientes activadoras de linfocitos T vrgenes

En el caso de generarse un foco inflamatorio, las DC inmaduras

reciben estmulos que modifican fuertemente su programa de
maduracin. Los estmulos provienen directamente del contacto
con componentes microbianos, lo que ocurre a travs de los
correspondientes receptores para PAMPs (ej. tpico los TLRs, y
tambin los receptores para lectinas de tipo C, como la dectina1) y
tambin el estmulo de interleuquinas inflamatorias que puedan
haber secretado otras clulas inflamatorias como los macrfagos o
clulas epiteliales (por ej. IL-1 y TNFalfa)
Este estmulo produce en la DC inmadura un aumento transitorio
de la fagocitosis que luego se apaga, y una marcada expresin de
molculas del MHC de clase I y II, y muy importante, la expresin
de las molculas coestimulatorias B7-1 y B7-2. Estas molculas (a las cuales a veces nos referimos en forma simplificada y
colectivamente como B7) son crticas para complementar la seal resultante de la unin del complejo MHC-pptido
(sobre-expresado) con el TCR, y tienen como ligando la molcula CD28.
Las clulas que han adquirido este fenotipo se llaman DC maduras
activadas, dado que antes se pensaba que la DC solo maduraban con un
proceso inflamatorio a veces se usa indistintamente el trmino DC
maduras, pero convengamos aqu que la maduracin no necesariamente
lleva a la activacin, la cual como se ha dicho ltimamente requiere del
contacto con microorganismo.

Las DC maduras activadas tienen una alta densidad de expresin de MHC-

pptido, B7 y tropismo por las zonas T del tejido linfoide secundario que
las hace particularmente adecuadas para acceder a los sitios de activacin
de los linfocitos T vrgenes. Veremos que adems de producir su
activacin, las DC activadas pueden influenciar fuertemente el modo en
que se activan los linfocitos T vrgenes.
La activacin de los linfocitos T puede ser iniciada por las DC residentes en el ganglio y es reforzada por las DC
provenientes del sitio de infeccin

Lo que vemos en la imagen son las etapas que siguen en la activacin de los linfocitos T luego de salir del HRV, al ganglio.
Lo primero que llega antes de llegar las DC, es el antgeno y las molculas inflamatorias que se secretaron. Una forma de
empezar la activacin de linfocitos T es a travs de clulas DC que estaban residentes en los rganos linfoides
secundarios, que son estimuladas por los PAMPs ya mencionados que llegan desde el sitio de infeccin y las citoquinas, y
que pueden convertirse ah mismo es clulas presentadora que active al linfocito T. Si hay linfocitos T con especificidad
por los pptidos que expresa se van a activar.
En el ganglio existen adems de las clulas dendrticas (DC) que acceden desde la periferia, una poblacin de DC
inmaduras residentes. Como resultado de la respuesta inmune innata en caso de ocurrir una infeccin, y antes de que las
DC del tejido puedan arribar lo que demora varias horas, comienzan a afluir al ganglio antgeno y detritus proveniente
del patgeno. Estos pueden ser captados por las DC inmaduras residentes (con alta capacidad fagoctica) a la vez que las
mismas son activadas por los ligandos para TLR y citoquinas que llegan del sitio de infeccin. stas DC activadas pueden
comenzar la activacin de los linfocitos T, lo cual se reforzar tras la llegada (8-12 horas ms tarde, proceso
relativamente lento) de las DC maduras que se activaron en el sitio de infeccin y transportan el antgeno en su MHC.
Estas clulas (con borde verde en la figura), vienen desde el sitio de infeccin, ya vienen con el antgeno cargado, ingresan
a la zona T del ganglio (violeta) y se agrupan en torno a las HEV que es el sito de ingreso de los linfocitos T vrgenes, donde
hacen contacto con varios linfocitos T a la vez y por varias horas. Esa activacin sostenida produce la proliferacin de los
linfocitos y su diferenciacin en clulas efectoras que ya sean, migran a la zona de contacto con las clulas B (como
veremos en la prxima clase) o salen a la periferia a los sitios de inflamacin.

Las clulas T se activan por la interaccin con el MHC-pptido y la ayuda de molculas correceptoras.

Tanto para las clulas T CD4

como T CD8, la unin del TCR
con el MHC, conlleva la unin
del correspondiente
correceptor con las regiones
invariantes de los respectivos
MHC de clase I o II. Esta
interaccin es clave para la
activacin del linfocito T que
tendr lugar. Recordar la
importancia de los
correceptores CD8 y CD4 que
interactan con los dominios
constantes del MHC, CD8 con
un MHC-I y CD4 con un MHC-
II. Cul es la importancia de
estos correceptores? Aumenta la avidez de la interaccin, ya que es una interaccin ms. Pero tambin tiene que ver con
el fenmeno en si de activacin, ya que (ver en imagen siguiente que esta solo para CD4 aunque es igual para CD8), la
molcula de CD4 no esta junta al TCR en condiciones normales en el linfocito T virgen. La molcula de CD4 est en una
zona roja en la imagen, llamada lipid raft, mientras que el TCR est en una zona de la membrana ms convencional. Lo
que vemos en el interior celular son una serie de interacciones con molculas adaptadoras sobre sitios de fosforilacin
(quinasas) y esas quinasas estn lejos de los blancos de fosforilacin, ya que el correceptor esta en una zona y el receptor
en otra. Cuando se da la formacin del complejo MHC-pptido-TCR, dicho complejo ternario se aproximan en el espacio,
mediante el movimiento del TCR hacia la zona del lipid raft y quedan en contacto las quinasas con los blancos de
fosforilacin (P en amarillo en la imagen), y esto permite la cascada amplificada con aumento de la fosforilacin, lo cual se
convierte en una seal.
Las clulas T son sensibles a pequeas cantidades de antgeno. Tan pocas como 10 molculas de complejo MHC-pptido
especficas en la superficie de una DC pueden ser capaz de activar una clula T, porque cada una de estas interacciones es
generalmente de alta afinidad. El hecho es notable si se tienen en cuenta que la DC expresa cerca de 1.000.000 de otros
complejos MHC-pptidos. Pero de hecho, se piensa que las interacciones dbiles del TCR con esos complejos (lo cual es el
resultado de la seleccin tmica positiva) agrega un factor ms de estabilizacin conjuntamente con la interaccin
aportada por los correceptores, y otras molculas de adhesin que forman la sinapsis inmunolgica que veremos ms
adelante.
La sealizacin del TCR est basada en los motivos de activacin ricos en Tirosina (ITAM), que son particularmente
numerosos y que se encuentran en las colas citoplasmticas del CDR3 y de las cadenas zeta del complejo TCR. En este
ejemplo, vemos adems que el correceptor CD4 que en reposo se encuentra en una zona de lipid raft en la membrana,
est asociado con una tirosine-kinasa (Lck) que como consecuencia de la unin al pptido-MHC resulta aproximado a las
colas de ITAMs promoviendo su fosforilacin, lo cual recluta una quinasa adicional (ZAP-70), que se asocia con las colas
fosforiladas y es activada. Esta activacin de ZAP-70 es el primer evento de formacin de un importante complejo
proteico que lleva a activacin celular. Este proceso que no veremos en detalle, implica mecanismos de activacin en
cascada, y tambin de inhibicin que controlan la magnitud de la activacin.
Cuando hablamos de activacin, tambin hablamos de B7, y para que se de la activacin (proliferacin y diferenciacin)
tiene que darse, como ya dijimos, la coestimulacin, entonces B7 y CD28 (en el linfocito T) dan una seal, la cual se acopla
a la antedicha y ese conjunto de seales es el que permite la transcripcin de los genes que da lugar a la activacin de los
linfocitos T.
El proceso, no obstante, DEBE complementarse con la sealizacin simultnea que produce la activacin de CD28 por
unin de B7 que tambin conduce a la fosforilacin de ITAMs y el subsiguiente reclutamiento de molculas de
sealizacin intracelular. Este mecanismo culmina con la activacin simultnea de varios factores de transcripcin que
controlan el gen para la secrecin de la IL-2 (el principal factor de proliferacin) y de componentes de su receptor. El
proceso es similar en el caso de la activacin de un linfocito CD8+

Lipid raft: regin de la membrana rica en colesterol, glicofingolpidos, y protenas de membrana, que es altamente
dinmica, y en la cual los componentes son rpidamente intercambiados.

El contacto entre las clulas T y las DC resulta un complejo altamente organizado: la sinapsis inmunolgica

La interaccin que da lugar a la

activacin del linfocito T es
altamente compleja. Si bien no
nos interesa memorizar los
distintos protagonistas de esta
sinapsis inmunolgica, es
importante comprender que
involucra varias molculas
protagonistas. Unas que forman
la zona de contacto ms cercano
entre las membranas (el complejo
de activacin supramolecular
central, c-SMAC) donde se
encuentra el TCR-pptido-MHC,
con el correceptor CD4 y la interaccin CD28-B7, y otra perifrica p-SMAC que contiene la interaccin de las integrinas
LFA-1 con ICAM-1 y receptores como CD45 que si bien no participan en la unin, al alejarse del TCR, permiten la
activacin del linfocito dado que sus cola citoplasmtica tiene un rol inhibitorio respecto a la activacin por las quinasas
como Lck. Molculas como CD45 o integrinas tienden a interferir con la fosforilacin del TCR. Cuando se forma la
interface, estas molculas mencionadas se ubican en una zona especial, quedando la zona del TCR en la parte central, y
estas molculas se ordenan hacia el exterior (ver imagen de la derecha). Esta es otra forma de permitir que a partir de
algunos contactos se genere una amplificacin de la seal.
Como se indicaba en la lmina anterior, a lo mejor solo 10 interacciones bien orientadas de TCR con su MHC especfico
son suficientes para activar una clula.

La amplificacin del nmero de clulas T durante la activacin es

rpida, de gran magnitud y dependiente de la secrecin autcrina de
IL-2

Qu es lo que le pasa a la clula T cuando se activa? IL2 es un factor

de crecimiento de los linfocitos; cuando hay IL2 hay un primer paso
para que los linfocitos proliferen, pero para que la interaccin de la
IL2 (triangulo en imgenes) con su receptor sea eficiente, el receptor
tiene que estar formado por tres subunidades: , , y . En
condiciones normales, el linfocito tiene solo 2 de estas subunidades
expresadas: y , por lo tanto la afinidad es muy baja por la IL2.
Es por esto, que al activarse, la clula T expresa el gen de la IL2 y el de
una subunidad () del receptor para IL2. Las dos cosas pasan a la vez.
El hecho de que la IL2 se secrete a veces permite que se activen otras
clulas que estn participando en la interface con la DC.
La proliferacin de los linfocitos tiene como principal componente la
secrecin autcrina (por la propia clula) de IL-2, la cual ocurre
concomitantemente con la expresin de la cadena alfa del receptor
para esta citoquina, la cual aumenta la afinidad del receptor por la IL-
2, y le permite as responder no solo a la IL-2 secretada en forma
autcrina, sino tambin a la IL-2 secretada por otros linfocitos que
estn proliferando.

La activacin de los linfocitos T

vrgenes genera un altsimo
nmero de clulas efectoras en
un corto lapso de tiempo. Cada
linfocito T CD4 virgen puede en
cuestin de pocos das a 10000
clulas T efectoras y en el caso de
linfocitos T CD8 el nmero puede
ser 5 veces mayor. Estas clulas
ocupan un volumen importante y
esta es la razn por la cual los
ganglios que drenan un sitio de
infeccin muchas veces aparecen
aumentados, duros y notorios.
El control sobre la proliferacin durante la activacin de los linfocitos T est dado por elementos de control positivos
(CD40L) y negativos (CTLA4).

La proliferacin de los linfocitos T durante su activacin es reforzada por un circuito de retroalimentacin debido a la
molcula CD40L (ligando para CD40). Este ligando tiene un papel fundamental para las funciones efectoras que cumplen
los linfocitos una vez que se diferenciaron como se ver ms adelante en el curso, pero en esta etapa, en la cual se
mantiene el contacto DC-linfocito T por algunas horas, la expresin de este ligando permite que se una al CD40 en la DC lo
cual hace que esta exprese una mayor densidad de molculas de B7, que redunda en un mayor estmulo de activacin
para los linfocitos T por esta DC. Si no se contrarresta, este estmulo puede descontrolar la situacin y resultar en una
proliferacin desmedida. La forma de limitarlo es que conjuntamente con el CD40L, el linfocito T activado comienza a
expresar CTLA4 (cytotoxic T lymphocyte antigen 4) una molcula de superficie con alta afinidad por las molculas de B7,
pero que no produce seales de activacin y por tanto funciona bsicamente como un competidor (ventajoso por la alta
afinidad) de CD28. Este mecanismo es sumamente importante, y sus consecuencias se ven claramente en situaciones
experimentales en animales en los que se
ha removido el gen de CTLA4, estos
mueren rpidamente por
linfoproliferacin desmedida acompaada
de enfermedades autoinmunes.
En la imagen vemos interface entre la
clula T y la DC. Antes de la activacin el
linfocito T expresaba CD28 y la DC si
expresaba capacidad coestimulatoria tena
B7, y la CD40. Como resultado de las dos
interacciones de ambos B7 con CD28 hay
una activacin del linfocito, lo cual hace
que exprese la molcula CD40L (ligando
de CD40) en el linfocito T. La interaccin
CD40-CD40L a su vez activa a la DC, la cual
aumenta la expresin de su capacidad
coestimulatoria, por lo tanto hay un
mayor impulso hacia la activacin. Esta
interaccin lleva un tiempo, hasta horas.
Si no hubiera una contra parte, un freno,
sera una estimulacin demasiado fuerte y
es por esto que los linfocitos T expresan
CTLA4 (hay que saberla) la cual es una
molcula que acta como regulador negativo de la proliferacin, entre otras cosas porque compite por unirse a B7 contra
CD28. Adems, la CTLA4 puede enviar seales al linfocito y as reprimir la activacin.
Si se carece del gen CTLA4 se muere tempranamente por linfoproliferacin descontrolada, es decir que ni bien tienen una
infeccin los linfocitos T comienzan a proliferar y nunca frenan de hacerlo.

La idea que debe quedar es que hay una serie de mecanismos que refuerzan la activacin pero tambin aparecen
mecanismos represores de ella.

Como resultado de la sinapsis inmunolgica los linfocitos T vrgenes reciben tres seales de la clula presentadora

Como resultado de la sinapsis inmunolgica los linfocitos T reciben tres

seales de la clula presentadora. Las dos primeras ya las hemos discutido
e implican la activacin inicial por el TCR-pptido-MHC que es necesaria
pero no suficiente. Para continuar con el programa de activacin, se
necesita de la presencia de molculas B7 que estimule el receptor CD28
para que la clula reciba seales de sobrevivencia y proliferacin, y como
vimos la expresin de la molcula reguladora B7 en la clula dendrtica
madura activada es una etapa clave. Finalmente hay una 3er seal que
instruye al linfocito sobre distintas rutas de diferenciacin para que termine
adoptando distintas funciones efectoras (por ejemplo si ser una clula T
CD4 TH1, TH2 o TH17). Esta tercer seal est dada generalmente pero no
exclusivamente por citoquinas secretadas por la clula presentadora.
Luego de proliferar se diferencian. Obtienen un fenotipo distinto. Cmo se
da esa diferenciacin y por qu esta determinada? La tercer seal como
consecuencia de la sinapsis es la que determina hacia dnde se diferencia el
linfocito T. Esa seal proviene del sitio de infeccin, de donde vienen las DC,
antgeno y adems citoquinas. Ese conjunto de citoquinas que fueron
secretadas por las DC o alguna otra clula, son las que terminan
condicionando la diferenciacin de los linfocitos T.

Una vez activados, la diferenciacin de los linfocitos T CD4 est fuertemente determinada por las DC y las citoquinas que
llegan al sitio de infeccin.

La diferenciacin de los linfocitos T que proliferan en el tejido linfoide que drena el sitio de infeccin, est fuertemente
determinada por la informacin que llega a travs del vaso linftico aferente. A travs del mismo adems del antgeno,
llegarn clulas dendrticas que maduraron, se activaron y transportan complejos del MHC con pptidos del patgeno,
llegarn tambin citoquinas y otras molculas generadas en el sitio de inflamacin. La suma de esos componentes
genera en el ganglio un microambiente que determina la va de diferenciacin de los linfocitos T durante su activacin y
proliferacin.

Los cambios en la expresin de los genes de las citoquinas que acompaan la diferenciacin de las clulas T en clulas
efectoras, son el reflejo del estmulo recibido por las citoquinas secretadas por las DC maduras que se activaron en el
tejido, y otras clulas (como macrfagos, mastocitos, clulas NK y NKT) que tambin fueron activadas por el patgeno.
Dado que los distintos patgenos tendrn distintos PAMPs, el perfil de citoquinas que secretaran estas clulas va a estar
afectado por los mismos y por las caractersticas del tejido donde se da la respuesta. En otras palabras, la respuesta
innata contra distintos patgenos activa las DC y otras clulas en forma distinta, y esto se transmite en la programacin
de la diferenciacin de los linfocitos T durante su activacin, lo que los capacita para combatir especficamente al
patgeno en cuestin. Otros factores que parece influir en el proceso de diferenciacin, es la densidad de complejos
TCR-pptido-MHC y la intensidad de la coestimulacin.
 Por ejemplo, la activacin de
clulas NK por una infeccin local o
por la secrecin de IL-12 por la DC,
hace que la NK secreten INF, el
cual a acta sobre los linfocitos T
que estn siendo activados a travs
de su TCR promoviendo la
activacin del factor de
transcripcin T-bet que es esencial
para la diferenciacin a TH1 y
hacer que estas clulas respondan
a la secrecin de IL-12. Para que se
d la activacin de linfocitos que
terminan con un fenotipo TH1
tiene que haber contacto MHC-
pptido-TRC, tiene que haber
coestimulacin de B7 pero si adems la DC adquiri un perfil que secreta IL-12 que puede interactuar con una clula NK
que esta por ah, y a su vez dicha clula NK gracias a este estmulo secreta IF, el cual estimula a la DC para producir ms
IL-12, la suma de estas dos citoquinas hace que los linfocitos se diferencien en TH1. Tpicamente, los TH1 expresan un
factor de transcripcin que se llama T-bet. No es tan importante el nombre, pero si es importante saber que hay un factor
de transcripcin que caracteriza cada poblacin.
Los otros caminos de diferenciacin no son tan bien comprendidos, por ejemplo en el caso de la diferenciacin a TH2, se
ha visto que in vitro la IL-4 es un poderoso factor de diferenciacin, que promueve la expresin del factor de transcripcin
GATA-3 caracterstico del desarrollo a TH2, siendo los mastocitos, eosinfilos, basfilos y clulas NKT las posibles fuentes
de esta citoquina in vivo. Otros factores que han sido asociado con la diferenciacin a TH2 incluyen la TSLP (thymic
stromal lymphopoietin) una protena producida por las clulas epiteliales durante la inflamacin, y la IL-25, pero al igual
que con la IL-4, las forma en que actan no es completamente entendida.
En el caso de las clulas TH17 y las Treg, los detalles son menos claros, en parte porque estas clulas se han descubierto
ms recientemente. Aparentemente la diferenciacin de ambas es promovida por el TGF (citoquina tpicamente anti-
inflamatoria), pero las TH17 se diferencian en presencia de IL-6 (particularmente cuando IL-4 e INF estn ausentes) y
una vez diferenciadas requieren de la IL-23 para su mantenimiento. El factor de transcripcin caracterstico de la TH17 es
el ROR mientras que el de las clulas reguladoras el FoxP3.

La activacin de las clulas T CD4 da lugar a distintas poblaciones de clulas efectoras

Durante su proliferacin las clulas T CD4 o las TC8 se

dividen a una alta velocidad (cada 6-8 h) y la
cromatina es modificada para activar la expresin de
determinados grupos de citoquinas y/o reprimir la
expresin de otros. Durante el tiempo que la clulas T
completan su diferenciacin, estos cambios de la
cromatina son estabilizados, de forma que una futura
activacin de la clula T efectora dar lugar a la
expresin del conjunto de citoquinas caracterstico.
Ese patrn de citoquinas sirve para definir distintas
poblaciones de linfocitos T efectores, y determina el
tipo de inmunidad mediada por los distintos tipos de
linfocitos T efectores. As, por ejemplo, la secrecin de
IFN por las clulas T TH1 coordina la respuesta
inmune que facilita la destruccin de varios tipos de
patgenos, como muchos virus, bacterias y
protozoarios , al activar macrfagos, clulas NK, y
linfocitos T CD8, y colaborar con las clulas B vrgenes
para que estas produzcan subclases de anticuerpos
como IgG1 e igG3. Por su lado las linfocitos T TH2, que
caractersticamente secretan IL-4, IL-5 e IL-13,
coordinan la accin de eosinfilos, basfilos y
mastocitos, que tpicamente actan contra gusanos
parsitos y larvas de insectos en sitios epiteliales, a la
vez que aumenta las secreciones mucosas y favorece
la produccin de IgE. Los linfocitos T TH17, son un grupo de caracterizacin reciente que se tpicamente secreta
interleukinas de la familia de IL-17. Estas clulas actan rpidamente al inicio de la respuesta adaptativa y promueven la
secrecin por parte clulas del estrma, epitelio o macrfagos de IL-6, quemoquinas inflamatorias y factores de
crecimiento, que estimulan la produccin y reclutamiento agudo de neutrfilos que actan rpidamente fagocitando los
patgenos en el sitio de infeccin. Luego las citoquinas secretadas por la polarizacin de una respuesta hacia TH1 o TH2
tiende a debilitar, y sustituir esta respuesta inicial de clulas TH17 que es bastante agresiva. De hecho se ha visto una
fuerte conexin entre respuestas TH17 sostenidas y procesos inflamatorios crnicos, especialmente en autoinmunidad y
asma. Finalmente otro grupo importante hacia el cual pueden diferenciarse los linfocitos T CD4 es hacia clulas
reguladoras Treg como hemos discutido en la clase anterior.

La mayora de las clulas T efectoras se dirigen hacia en tejido perifrico, y se acumulan en los sitios de infeccin donde
estarn prontas para actuar
Otro importante cambio que ocurren durante la diferenciacin de los linfocitos T vrgenes a linfocitos T efectores, es el
relativo a los receptores de superficies para quemoquinas (cambia por tanto el tipo de molculas que determinaran su
atraccin) as como otros receptores de superficie que le permiten interactuar con las molculas de la vasculatura, y por
tanto abandonar los vasos sanguneos en los sitios de inflamacin. Es as que los linfocitos T efectores expresan
selectina-P, que a diferencia de la selectina-L reconoce azcares presentes en la vasculatura perifrica y no en los rganos
linfoides secundarios. En relacin a los receptores para citoquinas, estos pueden variar segn el sitio y condiciones en
que se activ el linfocito. Por ejemplo, si se trata de linfocitos T colaboradores que activarn clulas B, entonces expresan
CXCR5 que reconoce quemoquinas caractersticas de la zona folicular favoreciendo en encuentro con la poblacin B en el
propio ganglio. Mientras que los linfocitos T que colaborarn con macrfagos o las clulas T citotxicas (CD8) presentarn
receptores para quemoquinas caractersticas de tejidos como la piel, las mucosas o los sitios de inflamacin.

Durante la diferenciacin de los linfocitos T se generan clulas efectoras y dos tipos de clulas de memoria

Como resultado de la activacin de los linfocitos durante la respuesta inmune, se generan adems de los linfocitos
efectores, que actuarn inmediatamente contra el proceso infeccioso en curso, dos tipos de clulas de memoria: las
clulas T de memoria efectoras y las clulas T de memoria central. Las primeras son clulas con un fenotipo similar al de
las clulas efectoras, que tienen tropismo por los tejidos perifricos como piel y mucosas, o sitios de inflamacin, y que en
caso de una infeccin recurrente pueden actuar rpidamente, reprogramando su estado y activndose para actuar como
linfocitos efectores. Las clulas T de memoria central en cambio, no expresan un fenotipo efector y tienen molculas de
adhesin y receptores de quemoquinas que las confinan en el tejido linfoide secundario. Sin embargo ante el encuentro
con el antgeno (como ocurrira en un ganglio que drena un sitio de infeccin) pueden se activadas por la presentacin,
proliferando y diferencindose en una poblacin efectora, y consecuentemente cambiando su patrn de migracin. Se
parecen ms a un linfocito T virgen, salvo que estas clulas T de memoria tienen un umbral ms bajo de activacin, es
decir que se pueden activar ms fcilmente. Adems ahora estn en mayor nmero que cuando eran linfocitos T vrgenes,
y tienen afinidad por los ganglios, ya que estas clulas, en el caso de haber una nueva infeccin, se van a tener que activar
y la activacin ocurre siempre en el ganglio. En este proceso el patrn de citoquinas finales que secretar ser similar al
de los linfocitos efectores generados en el primer contacto con el antgeno aunque se ha observado cierta flexibilidad.
Como se notar las clulas T de memoria central no pueden actuar tan rpidamente, porque necesitan proliferar y
diferenciarse, pero cuando estn listas actan en gran nmero. Entre tanto, las clulas T de memoria efectoras,
complementan a las anteriores al actan rpidamente, aunque no se multiplican y por tanto su eficacia depende del
nmero residual disponible.
Los linfocitos vrgenes son de larga vida, pero las clulas efectoras activadas, como tienen toda la maquinaria de
destruccin, siempre son de corta vida. Las clulas de memoria tienen mayor vida media. Las clulas T de memoria
(efectoras o centrales) persisten por mucho tiempo mientras que las efectoras no tanto.
La memoria T es particularmente importante para la inmunidad a virus latentes. Estos son por ejemplo el virus del
herpes, el citomegalovirus, y el virus de Epstein-Bar que luego de picos de reproduccin que es contenida por la respuesta
inmune, se mantienen en el interior de las clulas infectadas por mucho tiempo. Ante una recurrencia, el virus que sale a
infectar nuevas clulas puede ser contenido por la existencia de anticuerpos especficos que los neutralicen, sin embargo,
durante el perodo de latencia, algunos virus pueden mutar durante su reproduccin controlada en el interior celular.
Estas mutaciones pueden escapar la respuesta de anticuerpos que est dirigida contra la superficie de los componentes
virales, y es ah que la disponibilidad de clulas T citotxicas de memoria pueden impedir la expasin de una nueva
infeccin al destruir rpidamente las clulas reinfectadas. Ntese que las mutaciones pueden variar los epitopes B ms
fcilmente que los T. Estos ltimos pueden provenir de regiones del corte de la protena donde las mutaciones son
menos toleradas dado que pueden fcilmente afectar el plegamiento y por tanto la funcionalidad de la protena en
cuestin.
A diferencia de lo que pasa con los anticuerpos, cuando el virus esta en el cuerpo, hace mutaciones y vara su
composicin de eptope. Imaginemos una protena por ejemplo de la cpside del virus Qu tan difcil es variar un epitope
B respecto a un eptope T? Si hablamos de protenas, los eptopes B van a encontrarse en el exterior de la protena, ya
que el anticuerpo esta preparado para reconocer lo que se ve. Sin embargo, los epitopes T pueden ser de cualquier
lado, ya que dentro de la clula es procesada la protena, se generan pptidos y es esta parte la que es presentada a la
clula T, o sea que el pptido que reconoce sta puede derivar de cualquier parte. Desde el punto de vista de un
microorganismo es ms fcil mutar cosas que estn en la superficie, que cambiar la estructura empaquetada de la
protena en su interior, ya que el interior de una protena est perfectamente adaptado.

Los linfocitos T
Como una forma de regulacin de la respuesta inmune, durante su diferenciacin, los linfocitos T efectores son
programados para morir (activation-induced cell death), y la mayora muere por apoptosis 15 das despus de ser
activados, incluso aunque la infeccin no se haya contenido. La vida media de los linfocitos T efectores est influida por
estmulos internos que pueden acelerar o demorar el programa de muerte por apoptosis, pero en todos los casos la
poblacin de clulas T tiene un pico a los pocos das de comenzada la infeccin y luego decaen hasta llegar a quedar un
10% bsicamente compuesta por clulas de memoria especficas. La supervivencia de estas ltimas est determinada por
el estmulo recibido a travs de la expresin del receptor para la IL-7R y en el caso de los linfocitos T citotxicos de
memoria, por el estmulo adicional de la IL-15.
En la imagen vemos una etapa de activacin en la cual los nmeros aumentan mucho muy rpidamente (en comparacin
con las otras etapas). Esta etapa no puede sostenerse infinitamente. En algunos casos, la poblacin se expande mucho y
la cantidad de clulas T circulando es muy grande. Esto no se puede mantener, por lo tanto tienen que morirse cuando el
patgeno disminuye.
Tema 9: Activacin de clulas B y respuesta de anticuerpos
Clase 11, 30/10/2013

Los anticuerpos tienen un rol crtico en la prevencin y combate de la infeccin

Dentro de la respuesta adaptativa, la

inmunidad humoral o respuesta de
anticuerpos tienen un papel
complementario a la inmunidad celular, y
los anticuerpos cumplen funciones
esenciales en la proteccin contra
patgenos. En individuos en los cuales
por alguna razn la produccin de
anticuerpos est afectada, la
susceptibilidad a la infecciones aumenta
enormemente y su sobrevivencia
depende del suministro externo de
grandes cantidades de inmunoglobulinas
obtenida de donantes. Por ejemplo en
casos graves de agamaglobulinemia
(ausencia de anticuerpos) deben
inyectarse semanalmente 10 g de inmunoglobulinas purificadas de donantes sanos. Los anticuerpos pueden neutralizar al
patgeno impidiendo su interaccin con receptores celulares por eje., favorecer su fagocitosis al opsonizarlo, producir la
activacin del complemento en su superficie y por tanto aumentar su opsonizacin por deposicin de C3b y la posible
lisis por formacin de poros en la membrana (complejo MAC), o pueden reclutar clulas citotxicas que liberan
componentes con actividad citoltica (citotoxicidad mediada por anticuerpos).

Las distintas clases de anticuerpos tienen distinta distribucin corporal y variada funcionalidad
Como hemos visto anteriormente, las funciones efectoras de los anticuerpos estn determinadas por el tipo o clase de
anticuerpo que se produce. Hay cinco clases de inmunoglobulinas (IgM, IgD, IgG, IgA and IgE) que difieren en el tipo de
cadena pesada que las componen, lo que resulta en importantes diferencias estructurales, como flexibilidad, resistencia a
la protelisis y grado de oligomerizacin (pentamrica en el caso de IgM o dimrica en el caso de la IgA secretada). Una
de las mayores diferencias que determina el tipo de cadena que compone a los anticuerpos es su capacidad de
reaccionar con distintos receptores para Fc. La expresin de estos receptores vara en las distintas clulas del sistema
inmune, lo que hace que distintas clases (incluso subclases) de anticuerpos tengan distintas funciones efectoras. Por
ejemplo en los neutrfilos existen receptores para Fc con alta afinidad por la regin Fc de IgG1 e IgG3 y por tanto estas
subclases de inmunoglobulinas son eficientes opsoninas. Por otro lado, en los eosinfilos existen receptores con afinidad
por la regin Fc de la IgE y de esta forma, las IgE especficas para antgenos de superficie de larvas de insectos o helmintos
reclutan eosinfilos que descargan sus compuestos txicos sobre la superficie de estos agresores. Las IgG1 y 3 (as como
la IgM) tambin tienen en sus Fc regiones de unin al componente C1q del complemento, de las cuales carece la IgE o
IgG4, por tanto estas ltimas son incapaces de activar el complemento.
En esta clase veremos qu tipo de clulas producen estos anticuerpos, cmo se activan dependiendo del tipo de
antgenos que presenta el patgeno y cmo esta activacin vara a lo largo de la respuesta.

La produccin de IgG, IgA e IgM incrementa lentamente hasta la adultez y luego permanece estable
El conjunto de anticuerpos presentes en la sangre es el resultado de la secrecin de distintas clulas y vara con la edad.
En el recin nacido, los anticuerpos presentes son bsicamente las inmunoglobulinas IgG maternas transferidas a travs
de la placenta, en un proceso mediado por un receptor para Fc particular, el receptor FcRn, que tiene afinidad por un
gran rango de subclases de IgGs. Luego comienza la secrecin de anticuerpos naturales, IgMs (independientemente de
la estimulacin por antgeno) a partir de las clulas B1 que se generaron durante el desarrollo fetal, y la produccin
gradual de las distintas subclases hasta alcanzar concentraciones estables durante la adultez.

La proteccin conferida por los anticuerpos transferidos durante la preez y la lactancia es extraordinaria
Los anticuerpos transferidos de la madre al bebe o feto en los primeros meses de vida, cuando el sistema inmune an no
est en condiciones de producir sus propios anticuerpos son de extrema importancia. Hay dos vas a travs de las cuales
la madre le puede conferir anticuerpos a su bebe: la etapa fetal ya que en la placenta hay un receptor que capta las IgG
maternas y se las transfiere hacia la circulacin del feto; y la etapa de lactancia ya que el recin nacido puede captar los
anticuerpos que hay en la leche materna.
Hay nios que naces con una deficiencia congnita por la cual no pueden generar linfocitos T ni B, y por lo tanto no tienen
clulas que puedan producir anticuerpos. Es por esto que se encuentran aislado de todo lo que pueda ser un patgeno
potencial. A estos nios, tan susceptibles a una infeccin, se les detecta la enfermedad luego del perodo de lactancia,
debido a que antes ellos reciban anticuerpos de la madre.
Lo que se hace en estos casos, es un trasplante de mdula. La mdula proviene de un donante compatible. Pero como el
nio no tiene sistema inmune no ataca a las clulas inyectadas. Como en la mdula hay clulas madre se puede generar
un sistema inmune. Si bien el nio no tiene sistema inmune para atacar a estas clulas, igual se necesita compatibilidad ya
que lo que podra ocurrir es que el trasplante ataque al receptor.

Distintos tipos de linfocitos B secretan los anticuerpos que dan lugar a la respuesta inmune humoral

Como hemos visto anteriormente hay tres tipos principales de clulas B.

