2008 MANUAL DE BIOLOGA CELULAR PARA LA CARRERA DE ENFERMERA.

Fidelina Gonzlez Muoz

Eugenio Arriagada Maldonado

Registro Propiedad Intelectual N 169.912

I.S.B.N. 978-956-8029-77-7

Primera Edicin Marzo 2008

Impresin:
Talleres Direccin de Docencia
Edmundo Larenas 64-A
Barrio Universitario
Concepcin

IMPRESO EN CHILE / PRINTED IN CHILE

 Prlogo

Como resultado de una encuesta aplicada en dos aos sucesivos, en

generaciones anteriores del curso de Biologa Celular Bsica (251.121) dictado a
los estudiantes de Biologa Celular Bsica de la Carrera de Enfermera de la
Universidad de Concepcin, con el fin de averiguar posibles carencias que
hubieran en el curso con el objetivo de lograr un mejor rendimiento de los
estudiantes, surgi la idea de hacer un manual de apuntes para este ramo.

Este manual de apuntes es un material de apoyo para las clases

expositivas de dicha asignatura (con el apoyo de presentaciones digitales). Se ha
privilegiado el texto a la figura por razones de economa en nmero de pginas.
Los estudiantes acceder a las figuras pertinentes en las clases.

Se incluye adems todos los cuestionarios que los estudiantes deben

desarrollar durante el curso sobre las materias de las clases expositivas. Tambin
se incluyen los cuestionarios relativos a seminarios (sobre Virus y Cncer),
pelculas y sesiones de laboratorio. Estas ltimas actividades son
complementarias a las clases expositivas.

Este material impreso puede adems ser utilizado por cualquier estudiante
del rea biolgica que requiera complementar informacin sobre biologa celular
actualizada hasta el ao 2005, en espaol.

1
2
 CAPTULO I
MEMBRANAS BIOLGICAS

H. Eugenio Arriagada M.
Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular.
Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile.

Todas las clulas poseen al menos una membrana externa, la membrana

plasmtica, que separa el citoplasma (parte de la clula que, en las clulas
eucariontes, se ubica fuera del ncleo) del medio extracelular. El citoplasma,
contiene un gran nmero de diferentes enzimas. Las clulas eucariontes tienen
adems membranas internas que delimitan los diversos organelos y
compartimientos intracelulares. Cada tipo de organelo, posee un complemento
particular de protenas, algunas inmersas en sus membranas, otras en su espacio
interior acuoso, o en el lumen. Estas protenas permiten a cada organelo
desarrollar sus funciones caractersticas.

Las membranas biolgicas pueden separar estos diferentes medios porque

ellas son generalmente impermeables a macromolculas y selectivamente
permeables a solutos.

Al microscopio electrnico de transmisin (TEM), las membranas

biolgicas presentan una apariencia trilaminar como una lnea de ferrocarril
(Figura 1), con dos zonas electrodensas (oscuras) separadas por una zona central
menos densa (clara).

Figura 1. La apariencia trilaminar de la membrana plasmtica. Micrografa de membrana de

eritrocito humano, teida con tetraxido de osmio, obtenida al TEM.

3
 El espesor de la mayora de las membranas de mamferos es de 6-10 nm,
pero algunas de ellas son significativamente ms delgadas. Las membranas
intracelulares son normalmente de menor espesor que las membranas
plasmticas.

La base estructural del diseo particular de cada tipo celular en lo

referente a su forma y a la ubicacin de sus organelos, descansa en su
citoesqueleto, una densa red compuesta de tres clases de protenas fibrilares:
microfilamentos, filamentos intermedios y microtbulos, desplegada en todo el
citoplasma y que sustenta mecnicamente a las membranas celular y nuclear. Las
protenas del citoesqueleto, estn entre las protenas ms abundantes en una
clula eucarionte.

Las distintas membranas que tienen las clulas nucleadas animales son
especializadas debido a que poseen protenas y lpidos especficos que les
permiten efectuar tareas nicas.

Diversidad funcional de las membranas.

Las membranas biolgicas son ms que un lmite fsico como se seal

ms arriba, son estructuras que tienen funciones complejas y diversas. La funcin
ms general de las membranas es la de separacin de distintos compartimientos
celulares o subcelulares. Esta compartimentacin permite que procesos celulares
especializados tengan lugar sin interferencia externa y posibilita que las
actividades celulares se regulen en forma independiente.

Hay varias ventajas de la formacin de compartimientos en el interior de la

clula. Cuando las molculas de una reaccin catalizadas por enzimas se
concentran en un espacio pequeo del volumen celular total los reactivos pueden
"encontrarse" con mayor facilidad, lo cual aumenta la velocidad de la reaccin. Los
compartimientos separados por membranas tambin mantienen alejados de otras
estructuras, ciertos reactivos qumicos que pueden afectar a las reacciones
qumicas de manera adversa.

Los compartimientos tambin permiten el almacenamiento de energa

cuando se produce una diferencia en la concentracin de una sustancia a

4
cualquier lado de la membrana que los separa; la energa puede as, convertirse a
otras formas de energa mientras las molculas se mueven a travs de las
membranas desde el lado de mayor concentracin hacia el de menor
concentracin. Este proceso de transduccin de energa (cambio de una forma de
energa en otra), es el mecanismo bsico que utiliza la clula para convertir y
almacenar energa. En el interior celular, las membranas mitocondriales sustentan
procesos de transduccin de energa.

Las membranas celulares tambin desempean la importante funcin de

superficie de trabajo, as, algunas reacciones qumicas son catalizadas por
enzimas ligadas a las membranas. Las membranas proporcionan un andamiaje
que permite organizar en la superficie celular a las enzimas que participan en
reacciones sucesivas, ordenando los reactantes para una interaccin ms
efectiva, pudindose generar ms rpidamente algunas molculas requeridas por
la clula.

Las membranas biolgicas son estructuras muy dinmicas (flexibles)

permitiendo a los componentes celulares y subcelulares los cambios de forma que
acompaan al crecimiento celular y al movimiento (movimiento ameboideo).
Gracias a la fluidez de las membranas sus componentes lipdicos y proteicos son
capaces de moverse e interactuar.

Las membranas son autosellantes (por razones termodinmicas), lo que

permite entre otras cosas que dos membranas se fusionen como ocurre en el
fenmeno de la exocitosis.

En las membranas, hay protenas integrales que atraviesan la bicapa

lipdica tales como: protenas transportadoras o portadoras (carriers) que
translocan iones y solutos orgnicos a travs de la membrana; receptores que se
combinan con molculas especficas externas (ligandos o primeros mensajeros)
tales como hormonas, neurotransmisores, factores de crecimiento, provocando
que la membrana genere una seal que puede estimular o inhibir una respuesta
celular (transduccin de seales); molculas de adhesin que hacen posible que
las clulas se reconozcan y se adhieran entre s y con componentes de la matriz
extracelular.

5
 En las superficies de la bicapa lipdica, se encuentran protenas
perifricas. Algunas de estas protenas participan en reacciones enzimticas y en
vas de sealizacin intracelular. Otras forman un esqueleto sobre la superficie
citoplasmtica que refuerza la frgil bicapa lipdica y la une a microfilamentos o a
filamentos intermedios del citoesqueleto.

La membrana plasmtica funciona como una barrera de

semipermeabilidad entre la clula y el medio extracelular, es decir, restringe y
regula el paso de solutos hacia y desde el interior celular. Las membranas tambin
controlan el paso de sustancias hacia y desde los organelos celulares.

La membrana plasmtica, se caracteriza tambin por presentar una

continuidad transitoria con el sistema endomembranoso a travs de las vesculas
de exocitosis.

Cmo las membranas biolgicas pueden realizar diferentes funciones?

Un enfoque experimental que se ha utilizado para responder la anterior

interrogante, ha sido determinar primero qu componentes qumicos son comunes
y cules son nicos en las diferentes membranas biolgicas.

Despus, se han estudiado las propiedades qumicas y fisicoqumicas de

los distintos componentes de las membranas biolgicas y cmo estos
componentes se asocian e interaccionan entre ellos para formar estructuras
moleculares estables y dinmicas.

Finalmente, considerando los aspectos anteriores, se han elaborado

modelos de membranas biolgicas que permitan explicar dicha diversidad
funcional.

Dichos modelos son muy importantes en el estudio de los organismos

biolgicos. Un buen modelo incorpora lo que se conoce acerca de una entidad y
agrega la mejor aproximacin acerca de aquellas partes que faltan y/o las formas
en que se interrelacionan. Los modelos, al igual que las hiptesis, pueden resultar
errneos, pero ellos sirven como un valioso elemento si estimulan los
experimentos y la investigacin necesaria para confirmar la evidencia. No

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obstante, los modelos son hipotticos y no deben ser considerados ms all de lo
que son. As, a pesar de su gran utilidad, los modelos no pueden sustituir las
mediciones y los experimentos en un sistema real.

Constituyentes qumicos principales de las Membranas Biolgicas.

Para la determinacin de los componentes qumicos presentes en las

diferentes membranas biolgicas fue necesario previamente contar con
preparaciones de membranas puras provenientes de diversas fuentes.

Las membranas bajo estudio fueron primero aisladas como una entidad
separada (deben retener alguna o la mayora de las propiedades apreciadas en
observaciones morfolgicas o estudios de permeabilidad en clulas intactas o en
organelos celulares) a partir de homogenizados de tejidos (hgado, rin, etc.)
obtenidos por diferentes tcnicas, mediante centrifugacin diferencial y/o
centrifugacin en gradiente de densidad y luego procesadas para su purificacin.
Una preparacin muy estudiada, ha sido la de membranas de glbulos rojos
maduros de mamferos (fantasmas). Posteriormente, se realiz el anlisis
qumico de los constituyentes de las membranas empleando entre otras tcnicas,
las cromatogrficas. Los resultados obtenidos, mostraron los diversos
componentes lipdicos, proteicos e hidratos de carbono existentes en aquellas.

Despus de alcanzar el conocimiento de la composicin qumica de las

membranas, se realizaron estudios fsicoqumicos de los componentes puros, los
cuales han ido revelando la organizacin de las membranas y la forma cmo los
constituyentes de ellas interactan mutuamente y cmo se afectan unos a otros.

Todas las membranas biolgicas estn compuestas principalmente de

lpidos y protenas. Los componentes lipdicos no slo afectan la forma celular sino
que desempean roles importantes como en el anclaje de protenas a la
membrana, en la modificacin de actividades de protenas de membrana
(microambiente lipdico) y en la transduccin de seales (fosfatidilinositol). La
funcin principal de cada membrana, est determinada esencialmente por el
complemento de protenas que posee y por las protenas adyacentes a aquella.

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 La mayora de las membranas plasmticas de mamferos presentan
adems carbohidratos (2-10% en peso). Con la excepcin de las membranas del
aparato de Golgi, la mayora de las membranas intracelulares tienen muy bajo
contenido de hidratos de carbono. Los carbohidratos no estn en las membranas
animales como componentes individuales sino que en su mayora unidos
covalentemente al OH de una serina o treonina (enlace O-glicosdico o unin O) o
al grupo amida de una asparagina (enlace N-glicosdico o unin N) pertenecientes
a protenas de membrana a la forma de glicoprotenas y en menor proporcin
tambin covalentemente unidos a lpidos de membrana, como glicolpidos.

La proporcin entre lpidos y protenas vara considerablemente

dependiendo del tipo de membrana, del organismo y del tipo celular (Tabla 1).

Tabla 1. Composicin (% en peso) de membranas plasmticas e intracelulares.

Membrana Protena Lpido Carbohidrato

Mielina (SNC humano) 18 79 3
Eritrocito (humano) 49 43 8
Hgado (rata) 58 42 (5-10)
Mitocondria (cerdo)
Membrana interna 76 24 (1-2)
membrana externa 55 45
Microsomas (bovino)
RE rugoso 55 45
RE liso 47 53
B. subtilis 80 20

En la tabla anterior, se puede apreciar que en las membranas plasmticas

de clulas animales la relacin entre protenas y lpidos es aproximadamente 1:1,
mientras que en las membranas internas el contenido de protenas suele ser
mayor. Por otro lado, las membranas que forman la vaina de mielina, cuya funcin
principal es ser un aislante elctrico, presenta alrededor de 80% de lpidos.

Estas diferencias sealadas y otras pueden ser correlacionadas con las

funciones bsicas de estas membranas. La membrana interna de la mitocondria,

8
presenta numerosas protenas relacionadas con procesos como la fosforilacin
oxidativa, la cadena transportadora de electrones y el transporte de metabolitos.

Lpidos de las membranas.

Los componentes lipdicos de las membranas contribuyen a la funcin de

barrera de las membranas. El lpido es tambin responsable de la fluidez y la
flexibilidad/curvatura de las membranas. La flexibilidad de las membranas es
esencial para la formacin de vesculas provenientes de membranas y para la
fusin de membranas como se indic anteriormente. Los lpidos son tambin muy
importantes en numerosas vas de sealizacin celular.

Hay tres clases de lpidos de membranas celulares animales:

fosfoglicridos, esfingolpidos, y colesterol. La cantidad y el tipo de lpidos que se
encuentran en las membranas de clulas diferentes de un organismo determinado
son variables, incluso en las diversas membranas de un mismo tipo celular.

Los lpidos de membrana son molculas anfipticas, esto es, parte de la

molcula es hidrofbica; y parte es hidroflica pudiendo por tanto interaccionar con
molculas apolares y con molculas polares (agua).

Debido a la forma y la naturaleza anfiptica los lpidos (excepto el

colesterol), forman espontneamente bicapas en solventes acuosos, en las cuales
las zonas hidroflicas estn expuestas al medio acuoso y las zonas hidrofbicas
alejadas del contacto con el agua. La estructura de la bicapa lipdica es mantenida
por interacciones hidrofbicas entre las cadenas alifticas de los cidos grasos de
los fosfolpidos.

Los fosfoglicridos juegan un papel esencial en la sntesis de lipoprotenas

plasmticas y eicosanoides. Ellos funcionan tambin en la transduccin de
mensajes desde los receptores de la superficie celular a segundos mensajeros
que controlan los procesos celulares. Tambin juegan un rol fisiolgico muy
importante como surfactante pulmonar (Dipalmitoil fostatililcolina).

El colesterol es principalmente de origen animal y es un constituyente

esencial de las membranas celulares, especialmente en la membrana plasmtica.

9
Fosfoglicridos.

Los fosfoglicridos son comnmente llamados fosfolpidos, pero este

trmino es impreciso ya que otros lpidos tambin contienen fosfato. Son la clase
ms abundante de los lpidos de las membranas biolgicas. Son derivados
acilados del sn-glicerol-3-fosfato. En trminos estrictos, esta definicin es la de
cido fosfatdico, el cual est virtualmente ausente en la mayora de las
membranas.

En general, los cidos grasos en el C-1 del glicerol son generalmente

saturados pero pueden presentar un doble enlace y habitualmente tienen 16 o 18
tomos de carbono, mientras los cidos grasos en el C-2 tienen 1 a 4 dobles
enlaces y con 18 a 24 tomos de carbono (cada doble enlace genera una
curvatura, kink, permanente en la cadena aliftica de los cidos grasos). La
anterior regin es de naturaleza hidrofbica y se le suele denominar cola o tallo.

Los fosfoglicridos ms abundantes contienen a su vez un radical hidrfilo,

que puede ser un grupo polar nitrogenado (colina, serina o etanolamina), inositol o
bien glicerol, unido mediante enlace ster al grupo fosfato del cido fosfatdico.
Esta ltima regin es hidroflica y se le llama cabeza polar.

Tambin es considerado como fosfolpido por su parecido estructural el

difosfatidilglicerol o cardiolipina, presente en las membranas mitocondriales interna
y externa, que tiene dos cidos fosfatdicos unidos a glicerol.

Los fosfoglicridos son, por lo tanto, molculas anfipticas o anfiflicas con

colas apolares o hidrofbicas y cabezas polares o hidroflicas (Figura 2).

10
Figura 2. Estructura qumica de un fosfoglicrido, 1,2-dipalmitoilfosfatidilcolina (1,2-
dihexadecanoil-sn-glicero-3-fosfocolina). Se muestra en rectngulos, la cabeza polar y la
cola apolar del fosfolpido (molcula anfiptica).

El signo de la carga elctrica de la cabeza polar depende del pH. A pH

fisiolgico, fosfatidilserina y fosfatidilinositol presentan una carga negativa neta,
fosfatidiletanolamina (nombre trivial, cefalina) y fosfatidilcolina (nombre trivial,
lecitina) son neutros. Lo anterior, se ilustra en la Figura 3.

Figura 3. Representacin de la estructura qumica de los fosfolpidos: fosfatidilserina (PS),

fosfatidilinositol (PI), fosfatidiletanolamina (PE) y fosfatidilcolina (PC).

De los fosfolpidos, la fosfatidilcolina y la fosfatidiletanolamina son los ms

abundantes, representando entre los dos, el 30 a 40% (en peso) de todos los
lpidos de la membrana plasmtica, y hasta el 75% en algunas membranas

11
internas. La fosfatidilserina y el fosfatidilinositol, estn tambin presentes en las
membranas, pero en menor proporcin (1 a 10%).

Los fosfolpidos que contienen inositol (un hexahidroxil alcohol) referidos

generalmente como fosfoinositidos, tienen un rol destacado en la comunicacin
intracelular. Fosfatidilinositol 4-fosfato (PIP) y fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PIP2)
estn presentes en membranas plasmticas. El PIP2 es la fuente de inositol
trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG o DG), sealados como segundos
mensajeros y que estn involucrados en la accin de algunas hormonas.

Otro grupo de lpidos derivados de los fosfoglicridos son los

plasmalgenos, que poseen una cadena aliftica unida a glicerol por un enlace
ster, y una larga cadena aliftica unida al C-1 del glicerol por un enlace ter , -
insaturado. Los plasmalgenos que contienen etanolamina o colina esterificados al
fosfato son abundantes en cerebro y corazn. En tejido cardiaco ms del 50% de
los glicerofosfolpidos conteniendo etanolamina son plasmalgenos.

Se ha informado de altos niveles de plasmalgenos en membranas

plasmticas de clulas cancerosas metastsicas, sugiriendo con esto que estas
molculas pueden tener un rol en las caractersticas invasivas de estas clulas.

Los esfingolpidos son derivados de esfingosina.

Los esfingolpidos tienen una estructura diferente a la de los fosfolpidos.

En vez de glicerol, los esfingolpidos contienen ceramida (Figura 4b), unidad
estructural fundamental de todos los esfingolpidos, la cual es una molcula de
esfingosina, amino alcohol de 18 tomos de carbono (Figura 4a), unida a un cido
graso por su grupo amino. Es frecuente que presenten cidos grasos saturados de
cadena larga (20 a 24 tomos de carbono).

Los diferentes esfingolpidos, tienen grupos adicionales unidos al alcohol

de la esfingosina. Si este grupo adicional es fosforilcolina o fosfoetanolamina, la
molcula resultante es una esfingomielina (Figura 4c), la cual a pH fisiolgico es
una molcula neutra. Las esfingomielinas son tambin molculas anfipticas.

12
 La esfingomielina que es considerada como fosfolpido, porque contiene
fsforo, es el esfingolpido ms abundante en los tejidos de mamferos,
representando 10-20% de los lpidos de membranas plasmticas y 1-5% en la
mayora de las membranas internas. La mielina que rodea y asla elctricamente a
muchos axones en las neuronas del tejido nervioso, es particularmente rica en
esfingomielinas. Las propiedades fsicas de los esfingolpidos son similares a los
de los fosfoglicridos, con los cuales ellos son encontrados en muchas
membranas biolgicas. El tallo hidrocarburo de esfingosina y el cido graso
contribuyen a la bicapa hidrofbica, y los grupos de las cabezas polares son
expuestos hacia la superficie.

Figura 4. Representacin de la estructura de: a) esfingosina, b) ceramida, y c)

esfingomielina (SM).

Si el grupo adicional unido al alcohol de esfingosina es un azcar, se

genera un esfingoglicolpido o glicoesfingolpido. Los esfingoglicolpidos son
derivados de ceramida, que presentan monosacridos u oligosacridos, unidos
mediante un enlace -glicosdico al grupo 1-OH de la esfingosina en una
ceramida; no contienen fosfato y son con mucha frecuencia elctricamente

13
neutros. Los glicolpidos, se hallan en la superficie externa de la membrana y son
los lpidos que presentan la mayor asimetra en su distribucin en las membranas.
Dependiendo de la naturaleza del azcar, se distinguen diversos
glicoesfingolpidos: cerebrsidos, sulftidos, globsidos y ganglisidos.

Los cerebrsidos que tienen glucosa o galactosa unida a la cermida dan

origen a los glicocerebrsidos y galactocerebrsidos respectivamente. Son
compuestos neutros. Los galactocerebrsidos, se encuentran en cantidad
apreciable en el cerebro y tejido nervioso (mielina tiene un alto contenido de un
galactocerebrsido), mientras que pequeas cantidades de cerebrsidos
presentes en tejidos no neuronales normalmente contienen glucosa.

Los sulftidos son los steres sulfricos de los cerebrsidos. Los ms

frecuentes son los derivados de los galactocerebrsidos, donde el grupo sulfato
esterifica el C3 del azcar. Galactocerebrsido 3-sulfato, es el principal sulfolpido
en el cerebro, dando cuenta de aproximadamente 15% de los lpidos de la materia
blanca. Los cerebrsidos y los sulftidos normalmente contienen cidos grasos
con 22-26 tomos de carbono. Estos ltimos compuestos son inicos.

Los globsidos, son glicoesfingolpidos neutros con dos o ms azcares,

normalmente D-glucosa, D-galactosa o N-acetil-D-galactosamina. Los globsidos
y los cerebrsidos son a veces llamados glicolpidos neutros, ya que a pH
fisiolgico no presentan carga elctrica neta.

Los ganglisidos (Figura 5), los glicolpidos ms complejos contienen un

grupo oligosacrido (el nmero de hexosas vara entre uno y cuatro) que tiene de
uno o varios residuos de cido N-acetilneuramnico (cido silico); son
compuestos anfipticos con una carga negativa a pH fisiolgico.

Los ganglisidos son abundantes en las membranas plasmticas de las

neuronas donde constituyen 5-10% del total de los lpidos. Ellos tambin se
encuentran en menores cantidades en membranas plasmticas de clulas de la
mayora de los tejidos extraneuronales. Su nomenclatura abreviada hace
referencia al nmero de cidos silicos que contienen (M: un cido silico; D: dos
cidos silicos; etc.), y el nmero, a su posicin relativa de migracin en
cromatografa de capa fina.

14
Figura 5. Frmula estructural del ganglisido GM1.

La porcin oligosacrida de los ganglisidos, se extiende ms all de la

superficie de la membrana, participa en el reconocimiento clula-clula, y sirve
como sitio de unin para hormonas y toxinas bacterianas.

El ganglisido GM1 (Figura 5), sirve como un receptor de la membrana

celular para la toxina del clera, una protena secretada por el patgeno Vibrio
cholerae. Tambin las toxinas de las bacterias del ttanos, del botulismo y de la
difteria, se unen selectivamente a ciertos oligosacridos de los ganglisidos
presentes en la superficie celular.

Algunos desrdenes de almacenamiento de lpidos (gangliosidosis),

implican acumulacin de ganglisidos en las clulas. Las dos gangliosidosis ms
comunes, conducen al almacenamiento de los gangliosidos GM1 (gangliosidosis
generalizada) y GM2 (enfermedad de Tay-Sachs)

Por lo anterior, los ganglisidos tienen adems una importancia mdica.

Colesterol.

El colesterol es un componente mayoritario de las membranas plasmticas

animales. En las membranas de organelos, se encuentra en menor cantidad. Las

15
membranas de procariontes no contienen colesterol (ver Tabla 2). Un poco ms de
la mitad del colesterol del cuerpo proviene de sntesis y el resto es proporcionado
por la dieta promedio.

El colesterol es una molcula planar rgida, ms pequea y con un

carcter anfiptico menor que el de otros lpidos. El colesterol al igual que los
esteroides, que son predominantemente de origen eucarionte, es derivado de un
compuesto llamado ciclopentanoperhidrofenantreno (Figura 6a).

a b
Figura 6. a) La estructura qumica del colesterol, b) Las molculas de colesterol estn
orientadas e intercaladas en ambas monocapas lipdicas.

El colesterol, es una molcula antiptica y como tal se orienta con su

pequeo grupo OH polar hacia la superficie de la membrana interaccionando con
las cabezas polares de los fosfolpidos, y con su regin hidrofbica (anillo
esteroidal) embebida en el interior de la membrana (Figura 6b).

El colesterol, es un modulador o tampn de los cambios de la fluidez de la

bicapa lipdica. El efecto neto del colesterol en la fluidez de la membrana depende
la proporcin de fosfolpidos (PC, PE) y esfingolpidos (SM). Adems, el colesterol
restringe el movimiento de las colas de los fosfolpidos en la zona cercana a los
grupos polares y hace a la membrana menos deformable, esto es, refuerza la
estabilidad de la membrana.

16
 El colesterol es un precursor de los cidos biliares formados en el hgado.
Es tambin precursor de hormonas esteroidales (cortisol, aldosterona,
andrgenos, estrgenos, progestgenos), y glicsidos cardacos.

El colesterol est presente en los tejidos y en el plasma ya sea como

colesterol libre o como una forma almacenable, combinado con un cido de
cadena larga a la forma de ster de colesterilo. En el plasma, ambas formas son
transportadas en lipoprotenas.

Los porcentajes de algunos de los principales tipos de lpidos de una

variedad de membranas, se muestran en la tabla 2.

Tabla 2. Composicin lipdica (% en peso lpido total) de membranas tpicas.

Mielina G. R. Mitocondria Microsoma E. coli

Colesterol 25 25 5 6 0
PC (lecitina) 11 23 48 55 0
PE (cefalina) 14 20 28 18 82
SM 6 18 0 0 0
PS 7 11 0 9 0
PG 0 0 1 0 7
Resto* 37 3 18 13 11
*Principalmente cerebrsidos en el caso de mielina, y cardiolipina
(difosfatidilglicerol) en el caso de mitocondria y E. Coli.

Bicapa lipdica.

A pesar de la variabilidad en la composicin fosfolipdica de las

membranas biolgicas, la unidad estructural es siempre una bicapa (Figura 7), una
estructura laminar compuesta de dos capas de molculas de fosfolpidos en
aposicin cuyas cabezas polares enfrentan el medio acuoso y cuyas colas
alifticas forman un medio hidrofbico de alrededor de 3 nm (30 ) de espesor.

La bicapa lipdica, es una consecuencia de la orientacin espontnea

energticamente ms favorable de las molculas de fosfolpidos (tienen forma

17
cilndrica) y de esfingolpidos en un medio acuoso. Las cabezas hidroflicas de los
lpidos estn en contacto con el agua en cada superficie de la bicapa, y las colas
hidrofbicas de cada monocapa estn excluidas del contacto con el agua en el
interior, interaccionando entre ellas.

La estabilidad de la bicapa depende de las interacciones hidrofbicas

entre las cadenas acil lipdicas de los fosfolpidos: las interacciones de van der
Waals entre las cadenas alifticas que favorecen el empaquetamiento de las
colas. Tambin contribuyen los enlaces de hidrgeno y las interacciones
electrostticas entre las cabezas polares de los fosfolpidos y el agua.

Otros lpidos que poseen grupos de la cabeza hidratados ms anchos que

las cadenas alifticas tales como cidos grasos libres, lisofosfolpidos (slo tienen
un cido graso) y detergentes tales como el dodecil sulfato de sodio (SDS), tienen
forma cnica, y forman micelas (estructuras esfricas constituidas por molculas
con sus regiones hidrofbicas agregadas en el interior excluidas del contacto con
el agua y sus regiones polares en la superficie interaccionando con el agua)
cuando se colocan en un medio acuoso.

El colesterol no forma bicapas por s slo, pero se integra fcilmente en

las bicapas formadas por otros lpidos anfipticos.

Las mismas fuerzas impulsoras de la formacin de bicapas lipdicas

proveen otra propiedad importante, el autosellado. Si se interrumpe
mecnicamente la continuidad de una bicapa, sta se cierra o autorrepara por
razones termodinmicas ya que es energticamente desfavorable que un borde
libre con cadenas alifticas est expuesto al agua.

La bicapa lipdica es un fluido bidimensional, en que los fosfolpidos,

difunden rpidamente en el plano de la membrana. La difusin lateral de lpidos en
las membranas, se ha estudiado cuantitativamente con tcnicas espectroscpicas,
y la de lpidos y protenas de membrana, por medio de la tcnica de recuperacin
de fluorescencia despus de fotoblanqueado o FRAP (fluorescente recovery after
photobleaching).

Los fosfolpidos intercambian lugar con sus vecinos ~10

7
veces por
segundo, lo que significa que una molcula puede difundir en el plano de la

18
membrana 1-2 mm en 1 segundo. Los fosfolpidos pueden experimentar tambin
movimientos de rotacin en torno a un eje perpendicular a la membrana y de
flexin (Figura 8). Sin embargo, estudios recientes sugieren que no todos los
lpidos difunden libremente en la membrana plasmtica.

El flip-flop o difusin transversal de los fosfolpidos (Figura 7) rara vez

ocurre espontneamente debido a que no est termodinmicamente favorecido.
Sin embargo, las clulas poseen enzimas llamadas flipasas, que mueven
activamente ciertos fosfolpidos desde una superficie de la membrana a la otra.
Estas enzimas desempean un rol en el establecimiento de la asimetra lipdica en
las membranas celulares.

Figura 7. Bicapa lipdica. Algunos de los movimientos que exhiben los fosfolpidos en la
bicapa.

Fluidez de las membranas.

La fluidez es un reflejo de la viscosidad dentro de la membrana. La

viscosidad est determinada por la movilidad de los componentes qumicos
individuales de la membrana.

A baja temperatura, los fosfolpidos estn en un estado gel en que las

colas hidrofbicas de los cidos grasos estn totalmente extendidas, y las
interacciones de van der Waals entre colas adyacentes estn maximizadas
conduciendo a una estructura rgida, cristalina. A medida que la temperatura
aumenta, se produce una transicin de fase a un estado cristal-lquido, con un
incremento de la fluidez como se muestra en la figura siguiente.

19
Figura 8. Estructuras gel (rgida) y cristal-liquido (fluida) de la bicapa fosfolipdica.

Los doble enlaces cis de los cidos grasos, interfieren la transicin al

estado gel porque impiden que las cadenas alifticas de las colas de los
fosfolpidos se compacten y formen una estructura ms rgida, y disminuyen la
temperatura de transicin de fase (Tm).

El anterior fenmeno, ha sido estudiado en liposomas unilamelares

(vesculas esfricas constituidas por una bicapa lipdica que separa el medio
externo de un compartimiento acuoso interno) preparados a partir de un fosfolpido
puro o de una mezcla de ellos. Tambin los liposomas, se han empleado en
estudios de transporte biolgico aunque limitados por el pequeo tamao de estas
vesculas. Para tal efecto, se incorporan protenas en los liposomas
(proteoliposomas) al momento de prepararlos. As, los liposomas han sido
utilizados como modelos de membrana siendo menos complejo su estudio que el
de las propias membranas biolgicas.

Otro tipo de preparacin de membranas sintticas o artificiales empleadas

han sido las membranas planas (black lipid membranes) las que se forman al
pincelar con una solucin de lpido un orificio de 1-2 mm de dimetro existente en
un tabique de material hidrofbico (tefln) que separa dos compartimientos
acuosos. Esta tcnica se ha empleado en estudios de permeabilidad de dichas
membranas, o de la funcin de canales o protenas transportadoras incorporadas
a estas membranas artificiales.

El interior de una bicapa lipdica de una membrana, es normalmente

altamente fluido, ya que los cidos grasos estn a una temperatura sobre sus Tm.
En el estado fluido, las colas hidrofbicas de los fosfolpidos estn desordenadas y
en constante movimiento.

20
 Los organismos poiquilotermos o hibernadores y los procariontes pueden
regular la composicin lipdica, y as la fluidez de la membrana, a fin de responder
a cambios de temperatura en el medio externo. El grado de fluidez puede ser
controlado en dichos organismos por modificacin de: a) la longitud de las
cadenas alifticas de los cidos grasos; mientras ms corta es la cadena menor la
Tm y viceversa, y b) la cantidad de doble enlaces presentes en dichas cadenas; la
introduccin de doble enlace baja la Tm.

Importancia de la fluidez.

Muchos procesos celulares bsicos dependen del movimiento de

componentes de la membrana, lo que es posible gracias a la fluidez de la
membrana. La fluidez permite que ocurran entre otros procesos celulares: el
ensamblaje de membranas, la asociacin de protenas de membrana, la unin de
ligandos a sus receptores y que se genere la transduccin de seales, el
funcionamiento correcto de los sistemas de transporte y las enzimas (transduccin
de energa), la distribucin de los lpidos y protenas de membrana desde sus
sitios de sntesis, y la distribucin de molculas de membrana entre clulas hijas
cuando una clula se divide.

Rafts o microdominios lipdicos.

Por muchos aos, se asumi que la distribucin de los lpidos en las

membranas, si bien asimtrica era al azar. Recientes evidencias indican que islas
de esfingolpidos y colesterol pueden segregarse de los otros lpidos para formar
los rafts (balsas) o microdominios lipdicos.

La cara externa del raft consiste principalmente de: esfingolpidos,

glicoesfingolpidos y colesterol e influye en la organizacin de la cara interna que
presenta principalmente colesterol y fosfolpidos con cidos grasos saturados.
Debido a que las cadenas alifticas de sus lpidos son ms largas y rectas que la
mayora de los lpidos de membrana, los rafts poseen un mayor grosor y son ms
ordenados, menos fluidos que los microdominios vecinos ricos en fosfolpidos. Los
rafts tienen un tamao aproximado 50 a 70 nm. Se cree que protenas ancladas

21
por GPI y protenas miristoiladas estn asociadas a rafts. Los rafts participaran
en: polarizacin y trfico de membranas, transduccin de seales e infeccin viral.

A partir de rafts lipdicos por polimerizacin de caveolina, protena integral

con dos dominios globulares con un dominio hidrofbico con forma de horquilla
que une la protena a la cara citoslica de la membrana plasmtica, se forman las
caveolas, pequeas invaginaciones locales de las membranas plasmticas de
clulas endoteliales y epiteliales. Tienen un dimetro de 50 a 100 nm. Se
relacionan con funciones tales como: endocitosis, transcitosis de albmina y otras
protenas en endotelios, homeostasis del colesterol y transduccin de seales.

Alteraciones patolgicas de la composicin lipdica y de la fluidez de la

membrana.

Hay dos tipos de anormalidades reconocidas en los lpidos de membrana

y ambos pueden ser atribuidos a causas hereditarias. El primer grupo incluye a la
fibrosis qustica o cstica del pncreas, glicosuria renal, cistinuria y acidosis tubular
renal, y el sndrome de Fanconi (disfuncin del tbulo proximal renal) entre otras
patologas.

El segundo grupo involucra defectos en las enzimas encargadas del

metabolismo de esfingolpidos, de las cuales algunas estn confinadas
principalmente en el sistema nervioso causando neurodegeneracin y
acortamiento de la expectativa de vida, mientras otras tienen implicancia en una
serie de otros tejidos. Las dolencias se caracterizan por una acumulacin de
esfingolpidos especficos de membrana en el interior de las clulas; el defecto
generalmente radica en la falla del catabolismo (hidrlisis) de los lpidos que tiene
lugar en los lisosomas. Se conocen varias enfermedades de este tipo que se
manifiestan a menudo en la infancia; Niemann-Pick (esfingomielinosis), Tay-Sachs
(gangliosidosis GM2) y Gaucher (cerebrosidosis). Alteraciones del metabolismo de
cerebrsido sulfato (Leucodistrofia metacromtica) y trihexsido ceramida
(enfermedad de Fabri) han sido a su vez documentadas.

