Professional Documents
Culture Documents
Instrum
Instrum
A = apsorbancija
= molarni apsorpcijski koeficijent
A = cl (ekstinkcija stari naziv; L cm-1 mol-1)
c = molarna koncentracija uzorka (mol/L)
l = duljina puta zrake kroz uzorak (debljina
kivete) (cm)
1
IR SPEKTROSKOPIJA
Infracrvena regija spektra
lat. infra ispod crvene; znai regija u spektru koja korespondira frekvenciji
tono ispod frekvencije vidljivog dijela spektra (crvena boja), odnosno iznad
najvie frekvencije mikrovalova: ~ 8 x 10-5 do 1 x 10-2 cm.
2
Valna duljina () se unutar IR-podruja iskazuje u mikrometrima
(1m = 10-6 m = 10-4 cm).
( cm-1) = c= x
c
1 10 000 m/cm
( cm-1) = = (jer 1 m = 10-4 cm)
(cm) (m)
rastezne vibracije
4
APSORPCIJA ZRAENJA
npr: rastezna vibracija C=O veze apsorbira energiju valnog broja 1700 cm-1,
a O-H veze 3350 cm-1
6
Dipolni moment je ustvari elektrino polje koje okruuje polarnu vezu.
Kako dipolni moment oscilira, polarna veza okruena je oscilirajuim
elektrinim poljem koji slui kao antena za apsorpciju IR zraenja.
7
Vrijeme (vibracije veze) Vrijeme (vibracije veze)
9
IR-spektar (graf) dijelimo na dva podruja:
10
Rastezne i deformacijske vibracije svake veze u molekuli daju jako
puno apsorpcijskih vrpci, pa IR-spektar izgleda vrlo kompleksno.
11
Svaki signal (apsorpcijska vrpca) u IR-spektru ima 3 karakteristike koje
su vane kod tumaenja spektra:
VALNI BROJ
INTENZITET
OBLIK
VALNI BROJ
12
Hookov zakon
OH > NH > CH
Poto je OH veza u usporedbi sa NH i CH vezom najpolarnija, tokom
rasteznih vibracija razmak izmeu atoma u takvoj vezi je najvei, rezultirajui
najboljim poveanjem dipolnog momenta i najveim intenzitetom apsorpcijske
vrpce.
14
OBLIK APSORPCIJSKIH VRPCI
U alkoholima:
16
U nekom prosjenom vremenu, jedan dio molekula amina e vibrirati
simetrino, a drugi dio asimetrino. Simetrina vibracija e apsorbirati
odreenu frekvenciju IR- zraenja potrebnu za vibracijsko pobuivanje,
dok e asimetrina vibracija apsorbirati drugu frekvenciju.
17
IR-spektrometri
18
IR-spektrometre dijelimo na:
Disperzijske s optikom reetkom (primarno se koriste za
kvalitativnu analizu)
FT-IR-ureaje (i za kvalitativnu i za kvantitativnu analizu)
Nedisperzijske fotometre (za kvantitativno odreivanje
organskih spojeva u atmosferi)
Refleksijske ureaje (najee za analizu krutina u poljoprivredi i
industriji)
21
Prednosti FT-IR-tehnike:
1. Kratkoa postupka (par sekundi, sve frekvencije IR
zraenja simultano prolaze kroz uzorak)
2. Visoka resolucija ( 0,01 cm-1)
3. Odlini spektri (s nekoliko skeniranja izbjegavaju se sluajne
apsorpcije)
4. Mala koliina uzorka (ng, kombinacija s GC, HPLC)
5. Kompjutor pohranjuje spektre istih uzoraka i otapala
(analiza smjesa), te je takoer mogue usporeivanje spektara
sa onima u bazi (katalozima)
6. Mogua je linearnost u ili , odn. kompjutorska obrada spektra
(poveanje i izdvajanje pojedinih dijelova, itd.).
Video - IR-spektroskopija
22
Podsjetnik:
23
Spektralno podruje Valna duljina, Raspon energije, kJ/ mol (kcal/ mol)
24
Apsorpcija UV/Vis energije zraenja
27
Dio molekule koji je apsorbirao UV/Vis zraenje naziva se KROMOFOR
(nezasieni dio molekule C=C, C=O, NO2 itd).
Uzorak je apsorbirao zraenje kada je intenzitet zrake prole kroz uzorak (I)
manji od intenziteta ulazne zrake (Io) i omjer Io /I je vei od 1.
29
Veliina ovisit e o veliini kromofora, te o vjerojatnosti da e zraenje
odreene biti apsorbirano kada pogodi kromofor (P = 0-1).
30
EFEKT KONJUGACIJE na vrijednost valne duljine apsorbiranog UV-zraenja
protuvezna
Energija
vezna
UV-spektar izoprena
max = 20 000
apsorbancija
buta-1,3-dien
max = 217 nm
32
Terminologija za apsorpcijske pomake
Priroda supstituenta i polarnost otapala utjeu na poloaj
apsorpcijskog maksimuma. Kako bi odredili njihov utjecaj,
upotrebljavaju se sljedei pojmovi:
33
Woodward-Fieserova pravila
KROMOFOR
AUKSOKROM
Kada bijelo sunevo svjetlo prolazi ili se reflektira kroz obojani spoj
(otopinu), jedan se dio Vis-spektra apsorbira.
35
BOJILA organski spojevi koriteni za bojanje tkanina, plastike,
prehrambenih proizvoda i sl.
prvotno ekstrahirani iz biljaka, a danas se dobivaju sintetski
struktura: konjugirani spojevi sa heteroatomima koji sadre
nevezne elektronske parove.