Por un lado, se encuentran los linfocitos B foliculares o B2, que son los tpicos representantes de la respuesta humoral,
que necesitan la colaboracin de los linfocitos T para activarse y dan lugar respuestas de anticuerpos de alta afinidad.
Luego de su activacin en los rganos linfoides secundarios proliferan y se diferencian dando lugar a clulas
especializadas en la secrecin de anticuerpos (plasmocitos o clulas plasmticas) as como una poblacin paralela de
clulas B de memoria. Durante el proceso de generacin de estas clulas a partir de los linfocitos B vrgenes foliculares,
se producen cambios en los genes de las inmunoglobulinas que dan lugar a la maduracin de la afinidad y el cambio de
clase de los anticuerpos.
Adems de los linfocitos B foliculares, se producen otros dos tipos de clulas B, las clulas B1 y las clulas B de la zona
marginal (B ZM). Estos dos decimos que estn a medio camino entre la inmunidad innata y la inmunidad adaptativa. A
diferencia de los linfocitos B foliculares, estas dos poblaciones de clulas tienen una distribucin corporal ms restringida
y su repertorio de reconocimiento es menos variado, estando especializado en el reconocimiento de componentes
comunes que se encuentran distribuidos ampliamente entre los patgenos, y representan por tanto un eslabn
intermedio entre la respuesta inmune innata y adaptativa. Sus condiciones de activacin son diferentes, y puede
realizarse en ausencia de colaboracin de las clulas T, T independientes.
Algunas de estas clulas no son de tan corta vida, como los linfocitos B1, que se autorenuevan en la periferia. Sin
embargo, los B2 (linfocitos B foliculares) si no encuentran antgenos, en unos das muere.

Linfocitos B1: Estas clulas se desarrollan en la etapa fetal (en el hgado) o en los primeros meses de vida y esta primer
poblacin se auto-renueva en los sitios que pueblan (peritoneo y cavidad pleural principalmente) a lo largo de la vida del
individuo. Estas clulas secretan los denominados anticuerpos naturales. Estos anticuerpos presentan relativamente poca
diversidad, particularmente en la cadena pesada, como resultado de que usan solos los segmentos gnicos V ms
cercanos a los segmentos D, y de que no expresan la enzima Terminal Deoxinucleotidil Transferasa por lo cual tienen
adems muy restringida diversidad de unin de segmentos. Los segmentos gnicos V adyacentes a los D han sido
seleccionados evolutivamente para reconocer epitopes presentes en patgenos comunes, y por tanto estos anticuerpos
naturales presentan una proteccin cuasi innata contra los mismos. La secrecin de anticuerpos naturales,
aparentemente (existe cierta controversia), se da sin contacto previo con el antgeno. Adems de ser la fuente de los
anticuerpos naturales, las clulas B1 pueden ser activadas especficamente por algunos antgenos con epitopes
repetitivos (antgenos T independientes), dando lugar a la rpida produccin de IgM, IgA y IgG3 en ratn (IgM, IgA y
probablemente IgG2 en humanos) que cumplen un rol fundamental en la contencin de muchas infecciones bacterianas y
virales. Hasta el 40% de la secrecin de IgA en mucosas depende de linfocitos B1. Las clulas B1 responden tambin
fuertemente a la estimulacin por receptores TLRs. En las clulas B1 no hay diferenciacin hacia clulas de memoria.

Linfocitos B MZ: Los linfocitos B de la zona marginal (ZM) son un tipo especializado de clulas B que se encuentran en la
ZM del bazo en donde tienen un intenso contacto con la circulacin sangunea. Esta ubicacin y su fenotipo, les permite
responder rpidamente contra agentes infecciosos que puedan aparecer en sangre. Los linfocitos B MZ son responsables
de la produccin T independiente de anticuerpos IgM y parcialmente IgG3 en ratn (probablemente IgG2 en humanos),
contra polisacridos de la cpsula bacteriana de distintos patgenos. Dado que estas clulas, a diferencia de las B1, son
escasas hasta los 1 o 2 aos de edad, los infantes responden pobremente a las vacunas contra polisacridos y es por esta
razn que se han introducido vacunas conjugadas que permiten estimular los linfocitos B foliculares a travs de una
respuesta T dependiente.
Adems de esta tpica respuesta T independiente, la fuerte estimulacin por el antgeno, o la co-estimulacin por PAMPS
a travs de los TLRs, hace que las clulas B MZ expresen B7 y migren a las zonas T del bazo. En caso de que el antgeno
reconocido posea epitopes T, puede darse entonces una respuesta T dependiente con cambio de clase y parcial
maduracin de la afinidad (las clulas B MZ con alta expresin de B7 pueden estimular linfocitos T vrgenes en el bazo).
Este proceso es muy rpido y puede ocurrir a las pocas horas de producida la estimulacin inicial de las clulas B MZ

El splicing alternativo permite la transicin entre la forma de membrana (BCR) y la forma secretada de los anticuerpos
La transicin de BCR a anticuerpo secretado marca una etapa clave en el proceso de transformacin de una clula B
virgen (o de memoria) a clulas secretoras de anticuerpos (clulas plasmticas), en las cuales la maquinaria de la clula
est dedicada a la produccin de enormes cantidades de anticuerpo. En la transicin a clula plasmtica, la regin C
terminal de la cadena pesada de las inmunoglobulinas cambia. Mientras que en el BCR la regin transmembrana que
ancla la cadena pesada se genera por splicing del transcripto primario de RNA, que permite conectar los segmentos
gnicos correspondientes, en la forma secretada la transcripcin finaliza en el intrn que est entre el primer sitio de
poliadenilacin (pA1) y la regin transmembrana.
Los antgenos que estuvieron expuestos a la accin del complemento pueden favorecer en inicio de la activacin de los
linfocitos B

As como la seal del TCR es reforzada por

los coestimuladores CD4 o CD8, la seal
producida por el BCR puede reforzarse por
la coestimulacin de otros receptores. Eso
ocurre por ejemplo cuando el antgeno se
encuentra opsonizado por componentes del
complemento. Esta es una situacin comn,
dado que el antgeno que llega al ganglio ha
estado expuesto a la actividad del
complemento en el sitio de infeccin. En
esos casos, adems de unirse por el eptope
especfico al BCR, el antgeno puede unirse
a travs de el fragmento C3d (uno de los
fragmentos que se generan a partir de C3) al
receptor CR2. El receptor CR2 a su vez
forma un complejo con otras molculas,
CD19 y CD81, que participan en la
sealizacin como se muestra en figura.
Esta forma de generar la primer seal no requiere que el antgeno tenga mltiples copias del eptope que puedan
entrecruzar el receptor. Este es el caso de la muchas toxinas bacterianas que son protenas con eptopes nicos, y que al
estar opsonizadas pueden iniciar la activacin de las clulas B. Tambin es un importante mecanismo para asegurar que el
antgeno proviene de un sitio de infeccin (y por esta razn se encuentra opsonizado) y de esta forma evitar la activacin
por antgenos propios.
Cmo se activa un linfocito B? Lo primero que tiene que ocurrir siempre es que tiene que haber interaccin con el
antgeno (mostrado en rojo en la imagen). Uno de los disparadores es el entrecruzamiento entre los receptores del
linfocito.
En la imagen vemos que por uno de los varios epitopes del antgeno el anticuerpo 1 lo reconoce y otro anticuerpo (2) lo
reconoce por otro epitope, le cual produce el acercamiento de los dos receptores. Las lneas rojas representan la zona del
lipid raft vista la clase pasada. Son los dos epitopes mencionados el mismo epitope? Si, porque esta en la misma clula
y todos los BCR que hay sobre la clula B van a reconocer a un mismo epitope.
Qu pasa cuando hay un antgeno que no tiene eptopes repetidos? (ver imagen de la derecha) En este caso, aunque no
hay un entrecruzamiento, puede generarse el equivalente a ste con receptores que hay en los linfocitos T para
compuestos del complemento. Es tan fcil que un antgeno este conjugado con componentes del complemento? Si,
porque el antgeno viene de una zona de inflamacin y por lo tanto esta conjugado o opsonizado por molculas del
complemento.

La respuesta de anticuerpos se inicia cuando las clulas B que unen el antgeno son activadas:
a) directamente por ciertos antgenos microbianos
b) por la interaccin con clulas T

La activacin de los linfocitos B vrgenes

comienza con las seal generada por la
unin del antgeno, la cual normalmente al
entrecruzar el receptor produce su
migracin a la zona de lipid raft donde
existen los elementos de activacin
(quinasas). De esta forma se produce una
primer seal al promoverse la fosforilacin
de las colas citoplasmticas de los
correceptores Ig e Ig que contienen los
motivos ITAM (Immunorreceptor Tyrosine-
based Activation Motif).
Cuando esta seal es suficientemente
potente, la clula B puede activarse en
forma T independiente, ya sea
directamente por el entrecruzamiento de
un gran nmero de BCRs, o por contacto
adicional con receptores de patrones
asociados a patgenos, que generen una segunda seal. En otros casos, respuesta T dependiente, la segunda seal
proviene de la colaboracin con una clula T a la cual la clula B le presenta pptidos derivados del antgeno proteico.
La primera seal para la activacin del linfocito B vendra a ser las quinasas aproximadas al sitio de fosforilacin. La
segunda seal puede estar dada segn el tipo de activacin que se va a tener. Hay dos vas:
Si la respuesta es T independiente, la segunda seal est dada por que el antgeno tiene motivos repetidos de PAMPs
porque hace un entrecruzamiento muy poderoso de de varios BCR (ah sera como primer y segunda seal a la vez). Son
sobre todo los B1 y los BZM a veces.
Si la respuesta es T dependiente, la segunda seal viene dada gracias a la clula T. Cuando el linfocito B se une al
antgeno ocurre la primera seal. El antgeno es endocitado. Los pptidos que derivan de este antgeno van con el MHC-II
hacia la superficie y convocan la ayuda de una clula T colaboradora que reconoce por el TCR el complejo pptido-MHC y
les da el estimulo que llamamos segunda seal.

La proteccin que proveen los anticuerpos es preexistente e inducida

Hay cuatro tipos de respuestas de anticuerpos que proveen proteccin.
La primera, es la produccin basal de anticuerpos naturales, por las clulas B1. Se producen an sin antgeno (ver
experimento que sigue). Como se ha visto, estas clulas no introducen variabilidad de unin durante la recombinacin
somtica y utilizan los primeros segmentos gnicos V (uso restringido de segmentos gnicos, no recombinan con
cualquiera), que han sido seleccionados evolutivamente para el reconocimiento de patgenos comunes. Estos
anticuerpos constituyen la mayora de las IgM circulantes y su secrecin es antgeno independiente.

En ratones criados en ausencia de

microorganismos, los niveles de IgM son similares
a la de los ratones que si tienen contacto con
microorganismos, sin embargo la sangre de los
primeros, prcticamente carece de IgG e IgA.
Los anticuerpos naturales poseen una tendencia a
la reactividad cruzada con varios antgenos, y por
tanto cubre un amplio espectro de especificidades
en conjunto. De esta forma son una importante
lnea de defensa que permite una rpida respuesta
contra patgenos que no han sido encontrados
previamente. Aunque esta respuesta tiende a ser
de baja afinidad, la alta valencia de los mismos
permite que acten como un mecanismo rpido, y
por tanto clave para la contencin de la infeccin
al comienzo y hasta tanto no se desarrolle la
respuesta inmune adaptativa.

Respecto a las respuestas inducidas por el

antgeno, la ms rpida se da por la activacin, sin
participacin de clulas T, de los linfocitos B1 y las
clulas B de la zona marginal. Estos anticuerpos
empiezan a aparecen a las 48 h dando lugar a la
respuesta de anticuerpos T independiente, y si
bien se caracterizan por ser IgMs, tambin pueden
producir IgA secretora. Esta corresponde a la
grfica roja.
Luego de la respuesta de anticuerpos naturales y
las respuestas T independientes de las clulas B1 y
B ZM, aparece una segunda respuesta inducida
por el antgeno que es rpida y da lugar a la
secrecin de IgMs en forma dependiente de la
colaboracin con clulas T. En esta respuesta
participan las clulas B ZM y las clulas B
foliculares, y requiere de la expansin de los clones de clulas B y T especficos, pero es rpida y provee un importante
suministro de anticuerpos, sobre todo IgMs, a los 3-4 das de la infeccin. Todava no hay un cambio de clase en los
anticuerpos. Esta corresponde a la grfica verde
Estos dos tipos de respuestas, as como los anticuerpos naturales, son fundamentalmente IgMs y tienen normalmente
baja afinidad (que se compensa en parte por la multivalencia de las IgM: avidez). En ambos casos son generadas por
estructuras repetitivas como las cpsides virales o superficies de bacterias que producen un importante entrecruzamiento
del BCR de las respectivas clulas, y de esta forma su activacin. Justamente estas estructuras repetitivas, son
posteriormente el blanco de los anticuerpos secretados y, como ya hemos visto, a pesar de que su afinidad es baja, la
unin de varios de los sitios de unin de estas IgMs da uniones de alta avidez. Esta respuesta no genera memoria.

El tercer tipo de respuesta inducida por el antgeno es la que ocurre en los centros germinales con la participacin de las
clulas B foliculares y la colaboracin de los linfocitos T. Este componente de la respuesta inmune humoral toma entre
una y tres semanas para desarrollarse completamente, pero produce distintas clases de inmunoglobulinas, con mucha
mayor afinidad por el antgeno y genera clulas B de memoria. Adems de estas clulas de memoria que en el futuro se
activarn rpidamente si vuelve a ingresar el mismo patgeno, las clulas que se diferenciaron en los centros germinales
para producir estos anticuerpos son clulas plasmticas de larga vida, que continan secretando anticuerpos por aos, y
que como tal confieren una proteccin inmediatamente disponible contra el mismo patgeno, por largos perodos. Esta
respuesta si es con cambio de clase. Esta corresponde a la grfica azul.

RESPUESTA T INDEPENDIENTE

La mayora de los patgenos presentan eptopes con mltiples copias que posibilitan la activacin T independiente de las
clulas B
La estructura repetitiva que presenta la superficie de la mayora de los patgenos, es un elemento que aparece
recurrentemente en la activacin de distintos mecanismos que ayudan a desarrollar una respuesta inmune contra los
mismos. Ejemplos de esto son, la activacin del complemento, la fagocitosis, etc. Esta multivalencia permite la activacin
directa de las clulas B, al dar lugar a un poderoso entrecruzamiento de los BCR de las mismas. Esta activacin no
necesita de la colaboracin con las clulas T y los antgenos que pueden activar los linfocitos B de esta forma se
denominan antgenos T independientes. (En el libro Janeway lo llaman antgenos timo independientes)
Todos los microorganismos pueden dar lugar a respuestas T independientes. Por eso veamos en la grfica anterior que
tpicamente en una respuesta contra algn patgeno, lo primero que aparece es una respuesta del tipo T independiente.

La respuesta de anticuerpos T independientes es crtica contra un importante grupo de patgenos y puede ser de dos
tipos

Los antgenos T
independientes caen
en dos clases que
activan las clulas B
por dos mecanismos
diferentes:
Por un lado, los
antgenos T
independientes de
tipo 1 poseen la
capacidad intrnseca
de causar la divisin
celular de las clulas
B (mitgenos). Los
antgenos TI-1 tienen
adems de su eptope
un PAMP.
A alta concentracin pueden inducir la proliferacin policlonal de las clulas B, independientemente de su especificidad.
Se dice que son, en este caso, mitognicos, ya que estimulan a todos los clones de los linfocitos B. Un ejemplo de un
antgeno de este tipo es el lipopolisacrido (LPS) que se une a CD14, que entonces se une al TLR4.

Sin embargo, a bajas concentraciones, como las que ocurren al principio de una infeccin, el LPS solo se une a las clulas B
con la especificidad adecuada y las activa. Cuando el antgeno TI-1 est en baja concentracin es captado sobre todo
cuando adems de la interaccin con el receptor para PAMP est la interaccin con el BCR.

Concluimos que la activacin de linfocitos B por antgenos TI-1 en alta concentracin no es muy til, ya que se producen
anticuerpos contra cualquier cosa, sin especificidad.
 Por otro lado, antgenos T
independientes de tipo 2 como los
polisacridos de las cpsulas
bacterianas, carecen de la capacidad
intrnseca de activar las clulas B en
forma inespecfica, pero tienen
estructuras altamente repetitivas que
pueden activarlas si producen un
adecuado entrecruzamiento de sus
BCRs. Hay evidencias de que las
clulas dendrticas y los macrfagos
pueden tambin participar
coestimulando las clulas B para su
activacin. Esta coestimulacin, que
es en gran parte mediada por
citoquinas como BAFF, es necesaria
para la diferenciacin de esta clula en
plasmablastos (clulas de corta vida)
que secretan IgM, y puede inducir la
diferenciacin de la clula B tambin a
plasmablastos secretores de otras
clases (IgG3 en ratn).
Es por esto que decimos que en la
respuesta T independiente puede
llegar a haber un cambio de clase en
forma muy moderada.
En ningn caso hay una importante
generacin de memoria.

La respuesta de anticuerpos T independientes es crtica contra patgenos encapsulados que escapan a la fagocitosis y
activacin del complemento
Un importante grupo de patgenos han desarrollado cpsulas como forma de evasin para evitar la fagocitosis y la
actividad ltica del complemento, al impedir el acceso del complejo de ataque a la membrana (MAC) a la membrana
bacteriana. En cada cepa de bacteria, la regin de polisacridos tiene un cierto patrn de glicosilacin, el cual nuestros
receptores para PAMPs no estn preparados para reconocer. Entonces los receptores fagocticos falla, no hay fagocitosis.
Aunque el complemento se active en cierta medida el MAC no puede acceder a la membrana por lo tanto tampoco hay
lisis. Estas bacterias son un desafo. A las DC les cuesta introducir a estas bacterias y generar pptidos para generar la
respuesta T independiente. Fallan mecanismos importantes de la inmunidad innata y tampoco hay un disparo de la
respuesta inmune adaptativa. Los que salvan esta situacin son los linfocitos B1 y BZM, ya que la cpsula de
polisacridos tiene motivos repetidos que pueden ser reconocidos por estos linfocitos.

Entre estos se encuentran patgenos que son muy comunes como Streptococcus pneumoniae, Neisseria menigitidis y
Haemophilus influenzae y que son responsables de la mayora de las otitis y serios casos de meningitis. Sin embargo, los
eptopes repetitivos que constituyen la cpsula de polisacridos de estos patgenos, son buenos activadores de los
linfocitos B1 y B ZM, y dan lugar a una respuesta de anticuerpos T independiente que es fundamental para controlarlos.
Desafortunadamente, la estimulacin por antgenos T independientes de tipo II, como es el caso de los polisacridos,
requiere la activacin de linfocitos B maduros. Este no es el escenario de los nios menores de 2 aos, como se discute
en la ltima lmina.
La respuesta de anticuerpos T independiente, tpicamente se da contra los antgenos de superficie de bacterias o
protenas de la cpside viral, y son principalmente IgMs, con la funcin principal de activar el complemento. Adems de
participar, en esta forma, en la destruccin directa de los patgenos, contribuyen al desarrollo de la inflamacin, con el
reclutamiento de neutrfilos y monocitos, y activan las clulas dendrticas que pueden comenzar el proceso de
produccin de una respuesta T dependiente, que dar lugar, ms tarde, a la produccin de anticuerpos de mayor afinidad
contra otros eptopes del mismo patgeno.

Los antgenos T independientes y T dependientes dan lugar a distintas respuestas en el curso de una inmunizacin

A modo de comparacin entre la respuesta T

independiente con la T dependiente:
La respuesta de anticuerpos contra antgenos T
independientes y dependientes vara
enormemente. La diferencia principal es que si
bien la respuesta T independiente es ms
rpida, no genera memoria, y no da lugar a
cambio de clase ni maduracin de la afinidad
de los anticuerpos.
Si tenemos un antgeno T independiente e
inmunizamos un ratn, vemos que tenemos una
respuesta del tipo de lnea punteada mostrada
en la grfica. Al hacer una segunda
inmunizacin lo que va a pasar es que va a
haber una respuesta ms o menos similar a la anterior, donde no hay evidencia de memoria inmunolgica y se vuelve a
producir IgM. La respuesta segunda se parece mucho a la respuesta primera.
Sin embargo, eso no es lo que pasa en la respuesta frente a un antgeno T dependiente. En este caso vemos una primera
respuesta, un poco ms lenta, pero que al inmunizar por segunda vez vemos un disparo importante y rpido en la
produccin de anticuerpos. Hay un cambio de clase y una maduracin de la afinidad. Por qu es ms rpida la
produccin de anticuerpos en la segunda respuesta, con respecto a la segunda respuesta T independiente? Por la
generacin de memoria. Es decir que sta es la evidencia de que las respuestas ante antgenos T dependientes generan
memoria. Al dar la segunda dosis no hay que esperar a encontrar un linfocito que justo se una al antgeno. Ahora la
poblacin que se une al antgeno se expandi y tienen un umbral de activacin ms bajo.

RESPUESTA T DEPENDIENTE

La activacin de las clulas B foliculares (B2) vrgenes ocurre en los rganos linfoides secundarios, en forma concertada
con la activacin de los linfocitos T. Ya sea en los ganglios, el bazo o en el tejido linfoide asociado a mucosas, existen
zonas T y B donde se encuentran recirculando estos linfocitos. La llegada del antgeno a estos sitios, en un contexto
inflamatorio, da lugar a la activacin de los clones especficos de clulas T y B, que darn lugar a la respuesta de
anticuerpos T dependiente. En las imgenes, la zona T est representada con violeta y la zona B con celeste. Adems est
la posibilidad de que se formen centros germinales, los cuales se forman solamente cuando hay una respuesta activa.

Si tomamos como ejemplo un

ganglio linftico, el ingreso del
antgeno desde el sitio de infeccin
ocurre a travs de los conductos
linfticos aferentes que como
resultado de la inflamacin
transportan clulas dendrticas
activadas y antgenos. Este
contenido se vaca en conductos
especializados que los ponen en
contacto con las vnulas del alto
endotelio (HEV). Clulas dendrticas
residentes pueden capturar
tambin antgeno que est llegando
y actuar en la presentacin. El
antgeno, recubierto por
componentes del complemento o
anticuerpos preformados, puede
ser capturado por las clulas
dendrticas foliculares que estn en
la zona de los folculos y que participan en el proceso de maduracin de la afinidad como veremos.
La recirculacin de los linfocitos B vrgenes es similar al que vimos en la clase anterior para los linfocitos T, solo que en
lugar de llegar desde el timo, estos llegan desde los sitios en que maduraron (tejido linfoide secundario). Una vez en
circulacin, los linfocitos B foliculares vrgenes ingresan por diapdesis a travs de las HEV. Este homing est dirigido
por el receptor CXCR5 del linfocito B que tiene especificidad por la quemoquina CXCL13 folicular. De modo que los
linfocitos B foliculares que ingresan van al folculo y permanecen all por horas hasta que contactan el antgeno o
abandonan el ganglio.

El encuentro con el antgeno induce la migracin de la clula B dentro del ganglio y su encuentro con las clulas T
colaboradoras

En los folculos, el contacto con el antgeno

especfico moviliza la clula B aumentando
la expresin de CCR7, el receptor que
reconoce las quemoquinas CCL21 y CCL19
caractersticas de la zona T. De esta forma
las clulas B que encontraron el antgeno
migran hacia el borde de la zona marginal
T donde esperan a encontrarse con una
clula T que las active. Si al cabo de unas
horas la colaboracin T no se produce,
entonces la clula B pasa a un estado de
anergia, haciendo difcil su posterior
activacin. Por el contrario, si la clula B al
llegar a esta zona se encuentra con un clon
adecuado de una clula T que se activ,
prolifer y se diferenci mediante la
interaccin con una clula dendrtica que
le present pptidos derivados del mismo
antgeno, entonces recibe seales de
activacin. Ntese que como vimos en la
anterior clase, que la activacin del
linfocito T que se diferencia a un fenotipo
que posibilita la activacin de las clulas B,
va a aumentar la expresin del receptor
CXCR5 (con especificidad por las quemoquinas del folculo) lo cual facilita el encuentro.
El encuentro se produce en la zona intermedia (entre el folculo y la zona T, en prpura claro) como se muestra en la
figura 2. La interaccin especfica entre ambas clulas est determinada por la expresin de complejos pptidos-MHC
derivados del antgeno que reconoce las clulas B. Adems deben producirse otras seales, particularmente la expresin
en la clula T del CD40L, para que la activacin tenga lugar. Como resultado de la interaccin ambas clulas reciben
estmulos, resultando en la activacin de la clula B virgen y la reactivacin de la clula T efectora.

Varias interacciones moleculares dan lugar a una activacin efectiva de la clula B, en particular la interaccin con el
Ligando para CD4

Para que una clula T provea colaboracin a una clula B activada, su TCR debe reconocer el complejo pptido-MHC
especfico en la superficie de la clula B. Pero adems debe recibir otras seales por parte de la clula B como las
provistas por el ligando para ICOS y B7. ICOS se expresa constitutivamente en la clula B, pero B7 se expresa en respuesta
a la activacin por el BCR y la sealizacin por TLRs durante su encuentro con el antgeno. Como resultado de estas
interacciones, y como ya hemos comentado, la clula T secreta una serie de citoquinas y expresa el ligando para CD40,
cuya expresin es crtica para que se de la activacin de la clula B.
Si nos fijamos en la imagen, vemos que el linfocito T adems de ser colaborador (H = helper) es folicular (F).
Esta es la segunda seal que esperaba el linfocito B para su activacin. El B7 expresado en la clula B se une al CD28 de la
clula T, lo cual le da un empuje de activacin a la clula T provocando que se exprese en l el CD40L, y aqu es donde
viene la verdadera seal, a travs del ligando para CD40.

Este linfocito T no activa a cualquier linfocito B. Solo activa a aquel que fue capaz de capturar el antgeno.
Podemos deducir que ambos linfocitos tienen especificidad por el mismo antgeno, ya que de haber sido de otra forma no
podran ambos haberlos reconocido.
Las clulas T colaboradoras inducen una primer respuesta de anticuerpos y la reaccin del centro germinal

El contacto antgeno especfico se produce entre las clulas B y T en la regin que limita la zona T y la zona folicular.
Durante el tiempo de contacto, que dura aprox. una hora, la clula colaboradora sintetiza IL-6, IL-10 e IL-21, y sintetiza el
ligando para CD40, el cual interacciona con el CD40 en la clula B. Esta interaccin es crtica para que se produzca una
rpida respuesta de anticuerpos y la formacin de la reaccin del centro germinal. Como resultado de esta interaccin
algunas de las clulas B proliferan y se diferencian en clulas secretoras de anticuerpos, que los secretan en esta zona del
ganglio, o en el caso del bazo en la zona adyacente a la pulpa roja. Estas clulas son las responsables de la primera oleada
de anticuerpos T dependientes del tipo IgM e IgG y se denominan plasmablastos (representados por la grfica verde).
Los plasmablastos tienen vida corta y mueren luego de algunos das o se transforman en clulas plasmticas de larga
vida.
Otras clulas B migran nuevamente a la zona folicular, en la zona B, junto con las clulas T antgeno especfica e inician la
reaccin del centro germinal.

El centro germinal es una estructura que permite la proliferacin y diferenciacin de las clulas B, dando lugar a la
produccin de anticuerpos de alta afinidad, con cambio de clase y generacin de clulas B de memoria

Parte de las clulas B que se activaron vuelven a la regin rica

en clulas B del folculo donde empiezan a proliferar a buen
ritmo duplicndose cada 6-8 h. Estas clulas en divisin se
denominan centroblastos y forman la zona oscura de centro
germinal. En paralelo, parte de las clulas T que participaron
en esa activacin tambin migran a esta regin formando
parte de la denominada zona clara del centro germinal
conjuntamente con las clulas dendrticas foliculares (FDC) y
centrocitos.
 Estos ltimos estn constituidos por la progenie de los
centroblastos que han finalizado su divisin. Las clulas dendrticas
foliculares estn especializadas en la captacin de antgenos, ya sea
a travs de sus receptores para Fc que unen inmunocomplejos y/o,
a travs de sus receptores para antgenos opsonizados con
componentes C3b del complemento. La interaccin de los
centrocitos con las FDC y subsecuentemente con los linfocitos T
colaboradores, promueve la reaccin del centro germinal que
produce la:
1) Rpida mutacin de la regin variable (partope) de los genes
de las inmunoglobulinas, seguida de una seleccin de los clones de
mayor afinidad a travs de la interaccin con el antgeno retenido
en las FDCs
2) El cambio de clases que permite pasar de la secrecin de IgM a
IgG, IgA e IgE
3) La generacin de clulas plasmticas de larga vida (a diferencia
de los plasmablastos que no los son, ver slide anterior)
4) La generacin de clulas de memoria que pueden activarse
rpidamente en un encuentro posterior con el antgeno.
Recordar que estas dendrticas no son las comunes, son foliculares,
FDCs.
El proceso de hipermutacin somtica que produce mutaciones
puntuales en los segmentos gnicos de la regin variable requiere
de la participacin de la Citidine Deaminasa Inducida por Activacin
(Activation-Induced Cytidine Deaminase (AID)). Esta enzima
convierte la citidina en uracilo y da lugar por tanto a mutaciones puntuales, reparacin del DNA, o ruptura del DNA.
Justamente es esta ltima consecuencia la que la vincula tambin al proceso de cambio de clase, y se ha visto que la
deficiencia de AID conduce a enfermedades caracterizadas por la sobreproduccin de IgM y carencia de otras subclases.
En la mayora de los casos la hipermutacin somtica produce clones con peor reconocimiento del antgeno, pero en
algunos casos, la mutacin mejora la afinidad. Cmo se seleccionan estos clones? Como dijimos, la FDC secuestra
antgenos por el cual los centrocitos deben competir duramente. Los centrocitos estn originalmente programados para
morir, y las seales que recibe al interactuar fuertemente con las FDC y con clones T antgeno-especficos es rescatado del
programa de muerte y sobrevive. Para esto ltimo, el centrocito debe arrancar antgeno de la FDC y solo aquellos con
un BCR de alta afinidad podrn hacerlo. Esto est tambin ayudado por la liberacin de icosomas por parte de la FDC, los
cuales son pequeos cuerpos cubiertos de inmunocomplejos (anticuerpos que se fueron produciendo al principio de la
respuesta son captados ac), y son las pequeas bolitas que se ven en las dendritas de la FDC de la figura primera.

La colaboracin T promueve la maduracin de la afinidad y perfil de citoquinas secretadas determina el cambio de clase

Los nmeros en el rbol genealgico indican las

mutaciones en los genes de la cadena pesada y
liviana en ese orden (P/L).
A la derecha se muestran diferentes hibridomas
(clulas B inmortalizadas por fusin con una
clula tumoral) derivados del mismo clon
original de una clulas B. Se obtuvieron de un
ratn nico de un modelo experimental de
artritis. Los nmeros en el rbol genealgico
indican las mutaciones en los genes de la
cadena pesada y liviana P/L. En rojo los eventos
de cambio de clase hacindose claro que los
eventos estn interrelacionados.
Las citoquinas que secreta el linfocito T
colaborador influyen en la clase de
inmunoglobulina secretada como se muestra en
la tabla.
El centro germinal es necesario para que se generen clulas plasmticas secretoras de anticuerpos y clulas de memoria

Las clulas plasmticas se generan a lo

largo de las 6 o 7 semanas en las cuales
funciona el centro germinal, inicialmente
dejan el centro germinal como
plasmablasto y se diferencian a clulas
plasmticas cuando se establecen en su
sitio de homing definitivo. Su
diferenciacin est determinada por la
expresin del factor de transcripcin
Blimp-1. Las clulas plasmticas son
clulas de larga vida (varios aos), en
contraste a los plasmablastos que si no se
diferencian a clulas plasmticas solo
sobreviven por pocos das. La mayora de
los plasmablastos generados en la
respuesta rpida de anticuerpos que
hemos visto anteriormente (antes de la
formacin del centro germinal) no se
diferencian en clulas plasmticas (aunque
un 10% aprox. si lo hace). La larga vida de
las clulas plasmticas, es la razn
principal de que an varios aos despus
de una inmunizacin (por ej. con la vacuna
tetnica) an estn presentes en el suero cantidades suficientes para lograr la proteccin. Su supervivencia, sin embargo,
depende de la que encuentren un nicho apropiado donde reciban seales de supervivencia. Estas seales estn
comnmente en el sitio de inflamacin y las clulas plasmticas pueden migrar all y secretar anticuerpos in situ, o bien
migrar a sitios de supervivencia de largo plazo, tpicamente la mdula sea. Los sitios de supervivencia son limitados y
durante la produccin de nuevas generaciones de clulas plasmticas, las anteriores son desplazadas disminuyendo el
ttulo de anticuerpos que secretan. Esto se ve en el caso de mielomas, donde las clulas plasmticas cancerosas colonizan
la mayora de los sitios de supervivencia y los enfermos carecen de anticuerpos protectores.
Las clulas B de memoria, por su parte, se desarrollan a partir de centrocitos en etapas ms avanzadas de la respuesta y
por tanto suelen corresponder a clulas que hicieron el cambio de clase y tienen BCR de alta afinidad. Las clulas B de
memoria son fcilmente activadas y si una infeccin reaparece, pueden formar un nuevo centro germinal con la
colaboracin de las correspondientes clulas T de memoria. En esta segunda respuesta que ocurre mucho ms rpido se
producen un nmero mucho mayor de clulas plasmticas lo que redunda en una proteccin de mayor duracin en el
tiempo, y la sucesiva inoculacin para lograr este efecto es comnmente vista en los protocolos de vacunacin.