Existen anormalidades de la fluidez de la membrana en ciertas

enfermedades. En la cirrosis heptica provocada por la ingesta de alcohol, los
eritrocitos se destruyen prematuramente en el bazo. El contenido de colesterol en

22
las membranas de los glbulos rojos est aumentado en 25-65%. Tambin se ha
informado que la razn de cidos grasos insaturados/saturados est disminuida
significativamente. Estos cambios pueden afectar la fluidez de la membrana del
eritrocito y eventualmente las funciones de la clula. As, el efecto intoxicante del
alcohol en el sistema nervioso puede deberse a la modificacin de la fluidez y a la
alteracin funcional concomitante de receptores y canales ubicados en las
membranas.

Individuos con abetalipoproteinemia que presentan falla en el transporte y

absorcin de lpidos, tienen aumentado el contenido de esfingomielina y
disminuido el de fosfatidilcolina en las membranas celulares, lo que produce una
modificacin de la fluidez de la membrana de los glbulos rojos (acantocitosis,
forma espinada).

Protenas de membrana.

Todas las membranas celulares poseen la estructura de un bicapa

lipdica, sin embargo, mucha de las funciones claves de una membrana son
debidas a las protenas que la atraviesan o que se asocian con ella.

Todas las membranas biolgicas contienen protenas cuyas propiedades

dependen del tipo de clula y de la localizacin subcelular.

El tipo y cantidad de protenas que componen las membranas es muy

variable. Por ejemplo, la membrana mitocondrial interna contiene poco ms de
70% de protenas y la mielina slo 18%. El alto contenido de lpido de la mielina
posibilita que asle elctricamente a una neurona de su medio ambiente.

En una membrana que contiene un 50% de protenas y ya que las

protenas son mucho ms grandes que los lpidos, hay 50 a 100 molculas de
fosfolpidos por molcula de protena. Las protenas de membrana son
principalmente glicoprotenas.

23
Asociacin de las protenas a las membranas biolgicas.

Las protenas de membrana pueden clasificarse de acuerdo a sus

interacciones con las membranas en: integrales o intrnsecas, perifricas o
extrnsecas y unidas o ancladas por lpidos (Figura 9).

Figura 9. Tipos de protenas de membrana.

Protenas integrales.

Las protenas integrales, requieren detergente a fin de ser extradas desde

las membranas. Lo anterior pone de manifiesto que la interaccin de las protenas
integrales con la bicapa lipdica es de tipo hidrofbico (Figura 9a).

La insercin de protenas integrales en el interior apolar de la bicapa, se

pudo visualizar mediante microscopa electrnica de transmisin (TEM) de
superficies de fractura por congelamiento o criofractura (freeze-fracture). En esta
tcnica la membrana en estudio es congelada rpidamente a 196C y luego es
fracturada con una cuchilla de ultramicrotomo. La fractura ocurre por la parte
central de la bicapa, separndose en las dos monocapas constituyentes con sus
superficies hidrofbicas expuestas. Al observar al TEM, rplicas metlicas de las
superficies, se aprecian en ellas partculas de 5-10 nm de dimetro, que
corresponden a protenas integrales que penetran la bicapa. En general, las
superficies expuestas de una misma membrana difieren en el nmero y tamao de

24
las partculas, lo que significa que las protenas integrales no tienen una
distribucin simtrica en las membranas. Al observar preparaciones de bicapas
lipdicas, stas muestran slo superficies de criofractura lisas.

Una protena integral unipaso, atraviesa la bicapa con un dominio

hidrofbico interior, formado por alrededor de 20 residuos de aminocidos
generalmente apolares, y con dominios extracelular y citoplasmtico hidroflicos,
de tamao variable dependiendo de la funcin de la protena, hacia las fases
acuosas.

La glicoforina A, glicoprotena de la membrana del eritrocito, fue la primera

protena de esta clase en la que se demostr por mtodos qumicos que atraviesa
una vez la bicapa. Esta protena integral presenta: a) un dominio N-terminal
hidroflico en el lado externo de la membrana, que consta de 72 residuos de
aminocidos y de 16 cadenas de oligosacridos (~60% de la masa molecular), b)
un dominio hidroflico de 40 residuos de aminocidos en el lado citoslico, con
numerosos residuos de aminocidos con carga elctrica y el extremo C-terminal, y
c) un segmento hidrofbico de 19 residuos de aminocidos que atraviesa la
bicapa. Un aspecto destacable en esta glicoprotena es la presencia de cido
silico y por tanto de carga negativa en el extremo de cada cadena de
oligosacrido las que pueden permitir a los eritrocitos repelerse unos a otros y
prevenir el agrupamiento de los mismos cuando circulan por vasos finos.

Otras protenas transmembrnicas (canales y transportadores) atraviesan

varias veces la bicapa. Por ejemplo, los transportadores de glucosa atraviesan 12
veces la membrana. Un tipo importante de receptores hormonales (receptor
acoplado a protena G) atraviesan la membrana 7 veces.

Algunas protenas integrales estn inmersas (alfa hlices hidrofbicas)

slo parcialmente en la bicapa (Figura 9b), por aos se crey que este tipo de
protena no exista, pero la melitina (veneno de abeja) y la prostanglandina H2
sintasa comprueban lo contrario.

Muchas protenas transmembrnicas, se asocian a otras protenas

transmembrnicas para formar dmeros, trmeros, tetrmeros, etc. Por ejemplo,
receptores para protenas de la matriz extracelular (colgeno, fibronectina y
lamininas) son conocidas como integrinas, protenas heterodimricas con una

25
subunidad alfa y una beta, cada una de las cuales atraviesa la membrana slo una
vez. Las subunidades se mantienen unidas por interacciones no covalentes.

Adems de unirse entre s y con otros componentes de la membrana, las

protenas pueden unirse a protenas del citoplasma que las anclan a los
microfilamentos, microtbulos, filamentos intermedios o forman parte de alguna
cadena de transduccin de seales. Anlogamente, hay protenas que reconocen
y se unen a componentes de la matriz extracelular, o forman estructuras que les
permiten asociarse a clulas vecinas, como es el caso de los desmosomas,
uniones oclusivas y uniones comunicantes.

La regin de la protena que atraviesa la membrana es en la mayora de

los casos una a-hlice, pero en otros como el de las porinas de la membrana
externa de bacterias Gram negativa (E. Coli) y las porinas de la membrana
mitocondrial externa es un barril b, en el cual 8-22 hojas beta antiparalelas
conforman una estructura cilndrica en forma de barril. Estas estructuras,
presentan poros centrales que permiten el transporte de pequeas molculas
hidroflicas que incluyen nutrientes y productos de deshecho. No todos los barriles
beta son protenas de transporte. Algunas de estas ltimas protenas de bacterias
funcionan como receptores o enzimas.

Las mismas fuerzas termodinmicas que favorecen la formacin de una a-

hlice en el interior apolar de una bicapa lipdica estabilizan tambin los barriles
beta. En estos barriles b de membrana, cada hoja beta est unida rgidamente a
sus vecinas por uniones hidrgeno, de manera que es improbable que ocurran
cambios conformacionales como sucede en las a-hlices de protenas de
membrana.

Protenas perifricas.

Las protenas perifricas (Figura 9d), pueden ser extradas desde las
membranas por tratamientos suaves como soluciones de alta fuerza inica o con
tampones de alto o bajo pH. Al removerlas o solubilizarlas, no se altera la
estructura de las bicapas lipdicas.

26
 Este tipo de protenas de membrana, estn asociadas con la membrana a
travs de interacciones dbiles no covalentes: puentes salinos e interacciones
electrostticas. Aunque los puntos de interaccin podran ser las cabezas polares
de los fosfolpidos, las protenas perifricas suelen estar unidas especficamente a
determinadas protenas integrales por interacciones no covalentes. Es el caso de
la ankirina unida al canal aninico presente en eritrocitos.

Fosfolpidos de membranas cargados negativamente (PS) pueden

interactuar con regiones positivas de protenas, permitiendo una interaccin
electrosttica entre ellas que mantiene unida dichas protenas a la bicapa lipdica.

Numerosas protenas perifricas, se unen a los dominios citoplasmticos

de protenas integrales de membrana, tales como las cateninas unidas a protenas
transmembrnicas de adhesin llamadas cadherinas. Estas interacciones
protena-protena anclan el citoesqueleto a protenas transmembrnicas de
adhesin.

Las interacciones protena-protena, tambin proporcionan un modo de

transmitir informacin a travs de una membrana. La unin de un ligando al
dominio extracelular de un receptor transmembrnico puede cambiar la
conformacin de su dominio citoplasmtico, propiciando interacciones con
protenas citoplasmticas las que transmiten a su vez seales intracelulares.

Protenas ancladas por lpidos.

En las clulas eucariontes, existen protenas que tienen uno o ms lpidos

de diferentes tipos unidos a ellas covalentemente. Estos lpidos proporcionan una
ancla hidrofbica que se inserta en la bicapa lipdica y mantiene a estas protenas
unidas a una u otra superficie de la membrana plasmtica y a ciertas otras
membranas celulares (Figura 9c).

Las protenas de membrana, pueden estar asociadas a la cara citoslica

de una membrana a travs de simple cadena aliftica de cido mirstico (14:0) que
es unido postraduccionalmente al grupo amino de un residuo de glicina del
extremo N-terminal del polipptido como ocurre en la protena tirosina quinasa Src
(sarcoma de Rous) y otras protenas que participan en sealizacin celular o a

27
travs de cido palmtico (16:0) unido va enlace tioster a un residuo interno de
cisterna de la protena (Figura 10b).

Figura 10. Protenas de membrana ancladas a la bicapa.

Un segundo grupo de protenas citoslicas est asociada a membranas

por un grupo prenilo (farnesil de 15 tomos de carbono o geranilgeranil de 20
tomos de carbono) que es aadido postraduccionalmente a travs de un enlace
tioter al grupo SH de un residuo de cistena del extremo C-terminal (Figura 10a).
En algunos casos, un segundo grupo geranilgeranil o un grupo palmitato est
unido a un residuo cistena vecino reforzando la unin a la membrana (protena
Ras). Las protenas ancladas por estas cadenas alifticas estn localizadas en la
superficie interna de la membrana plasmtica.

Algunas protenas de la superficie celular y proteoglicanos altamente

glicosilados de la matriz extracelular estn unidas a la superficie externa de la
membrana plasmtica por un tercer tipo de grupo de anclaje, un linker
oligosacrido, GPI (glicosilfosfatidilinositol).

Las anclas de GPI son derivados del fosfatidilinositol, el cual est inmerso
en la bicapa mediante sus dos cadenas alifticas, y lleva una corta cadena
oligosacrida unida covalentemente al residuo carboxi terminal de una protena a
travs de fosfoetanolamina (Figura 10c).

Las protenas ancladas por GPI estn siempre en la cara extracelular de la

membrana plasmtica. El antgeno de superficie Thy-1 (linfocitos T), protenas de

28
adhesin (T-cadherina) y varias enzimas (fosfatasa alcalina, acetilcolinoesterasa,
5-nucleotidasa) son algunos ejemplos de este tipo de protena de membrana.

La fosfatasa alcalina placental est concentrada en rafts lipdicos. Aunque

como ya se indic, esta ltima protena y otras ancladas por GPI se ubican en la
cara opuesta de la membrana a la que se asocian las protenas ancladas por
grupos acilos, ambos tipos de protenas se encuentran en los microdominios
lipdicos. Por contraste, las protenas ancladas por grupos prenilados no se hallan
concentradas en rafts (Figura 10a).

Investigaciones recientes, han indicado que la asociacin de las protenas

con membranas puede ser compleja y la definicin entre protenas integrales y
perifricas de membrana ha llegado a ser confuso en ciertos casos, tales como
aquellas que estn unidas a las membranas por tallos o anclas lipdicas. Aqu,
este ltimo tipo de protenas sern consideradas como protenas integrales de
membrana, aunque hay que sealar de igual forma que en algunos textos son
consideradas como protenas perifricas de membrana.

Funciones de las Protenas de Membrana.

La fisiologa celular, se sustenta fundamentalmente en las protenas de

membrana. Las protenas de membrana son diferentes y caractersticas de cada
tipo celular y tipo de membrana. Realizan numerosas funciones en las
membranas, entre ellas se pueden citar:

Estructural. Las clulas poseen un citoesqueleto de naturaleza proteica

que constituye un armazn alrededor del cual se organizan todos sus
componentes, y que dirige fenmenos tan importantes como el transporte
intracelular o la divisin celular. En los tejidos de sostn (conjuntivo, seo,
cartilaginoso) de los vertebrados, las fibras de colgeno forman parte importante
de la matriz extracelular y son las encargadas de conferir resistencia mecnica
tanto a la traccin como a la compresin.

Transporte. Lo realizan protenas, generalmente integrales, cuya funcin

es la translocacin (cambio de lugar) de molculas a travs de la membrana
desde un compartimiento a otro. El transporte de solutos, es realizado por

29
transportadores, bombas y canales. Por ejemplo, aminocidos necesarios para la
sntesis de nuevas protenas ingresan a las clulas mediante transportadores. A
menudo el transporte ocurre desde una regin donde el soluto est presente a
ms baja concentracin a una regin donde est a mayor concentracin. Este tipo
de transporte necesita de energa metablica.

Recepcin de seales externas (transduccin de seales). Efectuada

por protenas, generalmente integrales, llamadas receptores que reconocen
molculas (ligandos) especficas (factores de crecimiento, neurotransmisores) y
hormonas que no pueden penetrar la bicapa lipdica y transmiten dichas seales a
travs de las membranas provocando estimulacin o inhibicin de actividades
celulares internas.

Por ejemplo, la hormona antidiurtica o vasopresina, se une a receptores

ubicados en los riones y modifica la permeabilidad de las membranas
plasmticas al agua aumentando su reabsorcin.

Catlisis. Protenas, tanto integrales como perifricas, que catalizan

reacciones en el interior o exterior celular. Por ejemplo, lactasa presente en la
membrana plasmtica de las clulas epiteliales intestinales hidroliza lactosa.

Unin clula-clula. La adhesin clula-clula en uniones adherentes y

desmosomas, est mediada por protenas de adhesin transmembrnicas
especficas pertenecientes a la familia de cadherinas.

Unin clula-matriz. Interacciones clula-matriz (adhesiones focales y

hemidesmosomas) son mediadas por protenas integrales de membrana
heterodimricas (familia de integrinas).

Reconocimiento y adhesin celular. Glicoprotenas transmembrnicas

llamadas CAM (molculas de adhesin celular), participan en el reconocimiento y
adhesin celular que ocurre en la formacin de algunos tejidos epiteliales durante
el desarrollo embrionario antes de formar uniones estables (oclusivas, anclantes y
comunicantes).

30
 Anclajes del citoesqueleto. Protenas perifricas situadas en la regin
citoplasmtica de la membrana y que sirven de punto de unin o anclaje para los
filamentos del citoesqueleto.

Marcadores de identidad de la clula. Glicolpidos y glicoprotenas

caractersticos de cada individuo y que sirven de reconocimiento para clulas
procedentes de otro individuo. Las cadenas de carbohidratos procedentes, tanto
de los glicolpidos, como de las glicoprotenas dan lugar a una especie de cubierta
denominada glicocliz. Una clase importante de tales marcadores de identidad son
los antgenos mayores de histocompatibilidad.

Funciones reguladoras. Muchas protenas se unen al ADN y de esta

forma controlan la transcripcin gnica. De esta forma el organismo se asegura
que la clula, en todo momento, tenga todas las protenas necesarias para
desempear normalmente sus funciones. Las distintas fases del ciclo celular son
el resultado de un complejo mecanismo de regulacin desempeado por protenas
como son las ciclinas.

Movimiento. Todas las funciones de motilidad de los seres vivos estn

relacionadas con las protenas. As, la contraccin del msculo resulta de la
interaccin entre dos protenas, la actina y la miosina. El movimiento de la clula
mediante cilios y flagelos est relacionado con las protenas que forman los
microtbulos.

Defensa. La propiedad fundamental de los mecanismos de defensa es la

de discriminar lo propio de lo extrao. En los vertebrados superiores, las
inmunoglobulinas se encargan de reconocer molculas u organismos extraos y
se unen a ellos para facilitar su destruccin por las clulas del sistema inmunitario.

Otras funciones. Los fenmenos de transduccin (cambio en la

naturaleza fsico-qumica de seales) estn mediados por protenas. As, durante
el proceso de la visin, la rodopsina de la retina convierte (o mejor dicho,
transduce) un fotn luminoso (una seal fsica) en un impulso nervioso (una seal
elctrica).

31
Las protenas de membrana difunden lateralmente en la bicapa.

El experimento de L. D. Frye y M. Edidin (1970), demostr que las

protenas difundan lateralmente en las membranas (Figura 11). En este
experimento realizado a 37C, se indujo la fusin de clulas humanas y de ratn
con ayuda del virus Sendai inactivado, obtenindose una clula hbrida,
heterocarin (clula con dos ncleos). Se prepar anticuerpos contra las protenas
de membrana de ambos tipos celulares y se le unieron covalentemente sustancias
fluorescentes. Los anticuerpos contra protenas humanas fueron marcados con
rodamina (de color rojo) y los anticuerpos contra protenas de ratn marcados con
fluorescena (de color verde). Los anticuerpos, se agregaron a las clulas
fusionadas.

Figura 11. Movilidad lateral de protenas de membrana evidenciada por experimento de

fusin celular.

Mediante microscopa de fluorescencia, se observ a tiempo cero que la

membrana plasmtica del heterocarin apareca mitad roja y mitad verde, esto es,
los dos tipos de protenas estaban segregados en las dos mitades del
heterocarin. Al cabo de 40 minutos las protenas de membrana del heterocarin,
se haban entremezclado completamente.

El agregado de inhibidores del metabolismo o de sntesis de protenas no

afect este proceso, pero si lo hizo la disminucin de la temperatura por debajo de

32
15 C. Lo anterior, seala que las protenas de membrana haban difundido en el
plano de la membrana, en un evento independiente de energa metablica y de la
insercin en la membrana de protenas recin sintetizadas.

El anterior experimento, mostr que aparentemente las protenas pueden

difundir en el plano de la membrana sin restriccin, pero, actualmente se sabe que
su movimiento puede estar restringido por razones funcionales.

Entre el 30 y 90% de todas las protenas integrales de membrana son

libremente mviles, dependiendo del tipo celular. Algunas protenas integrales
estn unidas permanentemente al citoesqueleto subyacente; estas protenas son
totalmente inmviles en la membrana.

Las clulas presentan dominios especficos en las membranas.

La restriccin de protenas a una parte de la membrana constituye un

dominio (en clulas funcionalmente especializadas). Los dominios de membrana
son cruciales para las funciones de clulas polarizadas como las clulas
epiteliales.

Las clulas epiteliales alineadas en la pared intestinal o que constituyen

los tbulos microscpicos del rin son clulas altamente polarizadas cuyas
diferentes superficies (apical y basal) llevan a cabo funciones distintas (Figura 12).

Figura 12. Dominios en membranas de clulas epiteliales.

33
 As, existe evidencia que la membrana plasmtica apical de clulas
epiteliales intestinales posee protenas integrales que funcionan como
transportadores de solutos orgnicos (azcares y aminocidos) y otras como
enzimas (por ejemplo, disacaridasas); la membrana lateral y la membrana basal
de clulas epiteliales del intestino tienen bombas que mueven iones a travs de
ellas. Tambin dicha membrana basal, posee protenas transportadoras que
translocan azcares hacia el torrente sanguneo diferentes a las presentes en la
membrana apical.

La organizacin polarizada, depende de las uniones que las clulas

epiteliales establecen unas con otras. Los dominios son creados por las uniones
ocluyentes que las clulas epiteliales establecen con las vecinas.

Las membranas son estructuras asimtricas.

Las membranas biolgicas son estructuralmente y funcionalmente

asimtricas. Dependiendo del tipo celular y del organelo particular en la clula,
una membrana contiene cientos de diferentes protenas.

Los nexos, uniones oclusivas y sinapsis, ocupan regiones ms reducidas

de la membrana y generan asimetras locales ms pequeas.

Asimetra de las protenas.

Cada protena de membrana presenta una topologa definida relativa al

citosol, de modo que las propiedades de una superficie de la membrana son muy
diferentes a las de la otra superficie. Esta asimetra ha sido llamada lateralidad
de la membrana.

Las superficies interna y externa de todas las membranas biolgicas

conocidas tienen diferentes componentes y diferentes actividades enzimticas. Un
+ +
claro ejemplo de lo anterior es la bomba Na -K que regula la concentracin de
+ +
Na y K en las clulas. Esta protena de transporte est localizada en la
membrana plasmtica de casi todas las clulas en organismos superiores. La
+ + +
bomba Na -K est orientada de modo tal que bombea activamente Na hacia

34
 +
fuera de la clula y K hacia el interior. Adems, el ATP debe estar en el interior
celular para impulsar la bomba.

La ouabana, un inhibidor potente y especfico de esta bomba es efectivo

slo si acta externamente.

En general, los dominios de las protenas expuestos en una cara de la

bicapa son diferentes de aquellos expuestos en la otra cara, reflejando una
asimetra funcional como sucede con las protenas transmembrnicas que
atraviesan la bicapa con orientaciones especficas: receptores, transportadores,
canales.

Las protenas de membrana tienen una orientacin nica porque ellas son
sintetizadas e insertadas en la membrana de una forma asimtrica. Esta asimetra
absoluta es preservada porque las protenas de membrana no rotan desde un lado
de la membrana al otro y porque las membranas son siempre sintetizadas por el
crecimiento de membranas preexistentes.

Adems, enzimas especficas estn exclusivamente en el exterior o

interior de las membranas, como en las membranas mitocondriales y las
plasmticas.

Asimetra lipdica.

Una caracterstica de las membranas es la asimetra en la composicin de

lpidos de la bicapa. Aunque la mayora de los fosfolpidos estn presentes en
ambas monocapas, ellos son normalmente ms abundantes en una u otra
superficie de las membranas. La asimetra de las bicapas lipdicas es
consecuencia de su modo de biosntesis, pero esta asimetra no es absoluta,
excepto para los glicolpidos.

En la membrana plasmtica de los eritrocitos, los fosfolpidos que poseen

un grupo colina (SM y PC), se encuentran predominantemente en la monocapa
externa y los lpidos con grupos amino (PS y PE), se encuentran en la cara
citoslica. Tambin el fosfatidilinositol, se halla en la cara citoslica de la

35
membrana plasmtica. Grandes cantidades de colesterol, se hallan presentes en
ambas monocapas de membranas plasmticas.

Ya se seal que formas fosforiladas del fosfatidilinositol unidas a la cara

citoslica de la membrana plasmtica, por ejemplo, PI(4)P y PI(4,5)P2, participan
en vas de sealizacin intracelular.

Fosfatidilserina, ms abundante en la cara citoslica, es translocada a la

cara extracelular por accin probablemente de una flipasa, en aquellas clulas que
van a experimentar muerte celular programada o apoptosis. La fosfatilserina
expuesta en la superficie celular sirve como seal para que macrfagos fagociten
linfocitos viejos, mientras su aparicin en la superficie externa de plaquetas lleva a
la coagulacin sangunea.

En las bicapas constituidas de fosfolpidos puros, stos no difunden de

una monocapa a otra (flip-flop). En las membranas naturales, la difusin
transversal o flip-flop es catalizada por flipasas, como ya se mencion
anteriormente.

Asimetra de carbohidratos.

Una asimetra interior-exterior es proporcionada por la ubicacin de

carbohidratos unidos a protenas y lpidos de membrana. Las cadenas de
carbohidratos de los glicolpidos y glicoprotenas, se ubican en la superficie
externa de la membrana plasmtica.

Hay tambin asimetras regionales en las membranas como las de las

clulas mucosales intestinales. En las membranas plasmticas de las clulas
epiteliales, los glicolpidos estn confinados a la superficie apical expuesta, donde
estas molculas pueden ayudar en la proteccin de la membrana contra las
difciles condiciones que presenta esta zona (bajo pH y enzimas degradativas).

36
Los carbohidratos de membranas estn presentes en glicolpidos y
glicoprotenas.

Los hidratos de carbono presentes en las membranas varan de especie a

especie, entre individuos de la misma especie y entre clulas del mismo individuo.

Dependiendo del tipo celular, el contenido de carbohidrato de las

membranas va de 2 a 10%. Ms del 90% de los hidratos de carbono de membrana
estn unidos covalentemente a protenas formando glicoprotenas
(mucoprotenas); el resto de los azcares estn covalentemente unidos a lpidos
constituyendo los glicolpidos.

Las glicoprotenas de membrana pueden contener oligosacridos o bien

polisacridos. Los oligosacridos estn unidos a las protenas como ya se ha
indicado antes por medio de enlaces covalentes N-glicosdicos o bien O-
glicosdicos.

Los polisacridos unidos covalentemente a protenas son

glicosaminoglicanos (mucopolisacridos, polisacridos largos, lineales y altamente
cargados compuestos por una sucesin de una misma unidad disacrido en la que
uno de los monmeros es siempre es un aminoazcar y el otro un cido
glucornico, un cido idurnico o una galactosa) y constituyen las gliprotenas
complejas denominadas proteoglicanos. Estas molculas prevalecen en el medio
extracelular.

Los proteoglicanos son los principales componentes del tejido conectivo y

participan con otras protenas estructurales, colgeno y elastina, en la
organizacin de la matriz extracelular.

Las glicoprotenas tienen dominios de secuencias hidroflicas e

hidrofbicas. Son molculas anfipticas.

Las glicoprotenas y glicolpidos son especialmente abundantes en la

membrana plasmtica de clulas eucariticas y se ubican en la cara no citoslica
de la membrana celular.

37
 La membrana que cubre las microvellosidades, es altamente
especializada, y presenta una gruesa cubierta extracelular, rica en polisacridos,
denominada cubierta celular o glicocliz (Figura 13).

En el caso del epitelio intestinal, algunas glicoprotenas, que forman parte

del glicocliz, corresponden a disacaridasas y a g-glutamiltranspeptidasas,
enzimas que participan en el proceso digestivo. Adems, en muchas clulas
contribuyen a esta estructura glicoprotenas y proteoglicanos adsorbidos a la
superficie celular y que se han secretado al espacio extracelular.

Figura 13. Glicocliz de microvellosidades de clulas epiteliales intestinales visualizada por

microscopa electrnica de transmisin.

Una de las funciones relevantes del glicocliz es proteger a la superficie

de las clulas de agresiones qumicas y mecnicas. As, en el caso de las clulas
ubicadas en la superficie de la mucosa intestinal, su cubierta celular las protege
del contacto con los alimentos y de la accin de las enzimas digestivas.

La presencia de cido silico en las cadenas de oligosacridos de los

glicolpidos, proporciona a pH fisiolgico una carga negativa neta a la superficie de
la clula. Esta carga elctrica atrae a los cationes del lquido extracelular los que
quedan retenidos en la cara no citoslica de la membrana celular.

Las cadenas de carbohidratos de glicolpidos y glicoprotenas, permiten el

reconocimiento celular. Lo anterior es posible debido a la diversidad que tienen
estas cadenas, las que pueden variar en el nmero de azcares (de 15 a varios

38
cientos), en su ramificacin y en sus secuencias de azcares. Adems, los
glicolpidos y las glicoprotenas varan de especie a especie, de individuo a
individuo de la misma especie, y an de clula a clula del mismo individuo.

El rechazo de tejidos transplantados por nuestro sistema inmune es

debido al reconocimiento de glicolpidos y glicoprotenas nicos.

Funciones de los hidratos de carbono de membranas.

Las glicoprotenas tienen una importante participacin en: reacciones

antgeno-anticuerpo, funcin hormonal, catlisis enzimtica, fertilizacin. Tambin
los oligosacridos del glicocliz sirven como marcadores para una variedad de
interacciones clula-clula.

Un ejemplo de interacciones clula-clula es la adhesin de leucocitos

(neutrofilos) circulantes a las clulas endoteliales de vasos sanguneos en la
respuesta inflamatoria de tejidos injuriados. El paso inicial es una dbil y reversible
adhesin entre ligandos glicoproteicos (receptores) para selectinas que se hallan
en la superficie del leucocito y selectinas (glicoprotenas que contienen un dominio
lectina que se une especficamente a un ordenamiento particular de azcares en
un oligosacrido) ubicadas en la membrana plasmtica de clulas endoteliales del
rea daada. Cuando los neutrofilos encuentran las selectinas de las clulas
endoteliales, ellos forman adhesiones transitorias que enlentecen dramticamente
su movimiento a travs del vaso sanguneo. Mientras estas interacciones tienen
lugar, se produce un proceso de activacin de integrinas de la superficie del
neutrofilo, gatillado por varios agentes (incluyendo el factor de activacin de
plaquetas liberado por el endotelio), las cuales se unen con alta afinidad a ICAMs
(molculas de adhesin intercelular) de la superficie de la clula endotelial
provocando la detencin del movimiento de los neutrofilos y la fuerte adhesin de
ellos al vaso sanguneo, iniciando el proceso de extravasacin en el tejido daado.

Debido a que las cadenas de carbohidratos de las glicoprotenas y

glicolpidos en la membrana celular se proyectan hacia el espacio extracelular,
ellas pueden interaccionar con componentes de la matriz extracelular, factores de
crecimiento y anticuerpos.

39
 La especificidad de los grupos sanguneos ABO humanos es establecida
por componentes oligosacridos de ciertas glicoprotenas y glicolpidos de la
superficie de los eritrocitos. La porcin carbohidrato de estas molculas, la cual
constituye el determinante antignico, est genticamente determinado en los
humanos y otros animales.

En la interaccin clula-clula, el rol de las glicoprotenas es la

coordinacin y la regulacin de adhesin, crecimiento, diferenciacin celular, y
tamao de las clulas. La alteracin de estos procesos puede conducir a la
prdida del control de la divisin celular y del crecimiento, propiedad caracterstica
de clulas cancerosas.

Se cree que alteraciones en la estructura de glicoprotenas y otros

glicoconjugados en la superficie de clulas cancerosas son importantes en el
fenmeno de metstasis en que clulas cancerosas dejan su tejido de origen (por
ejemplo, mama), y migran por el torrente sanguneo aun sitio distante en el cuerpo
(por ejemplo, cerebro), y crecen de una manera no regulada, con resultados
catastrficos para el individuo afectado.

Modelos de la Membrana Plasmtica.

Los primeros indicios acerca de la naturaleza qumica de la membrana

celular los obtuvo Overton en 1985. Este investigador, observ que aquellos
solutos solubles en lpidos atravesaban ms rpidamente las membranas
plasmticas que los no solubles.

Los primeros modelos de estructura de membrana incorporaron una

bicapa lipdica como el rasgo estructural sobresaliente. La evidencia para estos
modelos, provino de experimentos realizados en fantasmas de eritrocitos por
Gorter y Grendel en 1925. En esa misma poca, se realizaron estudios que
mostraban que la solubilidad en lpidos no era el nico factor determinante en el
paso de solutos a travs de las membranas, as mismo mediciones de las
tensiones superficiales en estructuras lipdicas indicaban la probable presencia de
protenas en las membranas.

40
 En 1935, Danielli y Dawson propusieron un modelo en el cual se
incorporaban protenas. La membrana celular estaba constituida por una bicapa
lipdica emparedada entre dos capas de protenas globulares. Posteriormente en
1954, estos investigadores modificaron el anterior modelo incorporando poros
constituidos por protenas que se extendan a travs de la membrana para dar
cuenta de la permeabilidad selectiva de las membranas que ellos haban
estudiado. Estos modelos proponan membranas simtricas.

Este modelo fue despus modificado por Robertson en 1959 a la luz de

nueva informacin, especialmente relacionadas con aspectos ultraestructurales de
membranas que l estudi al microscopio electrnico de transmisin. La mayora
de esos estudios fueron en membranas plasmticas de mielina pero el modelo
propuesto, habitualmente denominado como hiptesis de la membrana unitaria,
fue sugerido como la estructura bsica de todas las membranas celulares. En este
modelo, las protenas que cubren las superficies de la bicapa lipdica tienen una
estructura extendida ms que una configuracin globular, y estn
asimtricamente distribuidas en la membrana.

A pesar del efecto unificador de la hiptesis de Robertson, surgieron

ciertas inconsistencias como que cada membrana de los organelos tena su
propia funcin particular. La pregunta que surgi en ese momento fue: cmo las
membranas pueden variar en funcin si todas ellas tienen la misma estructura?
Tambin se realizaron observaciones que mostraban variaciones en el espesor de
las membranas y que ponan en duda la generalizacin hecha por Robertson.

Al inicio de la dcada del 70, dos enfoques experimentales

complementarios demostraron que las protenas atraviesan la bicapa lipdica.
Primero, como ya se mencion, micrografas electrnicas de membranas
congeladas y fracturadas en dos mediante un cuchillo (tcnica denominada
criofractura), mostraron protenas embebidas en la bicapa lipdica. Segundo, el
marcaje qumico de las protenas de membrana mostr que muchas atraviesan la
bicapa, exponiendo diferentes partes del polipptido a la fase acuosa en ambos
lados. La microscopa fluorescente usando etiquetas (tags) fluorescentes
demostr que los lpidos de membrana y algunas protenas de membrana
difunden en el plano de la membrana. Estudios espectroscpicos cuantitativos
mostraron que la difusin lateral de lpidos es un proceso rpido, pero la difusin
transversal es lenta. Esta informacin fue incorporada en 1972 por S. Jonathan

41
Singer y Garth Nicholson en su modelo de Mosaico Fluido (Figura 14) para la
estructura de las membranas biolgicas.

El modelo de mosaico fluido, es hasta ahora aceptado generalmente como

el modelo de organizacin estructural de todas las membranas biolgicas.

Figura 14. Modelo de mosaico fluido.

En este modelo de membrana, se propone que el elemento estructural

fundamental de las membranas biolgicas es una bicapa lipdica continua formada
por fosfolpidos, la cual aparece interrumpida por protenas inmersas en ella
mantenidas por interacciones hidrofbicas entre los lpidos de membrana y los
dominios hidrofbicos en las protenas.

La bicapa lipdica, es de carcter Fluido debido a que la mayora de las

interacciones de sus componentes son no covalentes, lo que permite tanto a los
lpidos como a las protenas de las membranas difundir lateralmente, conservando
su orientacin con respecto al plano de la bicapa.

Las protenas que median la mayora de las funciones de la membrana

forman un Mosaico que es libre de cambiar constantemente. Algunas protenas
emergen slo a un lado de la membrana; otras tienen dominios expuestos a
ambos lados de la membrana.

El modelo de mosaico fluido de las membranas, ha probado ser una muy

til hiptesis para explicar muchos, pero ciertamente no todos los fenmenos que
tienen lugar en las membranas biolgicas.

42
 Nuevos datos experimentales muestran que la compartimentacin de los
componentes de membrana puede ser tan importante para una efectiva
transduccin de seales como es la fluidez de la membrana.

Tcnicas actuales muestran por ejemplo que hay protenas de membrana

que difunden de una forma compleja que indica que hay una considerable
heterogeneidad lateral en la estructura de las membranas, otras estn confinadas,
al menos transientemente, a pequeos dominios, y unas pocas protenas de
membrana experimentan un rpido transporte hacia el borde celular, quizs
impulsadas por protenas motoras. Todo lo anterior, ha hecho necesario la revisin
del modelo de membrana elaborado por Singer y colaboradores.