O2
PREHRAMBENE BOJE:
Indigo Carmine
Sunset Yellow
36
Primjena UV/Vis spektroskopije u biokemijskim procesima
37
Primjena UV/Vis spektroskopije u analizi anorganskih kompleksa
s ionima prijelaznih metala
38
Kompleksi s prijenosom naboja (prijelazi izmeu orbitala metala i liganda)
Udruivanjem dvije ili vie molekula, pri emu izmeu njih dolazi do
prijelaza dijela naboja, stvara se elektrostatska privlana sila koja
stabilizira nastali kompleks.
prijelaz naboja sa liganda na metal LMCT (ligand to metal charge transfer)
- ligand je donor elektrona, zbog nieg nivoa energije orbitala
- primjeri liganada: F-, Cl-, Br-, I-, H2O, OH- itd.
39
UV/ Vis SPEKTROFOTOMETAR
mono- referentni
---- -------- uzorak
----- detektor
kromator ------
izvor omjer
---- uzorak ----- detektor
UV/Vis spektroskopija
41
Nuklearna magnetska rezonancija (NMR): najmonija metoda za
odreivanje strukture organskih i anorganskih spojeva
slino IR-spektroskopiji, NMR-analiza je izvediva s vrlo malom
koliinom uzorka koji se pri tom ne oteuje,
NMR se koristi za analizu razliitih jezgri (1H, 13C, 15N, 19F i 31P), a
temelji se na njihovim magnetskim svojstvima,
vodikov atom kao mali magnet 1H NMR,
igla na kompasu usmjerava se prema sjeveru, u smjeru Zemljinog
magnetskog polja; prisilno usmjerenje prema jugu je nestabilno te
se igla, nakon otputanja, brzo izvre prema sjeveru,
vodikova jezgra (mali magnet), nakon izlaganja vanjskom mag.
polju Bo orjentira se u njegovom smjeru (stabilniji poloaj), ali je
mogue, izlaganjem dodatnom elektromagnetskom zraenju Brf,
postii i izvrtanje u suprotnom smjeru (nestabilniji poloaj),
frekvencija zraenja Brf, potrebna za izvrtanje jezgre ovisi o jakosti
vanjskog magnetskog polja, a odgovara frekvenciji radiovalova
(radio frequency, rf),
izvrtanje jezgre iz jednog magnetskog usmjerenja u drugo
primjenom radiovalova naziva se rezonancijom.
Teorija NMR
etiri signala
KEMIJSKI POMAK
uzrokuju cijepanje
0 1 (singlet)
1 2 (dublet)
2 3 (triplet)
3 4 (kvartet)
4 5 (kvintet)
5 6 (sekstet)
6 7 (septet)
Konstanta
sprege
signali protona koji cijepaju jedni druge uvijek imaju jednake konstante
sprege, to nam pomae u odreivanju protona pozicioniranih na
susjednim poloajima.
13C NMR-spektroskopija
nedostaci:
o ograniena na hlapljive uzorke s temperaturama vrelita niim od 500 C,
o temperatura kolone ograniena na 380 C,
o nepogodna za termolabilne uzorke,
o uzorci moraju biti topljivi i ne smiju reagirati s kolonom,
o zahtijeva spektroskopsku identifikaciju (MS) pika.
Ureaji za GLC
Princip rada - organski se spojevi razdvajaju na temelju razliite raspodjele izmeu MF i SF:
o rasplinuti uzorak injektira se u kromatografsku kolonu,
o uzorak se giba kroz kolonu noen plinom nositeljem (MF),
o komponente iz uzorka, nakon izlaska iz kolone, detektiraju se pikovima na kromatogramu.
Unutarnja stijenka kapilare presvuena je, izravno ili preko tankog sloja
poroznog vrstog nosaa, tankim slojem tekue SF,
SCOT (kapilarne kolone obloene nosaem, support-coated open tubular): mikropunjene kolone ije su
unutranje stijenke presvuene dijatomejskom zemljom na koju je nanesena SF,
megabore kolone: odnedavno na tritu, kapilarne kolone promjera 530 m; djelotvornije od punjenih
kolona.
usporedba kapilarnih i punjenih
kolona:
KAPILARNA
KOLONA
potrebno manje
uzorka,
bolje odjeljivanje,
vie pikova,
bra analiza
PUNJENA KOLONA
slabije odjeljivanje,
manje pikova, iri
pikovi,
dulja retencijska
vremena,
nia cijena
4) Termostatiranje kolone
je konstantna
procesa odjeljivanja; optimalna temperatura bliska je prosjenom vrelitu uzorka,
konvertiraju detektirane
promjene u elektrini signal
koji se ispisuje kao
kromatogram,
GLC je uspjena samo ako izabrana SF daje razliite omjere raspodjele za razliite analizirane sastojke,
preveliki omjeri raspodjele su nepovoljni jer se troi previe vremena za analizu, a uz premale omjere
raspodjele ne dolazi do potpunog odjeljivanja sastojaka,
optimalno vrijeme zadravanja u koloni podrazumijeva da analizirani sastojci pokazuju odreeni stupanj
slinosti (topljivosti) sa SF po principu slino otapa slino,
polarnost SF mora odgovarati polarnosti sastojaka uzoraka, te u tom sluaju redoslijed eluacije ovisi
Nepoeljna adsorpcija analita na nosa: tokom
plinsko- kromatografske analize polarni ili
polarizabilni sastojci adsorbiraju se na
povrini vrstog nosaa uzrokujui javljanje
nepravilnih pikova; za adsorpciju su
odgovorne silanske skupine na povrini
dijatomejskog silikata koje jako privlae
polarne organske molekule i nastoje ih
zadrati adsorpcijom, hidrolizirana povrina silikata