Los linfocitos T colaboradores activan clulas B que reconocen el mismo antgeno o complejo antignico (linked
recognition)

Los linfocitos B vrgenes reaccionan con

eptopes (eptopes B) en una dada
estructura (el antgeno) con la condicin de
que el sitio de unin est expuesto (en la
superficie) y no tienen restricciones
respecto a la naturaleza qumica (protenas,
carbohidratos, lpidos, etc). Como hemos
visto en la clase de presentacin de
antgeno, una vez formado el complejo BCR-
antgeno, el mismo es endocitado, luego el
complejo es procesado por las enzimas
hidrolticas en el endolisosoma, y
finalmente los pptidos generados
(eptopes T) a partir del antgeno son
cargados en el MHC II y expresados en la
superficie donde pueden reaccionan con el TCR de un linfocito colaborador. El eptope T (pptido rojo en la figura) es
entonces el nexo entre las dos clulas, y sin eptopes T en el antgeno, las clulas B no pueden recibir colaboracin de
los linfocitos T. Ntese entonces que al endocitarse el antgeno que reconoce la clula B virgen, la condicin que debe
cumplirse es que esa endocitosis implique el ingreso al linfocito B de eptopes T (pptidos) asociados de alguna forma al
eptope B que est siendo reconocido. Este reconocimiento ligado (linked recognition) entre las clulas B y T, opera
como una garanta adicional para el control de la tolerancia, dado que las dos clulas deben reconocer eptopes en la
misma molcula para que se produzcan anticuerpos.
La mayora de los patgenos son estructuras complejas, que incluyen protenas y que por tanto si son endocitados al
unirse al BCR proveern eptopes T. El ejemplo tpico es un virus, en estos casos puede ocurrir que los eptopes T no estn
ni siquiera en la misma molcula que el eptope B que reconoce el BCR, pero an as promueven la colaboracin T. La
situacin opuesta son los antgenos muy simples como por ejemplo un compuesto orgnico de sntesis. Estos pueden
tener alta afinidad por un dado BCR pero no entrecruzan BCRs y no conllevan eptopes T asociados, entonces cmo
puede generarse una respuesta de anticuerpos contra este tipo de compuestos?

Las molculas pequeas que no proveen eptopes T (haptenos) necesitan conjugarse a una protena (carrier) para
producir anticuerpos

Los antgenos T dependientes dan respuestas de anticuerpos que se caracterizan por el cambio de clase y la ALTA
AFINIDAD de reconocimiento. En muchas ocasiones, a travs de la inmunizacin de animales se preparan estos
anticuerpos de alta afinidad para luego ser usados por ejemplo como herramientas para detectar determinados
marcadores moleculares, o para inmovilizarlos y as purificar la molcula blanco (inmunopurificacin), para neutralizar
una toxina (por ej. neutralizacin de venenos, sueros antiofdicos), etc. Pero cuando el antgeno de inters es una
molcula pequea, que puede unirse al BCR, pero que una vez endocitado por el linfocito B no es capaz de proveer
eptopes T para promover la colaboracin con las clulas T, entonces no se producen anticuerpos. Estos compuestos se
denominan haptenos, y para que generen una respuesta T dependiente deben conjugarse qumicamente a una
protena (carrier) que suministre los eptopes T (que no sea propia), que permitirn la interaccin con la clula
colaboradora. La protena carrier puede ser en principio cualquier protena para la cual no exista tolerancia. Los mejores
resultados se obtienen cuando la protena carrier se obtiene de una especie poco relacionada, dado que la similitud de
secuencias ser mnima.
Desde el punto de vista prctico, en distintas aplicaciones, en general las molculas pequeas, que no tienen mltiples
copias de estos pueden tener alta afinidad por un dado BCR pero no entrecruzan BCRs y no conllevan eptopes T
asociados, entonces cmo puede generarse una repuesta de anticuerpos contra este tipo de compuestos? Mediante la
formacin de un conjugado producido por la unin covalente del hapteno a una protena inmunognica (carrier).
El principio hapteno-carrier se utiliza en la preparacin de vacunas contra polisacridos capsulares

Un interesante ejemplo de una aplicacin prctica del principio hapteno-carrier son las vacunas conjugadas contra
polisacridos de bacterias encapsuladas. Tal es el caso del patgeno Haemophilus influenzae tipo b. Esta bacteria puede
invadir las meninges causando meningitis de alta gravedad y ha sido una importante causa de mortalidad infantil. En los
individuos adultos, la inmunidad protectora contra este patgeno se produce mediante la produccin T independiente de
anticuerpos contra los polisacridos capsulares del patgeno, que como vimos son un ejemplo de antgenos
independientes de tipo 2. En nios de corta edad la respuesta contra antgenos independientes de tipo 2 no est
consolidada. La razn principal es que en esta respuesta las principales clulas B involucradas son las clulas B de la zona
marginal (B ZM), y la poblacin de estas clulas es muy baja en el periodo neo natal y lo sigue siendo hasta alcanzar los
dos aos, por lo cual en esa ventana de tiempo no pueden montar una produccin de anticuerpos TI eficiente. Como
estas clulas estn en el bazo, lo mismo ocurre con los pacientes a los cuales se les ha extirpado, como ocurre en el caso
de algunos accidentes que provocan su ruptura. En estos casos, las vacunas de polisacridos no conjugados, que si
proveen cierta proteccin en adultos, no son eficientes en esta poblacin. No obstante a principio de los 90, se desarroll
una vacuna que tena como antgeno un conjugado formado por la protena del toxoide tetnico y polisacridos
capsulares de H influenzae. El principio de funcionamiento se describe en la figura. El hecho de que la poblacin infantil
ya haya sido expuesta al toxoide tetnico a travs de la vacunacin con la vacuna triple bacteriana (ttano, difteria y
pertusis), hace que existan clulas T de memoria contra
pptidos del toxoide que favorecen la respuesta contra el
conjugado toxoide-polisacrido acelerando la respuesta.

Como los nios menores de 2 aos no tienen muy

desarrollado el sistema de produccin de anticuerpos de
forma T independiente, lo que se hace es convertir la
respuesta T independiente contra polisacridos (eptope
B) mediante la conjugacin de una protena (eptope T).
Generalmente se usan antgenos para los cuales ya estamos vacunados, as ya tenemos linfocitos T de memoria. De esta
forma, hay colaboracin de linfocitos T para la activacin del linfocito B, y se generan anticuerpos contra los polisacridos.
Tema 10: Inmunidad de mucosas
Clase 13, 4/11/2013

Los epitelios mucosos representan la principal rea de entrada de los patgenos

Los epitelios mucosos representan la mayor superficie del cuerpo expuesta a los patgenos. Son estructuras
particularmente vulnerables, ya que algunos de ellos como los epitelios intestinal y pulmonar son estructuras
monoestratificados en consonancia con las respectivas funciones de absorcin de nutrientes e intercambio gaseoso.
La gran exposicin exige mecanismos continuos y efectivos de proteccin frente al ingreso de patgenos, mediante
respuestas que en condiciones de salud no generen niveles de inflamacin incompatibles con la funcin. Una vez que los
patgenos lograron vencer las barreras, hay generacin de respuestas protectoras que involucran inflamacin aguda.
El sistema inmune de las mucosas representa en nmeros el compartimento ms importante del organismo. La gran
mayora de los estudios en inmunologa se realizan en modelos en los que se inoculan antgenos a animales de
experimentacin, y por ello la mayora de la descripcin de los mecanismos de la respuesta inmune se realiza en los
ganglios y el bazo.

Los tejidos epiteliales son heterogneos y adaptados a su funcin

Las llamamos mucosas porque la mayora de las clulas que componen estas superficies secretan mucus. Cada superficie
tiene distintos epitelios, con distintas estructuras adaptadas a su funcin. Algunas son monoestratificados (estmago,
intestino, tero, cavidad nasal, trquea, bronquios), por lo que podramos pensar que son ms vulnerables al ataque de
los patgenos. Los otros tejidos epiteliales tienen ms capas celulares (cavidad bucal, esfago, vagina, tracto urinario). Si
bien los epitelios monoestratificados son ms vulnerables, tienen asociados algunos de los elementos ms importantes
del sistema inmune.

El sistema inmune de las mucosas en cifras:

Las mucosas concentran 3/4 partes del total de los linfocitos del organismo. Hasta ahora venamos viendo a los linfocitos
en los ganglios y dems rganos linfoides, pero la mayor parte de ellos estn en las mucosas. El 80% de las clulas
productoras de IgA estn en las mucosas. Hasta ahora habamos visto que la mayor parte de los plasmocitos que se
diferencian iban hacia la mdula sea y desde all se liberaban anticuerpos a la sangre. En un adulto de 70kg, se producen
por da, aproximadamente 3g de IgA. Evidentemente esta IgA tiene una vida media corta, ya que de ser de otra forma
desbordaramos IgA.
En esta clase, cuando hablamos de mucosas nos vamos a referir al intestino, ya que es donde estn ms claros los
conceptos.
Microbiota asociada o flora comensal asociada es muy importante. Va creciendo en nmero desde el esfago hasta el
colon y en su conjunto suman 1kg de biomasa; superando as el total de clulas de procariotas que nos colonizan al total
de clulas del individuo. Esta flora es importante para el individuo ya que tiene como fin la produccin de nutrientes,
defensas y dems, pero a su vez cumplen un rol importante en lo que es la regulacin del sistema inmune.
Mecanismos innatos de defensa
Barreras fsicas, bioqumicas y biolgicas de defensa:
- Uniones fuertes entre clulas epiteliales (fsica)
- Mucus (fsica)
- Microbiota o flora comensal (biolgica)
- Enzimas proteolticas (bioqumica)
Los epitelios cuentan con poderosos mecanismos de defensa, que facilitan la exclusin de los patgenos. En el caso del
epitelio intestinal por ejemplo, la exclusin opera desde la propia estructura del epitelio monoestratificado, en el que los
enterocitos presentan uniones muy fuertes tight junctions (uniones estrechas) mediante protenas que hacen de
sello y slo permiten el pasaje de molculas pequeas.
Algunas clulas especializadas del epitelio producen mucus, una secrecin formada bsicamente por mucinas, que son
glicoprotenas muy hidroflicas que forman una capa sobre el epitelio, formando una barrera que se interpone entre las
clulas epiteliales y los patgenos. Algunos patgenos deben su capacidad invasiva a la produccin de enzimas que
degradan mucus.
La propia flora comensal, acta compitiendo con los patgenos, adems de aportar vitaminas y otros metabolitos
esenciales para el individuo. Las enzimas proteolticas y pptidos antimicrobianos (defensinas), contribuyen tambin al
control de los patgenos. Hay que destacar el hecho de que en este sitio anatmico, la produccin de defensinas es
constitutiva.

Los mecanismos innatos de defensa en el epitelio intestinal

Las barreras naturales.
Si vemos la unin entre enterocitos a nivel molecular, vemos que estn unidos a travs de protenas que a su vez estn
asociadas con el citoesqueleto y que regulan la permeabilidad intestinal. Entre dos enterocitos hay solo pasaje de
molculas pequeas. A su vez ese pasaje puede ser afectado y que pasen microorganismos.
Algunos patgenos (Vibrio colera, Bacteroides fragilis) producen proteasas que degradan, clivan el dominio extracelular
de las protenas ocluidina y E-caderina, aumentando la permeabilidad epitelial y facilitando su ingreso.
La propia flora comensal, acta compitiendo con los patgenos, adems de aportar vitaminas y otros metabolitos
esenciales para el individuo. Adems, contribuye a la regulacin de la homeostasis, el sistema inmune no es indiferente a
la flora, y como veremos se generan mecanismos de muestreo y control mediante exclusin con IgA secretoria.

Produccin de pptidos antimicrobianos: DEFENSINAS

En las criptas (parte ms profunda) de las microvellosidades del epitelio delgado hay abundantes clulas denominadas
de Paneth que secretan constitutivamente al lumen, pptidos con actividad antimicrobiana que reciben el nombre de
defensinas. Se trata de un mecanismo general de defensa compartido con
invertebrados y plantas.

Estos pptidos forman parte de una gran familia de molculas con actividad sobre los
patgenos y tambin sobre la respuesta del propio hospedador, que comparten
algunas caractersticas: son pptidos anfipticos (tienen una parte de la molcula
cargada y otra apolar) cargados positivamente a pH fisiolgico, que no tienen ms de
100 aminocidos, que interaccionan con los lpidos de la membrana celular,
intercalndose en la bicapa lipdica, oligomerizando y formando poros (ver imagen).
Los lpidos de la membrana de los microbios son mayoritariamente cidos, presentan
cargas negativas y la diferencia con la composicin lipdica de las membranas de
eucariotas superiores, es responsable de la selectividad de accin sobre los
patgenos.
Tambin son producidos por otros tipos de clulas epiteliales especializadas y encontramos este tipo de defensa
constitutiva en todas las secreciones (ej. saliva, leche).
Adems, son almacenadas en los grnulos azurfilos de los neutrfilos y su secrecin es estimulada luego de la
activacin celular resultante de la interaccin de receptores TLR y sus ligandos especficos.
Adems de los efectos directos sobre los patgenos, tienen efectos sobre clulas de la respuesta inmune potenciando
otros mecanismos efectores.
Es importante recordar que la produccin de estos pptidos en las criptas es constitutiva, no es necesaria la presencia de
un estmulo de parte de un patgeno. Ya los vimos en la clase de Inmunidad innata como pptidos producidos por
neutrfilos activados por un PAMP; en dicho caso esa si es una produccin inducida.
 El intestino tiene un repertorio particular de linfocitos intraepiteliales

LT CD8+ (citotxicos) convencionales (50%) con fenotipo efector. No son

vrgenes, por lo tanto ya estn prontos para actuar, por lo que ya puede
inducir la apoptosis de una clula infectada.

LT CD8+ (citotxicos) no convencionales (50%). Es una poblacin ms

heterognea. No convencionales significa que son linfocitos que expresan
receptores que no tienen la cadena sino que expresan principalmente
cadenas . No reconocen pptidos de la forma cannica convencional,
presentados por molculas MHC, sino que reconocen en forma independiente
al MHC, seales de peligro. Se clasifican como en la interface entre lo que es
una clula de respuesta adaptativa y una clula de respuesta innata.

- Expresan receptores T con cadenas

- Predomina poblacin con TCR V1
- Predominan fenotipos particulares como CD8 CD4-CD8-
Son como linfocitos centinela que actan en la interface.
Los linfocitos T intraepiteliales pueblan el intestino en edad fetal, en forma
independiente de la flora comensal. En la vida adulta colonizan el intestino a
partir de sangre perifrica, predominando en intestino una poblacin que
utiliza las cadenas 21, mientras que en sangre predominan los que expresan
92 (1-5% de los linfocitos).
Actan como clulas efectoras, ya que inmediatamente al reconocimiento de sus ligandos actan induciendo apoptosis y
produciendo citoquinas, principalmente interfern alfa. Adems, tienen un rol regulador de reparacin tisular actuando
en una etapa ms tarda de la respuesta.
Hay an controversia en cuanto a los ligandos y la forma de reconocimiento. Reconocen tanto molculas endgenas
como exgenas (ej. fosfoantgenos de micobacterias). En cuanto a los ligandos endgenos, reconocen las molculas
expresadas frente al estrs celular MIC A/MICB en humanos (T10 y T22 murinos) as como fosfoantgenos endgenos
expresados por clulas tumorales.
En cuanto la forma de reconocimiento est claro que reconocen antgenos en membranas celulares en forma no
restringida a MHC-I, en algunos casos se ha reportado reconocimiento restringido a CD1c.
No requieren la coestimulacin clsica a travs de CD28, pero se cree que in vivo la unin de ciertos ligandos a travs de
receptores como NKG2D (MICA; MICB) conducira a una disminucin del umbral de respuesta.
En el epitelio humano se encuentran un promedio de 10 20 linfocitos intraepiteliales por cada 100 enterocitos en el
intestino delgado (cuando esto aumenta puede ser un marcador diagnostico). Algunos de esos linfocitos expresan el
receptor T con cadenas y tienen una forma particular de reconocimiento, no restringido al MHC-I.
Expresan tambin receptor de las clulas NK, que une molculas de stress expresadas solamente bajo condiciones de
stress celular, como por ejemplo en una infeccin o transformacin celular.
En suma, los linfocitos T se consideran en la interfase entre la respuesta innata y adaptativa.
- Utilizan un repertorio limitado de genes V
- Reconocen antgenos en forma no restringida al MHC
- Representan una poblacin minoritaria y heterognea.
- Hay subpoblaciones funcionales, con propiedades efectoras y reguladoras.

El reconocimiento de los LIep no convencionales

Decimos que se clasifican como en la interface entre lo que es una

clula de respuesta adaptativa y una clula de respuesta innata.
Por qu?
Respuesta adaptativa porque tienen un TCR. Pero respuesta
innata porque no estn reconociendo pptidos en un MHC sino
que reconocen ligandos, tanto endgenos como exgenos,
expresados en un tipo de molculas que se llaman CD1. Estas son
molculas MHC no clsicas. No necesariamente tiene que mostrar
pptidos (como el MHC) sino que puede mostrar molculas de
otro ndole qumico (lipoflicas por ejemplo).
Estos LIep tienen receptores que reconocen molculas de estrs
que se expresan en las clulas solo cuando stas estn alteradas.
Las MICa y MICb son dos molculas de estrs. Estos receptores
tambin los tienen las NK (molculas de la inmunidad innata).
Algunas bacterias inducen la expresin de molculas de stress que activan a los LT

Los enterocitos infectados por algunas bacterias aumentan la expresin de molculas propias de estrs denominadas
MIC-A y MIC-B. Una poblacin de los linfocitos
T intraepiteliales con receptor T tienen
propiedades citotxicas que son inducidas
inmediatamente luego del reconocimiento de
las molculas de estrs y componentes
bacterianos presentados en una forma no
clsica (no presentados por MHC sino por otra
molcula capaz de unir molculas no peptdicas
por la va endoctica, CD1). Aunque, se sabe
poco an sobre la naturaleza molecular del
reconocimiento es claro que cumplen una
funcin de inmunovigilancia en la interfase con
el medio externo, y son capaces de destruir
clulas alteradas. Otras poblaciones de LT
intraepiteliales producen citoquinas y participan
en funciones reguladoras y de reparacin
tisular.
Se muestra un linfocito T interepiteliar en
amarillo y enterocitos siendo infectados por una bacteria (en rojo), la cual induce en el enterocito la expresin de
molculas de estrs (MIC). Las molculas de estrs son reconocidas por el LTiep el cual, por ser CD8+ induce la apoptosis
de la clula infectada mediante la interaccin ligando-receptor. Tambin podra inducir la apoptosis por el
reconocimiento de ligandos para el CD1.
Los epitelios tienen tejido linfoide asociado a mucosas: MALT
GALT: Tejido linfoide asociado a intestino (ej. placas de Peyer, apndice) y gnito-urinario
BALT. Tejido linfoide asociado a bronquios
NALT: Tejido linfoide asociado a nasofaringe (ej. amgdalas)

El sistema inmune asociado a mucosas tiene un tejido linfoide asociado, con una anatoma funcional parecida a los
rganos linfoides sistmicos, en cuanto presentan reas T y B bien definidas.

La compartimentacin del sistema inmune

El sistema inmune puede visualizarse como un
rgano que tiene una distribucin que abarca
todo el cuerpo.
Dentro del sistema inmune, hay diferentes
compartimentos anatmicos donde se
desarrollan respuestas inmunes frente a
patgenos que ingresan por distintos tejidos.
En las clases anteriores, nos hemos centrado en
las caractersticas de las respuestas iniciadas en
ganglios linfticos perifricos y el bazo, en
respuesta a antgenos que ingresan a travs de la piel y la sangre respectivamente. Estos dos rganos linfticos
pertenecen a los que llamamos sistema linfoide sistmico. Lo que estamos viendo hoy es cuando los antgenos entran
por lo epitelios mucosos, se generan respuestas adaptativas en los MALT (GALT, NALT, BALT).
Un segundo compartimento del sistema inmune adaptativo, se localiza cerca de las superficies mucosas. Otros
compartimentos son el peritoneo y cavidad pleural. Tanto el peritoneo como la pleura (membranas que recubren los
pulmones y las visearas abdominales) hay clulas del sistema inmune, hay un drenaje linftico, y ganglios asociados que
iniciaran las respuestas inmunes frente a alguna infeccin peritoneal o pleural.
Las respuestas inmunes iniciadas en cada compartimento, quedan mayoritariamente confinadas al mismo y este
fenmeno lo estudiamos con las respuestas iniciadas en el intestino. La compartimentalizacin de las respuestas se basa
en la programacin que sufren los linfocitos vrgenes al ser activados en los rganos linfoides de cada compartimento,
que implica una expresin diferencial de molculas de adhesin. Esta compartimentalizacin no es absoluta (por eso
vemos flechas que unen ambos sistemas linfoides).
Esto permite direccionar las clulas efectoras preferentemente (pero no exclusivamente) al sitio de entrada del patgeno
(expresando diferentes molculas dependiendo del sitio de activacin) donde fueron activadas, haciendo ms eficiente la
respuesta.
Adems, el tipo de respuesta efectora generada en cada compartimento vara segn las caractersticas del patgeno y
las particularidades de cada rgano.
Cada sitio anatmico tiene un microambiente regulatorio que condiciona el tipo de respuesta, las clulas no inmunes
del tejido producen constitutivamente factores que influyen sobre la respuesta generada.

Considerando al GALT como modelo para el estudio de la respuesta inmune desarrollada en las mucosas, se destacan sus
propiedades particulares respecto a los rganos linfoides sistmicos.
Estos rganos linfoides asociados al intestino (GALT) tienen una particularidad muy importante si lo comparamos con lo
que es un ganglio sistmico de cualquier parte del cuerpo que no est permanentemente en contacto con potenciales
antgenos. En el intestino tenemos una cantidad de potenciales antgenos, la microbiota (necesario pero no son
componentes propios) y los alimentos parcialmente digeridos (protenas antes de ser totalmente digeridas podran ser
potencialmente reconocidas como patgenos).

Hay muestreo activo de componentes del lumen, con induccin de tolerancia frente a los antgenos dietarios y de la
microbiota e induccin de IgA secretoria hacia el lumen y que contribuye a la exclusin de parte de los potenciales
antgenos. Vemos entonces que esta barrera no es absoluta, deben haber mecanismos de muestreo.
Debido a la gran exposicin a molculas antignicas y microorganismos que enfrenta el intestino respecto al resto de los
rganos, se han desarrollado mecanismos constitutivos de defensa innata muy importantes.
Adems, hay mecanismos regulatorios que aseguran que en condiciones de salud, se mantenga el equilibrio de simbiosis
con la flora normal y que no se desarrolle respuesta frente a los alimentos. Bsicamente debe defendernos de
patgenos (mecanismos de defensa) pero al mismo tiempo no confundir los alimentos y la microbiota asociada al
intestino como patgenos (mecanismos regulatorios).

Cuando estos mecanismos inmunoregulatorios estn alterados se producen enfermedades autoinmunes como la
enfermedad celaca (intolerancia a algunas protenas del trigo) y enfermedades inflamatorios intestinales (colitis ulcerosa
y enfermedad de Chron, cuando se rompe la tolerancia por la microbiota).
El GALT como modelo de estudio de inmunidad en mucosas

Se representan esquemticamente los

componentes linfoides del sistema inmune
intestinal. Se destaca en particular el sistema
linftico, que drena las placas de Peyer situadas
adyacentemente a la superficie epitelial en zonas
especializadas, y los linfticos que drenan las
vellosidades (donde hay vasos capilares que no se
muestran en esta figura); los vasos convergen en
los ganglios mesentricos. Esta gran cadena
ganglionar se conecta con el resto de sistema
linftico, que finalmente converge en el conducto
torxico y vierte su contenido a la sangre a nivel
de la vena subclavia izquierda.
Los ganglios linfticos mesentricos se localizan en el
tejido conectivo que fija el intestino a la pared posterior
del abdomen. Drenan las placas de Peyer y los folculos
linfoides aislados del intestino. Se considera que
pertenecen al compartimento de mucosas y al
compartimento sistmico.

Cuando observamos el rgano linftico que llamamos Placa de Peyer, vemos que
tiene una estructura similar a la de un ganglio, en el sentido de que tiene zonas B
(folculos) y zonas T. Adems tiene vasos linftico eferentes. Sin embargo, en
comparacin con un ganglio, faltaran los vasos linfticos aferentes. En el ganglio
estos vasos son a travs de los cuales llegan las DC, el antgeno y otros
componentes. Por qu no existen en las placas de Peyer? Porque estn
prcticamente en la interface con el medio externo. Si vemos en la imagen de la
derecha, existen unas clulas, llamadas clulas M en el epitelio, que son las que
aseguran el ingreso de antgenos a la placa de Peyer.
Las placas de Peyer tambin estn conectadas con los ganglios mesentricos.

La lmina propria incluye sitios inductores y efectores

En el intestino delgado se concentra la mayor parte de

las clulas del GALT. El sistema inmune est organizado
en Placas de Peyer, limitadas a algunas regiones del
intestino delgado y los folculos linfoides dispersos (son
como Placas de Peyer microscpicas) que se extienden
por todo el intestino.
Adems, en la lmina propria (tejido conjuntivo
adyacente al epitelio) se encuentran en forma dispersa,
gran cantidad de clulas del sistema inmune.
El epitelio asociado a las placas de Peyer, est
especializado en el muestreo de antgenos luminales y la
transferencia de estos hacia el tejido linfoide adyacente.
La principal caracterstica es la presencia de un tipo
celular, denominado clulas M, especializadas en la transitosis de antgenos del lumen.
Los folculos dispersos son zonas de acumulacin de linfocitos B. Tanto en las Placas de Peyer como en los folculos son
zonas ms chatas donde predominan las clulas M (rojas). En estos sitios es donde se inicia la respuesta adaptativa, es
por esto que se llaman sitios inductores.
Una particularidad del intestino frente a otros tejidos es la presencia de lmina propia, que es el tejido constitutivo que
est por debajo de los enterocitos. A diferencia de lo que pasara en cualquier otro tejido constructivo, en la imagen se ve
que est poblado por una gran poblacin de clulas del sistema inmune: Linfocitos B, T, DC, muchas clulas plasmticas o
plasmocitos, etc. A estos sitios, gracias a que las clulas presentes estn en una forma efectora, se los llama sitios
efectores. La principal clula efectora son los plasmocitos, que producen IgA dimrica, o secretoria, exportada hacia el
lumen.

Hay zonas de epitelio especializados para el ingreso de antgenos

Cmo se inicia una respuesta adaptativa en el intestino?

Inicia por una zona en las Placas de Peyer. Estas zonas del epitelio
modificado son zonas que promueven en el ingreso de antgenos
intactos, es decir, zonas que estn modificadas para facilitar el
ingreso de antgenos.
Tambin tenemos zonas en el intestino donde hay vellosidades y no
Placas de Peyer, donde se da la degradacin de nutrientes.

Epitelio altamente modificado:

No hay microvellosidades
Hay abundantes clulas M
No hay clulas productoras de mucus (poco mucus)
Escasa produccin de defensinas
No hay produccin de enzimas digestivas
No hay transporte de IgA al lumen

El epitelio altamente modificado se encuentra adyacente a las Placas de Peyer localizadas en algunas regiones del
intestino delgado. Todas las caractersticas sealadas contribuyen a que el muestreo antignico sea eficiente en esta
regin.

Cmo entran los antgenos y patgenos al GALT?

Los patgenos pueden entrar activamente a travs de los
enterocitos clulas M o pueden ser muestreadas por
clulas dendrticas de la lmina propia que en
determinadas regiones del intestino son capaces de
extender sus dendritas al lmen. Las clulas M reciben ese
nombre del ingls Microfold, por la apariencia de
bolsillo que presentan hacia la lmina propia (del lado de
la membrana basal), en este espacio se concentran clulas
del sistema inmune que son capaces de incorporar
antgenos y acceder rpidamente a las placas de Peyer
adyacentes.
Las clulas M realizan transporte activo, mediante
pinocitosis y endositosis, pero el material incorporado no es dirigido a los lisosomas. No tienen actividad de clula
presentadora de antgeno.
La entrada paracelular (a travs de las uniones estrechas entre enterocitos) est limitada en condiciones de salud, en que
solo tienen acceso molculas pequeas.
Los procesos inflamatorios pueden alterar estas uniones, incrementando la permeabilidad intestinal que puede favorecer
la entrada de antgenos/patgenos por esa va.
En suma, en condiciones de salud hay muestreo de antgenos y microorganismos del lmen por las clulas M y clulas
dendrticas de lmina propria. En procesos inflamatorios de diverso origen, puede haber entrada masiva de antgenos por
la va paracelular y los microorganismos patgenos pueden acceder activamente por varias vas, dependiendo de su
capacidad invasiva y condiciones del epitelio. Las DC inician una respuesta adaptativa en las Placas de Peyer, en los
folculos linfoides dispersos o en los ganglios mesentricos, de la misma forma que ya hemos visto: Madura, se activa,
migra y podr activar linfocitos T.

Las DC que captan Ags transportado por las clulas M pueden iniciar la respuesta adaptativa en la Placa de Peyer
adyacente

El enterocito como sensor de peligro

La flora normal o bacterias comensales del intestino comprende aproximadamente unas 400 especies, distribuidas con
distinto perfil y nmero creciente desde el intestino delgado hasta el colon. Es sorprendente la comparacin entre el
13 14
nmero de clulas de un organismo (del orden de 10 ) y el nmero de bacterias de flora normal (10 ), o sea que superan
en la relacin 10:1 a las clulas del hospedador representando un ejemplo de simbiosis.
El sistema inmune no es indiferente a la flora normal, de hecho en condiciones de salud hay produccin de IgA especfica
contra ella, como mecanismo de contribuir a la homeostasis. El mecanismo por el cual se produce esta IgA, es an
controversial y hay diferencias entre el sistema humano y murino (de ratn). Es probable que en el humano el muestreo
de DC a travs del epitelio, y la presentacin por clulas dendrticas productoras de IL-10, pero no IL-12, sea uno de los
mecanismos implicados.
El intestino controla el nivel de microorganismos que colonizan, manteniendo un estado de inflamacin controlada en
condiciones de salud, que no interfiere con la funcin del rgano pero produce molculas efectoras que contribuyen a
mantener constante la carga de microorganismos.

Los enterocitos pueden iniciar una respuesta innata frente a seales de peligro

Los enterocitos tienen la potencialidad de reconocer patgenos cuando estos

han accedido activamente a la clula epitelial, y responder de diferentes
formas a las seales de peligro, por ejemplo mediante produccin de
quimioquinas, aumentando la expresin de molculas de MHC-II, etc.
Como vemos en la imagen, el enterocito tiene receptores de la respuesta
inmune innata, como TLR5, un Toll Like Receptor especfico para la flagelina.
El problema radica en que la microbiota puede presentar flagelos compuestos
por flagelina, entonces Cmo discrimina? Este receptor esta expresado en la
membrana basolateral solamente, y no en la membrana apical, lo cual hace
que pueda activarse solo si el patgeno ingres. Si estuviera en la cara apical, estara constantemente indicando
inflamacin gracias a la microbiota. Con esto podemos decir que el enterocito es una clula polarizada.
Tambin vemos que el enterocito puede producir IL-8 (una quimioquina proinflamatoria y quimiotctica para neutrfilos),
expresa molculas de estrs (MICA y MICB), y receptores para PAMPs como los Nod1 que son intracitoplasmticos (no
est al alcance de una bacteria de la microbiota).

Los patgenos interfieren con la barrera epitelial e inducen respuesta inflamatoria

Los patgenos cuentan con factores de virulencia, que les permiten acceder a las clulas
epiteliales venciendo los mecanismos de barrera existentes.
Los enterocitos, no son pasivos, ya que presentan receptores para PAMPS en la regin
basolateral o intracelularmente, activando diferentes vas inflamatorias.
La consecuencia principal de la infeccin es la induccin de una respuesta inflamatoria. La
produccin de citoquinas es clave para inducir la maduracin de las clulas dendrticas
residentes de la lmina propria, y las que son luego reclutadas, en la forma productora de IL-
12, en vez de IL-10.
En consecuencia, es posible la activacin de linfocitos Th1 en los rganos linfoides, en
contraste a la respuesta generada frente a microorganismos comensales.
Las principales especies de patgenos son Salmonella, Yersinia, Shigella, Listeria y
protozoarios como Entamoeba histoltica. Salmonella y Shigella se unen a las clulas M y son
translocadas a travs del epitelio, Salmonella adems causa apoptosis de las clulas M y es
capaz de infectar macrfagos y DC. Shigella, una vez traslocada a travs de las clulas M,
infecta enterocitos por la cara basal y es liberada en el citoplasma donde su LPS activa vas
inflamatorias a travs de receptores intracelulares.
Vemos en la imagen que una vez que ingresa la Salmonella typhimurium, puede interactuar
con el TLR5, lo cual desencadena una repsuesta inflamatoria.

Algunas bacterias interaccionan con receptores intracelulares que reconocen PAMPs

Algunos patgenos
como Shigella acceden
a la lmina propria a
travs de las clulas M,
son capaces de
infectar enterocitos
por la membrana basal
y rpidamente
diseminarse entre
enterocitos por la cara
lateral.
Algunos receptores
intracelulares (Nod)
reconocen PAMPS que activan cascadas de activacin que conducen a la produccin de citoquinas proinflamatorias,
como la IL-8, que reclutan ms clulas inflamatorias (quimioatrayente de neutrfilos), incluyendo las presentadoras (DC).
En los ganglios mesentricos o Placas de Peyer se activa la respuesta adaptativa. Las clulas efectoras (LT y plasmocitos)
retornan va sangunea a la lmina propria.
La respuesta adaptativa puede iniciarse en folculos linfoides, Placas de Peyer o ganglios mesentricos.
El microambiente intestinal favorece un cambio de clase a IgA como isotipo predominante.
Los plasmocitos diferenciados en los rganos linfoides locales, pasan al torrente sanguneo y vuelven a trasvasar
selectivamente al tejido mucoso infectado, a travs de un endotelio activado por la inflamacin.

El enterocito participa en el transporte de IgA

El transporte de IgA dimrica

secretada en el lmen por clulas
plasmticas es transportado al
lmen mediante un proceso de
transcitosis a travs de las clulas
epiteliales, que expresan en su cara
basal receptor para IgA (llamado
receptor Poli-Ig). El complejo
receptor IgA, es transportado en
vesculas hacia la cara apical del
enterocito, donde el receptor es
clivado y parte del receptor (4
dominios) permanecen junto con la
IgA, como componente secretor
en la IgA del lmen. El fragmento
residual del receptor no es
funcional y es degradado.
Esta IgA, en este tejido, se produce
como dmero, junto con la cadena J.
En la sangre tenemos otra IgA que
es monomrica. Adems, lo que
llamamos IgA secretora es el dmero
junto con los 4 dominios del
receptor Poli-Ig que quedan junto a
ella luego de la liberacin en la cara apical de la clula epitelial.