Dinmica de las membranas.

En este contexto el trmino dinmica es usado para describir el hecho que

la estructura de la membrana cambia en el tiempo.

Las membranas y sus componentes son estructuras dinmicas. Los

lpidos y protenas en membranas tienen un recambio tal como sucede en otros
compartimientos de la clula. Lpidos distintos presentan diversas velocidades de
recambio y las velocidades de especies individuales de protenas de membrana
pueden variar ampliamente.

En tiempos cortos (horas), esta capacidad para el cambio puede

visualizarse por las modificaciones en la posicin de molculas individuales dentro
de la membrana como resultado de su energa cintica y de la naturaleza fluida de
las membranas.

En tiempos largos (das), estos cambios pueden implicar significativas

modificaciones en los componentes de las membranas. Por ejemplo, la
introduccin de ms colesterol al inicio del invierno (variaciones estacionales o
geogrficas), o el cambio en las clases de protenas de membrana que afectan las
propiedades de intercambio de las membranas.

Los procesos principales responsables para estos cambios son la

endocitosis y la exocitosis. La parte de la clula que est ms directamente

43
implicada en estos procesos es el sistema de endomembranas con vesculas
responsables de aadir/remover partes de la membrana.

Resumen.

Las membranas son estructuras complejas y dinmicas que establecen lmites

cerrados entre diferentes compartimientos. El espesor de la mayora de las
membranas es de 6 a 10 nm.
Las membranas estn compuestas principalmente de lpidos y protenas. La
razn lpido/protena vara de 1:4 a 4:1. Dicha variacin depende del tipo de
membrana, del tipo de organismo y del tipo de clula.
Las membranas tambin contienen carbohidratos que forman parte de
glicolpidos y glicoprotenas.
La composicin en lpidos y protenas vara de una membrana a otra. Los
componentes lipdicos principales de las membranas animales son
fosfoglicridos, esfingolpidos y colesterol.
Los lpidos de membrana son molculas relativamente pequeas que poseen
regiones hidroflicas e hidrofbicas molculas anfipticas. Forman
espontneamente capas bimoleculares cerradas en medio acuoso.
Las bicapas lipdicas son barreras al flujo de molculas polares con carga o
sin carga.
Las diferentes membranas tienen protenas especficas que son responsables
principales de las distintas funciones de las membranas. Funcionan como
transportadores, bombas, canales, receptores, enzimas, transductores de
informacin y energa. Estas protenas estn inmersas en las bicapas lipdicas
que proporcionan un microambiente adecuado para su funcionamiento.
Las membranas presentan protenas integrales y perifricas. Algunas
protenas estn unidas a lpidos de cadena larga que las anclan a una u otra
superficie de la membrana.
Las membranas son ensamblajes no covalentes. Las protenas y lpidos que
las componen, se mantienen unidos por numerosas interacciones no
covalentes, las cuales son de carcter cooperativo.
Las membranas son altamente asimtricas. Las dos caras de las membranas
biolgicas siempre difieren en composicin una de otra.
Las membranas son estructuras fluidas. Los lpidos difunden lateralmente en
las membranas, al igual que numerosas protenas.

44
 La mayora de las membranas celulares estn polarizadas elctricamente, el
interior es negativo. El potencial de membrana juega un rol protagnico en el
transporte de molculas con carga elctrica (iones), conversin de energa y
excitabilidad celular.

Bibliografa

Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. Biologa
Molecular de la Clula. Ediciones Omega, Barcelona. 4 edicin. 2003.

Cooper, G. M. La Clula. Editorial Marbn, Madrid. 2 edicin. 2002.

Lodish, H., Berk, A., Zipursky, S. L., Matsudaira, P., Baltimore, D., & Darnell, J.
Biologa Celular y Molecular. Editorial Panamericana. 4 edicin, 2002.

Nelson, D. L, & Cox M. M. Principios de Bioqumica. Ediciones Omega S.A.

Tercera Edicin, 2000.

45
46
 CAPTULO II
SISTEMAS DE ENDOMEMBRANAS (RE Y GOLGI),
SISTEMA VACUOLAR Y LISOSOMAS

Fidelina Gonzlez, Gabriela Sconzo, Giussepina Turturici, Fabiana Geraci, Giovanni Giudice.
Depto Biologa Celular. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile.
Dipartamento di Biologia Cellulare e dello Sviluppo. Universit di Palermo. Palermo. Italia.

Temas.
1. Retculo endoplsmico rugoso.
2. Retculo endoplsmico liso.
3. Golgi.
4. Vesiculacin y secrecin.
5. Formacin de los lisosomas y funcin.
6. Endocitosis y exocitosis.
7. Proyecto Genoma Humano y la va secretora.

Aplicacin al rea de la salud.

1. Enfermedad de Parkinson.
2. Enfermedades producidas por defectos enzimticos en los lisosomas.
3. Fibrosis qustica o fibrosis cstica.

Retculo Endoplsmico Rugoso.

1. Generalidades.
2. Pptido seal.
3. Traslocacin cotraduccional. Traslocn.
4. Protenas solubles y la insercin de protenas transmembrana. Peptidasa
seal. Complejo peptidasa seal.
5. Control de calidad en el retculo endoplsmico. Chaperonas. Plegamiento de
las protenas. Glicosilacin. Complejo oligosacariltransferasa.
6. Formacin de puentes disulfuro.

Retculo endoplsmico liso.

1. Generalidades.
2. Sntesis de lpidos y fosfolpidos. Vitamina A.
3. Sntesis de hormonas esteroidades
4. Calcio y sodio.

47
5. Metabolismo de Glcidos.
6. Detoxificacin.
7. Formacin de vesiculas que van del RE al Golgi.

Golgi.
1. Generalidades.
2. Glicosilacin de protenas.
3. Grupos fosfato protenas lisosmicas
4. Sulfatacin de protenas.
5. Empaquetamiento.
6. Condensacin.
7. Acumulacin.
8. Protelisis final.
9. Distribucin especfica.
10. Vesiculacin.

Lisosomas.
1. Generalidades.
2. Formacin de lisosomas.
3. Endosoma primario.
4. Membrana plasmtica del lisosoma.
5. Funciones de los lisosomas.

48
 INTRODUCCIN

Direccionamiento de protenas en la clula: biognesis de organelos y

secrecin de protenas.

Una clula de mamfero contiene alrededor de 10.000 protenas

diferentes y el funcionamiento adecuado de cada clula depende de la correcta
ubicacin de las protenas ya sea como parte de una membrana o dentro del
compartimiento apropiado, formando parte del contenido de estos
compartimientos, como puede ser la matriz mitocondrial, el citosol, los lisosomas,
etc.

Cuando el mensajero, ARN o cido ribonucleco que lleva la informacin

para la sntesis de la protena, ingresa al citoplasma proveniente del ncleo, se
une a la subunidad menor de los ribosomas, al que luego se une la subunidad
mayor, para iniciar la lectura del mensajero y por tanto la sntesis de protena.
Por otro lado una protena madura, como la conocemos y funcionalmente
normal, en la mayora de los casos tiene que pasar por una serie de
modificaciones que estn relacionadas con el transporte y destino hacia
organelos y vesculas. La clasificacin de cada protena hacia su compartimiento
es de importancia fundamental para la organizacin y funcionamiento de la clula
eucaritica. Hay distintos niveles de secrecin de una protena lo que define dos
vas distintas: la va secretoria y la va citoslica.

En la va secretoria se sintetizan las protenas destinadas al Golgi,

lisosomas y secrecin al exterior de la clula sea tanto constitutiva, que siempre
se est produciendo, y regulada, cuya secrecin obedece a una seal. En la va
citoslica se sintetizan las protenas destinadas al citoesqueleto, peroxisomas,
mitocondrias y ncleo. En este captulo se hace referencia a las protenas que
van a la va secretoria y en el captulo siguiente a las protenas de la va
citoslica.

En la clula, las funciones desarrolladas por el sistema de

endomembranas retculo endoplsmico y Golgi estn asociadas a la formacin de
membranas, sntesis de las protenas y exportacin de sustancias hacia el exterior
y a la sntesis y al empaquetamiento de las protenas destinadas a lisosomas. Las

49
funciones desarrrolladas por los lisosomas estn orientadas a la degradacin de
mltiples sustancias y estructuras. En tanto que la detoxificacin y sntesis de
esteroides se sitan en el retculo endoplsmico liso entre otras funciones tan
importantes como almacenamiento de calcio, sntesis de fosfolpidos, sntesis y
almacenamiento de glicgeno, degradacin de glicgeno (glicogenolisis) y
transformacin de pigmentos biliares, entre otras funciones. El sistema
endoplsmico est formado por membranas que permite la separacin del
contenido interno del externo que es el citosol con el que se comunica a travs de
canales protecos. En tanto que la intercomunicacin entre retculo endoplsmico
rugoso y Golgi es a travs de formacin de vesculas que yeman desde la
superficie de los organelos y se fusionan con otra cisterna cercana liberando el
contenido interno al lumen de la cisterna receptora ms cercana. Estas vesculas
forman parte del Aparato de Golgi y almacenan y transportan las sustancias que
van a formar tanto parte de los lisosomas como de aquellas destinadas a la
secrecin al exterior de la clula. Este proceso se conoce como la va secretoria
en oposicin a la va citoplasmtica en la cual los ribosomas, asociados a travs
del mensajero conformado por polirribosomas libres hacen la sntesis de protenas
en el citosol.

Retculo Endoplsmico Rugoso

1. Generalidades.

La descripcin morfolgica de estos organelos se debe principalmente a la

microscopa electrnica de transmisin. El retculo endoplsmico es una red de
tbulos y cisternas o sacos ramificados e interconectados. El dimetro de los
-10
tbulos y cisternas oscila entre 400 y 700 A (A = 1 Angstrom es igual a 10 m). La
membrana del retculo endoplsmico es de 50 a 60 A de espesor. Sobre la cara
citoplasmtica del RER se pueden contabilizar alrededor de 13 millones de
ribosomas en los hepatocitos.

El retculo endoplsmico (RE) es una red que ocupa gran parte del
citoplasma de las clulas. Los sculos y tbulos se encuentran interconectados a
travs de la membrana continua que rodea un espacio interno, el lumen, este
puede llegar a ocupar el 10% del volumen total de la clula. La membrana del

50
retculo permite mover selectivamente las sustancias entre el lumen y el citosol.
Esta se conecta tambin con la envoltura nuclear, que est conformada por una
doble membrana. La membrana del retculo es una membrana que tiene bajo
contenido en colesterol, menor que el contenido de colesterol de la membrana
plasmtica que rodea a la clula y que en el resto de las membranas de la va
secretoria, esto permite mayor fluidez de la membrana (visto en el captulo de
membranas celulares). Se ha demostrado experimentalmente que una mayor
concentracin de colesterol en la membrana del retculo impedira la traslocacin
del polipptido sintetizado por el ribosoma, debido a una desorganizacin de los
componentes del traslocn. La funcin del retculo endoplsmico rugoso es
participar en la sntesis de protenas, plegamiento, control de calidad, glicosilacin
primaria y transporte de las protenas mediante el proceso de formacin de
vesculas (vesiculacin) al Aparato de Golgi.

La superficie del retculo endoplsmico rugoso est cubierto por ribosomas

en la cara citoplasmtica de la membrana del retculo. Aqu ocurre la produccin y
procesamiento de protenas que van a ser exportadas, o secretadas de la clula.
Los ribosomas son el mesn de la formacin de la protena. La protena ingresa al
interior del retculo endoplsmico rugoso a travs de la membrana, y puede seguir
dos vas: como protena soluble o formando parte de membranas. Estas ltimas
pueden anclarse a la membrana como una protena transmembrana, pudiendo
ser unipaso, bipaso o multipaso. Todo el proceso depende de las seales, que en
este caso corresponden a secuencias hidrofbicas, que lleve la protena en
formacin. En el retculo endoplsmico ocurre tambin la glicosilacin primaria de
las protenas que van a ser transportadas, esto es la agregacin de azcares a
residuos aminoacdicos de la protena.

2. Pptido seal.

Una vez asociadas las subunidades de los ribosomas al mensajero, se

inicia la sntesis de protenas en el citoplasma, que se detiene si en la secuencia
de aminocidos se lee la correspondiente a un pptido seal, que es reconocido
por la protena citoplasmtica SRP (es una sigla derivada del ingls que significa
partcula de reconocimiento de la seal) que se une a la secuencia del pptido
seal y ancla al ribosoma a la membrana del retculo endoplsmico a travs del
receptor de la partcula (RP) situado en el retculo endoplsmico. La secuencia

51
seal se encuentra en el extremo NH2-terminal de la cadena polipeptdica en
crecimiento. Esta secuencia de alrededor de 15-35 aminocidos, en el extremo
amino terminal N-terminal se inicia con un trecho de aminocidos hidroflicos,
seguidos de una secuencia de aminocidos hidrofbicos (8-15), que forman una
estructura de alfa hlice, denominado core hidrofbico, seguidos por
aminocidos bsicos, es rico en metionina (dominio M), que se ha demostrado
conforman un sitio de reconocimiento del pptido seal. Esta secuencia distingue
a las protenas que van a la va secretora de aquellas que van a la va citoslica.

La partcula receptora de la seal (SRP) reconoce y se une a la secuencia

seal de anclaje de la protena en formacin y se integra al ribosoma. La protena
SRP est formada por 6 polipptidos y una molcula corta de ARN (ARN7sl). La
regin que interacta directamente con el core hidrofbico es un polipptido de 54
kDa (SRP54). En su estructura tiene una regin altamente hidrofbica, que forma
un bolsillo hidrofbico a la que se ancla el core hidrofbico del pptido seal recin
formado, y un sitio de unin para GTP. El ARN contenido en esta partcula tiene
por misin interrumpir la lectura del mensajero, al aparearse las secuencias
complementarias del mensajero con el ARN del SRP, mientras se asienta el
ribosoma al RER. La unin de la protena SRP a la secuencia inhibe la traduccin
(lectura del ARN mensajero), por lo cual esta se detiene transitoriamente.

La SRP con el pptido seal, integrados a la subunidad mayor del

ribosoma, se une al complejo receptor de SRP o protena de anclaje de SRP. El
receptor SRP es un complejo de dos protenas, la subnidad alfa y la subunidad
beta, esta ltima es una protena integral de membrana del retculo endoplsmico
rugoso, en tanto que la subunidad alfa es la encargada de unir GTP, para lo cual
tiene un sitio de unin. Tanto la SRP como el receptor de SRP son protenas que
requieren de la unin de GTP, para lo cual tienen una regin de unin de GTP, y
liberan GDP luego de escindirse del pptido seal. La partcula que ancl al
ribosoma a travs del pptido seal se libera y la sntesis de protenas se reanuda.
El proceso de traslocacin cotraduccional de la protena culmina con el final de la
traduccin (proceso de sntesis de protena).

En el momento que se ancla el ribosoma a travs de receptor de SRP, se

asienta sobre el complejo de traslocacin de membrana, a travs de la cual la
protena que va a ser sintetizada pasa al lumen del retculo para insertarse en la
membrana (si es protena integral de membrana) o para ingresar al lumen (si es

52
protena soluble) y es a la vez anclado a la cara externa del retculo endoplmico
rugoso a travs de la subunidad mayor que se une a la riboforina I y II, protenas
pertenecientes a otro complejo de protenas integrales de la membrana del RER,
que participan en la glicosilacin de la protena, denominado OST.

3. Traslocacin cotraduccional. Traslocn.

Existen dos tipos descritos de traslocacin en eucariontes, una es la

traslocacin cotraduccional que ocurre en mamferos y la otra es la
traslocacin posttraduccional que ocurre en levaduras.

En la traslocacin cotraduccional, la subunidad mayor del ribosoma queda

asentada sobre el traslocn, que es un complejo proteico a la forma de canal que
contiene un poro acuoso y que est bloqueado en la cara interna por una protena,
que cierra el poro, se ha demostrado que esta es una chaperona. A travs del
traslocn ingresar la protena en formacin (Figura 1).

Figura 1. Estructura del ribosoma eucaritico unido al complejo traslocn en la membrana

del retculo endoplsmico (Modificado de Cell 107:361 (2001). (Con permiso de la
editorial*).

53
 El traslocn est conformado por un core de complejos heterotrimricos y
protenas asociadas. Estos complejos se conocen como Sec61, y las protenas
que lo conforman se denominan alfa, beta y gamma. La protena alfa atraviesa la
membrana, atravesndola 10 veces, la subunidad beta y gama slo una vez. Otro
componente importante del traslocn es la protena TRAM, que cruza la
membrana al menos 8 veces.

Cuando el ribosoma est anclado al traslocn, se reinicia la sntesis de la

protena que haba sido interrumpida al unirse la partcula SRP a la secuencia
seal. La secuencia seal de la protena en crecimiento se introduce a travs del
poro del traslocn.

Luego que la partcula SRP se ha unido al receptor de SRP, la cadena

polipeptdica es ubicada en el canal acuoso del traslocn que se encuentra
cerrado en la cara interna del retculo endoplsmico, se ha postulado que es una
protena soluble, una chaperona de la familia HSP70, BiP, la que cierra el poro en
la cara luminal, pero tambin hay evidencias que el cierre del poro se hara
efectivo a travs de una regin de protenas integrales de membrana, asociadas al
traslocn, que son la riboforina I y la riboforina II. Estas protenas integrales
forman parte del complejo oligosacarltransferasa (OST). A medida que la cadena
polipeptdica crece hasta 70 residuos pasa a travs del poro del traslocn al lumen
del retculo endoplsmico rugoso. Al finalizar la traduccin, el ribosoma permanece
unido al traslocn hasta que la protena pueda ser completamente liberada al
lumen. El poro acuoso entonces se cierra en un proceso que requiere energa a la
forma de ATP. El dimetro del poro es de 40 a 60 A. En algunos trabajos
cientficos se ha sealado que este poro cambia de tamao durante la traslocacin
cotraduccional, inicialmente el tamao de poro sera de 9 a 15 A, cuando el
traslocn no est unido al ribosoma y luego se expande el dimetro interno a 40 a
60 Angstrom. Este proceso impide la liberacin de iones, especialmente iones
calcio, desde el lumen del retculo al citoplasma, conservndose as los gradientes
inicos crticos durante la traslocacin.

La protena TRAM.

La protena TRAM (protena de membrana asociada a la traslocacin de la

cadena polipeptdica) es una protena glicosilada multipaso que cumple un rol

54
adicional en el proceso de traslocacin cotraduccional. Participa en un paso
inmediatamente posterior al inicio de la traslocacin. Inicialmente la interaccin
entre el traslocn y el ribosoma es dbil y luego se intensifica, es en este instante
donde participa la protena TRAM, en el proceso de traslocacin. La protena
TRAM funciona de una forma dependiente de la secuencia seal de la protena en
formacin, en los pasos iniciales de la traslocacin para algunas protenas. Las
protenas que requieren de TRAM son aquellas que tienen menos residuos de
aminocidos en el extremo amino terminal que preceden al core hidrofbico
(alrededor de 5 aminocidos) y tienen un core hidrofbico de menor longitud. Las
protenas que traslocan independiente de TRAM son aquellas que tienen
alrededor de 9 aminocidos antes del core y este core es ms largo. El rol de la
protena TRAM es orientar al pptido seal hacia el traslocn, interactuando con el
extremo N-terminal de pptido seal. Los elementos necesarios bsicos para el
ingreso de pptido seal son el complejo sec61p, la protena Tram y el receptor de
SRP.

En el lumen del RER ocurre la escisin del pptido seal, mediada por una
peptidasa seal que es una protena integral de membrana que se encuentra
cercana al traslocn y luego tienen lugar los procesos posttraduccionales, que
ocurren en el retculo endoplsmico y culminan en el Complejo de Golgi y la
adicin de oligosacridos a los residuos de asparragina de la cadena polipeptdica
(oligosacridos N-ligados). La adicin de oligosacridos es realizada por enzimas
como riboforina I y II, que son tambin protenas integrales de membrana.

En el lumen del RER las protenas solubles y las integradas a la

membrana son sometidas a un control de calidad por chaperonas.

4. Protenas solubles y la insercin de protenas transmembrana. Peptidasa

seal. Complejo peptidasa seal.

Insercin de protenas en la membrana del retculo endoplsmico. Si la

protena sintetizada es una protena unipaso, bipaso o multipaso que va a formar
parte de la membrana plasmtica, de la membrana del retculo endoplsmico, del
Golgi o de los lisosomas, estas se insertan en la membrana en vez de ser
liberadas al lumen. As, el ingreso de la protena a medida que se va sintetizando,
se interrumpe, formando bucles que se extienden al citosol o al lumen del retculo.
As la insercin de las protenas integrales a la membrana del retculo es una

55
insercin cotraduccional. Adems, las diferentes protenas integrales pueden tener
expuestos hacia el citosol el extremo N-terminal o extremo C-terminal. Estas
orientaciones estn establecidas en la cadena polipeptdica. Para protenas con el
extremo C-terminal expuesto al citosol, la insercin en la membrana implica dos
eventos secuenciales: una secuencia seal que inicia la traslocacin y que
posteriormente es escindida y una secuencia de interrupcin de la transferencia
que ancla la protena a la membrana.

En el caso de las protenas multipaso el anclaje a la membrana se efecta

mediante varias secuencias internas de anclaje que interrumpen la traslocacin de
la protena. Estas seales no son escindidas por la peptidasa seal, porque no son
reconocidas por esta enzima. As las protenas multipaso resultan como una serie
de bucles que continan en ambos lados de la membrana del retculo,
atravesando la membrana desde la cara citoslica al lumen del retculo y
viceversa. Las secuencias hidrofbicas que anclan la protena a la membrana no
son transferidas al lumen, sino que son insertadas en los lpidos de la membrana,
y se les denomina secuencias de detencin de la transferencia o secuencias
de anclaje. El traslocn abre un espacio lateral, entre los trmeros que conforman
la protena, permitiendo que tales secuencias entren a la membrana lipdica. Para
protenas con mltples dominios transmembrana, no est claro si los dominios son
liberados secuencialmente o todos de una vez. Por lo tanto el traslocn es
responsable de la orientacin correcta de los dominios transmembrana
(enfrentando la direccin adecuada desde adentro hacia afuera o viceversa).

El complejo peptidasa seal est compuesto de 6 polipptidos de masa

molecular de 25, 23, 22, 21,18 y12 kDa. Los polipptidos de 23 y 22 kDa son
glicoprotenas. Dos de estos polipptidos son los responsables de la actividad
cataltica, cuyo sitio activo se encuentra orientado hacia el lumen del retculo.
Dos de los polipptidos tienen ubicacin citoslica (12 y 25 kDa), y los otros
probablemente sean responsables de la interaccin con el traslocn, de hecho
se ha demostrado que el traslocn interacta con la subunidad de 25 kDa. El
complejo peptidasa seal acta en asociacin con el traslocn.

56
5. Control de calidad en el retculo endoplsmico. Glicosilacin: Complejo
oligosacariltransferasa (OST). Chaperonas: Plegamiento de las protenas.
Vias ERCQ, UPR, ERAD.

Glicosilacin de protenas.

La adicin de carbohidratos o glicanos a la protena cumple roles

esenciales en el destino de la protena. Es as que se ha demostrado que la
composicin de carbohidratos codifica la informacin crucial sobre la estructura,
localizacin y edad de las protenas, promueve la maduracin y facilita el control
de calidad de las protenas en el lumen de la va secretoria. Adems actan de
forma estrica (en el espacio) impidiendo el acceso de proteasas. Los glicanos
agregados a las protenas en el retculo endoplsmico constituyen el 50% de la
masa de la protena, son por lo tanto modificaciones voluminosas, que le dan
flexibilidad a la protena y a la vez le confieren propiedades hidroflicas, se ha
comprobado que se extienden aproximadamente 3 nm desde la protena.

En el retculo endoplsmico ocurre la glicosilacin N-ligada de protenas

mientras la traslocacin est en progreso: glicosilacin cotraduccional. Las
unidades de oligosacridos de 14 residuos de azcares son agregadas al
aminocido asparragina de la cadena polipeptdica en crecimiento por el complejo
oligosacrido transferasa (OST). Previamente el oligosacrido es sintetizado en
un lpido que est anclado a la membrana del retculo endoplsmico, dolicol, que
porta el oligosacrido, a la forma de dolicol pirofosfato. Este oligosacrido es
transferido a la protena en el residuo asparragina en una secuencia de consenso
Asn-X-Ser/Thr de la protena, por el complejo oligosacrido transferasa. La OST
tiene al menos dos sitios de unin, uno para el sitio de consenso y el otro para el
oligosacrido unido al dolicol, es probable que exista otro sitio de unin al
traslocn. Posteriormente son removidos cuatro residuos de azcar: tres glucosas
y una manosa del glicano. La Figura 2 indica claramente la composicin del
glicano transferido a asparagina, con sus respectivos enlaces y se indican las
enzimas que participan en forma posterior a la unin del glicano N-ligado (a
asparagina). En la Tabla 1, se detallan las funciones de cada uno de los pasos.

57
Figura 2. Composicin del glicano transferido al residuo asparragina (Asn) de la protena en
formacin de acuerdo a Herbert, DN, Garman, SC, Molinari, M. 2005. Trends in Cell Biology
15(7):364-370.

58
Tabla 1. Funcin de cada unidad de glicano que se une a la protena en formacin
en el Retculo Endoplsmico Rugoso (de acuerdo a Herbert, DN, Garman, SC,
Molinari, M. 2005. Trends in Cell Biology 15(7):364-370.).

Glicano Modo de generacin Funcin

Glc3Man9GlcNAc2 Transferido por OST El glicano es transferido por OST
desde OS-PP-Dol
Glc2Man9GlcNAc2 Glucosidasa I Inhibicin de la unin a OST. Libera la
glicoprotena para iniciarse el
plegamiento
Glc1Man9GlcNAc2 Glucosidasa II y GT Une las chaperonas del RE: calnexina
y calreticulina; ayuda al reclutamiento
de la Oxidoreductasa ERp57. Evita la
agregacin de protenas. Inhibe el
plegamiento global y retiene a las
glicoprotenas en el RE.
Man9 GlcNAc2 Glucosidasa II Libera las chaperonas y ocurre el
plegamiento y la maduracin de la
protena
Man8 GlcNAc2 Manosidasa I del RE Marca al sustrato para la va ERAD,
cuando esta es una protena mal
plegada
ManX GlcNAc2 Manosidasa II del RE Se une a ERGIC-53 en el RE y lo
marca con destino ERGIC cuando
est acoplada a una protena plegada
apropiadamente.

La oligosacrido transferasa es un complejo de protenas integrales de

membrana que ha sido estudiada en levaduras y en mamferos. En las levaduras
comprende ocho unidades Ost1p, Ost2p, Ost3p/ Ost6p, Ost4p, Ost5p, Wbp1p,
Swp1p y Stt3p. En eucariontes pluricelulares se han identificado los homlogos de
las protenas Ost4p y Ost5p. En mamferos se ha determinado la presencia del
homlogo de Stt3p y Ost3p/Ost6p. Se ha determinado que la protena Stt3p es la
subunidad central implicada en la transferencia del glicano al polipptido en
formacin. La transferencia oportuna del oligosacrido al polipptido en formacin
es facilitada por la proximidad que existe entre el complejo OST y el traslocn.

59
 La glicosilacin de las protenas permite el correcto plegamiento de las
protenas, por lo tanto es necesaria que sea completa, ya que es requisito del
control de calidad de la protena en el lumen del retculo endoplsmico. Desde ya
se puede sealar que la ausencia de algunos de los aminocidos Ser o Thr en la
secuencia de la protena en el orden sealado, impide la glicosilacin de la
protena.

Formacin del dolicol-pirofosfato-oligosacrido dador del glicano.

El dolicol es un lpido que forma parte de la membrana del retculo, y

transporta el oligosacrido formado por 14 residuos de monosacridos que cede a
la oligosacaril transferasa para ser unido a la asparragina del polipptido en
formacin. El primer paso para la formacin del oligosacrido es la fosforilacin del
dolicol. Este se fosforila para formar un dolicol pirofosfato, que son dos grupos
fosfatos unidos que contienen una muy alta energa. El primer fosfato proviene de
CTP, y el segundo fosfato proviene de UDP-N-acetilglucosamina (GlcNAc),
incorporndose junto con el fosfato la primera molcula de sacrido al dolicol que
ya contena un fosfato. Luego se incorpora otra GlcNAc proveniente de UDP-N-
acetilglucosamina, esta vez sin el fosfato, a la GlcNAc ya unida. Luego se
incorporan 5 manosas de una por una, provenientes de GDP-manosa. Todos los
sacridos unidos al dolicol estn orientados hacia el citoplasma y en este punto
mediante un movimiento de "flipping" o flip-flop en la membrana del retculo
quedan enfrentados hacia el lumen del retculo, donde se siguen agregando 4
manosas provenientes de GDP-manosa, y luego las tres glucosas que provienen
de UDP-glucosa.

Chaperonas y plegamiento de las protenas.

Luego de la traslocacin al lumen del RE y la glicosilacin, las protenas

se encuentran con las chaperonas que facilitan el proceso de maduracin y
deteccin de un producto proteco defectuoso. Las chaperonas constituyen una
clase de protenas que se unen a polipptidos no plegados o parcialmente
plegados, que tienen la funcin de ayudar al plegamiento de las cadenas
polipeptdicas en formacin, ayudar al replegamiento de las protenas
denaturadas o evitar la agregacin de las superficies hidrofbicas expuestas de

60
las protenas que presentan problemas en el plegamiento evitando la agregacin
y promoviendo el plegamiento. Estn presentes tanto en eucariontes como en
procariontes. Las chaperonas ayudan a las protenas a plegarse, acelerando el
proceso, estabilizando intermediarios inestables y decreciendo las barreras de
activacin del plegamiento. Reconocen superficies hidrofbicas de las protenas,
se unen a ellas, evitando la agregacin de protenas. Juegan un rol importante
en la transduccin de seales, en la mantencin del la organizacin del
citoplasma y de compartimientos intracelulares ya que no slo estn presentes
en el interior del retculo sino que tambin en el citoplasma, ncleo, mitocondrias,
etc. Se ha estimado que alrededor del 30% de las protenas sintetizadas en una
clula son defectuosas o aberrantes. Las protenas mal plegadas son
inherentemente txicas al organismo. Adems estas protenas si no son
eliminadas pueden tender a la agregacin, debidos a interacciones hidrofbicas.

Las chaperonas que interactan en forma inmediata con el polipptido

recin formado son la calnexina y la calreticulina, ambas son chaperonas tipo
lectina. La calnexina es una protena de membrana y la calreticulina es soluble.
Ambas tienen un sitio para unir al glicano de la glicoprotena que est al estado
monoglucosilado, tiene slo una glucosa en la ramificacin A (ver Tabla 1). La
unin a la calnexina o calreticulina aumenta la eficiencia del plegamiento, ya que
enlentecen el proceso para dar tiempo a un plegamiento correcto, evitando la
agregacin con otras protenas en el interior del RE. Si la interaccin es con una
protena aberrante, esta protena permanecer mayor tiempo unida a estas
chaperonas. Por lo tanto la ubicacin de los glicanos es esencial para dirigir el
plegamiento correcto, el dominio de la protena donde se ubica el glicano que
est unido a la chaperona es el ltimo en plegarse. La importancia de la
transferencia del glicano N-ligado completo tambin influye en la calidad de una
protena ya que aquellos incompletos no sern reconocidos por la chaperona.

Es as que el retculo endoplsmico rugoso juega un papel primordial en el

control de calidad de las protenas, solubles o transmembrana; esta va de estricto
control de calidad de las protenas se denomina ERQC (que significa control de
calidad en retculo endoplsmico) y tiene asociada una va de degradacin de
protenas ERAD (ERAD, que significa degradacin de protenas asociado al
retculo endoplsmico) que es el reconocimiento de las protenas defectuosas en
el RE, su marcaje para exportacin y la degradacin en el citoplasma y que consta
de tres pasos:

61
1) reconocimiento de los polipptidos aberrantes por chaperonas presentes en el
lumen del retculo endoplsmico, esto se inicia desde el momento de entrada del
pptido al lumen del retculo, cuando la sntesis de protena est en progreso.

2) exportacin de las protenas solubles al citoplasma a travs del poro del

traslocn (retrotraslocacin)

3) degradacin de los polipptidos aberrantes, mal plegados, previa ubiquitinacin,

en el proteasoma que se encuentra en el citoplasma. La degradacin de los
polipptidos ubiquitinados produce oligopptidos y unidades de ubiquitina. El
proteasoma es un complejo proteasa citoslico muy abundante que consta de una
partcula core 20S que tiene actividad proteoltica y uno o dos RP19S, que le da el
aspecto de un tubo con tapas abatibles en ambos extremos del tubo. El
proteasoma es una macroestructura que recicla protenas a pptidos pequeos,
que luego son degradados a aminocidos en el citoplasma.

Cabe sealar que en algunos casos, las protenas transmembrana pueden

ser degradadas directamente por el proteasoma o por proteasas en la cara
citoslica.

Cmo se detecta una protena mal plegada? Se ha postulado un

mecanismo molecular primario de deteccin de protenas mal plegadas
denominado con la sigla UPR (que significa respuesta a protenas mal
plegadas), asociada a la va ERAD, mediante este mecanismo las clulas
eucariticas contrarrestan la acumulacin de protenas mal plegadas en el lumen
del retculo endoplsmico, evitando la agregacin de protenas en el interior del
retculo.

Hay evidencias que la presencia de protenas mal plegadas en el lumen

del retculo, inducen mediante un complejo mecanismo al aumento de la sntesis
de chaperonas. Esto implica que habra seales que partiran desde el interior del
retculo hasta el ncleo, que aumentaran el nmero de mensajeros de las
chaperonas, que luego seran traducidos en el RE. Se postula que la protelisis
activara factores que entraran al ncleo y se uniran al ADN facilitando la sntesis
de mensajeros de las chaperonas.

62
 Dnde ocurre la degradacin de protenas? Como ya se ha sealado,
las protenas secretadas son marcadas y traslocadas al interior del lumen del RE a
travs de un canal proteco ubicado en la membrana del RE. En el lumen estas
protenas son plegadas correctamente antes de ser transportadas a travs de
vesculas que las trasladar hacia el siguiente compartimiento de la va secretora.
En tanto, las protenas mal plegadas sern retenidas en el RE, y finalmente sern
degradadas, en el citosol. Las protenas mal plegadas vuelven al citosol a travs
del mismo poro del traslocn y pasan al citosol. Las chaperonas BiP o calnexina y
PDI (protena disulfuro isomerasa) que estn en el lumen del RE evitan la
agregacin de protenas e intervienen en la decisin de transportar las protenas
para ser secretadas, o bien para ser degradadas. As, las chaperonas pueden
recubrir la seal de salida de las protenas o anclar estas proteinas defectuosas en
el lumen del retculo endoplsmico rugoso. Las chaperonas en el citosol a la vez
participan en la exportacin de las protenas defectuosas provenientes del RE, y
para marcarlas con residuos de ubiquitina (poliubiquitinacin, visto en el captulo
de protenas) y dirigirlas hacia los proteasomas citoslicos para su degradacin
por el proteasoma que se encuentra en el citoplasma.

Reglucosilacin.

