Microsatélites Los microsatelites o secuencias pequeias repetidas en tindem (STR, short tandem peat) son se- ccuencias de 2.2 7 nucledtides repetidas en vinden u semtan ampliamemte en el geoma de muchos organismos (en el genom humano, por ejem- plo, las repeticiones de dinuclestidos se presentan en promedio cada 30000 pares de bases). Estos microsatéites son muy eficientes para su andlisis en pruchas forenses y han sustituido e medida los minisatclites por varias razones, una de ellas es que Tos mi amplificados por PCR debido a su pequetio tamatio, dems, el niimero de rey Ccrosatélites varia enormemente entre individues, lo que los hace ideales para props cacion (ver la figura X-+4, en clatlasa color) Es importante aclarar que ademas de presentar variabilidad en el ntimero de unidades de repe- ticion a lo largo del alelo, fos microsatlites, al igual que los minisatelites, presentan polimorfismos dentso de las unidades de repeticion, Los microsutelites muchas voces se nombran seguin la longitud de su unidad de repeticion, Las repeticiones de dinuclestidos tienen dos pares de bases como unidad de repeticion, las de tinu- le6tido, tres pares; ls de tetranucleotido, cuatro pares, yas{sucesivamente, por lo general hasta 7 unidades de repeticion. w 5 430 veces. Estos microsatd tos de idlenifi- Enire los diferentes ipos de microsatélites existentes, los ms utilizadosson los tetranuclestidos, sto se debe a que los microsatéites dinucledtidos ytinuclestides no son adecuatos para el anlisis forense, ya que al amplificarlos por PGR se presenta un feasmeno conocido como “astamudeo” (Gtuite) en el que los productos resultantes de la PCR poseen 1 02 unidades de repeticién menos de las que realmente posee;a st vez,los penta y hexanuclessidos no von. nano. Por estas razones, las repeticiones de tetranucleGtidos son las mis usadas en la ident de individuos en la medicina forense (figura X-5) (Duiler, 2009). Losandlisisde ifieacién de individuos se han realizado desde siempre con la técnica de PCR para amplificar los aleles. Lo que ha variado a wavés del tiempo es a forma de ver" esos productos de PCR y los loc’ de microsatdlites elegides para analizarse, ante el niimero de locus como los loci en sf. Los primeros anilisie de amplificacién de miiples loci de mercialmente fueron los GET triples, Hamaddos asi por la inicial de los loei de mierosatélites que eran analizados (CSFIPO, TPOX y THO1), y estaban basaos en tineién de plata para visualizar los ppatrones de banda que se generan en el gel. Ta técnica por la cualse anzalizan muluples loci de STR yornina milifles PCR. de plata se realizan cargando el producto de la PCR en geles y summer: puesto quimico donde el nitrato de plata se encuentra como susiancia crosatéite que se utilizar simulineamente a le dé Los andlsis con ti siendo estos geleser principal. As, la plata se une al ADN y posteriormente es reducida con formaldehido para formar un depésitw metalieo en las moléeulas del ADN del gel para su visualizacic Hoyen dia uno de los métodos que predominan para vistalizar la huella genética es ladeteeci6n, de ADN por medios fuorescentes, Este procediniento es muy versétl, con Tas yentajas de uilzar diferentes colores para cl andlisissimultineo de diferentes loci yla autamatizaci6n del proceso Para marcar él ADN microsutélite producto de la PCR con colorantes fluorescentes, se pegan Alvorocromos los oligonncledtidos usudlos para amplificar los diferentes loci. Se wilizan diferentes colores de fuorocromo para cada alelo a amplificar, lo cual permite que los alelos que se sobrepo- ‘ea cl gel pucdan ser distinguidos por su marcador fluorescente on f .generados en la PCR son analizados por medio de eleetroforesis en capita 1cidn del color, Los alelosLa eleciroforesis en capilar es un proceso automatizado para separar biomoléculas, sus resultados enen minutos y requiere cantidades muy pequeiias de la muestra biol6gica para el analiss. EI fundamento de la electroforesis en capilar es relativamente sencillo: es una técnica de separa- de didmetro, En se obtie i6n diferencial de moléculas mediante un campo eléctrico en un capilar de 50 yp 1 capilar, los cationes fluyen hacia la terminal negativa y los aniones lo hacen hacia la positiva. Del do al alto potencial eléctrico quese genera (100 a 500 V/cm), la separacién es las que con alguna otra té de la PCR, que corresponde ca de electroforesis (Magaiia, 2009). Los productos a frag os de ADN de los locus STR que se amplificaron, viajan a través (Ar) que los excita a diferentes longitudes de onda segin el marcador fluorescente que posean. De esta manera se determina el tamaito de los alelos, que posee el individuo para cada locus STR, en. funcién del tiempo qu 1 viajar por el capilar y pasar por el rayo. Al momento de ser excitadas por el rayo de luz, las muestras son graficadas directamente por computadora. Los datos obtenidos n en un clectroferograma, que es una grafica de intensidad minutos (la duracién de un andlisis no suele del capilar donde son separados de acuerdo a su tamaiio, y detectados por un Kiser de argon tarda: en la electrofor capilar se represen de luzen funcién del tiempo, generalmente medido en exceder de 45 minutos). Este procedimiento permite analizar a la ver varios loci de diferente tamat romo, y otra cantidad similar aungu 10. Actualmente, en una sola PCR y usando cuatro dife n solo fluo can del mismo tam: 10 pero marcados con inte fluoroer sntes fluorocroms se pueden analizar 16 loci diferentes (figura X6).