Exclusin de patgenos por la igA secretoria

El 80% de los plasmocitos del organismo estn en la

lmina propia, donde la inmunoglobulina que predomina
es la IgA. Adems, la IgA dimrica predomina en las
secreciones como leche materna, saliva, mucus, lgrimas.
La produccin diaria de IgA supera la de todas las otras
Inmunoglobulinas producidas en los otros rganos
linfoides (3-5 g/da/adulto de 70 Kg). El componente
secretorio le otorga gran resistencia al ataque
enzimtico y carcter muy hidroflico que favorece la
interaccin con el mucus (lo que favorece su
concentracin en la proximidad del epitelio). La
neutralizacin de patgenos en conjunto con las
propiedades aglutinantes del mucus y el peristaltismo
favorecen la eliminacin de los patgenos por el
intestino.

Los recin nacidos toman leche materna y de all reciben IgA, una inmunoglobulina muy resistente gracias al componente
secretor. Este recin nacido tiene anticuerpos, mayoritariamente IgG transferidos por la madre.
IgA es una molcula muy glicosilada, y tambin el componente secretor. Adems, el mucus est formado por ncleos de
protenas tambin muy glicosiladas, lo cual hace que haya una interaccin importante entre mucus e IgA, quedando sta
ltima retenida en el mucus, alargando as su vida media.
Conexin entre MALT y sistema linfoide perifrico
Los tejidos linfoides asociados a las mucosas estn integrados a los ganglios sistmicos a travs de cadenas ganglionares
que actan como nexo, las principales son los ganglios mesentricos que irrigan los intestinos y los ganglios
mediastnicos que drenan el aparato respiratorio.
Los antgenos provenientes de los epitelios mucosos son drenados por vasos linfticos aferentes, que finalizan en el
conducto torxico, donde se establece el nexo con la circulacin sangunea a nivel de la vena subclavia izquierda.

Una vez que completaron su desarrollo en el timo, los linfocitos entran en la corriente sangunea y al llegar a los rganos
linfoides perifricos, abandonan la circulacin a travs de las venas del alto endotelio (HEV) para migrar a travs del
rgano linfoide saliendo por los vasos linfticos eferentes y retornando a la circulacin general para repetir el patrn de
circulacin. El proceso contina hasta que el linfocito T virgen encuentra el antgeno para lo cual puede sobrevivir mucho
tiempo (aos). Si en este recorrido encuentra una clula presentadora que expresa un MHC-pptido que puede
reconocer, y el encuentro se da en un contexto inflamatorio (como el que presentara un ganglio que drena un sitio de
infeccin), entonces el linfocito virgen puede activarse proliferando y diferencindose en un linfocito efector. Estas
clulas efectoras cambian su fenotipo, y el encuentro posterior con el antgeno presentado por otras clulas les permite
activarse ms fcilmente y cumplir funciones efectoras ya sea activando o destruyendo las clula blanco. Ntese que los
linfocitos T efectores tienen como blanco de accin otras clulas del organismo y no al patgeno directamente.
El linfocito efector debe encontrar su destino, no queda residente. Cambia su patrn de migracin, pasa a la sangre,
circula por la sangre y trasvasa. Preferentemente va a volver al sitio en el cual se gener. Es decir, un linfocito efector que
se diferenci en la placa de Peyer va a volver al intestino, va a trasvasar por los HEV del sitio y va a quedar como residente
de la lmina propia, como clula efectora.

La selectividad de la zona a dnde va el linfocito T se basa en la expresin de distintas molculas de adhesin.

Todos los linfocitos vrgenes expresan L-selectina, que les permite acceder a todos los rganos linfoides, porque
Interacciona con diferentes cadenas glicosiladas de los diferentes receptores de homing en distintas localizaciones.
Si ese linfocito virgen se activa, por ejemplo en las Placas de Peyer, la L-selectina disminuye su expresin y aumenta la
expresin de otras molculas de adhesin.
Extravasacin de clulas efectoras
La migracin linfocitaria asegura que el nmero reducido de linfocitos que expresan el receptor especfico se encuentren
con el antgeno y tambin que los linfocitos diferenciados permanezcan en los sitios donde se requiere su accin (por
ejemplo linfocitos efectores en los sitios de inflamacin).
El proceso est gobernado por dos tipos de interacciones moleculares:
1. Molculas de adhesin en los linfocitos y clulas plasmticas, que interaccionan con sus receptores en los endotelios.
Cada tejido expresa un tipo exclusivo de estos receptores (homing receptors), aunque tambin existen receptores
comunes en todos los endotelios (ej. LFA-1 - ICAM).
2. Quimioquinas producidas por cada tejido particular que interaccionan con los receptores que expresan los linfocitos.

Dependiendo, del rgano linfoide donde cada linfocito se activ y diferenci, ser el repertorio de molculas de
adhesin y receptores para quimioquinas expresado.
As, un linfocito activado en el MALT, expresa receptores para quimioquinas producidas por tejidos asociados a mucosas,
y molculas de adhesin (47) que interaccionan con molculas expresadas en los pequeos vasos sanguneos y HEV
asociados a la lmina propria (MAdCAM-1) y otros tejidos asociados a mucosas.
Tema 11: Mecanismos efectores de la respuesta inmune
Clase 14, 6/11/2013

Los patgenos residen en varios compartimentos

La mayora de los individuos sobreviven a los patgenos, por la respuesta innata generada en las primeras horas de la
infeccin.
En esta clase se considerar cmo las clulas y molculas del sistema inmune actan en forma integrada, en las defensas
del organismo contra distinto tipo de patgenos, a travs de la expresin de mecanismos efectores que varan de
acuerdo a las caractersticas del agente infeccioso. El organismo se ve expuesto a una diversidad de patgenos, en
relacin a su va de entrada, formas de replicacin, mecanismos de virulencia que le permiten la invasin de las barreras
naturales e instalarse en diferentes tejidos y compartimentos extra e intracelulares.
La mayora de los patgenos tienen una fase de vida extracelular, los patgenos de vida intracitoplasmtica infectan en
conjunto un amplio espectro de clulas, mientras que los patgenos intravesiculares se limitan a la infeccin de
macrfagos.
El sitio anatmico condiciona el tipo de respuesta efectora eficiente. Prcticamente todos los patgenos tienen una
etapa de vida extracelular, en la que son vulnerables a molculas efectoras como los anticuerpos, mientras que en las
etapas intracelulares se requiere de clulas citotxicas para su erradicacin.
En las primeras horas de la infeccin, se ponen de manifiesto mecanismos efectores de la respuesta innata, cuyas
caractersticas dependen del patgeno y del sitio anatmico, y pueden en la mayora de los casos contener la
diseminacin del agente patgeno.
Cuando esto no ocurre, se requiere de los mecanismos de la respuesta adaptativa, que estarn condicionados por las
caractersticas de la respuesta innata. En estos casos, se requieren varios das para que ocurra la expansin clonal, y se
generen las clulas y molculas efectoras que efectivamente eliminen al patgeno.
Los patgenos residen en distintos compartimentos: Intracelular, extracelular, dentro del cual tenemos el vesicular y el
citosol. Los que conocemos intracelulares son los virus (nico patgeno que se reproduce en el citosol), bacterias (muy
pocas), protozoarios y micobacterias (capaces de reproducirse en el compartimiento vesicular ya que generan
mecanismos de evasin). Por otro lado, en el espacio extracelular conocemos los virus, bacterias, hongos y parsitos
(como helmintos).

Algunas infecciones requieren de la respuesta inmune adaptativa para ser controladas

En algunas circunstancias, se desarrolla la enfermedad por diversos mecanismos patognicos.
Los mamferos son susceptibles a una gran diversidad de patgenos, que por definicin son capaces de vencer los
mecanismos de barrera naturales del hospedado, llegan a colonizar el tejido y causan la enfermedad.
Una vez que los mecanismos innatos son superados por el patgeno, pueden desarrollarse una variedad de patologas,
que reflejan las distintas formas que poseen los patgenos para daar los tejidos.
Por ejemplo, algunos clostridum y cocos gram positivos, producen exotoxinas muy potentes, que tienen blanco de
accin en diferentes tejidos.
Las bacterias gram negativas tienen componentes de su pared con accin txica (endotoxinas), que acta sobre clulas
del sistema inmune causando sobreproduccin de mediadores inflamatorios, que puede llegar en condiciones extremas
de infeccin diseminada, a la muerte por shock endotxico. El LPS es la principal endotoxina que comparten las bacterias
gram negativas.
Otros patgenos, como las bacterias intracelulares que infectan macrfagos (Mycobacterias) y algunos parsitos (ej.
Schistosoma mansoni) permanecen en el hospedador por largos perodos y la respuesta inmune sostenida puede
ocasionar la enfermedad por sustitucin de tejido funcional de un rgano por tejido fibroso (ej. granulomas). En estos
casos, el precio que el organismos paga por evitar la diseminacin del patgeno, es la disfuncin del rgano blanco,
es decir que la patologa es provocada por la respuesta inmune.
En diversos grados para distintos patgenos, la respuesta mediada por clulas inflamatorias causa patologa debido a los
mediadores producidos; un ejemplo representativo es el virus sincitial respiratorio que causa bronquiolitis en nios
pequeos.
La patologa depende de los mecanismos de virulencia de los patgenos.

Los mecanismos efectores eficientes para cada patgeno dependen de sus caractersticas: localizacin, estructura
La ubicacin de cada patgeno condiciona a qu tipo de mecanismo efector ser vulnerable, es decir, cules son las
estrategias que usa el organismo para eliminar patgenos? depende de dnde se localiza.
La mayora de los patgenos tienen una fase extracelular, en la cual son susceptibles a la accin de los mecanismos
efectores directos de eliminacin del patgeno, mientras que en la etapa intracelular, la estrategia del sistema inmune
es eliminar la clula infectada (intentando que no se desperdigue su interior, es decir preferiblemente por apoptosis y no
por lisis) en el caso de patgenos de vida intravesicular (micobacterias) en los macrfagos potenciar al mximo sus
propias mecanismos microbicidas y as eliminar el patgeno, aunque en algunos casos se puede llegar a eliminar el
macrfago infectado. Estos seran los mecanismos generales, a continuacin vemos mecanismos y protagonistas en cada
caso.
Los mecanismos
Es difcil establecer cuando un patgeno es contenido por la respuesta innata, porque generalmente pasa inadvertida la
infeccin, sin generar sntomas o patologa. Como adems, las deficiencias en la respuesta innata son raras, es difcil
estudiar sus efectos en humanos. Pero estudios en ratones deficientes en clulas como neutrfilos y/ macrfagos
muestran infecciones incontroladas y de mayor magnitud que aquellos animales que presentan alguna deficiencia en
componentes de la inmunidad adaptativa.
El tipo de respuesta que ofrece proteccin frente a determinado patgeno, depende del ciclo de vida del mismo y sus
estrategias para su sobrevida en el hospedador.
En esta clase analizamos el rol de los mecanismos efectores de la respuesta adaptativa en el control de una infeccin
primaria, y ms adelante, se estudiar cmo es posible generar la misma la inmunidad protectiva mediante la vacunacin.
En la gran mayora de los casos los anticuerpos representan un mecanismo importante para controlar la infeccin, y
prcticamente todas las vacunas basan su eficacia en evitar la enfermedad mediante la induccin de anticuerpos
especficos. Frente a algunos patgenos de rpido crecimiento, es necesario disponer desde el inicio niveles altos de
anticuerpos para evitar la infeccin (por vacunacin o infeccin natural previa), tal es el caso de virus como el de la polio
que infectan las neuronas motoras y las destruyen si no son eliminados rpidamente y se evita su diseminacin.
Los anticuerpos y otras molculas solubles contribuyen a la eliminacin de patgenos por fagocitosis (opsonizacin). La
lisis por complemento, es importante para la eliminacin de bacterias siendo las gram negativas las ms susceptibles.
Para los patgenos extracelulares la neutralizacin, la fagocitosis, la lisis por complemento y la produccin de mediadores
con efectos txicos. Para eliminar las clulas infectadas intracelularmente, por ejemplo por un virus, el mecanismo
utilizado es la apoptosis. Todos estos mecanismos ya los vimos en innata. Las respuestas innata y adaptativa utilizan los
mismos mecanismos para eliminar a los patgenos, lo que vara son los protagonistas y que en la adaptativa se
incorporan algunos ms. Incluso la neutralizacin por anticuerpos, ya que en la respuesta innata estn presentes los
anticuerpos naturales, preformados. La mayor parte de los Ac del cuerpo ya estn preformados y son del tipo IgM.

Los protagonistas
Las clulas de respuesta innata que participan en la fase de respuesta innata, tambin participan en la fase de respuesta
adaptativa, aunque en este caso los mecanismos son ms eficientes por la accin de los anticuerpos especficos y por la
mxima induccin de mecanismos microbicidas de los macrfagos.
Los linfocitos T citotxicos participan exclusivamente en la fase de respuesta adaptativa, complementando los
mecanismos citotxicos mediados por las clulas NK.
Tanto en la innata como en la adaptativa tenemos participando clulas fagocticas (neutrfilos, macrfagos), clulas
citotxicas (NK y LT en los epitelios, los interepiteliales que vimos en la clase de mucosas que dijimos que estn en la
interface de la respuesta innata y adaptativa) y factores solubles (complemento y citoquinas, las cuales tambin podemos
considerar como efectoras gracias a su accin directa sobre el patgeno). Adems, en la adaptativa, se incorporan otros
elementos como los linfocitos TCD4+ helper, anticuerpos especficos y linfocitos citotxicos (CD8+).

Los mecanismos efectores que actan en la respuesta adaptativa son condicionados por la respuesta innata inducida por
cada tipo de patgeno
Cmo es que para cada tipo de patgeno el organismo sabe cmo actuar? Cmo se da esa seleccin que hace que el
organismo, desde que ingresa el patgeno, termine generando un tipo de mecanismo efector para uno o para otro? Es
informacin generada desde el patgeno. Cada tipo de patgeno requiere de un tipo de respuesta para ser eliminado
eficientemente. La seleccin del tipo de respuesta desarrollado, depende del patgeno, a travs de la respuesta innata
inducida, que a su vez depende de la va de entrada que condiciona las distintas poblaciones celulares y sus repertorios
de receptores para PAMPs. Hasta ahora hemos hablado de inflamacin, la generacin de citoquinas, quimioquinas, el
complemento pero todo eso cualitativamente puede ser distinto segn el tejido y segn el patgeno.

Inmunidad protectiva frente a diferentes grupos

de patgenos.

Distintos mecanismos efectores son usados para

eliminar a los patgenos durante las infecciones
primarias; en la mayora de los casos esos
mecanismos son los implicados en la proteccin
contra reinfecciones subsecuentes.
Es claro que grupos de patgenos, generan el
mismo tipo de respuestas efectoras, reflejando
las similitudes entre sus ciclos de vida.
Es importante resaltar que la inmunidad por
anticuerpos, est presente en todos los tipos de
patgenos, ya que los de vida intracelular tienen
una fase extracelular en la que son susceptibles a
los anticuerpos. En algunos casos una inmunidad protectiva eficiente requiere anticuerpos neutralizantes preformados,
como en el caso del virus de la polio que es capaz de infectar rpidamente y destruir neuronas motoras a menos que sea
inmediatamente neutralizado. La gran mayora de las vacunas existentes actualmente, basan su capacidad protectiva en
la generacin de anticuerpos que perduran por bastante tiempo luego de la vacunacin.
La tabla muestra bloques rojos, los cuales indican para distintos grupos de patgenos (bacterias extracelulares,
intracelulares, virus, protozoarios) los distintos tipos de anticuerpos o linfocitos T efectores que se activan y resultan
eficientes para su eliminacin. Indican que son respuestas protectivas que llegan a eliminar al patgeno.
Si observamos ms detalladamente cada caso, al observar las bacterias extracelulares vemos que requieren la generacin
de anticuerpos IgM e IgG para su eliminacin. Vemos adems que prcticamente todos los patgenos requieren de
anticuerpos para su eliminacin, incluso los virus, lo cual es notable debido a que son patgenos intracelulares. De hecho,
las vacunas virales que recibimos son en base a anticuerpos. Hay muy pocas vacunas que generen respuestas citotxicas.
Los linfocitos T citotxicos son muy importantes en virus para eliminar por apoptosis las clulas infectadas, pero algo que
llama la atencin en la columna de linfocitos es a nivel de los linfocitos T CD4+ actuando junto con los macrfagos para la
eliminacin de las bacterias intracelulares (micobacterias).

Las clulas y molculas efectoras se generan en los rganos linfoides y actan en el sitio de infeccin

La respuesta innata se desarrolla en los

tejidos perifricos. La clula dendrtica es la
principal clula con capacidad migratoria que
conduce la informacin desde la periferia a los
ganglios linfticos ms prximos, a travs de la
linfa y es considerada el principal vnculo entre
la respuesta innata y adaptativa. Durante este
proceso, la clula dendrtica sufre una
maduracin funcional, por la cual cambia el
perfil de expresin de receptores para
quimioquinas que dirigen su migracin: baja la
respuesta a quimiquinas inflamatorias y
aumenta a la expresin de MHC-II, pierde la
capacidad para endocitar antgenos y
concomitantemente adquiere mxima capacidad para activar linfocitos T vrgenes.
Por estas caractersticas las clulas dendrticas se consideran el principal vnculo entre la respuesta innata y adaptativa,
aunque otras clulas como los macrfagos pueden contribuir tambin.
Adems, a los ganglios pueden acceder patgenos y/ sus componentes directamente por la linfa que drena el tejido
infectado. En este caso, las clulas presentadoras residentes en el rgano linfoide hacen el procesamiento del antgeno y
activan linfocitos T.
En los ganglios ocurren los procesos de proliferacin y diferenciacin celular a clulas efectoras y memoria, adems de
las molculas efectoras, como los anticuerpos que llegan al sitio de infeccin por extravasacin selectiva en los endotelios
modificados en el sitio de infeccin.
A partir de una infeccin se da la respuesta innata, una inflamacin, lo cual tiene como consecuencia que DC migren,
maduras y activadas, hacia el ganglio ms cercano. All se da el proceso de activacin linfocitos T y B con sus consecuentes
proliferacin y diferenciacin a clulas efectoras y de memoria. Tanto los T como los B generados en el ganglio van a
migrar. Salen del ganglio por linfticos eferentes, pasan a la sangre por el conducto torxico (donde se junta la linfa con la
sangre) y trasvasan donde encuentren endotelios activados para la transvasacin. Los linfocitos efectores tienen
selectividad para trasvasar en estos sitios, como veremos a continuacin.

Los linfocitos vrgenes y efectores tienen distinto perfil de migracin.

La extravasacin selectiva de los linfocitos en los rganos linfoides y en los tejidos perifricos, se basa en la expresin
diferencial de molculas de adhesin, que son inducidas en los linfocitos durante el proceso de activacin y en los
endotelios perifricos, por seales inflamatorias. Las vnulas de alto endotelio (HEV) en los rganos linfoides presentan
constitutivamente molculas de adhesin implicadas en la transvasacin.
En todos los casos, la transvasacin implica el proceso de diapedesis, por el cual la clula migra entre compartimentos, y
requiere la activacin de metaloproteasas de matriz celular, en forma anloga a la transvasacin de los neutrfilos.
El linfocito virgen se diferencia de un linfocito efector en varias cosas, pero una muy importante es la capacidad de los
linfocitos efectores de trasvasar endotelios activados por inflamacin, ya que ellos adquirieron las molculas necesarias
en el proceso de activacin (proliferacin y diferenciacin). Los linfocitos vrgenes tienen un patrn de circulacin distinto
a los efectores; ellos trasvasas por las vnulas de alto endotelio (HEV), presentes en los rganos linfoides secundarios.

POBLACIN DE LINFOCITOS T

La generacin de linfocitos T efectores

Los linfocitos T CD8+ que emergen del timo estn predestinados a diferenciarse a clulas citotxicas si ocurre su
activacin en rganos linfoides secundarios. En el caso de los linfocitos T CD4+, el proceso es ms complejo y la
diferenciacin hacia clulas efectoras puede pasar por un estadio de clulas con un perfil denominado Th0 mixto y
terminar en clulas con un perfil Th1 Th2, caracterizadas por un perfil no solapado de citoquinas. En consecuencia,
estas poblaciones son funcionalmente diferentes y median distintos mecanismos efectores.
El hecho de que la diferenciacin derive hacia Th1 Th2, depende de las condiciones de la interaccin con la clula
presentadora, por ejemplo de las citoquinas involucradas en las primeras fases de la respuesta innata. El compartimento
en el cual se da la diferenciacin tambin es importante, as en el intestino en condiciones de salud, predomina la
diferenciacin a un perfil Th3.
A partir de los linfocitos T vrgenes, luego de la proliferacin, algunos se diferencian a clulas de memoria y otros a clulas
efectoras. Si estamos hablando de la poblacin de linfocitos T CD8, el linfocito efector es el Linfocito T CD8+ citotxico
(CTL). En el caso de los linfocitos T CD4, los tipos de efectores son Th1, Th2 y Th17; linfocitos colaboradores o helpers,
funcionalmente diferentes a los CTL ya que actan sobre otras clulas efectoras.

Cada tipo de clulas Th recluta y potencia la accin de otros tipos celulares, a travs de las citoquinas que producen
La poblacin T helper es sumamente heterognea en su funcin.
Los linfocitos Th actan sobre clulas efectoras (ya conocidas de la respuesta innata y linfocitos B). Como se puede
observar en la tabla ms adelante, los Th1 activan macrfagos y NK, los Th2 mastocitos y eosinfilos, y ambos (Th1 y Th2)
actan sobre los linfocitos B como colaboradores para llevarlos a la diferenciacin y que stos produzcan anticuerpos. Los
Th17 tienen como principal funcin reclutar neutrfilos, muy importantes para algunas infecciones bacterianas de
bacterias extracelulares.
En la tabla tambin podemos observar los grupos de patgenos sobre los cuales son ms eficientes uno u otro grupo de
Lh.
Comnmente a los Th1 y Th17 se los llama linfocito T inflamatorios, ya que actan macrfagos o neutrfilos.

Cada tipo de linfocito T efector expresa un conjunto particular de molculas efectoras

Las molculas que se inducen durante el proceso de diferenciacin de los linfocitos a su estadio efector estn
involucrados en la interaccin con las clulas infectada, en el caso de los linfocitos citotxicos y linfocitos Th1, mientras
que en los linfocitos Th2 y algunos Th1, se vinculan con la interaccin con los linfocitos B.
Las molculas denominadas FAS-Ligando y CD 40 ligando pertenecen a la misma familia de proteinas. Los grnulos
lticos son exclusivamente expresados en las clulas citotxicas (CD8+ y NK).
En todos los casos, los linfocitos efectores producen citoquinas caractersticas que interaccionan con receptores en las
clulas blanco; las mismas tienen efectos potenciadores sobre la citotoxicidad y los mecanismos microbicidas del
macrfago en el caso de LT CD8+ y LTh1 respectivamente. Sobre los linfocitos B, las citoquinas producidas por los Th
efectores, inducen su activacin, proliferacin y diferenciacin a plasmocitos, influyendo adems en el isotipo de los
anticuerpos generados.
Inicialmente, los linfocitos no producen las citoquinas, pero una vez que se diferenciaron, comienzan a producirlas. El INF
es el mediador especfico producido por CTL y Th1 exclusivamente. Si el linfocito se diferenci a un Th2, no producir
INF, sino que producir otro set de citoquinas, como la IL-4 y la IL-5.
A su vez, cuando el linfocito se diferencia a efector, cambian muchas protenas de las membranas de los linfocitos.
En particular, los linfocitos T citotxicos, al diferenciarse adquieren grnulos txicos. Es por esto que en muchas
bibliografas se les dibujan grnulos a los CTL. Es parte de su maquinaria para matar a las clulas infectadas. Estos
grnulos contienen algunos componentes que iremos viendo a lo largo de la clase.
Activacin de linfocitos T citotxicos (CTL)

Hay dos formas de activar un linfocito CD8 citotxico.

Los linfocitos TCD8+ vrgenes, son funcionalmente inactivos, deben activarse y diferenciarse para convertirse en clulas
con actividad citotxica. Debido a su alto potencial citotxico, tienen requerimientos ms estrictos para la activacin que
los LT CD4+.
Las clulas dendrticas, son particularmente importantes para estimular respuestas citotxicas frente a algunos virus que
no inducen la expresin de molculas coestimuladoras en otras APC. Muchos virus infectan clulas dendrticas inmaduras
a travs de receptores de superficie, y no son destruidos por ellas, expresando pptidos virales en mlculas de MHC I.
Adems, puede internalizar virus por fagocitosis o macropinocitosis, y de esta forma presentar pptidos virales en
molculas de MHC II.
En algunos casos, algunos de estos pptidos que ingresan a la va endosomal, tambin son presentados en molculas de
MHC-I, proceso denominado cross-priming, que es nico de las CD. Es un mecanismo importante para lograr inmunidad
frente a virus que no infectan clulas dendrticas.
En cambio, con otras clulas presentadoras con menor capacidad coestimuladora, se requiere la activacin de linfocitos
Th1 efectores sobre la misma clula presentadora. En este caso primero se induce la expresin de la molcula
coestimuladora (B7) y luego la produccin de IL-2 y expresin del receptor.
En clases anteriores vimos cmo se activa un linfocito T CD4. En el caso de T CD8 no es muy distinto, pero tiene mayores
requerimientos, dado que esta clula tiene mayor potencial destructivos, por lo tanto es necesario que no sea tan fcil de
activar, como forma de control.

PANEL DE LA IZQUIERDA. Si observamos la primera imagen vemos que cuando un linfocito T virgen se encuentra con una
DC infectada, previamente activada (es decir que expresa la molcula coestimuladora B7), la DC puede inducir
directamente la diferenciacin del Linfocito TCD8 a efector, que implica la produccin de IL-2 (autcrina). En este caso las
seales de activacin son:
1) El complejo TCR-MHC I-pptido, que proviene del virus que esta infectando
2) CD28-B7, accin de la molcula coestimuladora de la DC y CD28 del LT
3) IL2-rIL2, citoquina autcrina producida por el linfocito y la expresin completa del receptor por la misma
Este mecanismo no es muy distinto a lo que pasa con un TCD4. La nica diferencia es que en este caso, por tratarse de un
linfocito T con CD8, la presentacin del antgeno es con un MHC-I, mientras que en el caso de CD4 es con un MHC-II. Sin
embargo, esto no es lo que pasa la mayor parte de las veces, ya que las DC pueden no tener los niveles suficientes de B7.

PANEL DE LA DERECHA. La mayor parte de las veces se requiere adems la participacin de un linfocito Th1 efector como
colaborador a travs de MHC-II presentado por la APC (clula presentadora) que previamente fagocit al virus, para
activar al CD8 virgen. La APC tambin debe expresar suficiente B7 para activar al CD8. Es importante observar que esta DC
que hace de APC no solo fagocit el virus y lo expres en su MHC-II, sino que tambin fue infectada y expresa los pptidos
del virus presentes en su citosol mediante un MHC-I.
Este es el mecanismo que marca la diferencia con la activacin de TCD4.

Interacciones entre la clula blanco y LT CD8+ efectores

La interaccin inicial de un linfocito efector con
su clula blanco, involucra la interaccin entre
molculas de adhesin que posibilitan que el
linfocito T pueda realizar un muestreo de los
pptidos expresados en las molculas de MHC-I
(cuadrado 1 en imagen). En ausencia de
reconocimiento especfico, las clulas se
separan (cuadrado 2 en imagen); en presencia
de reconocimiento especfico, la fuerza de la
interaccin es mayor, el contacto celular es ms
prolongado y la clula T estimulada a liberar
sus molculas efectoras en la clula blanco
(cuadrado 3 en la imagen). Para esto, existe una
reorganizacin del citoesqueleto y de los
componentes citoplasmticos del linfocito T. La
reorganizacin permite que la liberacin de las
molculas efectoras se concentre en la zona del
contacto celular, evitando la diseminacin de
las mismas (ver imagen siguiente).
El fenmeno de polarizacin celular, tambin ocurre durante la liberacin de mediadores solubles producidos de novo,
como las citoquinas producidas por todos los linfocitos T. En todos los casos se obtiene entonces una accin selectiva
sobre la clula blanco.

Ensamblaje de perforinas en la membrana de la clula blanco

En la figura se muestra la zona de

contacto entre la clula blanco
(inferior) y el linfocito citotxico
(superior). Los grnulos lticos del
linfocito citotxico contienen varios
tipos de mediadores, los ms
conocidos son las granzimas y
perforinas. En la interface se da la
exocitosis de los componentes de
los grnulos lticos. Las perforinas
estn implicadas en la formacin de
los poros en la membrana de la
clula blanco, proceso que ocurre
por polimerizacin. Las granzimas
difunden a travs de los poros.
Perforinas: Ayuda a depositar el contenido de los grnulos en el citoplasma de la clula blanco
Granzimas: Serinproteasas, que activan la apoptosis una vez que se encuentran en el citoplasma de la clula blanco

Las perforinas son los principales mediadores solubles de los grnulos. Los monmeros de perforinas interaccionan con
fosfolpicos bicapa lipdica, y luego polimeriza para formar un poro similar al formado por polimerizacin del
componente C9 del complemento (MAC), con el que presentan gran homologa. Si bien nos trae el recuerdo del otro tipo
de poro que vimos por ensamblaje de polmeros, el MAC, tenemos que tener muy en cuenta que en este caso es sobre la
membrana de una clula blanco (clula propia), mientras que en el caso del MAC es sobre la membrana de una bacteria.
Adems en el caso del MAC, la muerte de la clula se da por lisis osmtica con un nmero de poros muy importante,
mientras que en el caso de los poros de Perforina la finalidad es la muerte por apoptosis, no se induce la lisis osmtica
sino que el fin del poro es la entrada de granzimas y otros componentes de los grnulos, los cuales desencadenan
cascadas enzimticas que llevan a la degradacin del ADN que es el primer evento que ocurre en la apoptosis.
Es un proceso dependiente de calcio. Para que exista muerte celular, se requiere de la accin de los dems componentes
de los grnulos.

Mecanismo de apoptosis inducida por grnulos citotxicos

Las granzimas son serinproteasas, por lo tanto aunque
contribuyen a la apoptosis no degradan el DNA directamente
sin activando una cascada de caspasas (cistein proteasas que
clivan la cadena carboxilo terminal de residuos de cido
asprtico), que culmina en la activacin de endonucleasas que
degradan el DNA rpidamente (antes de que ocurra lisis celular
por los poros). La granzima-B ingresa por los poros e interacciona
con enzimas (caspasas) que se encuentran como pro-enzimas,
inactivas. En la imagen la cascada enzimtica est muy
simplificada, pero en definitiva lo que importa es que es una
cascada proteoltica, se van activando protenas en el citosol
hasta que se activa una endonucleasa que puede ingresar al
ncleo y degradar con un patrn muy particular el ADN eucariota y del virus. Es muy parecido a lo que ocurre con una NK.
Algunos linfocitos citotxicos pueden ejercer su accin efectora en una forma independiente de los grnulos, mediante la
activacin de la cascada de las caspasas a travs de la interaccin de FAS-L con FAS expresada en la clula blanco,
activando cascadas similares pero a travs de los dominios intracelulares (dominios de muerte) de las molculas
efectoras (FAS-L).
Este mecanismo alternativo, es ms importante en la regulacin de la respuesta inmune y el control del nmero de
linfocitos en las etapas finales de la respuesta. (Lo vemos en la clase de regulacin, clase 15 tema 12)

Las clulas citotxicas inducen la muerte por apoptosis en

sus clulas blanco. Por qu?
En general las clulas pueden morir de dos formas. Frente
a traumatismos, privacin de oxgeno, agresiones qumicas
dao en la membrana por anticuerpos y complemento, la
clula muere por necrosis (por ejemplo lisis osmtica). Lo
primero que ocurre en ese caso es que la membrana
plasmtica pierde integridad, por lo tanto si hay
diseminacin del contenido intracelular. Recordando el
concepto de DAMPs, vemos que en el caso de necrosis se
generaran DAMPs, lo que para a lugar a una inflamacin.
La finalidad de los linfocitos citotxicos no es generar
inflamacin, sino que estn en bsqueda de la eliminacin
de tal.
La otra forma de muerte celular es la apoptosis muerte
celular programada, que es un proceso activo que ocurre
en todos los tejidos de los organismos multicelulares y es
desencadenada por estmulos externos a la clula las seales pueden provenir de la propia clula (vas intrnsecas). En
relacin a los mecanismos efectores de la respuesta inmune, la apoptosis es inducida por clulas citotxicas y puede
involucrar distintas molculas de membrana y mediadores solubles.
Los cambios ms tempranos que ocurren en la apoptosis, son la fragmentacin del ncleo, cambios en la morfologa
celular, degradacin del DNA con un patrn tpico de fragmentos de 200 pares de bases, mediante nucleasas que clivan
el DNA entre los nucleosomas. La membrana celular no sufre ruptura, sino que se reordena formando los cuerpos
apoptticos. No hay escape de DAMPs, no hay inflamacin.
La muerte celular por apoptosis es un proceso activo, que lleva a la muerte celular sin generacin de seales de peligro
para el organismo, debido a que no hay diseminacin del contenido intracelular, ya que la desintegracin del material
gentico precede al dao a la membrana celular, que en cambio forma cuerpos apoptticos. Una clula en apoptosis
adems, expresa molculas de membrana que no estn expuestas en las clulas viables y participan en los procesos de
eliminacin de las mismas por clulas fagocticas (macrfagos tisulares).

LTh efectores que potencian la accin de clulas fagocticas

Una vez en los tejidos infectados, los linfocitos Th1 Th17 (preferentemente
diferenciados al inicio), producen citoquinas que actan sobre otras clulas,
que participan directa indirectamente en la eliminacin del patgeno. Los
linfocitos Th1 contribuyen a la activacin de los macrfagos, potenciando su
accin microbicida. Los linfocitos Th17 producen IL17 que puede
interaccionar con su receptor especfico distribuido en una variedad de
clulas de los tejidos (epiteliales, keratinocitos, fibroblastos); estas clulas
producen quimioquinas y citoquinas, que atraen al sitio de infeccin
neutrfilos y tienen efectos sobre la mdula sea para aumentar el recuento
de leucocitos.
En ambos casos hablamos de linfocitos T efectores colaboradores que
reclutan clulas fagocticas.
Macrfagos: fundamental para eliminacin de bacterias intracelulares.
Neutrfilos: fundamental para eliminacin de bacterias extracelulares.