La calreticulina y la calnexina, son ayudadas en el reconocimiento de las

protenas mal plegadas por la glucosil transferasa (GT) dependiente de UDP. GT
es una protena de 174 kDa que tiene dos dominios, uno para la actividad
transferasa de la glucosa a la glicoprotena, en el glicano, especficamente en la
ramificacin A (Figura 2, Tabla 1), y el otro dominio es el sensor de plegamiento,
que comprende alrededor del 75% de la protena. La protena GT reconoce los
residuos hidrofbicos expuestos en glicoprotenas en formacin, realizando as
una actividad complementaria con calnexina y calreticulina, que se asocian a la
porcin hidroflica de la protena, es decir a la porcin glicanos N-ligados. La GT
agrega glucosa a aquellas molculas que detecta como glicoprotenas mal
plegadas. Esta es una marca de retencin en el RE y que da tiempo para que la
protena mal plegada pueda plegarse correctamente. Los siguientes son los pasos
que se siguen en el lumen del retculo:

1) La enzima Glucosidasa I remueve la glucosa terminal de la ramificacin A del

glicano de una protena.

63
2) La enzima Glucosidasa II remueve la siguiente glucosa. En este punto se une la
calnexina, que es la chaperona unida a la membrana.
3) La enzima Glucosidasa II remueve la tercera glucosa, siempre que la
glicoprotena est bien plegada, y la protena enseguida es empaquetada para
salir del RE al Golgi, por formacin de vesculas con cubierta de coatmero COP I.
Si la protena no est bien plegada, entonces ineracta con calreticulina seguida
por la adicin de tres nuevas glucosas obtenidas de UDP-glucosa. Un nuevo ciclo
da la posibilidad de un plegamiento correcto.

Formacin de puentes disulfuro.

El estado de oxidacin del reticulo endoplsmico promueva la formacin

de los puentes disulfuro que estabilizan la estructura de la protena. Es as que las
protenas que estn en el RE son modificadas covalentemente por la formacin de
enlaces o puentes disulfuro. Esta reaccin es catalizada por protenas que actan
como agentes oxidantes o aceptores de electrones, en el RE antes que las
protenas nativas puedan seguir su curso hacia el Golgi. Tambin estas
oxidoreductasas tienen la facultad de reducir los puentes disulfuro para facilitar la
retrotraslocacin de las protenas defectuosas a travs del traslocn hacia el
citosol. La calnexina y la calreticulina participan en el proceso guiando las
oxireductasas como la ERp57 a los sitios de formacin de puentes disulfuro en la
protena en formacin o en la maduracin de la protena. Adems la enzima
denominada proteina disulfuro isomerasa (PDI) presente en el lumen del retculo,
es la responsable de reubicar los puentes disulfuro a lo largo de la protena. La
proteina disulfuro isomerasa contiene dos cistenas en su secuencia que estn
muy cercanas entre s, y que tienen la propiedad de interconvertirse fcilmente
entre la forma reducida (SH) y la forma oxidada (S-S). La PDI oxidada facilita la
formacin de puentes disulfuro (S-S) en la protena en maduracin, actuando
como un oxidante que reduce. La PDI reducida ayuda a la formacin de puentes
disulfuros correctos dentro del sustrato. Sale inalterada de la reaccin.

Control de calidad de la sntesis proteca: Va ERAD.

La va ERAD (ERAD, significa degradacin asociada al retculo

endoplsmico) es la exportacin desde el RE al citosol de las protenas mal

64
plegadas para su posterior degradacin. En este mecanismo de reconocimiento y
unin a las protenas mal plegadas en el lumen del retculo participan las
chaperonas. Las chaperonas probablemente estn implicadas en la distincin de
intermediarios de plegamiento de las protenas terminalmente defectuosas y en la
iniciacin del marcaje para su degradacin. En el retculo endoplsmico, las
protenas no glicosiladas mal plegadas son reconocidas por BiP, pero la
interaccin subsecuente es con protenas miembros de la familia PDI, anclada a la
membrana del retculo endoplsmico. Los miembros de la familia PDI forman los
puentes disulfuro en la protena, PDI es requerida para exportar sustratos con
puentes disulfuro al citoplasma. En la va ERAD, la interaccin con PDI u otros
miembros de la familia es un requisito para la exportacin al citoplasma, tenga o
no puentes disulfuro el sustrato.

El plegamiento incorrecto lleva a una asociacin prolongada con

chaperonas, escindindose un residuo de manosa del N-glicano de la protena por
manosidasa I del RE (Mns1p) y el reconocimiento del glicano sin este residuo de
manosa por Htm1p, que marca a la glicoprotena mal plegada para su
degradacin. El marcaje para la exportacin de las protenas mal plegadas no
glicosiladas puede ser mediada directamente por PDI. Las protenas mal plegadas
son exportadas al citosol a travs de un canal formado por Sec61p y mltiples
protenas accesorias. Durante la exportacin las protenas son oligoubiquitinadas
por un conjunto de enzimas E2-E3.

Rmisch (2005) seala tres escenarios mediante los cuales una protena
mal plegada llega hasta el proteasoma, de acuerdo al nivel de ubiquitinacin de la
protena:

1. Cuando los sustratos pobremente ubiquitinados se encuentran en el canal

Sec61p con destino al citoplasma, son ayudados por E4 que aumenta el tamao
de la cadena de ubiquitina y posterior deglucosidacin por otras enzimas
citoslicas antes de ser reconocido por la subunidad regulatoria del proteasoma
19SRP.
2. Alternativamente la ubiquitinacin puede ser mediada por el complejo ubiquitn
ligasa: SCF-N-glicano. SCF (sigla del ingls, protena Skp1-Cul1-caja F) es un
receptor perteneciente a una familia de ubiquitin ligasa que reconoce y agrega
ubiquitina a protenas N-glicosiladas que han sido transportadas al citosol. Estas
protenas constan de 4 subunidades y la subunidad que contiene un lugar que

65
reconoce y se une al sustrato. En mamfero se han reconocido dos miembros de la
FBS1 FBS2
familia SCF y SCF . FBS1 se expresa principalmente en neuronas y se une
fuertemente a la fraccin quitobiosa de glicoprotenas desnaturalizadas. FBS2 se
expresa en gran cantidad de clulas distintas.
3. A un alto nivel de ubiquitinacin del sustrato, el proteasoma se une
directamente al canal Sec61p y extrae la protena mal plegada desde el RE.

Retculo endoplsmico liso

1. Generalidades.

El retculo endoplsmico liso es ms tubular que el retculo endoplsmico

rugoso, y estos tbulos se encuentran profusamente anastomosados formando
una verdadera red de tbulos. El retculo endoplsmico liso no tiene ribosomas en
su superficie externa. Est conformado por canales tubulares que se
anastomosan, facilitando la intercomunicacin de los contenidos del mismo.

El retculo endoplsmico liso est implicado en la produccin de lpidos,

sntesis de bloques de carbohidratos (glicgeno) destinados al metabolismo de
carbohidratos, detoxificacin de drogas y venenos y almacenamiento de calcio.
Por lo tanto, en algunas clulas como neurona y clulas musculares se encuentra
muy desarrollado porque requieren del metabolismo de lpidos y carbohidratos, o
en hepatocitos, donde contribuye a la detoxificacin, metabolizando drogas como
barbitricos o alcohol. En las clulas musculares el retculo endoplsmico libera el
calcio almacenado y gatilla la contraccin muscular.

En las clulas de los diferentes tejidos el retculo endoplsmico liso juega

un rol muy importante en la regulacin del calcio, y de lo iones cloruros, en el
transporte de los lpidos y la sntesis y circulacin de fosfolpidos y glicoprotenas
de membrana, en el metabolismo de los lpidos, lipoprotenas y glicgeno, en la
sntesis de hormonas esteroidales y en la detoxificacin.

66
2. Sntesis de lpidos y fosfolpidos. Vitamina A.

En las clulas pigmentadas de la retina, el retculo endoplsmico liso est

implicado en la esterificacin de la vitamina A, la rodopsina, el pigmento visual,
est compuesto de un aldehdo de la vitamina A.

3. Sntesis de hormonas esteroidades.

Participa en la produccin de esteroides, como sucede en la glndula

adrenal y en las gnadas, formados a partir de colesterol se sintetizan estrgenos,
testosteronas, cortisol y progesterona, vas en las que intervienen las enzimas
mencionadas anteriormente. Los esteroides en las clulas de la corteza adrenal
difunden, no van incorporados a grnulos de secrecin como en el caso de las
protenas.

4. Calcio y sodio.

En las clulas regula la distribucin de los iones calcio, ya que el lumen

del retculo endoplsmico es el principal sitio de almacenamiento de la clula. En
las clulas musculares, se denomina retculo sarcoplsmico, regula la contraccin.
Contiene en su interior una AT pasa dependiente de Calcio. La liberacin de los
iones calcio promueve la contraccin.

5. Metabolismo de Glcidos.

En el retculo endoplsmico liso de hepatocitos, la presencia de Glucosa

6 fosfato interviene en el metabolismo del glicgeno (heptico). En el retculo
endoplsmico liso de los hepatocitos ocurre la sntesis de glicgeno y
almacenamiento como grnulos en el exterior del retculo endoplsmico liso
disponible para la degradacin de glucgeno con la liberacin de glucosa 1
fosfato.

67
6. Detoxificacin.

Aumenta en los hepatocitos luego de la exposicin a barbitricos;

transforma los frmacos liposolubles en productos hidrosolubles que pueden ser
excretados por el rin. Tambin metaboliza el alcohol producto de beber en
exceso. Contiene hidrolasas, lipooxidasas y metilasas que son responsables de
estos procesos.

7. Formacin de vesiculas que van del RE al Golgi.

La mayor parte de las protenas exportadas desde el retculo

endoplsmico salen del organelo en vesculas que yeman desde la porcin lisa de
retculo endoplsmico, esta regin carece de ribosomas. El retculo endoplsmico
liso no se encuentra tan desarrollado en algunas clulas y por esto es denominado
retculo endoplsmico de transicin.

Por qu se produce la retencin de protenas en el RE? Algunos

autores se refieren a esto como regulacin de los sitios de salida de los
productos proteicos en los que intervendran dos estructuras protecas, una el
coatmero COP II que forma la cubierta externa de la vescula que sale del RE
con destino a las cisternas cis del Golgi y una protena SAR, una GTPasa
(intercambia GTP por GDP, pudiendose de esta manera hacer el movimiento de
vesculas entre compartimientos) de la familia Ras. En estos sitios de salida,
tambien denominados RE de transicin (ERGIC), se inicia la yemacin de las
vesculas, con la incorporacin de los coatmeros en la parte externa, que van
unidos a otras protenas integrales de membrana, como lo muestra el esquema.
Micrografas electrnicas muestran que en estos sitios se producen numerosas
vesculas que migran hacia el Golgi, y se fusionan con las cisternas cis del Golgi.
Las vesculas tienen dimensiones de alrededor de 50 nm.

A nivel de la exportacin del RE, la clasificacin de las protenas en los

sitios de salida determina si una protena puede abandonar el RE. Aqu las
seales de exportacin y retencin, los efectos de la movilidad de protenas en el
RE y la inclusin selectiva en los sitios de salida del RE son factores cruciales.
Como conclusin se debe sealar que en el retculo el plegamiento y la
maduracin estn constantemente sujetos a procesos de ensayo-error, y una

68
fraccin sustancial de protenas es degradada rpidamente despus de la
sntesis. Es as como el proceso de plegamiento y ensamble de proetnas est
asociado a la exportacin por transporte vesicular.

El Aparato o Complejo de Golgi

1. Generalidades.

El aparato o complejo de Golgi es un organelo constitudo por una serie de

sacos aplanados o cisternas y vesculas asociadas, cuya funcin principal es la
modificacin postraduccional y clasificacin de protenas sintetizadas en el RE y
destinadas por medio de vesculas a: lisosomas, membrana plasmtica o a
secrecin. El Golgi est ubicado cerca del ncleo, del retculo endoplsmico y del
centrosoma. Su tamao es variable y su desarrollo depende del tipo celular y de
su estado metablico y del ciclo celular.

La unidad bsica del organelo es el sculo, que consiste en una vescula

o cisterna aplanada con una regin central de 0,5-1 mm de dimetro. Las
cisternas o sculos presentan una forma curva concntrica, con una cara
convexa y otra cncava, se disponen en pilas paralelas separadas por 20 a 30
nm. Esta serie de sculos apilados conforman un dictiosoma.

En las clulas animales, el nmero de dictiosomas vara entre 3 y 7. El

Golgi est compuesto de una asociacin de dictiosomas. Los dictiosomas estn
polarizados. Tienen una cara cis (proximal o formadora), generalmente convexa y
cercana a la envoltura nuclear y al retculo endoplsmico, y una cara trans, (distal
o de maduracin), cncava, rodeando la regin que contiene vesculas grandes
que contienen el material procesado.

Forman tambin parte del Golgi, una serie de vesculas regularmente

esfricas que se forman a ambos lados de los extremos del Golgi, y entre los
sculos. En la cara cis se localizan las denominadas vesculas de transicin y en
la cara trans las vesculas de secrecin. Es frecuente encontrar la denominacin
con la sigla TGN, que significa red trans Golgi, al lugar donde emergen las

69
vesculas de secrecin. Es posible diferenciar tambin tbulos tanto en la cara
distal como en la cara proximal del Golgi. El Aparato de Golgi tiene la
caracterstica de ser un organelo muy dinmico dentro de la clula. Todas las
protenas que lo componen son transitorias, llegan al Golgi desde el retculo
endoplsmico y salen del Golgi con diversos destinos en la clula. Consta con
una enorme diversidad de protenas, ms de 1000 tipos distintos.

Los microtbulos asociados a protenas motoras constituyentes del

citoesqueleto mantienen la localizacin, la forma y, por tanto las funciones del
aparato de Golgi. En el curso de la mitosis, el Golgi se fragmenta en pequeas
vesculas que se diseminan por todo el citoplasma. Los microtbulos tambin
participan en el reciclaje de membranas hacia el RE y en el transporte de material
de secrecin de la red trans del Golgi.

El Aparato de Golgi realiza tres funciones principales, esenciales para el

crecimiento, la homeostasis y la divisin de la clula. Opera como proveedor de
carbohidratos en el procesamiento y modificacin de protenas y lpidos que se
mueven a travs de la va secretoria. Sirve de centro de transporte y
direccionamiento de protenas en la clula y recibe membranas desde el retculo
endoplsmico y las enva a la membrana plasmtica u otros sitios celulares. Acta
como andamiaje membranoso donde se anclan las protenas del citoesqueleto y
las sorteadas con distintas seales.

Los siguientes mecanismos transcurren en el Aparato de Golgi en las

clulas animales:

1. maduracin de las glicoprotenas provenientes de retculo.

2. intervencin en los procesos de secrecin, almacenamiento, transporte y
transferencia de glicoprotenas.
3. Formacin de membranas: membrana plasmtica, membrana del retculo
y la membrana de la envoltura nuclear.
4. Formacin de los lisosomas.

En el Golgi ocurren una serie de modificaciones postraduccionales

(modificaciones que ocurren luego que las protenas han sido sintetizadas),
procesos de empaquetamiento y distribucin de sustancias que ocurren en
determinadas cisternas:

70
 ERGIC (compartimiento intermedio Golgi- Retculo Endoplsmico) o VTC
(complejo Tubulo Vesicular) o compartimiento pre GOLGI intermedio. Corresponde
a un compartimiento que se encuentra entre el retculo endoplsmico rugoso y el
Golgi.

1. Cisterna cis o CNG.

Adicin de Grupos fosfato a las protenas destinadas a los lisosomas. Se
agregan en la cisterna cis del Golgi. Fosforilacin de las glicoprotenas
destinadas a los lisosomas, fosforilacin de la manosa del oligosacrido de las
protenas y remocin de manosa no fosforilada.

2. Cisterna media.
Sulfatacin de protenas, estos grupos sulfatos se agregan a residuos de
oligosacridos unidos las protenas, sulfatacin de residuos especficos de
tirosina. Sntesis de proteoglicanos. Los proteoglicanos corresponden a
glicoprotenas altamente glicosiladas.
Remocin de manosa, y se agregan residuos de N-acetilglucosamina al
oligosacrido.
Glicosilacin de protenas en residuos de treonina o serina, conformando los
grupos glicanos O-ligados a las glicoprotenas.

3. Cisterna trans y red trans Golgi o TNG.

Empaquetamiento, distribucin de las molculas en regiones de la cisterna
donde va a ocurrir la vesiculacin para el transporte de las sustancias,
dependiendo del destino de las protenas. Es la organizacin de las sustancias
para ser exportadas posteriormente en lugares especficos de la cisterna.
Remocin de galactosa y se agrega cido silico o N-acetilneuramnico (NANA).
procesamiento del oligosacrido N-unido termina con el agregado de los ltimos
cidos silicos.
Condensacin, prdida de agua necesaria para el empaquetamiento, esta
prdida de agua de las sustancias permite reducir el volumen para la exportacin
desde el Golgi.
Acumulacin de las protenas en regiones especficas de la cisterna, necesario
para el empaquetamiento.
Protelisis final, ejemplo protelisis especfica de proprotenas (ej., proinsulina).
Es el procesamiento de protenas que pasan a travs del Golgi, donde pierden
parte de la cadena polipeptdica para transformarse a la forma activa.

71
 Normalmente la parte de las protenas que son escindidas del producto final
corresponde a regiones donde se encuentran pptidos seales que han enviado
a la protena como preprotena hasta la cisterna donde es procesada. Ejemplo
de esto es la insulina. La insulina es transportada desde el retculo endoplsmico
rugoso como proinsulina al Golgi, y tiene como parte de la cadena polipeptdica
a un pptido C, adems del pptido A y pptido B. Este pptido C es escindido
de la cadena polipeptdica antes de abandonar el Golgi. La funcin de esta parte
de la cadena polipeptdica es asegurar el paso por el Golgi.
Distribucin especfica de los productos a travs del proceso de vesiculacin,
est dada por seales peptdicas principalmente que envan a las protenas en
distintos tipos de vesculas y de compartimientos endocticos (endosomas,
lisosomas, vacuolas).

En resumen.

Todas las cisternas participan en los procesos de vesiculacin: formacin de

pequeos cuerpos rodeados por membranas y que contienen sustancias que
van a ser transportadas dentro de la clula o hacia afuera de la clula.

Glicosilacin de protenas. En el Golgi ocurre la glicosilacin en los residuos de

aminocidos de la protena serina o treonina. Estos aminocidos contienen un
grupo hidroxilo al que se agregan cadenas de azcares a las protenas.

Vesiculacin o Trfico vesicular

Las etapas en un paso de transporte mediado por vesculas (trfico vesicular):

1. Clasificacin y acumulacin del material a ser transportado en el organelo,

debajo de la membrana.

2. Vesiculacin o yemacin, mediante el reclutamiento de protenas citoslicas

que recubrirn la vescula formada y facilitarn la formacin de la vescula. Estas
protenas citoslicas incluyen a protenas de la cubierta sea de clatrina o
coatmeros y a sus protenas adaptadoras.

72
3. Desprendimiento, escicin o liberacin de la vescula mediante la intervencin
de una protena: la dinamina y una vez libre la vescula de su organelo formador
de la vescula se liberan las protenas de la cubierta.

4. Direccionamiento / transporte de la vescula, a un destino especificado por las

protenas de direccionamiento.

5. Reconocimiento de la membrana de destino de la vescula, mediante protenas

integrales de membrana del complejo SNARE tanto en la vescula como en el
organelo blanco y fijacin de estos complejos con protenas solubles citoslicas
SNAP y NSF.

6. Fusin de las membranas de la vescula y de la membrana de destino y

liberacin del contenido del orgnulo al organelo blanco.

En la va secretora es posible diferenciar distintos tipos de vesculas,

como las que van del RE de transicin al Golgi y viceversa, entre las cisternas
del Golgi y dos tipos diferentes de secrecin celular: Un tipo de secrecin
constitutiva y otro tipo de secrecin regulada. Ambos tipos de secrecin se
diferencian porque la vescula puede vaciar su contenido en cuanto alcanza la
membrana celular al abandonar la cara trans del Golgi, y en este caso hablamos
de secrecin constitutiva o bien se almacena transitoriamente en el citosol cerca
de la membrana esperando una seal que indique que la vescula debe vaciar su
contenido al exterior, y en este caso hablamos de secrecin regulada. Este
ltimo caso podemos ejemplificarlo con la secrecin de insulina en las clulas
beta de los islotes de Lagerhans en el pncreas. Las vesculas que participan en
la secrecin constitutiva tienen cubierta de coatmero COP I, en tanto que las de
la secrecin regulada tienen cubierta de clatrina.

Sistema vacuolar.

Las distintas vesculas se pueden diferenciar por las cubiertas protecas

que llevan en el lado citoplasmtico. Hay tres tipos de vesiculas de acuerdo a la
cubierta proteca: vesculas con cubiertas de clatrina, vesculas recubiertas por
coatmero COP I y vesculas cubiertas por coatmero COP II.

73
Vesculas recubiertas de clatrina.

Aisladas por primera vez en oocitos del zancudo Aedes aegypti, las
vesculas con cubiertas de clatrina tienen un dimetro entre 50 y 100 nm, siendo el
elemento bsico la clatrina, protena heterodimrica formada por 3 cadenas
pesadas (1675 aminocidos, 180 Kda, codificada por el gen HC17) y tres livianas
(35-40 Kda), organizadas en una estructura denominada trisquelin. Existen dos
tipos de cadenas livianas, alfa y beta.

La sntesis de las subunidades que conforman la clatrina ocurre en el

citoplasma, en polisomas libres, es decir en la va citoplasmtica y luego se
organiza la clatrina a la forma de trisqueliones. Luego ocurre la polimerizacin de
clatrina para conformar los canastillos de clatrina alrededor de las yemas en
formacin que conformarn las vesculas. Este proceso ocurre en la cisternas
trans y red trans del Golgi y tambin en la cara citoslica de la membrana
plasmtica, por lo tanto las vesculas revestidas por clatrina participan en el
transporte de sustancias entre la red trans del Golgi a la membrana plasmtica, y
desde la membrana plasmtica en los procesos de endocitosis y tambin en la
formacin de lisosomas. La polimerizacin de la clatrina es dependiente de su
concentracin en el citoplasma, definindose as una concentracin crtica de
trisqueliones que hace posible la polimerizacin de estas unidades que forman la
cubierta o canastillo de clatrina. Las vesculas recubiertas por clatrina dan origen a
las vesculas que participan en la secrecin regulada por receptor.

Otros procesos donde se forma cubierta de clatrina son la endocitosis

mediada por receptor, la fagocitosis, la transcitosis y la pinocitosis.

Por qu no se autopolimeriza la clatrina en la clula?

En la clula la autopolimerizacin de la clatrina no es posible porque los

trisqueliones solubles estn asociados a una chaperona citoslica (hsp70), en un
mecanismo anlogo al de respuesta a las protenas mal plegadas del RER, por lo
tanto su polimerizacin siempre est asociado a la formacin de vesculas
intracelulares recubiertas. La clatrina se une a las membranas mediante unas
protenas denominados adaptadores o adaptinas, de las cuales las ms
importantes son las adaptinas AP, GGA. Las adaptinas AP tambin se les

74
denominan "Ratn Mickey", porque su estructura molecular se asemeja a la cara
de este personaje de Disney.

Entre la red de clatrina y la membrana de la vescula hay un espacio de

20 nm en el que se encuentran las partculas de protenas adaptadoras, de 350
Kda.

Se han descrito 4 complejos de adaptadores diferentes:

1) Los adaptadores que reconocen las regiones de membrana que contienen

receptores con la seal de transporte.
2) Los adaptadores que reconocen la carga a transportar, es decir el contenido
de la vescula.
3) Los adaptadores que reclutan los trisqueliones de clatrina.
4) Los adaptadores que reclutan las protenas auxiliares.

Vesculas recubiertas por coatmeros.

Las vesiculas con cubierta de coatmeros COP I y COP II dirigen el trfico

de protenas y membranas entre los compartimientos iniciales de la va secretoria.
Estas cubiertas protecas participan en la seleccin de las protenas a transportar
y deformar la membrana de la cisterna dadora, para formar yemas al inicio del
proceso y luego vesculas. Las vesculas cubiertas por la protena COP II salen del
retculo endoplsmico con destino a la red cis del Golgi.

Las vesculas con cubierta COP I, median la va retrgrada que recicla

selectivamente las protenas desde la cara cis del Golgi al retculo endoplsmico,
tambin de retorno entre cisternas vecinas del Golgi, participando en el traslado de
protenas y sustancias entre las cisternas del Golgi y mantienen la estructura
normal del complejo Golgi interfsico.

75
Proceso de vesiculacin.

Adems de las protenas de cubierta mencionadas anteriormente y las

molculas adaptadoras, tambin en el proceso de vesiculacin participan
pequeas molculas que unen GTP en el caso de la formacin del canastillo de
clatrina, que son necesarias para la formacin de la vescula revestida.

Formacin del canastillo o jaula de clatrina.

La formacin de la vescula con cubierta de clatrina a la forma de

canastillo o jaula est dirigida por partculas de ensamble que promueven la
polimerizacin de los trisqueliones dependiendo de la concentracin de estos en
el citoplasma una vez iniciada la yemacin. El contenido de protenas a
transportar tambin se acumula en este punto, donde se encuentran
mayormente concentradas. Una vez formada la vescula interviene la dinamina,
una protena citoslica que liga y cierra la vescula, liberndola definitivamente
de su sitio de formacin hidrolizando GTP a GDP.

Formacin de cubierta de coatmero COP I y COP II.

La formacin de la vescula COP I y COP II se inicia cuando una enzima

asociada al Golgi cataliza el intercambio de GDP por GTP en una protena en la
cara citoplasmtica del Golgi, ARF (ARF corresponde a un factor de ribosilacin
de ADP), iniciando la polimerizacin de los coatmeros COP I que a su vez
induce la yemacin de la vescula.

Sistema endoctico.

Cmo se orienta una vescula que contiene material a transportar

desde el sitio que se genera al sitio donde debe depositar su carga?

La opcin del destino de la vescula, especialmente en el sistema

endosoma-lisosoma est dado por pptido seales contenidos en los dominios
citoslicos de las protenas transmembrana. Como parte de estas seales estn

76
los voluminosos residuos hidrofbicos que contienen tirosina o leucina. Son
seales cortas, con arreglos lineales de aminocidos. No son conservadas, son
motivos degenerados donde 2 3 tienen importancia crtica en la funcin
desempeada. Las seales de direccionamiento de protenas en la va
endoctica permiten que desde la membrana plasmtica las protenas
permanezcan formando parte de ella o sean internalizadas en los endosomas,
que en la red trans Golgi viajen hasta la membrana plasmtica o a los
endosomas, o bien que desde los endosomas sean reciclados a la membrana
plasmtica o a los lisosomas. En estas decisiones de direccionamiento en la
clula participa tambin una maquinaria molecular que reconoce a aquellas
seales y libera las protenas a sus destinos tentativos.

Lisosomas

1. Generalidades.

Los lisosomas son organelos rodeados de membrana de alrededor de

250 a 500 m, su nombre se debe a que el organelo puede lisar es decir romper
o degradar productos dentro de la clula, como protenas, cidos nuclecos
(ADN, ARN), carbohidratos y lpidos. Su ruptura en una clula causara la
destruccin total de sta. Tienen una membrana que rodea al lisosoma y que
contiene una mezcla de enzimas hidrolticas que sirven como el principal
compartimiento degradativo para macromolculas dentro del sistema vacuolar.
Son el destino final de muchos materiales celulares endocticos, autofgicos y
secretorios marcados debidamente con una seal para su destruccin. La
degradacin en los lisosomas es crtica en muchos procesos fisiolgicos
incluyendo el recambio de protenas normales de la clula, los productos de la
degradacin de las protenas pueden ser reutilizados por la clula, la regulacin
en cadena de los receptores, la liberacin de los nutrientes endocitados, la
inactivacin de organismos patgenos y el procesamiento de antgenos. Los
lisosomas juegan un rol fundamental en la homeostasis de iones metlicos y en
la reparacin de membranas.

La identificacin de los lisosomas al microscopio basado en la apariencia

es difcil debido a la heterogeneidad de formas. La identificacin de los lisosomas

77
es ms precisa a travs de protenas integrales de membranas altamente
glicosiladas, denominadas Lamp (protenas de membrana asociada al lisosoma),
Limp (glicoprotena de lisosomas de rata de 35 a 50 kDa), Lgp (glicoprotenas
lisosmicas). Los lisosomas tienen la caracterstica del lumen cido, albergando
numerosas hidrolasas dependientes de un medio cido. El gran espectro de
enzimas degradativas contenidas en los lisosomas asegura la completa digestin
de los materiales liberados a los lisosomas.

En los lisosomas estn ausentes los receptores manosa fosfato catin

dependiente (cd) y catin independiente (ci) que los distingue del ltimo
compartimiento endosmico.

2. Formacin de lisosomas.

Los lisosomas se forman a partir del Golgi a travs de compartimientos

endosmicos. Hay dos modelos propuestos para la biognesis de los lisosomas,
uno es el modelo de maduracin de los lisosomas que implica la formacin de
endosomas tempranos por coalescencia de vesculas originadas en la
membrana plasmtica. La remocin de vesculas reciclables y la adicin de
vesculas de la red trans Golgi transforma estos endosomas en endosoma
tardos y eventualmente lisosomas.

El otro modelo de transporte vesicular propone que los endosomas

tempranos, los endosomas tardos y los lisosomas son compartimientos
estables. El transporte procede desde los endosomas tempranos a travs de
vesculas transportadoras de endosomas con caractersticas de un cuerpo
multivesicular, a endosomas tardos los cuales maduran a lisosomas.

Las interacciones entre endosomas tardos y lisosomas incluyen el

modelo "kiss and run", contacto transiente entre endosomas tardos y lisosomas.
Este modelo propone que los endosomas y los lisosomas sufren ciclos repetidos
de fusin y fisin permitiendo la transferencia de materiales y mantencin de los
lisosomas maduros. Una reciente variacin de este modelo propone la fusin de
endosomas tardos con lisosomas, dando origen a un organelo hbrido con una
subsecuente reformacin de los lisosomas.

78
 Vas de direccionamiento de protenas desde red Trans Golgi al
lisosoma. Las hidrolasas destinadas a los lisosomas llevan covalentemente unida
la marca de manosa-6-fosfato que se une a los receptores de manosa-6-fosfato
ubicados en la membrana de la red trans Golgi. El complejo hidrolasa-receptor
va incorporado a vesculas hasta los endosomas tempranos o tardos. Aqu en
los endosomas, las hidrolasas se disocian del receptor y son liberadas a los
lisosomas, mientras los receptores se reciclan de regreso a la red trans Golgi.
Otras vas independientes de manosa-6-fosfato existen aparentemente como
vas directas y son las de las protenas integrales del lisosoma, como las
protenas Lamp-1 (Lamp: protenas de membrana asociadas al lisosoma), que
van directamente desde la red trans Golgi al lisosoma o tambin como va
indirecta desde el Golgi a la membrana plasmtica y luego a los endosomas.

El direccionamiento de protenas de los receptores de manosa fosfato y

de las protenas lisosmicas es mediado por seales presentes en los dominios
citoplasmticos de estas protenas. Las seales son reconocidas por molculas
citoslicas que son reclutadas en las membranas en los sitios de formacin de
las vesculas como red trans Golgi, membrana plasmtica y endosomas. Las
molculas que reconocen las protenas a transportar son los complejos
adaptadores AP-1, AP-2, AP-3 y AP-4.

AP-1 juega un rol como reciclador de receptores de manosa-6-fosfato y

como mediador del transporte de receptores de manosa-6-fosfato y protenas
integrales de los lisosomas desde la red trans Golgi a los lisosomas.

AP-2 est implicado en una rpida internalizacin desde la membrana

plasmtica y probablemente participan en la endocitosis de los receptores de
manosa-6-fosfato y trfico de las protenas de las membranas lisosmicas a
travs de la va indirecta hasta los lisosomas.

AP-3 ha sido implicada principalmente en la biognesis de organelos

relacionados a los lisosomas y participara tambin en el direccionamiento de
protenas de algunas protenas de membrana lisosmica a los lisosomas desde
sitios intracelulares (red trans Golgi o endosomas).

AP-4 se localiza en la red trans Golgi y podra estar implicada en el

direccionamiento de protenas de molculas a los lisosomas, pero no hay

79
evidencias para confirmar esto. El complejo COP I media el direccionamiento de
protenas de protenas entre los endosomas tempranos y tardos. As los
complejos AP y COP I participan en el direccionamiento en la ruta a los
lisosomas, aunque todava no es muy claro cuales de estos complejos son
responsables primariamente del marcaje del volumen de protenas lisosmicas a
los lisosomas.

Otra familia de protenas de cubierta que facilitan el transporte de

protenas desde la red trans Golgi al sistema endosoma/lisosoma son las
protenas GGA, con tres miembros en los mamferos: GGA1, GGA2 y GGA3.
Esta protenas se localizan en las yemas y en las vesculas con cubiertas en el
rea de la red trans Golgi. El reclutamiento de las GGA a la red trans Golgi es
mediada por factores de ADP-ribosilacin de la familia de protenas ARF(que
significa factor de ribosilacin de ADP), en virtud de una interaccin directa entre
la regin GAT, una regin de unin de ligandos variable de las GGA y el GTP
unido a ARF. El dominio GAE en el carboxilo terminal de las GGA interacta con
gama-sinergina, una potencial molcula regulatoria. Algunas GGA tienen una
regin GAT que se une a la clatrina.

Rabs y SNARE implicadas en el transporte a los lisosomas.

Una vez que las vesculas transportadoras se forman con las protenas
cargo direccionados en el interior, las vesculas deben ser marcadas y
fusionadas a compartimientos aceptores. Una clase de protenas pequeas que
unen GTP, denominadas Rab, se localizan en la membrana plasmtica y en los
organelos de las vas secretoras y endocticas y funcionan en el transporte de
vesculas y en el proceso de anclaje y fusin. En la etapa de unin de GTP, las
protenas rabs unen las membranas y reclutan las molculas regulatorias y
efectoras del anclaje y fusin. Rab-7 y Rab-9 se localizan en la superficie de los
compartimientos endocticos tardos. Rab-7 se requiere para el transporte al
lisosoma y Rab-9 media el reciclaje de los receptores de manosa fosfato desde
el endosoma tardo a la red trans Golgi.

El marcaje y la fusin de membranas requieren tambin de las protenas

de membrana asociadas a vesculas VAMP/sinaptobrevina, sintaxina y familias
de protenas asociadas a sinaptosoma SNAP-25, de 25 kDa. Estas protenas son

80
denominadas en conjunto como receptores de protenas de anclaje (SNAP)
factor N-etilmaleimida sensibles (NSF) o SNARE. Sintaxina-7 y VAMP-7 median
la fusin heterotpica y homotpica que implican a los lisosomas. Sintaxina-8 se
encuentra en los endosomas, lisosomas y posiblemente en la red trans Golgi y
media el direccionamiento desde los endosomas tempranos a los endosomas
tardos. El grado en que estas u otras SNARE se requieren para el
direccionamiento de los lisosomas maduros es incierto. Las interacciones
funcionales entre las v-SNARE (SNARE de membrana de vesculas) y t-SNARE
(SNARE del organelo blanco) en mltiples vas de direccionamiento y entre las v-
SNARE o t-SNARE con varios otros sistemas sugiere la participacin de
efectores Rab y lpidos modificados.

Rutas para la liberacin de materiales desde la vacuola de la levadura.

Al menos seis vas estn implicadas en el trfico vacuolar de la levadura:

1. Endocitosis desde la superficie celular

2. Va del citoplasma a la vacuola
3. Autofagia
4. Herencia de vacuolas durante la divisin celular
5. Va de la carboxipeptidasa Y (CPY) desde el trans Golgi
6. Va de la fosfatasa alcalina (ALP) desde el trans Golgi

La endocitosis es esencial en la regulacin de los niveles de protenas de

membranas que funcionan como receptores y requiere de una comunicacin
regulada entre los mediadores endocticos y el citoesqueleto de actina.