El neutrfilo es el fagocito ms potente para eliminar bacterias extracelulares

La fagocitosis es el proceso por el cual una clula internaliza una partcula,
mediante la participacin de receptores que inducen la polimerizacin de
actina. Los neutrfilos cuentan con varios tipos de grnulos, denominados
azurfilos primarios y secundarios, que se fusionan con el fagolisosoma
que contiene a la partcula ingerida.
Los grnulos en conjunto contienen proteasas (elastasa, catepsina), lisozimas (enzimas que hidrolizan pptidoglicanos de
las paredes bacterianas), pptidos antimicrobianos (defensinas), y componentes para el ensamblaje de la enzima NADPH
oxidasa, que conduce a la formacin de radicales libres del oxgeno (relacionado con el estallido respiratorio). Cuando un
neutrfilo se activa se fusiona el fagosoma con alguno de los grnulos presentes en el citoplasma del neutrfilo.
Son clulas fagocticas nicas por la cantidad de mecanismos microbicidas constitutivos que poseen; en contraste los
macrfagos no poseen grnulos y requieren del estmulo del IFN- para exhibir al mximo sus propiedades microbicidas.
Sin el efecto potenciador del IFN- son menos potentes que los neutrfilos.
En la fase de respuesta adaptativa, las clulas Th17 a travs de los efectos de la IL-17 (principal citoquina secretada por
esta poblacin) sobre varios tipos celulares inducen molculas quimiotcticas para los neutrfilos potenciando su accin
en la respuesta a bacterias extracelulares que requieren mecanismos fagocticos potentes.

En la respuesta adaptativa, los macrfagos son activados muy eficientemente por los linfocitos Th1 efectores

Algunos microorganismos como las micobacterias (agente

causal de la tuberculosis y la lepra), son patgenos
intracelulares que sobreviven en los fagosomas de los
macrfagos, inhibiendo la fusin de los lisosomas evitando
la acidificacin de las vesculas que es requerido para la
activacin de las proteasas lisosomales.
Los linfocitos Th1 activan los macrfagos volvindolos
altamente microbicidas. Cuando una clula efectora Th1 hace
contacto con un macrfago infectado -mediante el
reconocimiento de un pptido del patgeno expresado en
molculas de MHC II- el linfocito Th1 es inducido a secretar
IFN- y a expresar la molcula CD40 L.
En general los macrfagos requieren dos seales para
activarse, el IFN- y una segunda seal que sensibiliza al
macrfago para responder a esta citoquina. Los linfocitos Th1
pueden proveer ambas seales. La fuente de IFN- puede
adems proceder de otras clulas como los linfocitos T
citotxicos que pueden activar macrfagos que presentan
antgenos derivados del citosol.
Los macrfagos tambin se vuelven ms sensibles a la
activacin por IFN por los efectos del LPS bacteriano del
TNF-, que es una citoquina autcrina producida por el
macrfago activado. Los macrfagos activados sufren
cambios que aumentan la efectividad de los mecanismos
microbicidas y amplifican la respuesta inmune.
Los macrfagos activados aumentan la expresin de CD40 y
receptores para TNF, y son estimulados a secretar TNF- que
representa un estmulo autcrino que sinergiza con el IFN-.
En particular, la produccin de xido ntrico (NO) y radicales
libres del oxgeno son inducidos por la activacin de LTh1.

En los macrfagos activados por Th1 se inducen enzimas implicadas en la generacin de sustancias microbicidas: ROIs
(intermediarios reactivos del oxgeno) y xido ntrico

La principal funcin efectora de las clulas fagocticas,

como los macrfagos y los neutrfilos es destruir
microorganismos por fusin de los lisosomas con los
fagosomas, y por la produccin de sustancias
microbicidas. En los fagolisosomas, las enzimas
proteolticas almacenadas en los lisosomas se activan y
participan en la destruccin de los microorganismos.
El segundo grupo de componentes efectores, se genera
a partir del oxgeno molecular, que es transformado a
formas muy reactivas, con un potencial oxidativo muy
alto (intermediarios reactivos del oxgeno, ROIs). El
principal sistema generador de ROIs, es la NADPH
oxidasa, una enzima formada por varias subunidades
que se ensambla en la membrana plasmtica de las
clulas activadas y en la membrana de los fagolisosomas. El proceso por el cual se generan los ROIs se llama estallido
respiratorio.
Los macrfagos, tienen adems otro sistema de generacin de ROIs, denominado sintetasa inducible del xido ntrico
(iNOs), una enzima citoslica ausente en las clulas en reposo, pero que es inducida por estmulos como el LPS en
combinacin con IFN-. La enzima cataliza la conversin de arginina y oxgeno en citrulina y gas xido ntrico, que
difunde. A su vez, el xido ntrico puede reaccionar con intermediarios del oxgeno generados en el estallido respiratorio y
producir sustancias ms potentes, como peroxinitritos que pueden destruir patgenos. Este mecanismo es especfico de
los macrfagos. Esto podra hacernos dudar de qu clula fagoctica es ms potente. Si bien las especies reactivas del
nitrgeno son ms txicas que las del oxgeno, decimos que los neutrfilos son ms potentes que los macrfagos ya que
actan igual en la respuesta innata y en la adaptativa, y comienzan a actuar muy rpido produciendo el estallido
respiratorio. Recordemos que al comenzar la clase se mencion que la mayora de las infecciones se eliminan en la etapa
de la respuesta innata, y all los protagonistas fagocticos son los neutrfilos. Sin embargo, el macrfago, residente en los
tejidos, para poder producir las ERN debe primero ser activado por un Th1, lo cual lleva un tiempo. Pero debemos tener
en cuenta que ambos son muy activos.
Todos estos componentes, enzimas, ROIs y xido ntrico, son potencialmente dainos para los tejidos propios, ya que su
potencial oxidativo no es especfico para las estructuras de los patgenos, y pueden actuar tambin sobre membranas y
componentes de la matriz extracelular. El organismo cuenta con inhibidores naturales para contrareestar estos efectos.
Los abcesos observados en algunas infecciones, representan tejido del hospedador destruido, junto con restos celulares
que incluyen a las clulas efectoras muertas, principalmente neutrfilos.

Algunos linfocitos Th1 pueden inducir apoptosis en macrfagos infectados

Adems de los productos antimicrobianos que actan en los compartimentos intra y extracelular, se producen pptidos
antimicrobianos y proteasas que pueden actuar sobre algunos patgenos extracelulares.
Algunos Th1 son capaces de eliminar por apoptosis al macrfago infectado por un mecanismo distinto al del CD8, es decir
que no es mediante grnulos. Luego un macrfago fresco, no infectado, puede fagocitar al macrfago crnicamente
infectado.

POBLACIN DE LINFOCITOS B

Algunos linfocitos Th (Th2 y Th1) tienen afinidad por las zonas foliculares de los ganglios y son eficientes en la activacin
de linfocitos B
El perfil de citoquinas que producen condiciona el isotipo producido por las clulas.
En los rganos linfoides se generan varios tipos de clulas efectoras, que actuarn por distintos mecanismos en el sitio de
infeccin en el propio rgano linfoide, como es el caso de la activacin y diferenciacin de linfocitos B para
produccin de anticuerpos, que posteriormente actuarn en el sitio de infeccin.
Acabamos de ver que los Th1 tienen esa funcin exclusiva sobre los macrfagos muy importante para la eliminacin de
patgenos, pero, adems tambin algunos Th1 cooperan con los linfocitos B para la produccin de anticuerpos. Este rol
de los Th1 queda muy subestimado y por lo general este mecanismo se atribuye nicamente a los Th2, pero no es as; el
motivo es que es casi la nica funcin de los Th2.

Las citoquinas condicionan el cambio de clase de los anticuerpos

Qu es lo que hace que se

produzca determinado tipo de Ac
frente a un patgeno o frente a
otro? La participacin de distintas
poblaciones de linfocitos T
colaboradores que excretan
distintos perfiles de citoquinas.
Cuando los que colaboran son los
linfocitos del tipo Th1, los
anticuerpos producidos son los del
isotipo IgG1 e IgG3 en humanos.
Dicho cambio de clase se da porque
en el contacto con el linfocito B se producen las citoquinas IL-2 e IFN. Estos anticuerpos son opsonizantes y activadores
del complemento, por lo tanto, para infecciones de bacterias y virus al cuerpo le interesa generarlos, lo que indica que no
es menor el rol de los Th1 en la colaboracin con linfocitos B.
Los Th2 en cambio inducen el cambio de clase a IgE, anticuerpos que ms adelante vemos en que situaciones son
importantes.
Los Th de las mucosas son colaboradores en el cambio de clase a IgA secretoria, gracias a la TGF.
Con los linfocitos B que se activan de forma T independiente en humanos se producen principalmente las IgM e IgG2.
Anticuerpos en la respuesta efectora

- Neutralizacin de toxinas
- Bloqueo de la interaccin de un virus o bacteria con la clula blanco
- Bloqueo de la fusin de la cubierta viral con la membrana plasmtica de la clula blanco.
Muchas bacterias extracelulares secretan toxinas que daan los tejidos o alteran el funcionamiento de clulas del
hospedador. Para ejercer el efecto biolgico la toxina debe interactuar especficamente con una molcula que acta
como receptor en la superficie celular. Los anticuerpos que se unen al sitio de unin al receptor en la toxina, pueden
prevenir su unin a la clula blanco y por lo tanto protegerla de los efectos nocivos.
Otro tipo de toxinas, son las endotoxinas, componentes de la pared bacteriana como el LPS, y las mismas son liberadas al
medio cuando las bacterias mueren. La accin patognica de estas toxinas es ms compleja, porque las clulas del
sistema inmune poseen receptores que interaccionan con ellas.
Los virus infectan clulas por unin a un receptor celular particular, generalmente una protena especfica del tejido al
que infectan. Muchas bacterias tienen molculas de superficie que facilitan su unin a la superficie celular,
frecuentemente en los epitelios mucosas. La adherencia es crtica para su infectividad, y de igual forma que con los virus
los anticuerpos pueden evitar la invasin.
La afinidad de los anticuerpos, es muy importante para definir la eficiencia del efecto neutralizante.
Se suele hacer el ordenamiento general IgA > IgG > IgM, debido la gran cantidad de IgA secretoria que se produce en el
intestino por ejemplo, pero todas pueden bloquear, es decir, interactuar con molculas de patgeno que tienen que ver
con su interaccin con el hospedador. Al bloquear dichas molculas con un Ac se inhibe el ingreso del patgeno (o toxina)
a una clula o su interaccin. El ordenamiento se debe tambin a que si se quiere neutralizar una toxina que ya est en el
tejido las concentraciones de IgM en dicho tejido son mucho menores a las de IgA, debido a la naturaleza pentamrica de
la IgM lo que le impide la difusin.

Activacin de la va clsica del complemento

La activacin de la va clsica del

complemento se inicia por la
unin del componente C1q
(normalmente en el plasma) a
un anticuerpo que est unido a
una superficie (ej. una pared
bacteriana).
Una molcula de IgM, adopta la
conformacin de araa
cuando est interaccionando
con mltiples eptopes
expresados en la superficie del
patgeno. Esta conformacin
posibilita la interaccin con el
componente C1q, en la regin
Fc del anticuerpo. La unin con
C1q activa al componente C1r
asociado, que cliva a la
proenzima C1s, generando una
serin proteasa que inicia la cascada clsica del complemento.
En el caso de la IgG, se requieren por lo menos dos molculas de anticuerpo interactuando en la superficie, para activar
la cascada.
C1q, una protena que en conformacin nos recuerda a la MBL, pero asociada con subunidades menores.

C4b2a = convertasa de C3.

Todas las vas de activacin del complemento concluyen en el depsito de MAC, solo que las convertasas de la va de las
lectinas y de la clsica son C4b2a.
Como la va clsica tambin deposita C3b va a generar como consecuencia la activacin de la va alternativa.

Mecanismos efectores que involucran la interaccin AC receptor para Fc en la clula efectora

Los anticuerpos actan como sondas especficas, dirigiendo la accin efectora de diferentes tipos de clulas que
actan sobre el patgeno sobre una clula propia infectada o alterada.
Ya vimos la neutralizacin y la activacin de la va clsica del complemento. Lo que nos queda por ver es que los Ac
dirigen la accin de clulas de la respuesta innata efectoras. Cmo? Mediante los receptores para algunas
inmunoglobulinas (ms especficamente la regin Fc de ellas) que tienen estas clulas.
Los receptores para la regin Fc de las inmunoglobulinas median la interaccin entre la clula efectora y el blanco.
Este grupo de mecanismos efectores se definen como Citotoxicidad mediada por anticuerpos (abreviado en ingls como
ADCC), aunque algunos autores reservan esta denominacin al citotoxicidad por clulas NK.
Si recordamos la tabla que vimos antes en esta clase, la cual indica para distintos grupos de patgenos los distintos tipos
de anticuerpos o linfocitos T efectores que se activan y resultan eficientes para su eliminacin, nos llam la atencin que
para la eliminacin de virus se requiera de anticuerpos IgG. An cuando el virus ya est en la clula blanco los anticuerpos
son muy importantes, ya que estos dirigen la accin de las clulas citotxicas hacia la clula infectada.

Distribucin celular de los principales receptores para Fc

Los mecanismos efectores dependen

del tipo celular implicado. Las
clulas fagocticas macrfagos y
neutrfilos, son capaces de destruir
patgenos opsonizados por
anticuerpos por los mismos
mecanismos microbicidas que cuando
la fagocitosis ocurre a travs de
receptores para PAMPS. De igual
forma, la eliminacin de clulas
infectadas por ADCC ocurre
apoptosis, como en la fase de
respuesta innata.
Los eosinfilos y mastocitos, liberan
el contenido de los grnulos citoplasmticos al activarse por el entrecruzamiento de IgE de superficie; los mediadores
resultan txicos para distintos tipos de patgenos, por ejemplo la protena bsica mayor contenida en los grnulos de los
eosinfilos tiene efecto txico sobre algunos helmintos. Algunos de los mediadores liberados, por ejemplo histamina,
actan potenciando la respuesta inflamatoria y son causantes de daos sobre el hospedador cuando el
entrecruzamiento de IgE es inducido por ejemplo por agentes inocuos como el plen, un inductor de respuestas alrgicas
en individuos susceptibles.

Las infecciones por helmintos inducen respuestas Th2 protectivas. Para qu sirve la IgE?
Los linfocitos Th2 mediante la produccin de un set de citoquinas que se inducen en forma coordinada, favorecen la
eliminacin de helmintos que habitan en las barreras intestinales son capaces de invadir y migrar a los tejidos. Los
linfocitos Th2 efectores colaboran con los linfocitos B. Al activarse producen todo un set de citoquinas (IL-5 , IL-13 , IL-3 ,
IL-9 , IL-4) y algunas de ellas tienen que ver con el cambio de clase a IgE y otras tienen efectos directos sobre, por
ejemplo, un epitelio intestinal. Las citoquinas actan en conjunto favoreciendo una serie de acciones que contribuyen a la
eliminacin de estos patgenos: actan promoviendo la produccin de mucus por las clulas de Goblet, estimulando la
contraccin de los msculos intestinales, aumentando el recambio de las clulas epiteliales y por lo tanto eliminando
del epitelio a los parsitos que mantienen un contacto directo con la pared intestinal (mayora de helmintos viven
adheridos a las clulas epiteliales).
Adems, reclutan clulas que actan a travs de receptores para IgE y cuya activacin induce la liberacin de sus
grnulos que contienen molculas efectoras, particularmente txicas para helmintos que migran (ej. protena bsica
mayor del eosinfilo). Algunas citoquinas son quimiotcticas para eosinfilos y mastocitos, que son las clulas que tienen
receptores para IgE. Una de estas clulas con receptores para IgE e IgE unida (mayora parte de la IgE del organismo esta
siempre unida a estas clulas) degranulan. En los grnulos de los mastocitos tenemos por ejemplo histamina, la cual lleva
a la bronco constriccin: broncoespasmo. Los eosinfilos tienen los que se llama protena bsica mayor, por lo que si se
da la interaccin eosinfilo-IgE-helminto la clula libera hacia el exterior dicha protena que termina eliminando al
patgeno.
Los alrgicos producen muchas IgE contra cosas inocuas contra las que no debera producir.

Citotoxicidad mediada por anticuerpos

Las NK tienen receptores para Fc pero no para cualquier anticuerpo sino que para IgG1 e IgG3. Cmo participan los Ac
en la eliminacin de una clula infectada por virus? Una clula infectada por virus podr expresar pptidos en su
molcula de MHC-I y as los linfocitos T citotxicos la pueden eliminar. Pero a su vez, dependiendo del virus y de la forma
de entrada, pueden quedar en la membrana de la clula hospedera componentes virales, como por ejemplo
componentes de la cpside por la forma de entrada del virus. En definitiva esa clula esta mostrando componentes
virales en la membrana, no mediante un MHC. Estos componentes pueden ser reconocidos por Ac IgG1 e IgG3 especficos
contra ellos. Dado que las NK tienen receptores Fc para dichos Ac, se da la interaccin con posterior desenlace de
mecanismo de apoptosis similar al que ocurre cuando la NK es activada en el marco de la protena innata. NK tambin
tiene grnulos.
Esto se da con IgG1 e IgG3 formados, por lo cual tiene que haber habido una respuesta adaptativa.
Mecanismos efectores durante las infecciones virales agudas

Durante el curso de una infeccin aguda, hay

activacin de distintos mecanismos efectores a lo
largo del tiempo, en secuencias reguladas por las
propias clulas protagonistas en la respuesta innata.
En las primeras instancias ocurre la generacin de
interferontes tipo 1 (IFN-, IFN-), luego las NK
actuando en su forma de respuesta innata, con
receptores de innata.
Luego cuando ya ha pasado por lo menos una semana,
empiezan a estar en la circulacin los linfocitos T
citotxicos efectores, linfocitos B produciendo
anticuerpos.
La curva representada en amarillo es la curva de
viremia muestra cmo el virus termina siendo
eliminado.
Adems en la grfica se puede observar una de las
ventajas que nos deja la respuesta adaptativa:
generacin de linfocitos de memoria.
Recordar que estos linfocitos de memoria se activaran
ms rpido, pero no significa que ya estn activados,
deben pasar por ese proceso antes de poder actuar.

Luego de la activacin de linfocitos efectores y produccin de anticuerpos, hay retorno al sitio de infeccin de LT
citotxicos efectores y anticuerpos que potencian y refuerzan a los mecanismos ya existentes.
Tema 12: Regulacin de la respuesta inmune
Clase 15, 8/11/2013

Qu entendemos por regulacin de la respuesta inmune?

- La induccin de mecanismos efectores ptimos para cada tipo de patgeno.
- La autoeliminacin y finalizacin de la respuesta inmune
- El control de la reactividad contra lo propio

La importancia de los mecanismos que regulan la iniciacin, la magnitud y el tipo de respuesta inmune se pone en
evidencia en determinadas situaciones patolgicas, debidas a:
-Respuestas inmunes inapropiadas desencadenadas contra componentes propios (ej. esclerosis mltiple, lupus
eritematoso sistmico, artritis reumatoidea) estructuras exgenas (ej. alergias).
-Inmunodeficiencias, primarias (ej. deficiencia selectiva de IgA, de factores del complemento, etc.) o adquiridas (HIV),
que condicionan la vida del individuo al ser muy susceptible a agentes infecciosos de distinto tipo segn los mecanismos
involucrados.

Las preguntas a responder:

- La induccin de mecanismos efectores ptimos para cada tipo de patgeno. Cmo se regula el tipo y magnitud de la
respuesta inmune?
- La autoeliminacin y finalizacin de la respuesta inmune. Cmo se vuelve al estado inicial luego de una respuesta
inmune?
- El control de la reactividad contra lo propio. Cmo se controla la respuesta contra componentes propios?

La regulacin del SI est coordinada con otros mecanismos de homeostasis

El sistema inmune est vinculado

con el sistema nervioso y
autcrino a travs de
mediadores solubles:
neuropptidos, hormonas y
citoquinas. En este curso, nos
limitamos a analizar la regulacin
de la respuesta inmune, pero sin
perder de vista el escenario ms
amplio de regulacin en el que
participa. El sistema inmune se
relaciona con estos sistemas y
con otros ms, y los mecanismos
de regulacin son integrados.
Estos sistemas se comunican
entre s a travs de mediadores
solubles, que en el caso del
sistema inmune, el grupo de
mediadores solubles clsicos son
las citoquinas. A su vez, los
sistemas nervioso y endcrino
tienen sus propias molculas como neurotransmisores y hormonas.
Cmo se conecta el sistema inmune con el nervioso?
El sistema nervioso participa en la regulacin de la inflamacin en varios puntos. Las neuronas sensitivas del dolor liberan
neuropptidos como la sustancia P que induce la produccin de mediadores inflamatorios por clulas del sistema
inmune innato como los mastocitos. Por el contrario, la acetilcolina liberada por neuronas del nervio vago acta va
receptores nicotnicos de acetilcolina expresados en los macrfagos tisulares para inhibir la produccion de TNF-a e IL-1.
Esto puede explicar alguno de los efectos beneficiosos de la acupuntura sobre el dolor de origen inflamatorio.
Por otra parte a travs de la hipfisis se regula la produccin de hormonas producidas por glndulas suprarenales que
actan inhibiendo la inflamacin a travs de glucocorticoides.
La disciplina que busca integrar todo estos sistemas es la Psiconeuroendocrinoimunologa, lo que nos muestra que es muy
complejo desconectarlos.
Las citoquinas y quimioquinas son mediadores centrales en la orquestacin y regulacin de la respuesta

Las citoquinas son polipptidos pequeos (20 KDa) que actan sobre
receptores especficos. Representan un grupo estructuralmente diverso,
pero pueden sintetizarse algunas de sus propiedades comunes:
Son producidas por clulas de respuesta innata, linfocitos y otros tipos
celulares (ej. clulas endoteliales, clulas epiteliales) en determinadas
condiciones. Son secretadas en forma transitoria y autolimitada en
respuesta a estmulos derivados de patgenos endgenos (por ej. otras citoquinas).
No son almacenadas, sino que son sintetizadas generalmente por la transcripcin gnica inducida por la activacin
celular. La transcripcin es transitoria y los mensajeros codificantes para la mayora de las citoquinas son muy inestables.
Actan en concentraciones muy bajas, ya que interaccionan con sus receptores especficos con muy alta afinidad.
Participan en todas las fases de la respuesta inmune (de induccin, efectora) y tambin en el desarrollo de las clulas
hematopoyticas.
Pueden actuar sobre la misma clula productora o sobre
otro/s tipo/s celular/es: accin autcrina y parcrina
respectivamente.

En algunos casos, la citoquina en circulacin (cuando es

producida en grandes cantidades), pueden tener efectos
biolgicos sobre tejidos distantes (accin parcrina sistmica).
Las consecuencias de la accin de las citoquinas sobre las clulas blanco son muy diversas, controlan el crecimiento,
diferenciacin, proliferacin.
Muchas citoquinas se unen a receptores especficos que utilizan vas de sealizacin rpidas para inducir cambios en la
expresin gnica en el ncleo, la transcripcin de genes comienza rpidamente luego de la interaccin en la mayora de
las citoquinas. Una excepcin lo representan las quimioquinas, que al interactura con sus receptores inducen la migracin
celular sin la expresin de nuevos genes.

Las citoquinas ejercen su accin interaccionando con receptores especficos en la membrana de la clula blanco

Los receptores para la mayora de

las citoquinas consisten en varias
subunidades que al interaccionar
con el ligando especfico se
dimerizan, aproximan sus dominios
intracitoplasmticos permitiendo
interacciones moleculares
necesarias para la generacin de
factores de transcripcin que
traslocan al ncleo e inician la
transcripcin de nuevos genes.
Los dominios intracelulares
interaccionan con distintas
proteinas citoplasmticas, activando
cascadas de sealizacin que
pueden implicar o no la
transcripcin de nuevos genes
mediante cascadas que llevan a la
activacin de factores de
transcripcin. Los receptores en
general son de mxima seguridad.
Tienen dos subunidades en la membrana plasmtica de la clula, disociadas. La asociacin (acercamiento de molculas)
se da cuando interacciona con citoquinas. De la imagen de la izquierda, las subunidades verde y amarilla son molculas
adaptadoras que estn inactivas en el citosol y que gracias a los cambios conformacionales logran interactuar. La mayora
de las citoquinas culminan activando factores de transcripcin, es decir que molculas que estn inactivas en el citosol
que pasan a traslocar al ncleo para activar genes (imagen izq.)
Las quimioquinas (citoquinas quimiotcticas) no actan de esta manera. Los receptores no estn relacionados a la
activacin de factores de transcripcin (imagen der.), sino que tienen que ver con cascadas enzimticas. Para que una
quimioquina tenga efecto debe actuar sobre el citoesqueleto de la clula receptora para que migre. TNF es una citoquina
relacionada con la apoptosis tambin sealiza de esta manera y no por factores de transcripcin.
Muchas citoquinas son reconocidas por receptores estructuralmente relacionados

Los receptores para algunas citoquinas que tienen

efectos relacionados, interaccionan con
receptores que comparten subunidades. Por
ejemplo la familia de citoquinas que se muestran
en la figura tienen efectos sobre linfocitos,
actuando cada una sobre su receptor especfico,
pero estos comparten cadenas (cadena ).
Las citoquinas tienen receptores que son dimeros
o trmeros. Por ejemplo, en la imagen vemos un
bloque de citoquinas en las que todas tienen
distintos efectos sobre linfocitos T o B. Todas
tienen receptores que comparten cadenas. Los efectos de estas citoquinas estn vinculados en el sentido de sobre qu
clula actan. Sera como una especie de economa: utilizar las mismas cadenas que segn como se ensamblen sern
receptores de distintas citoquinas.

Cmo actan las citoquinas?

La accin pleiotrpica de las citoquinas es la capacidad de las mismas de actuar sobre distintos tipos celulares, lo que le
permite mediar diversos efectos biolgicos.
Esta propiedad es la principal limitante que
enfrenta la aplicacin clnica de las citoquinas
para el tratamiento de enfermedades, ya que el
uso de una citoquina por uno de sus efectos
biolgicos, seguramente se acompaa de
efectos colaterales debido a la accin sobre
otros tejidos.

Distintas citoquinas pueden compartir efectos

biolgicos sobre otras clulas; estos efectos
redundantes explican que el uso de
antagonistas para una citoquina dada no sea
suficiente en algunos casos para bloquear su
accin, debido a que hay efectos
compensatorios por otras.

Dos citoquinas pueden actuar antagonizando

mutuamente sus acciones biolgicas, pueden
producir efectos aditivos en algunos casos los
efectos superan a lo esperado y se trata de
efectos sinrgicos.

Estos efectos de regulacin entre citoquinas se

observa in vivo durante el curso de una respuesta
inmune, donde ocurren cascadas de
retroalimentacin positiva y negativa.
Cmo se regula el tipo y magnitud de la respuesta inmune?
El tipo de respuesta innata que se monta contra un
patgeno est determinado por sus PAMPs.
Cada tipo de patgeno expresa un patrn particular de
PAMPs y molculas activadoras del complemento. La
activacin a travs de diferentes receptores, condiciona
el perfil de molculas con actividad quimiotcticas en el
sitio de infeccin. Hay reclutamiento preferencial de
determinadas poblaciones efectoras, que expresan
diferente perfil de receptores para quimioquinas.

El tipo de respuesta inmune se empieza a definir desde el

principio, desde la entrada del patgeno.
Las caractersticas de la respuesta innata estarn
definidas por el patgeno, que dependiendo de los
PAMPS expresados, ser capaz de activar distintas
poblaciones celulares, ya que las clulas de respuesta
innata tienen una distribucin de los receptores para
PAMPS que vara segn el tipo celular e incluso el tejido
en cuestin (por ejemplo los macrfagos alveolares no
expresan el mismo perfil de receptores que los que
residen en otros tejidos no asociados a mucosas).
La activacin a travs de distintos TLR, induce la
produccin de perfiles de quimioquinas diferentes, que
condicionarn los tipos celulares que sern reclutados al
sitio de infeccin.
La mayor o menor activacin de la va del
complemento, tambin condiciona el perfil de clulas
reclutadas, por ejemplo el factor C5a es la molcula quimiotctica ms potente para la atraccin de los eosinfilos. Esto
nos muestra que no todas las respuestas innatas son iguales, cualitativamente hablando.

Las clulas reclutadas en el sitio de infeccin condicionan el tipo de respuesta adaptativa

Como consecuencia final, las clulas activadas en el sitio de infeccin producirn citoquinas que condicionarn en los
ganglios la diferenciacin de los linfocitos T.
Por ejemplo si en el sitio de infeccin hay predominio de CD, NK y macrfagos que son estimulados a producir un
microambiente rico en IL-12, la APC al presentar los antgenos a los linfocitos T, promover su diferenciacin a LTh1. La
ausencia de estas citoquinas y/ la presencia de IL-4 proveniente de otras clulas en el tejido perifrico, influenciarn la
diferenciacin de los LT hacia un perfil Th2.
En suma, la instruccin por los patgenos de las clulas del sitio de infeccin, se ve reflejada en el tipo de respuesta
adaptativa inducida en los rganos linfoides.
Los cambios en la expresin de los genes de las citoquinas que acompaan la diferenciacin de las clulas T en clulas
efectoras, son el reflejo del estmulo recibido por las citoquinas secretadas por las DC maduras que se activaron en el
tejido, y otras clulas (como macrfagos, mastocitos, clulas NK y NKT) que tambin fueron activadas por el patgeno.
Dado que los distintos patgenos tendrn distintos PAMPs, el perfil de citoquinas que secretaran estas clulas va a estar
afectado por los mismos. En otras palabras, la respuesta innata contra distintos patgenos activa las DC y otras clulas en
forma distinta, y esto se transmite en la programacin de la diferenciacin de los linfocitos T durante su activacin, lo que
los capacita para combatir especficamente al patgeno en cuestin. Otros factores que parece influir en el proceso de
diferenciacin, es la densidad de complejos TCR-pptido-MHC y la intensidad de la coestimulacin.

Por ejemplo, la activacin de clulas NK por una infeccin local o por la secrecin de IL-12 por la DC, hace que la NK
secreten INF, el cual a acta sobre los linfocitos T que estn siendo activados a travs de su TCR promoviendo la
activacin del factor de transcripcin T-bet que es esencial para la diferenciacin a TH1 y hacer que estas clulas
respondan a la secrecin de IL-12. Para que se d la activacin de linfocitos que terminan con un fenotipo TH1 tiene que
haber contacto MHC-pptido-TRC, tiene que haber coestimulacin de B7 pero si adems la DC adquiri un perfil que
secreta IL-12 que puede interactuar con una clula NK que esta por ah, y a su vez dicha clula NK gracias a este estmulo
secreta IF, el cual estimula a la DC para producir ms IL-12, la suma de estas dos citoquinas hace que los linfocitos se
diferencien en TH1. Tpicamente, los TH1 expresan un factor de transcripcin que se llama T-bet. No es tan importante el
nombre, pero si es importante saber que hay un factor de transcripcin que caracteriza cada poblacin.
Los otros caminos de diferenciacin no son tan bien comprendidos, por ejemplo en el caso de la diferenciacin a TH2, se
ha visto que in vitro la IL-4 es un poderoso factor de diferenciacin, que promueve la expresin del factor de transcripcin
GATA-3 caracterstico del desarrollo a TH2, siendo los mastocitos, eosinfilos, basfilos y clulas NKT las posibles fuentes
de esta citoquina in vivo. Otros factores que han sido asociado con la diferenciacin a TH2 incluyen la TSLP (thymic
stromal lymphopoietin) una protena producida por las clulas epiteliales durante la inflamacin, y la IL-25, pero al igual
que con la IL-4, las forma en que actan no es completamente entendida.
En el caso de las clulas TH17 y las Treg, los detalles son menos claros, en parte porque estas clulas se han descubierto
ms recientemente. Aparentemente la diferenciacin de ambas es promovida por el TGF (citoquina tpicamente anti-
inflamatoria), pero las TH17 se diferencian en presencia de IL-6 (particularmente cuando IL-4 e INF estn ausentes) y
una vez diferenciadas requieren de la IL-23 para su mantenimiento. El factor de transcripcin caracterstico de la TH17 es
el ROR mientras que el de las clulas reguladoras el FoxP3. (YA VISTO EN TEMA 8)

Las clulas TH1 y TH2 se inhiben mutuamente a travs de las citoquinas

Las citoquinas participan tambin en el mantenimiento del

perfil Th1 Th2 durante una respuesta, ya que las citoquinas
producidas por ambos tipos de linfocitos tienen efectos
inhibitorios sobre la poblacin opuesta.
Es de decir que las poblaciones de linfocitos Th1 y Th2
producen citoquinas diferentes, y se regulan mutuamente. Por
ejemplo, siguiendo la imagen: Los Th1 producen IFN, citoquina
que ya vimos que promueve la diferenciacin hacia linfocitos
Th1 (loop positivo) pero a su vez inhibe la proliferacin de los
Th2.
Son mutuamente antagnicas.

Cmo se vuelve al estado inicial luego de una respuesta inmune? La desaparicin de la infeccin es la principal causa del
apagado de la respuesta inmune.
En la respuesta adaptativa, hay una proliferacin en los ganglios de linfocitos T y B, la cual en determinado momento
debe ser frenada.
Lo mismo con las inflamaciones. En un proceso inflamatorio hay produccin de citoquinas, cambios en los vasos, etc. lo
cual tambin hay que frenar en determinado momento. Volver al estado inicial, al mismo tiempo que se va eliminando la
causa de la infeccin, el patgeno.
La disminucin de la carga de patgenos gracias al desarrollo de mecanismos efectores de la respuesta innata y
adaptativa, es la primer causa de que todo los dems disminuya, ya que hay menos PAMPs, menos clulas que se activan,
y as sucesivamente.

Autolimitacin de las respuestas inflamatorias

Las clulas que actan en la respuesta innata,

producen una variedad de citoquinas con efectos
sobre distintas clulas blanco del sitio de infeccin
(ej. clulas endoteliales, neutrfilos) y tambin en
tejidos distantes (ej. hgado, hipotlamo).
Algunas citoquinas tienen efectos redundantes,
por ejemplo sobre la induccin de protenas de
fase aguda y sntesis de protenas del
complemento por el hgado el caso de las
citoquinas que actan sobre el endotelio.
El efecto sistmico sobre el cerebro, ms
especficamente sobre el hipotlamo (centro de
regulacin de la temperatura), provoca un
aumento de la temperatura corporal (fiebre). Este
mecanismo efector consiste en aumentar la
temperatura por encima de la temperatura
ptima de virus y bacterias y as disminuir su proliferacin.
Cmo se detiene este efecto?