3. Endosoma primario.

El sistema endosmico juega un importante rol en el procesamiento de

nutrientes derivados extracelularmente, en la regulacin de receptores activados
de la superficie celular, mantencin de la homeostasis de la membrana y defensa
contra patgenos. Los ligandos internalizados son vaciados al inicio a los
endosomas, donde ocurre una serie de eventos de clasificacin o
direccionamiento. Subsecuentemente, los ligandos o complejos ligando-receptor

81
son vaciados a los lisosomas para su degradacin o bien reciclados a la
membrana plasmtica o al Golgi.

4. Membrana del lisosoma.

La membrana limitante de los lisosomas est conformada por una familia

de protenas altamente glicosiladas cuya funcin sera mantener la estabilidad y
la integridad de la membrana del lisosoma, a estas protenas ms abundantes en
la membrana del lisosoma se les denomina protenas mayores de la membrana
del lisosoma, esta funcin es atribuda a la alta glicosilacin de estas protenas.
La superficie interna de la membrana limitante del lisosoma est completamente
tapizada por una capa de carbohidratos, generando un glucoclix continuo. El
principal rol de estas protenas, presentes en lisosomas y endosomas tardos, es
la proteccin de la membrana lisosmica de la degradacin de las hidrolasas
cidas que contiene el lisosoma. Los lisosomas contienen adems en sus
membranas un cido graso especial que no es atacado por las lipasas, es el
cido liso-bis-fosfatidico.

Adems la membrana del lisosoma participa en los procesos de

autofagia, en la fusin de membranas de organelos secretorios, en la biognesis
de lisosomas y endosomas e interaccin de las vesculas del sistema fusin-
fisin vesicular. En comn son protenas integrales de membrana que tienen
dominios altamente glicosilados al interior del lumen y un pequeo dominio
citoplasmtico de 10-11 aminocidos como Lamp-1, protena de membrana
asociada al lisosoma de 120 kDa. Lamp1 se encuentra distribuda en la
membrana de los endosomas tardos y los lisosomas. A veces tambin se ha
detectado en bajas concentraciones en la membrana plasmtica y en los
endosomas tempranos. Lamp1 se integra a los lisosomas a travs de la va
endoctica a partir del Golgi, el mecanismo de integracin al lisosoma es distinto
a la integracin de las protenas solubles que lo hacen a travs del receptor de
manosa-6-fosfato. En el caso de Lamp-1, y de las otras protenas de membrana
del lisosoma es a travs de la seal ubicada en el dominio citoplasmtico de la
protena, en el extremo carboxilo terminal y es separada en la cisterna trans del
Golgi de las dems protenas destinadas a otros compartimientos y de aqullas
lisosmicas solubles. Desde all son transportadas hasta los endosomas tardos
y enseguida a los lisosomas.

82
 La fusin de los lisosomas con la membrana de otros organelos es un
paso clave para la adquirir los materiales internalizados o biosintetizados a ser
degradados. Los lisosomas se fusionan con endosomas tardos y fagosomas
(fusin heterotpica, a la fusin que ocurre entre distintos organelos) y tambin
con otros lisosomas (fusin homotpica, fusin que ocurre entre dos organelos
iguales).

La membrana de los lisosomas est compuesta de fosfolpidos y

colesterol y una abundante cantidad de carbohidratos. Ms an algunas
protenas de membrana deben mediar la funcin de acidificar el lumen del
lisosoma como es la bomba de protones ubicada en la membrana del lisosoma.
Adems debes ser traslocados a travs de la membrana los aminocidos, cidos
grasos y carbohidratos productos de la actividad degradativa del lisosoma y los
nutrientes como la vitamina B12 y el colesterol.

Componentes menores en la membrana del lisosoma:

Los componentes menores de la membrana del lisosoma tienen roles tan

importantes como la mantencin del pH cido interno del lisosoma. Esta funcin
es desarrollada por una bomba de protones vacuolar que es una protn-ATPasa
tipo V ubicada en la membrana del lisosoma que usa la energa derivada de la
hidrlisis del ATP para impulsar la traslocacin de protones desde el citoplasma
al lumen lisosmico. La bomba de protones es un complejo proteco conformado
por 13 subunidades. Ocho de estas subunidades se encuentran en el lado
citoslico de la membrana del lisosoma y es responsable de la hidrlisis del ATP.
Cinco subunidades forman la parte integral del complejo y median la traslocacin
de protones. Este proceso es contra gradiente, por esto necesita del ATP. Las
personas que presentan una de las subunidades de la fraccin del complejo
encargada de la traslocacin de protones defectuosa, especficamente la
subunidad de 116 kDa, producto de una mutacin, desarrollan severas
osteopetrosis, por una inhibicin de la desmineralizacin en la matriz del hueso,
producida a raz de este defecto de una deficiente acidificacin de los lisosomas.

Otros componentes menores de la membrana del lisosoma son los

transportadores de aminocidos que transladan los aminocidos resultantes de
la degradacin de protenas que tiene lugar en el lisosoma al citoplasma, para

83
ser usados en la sntesis de protenas. Uno de estos transportadores es el
transportador de cistena. El transportador defectuoso producto de mutacin del
gen CTNS que codifica al receptor de cistena, causa cistinosis que afecta la
funcin renal. Otro transportador identificado es el transportador de lisina.

Los transportadores de monosacridos envan al citoplasma los

monosacridos resultantes de la degradacin de oligosacridos en el lisosoma,
como el transportador de cido silico denominado sialina. Una mutacin en el
gen AST que codifica la sialina, produce la enfermedad de Salla.

Un posible transportador de nucletidos es la protena LAPPTM4 alfa.

Un transportador de colesterol, codificado por el gen NPC-1, cuya

mutacin causa el sndrome de Niemann- Pick tipo C.

Un transportador de vesculas sinpticas en las neuronas y sensor del

pH cido del lisosoma, codificado por el gen CLN3, cuya mutacin causa la
lipofuscinosis ceroide neuronal o enfermedad de Batten.

Un transportador de hierro, NRAMP2, asociado a transferrina.

Algunas protenas de membrana del lisosoma estn implicadas en

funciones enzimticas como LALP70 implicada en el metabolismo de los
nucletidos di- y trifosfato. LAP es una fosfatasa cida implicada en
desfosforilacin. La enzima acetil Co A: alfa glucosamida N-acetil transferasa,
responsable de la transferencia de los grupos acetilos al heparan sulfato. Una
mutacin en el gen de esta enzima causa la enfermedad de San Filippo Tipo C
(MPS III C), esta en una enfermedad de almacenamiento lisosmico en los
cuales el heparan sulfato no digerido y la heparina se acumulan en los
lisosomas.

Bomba de Protones.

La bomba de protones dependientes de ATP de endosomas tardos y

lisosomas corresponde a ATPasas que son responsables de la acidificacin de
estos compartimientos. La acidificacin de los compartimientos vacuolares juega

84
un rol importante en una variedad de procesos de trfico de membrana como la
endocitosis mediada por receptor, la acidificacin de endosomas que sirve como
una seal que activa la liberacin de los ligandos internalizados de sus
respectivos receptores, como ocurre en las lipoprotenas de baja densidad (LDL)
o insulina. Este desacoplamiento permite que los receptores ocupados ya
liberados de sus ligandos reciclen a la superficie celular donde pueden ser
reutilizados, mientras que los ligandos pueden ser marcados con destino a los
lisosomas para ser degradados.

La acidificacin de los endosomas es requerida tambin para la

formacin de vesculas transportadoras de endosoma que estn implicados en el
movimiento de ligandos en la va endoctica, y tambin favorece la fusin de
membranas endosmicas y envoltura del virus de la influenza, en este ltimo
caso provoca la infeccin viral.

En el marcaje intracelular de enzimas lisosmicas recientemente

sintetizadas, la acidificacin vacuolar juega un rol similar al de la endocitosis. En
este caso, las enzimas lisosmicas unidas al receptor manosa-6-fosfato son
liberadas al ltimo compartimiento de reciclaje (endodoma tardo) donde el pH
cido causa la disociacin, receptor manosa-6-fosfato-ligando (donde el ligando
es una protena con la marca manosa-6-fosfato), permitiendo que los receptores
reciclen al trans Golgi y a las enzimas ser dirigidas a los lisosomas. En los
lisosomas y en la vacuola de las levaduras el pH interno cido permite la
activacin de las hidrolasas cidas implicadas en la degradacin de
macromolculas.

El pH cido es generado por bomba de protones que tienen dos

dominios funcionales, el dominio citoplasmtico V1 de 570 kDa y el dominio de
membrana V0 de 260 kDa. El dominio citoplasmtico es el responsable de la
unin del nucletido, ATP, y de la actividad cataltica. Este dominio est
compuesto por 9 subunidades diferentes, 2 de las cuales, con tres molculas
cada una forma un hexmero, responsable de la hidrlisis y unin del ATP, las
restantes participan en la activacin y ensamble de este dominio para conformar
la molcula completa, que en su forma general se asemeja tanto en estructura y
conformacin de las subunidades a las partculas F de la membrana interna de la
mitocondria, al estar conformada por una base anclada a la membrana, un
pednculo y una cabeza rotatoria. El dominio V0 de la ATPasa del sistema

85
endoctico, participa de la traslocacin del protn a travs de la membrana. Este
dominio consta de protenas altamente hidrofbicas, denominadas proteolpidos,
cuya rotacin permite la entrada del protn. Adems, es posible que en este
dominio se puedan formar canales de agua que permiten a los protones tener
acceso a grupos carboxilos escondidos de los proteolpidos.

5. Funciones de los lisosomas.

Los lisosomas contienen numerosas enzimas que cumplen funciones

degradativas, algunas de estas son:

- Nucleasas: degradan cidos nucleicos, rompen enlace fosfodister.

- Proteasas: degradan protenas, rompen enlace peptdico.
- Lipasas: degradan lpidos.
- Glucosidasas: degradan carbohidratos.

Exocitosis y endocitosis

Autofagia.

La autofagia es un complejo proceso celular que implica rearreglos

dinmicos de membrana en condiciones fisiolgicas. Luego de la induccin de la
autofagia, en condiciones de hambruna, el citoplasma es secuestrado en
vesculas y vaciado a organelos de degradacin, el lisosoma en mamferos y la
vacuola en la levadura. El proceso es nico y convierte el material intracelular en
uno extracelular. Constituye un proceso de adaptacin a condiciones
ambientales diferentes. Cuando en condiciones experimentales se cultivan
clulas sin los nutrientes adecuados a su sobrevivencia, en el citoplasma se
forman rpidamente vacuolas o vesculas en el citosol conteniendo un gran
volumen de protenas y organelos. Estas vesculas se denominan
autofagosomas y tienen corta vida media, de alrededor de minutos, antes que las
hidrolasas lisosmicas inicien la degradacin del contenido de macromolculas,
permitiendo la liberacin de unidades monomricas desde el lumen lisosmico al
citosol. Esta forma de autofagia se denomina macroautofagia. La membrana del
autofagosoma se caracteriza por una relativa ausencia de protenas

86
transmembrana, lo que la hace una vescula transportada al lisosoma, destinada
a la degradacin hidroltica del lisosoma. La autofagia inducida por hambruna no
es selectiva ya que tiene el propsito de generar bloques de construccin
necesarios para que la clula pueda sobrevivir a la inanicin. En los mamferos el
hgado, que es un rgano muy noble, tiene una alta capacidad de autofagia, lo
que permite en condiciones de hambruna suministrar bloques de construccin
molecular durante hambrunas.

La autofagia, junto con el proteasoma son los dos mecanismos

degradativos que permiten la degradacin de protenas, siendo la autofagia el
principal mecanismo para la degradacin de protenas de larga vida, y el nico
mecanismo para el recambio de organelos, incluyendo mitocondrias y
peroxisomas, que ocurre cuando estos organelos estn en desuso o funcionan
mal. La membrana que rodea a organelos en desuso proviene del retculo
endoplsmico liso.

La perixofagia es otra forma de autofagia, destinada exclusivamente a

la degradacin de peroxisomas. Se ha descrito la macropexofagia y la
micropexofagia dependiendo si el peroxisoma es englobado completamente o
parcialmente.

Fagocitosis.

Rutas endocticas en mamferos. Johannes y Lamaze (2002) han

propuesto 5 rutas en mamiferos.

Macropinocitosis es una respuesta transitoria a factores de crecimiento y

agentes mitgenos (que promueven o estimulan la mitosis) que contribuye a
la incorporacin de la fase fluda a travs de la formacin de grandes
vesculas de tamao heterogeneo. Los macropinosomas corresponden a
estructuras grandes heterogeneas, vesiculares, dinmicas de rango 0,5-2
micrmetros.
La macropinocitosis puede ocurrir en forma constitutiva en algunas lneas
celulares. Contribuye a la incorporacin de antgenos y marcaje de clulas
que presentan antgenos. La formacin de macropinosomas sigue al
plegamiento de la membrana plasmtica, y conduce a la internalizacin

87
 masiva de membrana desde la superficie celular y es probable que sea
regulada por vas de reciclaje en la endocitosis. Probablemente en la
activacin de este proceso participa ARF6-GTPasa.
Endocitosis asociada a clatrina, es la formacin de fositas o depresiones
en la superficie de la membrana plasmtica que en la cara citoplasmtica
est recubierta de clatrina formando un canastillo que da soporte a la fosita o
depresin. Se forman vesculas del rango de 120 nm.
Invaginaciones sin cubierta proteca, se hunden para formar vesculas
lisas que comnmente se observan a la microscopa convencional en
diversas clulas y participan en la incorporacin de la fase fluda a la clula.
Balsas lipdicas (lipid rafts), son conjuntos de lpidos en las membranas
ricos en colesterol que son capaces de invaginarse formando vesculas de
muy pequeo tamao a travs de cual ingresan sustancias a las clulas.
Caveolas son vesculas no originadas por endocitosis que ingresan
sustancias a la clula por un proceso no mediado por clatrina.

Endocitosis y Pinocitosis.

- Endocitosis mediada por clatrina

- Endocitosis mediada por receptor
- Caveolas y caveosomas

Las caveolas son depresiones planas de superficie lisa de 50-80 nm de

dimetro que cubren la superficie de clulas de diferentes tejidos, cubriendo
hasta el 35 % de la superficie celular. Las caveolas son estructuras estacionarias
y permanecen en el lugar debido a que son sustentadas por citoesqueleto
cortical de actina subyacente a la membrana plasmtica. Slo luego de algunas
seales especficas se desprenden de la membrana como vescula endoctica.
Las caveolas son abundantes en adipocitos, endotelio, msculo, pero no se han
detectado en linfocitos y algunas clulas nerviosas, su forma vara dependiendo
de la clula donde se encuentren. Participan en los procesos endocticos
constitutivos aparentemente y se caracterizan por la presencia de caveolina-1,
denominada tambin VP21, una protena integral de membrana que consta de
33 aminocidos que forman un dominio central hidrofbico, que forma un loop o
vuelta en la capa bilipdica de la membrana, flanqueado por dominios
citoplasmticos expuestos N- o C-terminales. Esta protena une colesterol y

88
cidos grasos y es palmitoilada (une cido palmtico, un cido graso de 16
carbones) en su extremo C terminal y forma oligmeros de alto peso molecular.
Se cree que esta propiedad es importante para la formacin de las caveolas pero
el mecanismo exacto no es conocido an. El ingreso de las sustancias a travs
de caveolas desembocan en caveosomas, y desde el caveosoma pueden
ingresar al Golgi o al Retculo endoplsmico o al ncleo. No est claro si estas
sustancias pueden volver a la membrana plasmtica o a endosomas.

En la formacin de la vescula que va al interior de la clula, o

caveosoma, participa la dinamina, una GTPasa que tambin participa en la
formacin de las vesculas endocticas con cubierta de clatrina, unindose al
cuello de la caveola. La dinamina une los extremos de la depresin y cierra la
vescula, formando el caveosoma. En este proceso, estudiado en el ingreso del
virus SV40 ("simian virus"), que gatilla una cascada de seales que induce a la
fosforilacin de tirosin quinasas lo que produce en las caveolas unidas a actina
del citoesqueleto, se depolimerice la actina transitoriamente, reclutndose los
monmeros de actina alrededor de la caveola que transporta el virus, formando
un parche de actina. Concomitantemente la dinamina es reclutada en la caveola
que transporta el virus producindose una explosiva polimerizacin de actina en
el parche de actina. La vescula cargada con el virus se desprende de la
membrana plasmtica y se puede mover al citosol. Luego de la internalizacin, el
citoesqueleto de actina vuelve a su posicin normal.

El caveosoma es un compartimiento interno preexistente de pH neutro,

no degradativo, que contiene caveolina en la membrana plasmtica y esta es rica
en colesterol y glicoesfingolpidos. Participan en la internalizacin de
componentes de membrana como glicoesfingolpidos, protenas con anclaje GPI,
ligandos extracelulares como cido flico, albmina, toxinas bacterianas (clera,
ttanos). Los caveosomas son estructuras tubovesiculares, heterogeneas en
tamao y forma y las partculas virales aparecen como porotos en una vaina,
como se ha visualizado a la microscopa electrnica. Durante la acumulacin de
partculas virales se hacen muy dinmicos, desprendindose desde el
caveosoma extensiones tubulares ms grandes cuyas membranas carecen de
caveolina 1. Estas vesculas son transportadas a lo largo de microtbulos hasta
el retculo endoplasmtico.

89
 Cabe sealar que la caveolina est presente adems en caveosomas,
membrana plasmtica y TGN (del ingls, red Trans Golgi).

En resumen, la funcin de las caveolas en la clula es mantener la

homeostasis de colesterol, reciclaje de las protenas con anclaje GPI, transporte
de glicoesfingolpidos, transcitosis de componentes del plasma sanguineo
(albmina).

La transcitosis es el paso de las sustancias a travs de vesiculacin en

las clulas epiteliales o endoteliales desde la superficie apical de la clula a la
regin basal, o viceversa, como ejemplo adicional se puede citar el paso de
inmunoglobulina G a travs del epitelio mamario desde el plasma sanguneo a la
leche materna.

Balsas lipdicas ("lipid rafts").

Son regiones de la superficie celular organizados como microdominios

basados en lpidos que participan en procesos endocticos independientes de
dinamina. Las balsas lipdicas de la membrana plasmtica son consideradas
como islas altamente ordenadas de colesterol y lpidos saturados, son mviles
lateralmente en el plano de la bicapa desordenada ms fluda de lpidos no
saturados. Las balsas lipdicas son relativamente resistentes a la accin de
detergentes no inicos que solubilizan las regiones lipdicas adyacentes a las
balsas. En las balsas se incluyen protenas con anclaje GPI, glicerol
fosfofinositol, a aquellas protenas con doble grupo acilo como tirosn quinasa,
las de la familia Src, y subunidades de las protenas G, tambin protenas
palmotoiladas y asociadas a colesterol como caveolinas. Algunas protenas
pueden asociarse en forma regulada a las balsas lipdicas como las protenas H-
ras. La endocitosis mediada por balsas, es una va micropinoctica especfica
para protenas con anclaje GPI, es un proceso independiente de caveolina 1,
caracterstico de las caveolas, por lo tanto es un ingreso a la clula
independiente de caveolas, independiente de dinamina y de clatrina.

Se les ha definido como conjuntos dinmicos de colesterol y

glicoesfingolpidos que estn presentes en el plano lateral de las membranas,
tienen importancia en el transporte lateral de membranas. Se ha demostrado

90
experimentalmente que el colesterol y los esfingolpidos pueden organizarse en
dominios de fase lquida ordenada separados. Estos microdominios se
estabilizan a travs de interacciones con el citoesqueleto y pueden agregarse
entre ellos para formar plataformas mayores en respuesta a variados estmulos.
Dada su naturaleza, existe la posibilidad del transporte endoctico de sustancias
especficas al interior de la clula, de hecho hay transporte, pero este no ha sido
comprobado experimentalmente. Mutaciones de genes implicados en la
biosntesis de esteroides o ceramidas bloquean totalmente la incorporacin
endoctica.

Exocitosis, ectocitosis. Ambos procesos implican la salida de

sustancias desde la clula, y regulan la composicin proteca de la membrana.
En ambos procesos es posible que se liberen vesculas. En el proceso de
exocitosis, se liberan exosomas, e tanto que en la ectocitosis, ectosomas.

Exosomas y ectosomas. Ectocitosis lleva a la formacin de

ectosomas, tambin denominados micropartculas. Estas vesculas generadas
por yemacin desde la clula hacia el exterior y posterior desprendimiento de la
vescula. Los exosomas son vesculas generadas por proceso endoctico que
genera vesculas que se acumulan dentro de cuerpos multivesiculares (MVB) y
son liberados por exocitosis. Exosomas y ectosomas difieren en tamao y
composicin. La mayora de las clulas produce exosomas y ectosomas, excepto
los eritrocitos que producen slo ectosomas en condiciones de estrs. En la
formacin de los eritrocitos, sin embargo, la prdida de los receptores de
transferrina ocurre por exocitosis. Otro ejemplo de liberacin de ectosomas
ocurre en los condrocitos que liberan continuamente ectosomas cargados con
anexina I, que induce la precipitacin del calcio y formacin de hueso.

Retrmero.

El retrmero es un complejo proteco que participa en la va de

recuperacin de receptores desde el sistema endoctico al TGN. Se ha
demostrado su participacin en la recuperacin de un tipo de MPR (CI-MPR:
receptor de manosa fosfato catin independiente). El retrmero se encuentra
presente en endosomas tempranos y de maduracin intermedia entre endosoma
temprano y tardo, principalmente. El retrmero impide la liberacin de los

91
receptores a los lisosomas. El retrmero es un complejo heteropentamrico tanto
en levaduras como en mamferos. En levaduras est formado por Vps5p,
Vps17p, Vps26p, Vps29p, Vps35p. La subunidad Vps35p reconoce un dominio
citoslico de Vps10p, que es equivalente de MPR de mamferos, y forma un
subcomplejo estable con Vps29p. Vps5p y Vps17p unen PIP (fosfoinositol
fosfato). Estos dominios tienden a oligomerizar y por lo tanto sirven como
andamio para el ensamble de posibles cubiertas de membrana que conducen a
la formacin de vesculas. Vps26 se ha propuesto que promueve el ensamble de
carga selectiva del subcomplejo Vps35p-Vps29p con el subcomplejo estructural
Vps5p-Vps17p. En los mamferos las subunidades se denominan hVps26p,
hVps29p, hVps35p y dos homologos de Vps5p de la levadura que son las
nexinas de direccionamiento o clasificacin 1 y 2 (Snx1, Snx2).

La unin del retrmero al receptor de manosa 6 fosfato (MPR) se

produce en TGN en mamferos o en su equivalente en la levadura el Golgi
Tardo. El dominio citoslico de MPR en el Golgi, contiene seales agrupadas de
dileucina en el carboxilo terminal, protenas que unen ARF que contiene orejas
gama y AP1. Estas interacciones cooperan al empaquetamiento de los
complejos MPR-hidrolasas en vesculas con cubierta de clatrina que yeman
desde TGN y llevan los complejos hasta endosomas tempranos o ms
avanzados. En la levadura los complejos MPR-hidrolasa se disocian por causa
del pH cido de los endosomas, luego de lo cual las hidrolasas son
transportadas junto con la fase fluda al lumen del lisosoma mientras que los
MPR reciclan al TGN. En mamferos la subunidad hVps35 reconoce el dominio
citoslico de CIMPR, que no corresponde a la seal YSKV que es la seal
implicada en la endocitosis, ni la seal de agrupamiento o cluster de dileucina,
responsable del direccionamiento del receptor del TGN al endosoma. La funcin
del retrmero es extraer los MPR desocupados desde vescula intraluminales en
endosomas a travs de la captura de un compartimiento tubular de reciclamiento.
En el reconocimiento de membranas altamente curvadas participan las
sintaxinas del retrmero.

Proyecto Genoma Humano y la va secretora

Las investigaciones realizadas con vistas a dilucidar la ubicacin e

identificacin de los genes en la especie humana han logrado esclarecer la

92
participacin de 103 genes en la va secretoria:
- 7 genes participan en la glicosilacin
- 10 genes participan en el metabolismo de lipidilinositol
- 17 genes en la glicosilacin primaria en el retculo plasmtico
- 10 genes en el plegamiento de las protenas
- 6 genes en la degradacin de protenas
- 11 genes en el transporte RE- Golgi
- 5 genes en el transporte retrgrado o inverso Golgi- RE
- 6 genes en la glicosilacin en la cisterna media del Golgi
- 4 genes en la vesiculacin
- 7 genes en la secrecin
- 11 genes en la formacin de membranas

Aplicacin al rea de la salud

1. Enfermedad de Parkinson (PD), un ejemplo de una patologa

conformacional.

La enfermedad de Parkinson, junto con la enfermedad de Alzheimer,

encefalopatas producidas por priones, pertenecen a las denominadas
enfermedades conformacionales (por conformacin o disposicin espacial
defectuosa de una protena), y demuestran una clara evidencia de la relacin entre
la funcionalidad coordinada del retculo endoplsmico y del UPS (sigla traducida
del ingls que significa sistema ubiquitn-proteasoma). Este ltimo sistema
probablemente no est funcionando bien, es decir, la degradacin de protenas
marcadas con ubiquitinas mediada por este sistema sera poco eficiente,
acumulandose protenas en la clula que con el tiempo conllevara a la muerte
celular. La funcionalidad de UPS en estado normal se evidencia por una eficiente
degradacin de las protenas. En estas patologas, a travs de los aos, se van
acumulando selectivamente sustratos debido al estrs oxidativo, desregulacin
transcripcional, acumulacin de protenas txicas, induccin a la apoptosis debido
al estrs del retculo endoplsmico, finalmente agregacin de protenas
(denominados agregasomas, cuerpos que son producto de la acumulacin de
protenas), causas por las cuales se produce la muerte celular.

93
 La enfermedad de Parkinson, es una enfermedad neurolgica que se
manifiesta principalmente en adultos mayores que no se puede detener, controlar,
ni prevenir, slo los sntomas pueden ser reducidos mediante el uso de frmacos u
otro.

Una de las manifestaciones de la enfermedad a nivel celular es la

acumulacin de protenas (alfa sinucleina en la enfermedad de Parkinson) a nivel
de la neurona, lo que tambin es caracterstico de la enfermedad de Huntington
(donde se acumula huntingtina), y de la enfermedad de Alzheimer (donde hay
acumulacin de beta-amiloide).

Investigaciones de los ltimos 5 a 10 aos han demostrado que estas

acumulaciones de protenas en el caso del Parkinson se deben a mutaciones del
gen de la protena, que afectan el correcto plegamiento, y adems por la
naturaleza hidrofbica de la protena, esta tendera a formar acmulos
(agregasomas), favorecido por modificaciones posttraduccionales de la protena
como glicosilacin, nitracin y fosforilacin. En el caso de PD las mutaciones
producidas en el gen pueden afectar la secuencia primaria de la protena a causa
de delecin, sustitucin, adicin o duplicaciones internas en el gen; puede ocurrir
tambin duplicacin del gen normal completo, lo que produce una sobreexpresin
del gen. La alta concentracin de la protena tambin favorecera la formacin de
agregasomas.

Otra forma por la cual se manifiesta la enfermedad es por alteracin de

genes responsables de la ubiquitinacin, aunque en el caso de mutaciones en el
gen parkin, que produce la protena parkina, no se acumula como agregasomas.
La parkina tiene actividad de ubiquitn ligasa, es decir es responsable de catalizar
la formacin de la unin de molculas de ubiquitina a las protenas que van a ser
degradadas por el proteasoma en el citoplasma.

Recientes ensayos in vitro han demostrado que al incentivar la accin de

chaperonas (HSP70), mediante el uso de frmacos es posible disminuir el tamao
de los agregasomas.

Hay otras formas de Parkinson a nivel gentico pero las mencionadas

arriba tienen directa relacin con la va secretoria.

94
2. Enfermedades producidas por defectos enzimticos en los lisosomas.

Estas enfermedades corresponden a defectos en las enzimas contenidas

en los lisosomas y que producen acumulacin de sustancias en la clula que son
nocivas a la homeostasis celular. Casi todas estas enfermedades son causadas
por defectos genticos recesivos, es decir quienes manifiestan la enfermedad
son homocigotos recesivos en este locus. Entre estas enfermedades se pueden
mencionar Mucopolisacaridosis I (MPS I), enfermedad de Pompe, enfermedad
de Gaucher, entre otras.

La mucopolisacaridosis I es causada por un gen recesivo que codifica la

enzima alfa-L-iduronidasa. Las mutaciones causan ausencia de la enzima o una
enzima defectuosa. Esto da por resultado la acumulacin progresiva de
glicosaminoglicanos (GAG) en el lisosoma que causa en el tiempo la destruccin
por dao irreversible de las clulas y por ende del rgano afectado.

La enfermedad de Pompe es una enfermedad debilitante en adultos y en

nios que manifiestan debilidad muscular y dificultades respiratorias, por prdida
de fuerza del diafragma. La causa de la enfermedad reside en una enzima la alfa
glucosidasa cida deficiente. Esta enzima es la responsable de degradar el
exceso de glucgeno en el lisosoma, resultando por tanto la acumulacin de
glucgeno que interfiere con el funcionamiento del msculo.

La enfermedad de Gaucher es una enfermedad recesiva autosmica

desencadenada por la presencia de dos alelos mutados del gen de la
glucocerebrosidasa, localizado en el brazo largo del cromosoma 1, en la regin
21. Se han identificado a la fecha ms de 100 alelos que al estado homocigoto
causan la enfermedad debido a una disminucin de la actividad cataltica de la
enzima total o parcialmente o bien reducen su estabilidad o vida media. En
individuos normales la glucocerebrosidasa degrada glucocerebrsido, un
glucolpido proveniente de las membranas celulares de los leucocitos y eritrocitos
envejecidos dentro de los lisosomas de las lneas de los monocitos/ macrfagos.
En individuos con esta enfermedad se produce gran acumulacin de
glucocerebrsido dentro de los monocitos/macrfagos, estas se conocen como
clulas de Gaucher que muestran un citoplasma con aspecto de papel arrugado
debido a las fibrillas y depsitos acordonados de glucocerebrsido. Estas clulas
se acumulan progresivamente en hgado, bazo y mdula sea.

95
 Las mutaciones ms comunes corresponden a mutaciones de punto que
afectan la actividad enzimtica, estas son designadas como N370S y L144P.
Otras dos mutaciones de mayor envergadura no producen la enzima. Esta
enfermedad tiene graves consecuencias neurolgicas. Existen al menos 3 tipos
sobre la base de su severidad neurolgica. El tipo 1: no implica al sistema
nervioso central, el tipo 2 y 3 implica al sistema nervioso central de forma aguda
el primero y subaguda el segundo respectivamente. Estas son enfermedades
multisistmicas, es decir afectan a varios rganos a la vez. Uno de los ms
afectados es el hgado que aumenta varias veces su volumen causando una
hepatomegalia.

3. Fibrosis qustica o fibrosis cstica.

La fibrosis qustica es una enfermedad hereditaria codificada por un

locus ubicado en el brazo largo del cromosoma 7. Su manifestacin ocurre en
individuos que son homocigotos para el alelo recesivo que produce la
enfermedad. La manifestacin fenotpica corresponde a la alteracin de la forma
de un canal de cloruros. Es una protena defectuosa que no cumple con la
funcin. Las mutaciones en el gen que produce la fibrosis qustica pueden ser de
varios tipos. Se han descrito al menos una veintena de mutaciones agrupadas en
4 clases que implican a productos defectuosos que son degradados en la clula
antes de alcanzar la membrana plasmtica (Tabla 2, Figura 3).

El canal tiene distintos dominios que conforman el poro, dos dominios

que fijan ATP y el dominio regulador, que es una especie de tapn que se
articula por un brazo y abre o cierra el poro. Las mutaciones por lo tanto
bloquean el paso de cloruros desde el interior de la clula epitelial al exterior. Los
canales de cloruro se encuentran en forma normal en la cara apical de la clula
epitelial.

96
Tabla 2. Mutaciones recesivas que producen fibrosis qustica. (Welsh MJ & AE
Smith. 1993. Molecular mechanisms of CFTR chloride channel dysfunction in
cystic fibrosis. Cell 73 (7): 1251-1254.).

Clases de Defecto Ejemplo Dominio Aspectos

Mutacin afectado en clnicos
la protena
I Produccin de protena G542X NBD1 Insuficiencia
defectuosa causada por pancretica
mutaciones sin sentido y 3905InsT NBD2
corrimiento marco de
lectura 621+G-T
MSD1
II Procesamiento o DI507 NBD1 Insuficiencia
maduracin de la DF508 (*) NBD1 pancretica
protena en la va N1303K NBD2
secretora
III Regulacin del G551D NBD1 Insuficiencia
transporte de cloruros. G1244E NBD2 pancretica
Falta de reconocimiento
de nucletidos
IV Conduccin defectuosa R117H (**) MSD1 Suficiencia
del cloruro pancretica
NBD: dominio que une nucletidos
MSD: dominio de la protena que atraviesa la membrana
D: (delta): letra griega que indica delecin, es decir mutacin que causa la ausencia de
uno o varios desoxinucletidos en la secuencia de ADN
(*) causa un procesamiento defectuoso y tambin afecta la regulacin del canal de sodio.
Esta es la mutacin ms frecuente
(**) causa una conduccin defectuosa y disminucin del tiempo que el canal se mantiene
abierto

97
Figura 3. Modelo propuesto para explicar el camino que sigue en la clula la formacin de
un canal de cloruros y la forma como se manifiestan las mutaciones.
Modificado de Welsh MJ & AE Smith. 1993. Molecular mechanisms of CFTR chloride
channel dysfunction in cystic fibrosis. Cell 73 (7): 1251-1254.(Con permiso de la editorial)*.

*Agradecimientos: Agradecemos a los autores y a la editorial la facilitacin de las

figuras en este captulo.

98
Bibliografa:

Herbert, DN, Garman, SC, Molinari, M. 2005. The glycan code of the
endoplasmic reticulum: asparagine-linked carbohydrates as protein maturation
and quality-control tags. Trends in Cell Biology 15(7):364-370.

Johannes y Lamaze (2002). Clatrin-dependent or not: Is it still the question?

Traffic. 3:443-451.

Rmisch, K. 2005. Endoplasmic Reticulum-associated degradation. Annu Rev

Cell Dev. Biol. 21: 435-456.

Welsh MJ & AE Smith. 1993. Molecular mechanisms of CFTR chloride channel

dysfunction in cystic fibrosis. Cell 73 (7): 1251-1254.

99
100
 CAPTULO III
ARMAZN CELULAR Y ORGANELOS: CITOESQUELETO, MITOCONDRIA,
PEROXISOMAS Y NCLEO

Fidelina Gonzlez, Gabriela Sconzo, Giussepina Turturici, Fabiana Geraci, Giovanni Giudice
Depto Biologa Celular. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile.
Dipartamento di Biologia Cellulare e dello Sviluppo. Universit di Palermo. Palermo. Italia.

1. Citoesqueleto, organizacin para la arquitectura y los movimientos de la

clula.
1. Microtbulos.
2. Centrosoma.
3. Filamentos intermedios.
4. Microfilamentos.
5. Protenas motoras asociadas.

2. Mitocondria, organizacin para la produccin de energa y participacin en la

herencia.
1. Compartimentos mitocondriales, localizacin de funciones
mitocondriales.
2. Transporte de protenas de la mitocondria codificadas en el ncleo.
3. Origen de los fosfolpidos en las membranas de la mitocondria.
4. ADN y genes mitocondriales.