Una vez que las bacterias comienzan a ser

eliminadas, la concentracin de los
componentes activadores de las clulas
inflamatorias disminuyen, el reclutamiento
de ms clulas de sangre tambin disminuye
porque los cambios en el endotelio son
menos intensos, etc.
Por otra parte, las propias clulas
inflamatorias como los macrfagos
(residentes y reclutados en esta etapa),
comienzan a expresar otro perfil de
receptores y de citoquinas. Se induce la
produccin de IL-10 una citoquina con accin
autcrina y parcrina que inhibe la
produccin de citoquinas inflamatorias.
Los macrfagos en este estado, expresan otro
conjunto de receptores, por ejemplo los que
participan en la fagocitosis de los cuerpos apoptticos (que pueden provenir de los neutrfilos que actuaron en el sitio),
generando seales inhibitorias, relacionadas en cambio con la produccin de citoquinas antiinflamatorias como la IL-10
el TGF.
En el proceso algunas clulas efectoras comienzan a morir, por ejemplo las fagocticas, como los neutrfilos, que luego de
fagocitar mueren por apoptosis. Estas clulas apoptticas (mostradas en imagen) son una seal para comenzar a
comenzar a detener la inflamacin, ya que los macrfagos presentan algunos receptores llamados scavenger que
reconocen estas clulas apoptticas gracias a que muestran lpidos de membrana distintos a los de una clula viable. Los
macrfagos fagocitan estas clulas muertas y como consecuencia hay produccin de citoquinas antiinflamatorias (IL.10
por ejemplo), citoquinas que actan sobre otros macrfagos, volvindolos a un estado antiinflamatorio. Este macrfago
deja de producir las citoquinas que estaban afectando la pared vascular y potenciando el pasaje de clulas.

En etapas tardas de activacin, la respuesta a IL-1 y TNF tiende a autorregularse negativamente

Durante el curso de una respuesta inmune, se

pueden comenzar a sintetizarse
naturalmente, molculas que antagonizan la
accin de una citoquina como forma de
autocontrol de la respuesta. Por ejemplo el
antagonista de IL-1 se une al receptor sin
sealizar. En el caso del TNF, la propia
citoquina induce en fases tardas de la
respuesta la liberacin del receptor, de forma
que la clula es menos sensible a la
sealizacin y capta citoquina en la fase
soluble sin sealizar.
Estos mecanismos naturales de regulacin,
pueden ser explotados en la teraputica
humana, por ejemplo para lograr efectos
antiinflamatorios, mediante la administracin
de antagonistas o receptores solubles para
citoquinas sobreexpresadas en enfermedades
inflamatorias crnicas como la artritis reumatoidea.
En determinado momento los macrfagos como forma de autolimitacin realizan una serie de pasos:
1. Generacin del antagonista del receptor para IL-1. Esta molcula, en contraste de lo que hace la IL-1, si bien se une no
sealiza. Por lo tanto la clula blanco no tiene los efectos que tendra en un contexto inflamatorio a travs de la IL-1. Esta
es una de las estrategias que se usa en la teraputica con una molcula recombinante, antagonista del receptor para IL-1,
que se llama Anakinra, usado para artritis reumatoidea.
2. Liberacin por parte de los macrfagos de receptores solubles. En la imagen vemos el receptor para TNG. El hecho
de que se de el clivaje y la liberacin de dicho receptor (que tiene como fin la activacin del macrfago) tiene como efecto
la no activacin del macrfago, ya que por no estar en la membrana (est soluble), si bien se da la unin no se da la
sealizacin.
3. Produccin de citoquinas antiinflamatorias. Como ya mencionamos ms atrs, se produce TGF y IL-10.
 La limitacin de la respuesta adaptativa

Como una forma de regulacin de la respuesta inmune, durante su diferenciacin, los linfocitos T efectores son
programados para morir y la mayora muere por apoptosis 15 das despus de ser activados, incluso aunque la infeccin
no se haya contenido. La vida media de los linfocitos T efectores est influida por estmulos internos que pueden acelerar
o demorar el programa de muerte por apoptosis, pero en todos los casos la poblacin de clulas T tiene un pico a los
pocos das de comenzada la infeccin y luego decaen hasta llegar a quedar un 10%, bsicamente compuesta por clulas
de memoria especficas. La supervivencia de estas ltimas est determinada por el estmulo recibido a travs de la
expresin del receptor para la IL-7R y en el caso de los linfocitos T citotxicos de memoria, por el estmulo adicional de la
IL-15.

La autolimitacin de las respuestas mediadas por linfocitos

En condiciones de salud las respuestas inmunes son autolimitadas, a medida que el antgeno es eliminado el sistema
inmune retorna a su nivel basal de reposo, manteniendo en forma aproximadamente constante el nmero de linfocitos;
esta propiedad del sistema inmune, se denomina homeostasis.
Durante la respuesta inmune, debido a los procesos de proliferacin clonal de los linfocitos, el nmero de linfocitos
aumenta hasta 1000 veces y los linfocitos especficos para el patgeno pueden representar hasta el 50% del total de
linfocitos T CD8 en el momento de mxima respuesta.
Una vez que la infeccin es controlada, esa gran cantidad de linfocitos no es necesaria, y es potencialmente peligrosa,
por lo que el organismo controla el nmero de linfocitos hasta volver al estado previo a la infeccin, quedando solo los
linfocitos memoria de vida media ms larga pero quiescentes (en reposo); los linfocitos efectores son de vida media
corta.
Gran parte del declive de la respuesta inmune, se debe a que ocurre muerte de los linfocitos por la disminucin de
seales de activacin, en la medida que el antgeno se est eliminando, se trata de una muerte por apoptosis pasiva por
ausencia de seales que conducen a la expresin de protenas antiapoptticas, como son los miembros de la familia Bcl2.

Adems, los linfocitos activados por el antgeno disparan mecanismos activos que contribuyen a la autolimitacin:
i. los linfocitos T comienzan a expresar la molcula CTLA4, que interacciona con B-7 inhibiendo los procesos de
proliferacin.
ii. los linfocitos activados pueden comenzar a coexpresar las molculas Fas y Fas-L, cuya interaccin conduce a la
apoptosis; este proceso denominado apoptosis inducida por la activacin requiere de la estimulacin antignica
persistente, como puede ocurrir en infecciones crnicas en respuestas autoinmunes. No se sabe an si este mecanismo
opera in vivo en otras situaciones.
El control sobre la proliferacin durante la activacin de los linfocitos T est dada por elementos de control positivos
(CD40L) y negativos (CTLA4).

La proliferacin de los linfocitos T

durante su activacin es reforzada por
un circuito de retroalimentacin
debido a la molcula CD40L (ligando
para CD40). Este ligando tiene un papel
fundamental para las funciones
efectoras que cumplen los linfocitos
una vez que se diferenciaron como se
ver ms adelante en el curso, pero en
esta etapa, en la cual se mantiene el
contacto DC-linfocito T por algunas
horas, la expresin de este ligando
permite que se una al CD40 en la DC lo
cual hace que esta exprese una mayor
densidad de molculas de B7, que
redunda en un mayor estmulo de
activacin para los linfocitos T por esta
DC. Si no se contrarresta este estmulo, la situacin se puede descontrolar y resultar en una proliferacin desmedida. La
forma de limitarlo es que conjuntamente con el CD40L, el linfocito T activado comienza a expresar CTLA4 (cytotoxic T
lymphocyte antigen 4) una molcula de superficie con alta afinidad por las molculas de B7, pero que no produce
seales de activacin y por tanto funciona bsicamente como un competidor (ventajoso por la alta afinidad) de CD28.
El dominio intracelular, posee motivos de inhibicin (ITIM) que actan interfiriendo con la sealizacin originada a travs
del receptor T y en consecuencia inhibiendo su activacin. Es un mecanismo esencial para limitar la respuesta
proliferativa de los linfocitos T activados.
Este mecanismo es sumamente importante, y sus consecuencias se ven claramente en situaciones experimentales en
animales en los que se ha removido el gen de CTLA4, estos mueren rpidamente por linfoproliferacin desmedida
acompaada de enfermedades autoinmunes.

La apoptosis regula el nmero de linfocitos activados

La induccin de apoptosis en los linfocitos
involucra la activacin de enzimas
citoslicas denominadas Caspasas (nombre
que en ingls deriva de sus caractersticas:
proteasas con Cisteinas en el sitio activo,
que clivan residuos de asprtico).
En la clase pasada vimos cmo los linfocitos
TCD8 y las NK matan a clulas por apoptosis
a travs de grnulos. En este caso el
mecanismo no es por grnulos, sino que es
por otras vas de apoptosis.

La activacin de las caspasas en los linfocitos puede ser inducida de dos formas:
i. Mecanismo activo; va exgena: Interaccin de ligandos con los receptores de muerte en la membrana plasmtica (ej.
Fas TNFR).
ii. Mecanismo pasivo; va endgena o mitocondrial: Seales generadas por cambios en la permeabilidad de la
membrana mitocondrial inducidos por estress, por la deprivacin de factores de crecimiento o ausencia de
coestimulacin para los linfocitos T; hay un rpido incremento en la permeabilidad de la membrana de la mitocondria que
conduce a la liberacin de Citocromo C, que acta como cofactor para una enzima la va de las caspasas. Este tipo de
muerte (pasiva o por negligencia), significa que las clulas estn programadas para morir a menos que reciban estmulos
para la sobrevida.
Este mecanismo, tambin opera en clulas tratadas con corticoides, radiacin o algunas drogas quimioterpicas.
Induccin de apoptosis por la va endgena: cambios en la mitocondria conduce a la activacin de caspasas

En condiciones de normalidad la
membrana de la mitocondria
posee una molcula
estabilizadora, Bcl-2 que impide
el hinchado del organelo. Frente
a la deprivacin de seales de
sobrevida, puede ocurrir la
desestabilizacin de la
membrana y se libera el
citocromo C, un componente
proapopttico normalmente
confinado en la mitocondria.
El citocromo C que est en el
citosol interacta con protenas
que forman parte de la cascada
enzimtica de las capasas, las
cuales estaban inactivas antes.
Es decir que una vez que el citocromo C esta en el citoplasma, activa una cascada enzimtica que concluye con la
activacin de endonucleasas en forma anloga que las otras vas apoptticas.
La expresin de Bcl-2 puede regularse a la baja por la expresin de las llamadas protenas pro-apoptoticas. La falta de
citoquinas que ocurre con el apagado del estmulo inflamatorio, o sustancias como los glucocorticoides pueden inducir la
expresin de las protenas pro-apoptticas y as disminuir Bcl-2 disparando la apoptosis. El dao del DNA tiene un efecto
similar cascada enzimtica que concluye con la activacin de endonucleasas en forma anloga que las otras vas
apoptticas.
En la clase anterior vimos un proceso de apoptosis en el contexto de una clula infectada por un virus, por lo que se
degrada ADN propio y viral. Ac hablamos de una clula efectora que muere de esta forma mediante degradacin de su
cido nucleico y manteniendo la integridad de la membrana.

La interaccin entre Fas y FasL expresadas en la misma o diferentes clulas, desencadena el proceso de apoptosis en
linfocitos T maduros
Pasamos ahora a ver un mecanismo
activo de apoptosis generado por los
linfocitos; va exgena.
La interaccin entre Fas y Fas-L
inicia el proceso de apoptosis. La
molcula de Fas que se encuentra
como monmero en la membrana,
se trimeriza al interaccionar con su
ligando (coexpresado en la misma
clula en otra diferentes),
aproximando los dominios
citoplasmticos de muerte y
perimitiendo la interaccn con molculas adaptadoras, que a su vez activa caspasas. Ms adelante en la cascada, se
activan DNAsas que estn en forma inactiva en el citoplasma, pero que al translocar inician la degradacin del DNA.
Durante la apoptosis, el DNA es degradado de una forma caracterstica, que consiste en un patrn en escalera mltiplos
de 200 pares de base.
Todos los linfocitos T expresan Fas-L. Una vez que se activa el linfocito adems empieza a expresar Fas. Estas son
molculas que interaccionan entre si. Fas es una molcula que tiene un dominio que se llama dominio de muerte,
porque es la que al trimerizar interacta con molculas citoslicas inactivas que terminan cambiando la conformacin y
actuando sobre componentes de la cascada de caspasas.
Los linfocitos activados pueden expresar Fas y FasL

En determinadas condiciones, por

ejemplo cuando los linfocitos son
estimulados en forma persistente,
pueden comenzar a coexpresar en su
superficie ambas molculas FasL y Fas.
Una vez que las clulas blanco se van
eliminando, se va favoreciendo la
interaccin entre los linfocitos
citotxicos a travs de las molculas
Fas-FasL, ya sea en un linfocito entre
clulas adyacentes.
Analizando la imagen: se da una
respuesta a linfocitos T, una
proliferacin, activacin de linfocitos T,
los cuales comienzan a expresar las dos
molculas (Fas y Fas-L), y se puede dar
la interaccin de estas dos molculas
en el mismo linfocito o entre dos linfocitos distintos. El linfocito que tiene el Fas (molcula que tiene el dominio de
muerte) es el que lleva a la apoptosis, por una va que se llama la va de Fas-FasL que converge con las dems vias de
apoptosis pero que se inicia distinto a ellas.

La expresin de receptores de muerte celular es tambin una forma de disminuir los clones de clulas expandidas al
final de la respuesta
Inicio de la respuesta: Los linfocitos T citotxicos activados expresan el ligando para Fas (FasL) y esto contribuye a la
eliminacin de la clula blanco.
Final de la respuesta: Autodestruccin de linfocitos T citotxicos por accin del sistema Fas-FasL.

Se esquematiza como se limitara una respuesta citotxica frente a una clula blanco, mediante el proceso denominado:
muerte inducida por la activacin. Las clulas T interaccionan especficamente a travs del TRC (no indicado) con la
clula blanco.

Distintas formas de induccin de la apoptosis contribuyen al apagado de la respuesta

El programa para la apoptosis est presente en todas las clulas y puede ser disparado por la ausencia o presencia de
determinadas seales, ya sea que se produzcan en la propia clula va endgena, o por la activacin a travs de
receptores de muerte de membrana (ej. va Fas)
La va endgena est vinculada a la liberacin de citocromo de la mitocondria. En condiciones de normalidad la
membrana de la mitocondria posee una molcula estabilizadora, Bcl-2 que impide el hinchado del organelo. Frente a la
deprivacin de seales de sobrevida, puede ocurrir la desestabilizacin de la membrana y se libera el citocromo C, un
componente proapopttico normalmente confinado en la mitocondria.
Una vez en el citoplasma activa una cascada enzimtica que concluye con la activacin de endonucleasas en forma
anloga que las otras vas apoptticas. La expresin de Bcl-2 puede regularse a la baja por la expresin de las llamadas
protenas pro-apoptoticas (cuadro azul). La falta de citoquinas que ocurre con el apagado del estmulo inflamatorio, o
sustancias como los glucocorticoides pueden inducir la expresin de las protenas proapoptoticas y as disminuir Bcl-2
disparando la apoptosis. El dao del DNA tiene un efecto similar.
En cuanto a la va exgena, cuando los linfocitos son estimulados en forma persistente, comienzan a coexpresar en su
superficie ambas molculas FasL y Fas. Una vez que las clulas blanco se van eliminando, se va favoreciendo la interaccin
entre los linfocitos citotxicos a travs de las molculas Fas-FasL, ya sea en un linfocito entre clulas adyacentes. La
interaccin entre Fas y Fas-L inicia el proceso de apoptosis. La molcula de Fas que se encuentra como monmero en la
membrana, se trimeriza al interaccionar con su ligando (coexpresado en la misma clula en otra diferentes),
aproximando los dominios citoplasmticos de muerte y perimitiendo la interaccn con molculas adaptadoras, que a su
vez activa caspasas. Ms adelante en la cascada, se activan DNAsas que estn en forma activa en el citoplasma, pero que
al translocar inician la degradacin del DNA. Durante la apoptosis el DNA es degradado de una forma caracterstica, que
consiste en un patrn en escalera mltiplos de 200 pares de base.

La regulacin por anticuerpos.

Veremos ahora como baja la

produccin de anticuerpos, es decir,
cmo se frena la activacin de
linfocitos B y cmo una vez que hay Ac
suficientes sirven como mecanismo de
autocontrol.
La retroalimentacin por anticuerpos
IgG es un mecanismo de regulacin a
la baja en la respuesta humoral, opera
una vez que la concentracin de
anticuerpos especficos sintetizada por
un antgeno es suficientemente alta y
aparecen complejos antgeno-
anticuerpo solubles
(inmunocomplejos). Los
inmunocomplejos entrecruzan las Ig de
membrana de los linfocitos y los
receptores para Fc para IgG tipo RIIB
que tiene motivos de inhibicin en su
dominio intracelular (ITIM:
Immunoreceptor Inhibitory Tirosine
Motif).
Esto activa una cascada de seales
inhibitorias mediadas por la cola
citoplasmtica del FcR-RIIB como
consecuencia de la interferencia con la
sealizacin mediada por el BCR.
Es interesante destacar, que los
anticuerpos que median este
mecanismo inhibitorio son los IgG y
no los IgM generados al inicio de la
respuesta, que no interaccionan con
los FcR.
El concepto es el mismo que venimos
manejando. Aparece en los linfocitos
activados un receptor que tiene que
ver con la inhibicin. Ese receptor es,
en este caso, un receptor para la
regin Fc que se llama receptor (es decir de IgG) del tipo IIB (inhibitorio); FcRIIB. A diferencia de los receptores para
regin que vimos la clase pasada, estos tienen motivos de inhibicin en el citosol (ITIM) y no motivos activadores
(ITAM).
Hay una respuesta frente a un antgeno polivalente (en imagen se ve como una bola con muchos eptopes), lo cual genera
Ac especficos y se formaran los que se llaman inmunocomplejos circulantes, es decir antgeno unido al anticuerpo.
Estos inmunocomplejos en determinado momento, cuando ya hay mucho anticuerpo, interactan con el linfocito B a
travs del receptor para Fc. Al mismo tiempo, el antgeno libre (si es que sigue habiendo) puede actuar con la Ig de
membrana. La sealizacin que se da por interaccin entre el inmunocomplejo y el receptor para Fc, lleva a un bloqueo
de la activacin y diferenciacin del linfocito B.
Esto solo va a poder ocurrir cuando hay inmunocomplejo circulante, es decir que ya hay suficiente Ac para inhibir. No
tiene sentido que ocurra en el principio.

Limitacin de la produccin de anticuerpo por retroalimentacin mediada por receptores Fc.

En el esquema se muestra que la

inhibicin puede ser mediada
anticuerpos especficos contra diversos
eptopes presentes en el antgeno que
origin la respuesta, al permitir el
entrecruzamiento de los BCR y
receptores inhibitorios.
Tenemos un linfocito B en reposo, con
receptores BCR y muy poca cantidad del
receptor inhibitorio, FcRIIB (amarillo).
Por otro lado, tenemos un antgeno
polivalente contra el cual se generaran
Ac.
En un principio, el linfocito se activa y
empieza a expresar ms molculas de
las amarillas, es decir, ms receptores
FcRIIB, inhibitorios. Como resultado se
progresa hacia plasmocitos (clulas B efectoras activadas) y clulas de memoria. Cuando ya hay suficiente Ac del tipo IgG,
en las etapas finales de la respuesta, se podr dar la situacin en la cual el inmunocomplejo se une a travs de la regin Fc
de los Ac que lo conforman al linfocito B a travs de sus receptores FcRIIB. Es importante ver que hay un
entrecruzamiento, para lo cual es necesario que todos los eptopes estn en la misma molcula, el cual lleva al bloqueo
de la diferenciacin. Se trata de una inhibicin contra este antgeno, el cual presenta varios eptopes y entra en juego la
inhibicin de distintos linfocitos B, todos productores de Ac especficos contra ese inmunocomplejo pero puede ser
contra distintos eptopes.

En sntesis: La expresin de algunos receptores celulares son modulados durante el curso de la respuesta inmune

Vemos en esta sntesis cmo se detiene la respuesta para linfocitos B y T. Se cumple en ambos casos la misma premisa: En
una clula en reposo se expresan pocos receptores para la molcula inhibitoria y al activarse aumenta la expresin.
Fas y CTLA4 para linfocitos T; FCRIIB para los linfocitos B.
Supresin activa a travs de linfocitos T con funcin supresora.

Recordando la ltima pregunta

que nos realizamos al comenzar
la clase: Cmo se controla la
respuesta contra componentes
propios?
En el curso de una infeccin,
durante una respuesta inmune
especfica aumenta la
probabilidad de presentar
componentes propios en un
contexto inflamatorio, que
podran conducir a la activacin
de clulas autorreactivas. Para
controlar estos eventos, hay
generacin de linfocitos T
reguladores, que protegen al
individuo de enfermedades autoinmunes y contribuyen a apagar la respuesta.

Linfocitos T CD4+ reguladores; LTreg naturales (CD25+ high)

- Se generan en el timo
- Especficos para antgenos propios
- 10 15% de LT CD4+ en periferia
- Expresan el factor de transcripcin Foxp3+
- Producen IL-10 y TGF
- Se expanden en el curso de una respuesta inmune.

LTreg inducidos en rganos linfoides secundarios

La mayora de los LT reguladores son generados en el timo y tienen especificidades contra componentes propios. Sin
embargo, durante las respuestas inmunes tambin pueden diferenciarse LT reguladores (inducidos o adaptativos) a
partir de LT vrgenes en rganos linfoides secundarios. Aunque an es controvertido el tema de la generacin de LTreg in
vivo, por su diferenciacin con la expansin de los lTreg que puede ocurrir tambin, se cree que se generan
principalmente en circunstancias de estimulaciones crnicas, condiciones asociadas por ejemplo a infecciones crnicas
como tuberculosis o esquistosomiasis y tambin en animales con carga tumoral importante. En estas circunstancias
tambin puede haber expansin de LTreg naturales, que tenderan a evitar respuestas autoinmunes asociadas a
respuestas inflamatorias crnicas. En conjunto, ambas poblaciones actuaran para evitar inmunopatologa.
FoxP3 es hasta el presente el marcador ms utilizado para identificar las poblaciones T CD4+ reguladoras, aunque no es
totalmente especfico. Foxp3 interfiere con la interaccin entre los factores de transcripcion para IL-2 y su promotor
(NFAT, AP-1).
Ratones deficientes en FoxP3 desarrollan enfermedades linfoproliferativas y humanos con mutaciones en FoxP3 padecen
sndromes como la enteropata ligada el cromosoma X una poliendocrinopata, con disminucin del nmero de
linfocitos reguladores.
En modelos in vitro, se obtiene diferenciacin a Treg1 mediante estimulacin con IL-10 y Th3 mediante TGF.

Mecanismos de supresin de linfocitos Treg

Los LTreg ejercen su accin regulatoria actuando sobre otras clulas, que no necesariamente tienen la misma
especificidad. El contacto con sus clulas blanco no es a travs del TCR sin que a travs de citoquinas y contacto celular
por medio de otras molculas. La condicin para que ejerzan su accin es que las clulas estn en el mismo tejido o que
sean expresados por la misma APC. Se cree que los avances en el entendimiento de estas clulas puede tener
implicancias importantes para el tratamiento de las enfermedades autoinmunes en base a las experiencias de
transferencia de clulas en modelos animales.
No est claro an si los LTreg in vivo deben ser activados previamente para ejercer su funcin.

Generacin de LTreg CD25+ en periferia

Las clulas dendrticas juegan un rol central en la generacin de los linfocitos T reg inducidos en periferia. Dependiendo
del contexto en el cual se de la interaccin entre la CD y el linfocito, resultar en la generacin de linfocitos efectores,
reguladores anrgicos. En principio, cualquier linfocito maduro, no autoreactivo puede seguir uno u otro destino segn
el contexto en que se encuentre con la clula dendrtica.
Tema 13: Mecanismos de evasin de la respuesta inmune utilizadas por patgenos.
Clase 18, 15/11/2013

Nuestro organismo se encuentra constantemente expuesto a un gran nmero de patgenos presentes en el ambiente o
trasmitidos por otros individuos. Estos patgenos pueden ser muy diversos tanto en estructura como en la forma de
interaccin con sus hospederos. El sistema inmune ha desarrollado diferentes mecanismos de combate y eliminacin para
lidiar con ellos. Cada mecanismo es diferente ya que los patgenos son muy diversos.

La inmunidad innata controla y/o limita el progreso de la infeccin e instruye a la inmunidad adaptativa
La respuesta innata es la primera que se activa. Esta activacin ocurre horas luego del compienzo de la infeccin,
desencadenando mecanismos efectores (que a veces alcanza para combatir la infeccin) y una respuesta inflamatoria, la
cual funciona como nexo entre la respuesta innata y la adaptativa. La respuesta adaptativa requiere ms tiempo, pero
tambin activa mecanismos efectores y adems desencadena lo que es la memoria.

Qu es el xito?
En el enfrentamiento de cualquier ser vivo con un patgeno hay un enfrentamiento de dos formas de vida y el asunto es
Cul gana?
Para el hombre el xito sera combatir y eliminar las infecciones de forma efectiva, evitando daar los tejidos propios.
Para los patgenos el xito sera replicarse y asegurar la transmisin a nuevos hospederos. En general se dice que un
buen patgeno es aquel que no destruye muy rpido a su hospedero y aquel que logra no activar demasiado la
respuesta inmune.
Entre estos dos seres vivos que se enfrentan hay un balance en el que a veces gana uno y a veces el otro. Sera un balance
entre mecanismos de defensa del hospedero vs. mecanismos de evasin del patgeno.

En el caso de las infecciones agudas que se resuelven, si bien

hay un ingreso y una proliferacin rpida del patgeno, la
activacin de la respuesta adaptativa terminara enseguida
con l, ganando entonces los mecanismos de defensa.

En el caso de infecciones agudas sin resolver, el patgeno sigue proliferando y la

respuesta que se activa no es suficiente. Muchas veces la respuesta adaptativa no
alcanza a activarse, aunque esto no es lo ms frecuente. Estas infecciones que no
se resuelven causan la enfermedad o la muerte. En general, esto pasa entonces con
patgenos que son capaces de evadir la respuesta inmune pero suele acompaarse
con alguna inmunodeficiencia, o congnita o adquirida. Decimos entonces que en
este caso ganan los mecanismos de evasin.

En el caso de infecciones crnicas, el patgeno ingresa

al organismo y prolifera. Si bien el sistema inmune se
activa y controla la infeccin (el patgeno no sigue
proliferando), la carga de patgeno se estabiliza y no se
elimina nunca. El patgeno persiste pero tambin
persiste la respuesta inmune. Los dos seres vivos co-
existen. Hay un equilibrio en la relacin hospedero
patgeno. El patgeno logra evadir la respuesta inmune pero no es que sta sea intil, ya que controla la carga de
patgeno, no sigue creciendo. En importante notar que el sistema inmune no se est expresando de manea exacerbada,
sino eso sera daino para el hospedero, sino que convive con el patgeno. El ejemplo que vemos hoy es uno de estos
casos.

CONCEPTO IMPORTANTE: La infeccin y la enfermedad son cosas muy diferentes. Una cosa es estar infectado, lo cual
implica tener el microorganismo, el patgeno, alojado dentro. Otra cosa es estar enfermo. Estar infectado con, por
ejemplo, Mycobacterium tuberculosis, lo cual no implica necesariamente tener tuberculosis.

LA TUBERCULOSIS:
La tuberculosis (TB) es la enfermedad causada por la infeccin con Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Esta enfermedad
ocurre en homnidos desde hace millones de aos. Esta co-evolucin tan larga ha permitido a la bacteria desarrollar
mecanismos muy sofisticados para explotar a su hospedero, hacindola un patgeno extremadamente exitoso.
Fue Robert Koch, en 1882, quien descubri al bacilo causante de la enfermedad, Mtb, por lo cual recibi el premio nobel
de fisiologa en 1905.
En 1906 se logr la primera inmunizacin exitosa contra la tuberculosis, cuando Calmette y Gurin utilizaron una cepa
bovina atenuada de Mycobacterium (bacilo de Calmette y Gurin, BCG). No hay vacuna. La BCG protege a nios, pero no
a adultos.
Otro evento clave en la historia de la lucha contra la TB fue el descubrimiento de la estreptomicina en 1946, un
antibitico que result muy efectivo para el tratamiento y cura de la enfermedad.
Ms tarde, en los aos 80, hubo un retroceso en el control de la TB, principalmente debido a la aparicin de cepas
resistentes a los antibiticos de uso comn como MDR-TB (multidrug resistant-TB) y XDR (extensively resistan TB) y a la
fuerte asociacin de la enfermedad TB activa con la infeccin por HIV. Veremos ms adelante que los linfocitos T CD4 son
muy importantes para conseguir contener al Mtb. El virus VIH baja la carga de estos linfocitos, por lo que provoca que la
tuberculosis de reactive y se vuelva una infeccin descontrolada.

Prevalencia mundial
La OMS (2010) estima que un tercio de la poblacin mundial se encuentra infectada por Mtb. Aunque la mayor parte de
estos individuos no estn enfermos ni transmiten la enfermedad, se estima que un 5-10% de los mismos desarrollaran TB
en algn momento de su vida (este % es mayor para los individuos infectados por HIV).
El mapa muestra los nuevos casos de tuberculosis (expresados en casos cada 100.000 habitantes) registrados en el ao
2010. Los datos indican que en 2010 se reportaron 8.8 millones de personas infectadas, mayormente en Africa y Asia. En
2010, adems murieron 1.45 millones de personas (13% de los casos en personas HIV+) por lo que la TB sigue siendo una
enfermedad con una alta taza de mortalidad.

Mycobacterium tuberculosis

Curso de la infeccin

Si representamos la carga bacteriana en funcin del tiempo, tenemos que en una primera etapa la carga bacteriana
aumenta, el patgeno prolifera pero hay muy pocas personas a las que les ocurra que la tuberculosis se desarrolle en este
punto, es decir, que aparezca una infeccin aguda (en general nios, ancianos o inmunodeprimidos). Luego, en una
segunda etapa, la carga bacteriana baja muy rpidamente. La mayor parte de nosotros mantenemos una infeccin
latente, crnica.
La grfica se divide entonces en: inicio, contencin (infeccin crnica) y reactivacin (inmunosupresin)
El ser humano es el hospedero natural de Mtb.
La infeccin de un nuevo individuo se da va respiratoria, por contagio a partir de un paciente con TB activa. Las bacterias
son liberadas cuando el individuo infectado tose, y se mantienen viables en pequeas gotitas que son luego inhaladas
por el nuevo hospedero.
La infeccin primaria resulta en tuberculosis o enfermedad nicamente en un 5-10% de los individuos que son infectados
(mayormente en individuos inmunocomprometidos). La mayora de las personas pasa por esta etapa de la infeccin sin
sntomas o apenas una leve afeccin respiratoria. En el 90 % de los individuos que no desarrollan enfermedad la infeccin
va a ser contenida pero no eliminada. Esto se debe a que por ms que la respuesta inmune inducida sea del tipo
adecuado para eliminar la infeccin, algunos bacilos sern capaces de evadir esta respuesta mediante diferentes
estrategias, mantenindose en el hospedero en un estado no replicativo o latente (infecciones crnicas). Los bacilos en
este estado mantienen la capacidad de reactivarse y pueden producir una TB activa, particularmente cuando el sistema
inmune del hospedero, y particularmente la inmunidad celular, se ve afectado por alguna situacin, ya sea infeccin por
HIV, malnutricin, quimioterapia, etc. Se ha observado que un nmero pequeo de los individuos infectados es capaz de
eliminar la infeccin completamente (an no se conoce que eventos llevan a esta situacin).

Etapa temprana (primera, inicio)

Una vez inhalados, los bacilos de Mtb llegan a bronquiolos y alveolos pulmonares, y es en esta localizacin es donde
generalmente se manifiesta la enfermedad.
En los alveolos, las bacterias son fagocitadas por los macrfagos alveolares, que son macrfagos residentes en los
alveolos. Cumplen la funcin muy importante, ya que todo lo que entra por la respiracin es captado por ellos, ayudan a
mantener los pulmones sanos.

Mtb, como vamos a ver en detalle ms adelante, desarroll diversos mecanismos de evasin de su respuesta de los
macrfagos para sobrevivir en los fagosomas de estas clulas, su nicho predilecto. Entonces, una vez fagocitadas, las
bacterias logran replicarse intracelularmente. Algunos de los macrfagos cargados de bacterias cruzan la barrera alveolar
y se establece una infeccin local. Aunque los macrfagos no pueden eliminar la bacteria, si se activan y liberan
citoquinas y quimioquinas, generndose una respuesta pro inflamatoria. As, se reclutan diferentes poblaciones
leucocitarias al sitio de infeccin. Ms tarde se dispara la respuesta adaptativa, que ser capaz, de contener la
multiplicacin de los bacilos, aunque no de eliminarla, comenzando la etapa de contencin o de infeccin crnica. Los
linfocitos T activados, los macrfagos y otras clulas inmunes forman una estructura altamente ordenada conocida como
granuloma, que asla el tejido infectado, limitando la proliferacin y la diseminacin del patgeno. La formacin del
granuloma es tpica de la TB. En el granuloma, los linfocitos T efectores colaboran con los macrfagos potenciando sus
mecanismos microbicidas. En este proceso mucha de las bacterias y de las clulas infectadas mueren y se forma un ncleo
caseoso en el centro del granuloma (tejido necrtico). As se evita el progreso de la enfermedad, llegndose a un
equilibrio en la relacin hospedero-patgeno. Pero la infeccin no se elimina y algunas bacterias persisten en un estado
no replicativo, latente. Bajo ciertas circunstancias en las cuales se rompe ese equilibrio establecido, puede ocurrir la re-
activacin de la infeccin y Mtb prolifera y logra diseminarse.
El granuloma es una formacin sumamente estructurada. El nombre viene de las caractersticas que tiene cuando se mira
en un corte. El granuloma es lo que forma el tubrculo, es decir, lo que forma el engrosamiento de la pared, caracterstico
de esta enfermedad. Es el foco de la infeccin, pero es donde adems la infeccin est contenida, siguen habiendo
bacterias vivas dentro. Cuando se vuelve una infeccin crnica, en el centro hay una parte de tejido necrtico.