3. Peroxisomas, organizacin para la destoxificacin celular, metabolismo de

lpidos y de hormonas esferoidales.
1. Biognesis de los peroxisomas y transporte de las protenas
peroxisomales.
2. Funciones de los peroxisomas: Metabolismo y Destoxificacin.

4. Ncleo, organizacin para el almacenamiento y procesamiento de la

informacin gentica.
1. Envoltura y poros nucleares.
2. Lmina nuclear.
3. Cromatina y cromosomas.
4. Compartimientos nucleares y funcin en el procesamiento de la
informacin gentica.

101
5. Enfermedades producidas por mutaciones en protenas que conforman el
citoesqueleto.

6. Enfermedades producidas por mutaciones mitocondriales.

7. Enfermedades producidas por defectos en los peroxisomas,

peroxisomopatas: Enfermedad de Zellwegger.

8. Laminopatas.

102
 Citoesqueleto

Citoesqueleto organizacin para la arquitectura y los movimientos de la

clula.

Es una estructura celular dinmica que est compuesta por filamentos y

microtbulos que se extienden por todo el citoplasma. Cumple diversas funciones
en la clula entre las cuales est el mantener la forma celular, regular la posicin
de los organelos, dirigir y ejecutar el movimiento celular y el control
transmembrana de la clula, el transporte intracelular, la endocitosis y fagocitosis,
la direccin de crecimiento de la neurona, el desarrollo de la capilaridad, la
migracin de los leucocitos, la quimiotaxis celular, la migracin de fibroblastos en
cicatrizacin de heridas, la mecanosensibilidad del odo interno, la morfognesis
de embriones, la invasin y la metstasis de clulas cancerosas y el movimiento
intracelular de bacterias.

Componentes de citoesqueleto. Los componentes del citoesqueleto son

microfilamentos, filamentos intermedios y microtbulos.

Microfilamentos de actina de 5 a 9 nm de dimetro.

Componentes estructurales: En la clula podemos distinguir los

monmeros de actina, los filamentos de actina, correspondientes a la disposicin
lineal de los monmeros de actina para formar unidades filamentosas. Los
manojos de filamentos de actina, que son filamentos organizados paralelamente y
sustentados por protenas que mantienen unidos a los filamentos de actina unos a
otros. La red ramificada, que es la organizacin tridimensional en el espacio
intracelular.

103
Tabla 1. Estructura y funcin de elementos del citoesqueleto (Modificado de W.M. Becker,
I.J. Kleinsmith & J. Hardin. The World of the Cell (San Francisco, Ca. B Cummings). 2000 p.
753).

Microtbulos Microfilamentos Filamentos intermedios

Estructura Tbulos huecos
Pared consistente de 13
columnas de molculas de
tubulinas
Dimetro 25 nm, con lumen de 15 nm
Subunidad Tubulinas que constan de -
proteca tubulina y -tubulina
Funcin Mantencin de la forma celular:
principal estructuras que resisten la
compresin
Motilidad celular (como cilios y
flagelos)
Movimientos cromosmicos en
la divisin celular
Movimientos organelares
Dos bandas de actina Protenas fibrosas
entrelazadas superenrrolladas fprmando
cables engrosados
7 nm 8- 12 nm
Actina Una o varias protenas
diferentes de la familia de las
queratinas, dependiendo del
tipo celular
Mantencin de la forma Mantencin de la forma
celular (estructuras que celular (estructuras que
soportan tensin) soportan tensin)
Cambios en la forma Anclaje del ncleo y de
celular algunos otros organelos
Motilidad celular (como Formacin de la lmina
pseudpodos en nuclear
amebas y macrfagos)
Contraccin muscular
Ciclosis: movimiento del
citoplasma
Divisin celular:
formacin del surco de
clivaje o de divisin
celular.

104
Forma celular:

El esqueleto de actina es el ms importante componente del citoesqueleto

celular. La actina se localiza en la periferia de la clula, por debajo de la
membrana plasmtica formando una red que la sustenta. Al tener propiedades de
gel viscoso elstico, el citoesqueleto de actina mantiene la forma celular y sustenta
los cambios de la forma. La dinmica de la actina permite la extensin de la
membrana plasmtica. Los manojos de actina de la red de filamentos sustentan la
estructura celular. Los motores de miosina asociados permiten la contractilidad y
transporte de vesculas. Los manojos de actina y los filamentos intermedios
permiten la adhesin celular. La red de lmina sustenta la estructura nuclear.

En el caso del citoesqueleto de actina, este es una matriz porosa,

formando un andamio como sendas o caminos a lo largo de las cuales las
miosinas transportan sus cargamentos o se deslizan para realizar la contractilidad
celular. Los manojos de filamentos de actina (fibras de estrs o soporte) estn
unidas a la matriz extracelular mediante las integrinas. Las integrinas son
protenas integrales de membrana de aproximadamente 160 kDa que participan
en el anclaje a la matriz extracelular unindose a las protenas fibronectina y
laminina. Las integrinas estn conformadas por dos subunidades, alfa y beta. La
subunidad alfa tiene un dominio de unin del calcio. Dos enfermedades humanas
se originan por defectos genticos de las integrinas. La trombostenia de
Glanzmann, en las que las plaquetas carecen del receptor celular para el
fibringeno GpIIb/IIIa lo que lleva a la agregacin anormal y tiempos de sangrado
prolongados. La deficiencia de adhesin de leucocitos producido por la
ausencia de la subunidad beta de la integrina de leucocitos y causa infecciones
bacterianas recurrentes, adems de retardar la curacin de heridas. Esto es a
causa que la ausencia de integrina dificulta el movimiento de estas clulas
defensivas, perjudicando su capacidad de migrar hacia los lugares de infeccin y
fagocitar los microorganismos invasores.

Control de la motilidad no muscular.

Los filamentos dinmicos producen la fuerza protrusiva necesaria para el

movimiento rpido de ensamble y desensamble. Para esto es necesaria la
intervencin de numerosas protenas accesorias que juegan importantes roles

105
regulando la dinmica de los filamentos de actina. Entre estas protenas estn las
aquellas que unen monmeros, las que permiten el crecimiento del filamento, las
adaptadoras, las protenas que cortan el filamento y las protenas que
desestabilizan el filamento. Ejemplo Timosina beta 4, es una pequea protena de
masa molecular de 5000, une G-actina, la actina monomrica globular, est
presente en alta concentracin en la clula (aproximadamente 0,5 mM) y
secuestra G-actina manteniendo un gran volumen de actina no polimerizada en la
clula. Otro ejemplo es la profilina, una protena de masa molecular de 15000, se
une al extremo de la G-actina en una proporcin 1:1, promueve el intercambio de
ADP por ATP. El complejo actina-profilina puede agregarse al extremo positivo o
de crecimiento de un filamento, y compite con la timosina beta 4 por la actina.

Filamentos intermedios (FI).

Tienen un tamao de alrededor de 10 nm de dimetro, son los

componentes ms rgidos, responsables de mantenimiento de la forma general de
la clula. Se caracterizan por tener una composicin variable.

Existe una alta diversidad de filamentos intermedios en cuanto se refiere a

estructura mostrando una organizacin tripartita de dominios. Un dominio central
de ubicacin fija caracterizada por la presencia de segmentos de alfa hlices
formados por residuos apolares, conformado una varilla central flanqueada
lateralmente por los dominios de longitud variable, cabeza y cola, los cuales no
estn formados por hlices.

106
Tabla 2. Clasificacin de los filamentos intermedios.

Nombre Nmero de Tipo FI, de Grupo de Tamao kDa Distribucin

Genes que acuerdo a la ensamble de
codifican FI forma de la polimerizacin
varilla central de los FI

Keratina (cida) >25 I A 40-64 Epitelio

Keratina (Bsica) >25 II A 52-48 Epitelio

Vimentina 1 III B 55 Heterogneo

Desmina 1 III B 53 Msculo

GFAP 1 III B 50-52 Astrocito-

Astroglia

Periferina 1 III B 54 Neuronas SNP

Sincoilina 1 III/IV B 54 Msculo

NF-L 1 IV B 62 Neuronas SNC

NF-M 1 IV B 102 Neuronas SNC

NF-H 1 IV B 110 Neuronas SNC

Alfa-Internexina 1 IV B 66 Neuronas SNC

Lamina A/C 1 V C 72/62 Ncleo

Lamina Beta 1 1 V C 65 Ncleo

Lamina Beta 2 1 V C 78 Ncleo

Nestina 1 VI B 240 Heterognea

Sinemina 1 VI B 182 Msculo

Desmosina 1 VI B 140 Msculo

Fakinina/CP49 1 Orfan D 46 Lentes

Filensina 1 Orfan D 83 Lentes

Tomado de Coulombe PA. 2001 J Cell Science 114:4345-4347

Microtbulos de 25 nm de dimetro.

Microtbulos: cilindros huecos de 25 nm de espesor y pared de 5 nm de grosor.

Tienen longitud variable.

107
Filamentos y tbulos que se extienden por todo el citoplasma, es una estructura
altamente dinmica. Tiene como funcin el mantenimiento de la forma celular, la
regulacin de la posicin de los organelos, los movimientos celulares, el control
transmembrana de la actividad celular.

Morfologa.

Microtbulos lbiles y microtbulos estables. Axonema de cilios y flagelos.

Centrolos. Microtbulos lbiles se observan luego de la fijacin con glutaraldehdo
(>4C). Se originan del centro organizador de microtbulos (MTOC). Se agrupan
en haces. Microtbulos estables se observan despus de la fijacin con distintos
fijadores y a diversas temperaturas.

Axonema de cilios y flagelos. Centrolos. Los cilios y flagelos se caracterizan por

contener un axonema. El axonema est constitudo por un haz central de
microtbulos, que incluye 9 microtbulos dobles dispuestos en crculo alrededor

CENTROSOMA

El centrosoma o centro celular est conformado por dos centrolos

dispuestos cercano al ncleo. Los centrolos son organoides formados por
microtbulos organizados en tripletes, revelado por estudios de ultraestructura. El
centrosoma determina la polaridad de la clula y el eje de la clula.

Los microtbulos se observan en el centro organizador de microtbulos

(MTOC). El MTOC, corresponde a cualquier estructura que en la clula cumple la
funcin de agrupar y organizar los microtbulos. En las clulas animales el MTOC
es un centrosoma, protenas que forman una red que puede contener un par de
centrolos. El MTOC puede nuclear la polimerizacin de subunidades de tubulina o
puede unir los extremos de los microtbulos, que se ensamblan en forma
independiente en el citosol. Es probable que el MTOC sea la principal estructura
organizadora de la clula y contribuya a determinar la organizacin de las
estructuras y organelos asociados a microtbulos como por ejemplo las
mitocondrias, el Complejo de Golgi y el reticulo endoplsmico. En la mayora de

108
las clulas el MTOC se encuentra en el centro de la clula, o cercano al ncleo.
Uno de los principales componentes del material pericentriolar es la -tubulina,
capaz de formar in vitro el ncleo de polimerizacin de las subunidades de
tubulina que constituyen los microtbulos.

Composicin qumica: citoqumica y anlisis qumico. Organizacin

molecular.

Composicin qumica. Los microtbulos se forman a partir de la

polimerizacin de heterodmeros de alfa y beta tubulina, contienen dinena ciliar y
flagelar (formando parte del axonema), nexina (axonema) y MAPS (conjunto de
diversas protenas asociadas a los microtbulos). La tubulina alfa y la tubulina beta
se alternan para formar los protofilamentos, un conjunto de protofilamentos forma
un microtbulo. Las tubulinas forman la pared del tbulo. Los microtbulos se
caracterizan por mostrar polaridad estructural y funcional. En la mayora de los
casos el extremo negativo (-) de un microtbulo es adyacente al MTOC desde el
cual se ensambla, y el extremo positivo (+) est en posicin distal. El ensamblaje y
disociacin de los microtbulos depende de la concentracin crtica de los dmeros
de alfa y beta tubulinas. Por sobre la concentracin crtica, ocurre el ensamblaje y
por debajo, la disociacin de los microtbulos. Los microtbulos tienen dos
fenmenos dinmicos: en uno se agregan subunidades por un extremo y pierden
subunidades por el otro extremo y en el otro caso experimentan inestabilidad
dinmica, entre alargamiento o acortamiento. En todos los casos hay participacin
de GTP o GDP intercambiable.

Las protenas asociadas a cada uno de los tipos de filamentos

corresponden a MAPs (Protenas asociadas a los microtbulos). Estas protenas
pueden ser protenas de ensamblaje que tienen dos dominios, uno de fijacin a
los microtbulos y el otro es un brazo filamentoso que se extiende desde la pared
del microtbulo. Este brazo se puede fijar a membranas, filamentos intermedios u
otros microtbulos, y su longitud separa los elementos. Su funcin es evitar la
despolimerizacin de los microtbulos en el citosol, los organizan en haces o
manojos y establecen enlaces cruzados entre ellos y las membranas o los
filamentos intermedios ya que cuando las MAP recubren la pared externa de un
microtbulo, las subunidades de tubulina son incapaces de disociarse de los
extremos del tbulo. Debido al efecto de las MAP sobre la dinmica de los
microtbulos, en la clula estas se pueden encontrar fosforiladas, y en este caso

109
las MAPs fosforiladas son incapaces de unirse a los microtbulos o MAPs sin
fosforilar asociada a los microtbulos. Las MAPs son fosforiladas por una MAP
quinasa y desfosforilada por una fosfatasa. Las MAP se encuentran asociadas a
microtbulos de dendritas y axones son las MAP del tipo I: MAP1A, MAP1 B y las
MAP del tipo II: MAP2A, MAP2B, en dendritas; MAP2C, en dendritas
embrionarias, MAP4 en clulas no neuronales y Tau en dendritas y axones.

Transporte intracelular.

Las vesculas limitadas por membranas dentro de la clula son

transportadas a lo largo de vas bien definidas. Uno de los movimientos que son
mediados por microtbulos que sirven de carriles dentro de la neurona, es el
transporte axnico que puede ser de dos tipos: antergrado, desde el cuerpo
de la neurona hacia las uniones sinpticas o retrgrado, en sentido contrario.
Puede ser transportado material rodeado por membranas en vesculas, protenas
del citoesqueleto y organelos como las mitocondrias. El transporte de pigmentos
en melanforos es otro ejemplo donde el material transportado usando a
microtbulos como carriles son pigmentos. Las vesculas del Golgi y el retculo
endoplsmico, tambin son transportadas a travs de los carriles formados por
microtbulos en la clula. Si se desorganizan los microtbulos mediante la adicin
de colchicina, se desorganiza la conformacin reticular del RE, in vitro.

El transporte de las vesculas antergrado a lo largo del microtbulo es

dirigido por protenas motoras asociadas al microtbulo. Una de estas protenas es
la quinesina que dirige el movimiento hacia el extremo positivo del microtbulo,
este transporte requiere de ATP. La quinesina es un dmero que consta de dos
cabezas globulares conectadas por un largo tallo central. La cabeza se une a los
microtbulos y al ATP y la cola se une la membrana de las vesculas
transportadas. La vescula se conoce con el nombre de carga. Hay distintos tipos
de quinesinas como las quinesinas del citosol que transportan vesculas del citosol
exclusivamente hacia el polo positivo del microtbulo, en tanto, las quinesinas del
huso mittico transportan como carga microtbulos del huso y astrales,
centrosomas, quinetocoros hacia el polo positivo o negativo de los microtbulos.

Las dinenas son protenas motoras asociadas a los microtbulos que

transportan exclusivamente la carga hacia el extremo negativo del microtbulo,

110
como por ejemplo el transporte axnico retrgrado o el trnsito de vesculas de
endocitosis desde la membrana plasmtica hacia los lisosomas. Son protenas
multimricas compuestas por dos o tres cadenas pesadas que forman complejos
con un nmero variado de cadenas livianas e intermedias. Hay dinenas del citosol
que transportan vesculas del citosol y quinetocoros (protenas asociadas a los
centrmeros de los cromosomas a los cuales se anclan los microtbulos del huso
mittico y permiten la traccin de los cromosomas hacia los polos de la clula en
anafase) durante la mitosis y la meiosis. Tambin estn las dinenas del axonema
que son de dos tipos: las dinenas de brazo externo y las dinenas de brazo
interno, transportan un tbulos de los microtbulos dobles de cilios y flagelos y por
lo tanto es responsable del movimiento de estas estructuras. Este movimiento
requiere de ATP. Mutaciones de los genes que codifican a la dinena del axonema
o a otras protenas asociadas del axonema producen cilios o flagelos inmviles
provocando cuadros de bronquitis crnicas y esterilidad en hombres y mujeres,
esto porque no funcionan los cilios del rbol respiratorio, el flagelo del
espermatozoide o los cilios de las trompas uterinas. Este sndrome se conoce
como el sndrome de Kartagener o de los cilios inmviles.

Los microtbulos en la mitosis.

Durante la mitosis se organiza el aparato mittico que tiene dos

componentes: el huso mittico, una estructura simtrica bilateral situada a ambos
lados de la placa metafsica y un par de steres, un conjunto de microtbulos
situados en ambos polos de la clula. El huso contiene 3 tipos de microtbulos
cuyos extremos negativos se ubican hacia el centrosoma. Los microtbulos
astrales, forman el ster e irradian desde el centrosoma hacia la corteza celular,
ubicando el aparato mittico, determinando as el proceso de citoquinesis o
divisin del citoplasma. Los microtbulos de los quinetocoros se fijan a los
quinetocoros ubicados en el centrosoma de cada cromosoma. Los microtbulos
polares no interactan con los cromosomas, van de polo a polo de la clula.

Origen de las protenas del citoesqueleto.

Las protenas del citoesqueleto se originan en polirribosomas libres y son

las ms abundantes de la clula. La secuencia del polipptido carece de
secuencias seales o secuencias de insercin.

111
 MITOCONDRIA

Mitocondria organizacin para la produccin de energa, participacin en

la herencia y apoptosis.

La mitocondria es uno de los organelos ms grandes en las clulas

eucariticas. Al microscopio electrnico de transmisin aparece como estructura
esfrica o con forma de bastn de 0,5-1 m de dimetro y longitud variable. La
forma de la mitocondria en la clula podra estar determinada por su asociacin a
elementos del citoesqueleto, pero no es afectada por agentes disruptores de
microtbulos como nocodazol. Adems las mitocondrias aisladas mantienen su
forma tubular en medio isotnico, por lo tanto la forma tubular de la mitocondria
est dada por estructuras internas de la mitocondria.

El nmero de mitocondrias en la clula es variable; en hepatocitos hay

entre 1.000 y 2.000 mitocondrias. Su ubicacin es de preferencia en la regin
donde la clula tiene mayor demanda de energa metablica (ATP); en el msculo
se ubican alrededor de las bandas A de las miofibrillas, en los bastones retinianos
en el segmento interno, en los tbulos renales en la regin basal de la clula.

Las mitocondrias son estructuras dinmicas que estn constantemente

cambiando de forma, dividindose, fusionndose y movindose. Los movimientos
de desplazamiento y las modificaciones morfolgicas dependen de los elementos
del citoesqueleto los microtbulos y los microfilamentos y las protenas motoras
asociadas a este (quinesina y dinena). Sin embargo, en algunas clulas como
espermatozoides, clulas musculares y clulas adiposas las mitocondrias se
encuentran fijas, permaneciendo en lugares bien definidos de la clula. Las
mitocondrias se mueven rpidamente a lo largo de microtbulos, son
transportadas a las sinapsis o conos de crecimiento en neuronas. Las protenas
motoras juegan un rol preponderante en el direccionamiento del transporte. En las
clulas de mamfero hay al menos dos quinesinas especficas asociadas a la
mitocondria. La asociacin entre mitocondria y microtbulo permite ubicar a las
mitocondrias cerca de la membrana del retculo endoplsmico de donde puede
intercambiar iones calcio y lpidos. Estos ltimos necesarios para la composicin
de la membrana de la mitocondria como fosfatidilcolina y fosfatidilserina que son
sintetizados en el retculo endoplsmico y transferidos a la membrana externa de

112
la mitocondria. Tambin existe asociacin de la mitocondria con filamentos
intermedios y con el citoplasma circundante, desconocindose los mecanismos.

La mitocondria promedio duplica su masa y se divide en dos en cada ciclo

celular manteniendo de esta forma el "pool" mitocondrial en las clulas hijas; sin
embargo, algunas mitocondrias se dividen ms rpidamente, mientras otras no se
dividen durante este perodo. La masa mitocondrial aumenta al inicio de la fase S
y a lo largo de la fase M del ciclo celular. Por lo tanto, el proceso de divisin de las
mitocondrias est regulado y coordinado con el ciclo celular. La excepcin a la
regla son las mitocondrias del msculo que proliferan durante la miognesis
(formacin de la clula muscular en el desarrollo), pero tambin luego del ejercicio.
La divisin de la mitocondria puede ser inducida por un amplio rango de
sustancias como inhibidores de la fosforilacin oxidativa o flujos de iones calcio,
entre otras. En vertebrados podra estar controlada por T3, una hormona de la
glndula tiroides que regula las tasas metablicas y puede inducir la divisin de
mitocondrias.

Este organelo tiene una doble membrana que alojan espacios donde se
desarrollan las funciones que conducen a la produccin de energa, estos
compartimientos son seis en total: la membrana externa, la membrana interna, el
espacio intermembrana, la matriz mitocondrial y otros dos compartimientos que
sern discutidos ms adelante.

La membrana externa, lisa, permeable que presenta las siguientes

estructuras:

1 Protenas que forman un canal acuoso denominadas porinas a travs de

los cuales pasan pasivamente iones y molculas de hasta 5 kDa. Las
porinas son las protenas ms abundantes de la membrana externa de la
mitocondria, y una de las diez protenas ms abundantes de la
mitocondria, es tambin denominada canal aninico dependiente de
voltaje (VDAC). Es una protena integral de membrana de unos 35 kDa
que es importada a la mitocondria desde la va citoslica sin la presencia
de presecuencia a la mitocondria desde el citosol a travs de traslocasas
de la membrana externa de la mitocondria, denominadas Tom
especficamente Tom20, Tom22 y con participacin de la subunidad

113
 pequea de Tom5 que ayuda en la transferencia de la porina hasta el
canal Tom40. Intentos por caracterizar las posibles pptidos seales en la
protena precursora de la porina han llevado a la identificacin de algunas
regiones responsables de su ensamble. Esta protena tiene estructura
beta- barril que permite el paso de pequeas molculas a travs de la
membrana.
2 Receptores de importacin que reconocen secuencias de
direccionamiento de las protenas citoslicas destinadas a las
mitocondrias (Tom). Corresponden a protenas de membrana que
reconocen presecuencias de protenas ya sea secuencias internas de la
protena como aquellas ubicadas en el extremo amino terminal de la
protena. Entre estos estn Tom70, Tom22 y Tom20 que expone grandes
dominios hacia el citosol. Las protenas que llevan secuencias seales en
el extremo amino terminal son reconocidas por Tom20 y aquellas que
llevan secuencias seales internas de la protena son reconocidas por
Tom70 y transferidas al receptor central Tom22.
3 Elementos de translocacin de protenas codificadas en el ncleo y
destinadas a las mitocondrias (Tom, Gip). Las protenas sintetizadas en la
va citoslica requieren ser traslocadas al interior de la mitocondria a
travs de traslocasas con mltiples subunidades, las que estn ubicadas
en la membrana externa de la mitocondria se les denomina Tom, o
complejo Tom que contiene en su superficie receptores para el
reconocimiento especfico de precursores de protenas y un poro general
de importacin/ insercin (GIP) que media la traslocacin de la protena
precursora al interior o a travs de la membrana externa. El componente
que forma el poro central, Tom40 y tres pequeas protenas Tom7, Tom6
y Tom5 estn embebidas integralmente en la membrana externa de la
mitocondria. Junto con Tom22 forman un core estable de 400 kDa que
corresponde al complejo traslocasa externa Tom o complejo Gip (poro
general de importacin o de insercin). A travs de este complejo son
insertadas o importadas las protenas codificadas en el ncleo y
sintetizadas en la va citoslica que van destinadas a la insercin en las
membranas externa o interna o destinadas a la matriz mitocondrial o
espacio intermembrana. El destino de las protenas est sealado en las
secuencias seales de la protena.
4 Complejos de importacin de colesterol. Estos complejos de importacin
del colesterol han sido descritos en clulas de Leydig tumorales en

114
 ratones y humanos. Transportan el colesterol hacia la membrana interna
de la mitocondria destinado a la sntesis de hormonas esteroidales. El
colesterol en la membrana interna es convertido a pregnenolona por
rompimiento de la cadena lateral de la molcula por la enzima citocromo
P-450, localizada en la membrana interna de la mitocondria. La protena
que lleva el colesterol se encuentra en la membrana externa de la
mitocondria se denomina receptor benzodiazepina de tipo perifrico y se
abrevia con la sigla PBR, fu descubierto originalmente porque une
diazepan con alta afinidad en neuronas del sistema nervioso central. PBR
est localizado en la membrana mitocondrial de todas las clulas y en
especial en aquellas que hacen sntesis de esteroides. Es una protena de
18 kDa que une isoquinolina y que media la liberacin del colesterol desde
la membrana mitocondrial externa a la membrana mitocondrial interna. Se
ha demostrado que la reduccin en el nmero de PBR en las clulas
adrenales disminuye los niveles de glucocorticoides en circulacin. En las
clulas de Leydig la interrupcin del gen PBR da por resultado el bloqueo
del transporte del colesterol en la mitocondria y por lo tanto cesa la
formacin de esteroides. PBR est conformado por cinco alfa hlices que
transportan el colesterol acomodndolo en su interior y funcionando como
un canal, mediando el transporte entre las membranas de la mitocondria.

La membrana interna que presenta un 75% de protenas. La membrana

interna debe ser capaz de formar un gradiente electroqumico en el espacio
intermembrana. Esta membrana interna de la mitocondria muestra alta resistencia
al paso de iones o solutos para facilitar una eficiente conversin de energa, ya
que el gradiente electroqumico de protones a travs de la membrana interna es la
fuerza impulsora de la sntesis de ATP que ocurre en la membrana interna de la
mitocondria en la cara que enfrenta a la matriz de la mitocondria. Sin embargo, la
permeabilidad de la membrana interna de la mitocondria se hace extremadamente
elevada cuando en presencia de fosfato inorgnico se acumula cierta cantidad de
iones calcio. Esta es una permeabilidad transitoria (PT), y se cree que se debe a la
formacin transitoria de poros protecos (poros PT) en la membrana interna de la
mitocondria, cuyas aperturas facilitan la permeacin de solutos o iones de hasta
1500 Da.

115
 En la mayora de la mitocondrias la membrana interna presenta repliegues
que penetran profundamente en la matriz mitocondrial denominados crestas y que
aumentan la superficie de dicha membrana. La membrana interna posee una
permeabilidad selectiva, es decir, presenta protenas transportadoras para el paso
de iones y otras molculas.

Las dos membranas de la mitocondria crean 2 compartimientos: un

espacio intermembrana que las separa, y una matriz que es el compartimiento
incluido por la membrana interna y que tiene una consistencia muy viscosa. En
espacio intermembrana acumula protones, crendose de esta manera el gradiente
electroqumico que es la fuerza o energa potencial que permite la sntesis de
ATP. En la matriz mitocondrial tiene lugar el ciclo de Krebs o de los cidos
tricarboxlicos. En trabajos recientes se han propuesto otros dos compartimientos
en la mitocondria, se ha demostrado que las crestas estn unidas con la
membrana interna del lado opuesto de la mitocondria a travs de contactos
semejantes a poros, por lo tanto no slo son invaginaciones. Estos dos nuevos
compartimientos corresponden a la membrana de las crestas y al espacio
intercresta.

A estos compartimientos los caracteriza la funcin que cada uno desarrolla

y la caracterstica composicin de protenas, lo que queda por definir es como
estas protenas se organizan en complejos, se pueden mencionar algunos ya
definidos como los complejos de la cadena respiratoria, la ATP sintasa, el
nucleoide mitocondrial, los ribosomas, los poros de traslocacin de protenas, los
poros de permeabilidad transicional y an posiblemente las enzimas del ciclo de
Krebs.

En las crestas mitocondriales se ubican los complejos de la cadena

respiratoria asociados a la membrana. Las partculas F que forman parte de la
ATP sintasa que une la oxidacin con la fosforilacin del ATP, en una protena de
membrana con dos regiones, la regin F0 de cruza la membrana, consta de 4
cadenas polipeptdicas que forman un canal que conduce protones. La subunidad
F1 enfrenta la matriz y consta de 5 diferentes cadenas polipeptdicas. Esta
subunidad lleva a cabo la fosforilacin del ATP que es generada por el flujo de
protones que cruza el canal desde el espacio intermembrana a la matriz
mitocondrial.

116
 En general, la membrana interna contiene unas 60 protenas, la mayora de
naturaleza hidrofbica que participan en:

1. La cadena respiratoria o cadena transportadora de electrones. La fosforilacin

oxidativa ocurre en la mitocondria en un proceso que se desarrolla en conjunto
entre la matriz mitocondrial, donde ocurre el ciclo de los cidos tricarboxlicos o
ciclo de Krebs y la fosforilacin oxidativa que ocurre en la membrana interna de la
mitocondria. La cadena respiratoria consta de cuatro complejos, tres bombas de
protones y una unin fsica al cido ctrico. Los transportadores de electrones en el
ensamble respiratorio de la membrana mitocondrial son quinonas, flavinas,
complejos azufre-fierro, grupos heme de los citocromos y iones cobre.

Complejo I: es una ubiquinona oxidoreductasa dependiente de NADH con un

grupo prosttico FMN (flavn mononucletido). Esta oxidoreductasa tambin
contiene un centro Fe-S. El electrn proveniente del NADH reduce la
ubiquinona.

Complejo II: es el complejo succinato Q reductasa que es la parte integrante

del ciclo de Krebs que se ubica en la membrana interna de la mitocondria. Los
electrones son transferidos desde FADH2 a Q para formar QH2 del complejo
III. El complejo II tiene la caracterstica de ser altamente hidrofbico.

Complejo III: es una oxidoreductasa Q citocromo C que contiene los

citocromos b y c1 y un centro Fe-S. Este complejo reduce al citocromo C, una
protena perifrica de membrana soluble en agua. El citocromo C como Q, es
un transportador mvil de electrones, los cuales son transferidos a la
citocromo C oxidasa (Complejo IV).

Complejo IV: este complejo contiene a los citocromos a y a3 y tres iones cobre.
Un in Fe heme y un in cobre en esta oxidasa transfiere los electrones al
oxgeno, el ltimo aceptor para formar agua.

2. La sntesis de ATP (ATP sintasa o ATP sintetasa), ubicada en la membrana

interna de la mitocondria e impulsado por un gradiente de protones. El flujo de
electrones a travs de los complejos I, III y IV, ubicados en la membrana interna
de la mitocondria, conduce la transferencia de protones desde el lado de la matriz
a la cara del espacio intermembrana de la membrana interna. La fuerza impulsora

117
de protones generada se debe a un gradiente de pH, teniendo la matriz
mitocondrial un pH bsico vecino a la membrana interna, y en el espacio
intermembrana un pH cido. El flujo de protones de regreso a la matriz desde el
espacio intermembrana a travs de la ATP sintetasa impulsa la sntesis de ATP. El
complejo enzimtico es un motor molecular conformado por dos unidades
operacionales: un componente rotatorio y uno estacionario. La rotacin de la
unidad F1 induce cambios estructurales en la subunidad F0, anclada en la
membrana que dan por resultado la sntesis y liberacin de ATP en la matriz
mitocondrial. La entrada del flujo de protones provee la fuerza para la rotacin.

3. El transporte de solutos (piruvato, cidos grasos, calcio, fosfato). La protena

responsable del transporte de piruvato a la mitocondria es el transportador de
piruvatos mitocondrial (MPC) ha sido identificado en las levaduras es un miembro
de la familia de transportadores mitocondriales que constan de seis hlices
transmembrana de masa molecular de 41.9 kDa. El transporte de piruvato a la
mitocondria es esencial para la oxidacin de glucosa, lipognesis y
gluconeognesis y tambin para el metabolismo de algunos aminocidos. El
transportador tambin juega un rol importante en el transporte de cuerpos
cetnicos tales como acetoacetato y beta hidroxibutirato a travs de la membrana
interna de la mitocondria. El transportador de fosfatos mitocondrial PTP es una
protena integral de membrana que es responsable del transporte de fosfato
inorgnico a travs de la membrana interna de la mitocondria. El fosfato inorgnico
es usado en la matriz mitocondrial en la fosforilacin oxidativa del ADP. Este
transportador funciona como homodmero y como un cotransportador
electroneutro de protones. Recientemente se ha identificado una traslocasa de
cidos grasos (FAT/CD36) es una protena de transporte con alta afinidad por
cidos grasos de cadena larga (LCFA) en el msculo esqueltico de rata y se ha
encontrado que se requiere para la incorporacin del palmitato y su oxidacin en
la mitocondria. Este transportador tambin est presente en mitocondrial del
msculo esqueltico humano.

4. El transporte de ADP hacia la matriz y de ATP hacia el citosol. La traslocasa

nucletido adenina (abreviada con la sigla ANT) juega un rol en el intercambio de
ATP por ADP a travs de la membrana interna de la mitocondria, suministrando
as al citoplasma de ATP nuevamente sintetizado en la fosforilacin oxidativa. ANT
es una protena integral de membrana que comprende seis segmentos
transmembrana y que es codificada por un gen nuclear que tiene una masa de 32

118
kDa y se piensa que funciona como homodmero. Durante el transporte de ADP y
ATP la protena cambia de conformacin a travs del cual el sitio de unin al
sustrato est orientado hacia el citoplasma y la matriz respectivamente. Aparte de
su rol en el transporte o traslocacin de nucletidos, ANT es un componente core
del poro de transicin de la permeabilidad de la mitocondria (MPTP). Este es un
complejo proteco encontrado en los sitios de contacto de la mitocondria que
cuando estn abiertos actan como canal carente de especificidad, permitiendo el
paso libre de molculas bajo 1,5 kDa a travs de la membrana interna. Como
consecuencia, la mitocondria pierde su potencial de membrana y se hincha. En
general la permeabilidad de transicin es un proceso complejo con inductores,
moduladores e inhibidores. El calcio tiene un rol regulador de MPTP ya que hay un
requerimiento de acumulacin de iones calcio en la matriz mitocondrial previo a la
apertura del poro transitorio.

5. Los complejos de importacin Tim formadas por al menos 3 protenas distintas

que se ubican en la membrana interna de la mitocondria y que participan en la
transferencia o traslocacin de protenas sintetizadas en la va citoslica y
codificadas en el ncleo.

La membrana interna se caracteriza por tener una composicin lipdica

particular. Como componente especial est la cardiolipina (tambin denominado
bisfosfatidilglicerol), este es un lpido caracterstico de la mitocondria de una
estructura inusual que es biosintetizado en la membrana interna de la mitocondria,
este es un doble fosfolpido. Su concentracin en la membrana interna alcanza al
20% de los lpidos. La cardiolipina interacta con numerosas protenas de la
membrana interna, incluyendo varios sistemas transportadores aninicos y
algunos complejos de transporte de electrones, entre estos est la interaccin de
la cardiolipina con la citocromo oxidasa, el complejo enzimtico terminal de la
cadena transportadora de electrones. Se ha asociado en algunos estudios
realizados con el proceso de envejecimiento, habra una disminucin de la
actividad de la citocromo oxidasa con el avance de la edad en mamferos.
Experimentalmente se ha demostrado usando la citocromo oxidasa en
experimentos de reconstitucin en liposomas que la remocin de cardiolipina
decrece el transporte de electrones entre un 60 y 70% de la actividad original. Este
efecto no se logra con otros fosfolpidos, por lo tanto la cardiolipina acta
modificando el ambiente lipdico asociado a la citocromo oxidasa, facilitando de
esta forma su funcin enzimtica.