Composicin de la pared

El Mtb est rodeado por una cubierta muy

caracterstica formada por cidos grasos de cadena
larga, glicolpidos y otros componentes. sta
cubierta contribuye a su capacidad de sobrevivir en
el fagosoma. Una proporcin importante del
genoma de Mtb codifica para genes involucrados en
el metabolismo de los cidos grasos, metabolismo
lipdico es central, lo cual es un indicador de la
importancia de este tipo de molculas para la
biologa de la bacteria. Uno de los lpidos muy
caractersticos de la cubierta de esta bacteria es
LAM. Tambin hay mucha manosa.

Reconocimiento
Cmo es reconocida la bacteria?
Los macrfagos constituyen el nicho preferencial de
Mtb por su alta capacidad fagoctica (favorece la
entrada del patgeno a la clulas) y su vida media
prolongada. Una vez infectados cruzan el epitelio
alveolar (llegar al intersticio) y tienden a morir por
necrosis debido a la infeccin (como veremos mejor
ms adelante). De este modo, las clulas dendrticas
tendrn tambin acceso a las bacterias.
Mtb presenta mltiples ligandos para receptores en las
clulas dendrticas y macrfagos: TLR, NLR, receptores
de tipo lectina (CLR) y receptores barrenderos, as como
para receptores solubles como la MBL y para
componentes del sistema complemento.
-TLR-2 (lipopptidos y liposacridos). Los toll reconocen
motivos de la pared de la micobacteria.
-TLR-9 (genoma rico en motivos CpG). Reconoce ADN
bacteriano. Tambin hay ligandos para TLR-4.
- NOD-2 - peptidoglicano, y de hecho Mtb contiene un
muramil dipptido modificado que activa NOD-2 en
forma muy eficiente.
- CLRs (dectina-1, ManR (en macrfagos) y DC-SIGN (en dendrticas) - componentes de la pared ricos en manosas
terminales (liposacridos, particularmente ManLAM). Estos son receptores tipo lectina, como manosa y otros.
- Receptores de MBL y CR3, reconocen a la bacteria opsonizada por componentes del sistema del complemento. Los
componentes de la pared activan al complemento y conducen al depsito de C3b que es luego es degradado a C3bi por
un mecanismo que no ha sido completamente establecido. La activacin del complemento en el tejido pulmonar
probablemente comience por la va clsica, ms all de que los componentes de la pared son capaces de activar la va
alterna (ya que hay residuos nucleoflicos en la pared que pueden unir a C3b). (La activacin por la va clsica podra
ocurrir en etapas iniciales de la infeccin dado que existen anticuerpos naturales, sobre todo IgM, producidos por B1,
especficos para Mtb en el suero de individuos sanos).

Los receptores que median la internalizacin de

Mt por los macrfagos son receptores del
complemento, el receptor de manosa y los
receptores barrenderos, que reconocen diversas
estructuras en la pared de las bacterias. El receptor
de mananos y el CR3 son clave para la entrada de
Mtb a los macrfagos. La internalizacin por estos
receptores no favorece la fusin del fagosoma con
los lisosomas, lo que sera bueno para la bacteria.
El hecho de que estos receptores estn altamente
expresados en macrfagos y no en dendrticas
explica en parte porque los macrfagos son
mayormente infectados por Mtb. Las DC internalizan a Mtb principalmente mediante DC-SIGN. Vale subrayar la
importancia de cules son los receptores que median el reconocimiento, que afectarn fuertemente el resultado de la
infeccin. Recordemos que algunos receptores son fagocticos y otros no. Si bien los dos tipos de clulas, los macrfagos y
las DC, expresan todos estos receptores, el nivel de expresin de cada receptor no es el mismo en cada clula. Los
macrfagos expresan mucho ms receptor de manosas (ManR) y receptor para C3b (CR3) que DC.SIGN. Las DC al revs.
Adems, el destino de la micobacteria en el interior de la clula fagoctica depende de cul fue el receptor que medi la
internalizacin. Cuando las micobacterias son fagocitadas a travs de DC-SIGN son degradadas dentro del fagosoma, y por
lo tanto puede haber presentacin de pptidos de la bacteria en la superficie de la clula. En cambio, cuando son
fagocitadas mediante el ManR o el CR3, las bacterias se las ingenian para sobrevivir dentro de la clula.
El reconocimiento por TLRs y NLRs (receptores de sealizacin) as como por dectina-1 dan a las clulas seales de
activacin que favorecen la sntesis de citoquinas y quimioquinas pro-inflamatorias como IL-12, TNF-alfa, IL-6, IL-1beta,
etc y las quimioquinas CCL2 y CXCL10, que reclutan en forma preferencial, monocitos y linfocitos T efectores,
respectivamente. Los macrfagos tambin reciben seales para aumentar su capacidad microbicida (ej. expresin de la
iNOs). Tambin hay receptores que median la activacin de las clulas: TLR, NLR y dectina. Desencadenan la respuesta
inflamatoria porque activan los genes de citoquinas y la actividad microbicida de las clulas.
En cuando a la DC, vemos que adquiere un fenotipo que la hace apta para estimular la inmunidad adaptativa.
Por su parte las DC reciben seales de maduracin, para activarse y migrar a los ganglios linfticos drenantes, e iniciar la
respuesta adaptativa.

Evasin de la respuesta inmune

Los mecanismos de evasin de la inmunidad innata son claves para

que el patgeno logre establecer la infeccin.

Maduracin del fagolisosoma

Luego de la fagocitosis de los patgenos, el fagosoma debe sufrir un
proceso de maduracin, para el que ocurren una serie de eventos
de fusin y fisin con vesculas endocticas que van cambiando su
contenido, particularmente en relacin a enzimas proteolticas.
Finalmente ocurre la fusin con los lisosomas para dar lugar al
fagolisosoma, donde los patgenos sern completamente
degradados. Durante este proceso tambin se recluta la bomba de
protones dependiente de ATP que es clave para la acidificacin
interna, que permite una mayor eficiencia en la actividad de las
hidrolasas acidas. Mtb (ManLAM) inhibe tanto la acidificacin del
fagolisosoma como los eventos de fusin con ciertas vesculas.
Algunos de los efectos son mediados por LAM y otro por
componentes secretados por Mtb, que actualmente se estn
caracterizando. Impide la maduracin del fagolisosoma. Esto solo lo
hace cuando la fagocitosis ocurre a travs del receptor de manosa
(ManR) o del receptor para complemento (CR3), no a travs de la
dectina.
Actividad microbicida
Cuando los macrfagos se activan comienzan a producir especies
reactivas del O (por activacin de la NADPH oxidasa, estallido
respiratorio, produccin de anin superxido) y del N (por
induccin de la expresin de la iNOs que produce xido ntrico).
Estas especies son altamente txicas para las bacterias. Mtb
inhibe el reclutamiento de la iNOs a la membrana del fagosoma.
Adems expresa enzimas detoxificantes de O2 y peroxinitrito.

Mecanismos de muerte
Mtb inhibe la apoptosis (que favorece la captura de antgenos de Mtb
por internalizacin de cuerpos apoptoticos por las clulas dendrticas) y
estimula la muerte por necrosis (que causa inflamacin y por tanto la
llegada de nuevos monocitos a los que infectar).
Por tanto los macrfagos infectados van a ver fuertemente inhibida
sus funciones (en diferentes niveles), la bacteria se replicar en su
interior, y les provocar la muerte por necrosis. Esto genera DAMPs,
cuyo reconocimiento por las clulas del sistema innato contribuir a la
induccin de la respuesta inflamatoria. Mtb aprovecha la respuesta
inflamatoria a su favor, porque se reclutan gran nmero de monocitos.
La necrosis libera los bacilos, que pueden seguir proliferando
extracelularmente y ser fagocitados por los nuevos
monocitos/macrfagos, que tampoco controlarn la infeccin y as
sucesivamente.

Activacin lenta de la inmunidad adaptativa

Paralelamente, las clulas dendrticas maduran y migran a los ganglios linfticos que drenan el pulmn. La inhibicin por
Mtb de la produccin de IL-12 hace que las DC expresen menos CCR7 y por tanto su migracin al ganglio tome mucho
ms tiempo (lo que normalmente se dara en 3 das, en la infeccin por Mtb lleva de 8 a 9). Por tanto, el comienzo de la
inmunidad adaptativa es lento. Esto es clave para la bacteria, ya que le da tiempo de proliferar y diseminarse antes de
que lleguen los linfocitos T efectores, que son imprescindibles para controlar la infeccin.
Produccin de IL-12
Expresin de CCR7
Migracin a los ganglios
Los ganglios aqu involucrados son los ganglios mediastinos, ya que estos son los ms cercanos a los pulmones, donde
comenz la infeccin.
Fisiolgicamente, podemos esperar que hayan DC en el ganglio a los 3 das, sin embargo en este caso lleva de 8 a 9 das.

Algunos factores de Mycobacterium que modulan la respuesta innata, y promueven la persistencia del patgeno: El
manosil-lipoarabinomanano, hace muchas cosas:
- Impide la biognesis del fagolisosoma, es decir, impide la fusin del fagosoma con el lisosoma.
- Interviene con la expresin de antgenos por el MHC-II, lo cual es lgico ya que no hay degradacin en fagolisosoma, por
lo tanto no hay generacin de material para presentar en el MHC-II.
- Impide la secrecin de IL-12
- interfiere con la apoptosis de los macrfagos.
Existen adems otros componentes que intervienen con la biognesis del fagolisosoma. Esto se debe a que este es un
mecanismo fundamental para asegurar la sobrevida de la bacteria. Tambin hay otros componentes de la bacteria con
estos mismos fines, por ejemplo, la presencia de una dismutasa de superxido que tiene como fin la interferencia con los
mecanismos microbicidas del macrfago.

Induccin de la inmunidad adaptativa

Una vez en el ganglio las DC presentan el antgeno a los linfocitos T
especficos. Se conocen pocos patgenos capaces de inducir una
respuesta de LT tan diversa como el Mtb:
-LTCD4+, cuyos TCRs reconocen complejos de pptidos antignicos y
molculas del MHC de clase II
-LTCD8+, cuyos TCRs reconocen complejos de pptidos antignicos y
molculas del MHC de clase I
-LT cuyos TCRs reconocen antgenos fosforilados no proteicos en
la superficie de clulas presentadoras
-LTCD4+, CD8+ o dobles negativos, cuyos TCRs reconocen complejos
de glicolpidos (por ej: lipoarabinomanano) con molculas CD1.
No obstante, los mecanismos precisos por los que ocurre la
activacin de las distintas poblaciones de LT no se conocen
completamente. Por ejemplo, se sabe que se activan varias
poblaciones de LT especficas para glicolpidos bacterianos (LT
restringidos por CD1). Tambin se sabe que los glicolpidos son
incorporados en vesculas en las clulas infectadas. En la clase de
presentacin de antgenos, vimos que existen LT especficos para antgenos lipdicos, cuya activacin involucra a un
conjunto de molculas conocidas como el complejo CD1. Las molculas CD1A-E poseen alta similitud estructural con las
molculas del MHC de clase I y se expresan asociadas a la microglobulina beta 2. La presentacin de lpidos por CD1A-C
ocurre en forma similar a la de pptidos por el MHC II en el sentido que los ligandos provienen de la va endoctica. Tanto
los linfocitos T CD8+ como CD4+ (o, incluso, CD4-CD8 dobles negativos) pueden reconocer antgenos asociados a CD1.

Los linfocitos activados proliferarn y se diferenciarn. Al interaccionar con los linfocitos TCD4, las DC, que vieron en el
sitio de infeccin a Mtb y son productoras de IL-12, dan una seal de polarizacin de la respuesta a Th1. Los Th1
efectores, junto a los linfocitos TCD8, migrarn entonces al sitio de infeccin. Su llegada al sitio de infeccin es tarda (18-
20 das post-infeccin). Comienza la formacin del granuloma.

Mecanismos efectores y evasin de la respuesta inmune

Cuando una clula

efectora Th1 reconoce un
pptido del patgeno
expresado en molculas
del MHC II en la superficie
de un macrfago
infectado, el linfocito Th1
es inducido a secretar IFN
y a expresar la molcula
CD40L. En general, el
macrfago requiere dos
seales para activarse - el
IFN y una segunda seal
(CD40L) que lo sensibiliza
para responder a esta
citoquina. La activacin
determina que los
macrfagos potencien sus
mecanismos microbicidas
como la produccin de
xido nitrico y radicales
libres del oxgeno; que
aumenten la expresin de
CD40 y de receptores para
TNF, y que aumenten la
presentacin de Ag. Los Th1 secretan adems TNF, que acta en forma sinrgica con el IFN. El IFN y TNF tambin
pueden provenir los LT citotxicos. TNF a su vez es producido por macrfagos y DC.
La produccin de IFN es crucial para el control de la infeccin. En experimentos en ratones se observ que la ausencia
de la citoquina (ratones IFN -/-) lleva a un aumento importante en los niveles de proliferacin y diseminacin de la
bacteria.
Por otra parte, los TCD4 y los CD8 son adems capaces de inducir la muerte por apoptosis de los macrfagos infectados
mediante la interaccin Fas-FasL. Los CD8 adems podrn inducir la apoptosis en forma especfica al reconocer pptidos
de Mtb unidos a MHCI, que disparan sus mecanismos efectores citotxicos especficos (con liberacin de perforina y
granzima e induccin de apoptosis de los macrfagos).
Por ltimo, los CD8 son capaces de liberar granulisina, que es directamente citotxica para Mtb. Los CD8 son muy
importantes en el mantenimiento del balance en la interaccin patgeno-hospedero durante la fase crnica de la
infeccin. Es una forma de eliminacin directa a la bacteria.
Mtb tambin desarroll mecanismos de evasin de algunos de estos procesos:
- inhibe la presentacin del Ag de los macrfagos al linfocito T a diferentes niveles.
- inhibe la respuesta de los macrfagos a IFN al bloquear la transcripcin de un subgrupo de genes de respuesta a esta
citoquina.
Adems se ha visto que Mtb induce una expansin temprana de Treg en el ganglio que limita la activacin y proliferacin
de los linfocitos efectores. Adems se ha observado que los Treg se acumulan en el sitio de infeccin, limitando la
actividad de las clulas efectoras. Este es uno de los mecanismos que ayuda a impedir que se genere una respuesta
exacerbada del sistema inmune. Gracias a esto, la respuesta inmune se mantiene, crnicamente. Es como si el sistema
inmune haya aprendido que no se puede retirar el patgeno, pero que tampoco se puede tener una inflamacin
constante, por lo cual esto regula a la baja la respuesta inflamatoria, de manera de tener un cierto nivel de inflamacin.
Las Treg entonces protegen a la bacteria, pero tambin a nosotros.

Formacin del granuloma

Con la llegada de las clulas de la inmunidad adaptativa, comienza la formacin

del granuloma (estructura que se corresponde con los tubrculos que se observan
en los pulmones de individuos infectados). El granuloma, estructura que aparece
en forma caracterstica durante la TB, se observa generalmente en respuesta a
estmulos persistentes, ya sean infecciosos o no.
El granuloma se origina por la acumulacin de los macrfagos y clulas T
principalmente, pero tambin otras clulas como dendrticas y fibroblastos. Es una
estructura compacta y altamente ordenada que va a tener una zona central
necrtica (generada por la muerte de las clulas contenidas, los macrfagos
infectados), rodeada por macrfagos especializados que se caracterizan por tener
un citoplasma de mayor tamao, gran nmero de organelos y por la presencia de
extensiones de membrana importantes que se cree que facilitan su actividad
fagoctica y microbicida. Se pueden observar tres tipos de estos macrfagos maduros: clulas gigantes multinucleadas
(que se originan por fusin de macrfagos), clulas espumosas (que acumulan lpidos), y clulas epitelioides (que
establecen uniones interdigitantes fuertes entre si). Luego, hacia la periferia encontramos principalmente linfocitos T
CD4+, CD8+, linfocitos B y fibroblastos, asociados a una capa fibrosa de colgeno.
El granuloma rodea el foco infeccioso, lo asla del resto del tejido, limitando la diseminacin de la infeccin y generando
un ambiente que favorece las interacciones entre las clulas del sistema inmune y su comunicacin mediante las
citoquinas. Esta no es una estructura inerte. En todo momento hay interacciones, muerte de clulas y dems. Las clulas
CD4 y CD8 liberan IFN, lo cual permite activar a los macrfagos y hacerlos ms eficientes, aumentando su capacidad
microbicida. IFN es un protagonista fundamental para mantener el equilibrio.

Infeccin crnica

En el balance de fuerzas que ocurre en el granuloma, en algunos hospederos se

podr eliminar la infeccin, pero como vimos antes, en la mayor parte se llega a
un equilibro en el cual la progresin de la infeccin se detiene pero no se elimina.
Algunos bacilos resistentes son capaces de sobrevivir bajo estas condiciones de
estrs generadas por su hospedero (hipoxia, bajo pH, especies oxidantes del N y
O), que activan la expresin de varios genes de Mtb involucrados en la entrada a
un estado de latencia (en espera de condiciones ms favorables para recomenzar la lucha; no mueren, pero dejan de
proliferar). Tambin de esta manera Mtb evade la respuesta inmune.
Es importante comprender que para mantener el control de la infeccin se requiere una estimulacin constante del
sistema inmune. El equilibrio logrado es dinmico y las interacciones entre el sistema inmune y el patgeno se dan en
forma constante. Las bacterias pueden vivir en estado de latencia dentro del granuloma durante toda la vida del
hospedero, pero mantienen la capacidad de reactivarse el sistema inmune del hospedero se deprime.

Re-activacin
Pero si en algn momento la inmunidad falla, luego de meses o aos, el equilibrio se rompe (ej .HIV), la infeccin puede
reactivarse. Como consecuencia progresa la enfermedad y la infeccin se disemina. La replicacin vigorosa de Mtb
dispara una fuerte respuesta inflamatoria que erosiona el tejido pulmonar. El granuloma se vuelve una masa celular sin
estructura que contiene restos celulares y micobacterias. Estas propiedades, junto con el dao general del tejido causado
por la inflamacin, hacen que el granuloma se rompa y libere miles de bacilos viables e infecciosos hacia las vas areas.
La causa ms frecuente de TB no es una infeccin primaria, sino que es la reactivacin de una infeccin primaria de la cual
no nos enteramos, por algn tipo de inmunodeficiencia.

Transmisin
Cuando el granuloma se rompe y se liberan los bacilos a las vas areas, ocurre la aparicin de tos productiva, lo que
facilita la transmisin de los bacilos. (Una vez que se reactiva, la persona se vuelve contagiosa)
El xito de Mtb como patgeno reside en su capacidad de establecer infecciones crnicas que puedan reactivarse y
generar la enfermedad ms tarde, sosteniendo la transmisin a nuevos individuos.
Tema 14: Manipulacin del Sistema Inmune. Vacunas e inmunoterapias
Clase 19, 18/11/2013

Qu implica? Si conocemos el SI tenemos una manera de llegar a un fin buscado. Con las vacunas, se estimula el SI para
que produzca mecanismos efectores contra cierto patgeno. Esta esta una forma de manipulacin del SI porque el
individuo no se infect, sino que se le present una forma no virulenta de un patgeno para que lo conozca.
Otra forma que se busca de manipulacin del SI es la inmunidad contra tumores. Un cncer crece dentro de un individuo
a pesar de tener un SI competitivo porque se trata de clulas propias, y de esta forma evade al SI. No todas las clulas que
mutan y se vuelven cancergenas van a producir un tumor, la gran mayora el SI las logra mantener, pero algunas se
escapan. Si podemos manipular al SI para que si ataque a esas clulas propias mutadas, tambin engaamos al SI a
favor del individuo.
Otra circunstancia en la que se puede manipular al SI a favor del individuo es en el caso de las alergias. La alergia es una
reaccin exacerbada del SI. La manipulacin entonces no solo sirve para activar a la inmunidad, sino que en este caso se
podra disminuirla. Otra situacin en la que se busca disminuir una respuesta inmune es en el caso de enfermedades
autoinmunes.

La comprensin y manipulacin del sistema inmune tiene un enorme potencial preventivo y teraputico
Durante la historia de la medicina se han desarrollado nuevos tratamientos que a travs de la manipulacin del sistema
inmune permiten prevenir o combatir distintas enfermedades. Adems de la variolizacin empleada desde hace milenios
y que se ha comentado en clases anteriores, se han producido descubrimientos que revolucionaron la prctica mdica,
entre estos un primer sitial le corresponde al desarrollo de vacunas, que luego de la medida de disposicin adecuada de
aguas servidas ha tenido uno de los mayores impactos en la salud pblica. En 1796 Jenner ensaya el uso de un virus
relacionado al virus de la viruela como elemento para generar proteccin contra esta ltima, introduciendo de esta forma
el concepto de vacunacin para la prevencin de enfermedades. Un siglo ms tarde Louis Pasteur introdujo el concepto
de grmenes que producen enfermedades y encontr formas de atenuarlos artificialmente, lo que le permiti el
desarrollo de nuevas vacunas contra el clera, antrax y la famosa vacuna contra la rabia, que mostr su eficacia en un
impactante experimento cuando inocul con extractos secos de la mdula de conejos infectados con el virus a un nio de
9 aos que haba sido mordido por un perro infectado, lo cual significaba con gran certeza que morira
irremediablemente. Si bien constituy un acto de osada de Pasteur que no tena licencia mdica para hacer ese tipo de
intervencin, salv la vida del nio convirtindose en un hroe al que nadie le pidi cuentas. Esto abri las puertas a
posteriores desarrollos de vacunas y muchas de las principales enfermedades que aquejan a la humanidad pudieron ser
contrarrestadas, en 1979 la OMS declar a la viruela erradicada y en 1991 ocurri algo similar con la poliomelitis en las
Amricas, al presente la poliomelitis solo se encuentra en unos pocos pases de frica, la India y Afganistn.
A pesar de estos xitos, hay varias enfermedades de carcter devastador que permanecen an sin vacunas que permitan
combatirlas, como la malaria, la tuberculosis, y el SIDA.

Del primer intento de transfusin que hay registro es el de Jean-Baptist Dennise en 1667, que introdujo un pequeo
volumen (gotas) de sangre de carnero a una persona sin mayores consecuencias. Esto lo anim a administrar un volumen
mayor de sangre de ternera a un joven demasiado inquieto, resultando en la muerte de este ltimo. Ese y otros
accidentes, an con transfusiones de sangre humana, hicieron que la prctica se prohibiera. Sobre fines del siglo XIX,
Landsteiner estudiando la aglutinacin de glbulos rojos lavados, con sueros de distintas personas, lleg a definir los
grupos sanguneos principales 0, A y B (luego sus estudiantes el AB), posibilitando las transfusiones seguras.
No cualquier individuo poda recibir una trasfusin de sangre, ni tampoco donar. En 1900, K. Landsteiner realizaba antes
de la transfusin sangunea un agregado de suero. Luego, vea que si la sangre quedaba lisa, como una mezcla de
glbulos rojos realizaba la transfusin. Si se formaban grnulos, no lo haca. Hoy se sabe que lo que ocurra es que la
sangre de tipo A tiene anticuerpos contra la sangre de tipo B. Tipo A y tipo B son glcidos que estn en el glbulo rojo,
parecido a los que encontramos en las bacterias que colonizan el intestino, por lo tanto, si somos A hacemos Ac contra B.
En un individuo A, los linfocitos B que en la mdula sea reconocen a travs de su BCR A, son eliminados (no queremos
que reaccionen contra ellos en la sangre); si reconocen B salen y generan Ac contra B.

La eleccin de los donantes de sangre para un receptor determinado se hace teniendo en cuenta los antgenos de los
grupos sanguneos. La prctica totalidad de las personas expresan el antgeno H, por lo que toleran dicho antgeno y no
sintetizan anticuerpos anti H. Las personas que expresan los antgenos A o B toleran estas molculas y no elaboran
anticuerpos anti-A o anti-B, respectivamente. Sin embargo, las personas OO y AO producen anticuerpos IgM anti-B,
mientras que las OO o BO sintetizan anticuerpos IgM anti-A. Si un paciente recibe una transfusin de hemates
procedentes de un donante que exprese una forma de antgeno no expresada en los eritrocitos propios, se
producir una reaccin transfusional. La consecuencia es que las personas AB pueden tolerar transfusiones de
todos los donantes posibles, por lo que se conocen como receptores universales; a su vez, las personas OO slo
toleran transfusiones procedentes de donantes OO, pero pueden proporcionar sangre a todos los receptores, por
lo que se denominan donantes universales. En general, las diferencias en los grupos sanguneos de menor
importancia slo provocan lisis de los hemates despus de que transfusiones repetidas desencadenen una
respuesta de anticuerpos secundaria.
Adems de en las clulas sanguneas, los antgenos ABO se expresan en otros muchos tipos celulares, tales como las
clulas endoteliales. Por tanto, para evitar el rechazo hiperagudo de los aloinjertos de rganos slidos resulta esencial
tipificar el grupo ABO del donante y del receptor.

En forma similar, un importante hallazgo fue el descubrimiento, a mediados del siglo XX, de la los genes del MHC lo que
permiti seleccionar pares donante-receptor disminuyendo las posibilidades de rechazo. En un trasplante tambin
estamos manipulando el SI, porque en el momento que son trasplantados se los inmunosuprime, para no rechazar el
rgano, el injerto.
Otra importante contribucin de la inmunologa ha sido la posibilidad de utilizar anticuerpos producidos fuera del
paciente. En las primeras aplicaciones estos se utilizaron para neutralizar toxinas bacterianas y venenos de animales
ponzoosos. Por ejemplo, si nos muerde una vbora, el veneno acta muy rpido. Si esperamos a que el sistema inmune
adaptativo reaccione, reconozca y acte eliminando al patgeno, morimos. Es por esto que lo que se usa son los
anticuerpos teraputicos, antisueros, que son Ac ya producidos contra la toxina. De esa manera la toxina es neutralizada.
En las ltimas dcadas, el progreso en la ingeniera de anticuerpos monoclonales ha posibilitado definir la especificidad y
disminuir la inmunogenicidad de los mismos, abriendo la puerta al campo de anticuerpos teraputicos que pueden ser
utilizados contra un amplio espectro de blancos, clulas tumorales, citoquinas, clulas del sistema inmune, etc.
Finalmente la mejor comprensin del funcionamiento del sistema inmune y su regulacin, han permitido la introduccin
de productos biolgicos teraputicos (biofarmacuticos) que son capaces de modular la respuesta inmune. Entre estos
se destacan el uso de distintas citoquinas como interferones en cncer (IL2, IFN alfa y gama), enfermedades autoinmunes
(INF beta), e infecciones virales (IFN gamma). Los factores que promueven la generacin de granulocitos G-CSF
(Granulocyte Colony Stimulating Factor) y GM-CSF (Granulocyte and Monocyte Colony Stimulating Factor) han sido
aprobados para su uso en pacientes sometidos a radiaciones o quimioterapia para estimular la hematopoyesis.

De los Ac teraputicos que se le dan a los individuos es lo que se llama una inmunizacin pasiva, es diferente a lo que es
una vacuna, la cual es una inmunizacin activa. La diferencia entre estas radica en que en la pasiva ya damos el Ac, la
herramienta para eliminar el patgeno. En cambio, en la activa lo que hacemos es activar al SI del individuo para que
reconozca y elimine el patgeno. Por ejemplo, si quiero hacer una vacuna contra una bacteria, puedo agarrar pedazos de
la bacteria o de la bacteria muerta, la inoculo, y el SI del individuo lo reconoce como extrao, va a responder y va a
generar Ac contra dicho patgeno. Se activan las clulas B y T del individuo. Si yo quisiera actuar rpido contra un veneno,
le doy ya los Ac que neutralices la toxina, para que ya no sea toxica, y se eliminara del organismo como inmunocomplejo.
En este segundo caso no estoy activando linfocitos B ni T.

Las vacunas pueden prepararse con organismos vivos, inactivados o componentes individuales de los patgenos.
Vacuna: Preparacin no patognica, diseada para inducir una respuesta inmune de larga duracin (aos) que sea capaz
de evitar el desarrollo de enfermedad. Debe ser especfica contra cierto patgeno, capaz de generar memoria contra
dicho patgeno, de manera de que si el individuo se infecta, no desarrolle la enfermedad.
Le doy algo al individuo que no sea txico, que no lo enferme. Con la vacuna evitamos la enfermedad, no evitamos la
infeccin. Con la vacuna activamos los linfocitos T y B del individuo, los cuales se encuentran dentro del individuo, en los
ganglios, entonces. Las clulas T y B de memoria fueron generadas para que, si entra el patgeno se activen ms
rpidamente y me defiendan. El patgeno debe ingresar al organismo y llegar hasta el ganglio, por lo tanto la infeccin
est. Pero la enfermedad, en teora, no.

Tipos de vacunas:
Microorganismos vivos (1)
Microorganismos inactivados (2)
Componentes individuales (3)
ADN (experimentales) (4)
Patgenos similares o atenuados (respuesta B y T)
Calor, radiaciones, tratamiento qumico, etc.
Componentes purificados o recombinantes
Plsmido con fuerte promotor viral que contiene el gen del
antgeno de inters (respuesta B y T)

Cmo podemos preparar una vacuna? Si queremos activar linfocitos T y B para generar plasmocitos y T efectores,
adems de los B y T de memoria, es necesario inocular algo que se parezca (mucho) al patgeno. Porque no me sirve que
active a un linfocito para X, si luego se va a infectar con Y. Los linfocitos B y T se activan especficamente con algo, por lo
que debo similar al patgeno, de una manera no patognica.
(1) Las vacunas iniciales como la de Jenner, tenan como antgeno principal microorganismos vivos relacionados con el
patgeno, que sin generar la enfermedad inducan una respuesta inmune protectora. Un ejemplo de este tipo de
vacunas, es la BCG (bacilo de Calmette-Gurin) que se basa en el uso de una forma atenuada del Mycobacteirum bovis el
agente causante de la tuberculosis bovina. Como no siempre era posible contar con un organismo de ese tipo, se recurri
en otros casos a la atenuacin del propio patgeno. La atenuacin en la mayora de los casos se consigue cultivando por
largo tiempo al microorganismo, o en el caso de virus utilizando clulas de otros animales para cultivarlo. De esta forma
se consiguen variantes que dan lugar a formas moderadas de la enfermedad, pero que por persistir durante un tiempo,
dan lugar a respuestas de larga duracin. Hay que tener cuidado a quin se le da este tipo de vacunas, A un individuo con
el SI competente no hay problema, porque es atenuado. Si tratamos a un individuo inmuno-incompetente, con algn
sndrome de inmunodeficiencia, podemos matarlo.
(2) En el proceso de atenuacin se constat que an la formas muertas (que no se reproducan) del microorganismo
eran tambin capaces de generar una inmunidad protectora. Estas vacunas a microorganismos muertos se preparan de
diversas formas utilizando agentes qumicos o fsicos, pero en el caso de los virus, al administrarse en una forma que no
impide su replicacin, no pueden infectar las clulas y por tanto no generan respuestas T citotxicas.
Entre la utilizacin de microorganismos vivos y patgeno atenuados hay varias ventajas y desventajas, dependiendo de lo
que sabemos del patgeno al cual le queremos montar una respuesta inmune y dependiendo de lo que sabemos del SI.
Si doy algo extracelular, como puede ser un microorganismo muerto, ste ser fagocitado o endocitado, presentado por
molculas de MHC-II, las cuales activaran linfocitos T CD4, los cuales son colaboradores, por lo que el resultado ser la
colaboracin, probablemente a Linfocitos B: es una respuesta de anticuerpos. Si yo inoculo con el microorganismo vivo,
atenuado, tiene la ventaja de hacer el mismo camino que lo que hara el patgeno real. Por lo tanto, si es un virus
atenuado, el resultado es la activacin de linfocitos T CD8 (adems de los CD4), por ende tendremos una respuesta
citotxica de CLT, que matan clulas propias infectadas por virus. Si necesito activar y generar clulas T de memoria que
sean TCD8 de memoria, no puedo darlo como virus muerto, ya que es incapaz de infectar una clula. De todas formas, el
virus tiene una etapa extracelular, antes de infectar la clula blanco, y all puede actuar el Ac y puede incluso evitar que
infecte la clula si el Ac est dirigido a las molculas que usa para infectar la clula.
(3) Una segunda generacin de vacunas, las vacunas a subunidades consisten en el uso de compuestos discretos del
patgeno, como protenas de la cpside de un virus, que se desarrollaron sobre todo a partir de los avances en la
purificacin de macromolculas y los desarrollos de la tecnologa de protenas recombinantes.
(4) Las vacunas de DNA, que an estn en el estadio experimental, consisten en un plsmido circular que contiene un
potente promotor viral, que controla la expresin del gen que codifica el antgeno de inters. Estos plsmidos tambin
incluyen secuencias que codifican seales de poliadenilacin y terminacin. Las formas ms eficientes de inoculacin
comprenden la adsorcin del DNA en partculas de oro coloidal que son disparadas por una corriente de helio. Aunque
no est claro el mecanismo por el cual funcionan las vacunas de DNA, una de las ventajas ms importantes de la
vacunacin con DNA es que es capaz de inducir una respuesta de linfocitos T citotxicos, lo cual no es fcil con otras
formas de vacunacin que no incluyan organismos vivos. Tambin resulta interesante que, probablemente debido a su
permanencia, se produce una respuesta de IgG y de larga duracin an con una nica inmunizacin.

Comnmente las vacunas son preparadas con organismos vivos, patgenos inactivados (muertos) o componentes
individuales de los mismos (subunidades)

Del agente causal podemos agarrar algn componente que sea inmuno-protector, y dicho componente, si es una
protena, se le hace la produccin recombinante, se purifica y se da como vacuna. Por ejemplo, la vacuna contra el virus
de la hepatitis. Si bien es un virus y nos sirve activar los CTL, esta vacuna formada por la una protena de la superficie del
virus permite que, si tenemos Ac contra dicha protena, evitamos que el virus infecte al hepatocito, y le damos tiempo a
que el SI ataque al tejido. Es decir, que en este caso la accin de Ac es muy efectiva contra este tipo de virus.
 Si identificamos como componente inmunognico protector un carbohidrato, y no una protena. El problema con los
polisacridos radica en que no genera linfocitos B y T de memoria, ya que para la generacin de linfocitos T y B de
memoria es necesario la presentacin de pptidos en el MHC. En el ganglio el linfocito B reconoce al antgeno, lo endocita
y luego lo presenta para que el linfocito T colabore; de esta colaboracin, uno de los efectos es la generacin de linfocitos
B de memoria. Si es un polisacrido y hay una clula B que lo reconoce, luego de endocitarlo y procesarlo no puede
presentarlo. Los polisacridos son antgenos T independientes, no generan memoria. De todas maneras, activan
linfocitos B y rpidamente se genera anticuerpos, se excreta enseguida. Sirve entonces en casos de una epidemia, en que
es necesario que la poblacin rpidamente generen Ac. Sin embargo, hoy se sabe que las clulas ms involucradas en esto
son las clulas B de la zona marginal del bazo, BZM, lo cual implica un problema para los infantes, ya que los menores de
2 aos an no tienen formados esos nichos de BZM.
Si yo lo quiero hacer T dependiente a dicho antgeno (o quiero que los menores de 2 aos sean protegidos de este tipo de
antgenos) para as poder generar linfocitos de memoria, debo agregarle un pptido covalentemente, esto es lo que se
conoce como vacuna conjugada.

Las vacunas atenuadas son usualmente ms potentes que la correspondiente vacuna con el patgeno inactivo

Las vacunas atenuadas tienen la capacidad de reproducir en parte el proceso infeccioso con propagacin parcial que
extiende la dosis y permanencia de contacto con los antgenos, en el caso de los virus, esto permite adems su acceso al
citoplasma favoreciendo la presentacin por MHC I, y por tanto respuesta T citotxica. La atenuacin tradicional de
vacunas ha sido a travs del cultivo prolongado que permite la aparicin de mutaciones en el microorganismo en cuestin
con la correspondiente disminucin de virulencia. En el caso de los virus, muchas veces implica la perdida de virulencia
especie especfica. El problema de esta estrategia es la posibilidad de reversin de estas mutaciones. Se aisla de un
paciente el virus, se cultiva en clulas humanas para que se replique, y se lo subcultiva en clulas de mono. De esta forma
lo obligo a adaptarse a vivir en un mono, por lo tanto, si lo pongo luego en clulas de humano, no infecta prcticamente
nada. Cmo pasa esto? Los virus se replican mucho, y al replicarse mutan. Entonces aquel que mut y encontr receptor
para las clulas del mono sobrevive y sus replicas son adaptadas. Esta atenuacin experimental corre el riesgo de ser
revertida. As como fue obligado a ser de mono, a lo mejor puede revertirse dentro del humano.
Otras formas de atenuar la virulencia se basan en aplicaciones de la biologa molecular que permiten, si se conocen los
genes asociados a la virulencia, mutarlos extensamente, o eliminarlos del genoma viral. Estos son ms estables como
atenuados que los generados por atenuacin convencional.
Las vacunas deben activar la inmunidad innata y la adaptativa
Cuando tenemos un patgeno atenuado, ste hace lo mismo (o muy similar) a lo que hace el patgeno. Por lo tanto va a
dar seales de peligro, generando as el foco inflamatorio y dicha inflamacin lleva a que tanto el antgeno como las DC
(maduras y activadas) viajen al ganglio y se desencadene la respuesta inmune adaptativa.

Las vacunas a subunidades son ms seguras pero deben incluir un adyuvante para activar la respuesta inmune
Si bien la transicin desde vacunas a organismos vivos, pasando por las inactivadas y finalmente llegando a las vacunas a
subunidades se acompaa de una mayor seguridad en la aplicacin de vacunas, tambin esa transicin generalmente
conduce a vacunas menos efectivas. Las vacunas a subunidades tienen como ventaja principal la seguridad, dado que
tienen una composicin bien definida en la que se han eliminado muchos compuestos que pueden inducir respuestas
inflamatorias agresivas. La contracara de este punto es que son pobres activadores de la respuesta inmune innata, dado
que no generan seales de peligro. La forma de contrarrestar este punto ha sido la incorporacin de adyuvantes. El
poder adyuvante est dado por compuestos o es una propiedad de las vacunas que promueve y amplifica la respuesta
inmune contra el antgeno que constituye la base de la vacuna.
Cuando uso vacunas a subunidades, que por lo general son solubles, difunden sin generar seales de peligro. Es una
protena que no tiene PAMPs.
Cmo puedo yo hacer esas seales de peligro? Con manipulacin del SI innato. Si no hay inflamacin no hay respuesta
adaptativa. Uso lo que se conoce como adyuvante. ste provoca una inflamacin y por ende provoca una respuesta
adaptativa contra la protena. Si quiero una respuesta de linfocitos necesito que la clula presentadora adems de
presentar Ag presente las molculas coestimuladoras, los B7, los cuales no se expresan sin condiciones de inflamacin.
Como todo lo que est en el sitio de inflamacin va hacia el ganglio, el antgeno se dirige hacia all.

Adyuvante: Compuesto que aumenta la inmunogenicidad de los antgenos con los cuales se mezclan.
Modo de accin (cosas que debe si o si cumplir el adyuvante): formacin de partculas (que no sea soluble, por ende no
difunda. Por lo general el adyuvante engloba al Ag), persistencia en el tejido (para no tener que volver a darla en un
corto perodo de tiempo), generacin de seales de peligro (PAMPs o DAMPs).

NO CONFUNDIR CON VACUNAS CONJUGADAS. El adyuvante simplemente se mezcla con la solucin, la protena asociada
a polisacrido en vacunas conjugadas est unida covalentemente.

Distintos tipos de adyuvantes han sido desarrollados para aumentar la inmunogenicidad de las vacunas
Los adyuvantes tienen PAMPs,
tienen una clara forma de
accin, principalmente a travs
de la estimulacin de los
receptores TLR.
La respuesta a adyuvantes sin
PAMPs (almina, incompleto de
Freund) es prcticamente
normal en ratones MyD88-/- o
TRIF -/- que tienen bloqueada la
sealizacin por TLRs.
Exceptuando la almina
(fosfato o hidrxido de
aluminio) para otros
adyuvantes, la FDA aprueba
individualmente la combinacin
Antgeno-adyuvante de las
nuevas vacunas. Es decir que la
FDA solo permite almina como
adyuvante en humanos,
simplemente por costumbre y
experiencia.

En la imagen se muestran
ejemplos comunes de
adyuvantes. Algunos como el
adyuvante completo de Freund,
al emulsificarlo con el antgeno
cumple directamente con las
tres propiedades de los adyuvantes al formar partculas con el antgeno, retenerlo en el tiempo al ser difcil de procesar, y
presenta adems PAMPs derivados de micobacterias. Sin embargo, otros como la almina (hidrxido de aluminio)
carecen de PAMPs, y si bien forman partculas y retienen el antgeno, la forma en la que inician la inflamacin recin est
comenzado a entenderse y en parte se discute en la siguiente lmina.
Las clulas residentes ven a estos adyuvantes como partculas (aunque algunos son gotas de aceite) y por lo tanto las
reconocen como antgeno.

El poder de los adyuvantes depende de la activacin del adyuvante fisiolgico: la clula detrtica.
A la DC se la llama adyuvante fisiolgico, ya que la DC es la que conecta la innata con la adaptativa.
Mecanismo propuesto para la accin de la almina, y posiblemente para adyuvantes basados en emulsiones aceite/agua.
Distintos estudios demostraron que la activacin de la inmunidad innata por parte de los adyuvantes basados en el uso de
almina, se producan igual en ratones knockout para los adaptadores de sealizacin MyD88 y TRIF, las dos rutas
principales de activacin por las que actan los distintos TLRs. Recientemente se ha mostrado que una importante va de
activacin de la inflamacin por clulas necrticas es a travs la liberacin de cristales de c. rico (no del c. en
solucin). Estos activan una va adicional de deteccin de patgenos, a travs de receptores intracelulares llamados NOD-
like receptors (NLRs), siendo el ms estudiado el NALP3. Estos receptores, adems de detectar PAMPs (como
peptidoglicanos) reaccionan tambin con ligandos endgenos que tienen carcter de seales de peligro, como cristales de
c. rico, altas concentraciones de ATP, o especies reactivas del oxgeno (ROS).
Al ser inyectadas, las partculas de hidrxido de aluminio, y quizs tambin las microgotas de las emulsiones de aceite
minerales, resultan necrticas para las clulas del tejido donde han sido inyectados, las cuales responden
inmediatamente secretando citoquinas que atraen clulas del sistema inmune innato. Adems, en este proceso hay una
liberacin de cristales de c. rico (al menos en algunos modelos) por las clulas daadas (DAMP). Los monocitos
reclutados fagocitan la almina y los cristales de c. rico que han sido liberados. Estos probablemente a travs de la
desestabilizan de la vescula fagoctica entran en contacto con el componente NALP3 del denominado inflamasoma,
favoreciendo la polimerizacin de varios de los mismos que recluta nuevos factores resultando en un complejo con
capacidad de activar caspasas, como la caspasa 1, que procesa el precursor de la IL-1beta y la IL-18 disparando el proceso
inflamatorio local. A travs de este estmulo los monocitos se diferencian dando lugar a clulas dendrticas maduras
que presentan el antgeno en los ganglios, activando clulas T especficas para ese antgeno. Particularmente en
ratones, esta respuesta es del tipo Th2. En el baso y probablemente tambin en los ganglios se da el reclutamiento de
eosinfilos Gr1+, IL-4+ que estimulan la respuesta de linfocitos B.

La sper vacuna; importancia del efecto adyuvante

Una nica picadura de abeja inyecta solamente 0,1g de veneno y da a lugar a una importante produccin de IgG e IgE.

Las vacunas conjugadas activan las clulas T y permiten la vacunacin contra polisacridos.

[Recordar que esto ya fue mencionado en la ltima trasparencia del tema 9, clase
11]
Los ejemplos ms destacados de estas vacunas, son las vacunas contra
Haemophilus influenzae tipo b y contra Streptococcus pneumoniae. Los
polisacridos de las cpsulas bacterianas son altamente inmunognicos en el
curso de la infeccin, sin embargo el polisacrido purificado no da a lugar a
respuesta T dependientes, y por tanto es necesario conjugarlo (generalmente al
toxoide tetnico o diftrico que ya han sido aprobados para vacunas).
La aplicacin de esta vacuna es un buen ejemplo de la inmunidad de rebao
que se logra con la vacunacin. La aplicacin en nios redujo drsticamente la
incidencia en los mismos, pero tambin en adultos.
Recordemos que aqu el eptope B (polisacrido, celeste) es distinto al eptope T
(protena, roja). La protena se uni covalentemente para que se de la
colaboracin del linfocito T, pero el plasmocito que se genera, libera Ac con
afinidad por el polisacrido, ya que esto fue lo que reconoci el BCR en un
principio.
Existen vacunas contra un gran nmero de agentes infecciosos, pero importantes enfermedades an no cuentan con
vacunas.
Las vacunas aprobadas tienen como principal mecanismo de accin los anticuerpos.
Aunque algunas de las vacunas en uso producen respuestas de clulas T y respuestas de anticuerpo T dependientes la
eficacia de las vacunas que a resultado exitosa reposa en la generacin de anticuerpos de alta afinidad contra el
patgeno blanco.
Existe un gran nmero de vacunas que han sido aprobadas para uso en humanos con variada composicin, que ha sido
optimizada para mantener un balance entre la proteccin, seguridad, costos y estabilidad. La forma de accin de estas
vacunas va desde las que usan organismos completos ya sea vivos o muertos hasta aquellas que usan componentes
individuales como toxoides, protenas de cpsulas virales, carbohidratos de cpsulas bacterianas, etc. En el caso del
sarampin existen vacunas pero son particularmente sensibles a la cadena de fro y por tanto no son adecuadas para
una importante parte del mundo.
Otros ejemplos de enfermedades sin vacuna existente: Malaria, Paludismo, Esquistosomiasis, Infestacin por
helmintos intestinales, Tuberculosis, Enfermedad diarreica, Infecciones respiratorias, Sarampin e Infeccin por
VIH/sida.
Los eptopes del core de la protena no son tan fciles de mutar y por tanto los nuevos esfuerzos de generacin de una
nueva vacuna contra el HIV estn tambin dirigidos a generar clulas CD8+ contra el virus, particularmente en el sitio de
entrada en las mucosas.
Muchas infecciones estn ampliamente adaptadas a la respuesta inmune del hospedador y han encontrados formas de
persistir evadiendo la respuesta inmune. Tal es el caso de viremias como el Epstein Barr o citomegalovirus que
permanecen para siempre una vez producida la infeccin, organismos como M. tuberculosis que infectan un alto
porcentaje de la poblacin en forma prcticamente asintomtica, y una gran cantidad de parsitos. Dada su adaptacin,
ha resultado muy difcil el desarrollar vacunas contra los mismos. Algunos parsitos logran cambiar las protenas de su
cobertura, por lo que los Ac especficos para la cobertura anterior que se generaron gracias a la vacuna ya no son tiles.
Esta nueva cobertura como es extraa activara al SI una vez ms.
En general, las vacunas eficientes son para aquellos patgenos que dan enfermedad en la fase aguda, no en la crnica. La
tuberculosis, por ejemplo. Existe una vacuna, BCG, la cual se le da hoy por hoy a los nios de 15 meses, pero no es 100%
eficaz.
Las enfermedades diarreicas e infecciones respiratorias no tienen una vacuna debido a que las produce un alto nmero
de patgenos, muchos virus producen estas enfermedades. Por lo tanto, ms all de que el virus cambie, si yo tengo 1000
virus para atacar es muy difcil abarcarlos.
El sarampin tiene una vacuna 100% efectiva, pero el problema de la vacuna contra el sarampin es que no se puede
cortar la cadena de fro, lo que implica que no haya una cobertura mundial contra esta enfermedad.
Otro ejemplo es el virus del SIDA. La vacunacin contra el virus del
sida, HIV, an no ha sido resuelta debido en gran parte a la alta
capacidad de mutacin que tiene el virus. El ingreso del virus
depende de la unin a los receptores CD4 (de linfocitos T
colaboradores; por lo tanto es un virus que ataca el SI, ms
especficamente a dicho linfocito) y el receptor de quimioquinas
CCR5. El sitio de unin a CD4 se encuentra en la protena gp120
que est asociada en forma de trmeros en la superficie del virus. El
sitio de unin a CD4+, est en el fondo de un bolsillo rodeado de
motivos de glicosilacin poco inmunognicos, y loops
hipervariables (debido a cambios mutacionales), por tanto es muy
poco accesible a eventuales anticuerpos neutralizantes. Por otro
lado, el sitio de unin a CCR5, no est expuesto y solo se hace
accesible cuando se ha producido la unin de gp120 a CD4. Esta estructura hace que sea difcil una respuesta de
anticuerpos neutralizantes. No obstante, algunos anticuerpos neutralizantes, han sido aislados de pacientes que
mostraban una resistencia natural a la enfermedad.

Junto a los antibiticos, las vacunas son las principales herramientas para el control de las infecciones.
Desde hace aos los programas nacionales de vacunacin han incorporado nuevas vacunas lo cual ha disminuido
incidencia de muchas enfermedades infecciosas. Se estima que es necesario alcanzar un 95% de vacunacin para llegar a
un nivel de inmunizacin en la sociedad que impida la diseminacin de la enfermedad. La ausencia de la enfermedad
puede operar a su vez en la poblacin como un factor negativo para que los padres sometan a sus hijos a la vacunacin,
dado que no perciben el riesgo de la enfermedad y si estn muy atentos a los posibles efectos secundarios. Por esta razn
hay una gran presin para la elaboracin de vacunas cada vez ms inocuas, que requieran pocos boosters, y si es posible
vacunas combinadas. Por esto existe una alta exigencia para el desarrollo de vacunas, a las cuales se les exige adems
bajos costos, facilidad de aplicacin y vida media adecuada (de ser posible an en ausencia de cadena de fro).
Hay vacunas que se administran una sola vez en la vida, como por ejemplo la vacuna contra la varicela. Es decir que con
una sola inmunizacin, ya generamos una respuesta de memoria que es suficiente. Sin embargo, hay otras que debemos
seguir dndonos varias veces a lo largo de nuestra vida, como la antitetnica, cada 10 aos. Por qu? Porque el
microorganismo del ttano en menos de 24hs actu. Por lo tanto no nos sirven las clulas de memoria. Necesitamos
tener los Ac en el cuerpo para tener una respuesta ms rpida. Hay que neutralizar la toxina tetnica.

Debido a su carcter preventivo y su aplicacin masiva, las vacunas deben cumplir altos estndares de seguridad

La experiencia ha demostrado que se requiere una cobertura

del 95% para que se produzca la denominada inmunidad de
rebao. Cuando la incidencia de una enfermedad cae por la
vacunacin, la poblacin deja de percibir la necesidad de
vacunacin y es particularmente susceptible a los posibles
efectos secundarios.

Cuando la incidencia de una enfermedad cae por la vacunacin,

la poblacin deja de percibir la necesidad de vacunacin y es
particularmente susceptible a los posibles efectos secundarios.
En esta circunstancia puede disminuir el porcentaje de
poblacin vacunada, lo que afecta el estado de defensa de la
poblacin, la llamada inmunidad de rebao y pueden ocurrir
rebrotes de la enfermedad. Un ejemplo ilustrativo de este
fenmeno ocurri en Gran Bretaa en la dcada del 1970. La
vacuna contra la tos convulsa (Bordetella pertusi), que haba
reducido enormemente la incidencia y mortalidad de esta
enfermedad, se preparaba con microorganismos inactivados, y
produca efectos locales menores y dolor, en casos muy raros
produca convulsiones. En la prensa se publicaron rumores
sobre algunos casos de dao cerebral luego de la aplicacin de
la vacuna. El suceso llev a que muchos padres no vacunaran a
sus hijos y la inmunizacin cayo al 30%. Luego se vio que el
riesgo de dao cerebral era infundado, pero la cada de la
inmunidad caus dos brotes de tos convulsa en los que
murieron 30 nios. De todas formas el suceso hizo que se
estudiara la antigenicidad de los distintos componentes del
microorganismo, y que sobre esta base se sustituyera la vacuna
a microorganismos muertos sustituyndola por subunidades
purificadas o recombinantes. El resultado fue una vacuna ms
segura e igualmente efectiva. El lado negativo fue que el costo
aument, lo cual limita su aplicacin en pases de menos
recursos.
La vacunacin puede utilizarse para reforzar la respuesta inmune contra tumores
Los tumores generalmente desarrollan mecanismos de evasin de la respuesta inmune que les permite sobrevivir y por
tanto la vacunacin es de por s muy difcil.

El sistema inmune controla el desarrollo del cncer, y muchos tumores son eliminados en el momento de su formacin.
La vigilancia inmunolgica contra tumores queda de manifiesto al observar el aumento en la incidencia de tumores en los
individuos inmunosuprimidos. El sistema inmune innato responde a las clulas tumorales cuando estas debido a su alta
tasa de reproduccin, apoptosis y remodelacin de tejido que tiene lugar. La alta frecuencia de apoptosis hace que en
algunos casos se libere contenido celular al espacio intracelular. Muchos de estos componentes como histonas, ATP, etc.
y fragmentos de la remodelacin tisular activan a los macrfagos circundantes, que liberan TNF, IL1 que activan las DC
inmaduras (comienzo de la respuesta inmune contra el tumor) y la IL-12 activa las NK. Estas junto con las NKT y linfocitos
T gamma-delta, pueden activarse tambin al reconocer molculas de estrs que se expresan en el tumor (MICA y MICB).
El IFN gamma secretado por las NK promueve la expresin de MHC1 por el tumor y las clulas T citotxicas alfa-beta
CD8+ que se formaron como resultado de la respuesta adaptativa pueden ayudar a destruir las clulas tumorales. Esta
presin del sistema inmune hace que las clulas tumorales en algunos casos se seleccionen (en un proceso parecido al de
seleccin natural) para por ejemplo no responder al INF gama, para no expresar MHCI o eliminar de su genoma alelos
particulares del MHC que presentan pptidos del tumor, o secretar citoquinas antiinflamatorias como IL-10, TGF beta, o
secretar MICA o B en lugar de expresarlas en membrana.

El mayor adelanto en la vacunacin contra el cncer ha sido en aquellos de claro origen viral como la Hepatitis B y
Human Papiloma Virus. Otras formas de vacunacin directa contra componentes del tumor ya formado, no han sido
exitosas. La forma ms comn es la de utilizar preparados del tumor para inmunizar, combinados sustancias adyuvantes
bacterianas la BCG, o motivos de CpG sintticos, pero los resultados, aunque alentadores no muestran la efectividad
esperada. Otras estrategias se han basado en el uso de antgenos de tumores definidos, en forma recombinante o bien
como pptidos, acompaados de terapia gnica en la cual se transforman las clulas tumorales para que expresen B7 o
GM-CSF. Tambin ha habido muchos intentos de aumentar la inmunidad contra tumores pulsando clulas dendrticas del
paciente con pptidos o antgenos tumorales, y reinyectando estas clulas en el paciente. Dada las dificultades prcticas
y el xito relativo de este tratamiento, una nueva tendencia es la de explorar el targeting de las clulas dendrticas
inyectando en el paciente quimeras de antgenos tumorales fusionados a fragmentos de anticuerpos que estn dirigidos
contra receptores endocticos de las clulas dendrticas como DC-SIGN, Dec-205, Clec9A, dectina 1, etc, y se ha visto que
dependiendo del receptor utilizado se puede obtener respuestas T CD4+, T CD8+ o combinaciones. En algunos casos,
como con el uso de DC-SIGN o Clec9A, la activacin de las clulas dendrticas es incluso independiente del uso de
adyuvantes adicionales como CpG que pueden ser requeridos en otros casos. Esta ltima aproximacin ha dado
resultados muy promisorios en modelos murinos de metstasis de melanoma. Muchas de las estrategias de generacin
de inmunidad contra tumores, especialmente cuando se usan extractos complejos del tumor, pueden dar lugar a
autoinmunidad. Se toma parte del tumor por un lado, y sangre por el otro. De la sangre del individuo que tiene el tumor
se extraen los monocitos (clulas blancas). Luego se los incuba con ciertos factores de crecimiento para diferenciarlos en
DC. Si tomamos adems una biopsia del tumor y podemos una purificacin sobre los Ag tumorales, podemos cultivar la
DC con el Ag en presencia de una inflamacin (manipulacin: inflamacin en un Petri). Con esto tenemos DC activadas, y
es esto lo que se le da al individuo.

Los avances en la ingeniera de anticuerpos ha permitido su utilizacin teraputica: magic bullets.

La generacin de anticuerpos monoclonales a travs de la tecnologa de hibridomas (1975), despert gran expectativa en
cuenta a la posibilidad de utilizarlos como magic bullets para dirigir la accin del sistema inmune, o de toxinas,
radiofrmacos, etc. a clulas o tejidos enfermos. Sin embargo los primeros intentos resultaron frustrados sobre todo por
la generacin de una respuesta inmune de los pacientes contra los anticuerpos murinos. El nico ejemplo exitoso de este
primer intento fue el anticuerpo murino OKT3, que est dirigido contra la molcula CD3+ del complejo TCR de los
linfocitos T y permite la eliminacin de las clulas T de un individuo, lo que se ha utilizado como forma de
inmunosupresin en transplantes. En las dcadas siguientes se produjo un importante avance en la ingeniera de
anticuerpos que permiti la humanizacin de los anticuerpos monoclonales generados en ratn, por ejemplo
transfiriendo los dominios variables murinos a una molcula de anticuerpo humana, o mejor an injertando los CDRs
murinos en una Ig humana. Estos avances permitieron un auge en produccin de anticuerpos teraputicos y al presente
se encuentran en el mercado unos 20 anticuerpos sobre todo para su utilizacin en cncer y en desregulaciones del
sistema inmune. La forma principal de funcionamiento de estos anticuerpos es a travs de la neutralizacin por ejemplo
en el caso de los anticuerpos contra TNF-alfa o Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF), o tambin una vez unido al
receptor en la clula blanco, pueden reclutar la accin del complemento o de elementos celulares como NK dando lugar
a mecanismos de ADCC. Una fuerte limitante para su uso ha sido la dificultad de produccin. Los anticuerpos se
obtienen por procesos costosos de cultivo celular en clulas eucariotas, y la dosis teraputica puede ser de varios gramos.
Por ejemplo el Rituximab se usa en dosis de 375 mg/m2 en 8-16 aplicaciones, lo que termina en una cantidad de 8-12 g.
Tambin se prepararon distintas construcciones como la regin Fab o los dos dominios variables del anticuerpo unidos
por una cadena polipeptdica (single chain scFV) conjugados a toxinas, radiofrmacos, citoquinas que de esta forma son
dirigidas a determinados tipos celulares. Tambin pueden generarse anticuerpos biespecficos que dirigen la actividad de
clulas NK contra clulas tumorales, o la de linfocitos T contra las clulas tumorales, si bien en este caso la ventaja es que
hay muchos ms linfocitos T, estos requieren de activacin por CD28 para ejercer eficientemente su actividad citotxica.
Los fragmentos menores son ms fciles de producir y tienen mejor penetracin en los tejidos, por ejemplo se ha
estimado que solo el 20% de las molculas enteras pueden penetrar los tejidos. Sin embargo estos fragmentos tienen
menor vida media, lo que implica que deben repetirse las administraciones ms frecuentemente. Actualmente varios
grupos estn tratando de introducir modificaciones que aumenten la vida media de estos fragmentos, la ms promisoria
al momento ha sido la conjugacin a polietilenglicol.
Esto forma parte de la inmunizacin pasiva, y se usa en los casos de querer neutralizar una toxina o un veneno por
ejemplo.
Antiguamente lo que se hacia era darle la toxina tetnica a un caballo. Se le sacaban los Ac y stos se les daba al
individuo. Pero el individuo poda recibir Ac de caballo una sola vez. Si le doy Ac de caballo a un ser humano, su partope
va a reconocer y neutralizar la toxina, pero, su fraccin Fc activara el SI del individuo porque no es propio. Los estudios
siguientes se basaron en la bsqueda de la posibilidad de recibir antisueros ms de una vez. Hoy por hoy, los Ac
antitetnicos son de origen humano, ya que la mayora de la poblacin est vacunada, inoculada, lo que indica que la
mayora tenemos en nuestra sangre Ac contra el ttanos.
Los bilogos moleculares intentaron otras maneras de humanizar esos anticuerpos de animales. Si tenemos un Ac
especfico para el ttanos del ratn, lo que se puede hacer es sacar la secuencia del ARN que codifica para la regios Fab y
formar la Ig dimrica que tiene el partope proveniente del ratn y el resto (parte constante) humano. Qu mejora esto?
Adems de evitar el shock anafilctico (por su uso como antisuero y su rpida accin), todos los mecanismos efectores
que se activan mediante el reconocimiento del Fc se pueden activar, porque tenemos esa parte como propia; se puede
dar lugar a los mecanismos efectores dependientes de Ac.
Ms humanizado todava sera por ejemplo el caso de CAMPATH-1H: Anticuerpo humanizado generado por injerto de los
CDRs del anticuerpo de rata contra CD52 un marcador de linfocito maduros pero no de precursores, que se usa para
eliminar los mismos y como tal tiene aplicaciones en desordenes linfoproliferativos y est siendo utilizados en ensayos
clnicos en esclerosis mltiple. Al gen de Ig se le varan las secuencias de los CDRs (regiones de compatibilidad de las Igs).
Es all donde interaccionan con los eptopes de Ag, quedando en el centro del partope.

Otro mecanismo fue la formacin de un partope como cadena nica, o solo el fragmento dependiente

Cul es la idea de todo esto? Si tengo Ac contra un tumor y le doy el dimerico humanizado, puedo producir ADCC. Las
clulas que participan en esto son las NK, ya que tienen receptores para Fc. Al reconocer el Fc envan seales de muerte
por apoptosis a la clula neutralizada por Ac. Otro fin es a estos Ac conjugarles toxinas, radiofrmacos, citoquinas,
enzimas, etc.

Anticuerpos monoclonales teraputicos aprobados por la FDA

Ejemplo: Rituximab, un anti CD20. El CD20 es una molcula que est en los linfocitos B. El Rituximab se usa para tratar
linfomas de clulas B, ya que se unen donde debera hacerlo el CD20 y luego las clulas NK atacan al tumor.

Fragmentos de anticuerpos monoclonales pueden seleccionarse in vitro a partir de bibliotecas de phage display

Una importante
tecnologa para la
seleccin de
anticuerpos
humanos es la
tecnologa de
phage display. Los
linfocitos
perifricos de un
donante son
utilizados para
amplificar los
genes de los
anticuerpos contra
los que el paciente
ha generado
respuesta, ms la
diversidad de
inmunoglobulinas
que naturalmente
gener. Los
fragmentos de PCR
son clonados en un vector que permite expresar los fragmentos de anticuerpos fusionados a una de las protenas
minoritarias que forman la envoltura de fagos filamentosos de la familia fd. De esta forma se puede generar una
biblioteca de muy alta diversidad en la cual es de esperar que estn representados la mayora de los anticuerpos. Estas
bibliotecas se seleccionan contra la molcula contra la que se quieren obtener anticuerpos a travs de varios (3-5) ciclos
de seleccin y amplificacin. Luego se toman clones aislados y se ensaya su especificidad contra la molcula selectora.
En vez de realizar Ac en si, se pone la informacin del partope.
La afinidad de interaccin del Fc por los receptores FcR es crtica para la accin de los anticuerpos teraputicos

La interaccin de los anticuerpos con los distintos receptores FcR tiene gran importancia para su valor teraputico. Se
piensa que el principal mecanismo de accin in vivo de los anticuerpos teraputicos es a travs de mecanismos de ADCC.
Esto est apoyado por ejemplo por la constatacin de que Rituximab tiene una mayor eficiencia en pacientes que tienen
una mutacin particular en el receptor Fc-gama3 que le aumenta la afinidad por la regin Fc del anticuerpo (IgG1). La
mayora de los anticuerpos aprobados utilizan Fc de IgG1, solo algunas excepciones utilizan regiones Fc de IgG4 o IgG2
(solamente accin neutralizante). Durante su produccin en clulas eucariotas, distintas clulas puede afectar la
glicosilacin y esto resulta muy importante para la actividad. Por ejemplo un anticuerpo anti CD20 producido en la lnea
YB2/0 de rata, mostr un poder 50 veces mayor para mediar la ADCC que el mismo anticuerpo producido en clulas CHO
(Chinese hamster ovary). Esto se debe a que las clulas CHO tienen una mayor actividad de una fucosil transferasa y la
adicin de fucosa limita la interaccin con el receptor.
La necesidad de una afinidad por el receptor est fuertemente condicionada por la competencia con los anticuerpos
circundantes en el paciente. As las dosis de los Ac teraputicos que deben usarse in vitro son muchas veces cientos o
miles de veces menor que las que se necesitan para actuar in vivo. Otro aspecto importante es que idealmente el
anticuerpo no debera interactuar con los receptores inhibitorios Fc-gama-RII-B, y por esta razn se han hecho esfuerzos
para realizar mutaciones que puedan disminuir selectivamente esta interaccin.
La interaccin del receptor FcRn (neonatal receptor) prolonga la vida de las Igs de das a semanas.
Vida media IgG1 = 21 das; IgG3 = 7 das. Unin a FcRn igG1 > igG3.
Idealmente el anticuerpo debe interactuar con alta afinidad con los FcR activadores, pero no con los inhibidores. La
glicosidacin por ejemplo es crtica en este sentido.

Estrategias para la modulacin de la inmunidad contra el cncer

Estrategias para la modulacin de la autoinmunidad

Contrariamente a lo que ocurre con la terapia del cncer, las enfermedades autoinmunes requieren la inmunosupresin.
El tratamiento convencional ha sido el uso de agentes inmunosupresores como corticosteroides, macrlidos,
antimetabolitos y agentes alquilantes. Recientemente han aparecido una serie de opciones de biofrmacos que tienden a
suprimir selectivamente la respuesta inmune de los pacientes. En los casos en que se conoce el antgeno, mltiple
esclerosis, miastenia gravis, diabetes tipo I, Graves disease, etc. se ha considerado la posibilidad de generar tolerancia
antgeno especfica, en contraposicin a la immunosupresin indiscriminada. Sin embargo, muchos de los primeros
intentos han resultado en exacerbacin de la enfermedad. Una excepcin es el glatiramed (Copaxone Teva
Pharmaceutical) que es un copolmero al azar de pptidos bsicos desarrollado como un mimtico de la protena bsica
de mielina, ha dado bueno resultados y se ha visto que es capaz de estimular la produccin de clulas reguladoras, es el
nico antgeno especifico aprobado por la FDA. En cuanto a los tratamientos no antgeno especficos, los ms exitosos
han sido el uso de anti TNFalfa en artritis reumatoidea, con un obvio rol antiinflamatorio, el uso de IFN beta en esclerosis
mltiple (en este caso el mecanismo de accin no es claramente entendido), el bloqueo de la migracin de linfocitos T
activados usando anticuerpos anti VLA4 (una integrina que vinculada a la migracin de estas clulas). Este ltimo result
ser muy eficiente en esclerosis mltiple al impedir el acceso al cerebro de los linfocitos T que participan en el proceso de
la enfermedad, sin embargo, aunque con baja frecuencia, produjeron la reactivacin de una enfermedad viral latente de
alta incidencia, la progressive multifocal leukoencephalopathy (PML) justamente al disminuir la actividad de las CTLs. A
pesar de algunos progresos, se necesita una mejor definicin de los antgenos crticos y las poblaciones celulares, aunque
en algunos casos las aplicaciones no. Por ejemplo el Rituximab, que se une a CD20 y por tanto disminuye la poblacin de
clulas B, ha probado disminuir los sntomas de la esclerosis mltiple en corto plazo (das), evidenciando el rol de la
secrecin de anticuerpos en la enfermedad, an cuando hay acuerdo que el componente principal de la misma es la
respuesta d clulas T. En otro ejemplo, un tratamiento con anti CD3 tuvo un efecto de varios aos en el progreso de la
diabetes tipo I, indicando que el efecto fue regulador y no solo eliminacin de clulas. Finalmente, ahora sabemos que
CD25 es un marcador de clulas reguladoras, pero cuando se desarrollo el Daclizumab, una anticuerpo anti-CD25 no se
saba y se uso en estudio de supresin de la autoinmunidad, lo cual no era racionalmente indicado, sin embargo el
Daclizumab esta probando ser til en el tratamiento de la esclerosis mltiple y la uveitis (autoinmunidad que afecta los
ojos)