119
La matriz mitocondrial contiene las enzimas que participan en:

1 Oxidacin de piruvato producido en la gliclisis en el citoplasma.

2 -oxidacin de cidos grasos.
3 Ciclo de Krebs (excepto la succinato deshidrogenasa).
4 Replicacin, transcripcin y traduccin del ADMmit.

En los espacios intercrestas se ubica uno de los mayores complejos

protecos de la mitocondria, y es el complejo PDH que tiene una masa molecular
6
de 8x10 Da. La organizacin del complejo PDH es un ejemplo de una va
metablica integrada. Est conformado por tres enzimas:

1) Piruvato deshidrogenasa E1, representada por 30 copias.

2) Deshidrolipoamida acetiltransferasa E2, representada por 60 copias.
3) Deshidrolipoamida deshidrogenasa, representada por 12 copias.

Como parte del complejo tambin hay diferentes componentes

regulatorios incluyendo una quinasa y una fosfatasa.

Todava queda por definir la mayor parte de las unidades funcionales de la

mitocondria para establecer un modelo de compartimentacin metablica.

Adems en la matriz se encuentran: varias copias de ADN circular carente

de histonas y representa entre el 1 y el 5% del ADN celular total, ARNm, ARNt,
ribosomas mitocondriales o mitorribosomas (55S) y grnulos densos e irregulares
de 50 nm de dimetro y compuestos principalmente por calcio.

Los nucleoides, asociacin del ADN mitocondrial con protenas, se ubican

en lugares bien precisos de la matriz mitocondrial en las levaduras. En las clulas
somticas humanas hay de una a varios cientos de copias de ADNmt circular
ubicado en la matriz mitocondrial y asociado a la cara interna de la membrana
interna de la mitocondria a travs de la regin D-loop. Datos de microscopa
electrnica han sealado que las molculas de ADN circular mitocondrial forman
una especie de roseta con un denso core central que es mantenido por protenas
asociadas. La carencia de histonas es una de las causas que el ADN mitocondrial

120
sea altamente susceptible a sufrir mutaciones debido a presencia de radicales
libres en la mitocondria producidos durante el proceso de respiracin celular. El
ADN mitocondrial humano es una doble hebra circular de ADN de 16.5 kDa
presente de una a varios cientos por clula. Todas las protenas de mantencin
del ADN mitocondrial son codificadas por el genoma nuclear. Estas son las
protenas de la replicacin y de la segregacin del ADN y de reparacin tales
como la polimerasa mitocondrial POLG.

El genoma mitocondrial es diferente al nuclear. As tambin, el cdigo

gentico mitocondrial es ligeramente diferente al nuclear y puede codificar 2 ARNr
(12S y 16S), 22 ARNt, 13 ARNm y 13 polipptidos involucrados en el transporte de
electrones y fosforilacin oxidativa. Estos genes son traducidos en ribosomas
dentro de la matriz. Por esta razn la mitocondria es descrita como semiautnoma.

Las protenas restantes (90-95%) son codificadas por ADN nuclear, y son
traducidas en ribosomas citoplasmticos e importadas a la mitocondria como
cadenas polipeptdicas terminadas y traslocadas desde el citoplasma a la
mitocondria. El transporte y la traslocacin de las protenas va acompaado de
chaperonas. En total la mitocondria contiene alrededor de 600 a 1000 protenas.

Los fosfolpidos de las membranas mitocondriales provienen de la

membrana citoslica del REL desde son transferidas por protenas de intercambio
a la superficie citoslica de la membrana externa.

Las mutaciones del ADNmt pueden provocar enfermedades, y los tejidos

ms afectados son aquellos dependientes de la produccin de ATP como son el
nervioso y el muscular. Adems, se ha sugerido que la progresiva acumulacin de
mutaciones en el ADNmt durante la vida de un individuo puede contribuir al
proceso de envejecimiento.

Un hecho interesante es que en los mamferos casi todo el ADNmt es

heredado de la madre, pues virtualmente todas las mitocondrias son aportadas por
el ovocito en el momento de la fecundacin. Por tanto, las enfermedades
mitocondriales son de herencia materna.

Adems, la mitocondria de una clula puede contener una mezcla de

ADNmt normal y ADNmt mutante, condicin conocida como heteroplasmia. Las

121
investigaciones en este campo indican que estas enfermedades surgen slo
cuando hay una preponderancia de mitocondrias que poseen informacin gentica
defectuosa. Debido a lo anterior, los diferentes miembros de una familia que
presentan mutaciones en el ADNmt pueden exhibir sntomas diferentes. Aquellos
que tengan un mayor porcentaje de mitocondrias mutantes presentarn una forma
ms severa de la patologa.

Cabe destacar una diferencia importante entre el ADN nuclear y el ADNmt;

el primero est protegido del dao por una serie de sistemas de reparacin de
ADN, los cuales estn generalmente ausentes en la mitocondria. Adems, el
ADNmt puede estar sometido a altos niveles de radicales libres mutagnicos. As,
la velocidad de mutacin del ADNmt es mayor que la del ADN nuclear.

El ADN mitocondrial humano es una molcula circular, de ADN de doble

cadena que consta de 16.569 pares de bases y contiene una regin codificante y
otra no codificante. La regin codificante lleva la informacin gentica para 13
protenas, 22 ARN de transferencia y dos ARN ribosomales, todos implicados en
el proceso de la fosforilacin oxidativa que ocurre en la membrana interna de la
mitocondria. Una multitud de enfermedades asociadas al ADN mitocondrial han
sido correlacionadas con polimorfismos nucleotdicos tales como deleciones o
inserciones de la regin codificante. La mayora de estas enfermedades son
neuromusculares, sorderas, diabetes, epilepsia, disfuncin renal y cegueras.

Si bien es cierto que la principal funcin de la mitocondria es la produccin

de ATP, realiza otras funciones como ser:

2+
1. Remocin de calcio del citosol. Este transporte que realiza una ATPasa Ca
dependiente presente en la membrana interna de la mitocondria opera bombeando
el calcio hacia la matriz cuando la concentracin citoslica de este in aumenta
hasta niveles peligrosos para la clula.

2. Sntesis de esteroides. La sntesis de glucorticoides y mineralocorticoides (en la

corteza adrenal), y la de los esteroides sexuales (en la corteza adrenal y gnadas)
requiere la participacin de citocromos P450 ubicados en la membrana interna de
la mitocondria. La sntesis de las hormonas esteroidales se inicia con la
transformacin de colesterol que ha sido transportado a la mitocondria en

122
pregnenolona, la cual es posteriormente transportada al REL donde es convertida
en progesterona, donde prosigue su metabolismo va una serie de reacciones
enzimticas secuenciales.

3. Sntesis de aminocidos. En las mitocondrias de hepatocitos 2 grupos de

aminocidos son sintetizados a partir de intermediarios del ciclo de Krebs, un
grupo desde -cetoglutarato y el otro desde oxalacetato.

4. Produccin de radicales libres. Las especies qumicas de oxgeno reactivas,

denominadas con la sigla ROS, son generados continuamente en el interior de la
mitocondria a travs de reduccin de electrones del oxgeno, el oxgeno queda
con una carga negativa adicional, esto sucede en los pasos intermedios de la
cadena de transporte de electrones y ha sido implicado en el dao celular y
enfermedades del envejecimiento. Los radicales libres causan dao a membranas,
protenas y cidos nucleicos.

5. Homeostasis de iones metlicos, especialmente en el caso de iones de fierro. El

fierro es almacenado principalmente en el citosol, y la mayora del fierro
metablicamente activo es procesado en la mitocondria de la clula. El fierro es un
elemento vital para todos los organismos desde bacterias hasta organismos
superiores, dado que juega un rol esencial en numerosos procesos metablicos
incluyendo transporte de oxgeno, sntesis de ADN, transporte de electrones. En
3+ -18
condiciones fisiolgicas, la solubilidad del Fe es muy baja (alrededor de 10 ),
por lo que la clula debe tener mecanismos de transporte y almacenamiento
eficiente de fierro. El exceso de fierro ha sido implicado en enfermedades
neurodegenerativas, apoptosis y tambin en la generacin de los dainos
radicales libres ya mencionados. Esta funcin de detoxificar y secuestrar el fierro
est a cargo de las ferritinas que se encuentran en la matriz de la mitocondria.
Dado que la mitocondria est expuesta a intenso trfico de fierro para la sntesis
de gupos heme y grupos azufre-fierro, requiere de un eficiente mecanismo para
evitar la toxicidad del fierro. Si el fierro estuviera libre en la mitocondria podra
interactuar con los ROS mencionado arriba en el punto anterior para producir un
radical hidrxilo txico. La ferritina mitocondrial es una protena homopolimrica
formada por 24 subunidades idnticas, que a diferencia de la ferritina citoslica es
ms lenta y de menor actividad en la unin del fierro; es codificada por un gen
nuclear carente de intrones ubicado en el brazo largo del cromosoma 5 (5q23.1).
En general, las ferritinas son protenas abundantes en la clula destinadas a evitar

123
la toxicidad del fierro, contribuir a su solubilidad y biomineralizacin y al
almacenamiento de este metal. Otra protena mitocondrial implicada en el
2+
secuestro de fierro es la frataxina, una protena de membrana que une Fe ,
evitando la participacin de este in metlico en la formacin de los dainos
radicales libres.

Cmo las protenas sintetizadas en el citosol son direccionadas hacia la

matriz, membrana externa, membrana interna y espacio intermembrana?

El direccionamiento de estas preprotenas hacia la matriz mitocondrial, se

debe a un pptido seal (presecuencia) que consiste de un segmento localizado
en el extremo N-terminal de la cadena polipeptdica que presenta mltiples
residuos de aminocidos cargados positivamente (bsicos). La translocacin
ocurre en lugares donde las membranas externa e interna mitocondriales estn
muy cercanas.

Las preprotenas son mantenidas en un estado parcialmente desplegado

por asociacin a una chaperona Hsp 70 citoslica y son reconocidas por un
receptor de importacin que pertenece al complejo Tom (compuesto por varias
protenas con secuencias cidas) de la membrana externa, e interaccionan
electrostticamente con el complejo proteco. Las cadenas polipeptdicas
desplegadas son entonces translocadas a travs del complejo Tom en la
membrana externa, y transferidas al complejo Tim en la membrana interna. La
translocacin del polipptido a travs de la membrana interna, requiere del
gradiente electroqumico (generado por el transporte de protones desde la matriz
hasta el espacio intermembrana) a travs de la membrana interna. La
presecuencia es removida por una proteasa de la matriz, y una chaperona Hsp 70
mitocondrial asociada al complejo Tim, se une a la cadena polipeptdica a medida
que atraviesa la membrana interna, impulsando la posterior translocacin.
Finalmente, el polipptido es transferido a una chaperona Hsp 60 mitocondrial, en
cuyo interior ocurre el plegamiento de la protena y la liberacin posterior en la
matriz mitocondrial. En todo este proceso hay requerimiento de ATP.

Las protenas destinadas a las membranas mitocondriales o al espacio

intermembrana necesitan de mecanismos adicionales para ser dirigidas al
compartimiento submitocondrial correcto. Estas protenas adems de la

124
presecuencia cargada positivamente que dirige la importacin mitocondrial
presentan una segunda seal a continuacin de la primera. El direccionamiento de
protenas hacia las membranas mitocondriales parece estar mediado por
secuencias hidrofbicas de terminacin que detienen la translocacin de las
cadenas polipeptdicas a travs de los complejos Tim o Tom, provocando la
insercin de ellas en las membranas interna o externa respectivamente.

Las protenas cuyo destino es el espacio intermembrana pueden ser

direccionadas por varios mecanismos. Algunas protenas son transferidas a travs
de la membrana externa por el complejo Tom pero son liberadas en el espacio
intermembrana en vez de ser transferidas al complejo Tim. Otras son transferidas
a travs del complejo Tim pero entonces son liberadas como resultado de la
remocin de secuencias hidrofbicas de trmino de transferencia. Incluso algunas
protenas pueden ser completamente importadas a la matriz y reexportadas a
travs de la membrana interna hacia el espacio intermembrana.

Apoptosis y mitocondria.

La mitocondria juega un rol fundamental en la regulacin de la apoptosis,

acta como un centro de control de la apoptosis. En la mitocondria daada se
forma un poro de transicin de permeabilidad mitocondrial (mt PTP) que al parecer
consiste en un traslocador de nucletidos de adenina (VDAC) y de varias otras
protenas mitocondriales incluyendo a miembros de la familia Bcl2. Uno de los ms
potentes activadores de la apoptosis es el citocromo C derivado del espacio
intermembrana de la mitocondria. Su presencia en el citosol activa una cascada de
enzimas protelticas denominadas caspasas, en conjunto con otras protenas. La
activacin de las caspasas lleva a la destruccin de protenas claves en la
mantencin de la estructura celular, como ejemplo se puede citar la degradacin
de una protena que inhibe la enzima que destruye el ADN (DNAasa activada por
caspasas, CAD), liberando CAD para clivar el material gentico.

Los miembros de la familia de protenas Bcl2 estn ubicados

preferentemente en la membrana externa y se ha demostrado que la fraccin
citoplasmtica enriquecida de mitocondrias es capaz de inducir la apoptosis
nuclear. El estrs oxidativo que induce la apoptosis es frenado por las protenas
Bcl2, es por lo tanto un factor antiapopttico.

125
 En la mitocondria tambin se encuentran distribudas las caspasas
mitocondriales, cistn-proteasas que una vez activadas constituyen un punto de no
retorno. As, las caspasas 2 y 3 estn ubicadas en el espacio intermembrana de la
mitocondria, asociado con la membrana interna. La caspasa-9 est asociada con
la membrana externa y est expuesta al compartimiento citoslico.

PEROXISOMAS

Peroxisomas organizacin para la destoxificacin celular, metabolismo de

lpidos y de hormonas esferoidales.

Los peroxisomas (microcuerpos) son organelos presentes en todos los

tipos celulares, con la excepcin de los glbulos rojos. Son cuerpos de forma
ovalada o esfrica, limitados por una nica membrana lisa. La matriz se aprecia
granulosa y homognea. Normalmente son esfricos, pero tambin hay de formas
elongadas, tubulares o reticuladas tienen un dimetro vara de 0,1 a 1 m, y su
nmero vara entre 100 y 1000 por clula, siendo en las clulas hepticas y
renales normalmente muy numerosos. La membrana del peroxisoma es
+ +
impermeable a la mayora de las molculas, incluyendo NAD , NADP , protones y
acetil CoA, creando as un ambiente nico dentro de la clula. La matriz del
peroxisoma contiene enzimas involucradas en numerosos procesos metablicos.
Son responsables de la -oxidacin de cidos grasos de cadena muy larga, de la
sntesis de plasmalgenos. Los plasmalgenos son una importante clase de
fosfolpidos del tejido cerebral en los cuales uno de los cidos grasos est unido al
glicerol por un enlace ter en vez de un enlace ster. Los peroxisomas intervienen
en el metabolismo de los radicales oxigenados libres, en la sntesis de colesterol,
en el metabolismo del estradiol, en la formacin de cidos biliares, en el
catabolismo de las purinas, prostaglandinas y leucotrienos.

Biognesis de los peroxisomas.

El modelo de ensamble del peroxisoma implica tres pasos:

1. Formacin de la membrana del peroxisoma, probablemente desde el retculo

endoplsmico.

126
2. Importacin de las protenas de membrana del peroxisoma. Estas protenas de
membrana son sintetizadas fuera del peroxisoma, en la va citoslica, en
polirribosomas libres, son plegadas y enseguida transportadas e insertadas en la
membrana del organelo. Son codificadas por los genes pmp.

3. Importacin de las protenas de la matriz del peroxisoma a travs de la

membrana del peroxisoma.

Dado que los peroxisomas tienen una vida media de 5-6 das (son
destruidos por autofagia), los nuevos peroxisomas se forman por el crecimiento y
fisin (de un peroxisoma se originan dos) posterior de peroxisomas existentes. El
peroxisoma no tiene un genoma propio ni ribosomas; por lo que todas las
protenas y lpidos de membrana son sintetizados fuera del peroxisoma, en la va
citoslica. Los fosfolpidos provienen de la membrana citoslica del REL y son
transportados a la membrana del peroxisoma por protenas intercambiadoras. Las
protenas destinadas a los peroxisomas, ya sea a sus membranas o matriz,
provienen de ribosomas libres en el citosol (va citoslica) y son selectivamente
conducidas al peroxisoma.

Los fosfolpidos de la membrana del peroxisoma son principalmente

fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina, con una tendencia hacia los cidos grasos
de cadena ms larga que otras membranas. Los fosfolpidos son sintetizados en el
retculo endoplsmico y transportados a la membrana del peroxisoma por un
mecanismo an desconocido. Este caso ocurre tambin en la mitocondria. Los
fosfolpidos de la mitocondria se sintetizan en el retculo endoplsmico y tal vez se
mueven desde el retculo endoplsmico a la mitocondria en sitios muy vecinos.
Este mecanismo se puede aplicar a los peroxisomas, y esta sugerencia est
apoyada por datos morfolgicos de vecindad entre retculo endoplsmico y
peroxisomas. Alternativamente, se ha especulado que vesculas especializadas
pueden contener una o pocas protenas que especifican su destino. Pequeas
vesculas diferentes de los peroxisomas maduros han sido identificados en la
levadura Pichia pastoris, que llevan dos protenas Pex1p y Pex6p. Estas peroxinas
son miembros de la familia de las AAA ATPasas, algunos miembros de los cuales
estn implicados en los eventos de fusin de membrana. Se ha intentado
especular que estas vesculas podran transportar los fosfolpidos a los
peroxisomas.

127
 La biognesis de los peroxisomas es controlada por protenas codificadas
por los genes pex, denominadas peroxinas, que se encuentran distribuidos en
varios pares de cromosomas en el genoma humano. Las peroxinas pueden ser
receptores solubles o unidos a la membrana del peroxisoma. Se han descrito al
menos 14 peroxinas (Tabla 2) que cumplen distintas funciones en el transporte de
las protenas a la matriz o a la membrana, fusin de peroxisomas, proliferacin de
peroxisomas y reconocimiento de otras peroxinas.

Las protenas destinadas a los peroxisomas contienen un pptido seal,

denominado PTS (seal de transporte al peroxisoma). Esta seal puede ser en la
mayora de las protenas importadas al peroxisoma (95 %) que consta de 3
aminocidos (Ser-Lys-Leu) prximo a su extremo carboxilo, y se denomina PTS1.
Un nmero limitado de protenas de la matriz del peroxisoma contiene una seal
en el extremo amino terminal, PTS2, que es un nonapptido (Arg-Leu- X(5)-His-
Leu, X(5) corresponde a 5 posiciones de aminocidos en la secuencia de la
protena, puede ser cualquier aminocido). Ejemplo de protena que lleva la seal
PTS2 es la mevalonato quinasa humana. Dichas seales son reconocidas por las
peroxinas Pex5p que reconoce la seal PTS1 y Pex7p que reconoce la seal
PTS2, ambas peroxinas se ubican en el citosol. A diferencia de la mitocondria
cuyas protenas son importadas en un estado desplegado, los peroxisomas son
capaces de importar protenas a su matriz en un estado plegado.

3. Transporte de las protenas de la matriz del peroxisoma.

Las protenas destinadas a la matriz del peroxisoma son sintetizadas en la

va citoslica de manera inducible, es decir los genes nucleares que sintetizan
estas protenas son activados cuando se necesitan estas protenas. Una vez
sintetizadas estas protenas son transportadas a los peroxisomas por protenas
especiales.

Transporte de protenas que llevan la seal PTS1.

El transporte de las protenas sintetizadas en la va citoslica que llevan la

seal PTS1 con destino a la matriz del peroxisoma siguen los siguientes pasos:

128
1. Unin receptor-ligando. Las protenas destinadas a la matriz del peroxisoma
que llevan la seal PTS1 son reconocidas por la peroxina Pex5p citoslica, una
protena que contiene TPR en el extremo carboxilo. La seal PTS1 se une al
extremo carboxilo terminal de la peroxina formando un complejo Protena
transportada (PTS1)- Pex5p.

2. Transporte y anclaje al peroxisoma de los complejos receptor-ligando en la

membrana peroxisomal. Anclaje al receptor. El complejo luego se une a peroxinas
ubicadas en la membrana del peroxisoma por el extremo amino terminal de
Pex5p. Las peroxinas de la membrana del peroxisoma Pex13p, Pex14p, Pex17p
sirven de sitio de anclaje para el complejo Protena transportada (PTS1)-Pex5p.
Pex5p se asocia a Pex14p inicialmente y luego con Pex13p y con Pex17p. El
aparato de traslocacin ubicado en la membrana del peroxisoma permite la
liberacin de las protenas a la matriz del peroxisoma.

Tabla 2. Peroxinas y su funcin en el peroxisoma.

(Kurbatova EM, Dutova TA, Trotsenko, YA. 2005. Structural, functional, and
genetic aspects of peroxisome biogenesis. Russ J Gen 41(2): 149-165.)

Peroxina Ubicacin o Funcin Interaccin con otras Locus

peroxinas
Pex1p Implicada en la fusin de peroxisomas y Pex6p 7q21-q22
transporte de protenas a la matriz del
peroxisoma
Pex2p Protena integral de membrana, contiene Pex12p 8q21.1
Zinc, implicada en el transporte de
protenas a la matriz del peroxisoma
Pex3p Protena integral de membrana, implicada Pex19p 6q23-q24
en el ensamble de la membrana del
peroxisoma
Pex5p Receptor de la protena de la matriz PTS1 Pex7p, Pex12p, 12p13.3
Pex13p, Pex14p
Pex6p Implicada en la fusin de peroxisomas y Pex1p 6p22-p11
transporte de protenas a la matriz del
peroxisoma
Pex7p Receptor PTS2 Pex5p, Pex13p, 6q21-q22.2
Pex14p

129
Pex10p Protena integral de membrana, contiene Pex12p 1p36.32
Zinc, implicada en el transporte de
protenas a la matriz del peroxisoma
Pex11p Protena integral de membrana, contiene Pex19p
Zinc, implicada en el transporte de
protenas a la matriz del peroxisoma
Pex12p Protena integral de membrana, implicada Pex5p, Pex10p, 17q21.1
en el transporte de protenas a la matriz Pex19p
del peroxisoma
Pex13p Protena integral de membrana, contiene Pex5p, Pex7p, Pex14p 2q14-p16
Zinc, implicada en el transporte de
protenas a la matriz del peroxisoma
Pex14p Protena perifrica o integral, sitio primario Pex5p, Pex7p,
de unin de receptores PTS1 y PTS2 Pex13p, Pex14p
Pex17p
Pex16p Protena integral de membrana Pex19p 11p11.2
Pex19p Protena citoslica, implicada en el Diferentes peroxinas 1q22
transporte de protenas a la matriz del de la membrana del
peroxisoma peroxisoma
Pex26p Protena integral de membrana Pex1p, Pex6p 22q11.21

3. Traspaso del ligando a la maquinaria de traslocacin, a travs de la membrana.

4. Reciclamiento del receptor de regreso al citosol. Pex5p es un receptor reciclable

o recuperable. Este proceso es mediado por un conjunto de peroxinas: las AAA
Atpasas: Pex1 y Pex6; Pex 4, una enzima conjugada con ubiquitina; y
probablemente un sitio de anclaje de las peroxinas Pex4 y Pex22. Pex1 y Pex6
actan luego de la traslocacin, seguidas de Pex4 y Pex22.

Transporte de protenas que llevan la seal PTS2.

Tambin las Pex13p y Pex14p son sitios de anclaje para Pex7p, una
protena que contiene WD-40, el receptor de las protenas con destina a la matriz
del peroxisoma y que llevan la seal PTS2.

130
Transporte de protenas de membrana y de lpidos del peroxisoma.

Adems de las protenas de la matriz, la proliferacin de los peroxisomas

requiere de protenas de membrana y de fosfolpidos. Los fosfolpidos son
sintetizados en el retculo endoplsmico y transportados a los peroxisomas. La va
de transporte no est muy clara an y se han sugerido dos hiptesis. La primera
que habran protena de intercambio directo de fosfolpidos entre las membranas
de los organelos (retculo endoplsmico y peroxisomas) y la segunda es que los
fosfolpidos seran traslocados por vesculas especiales que contendran protenas
sintetizadas en el retculo endoplsmico y que determinaran los sitios de
liberacin de los lpidos.

Las protenas de membrana del peroxisoma son sintetizadas en forma

constitutiva, es decir los genes que las codifican estn siempre activos y las
protenas que son sintetizadas en la va citoslica, con una sola posible excepcin,
son incorporadas directamente a la membrana en el citosol. El mecanismo de
incorporacin est poco claro an, aunque se ha demostrado que existen seales
de transporte en algunas protenas. Hay tres peroxinas implicadas en el proceso
de insercin de las protenas de membrana del peroxisoma: Pex3p, Pex16p y
Pex19p.

Las protenas de membrana del peroxisoma tienen las siguientes funciones:

1. Interactuar con las protenas del citoesqueleto. Debido a esta interaccin, las
membranas pueden afectar la morfologa del peroxisoma, el movimiento y la
distribucin de los peroxisomas durante la mitosis.

2. Intervienen en la importacin de sustratos, intermediarios metablicos y

cofactores de enzimas como FAD y NADH.
3. Son responsables de la degradacin selectiva de peroxisomas.

4. Forman complejos para la importacin de protenas, especficamente anclaje y

traslocacin de las protenas destinadas a la matriz del peroxisoma.

Adems, los peroxisomas desempean un papel importante en la

destoxificacin celular, contienen enzimas oxidativas, las que en conjunto son

131
alrededor de 50. Las ms comunes son: catalasa, urato oxidasa, D-aminocido
oxidasa y -hidroxicido oxidasa.

La catalasa degrada rpidamente al H2O2 producida en los peroxisomas

por la oxidacin de sustratos orgnicos (RH2 + O2 R + H2O2 ), mediante la
siguiente reaccin:

catalasa
2 H2O2 2 H2O + O2

El H2O2 (perxido de hidrgeno o agua oxigenada) es un poderoso agente

oxidante muy reactivo que puede formar radicales hidroxilos (HO) que atacan las
macromolculas celulares.

En las mitocondrias, RE y citoplasma ocurren reacciones en vas

metablicas normales que originan aniones superxidos (radicales libres), muy
reactivos y que pueden producir alteraciones de la bicapa lipdica de las
membranas, dao en el ADN, modificaciones en las protenas generando
disfuncin celular. La reaccin de dismutacin producida por la superxido
dismutasa transforma a los aniones superxido en H2O2 y O2 , siendo neutralizado
el perxido de hidrgeno por accin de la catalasa peroxisomal.

La catalasa en clulas hepticas y renales usa H2O2 para oxidar otros

sustratos que son txicos (TH2), tales como fenoles, alcoholes, formaldehdo y
cido frmico, y as neutraliza su toxicidad. La reaccin general es:

catalasa
H2O2 + TH2 2 H2O + T

Desrdenes en peroxisomas: Peroxisomopatas

Se pueden clasificar en tres grupos:

1. Grupo I: asociados a la biognesis de los peroxisomas.

Existe un desorden gentico, el sndrome cerebro hepatorrenal de
Zellweger, en el que hay una falla en la protena que incorpora las enzimas

132
oxidativas a la matriz del peroxisoma y que est caracterizado por la existencia de
peroxisomas vacos en las clulas de los afectados por esta enfermedad, los que
mueren antes del primer ao de vida.

2. Grupo II: asociados a la deficiencia de una enzima en particular.

3. Grupo III: asociados con deficiencias enzimticas mltiples.

NCLEO

Ncleo, organizacin para el almacenamiento y procesamiento de la

informacin gentica

El ncleo es el organelo que contiene la informacin gentica de la clula

a la forma de secuencias de ADN que en los organismos eucariontes
discretamente organizada en cromosomas. En esta parte del captulo se hace
referencia a la organizacin del ncleo en la interfase del ciclo celular, que es la
etapa del ciclo celular en que se encuentra organizado para que tenga lugar el
flujo de informacin gentica hacia el citoplasma, a travs de la transcripcin en el
ncleo hacia el citoplasma donde se realiza la traduccin.

En el ncleo se sintetiza la molcula de ARN teniendo como molde la

informacin contenida en el ADN de los cromosomas y ocurre tambin la
maduracin o procesamiento del ARN heteronuclear o transcrito primario para
formar el ARN mensajero. La organizacin de los genes, la regulacin de la
expresin gnica y la generacin de traslocaciones cromosmicas (intercambio de
segmentos de cromosomas no homlogos), tiene lugar durante la interfase en el
ncleo. Durante la mitosis se interrumpe la organizacin del ncleo, los
cromosomas se condensan y se congregan en la placa metafsica, desaparece la
organizacin espacial tridimensional del ncleo. El ncleo es, por lo tanto, el
organelo ms dinmico de la clula. Almacena la mayor parte del material
gentico y es el sitio donde ocurre la mayor parte de los procesos regulatorios del
genoma. El ncleo contiene adems una variedad de estructuras dinmicas que lo
hacen un organelo con varios subcompartimientos que han sido delimitados
claramente aunque la interaccin funcional entre ellos an se desconoce.

133
 El ncleo est conformado por una matriz, la cariolinfa o nucleoplasma y
una envoltura continua con el retculo endoplsmico, denominada carioteca o
envoltura nuclear. La envoltura nuclear que una estructura conformada por dos
membranas, la membrana externa es contigua con el retculo endoplsmico
rugoso y frecuentemente est cubierta de ribosomas. La membrana interna y la
externa de la envoltura nuclear se fusionan en algunos trechos conformando los
poros nucleares que sirven en el trnsito de materiales entre ncleo y citoplasma.
El complejo de poro nuclear se ha demostrado que tiene una estructura de
canastillo que se prolonga hacia el nucleoplasma. Est conformado por grandes
complejos protecos embebidos en ambas membranas de la envoltura nuclear. En
las clulas de los mamferos estn compuestos por al menos 30 protenas
denominadas nucleoporinas. Slo dos de las nucleoporinas Pom121 y gp210, son
protenas integrales y por lo tanto anclan al complejo de poro a las membranas de
la envoltura nuclear, mientras todas las dems son sintetizadas como protenas
solubles en la va citoplasmtica. Estas protenas solubles se agrupan en bloques
como subcomplejos que posteriormente se ensamblan para conformar el poro
nuclear. Las nucleoporinas cumplen un rol especfico, se han clasificado 19
nucleoporinas basado en estudios de tiempo de residencia de las protenas, en
tres grupos: las nucleoporinas que cumplen funcin de andamiaje o de soporte
fsico, estas corresponden a alrededor de 10 nucleoporinas; las que cumplen una
funcin de adaptador estructural, alrededor de 6 y otras 3 que cumplen una
funcin regulatoria o transporte. Las molculas ms pequeas que 40 kDa pueden
difundir libremente a travs de los poros pero las de mayor tamao deben ser
transportadas a travs de los poros nucleares.

Transporte de sustancias a travs de los poros nucleares: Importinas y

Exportinas, intercambio ncleo citoplasma.

Una familia de protenas conocidas como importinas o exportinas, tambin

denominadas en conjunto carioferinas, median el movimiento de protenas y ARN
entre citoplasma y ncleo. Las protenas o ARN que son transportados
(cargamento o carga) contienen seales. Las protenas o ARN contienen la
secuencia seal de ubicacin nuclear (NLS) o secuencia seal de exportacin
nuclear (NES) que son reconocidas por importinas o exportinas respectivamente
La interaccin de la carga con su transportador es modulado por la pequea
GTPasa Ran. Para las importinas, la unin de la carga y Ran GTP es antagonista
y para exportinas la unin del cargo y RanGTP es cooperativa. El estado de unin

134
al nucletido de Ran, en efecto determina la identidad del compartimiento:
RanGTP en el nucleo y RanGDP en el citoplasma; y permite que el transportador
se una o libere la carga en el compartimiento apropiado. En este proceso del ciclo
de la Ran GTPasa participan numerosos factores accesorios incluyendo el factor
intercambiador de nucletidos RCC1, la protena activante citoplasmtica Ran
GTPasa RanBP1 y el factor de transporte nuclear 2 NTF2, todos ayudan en el
transporte manteniendo a Ran en su apropiado estado de unin a GTP o GDP o
modulando la interaccin de Ran con los transportadores. La familia
importina/exportina comparte varias caractersticas que incluyen un dominio amino
terminal de unin a Ran y la capacidad de moverse entre citoplasma y ncleo.

Otra estructura importante es la lmina perifrica nuclear fibrosa,

compuesta por microfilamentos intermedios, que rodea el interior de la cavidad de
ncleo adosada a la membrana interna de la envoltura nuclear. La lmina est
compuesta de las protenas denominadas lamina A/C y Beta 1 y Beta 2, y juega un
rol de regulacin en la estructura de la envoltura nuclear y anclaje de la cromatina
interfsica en la periferia nuclear. Las protenas de la lmina nuclear pueden
interactuar entre ellas, con protenas asociadas a la lmina, con protenas del
andamiaje nuclear y con la cromatina. Probablemente la mayora de las protenas
asociadas a la lmina interacten directamente con la cromatina. La lmina
nuclear se requiere para la regulacin apropiada del ciclo celular, organizacin de
la cromatina, replicacin del ADN, diferenciacin celular y apoptosis. Las
mutaciones en las protenas de la lmina nuclear pueden interrumpir estas
actividades y causar enfermedades genticas, denominadas laminopatas.

La membrana nuclear interna y la lamina nuclear tienen una composicin

proteica nica que incluye laminas nucleares, diferentes variantes polipeptdicas
de splicing asociados a la lmina (LAP1 y LAP2), emerina, Man1, receptor de
lmina B (LRB), otefina, nurima, "young arrest" y posiblemente UNC-84, quinasa
del receptor de la lamina B, p34 y p18. Las lminas corresponden a filamentos
intermedios del citoesqueleto del tipo V. La lamina A se expresa en clulas
diferenciadas, y es soluble en el citoplasma durante la mitosis. La lmina B se
expresa en todas las clulas y durante la mitosis tiende a permanecer unida a la
membrana. Los genomas de vertebrados contienen dos tipos de genes de lamina
B1 y B2 y un tipo de gen de lamina A. Estos tres genes codifican al menos 7
polipptidos distintos: lmina A, una lmina variante de A, C1 y C2, que son
variantes de splicing del gen lmina A y las lminas B1, B2 y B3. Lamina B3 es

135
una variante de splicing del gen B2. Las laminas B3 y C2 son especficas para
clulas germinales, donde probablemente juegan un rol en la reorganizacin de la
cromatina durante la meiosis. LAP1, LAP2, emerina, MAN1, LBR, nurima y UNC-
84 son todas protenas integrales de membrana. LAP2, emerin y Man1 comparten
un dominio homlogo de 43 residuos de aminocidos cerca del extremo N-terminal
denominado dominio LEM. LBR es una protena de unin a la lmina B que es
homloga de la reductasa esterol C14 ubicada en el retculo endoplsmico SR1 y
SR2. Nurima tiene cinco dominios transmembrana que median su marcaje a la
membrana interna, donde interacta con el andamiaje nuclear. La protena arresto
joven (YA o young arrest) es una protena codificada por genes maternos en la
mosca de la fruta, Drosophila y se requiere para la transicin desde meiosis a
mitosis. YA o protena de arresto joven es una protena perifrica de membrana
asociada a la lamina y la cromatina.

Diversas actividades nucleares requieren de la lmina nuclear, as por

ejemplo, durante la mitosis, el adecuado ensamble y desensamble de la lamina
nuclear se requieren para el progreso del ciclo celular. La lmina nuclear juega un
rol esencial en la organizacin nuclear por anclaje de la cromatina a la envoltura
nuclear. Se ha demostrado interaccin especfica entre histonas y laminas, entre
protenas con dominios LEM y BAF (BAF: barreras a factores de autointegracin) y
tambin entre LBR y HP1 (HP: protena asociada a heterocromatina). As las
interacciones entre estas protenas y sus respectivas protenas de interaccin en
la lamina estn probablemente implicadas en la organizacin del silenciamiento de
la cromatina en la periferia del ncleo, que da origen a la heterocromatina. Cabe
sealar que las histonas y las protenas HP-1 y BAF se distribuyen ampliamente
en el ncleo y no son especficas de la lmina. La protena UNC-84 facilita la
interaccin ncleo-centrosoma requerida para migracin y anclaje de nucleos
durante procesos del desarrollo de algunos invertebrados.

Tanto la envoltura nuclear, los complejos de poro nuclear y la lamina

nuclear son desensamblados de manera coordinada. El complejo COP I, que
juega un rol preponderante en el remodelamiento del Golgi, con la formacin de
vesculas, ha sido implicado en el proceso de la desorganizacin de la envoltura
nuclear y requiere de la interaccin del complejo de poro nuclear para ser
reclutado. Nup153 y Nup358/RanBP1, protenas residentes en el canastillo del
poro nuclear son las encargadas de reclutar COP I, la primera en el lado nuclear

136
del poro y la segunda (Nup358/RanBP1) en la cara citoplasmatica del poro, a
travs de la interaccin de los dedos de Zinc de estas protenas con el complejo
coatmero COP I. Se ha comprobado mediante el uso de anticuerpos contra estas
protenas impide la desorganizacin de la envoltura plasmtica en la mitosis.

El nucleoplasma est organizado en compartimientos que cumplen

funciones especficas, y se les ha definido como compartimientos porque:

1. Contienen subconjuntos de protenas residentes.

2. Pueden ser identificados morfolgicamente a travs del microscopio y
han sido experimentalmente visualizados en clulas vivas.
3. Algunos de estos compartimientos pueden ser aislados y ser
caracterizados bioqumicamente.

La eficiencia de la multitud de procesos que tienen lugar en el ncleo es

explicable slo si en ese espacio hay una organizacin de la matriz nuclear.

Los compartimientos descritos hasta ahora son el nuclelo, el

compartimiento de los factores de maduracin del ARN o de splicing (SFC), los
cuerpos de Cajal o cuerpos enrollados, los cuerpos de oncoprotena de leucemia
promieloctica o cuerpos PML, los dominios PTF, los dominios o territorios
cromosmicos, los canales intercromosmicos, los cuerpos PcG o polycomb, las
manchas nucleares IGC, Cuerpos Gemin, Cuerpos de Clivaje, entre otros.

El Nuclelo.

El nuclelo es la nica estructura subnuclear que es visible a la

microscopa ptica, como se puede apreciar claramente en las neuronas, en
hepatocitos, en oocitos de anfibios, etc. El nuclelo est conformado por una
regin fibrilar y una regin granular, el compartimiento perinucleolar, componente
fibrilar denso. Los nuclelos se forman en las regiones organizadoras del nuclelo
(NOR) ubicados en cromosomas especficos, en los cromosomas 13, 14, 15, 21 y
22. Las NOR contienen genes codificantes que transcriben activamente el ARN
ribosmico (ARNr).

137
El nuclelo est organizado en tres compartimientos:

1. El centro fibrilar, regin plida a la microscopa electrnica de

transmisin que est compuesta por fibrillas de 50 Angstrom de dimetro. Los
centros fibrilares contienen los genes de ARN ribosmico, en los cuales se realiza
la transcripcin. Cada gen activo contiene alrededor de 100 a 120 molculas de la
enzima ARN polimerasa que sintetizan cada transcrito primario en la periferia del
centro fibrilar, es decir en la interfase con el componente fibrilar denso.
2. El componente fibrilar denso regin que rodea al centro fibrilar est
formado de un material fibrilar denso que forma capas compactas.
3. El componente granular regin que contiene al centro fibrilar y al
componente fibrilar denso es una regin con abundante granulacin.

Esta arquitectura nucleolar refleja la maduracin vectorial de las partculas

pre-ribosmicas que se inicia en el centro fibrilar, pasan al centro fibrilar denso y
migran progresivamente al componente granular. A medida que ocurre el
procesamiento del ARNr (maduracin del ARN ribosomal) ocurren las
modificaciones del transcrito primario y el ensamble del ribosoma.

El nuclelo humano se encuentra rodeado por un casquete de cromatina

condensada que ocasionalmente penetra profundamente en el organelo
alcanzando el centro fibrilar, la cromatina perinuclear condensada y los centros
fibrilares son contiguos, y se ven como intersticios nucleolares.

Territorios o dominios cromosmicos.

Los cromosomas son las mayores subunidades fsicas del genoma. Su

naturaleza discreta es ms aparente durante la mitosis cuando se condensa la
cromatina. Sin embargo, entre el perodo G1 y G2 de la interfase tambin es
posible evidenciar la existencia de estas unidades discretas, dentro del
nucleoplasma se organizan los territorios de los cromosomas, de manera no al
azar. En las clulas de mamferos los territorios cromosmicos ocupan de
preferencia posiciones radiales en relacin al centro del ncleo de acuerdo a su
densidad de genes y posiblemente tambin a su tamao. Cada territorio
corresponde a la regin del ncleo ocupado por un cromosoma, es un lugar que

138
ocupa un cromosoma en el espacio del ncleo, que no se traslapa con el territorio
de otro cromosoma. As cada cromosoma ocupa una regin dentro del ncleo. Se
piensa que los genes activos de cada cromosoma se encuentran en territorios
libremente empaquetados en la superficie del nucleoplasma, hacia el centro del
ncleo; esta corresponde a la cromatina que replica tempranamente en la fase S
(eucromatina). La cromatina que replica tardamente en la fase S del ciclo celular
(Ver Captulo IV), que corresponde a la heterocromatina, ocupa la periferia
nuclear, cerca de la envoltura nuclear y la regin perinuclear. Algunos tipos
celulares muestran una banda de heterocromatina (cromatina inactiva) asociada a
la lmina nuclear. En adicin, cantidades variables de heterocromatina se
observan en las regiones ms internas del ncleo.

As, la cromatina que replica tempranamente (eucromatina) est separada

de la cromatina que replica tardamente (heterocromatina). Una caracterstica de
esta fase del ciclo celular es que los cromosomas homlogos no estn apareados
en la interfase. Sin embargo, los detalles estructurales de los territorios
cromosmicos no se ha establecido claramente an, pero la fibra de cromatina
est probablemente plegada en una compleja estructura de orden superior que es
permeada por canales de diferentes tamaos. Esto crea un cuerpo poroso de
cromatina con una gran superficie y permite el acceso de factores regulatorios a
las secuencias tanto en la superficie externa de un territorio cromosmico como
dentro del territorio cromosmico.

Se define tambin los dominios intercromosmicos que son las

regiones del ncleo no ocupados por cromosomas, tienen la forma de canales, por
lo que se les denomina tambin canales intercromosmicos. Los canales
intercromosmicos contienen la cola de poliA que se agrega a los ARN en el paso
final de la maduracin del mensajero, antes de ser transportado desde la periferia
del ncleo al citoplasma para ser traducido en los ribosomas. La traduccin ocurre
luego que el mensajero ha abandonado el ncleo al pasar por el poro nuclear.
Tambin es posible encontrar all, factores de transcripcin, de maduracin del
ARN (splicing), de replicacin y reparacin del ADN, etc.

Esta organizacin de la arquitectura del ncleo permite el ordenamiento de

las funciones de la informacin gentica en la cromatina del ncleo, como tambin
la regulacin gnica como un modelo territorio cromosmico- dominio
intercromosmico.

139
 Una clasificacin de los territorios nucleares o subcompartimientos
nucleares hasta ahora no mencionados que se da a continuacin:

Los cuerpos policomb (del ingls comb= peineta) contienen grupos de

protenas asociadas con la heterocromatina pericentromrica, que es la cromatina
que no transcribe en ARN y que se ubica alrededor del centrmero del
cromosoma. Estos dominios varan en nmero, tamao y composicin proteca.
No est claro si estos dominios son compartimientos de almacenamiento o estn
implicados en el silenciamiento de genes, como en el caso del silenciamiento
prolongado de genes hometicos Hox en Drosophila. Se han descrito grupos
policomb en humanos y ratones.

Los factores de maduracin del ARN transcrito primario a mensajero se

encuentran reunidos en pequeos grupos de 25 a 50 distribuidos en todo el
nucleoplasma, se denominan manchas nucleares. Las manchas nucleares son
un tipo de grnulos de intercromatina. Corresponden a estructuras que almacenan
y pueden llegar a ensamblar los componentes de la maquinaria de maduracin del
ARN (splicing).

Un cuerpo de Cajal (o cuerpo enrollado) es una estructura subnuclear

definida por la presencia de la proteina coilina, contiene protenas adicionales y
molculas de ARN, en particular, snRNA7 se encuentra en altas concentraciones;
y podra ser el sitio de ensamble de ARN pequeos: snRNA y snoRNA que
ensamblan protenas en el procesamiento del ARN. El ARN snRNA7, participa en
el procesamiento del transcrito primario de las histonas. Coillina y snRNA7
participaran en la nucleacin de los Cuerpos de Cajal.

Los cuerpos de Cajal se consideran organelos nucleares que juegan un rol

fundamental en la transcripcin y procesamiento del ARN. En el nucleo de
Xenopus se han descrito de 50 a 100 Cuerpos de Cajal de 10 micrmetros de
dimetro. Al someter a un estrs trmico a los oocitos de Xenopus, se originan los
Mini Cuerpos de Cajal, de 2 micrmetros de dimetro. Se ha planteado que los los
mini cuerpos de Cajal se originan desde la superficie de B-snurposomas. Los B-
snurposomas son cuerpos esfricos de 2 a 4 micrmetros de dimetro dispersos
por el nucleoplasma del ncleo o vescula germinal del oocito de Xenopus.
Corresponden a las manchas nucleares de los nucleos interfsicos. Cabe sealar
que el oocito es un gameto producto de la meiosis.

140
 Los cuerpos de Cajal y los nuclelos comparten varias caractersticas
biolgicas que incluyen una estrecha proximidad fsica, similar composicin de
protenas, desensamble durante la mitosis y asociacin con loci polimrficos
especficos. Los Cuerpos de Cajal estn asociados preferencialmente con sitios
cromosmicos especficos en cromosomas (locus) que codifican para histonas y
para varios tipos de ARN nuclear pequeos (del ingls: small nuclear RNA). Sin
embargo, la mayor parte de los Cuerpos de Cajal estn en forma libre en el
nucleoplasma.

Un cuerpo Gem es una estructura subnuclear, similar a los cuerpos de

Cajal y frecuentemente adyacentes a estos; tambin contiene protenas
especficas y pequeos ARN. Tienen estrecha asociacin con las protenas SMN y
gemin2. Se encuentran frecuentemente yuxtapuestos a los cuerpos de Cajal y
aunque alguna vez se consideraron dos estructuras separadas pero relacionadas,
los cuerpos gem y de Cajal son considerados ahora dos manifestaciones de la
misma estructura. La comunicacin entre los cuerpos de Cajal y los cuerpos gem
es mediante coilina. La coilina contiene residuos de arginina dimetilada dentro de
una caja que modula la afinidad con SMN (protenas motoras neuronales). La
inhibicin de la metilacin o mutacin de la caja RG decrece la interaccin de
coilina con SMN, dando por resultado los cuerpos Gem separados de los cuerpos
de Cajal. Cuando la coilina est metilada, los cuerpos de Cajal y los cuerpos Gem
son coincidentes.

La funcin de los cuerpos de Cajal y los Gem es estar involucrados en la

biognesis y el trfico de snoRNP y snRNP, que se mueven a travs de los
cuerpos de Cajal en ruta a los nuclelos o manchas de splicing o de maduracin
del ARN. Evidencias recientes indican que los Cuerpos de Cajal podran ser el
sitio de la biognesis de ARN de la telomerasa. Tambin contienen fibrillarina, una
posible ARN metiltransferasa.

Los cuerpos de clivaje aparecen con frecuencia como 1 a 4 focos de 0,3

a 1 micrmetro y contiene varios factores que estn implicados especficamente
en los pasos de clivaje y poliadenilacin del procesamiento del transcrito primario.
Estos factores incluyen el factor de estimulacin de clivaje (CstF) y el factor de
especificidad de la poliadenilacin (CPSF), ambos necesarios para el
procesamiento de terminacin 3 de la poliadenilacin de los mensajeros. Los
factores de clivaje generalmente se traslapan o se localizan adyacentes a los

141
cuerpos de Cajal, con un subconjunto no asociado a los cuerpos de Cajal que
contienen el ARN transcrito primario. Tambin se ha demostrado que la protena
DEAD reside en los cuerpos de clivaje donde no hay ARN transcrito primario,
sugiriendo que podran existir diferentes subclases de cuerpos de clivaje. La
asociacin de los cuerpos de clivaje y los cuerpos de Cajal es dinmica y
dependiente del ciclo celular. Los cuerpos de clivaje aparecen coincidentes con los
Cuerpos de Cajal en G1, luego adyacentes a estas estructuras en la fase S y
finalmente aparecen menos definidos o ausentes ambos en G2.

Heterocromatina. El ADN en las clulas eucariticas se encuentra

organizado asociado a protenas denominadas histonas formando la cromatina. La
cromatina es un complejo de nucleoprotenas que cumple la funcin de facilitar la
regulacin gnica, la replicacin del ADN, la cohesin de las cromtidas entre
otros aspectos de organizacin celular. Se pueden distinguir mediante tinciones en
el ncleo dos regiones de cromatina que se tien con distinta intensidad, la regin
teida con mayor intensidad corresponde a heterocromatina y aquella menos
intensa a eucromatina. La heterocromatina se encuentra distribuida en
centrmeros (banda C-positiva), en el brazo largo del cromosoma Y de humanos y
de ratones.

La heterocromatina tiene una estructura ms compacta que el resto de la

cromatina. Los factores responsables de esta caracterstica no han sido
completamente caracterizados, uno de estos factores corresponde a la protena de
la heterocromatina HP1 que se une a la fibra de cromatina mediante un residuo
metilado en lisina 9 de la cola de la histona H3. De acuerdo a estudios recientes el
termino heterocromatina es usado en forma incorrecta al describir como cromatina
transcripcionalmente silenciada. Los genes reprimidos tienen factores protecos
similares asociados a ellos como heterocromatina pero en muchos casos slo una
corta regin de la fibra de cromatina est cerrada. Por lo tanto estas regiones no
constituyen dominios de heterocromatina cuando es posible reabrir estas
secuencias y expresar los genes de estos loci. La verdadera heterocromatina
cubre grandes regiones de la cromatina que es capaz de formar un dominio
represivo dentro del ncleo. El silenciamiento de otros genes puede ser facilitado
traslocndolos al interior de estos dominios silenciados, generalmente en la regin
central de los dominios cromosmicos, mientras que los genes
transcripcionalmente activos y los genes que pueden ser reactivados se
encuentran hacia el exterior de estas regiones silenciadas, frecuentemente en la

142
superficie de estos territorios. Existira un complejo de remodelamiento de la
cromatina HuCHRAC localizado en la heterocromatina que facilitara el
posicionamiento regular de los nucleosomas dentro de la heterocromatina
permitiendo por lo tanto la formacin estable de la estructura de cromatina o bien
la heterocromatina funcionara como un estanque de complejos protecos que son
requeridos para reprimir la transcripcion de genes tales como histona desacetilasa
y complejos de remodelacin de nucleosomas.

Los dominios OPT (Oct/PTF/Transcripcin) son dominios

transcripcionalmente activos ricos en PTF, Oct1, TBP, SP1 y ARN polimerasa II.
Estos dominios tienen 1 a 1,5 micrmetros de dimetro y adems de los factores
de transcripcin, contienen tambin transcritos primarios en formacin. Cada
ncleo de clulas de mamfero contiene de uno a tres dominios OPT que aparecen
en G1, en estrecha proximidad al ncleolo, y desaparecen en fase S. Los dominios
OPT aparecen asociados con una banda del brazo corto del cromosoma 6 (banda
6p10) y al cromosoma 7, por lo tanto estara asociado a genes especficos en
estos cromosomas donde se concentran factores de procesamiento y transcripcin
que facilitan la expresin de estos genes. La funcin precisa de estas estructuras
nucleares es desconocida. Con el nuclelo adems comparten otro rasgo similar
aparte de la asociacin con genes especficos, y es la de contener ARN
polimerasas. El nuclelo contiene ARN polimerasa I que transcribe genes
ribosomales. Los dominios OPT contienen ARN polimerasa II y III. Los dominios
OPT y los nuclelos pueden aparecer prximos entre s en el ncleo, pero no se
traslapan.

Nucleoplasma propiamente tal contiene protenas nucleares difusas que

no se encuentran presentes en los nucleolos como por ejemplo muchos factores
de transcripcin con motivo dedos de zinc.

Miopatas mitocondriales.

Las miopatas mitocondriales muestran a la microscopa electrnica

mitocondrias de morfologa anormal como por ejemplo escasez de crestas dando
a la mitocondria un aspecto vacuolar o bien apareciendo como remolinos formado
panales al interior de la mitocondria. Estos cambios estructurales tienen
repercusin en transtornos en el transporte de electrones o en la ATP sintasa.

143
Peroxisomopatas.

Los peroxisomas que presentan un malfuncionamiento son la causa de

numerosas enfermedades genticas humanas causadas ya sea por la deficiencia
en la actividad de alguna enzima, que por tanto bloquea una va metablica o bien
por defectos en el transporte hacia la matriz del peroxisoma de los componentes
de este compartimiento. Las vas metablicas principales que ocurren en la matriz
del peroxisoma son:

a) beta oxidacin de cidos grasos

b) alfa oxidacin de cidos grasos
c) sntesis de colesterol y varios isoprenoides
d) sntesis de ter fosfolpidos
e) biosntesis de cidos grasos poliinsaturados

Algunas de las enfermedades mejor descritas son las denominadas de

acumulacin de cidos grasos de cadena muy larga como la Adenoleucodistrofa
ligada al cromosoma X (X-ALD), que implica alteraciones en la va de la beta
oxidacin de los cidos grasos, acumulndose en este caso cidos grasos
saturados de 24 y 26 carbones. Se han descrito seis fenotipos distintos. Algunos
de los cuales se caracterizan por una progresiva prdida de mielina cerebral,
inicindose en la infancia, alrededor de los 3 a 10 aos, es una enfermedad muy
severa, muriendo los nios que la padecen en dos o tres aos del inicio de los
primeros sntomas. Todos los enfermos corresponden a nios que han heredado
el gen defectuoso de su madre portadora sana. Hay otro fenotipo correspondiente
a la enfermedad iniciada en la adolescencia entre los 10 y 21 aos de edad. Un
tercer fenotipo corresponde a enfermas heterocigotas que desarrollan la
enfermedad en la etapa adulta, muchas de ellas mal diagnosticados
confundindose los sntomas con psicosis o esquizofrenia.

El gen ald codifica una protena sintetizada en la va citoslica, ALD,

semejante a una protena que forma el canal de cloruros cuyo defecto causa la
fibrosis qustica, perteneciente a las denominados protenas ABC. La protena ALD
es un semitransportador con seis dominios transmembrana que funciona como
homodmero o heterodmero con otros transportadores ABC. Este transportador
ALD est involucrado en el transporte de steres Coenzima A-C26:0 a travs de la

144
membrana del peroxisoma, por lo que su defecto es causa de acumulacin de
estos cidos grasos en la clula.

Las personas que presentan la enfermedad XALD, tienen un gen alterado

por mutaciones de distinta naturaleza tales como deleciones, inserciones y
mutaciones de punto, lo que a nivel molecular puede manifestarse como ausencia
total de la protena en la membrana del peroxisoma.

Laminopatas, como ejemplos de disfuncin patolgica del ncleo.

Las laminopatas son enfermedades causadas por mutaciones en las

lminas tipo A en diferentes procesos celulares, afectan principalmente los tejidos
de origen mesodmico. Las lminas, estn directamente implicadas en procesos
de divisin celular y apoptosis, principalmente porque la lmina debe
desintegrarse a fin de permitir que transcurran estos procesos.

Los niveles celulares, vale decir la concentracin de las lminas A/C estn
directamente relacionadas con la actividad proliferativa de la clula. La expresin
de las lminas es incrementada en clulas altamente diferenciadas, con el fin de
mantener la estructura del ncleo, mientras que su expresin es disminuida en
clulas con alta capacidad proliferativa.

El gen que codifica para las lminas de tipo A (LMNA) produce por splicing
alternativo cuatro protenas distintas que son lamina A, lamina Adel10, lamina C,
lamina C2. Se ha demostrado en al menos nueve patologas, las mutaciones en
este gen es responsable de la manifestacin de estas enfermedades. Entre ellas
hay algunas de envejecimiento temprano como un caso atpico de Sndrome de
Werner y la progeria de Hutchinson-Gilford. Hay algunas distrofas musculares,
que se heredan en forma autosmica dominante como la distrofia muscular
Emery-Dreifuss y la distrofia muscular cintura-piernas que presenta problemas de
conduccin atrioventricular. La enfermedad de Charcot-Marie-Tooth tipo 2, una
enfermedad autosmica recesiva que se manifiesta como una neuropata axonal.

145
Referencias.

Becker W.M., Kleinsmith I.J. & Hardin J. 2000. The World of the Cell (San
Francisco, Ca. B Cummings). p. 753.

Coulombe PA, Ma L, Yamada S, Wawersik M. 2001. Intermediate filaments at a

glance. Journal of Cell Science 114, 4345-4347.

Kurbatova EM, Dutova TA, Trotsenko, YA. 2005. Structural, functional, and genetic
aspects of peroxisome biogenesis. Russ J Gen 41(2):149-165.

Smith CA & EJ Wood 1997. Biologa Celular. Addison-Wesley Iberoamericana.

Wilmington. Delaware. USA. 367 pp.

146
 CAPITULO IV
CICLO CELULAR, APOPTOSIS Y ENVEJECIMIENTO

Fidelina Gonzlez, Gabriela Sconzo, Giussepina Turturici, Fabiana Geraci, Giovanni Giudice
Depto Biologa Celular. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile.
Dipartamento di Biologia Cellulare e dello Sviluppo. Universit di Palermo. Palermo. Italia.

1. Ciclo celular.
1. Mitosis.
2. Meiosis.
3. Genes y control del ciclo celular.
4. Genes supresores y protooncogenes.

2. Ciclo celular y apoptosis.

1. Apoptosis versus necrosis.
2. Cambios morfolgicos.
3. Mitocondria y apoptosis.
4. Formacin del apoptosoma. Estructura del apoptosoma humano.
5. Caspasas.

3. Tipos de apoptosis.
1. Apoptosis mediada por el ligando Fas.
2. Apoptosis inducida por TNF (factor necrtico tumoral).
3. Apoptosis estimulada por linfocitos T citotxicos.
4. Apoptosis por disminucin de factores de crecimiento.
5. Lesin del ADN mediada por apoptosis.

4. Envejecimiento.

147
 DESARROLLO DE LOS TEMAS

Ciclo celular.

Una de las propiedades de la materia viviente es la capacidad de

autoreplicarse. La clula se reproduce duplicando su contenido y dividindose en
dos. En los organismos multicelulares los ciclos de divisin celular se requieren
para reemplazar las clulas que se pierden en forma natural, en los organismos
unicelulares es la forma de aumentar el nmero de individuos de la poblacin, esto
incluye a eucariontes y procariontes.

Se puede definir el ciclo celular como una serie ordenada de eventos que
culmina en la duplicacin celular.

El rol del ciclo celular en eucariontes se puede resumir en los siguientes

puntos:

a) Aumento del nmero de clulas en un organismo.

b) Reparacin de clulas que se han perdido en forma natural, incluyendo a
aquellas que se pierden por apoptosis.
c) Participacin en la diferenciacin y el desarrollo de los organismos.
d) Forma de reproduccin de unicelulares.

Fases o etapas del ciclo celular.

El ciclo celular est dividido en cuatro fases principales: G 1, S, G2 y M. Las

fases G1, S, G2 son parte de la interfase y M corresponde a la mitosis.

Fase G1. En esta etapa, la clula aumenta de tamao, incluyendo aumento

de organelos, estructuras protecas y enzimas. Es una etapa caracterizada por
una intensa actividad metablica. La clula aumenta el nmero de ribosomas y
algunas estructuras como los elementos de citoesqueleto son sintetizados. Las
estructuras membranosas (organelos) como los componentes de la va secretora:
Complejo de Golgi, vacuolas y vesculas se forman a partir del retculo
endoplsmico que aumenta de tamao por sntesis de protenas y lpidos

148
generndose as nuevas membranas que migran como vesculas asociadas al
citoesqueleto para formar las nuevas estructuras. Las mitocondrias tambin se
duplican. Se inicia la duplicacin de los centrolos que culmina en la fase G2,
donde se inicia la separacin de estas estructuras. La duracin de esta etapa es
variable, y puede abarcar desde algunas horas a meses o aos. Las clulas que
no se dividen como las clulas nerviosas o del msculo esqueltico entran en esta
etapa a una etapa en la que permanecen debido a su diferenciacin celular que
corresponde a G0. Los linfocitos, clulas que cumplen funciones de defensa celular
se dividen en respuestas a ciertos estmulos, por lo tanto se dividen relativamente
poco en comparacin a otras clulas, estos se encuentran en G. Al final de esta
etapa se inicia la sntesis de las protenas necesarias para que ocurra la
replicacin del ADN en la fase S.

Fase S. En esta etapa se duplica el ADN y protenas asociadas. A medida

que avanza el ciclo el ADN celular aumenta en cantidad hasta un mximo que
corresponde al ADN nuclear completamente duplicado. En este momento hay dos
cromtidas por cromosoma, y corresponden a las cromtidas hermanas.

En la fase S hay una replicacin diferencial de la cromatina del ncleo. En

primer lugar se duplica la eucromatina y en la fase final lo hace la
heterocromatina.

La duracin de la fase S se ha establecido en 7 a 8 horas en clulas de

mamfero en cultivo.

Fase G2. Durante esta fase continua el crecimiento celular y se sintetizan

las protenas que participarn en la mitosis. Se terminan de formar los centrolos y
al final empieza la separacin de estos, evento que culmina en la metafase donde
conforma el eje de anclaje del huso mittico necesario para el movimiento de los
cromosomas.

Fase M. La mitosis se divide al menos en cuatro etapas que son: Profase,

Metafase, Anafase y Telofase.

Profase: se inicia con la condensacin (enrollamiento de la cromatina)

para conformar los cromosomas. Cada cromosoma consta de dos cromtidas
hermanas que se duplicaron en la fase S de la interfase. Las cromtidas

149
permanecen unidas a travs del centrmero, que es requerido en lnafase para una
adecuada segregacin o separacin de las cromtidas hermanas. Al final de la
profase cada centrolo se mueve a los polos de la clula para conformar el huso
mittico. El huso mittico es una estructura conformada por dmeros de tubulinas
que conforman microtbulos como se vi en un captulo anterior. El huso se
ensambla inicialmente por fuera del nucleo. A nivel celular los cambios observados
en la clula en mitosis son un aumento de la viscosidad del citoplasma en general,
desorganizacin de los organelos de la va secretoria, y al final de la profase
vesiculacin de la envoltura nuclear. Estas vesculas permanecen visibles
alrededor del huso mittico. El huso mittico empieza a crecer hacia el espacio
nuclear. Alrededor del centrmero se organizan complejos protecos
especializados denominados cinetocoros a los cuales se anclan las fibras del
huso. Denominndose a estas fibras como fibras cromticas o cinetocricas a
diferencia de aquellas que unen los polos de la clula como acromticas o polares.
Las fibras cinetocricas ejercen traccin sobre los cromosomas.

Metafase: Los microtbulos cinetocricos alinean los cromosomas en el

plano ecuatorial de la clula. Cada cromosoma es sometido a tensin en la placa
metafsica manteniendo a los cromosomas en el centro de la clula, conformando
la placa metafsica, y conectado a travs del cinetocoro con el polo mediante las
fibras del huso.

Anafase: La anafase se inicia con la separacin de los centrmeros de los

cromosomas a travs de la traccin que hacen las fibras del huso hacia los polos
de la clula, logrndose la separacin de las cromtidas hermanas. Cada
cromtida en los polos de la clula constituye un cromosoma que formara parte
del nuevo ncleo y a partir del cual se replicar la informacin en la fase S del
ciclo celular. La anafase es una de las etapas ms cortas de la mitosis.

Telofase: La telofase implica el fin de la mitosis, las cromtidas hermanas

separadas llegan a los polos y los cinetocoros desaparecen. Los microtbulos
cinetocricos se elongan an ms y se reorganiza la envoltura nuclear alrededor
de los cromosomas hijos. La cromatina se expande y reaparecen los nuclelos. La
divisin del citoplasma denominada citocinesis o citoquinesis se inicia por un
proceso denominado clivaje o formacin del surco de clivaje, inicindose durante
la anafase. En las clulas animales la membrana celular de la mitad de la clula se
invagina para formar una depresin de clivaje que se profundiza gradualmente

150
entre los don ncleos hijos. En el lugar del surco de clivaje, se forma un anillo de
actina contrctil perpendicular a las fibras del huso mittico.

Meiosis.

La meiosis es una divisin celular especializada que ocurre en las clulas

germinales dando origen a los gametos. En la meiosis hay dos divisiones celulares
sucesivas sin duplicacin del ADN, esta ocurre slo antes de entrar a la meiosis.
La obtencin del nmero haploide ocurre al final de la primera divisin meitica,
cuando se separan los cromosomas homlogos apareados durante la Profase I.
La importancia gentica de la meiosis en la variabilidad de la especie se puede
resumir en lo siguiente:

En el Paquinema de Profase I ocurre entrecruzamiento o croosing-over,

que es el intercambio de segmentos de ADN entre cromtidas homlogas
catalizado por ndulos de recombinacin que conforman el complejo
sinaptonmico. En este proceso es cortado un fragmento de ADN de una
cromtida homloga por la actividad nucleasa del ndulo y fusionado a su
homloga por una ligasa procediendo luego a la correccin de posibles eventos de
mal apareamiento de bases mediante polimerasas.

El complejo sinaptonmico est conformado por dos elementos

protecos laterales al que se sujeta cada cromtida homloga duplicada y uno
central que sirve de nexo entre los elementos laterales.

En Metafase I ocurre el evento de mxima recombinacin existente, y es

la permutacin cromosmica, en este caso se ordenan al azar los cromosomas
heredados de ambos padres, respecto a los polos de la clula. Las posibles
combinaciones de los genomas haploides paternos y maternos alcanzan a ser en
23
la especie humana de 2 , es decir entre 8 y 9 millones de combinaciones
posibles.

Tanto en Anafase I como en Anafase II ocurre la segregacin, de los

cromosomas homlogos y de las cromtidas hermanas que han recombinado
respectivamente.

151
Los eventos que suceden en la Profase I se han dividido en 5 etapas:

Leptonema: Los cromosomas homlogos en estado no condensado,

unidos a la lmina perifrica nuclear a travs de los elementos protecos unidos a
los telmeros (extremos del cromosoma) comienzan a migrar hasta encontrarse
con su homlogo.

Cigonema: Se inicia el apareamiento o sinapsis de homlogos con la

aparicin de los elementos laterales unido a cada cromosoma homlogo unidos
por el elemento central que hace de cierre del complejo sinaptonmico. Todo esto
va a conformar finalmente una ttrada o bivalente.

Paquinema: Las 23 ttradas o bivalentes en las clulas germinales

humanas conforman las unidades en las cuales se llevar a cabo el
entrecruzamiento o crossing-over entre cromtidas homlogas.

Diplonema: Desorganizacin de las ttradas o bivalentes. En algunas

especies en este perodo ocurre una profusa transcripcin de mensajeros y genes
ribosomales, especialmente se ha comprobado en oocitos en formacin de
insectos, donde se han descrito los llamados cromosomas plumulados, que
transcriben genes ribosomales.

Diacinesis: Terminalizacin de los quiasmas. Los quiasmas son los

puntos del cromosoma donde ocurri entrecruzamiento, los cromosomas
homlogos permanecen unidos por estos puntos durante algn tiempo hasta que
estos se desplazan hacia los telmeros lo que permite finalmente su separacin.
Luego de esto se inicia la condensacin o enrrollamiento de la cromatina.

Control del ciclo celular. El ciclo celular. Puntos de control del ciclo celular.

Los puntos de control del ciclo celular constituyen una forma de asegurar
que una clula en divisin traspase copias exactas de sus genomas a la prxima
generacin. Estas vas de vigilancia tienen como funcin detectar estructuras
anormales o daadas del ADN, coordinar la reparacin del ADN y facilitar la
progresin del ciclo celular, dando el tiempo suficiente para permitir los procesos
de reparacin. As estos procesos retardan o detienen la progresin del ciclo
celular momentneamente. Si no ocurre la reparacin la clula sufre apoptosis.

152
Mecanismos de los puntos de control del ciclo celular.

Estos mecanismos responden a seales que indican un mal

funcionamiento, y el ciclo celular se detiene. Hay tres puntos de vigilancia del ciclo:

a) Punto de control de la fase S. En este punto hay control sobre el crecimiento

celular. Una seal de no replicacin del ADN impide que se inicie la mitosis y el
ciclo celular se arresta o detiene en S.

b) Control G2/M. En este punto de control se verifica que el ADN se encuentre

duplicado por lo tanto hay control sobre el aparato de replicacin del ADN, que el
crecimiento celular sea el apropiado, hay control sobre el crecimiento celular.

c) Punto de control de la metafase. Aqu hay control sobre el alineamiento de los

cromosomas en el ecuador de la clula. Una seal que indique que el huso
mittico no est correctamente ensamblado a los cromosomas, y que por lo tanto
los cromosomas no se encuentran bien alineados en el ecuador de la clula,
entonces se impide la anafase, y hay arresto en M.

Protenas de los puntos de control.

Las vas de puntos de control implican tres grupos principales de protenas

que actan en conjunto para traducir la seal de ADN daado en respuesta a la
detencin o arresto del ciclo celular y reparacin del dao. Estos grupos incluyen:

1. Protenas sensoras que reconocen el dao del ADN directa o indirectamente y

funcionan sealando anormalidades, e inician una cascada bioqumica de
activacin.

Estas protenas pueden ser clasificadas como:

Parecidas o semejantes a RFC1: Rad17.

Parecidas a PCNA: Rad9, Rad1, Hus1.
Que contienen BRCT: BRCA1, Top BP1.
Que reconocen o reparan DSB: Mre11, Rad50, Nbs1.
Protenas de replicacin que reclutan polimerasas TopBP1.

153
 Polimerasas necesarias para la replicacin: Pol2.
ADN helicasa: BLM, WRN.
Topoisomerasa: Top3.
Cargador de horquilla: Rfc2-5.
Que se une al ADN hebra simple: Rpa2.

2. Protenas transductoras de las seales, tpicamente proten quinasas, que

reciben la seal de dao y la amplifican, fosforilando otras quinasas o protenas
blanco.

PI3-quinasas (PIKK): ATR, ATM.

Par de unin de PIKK: ATRIP.
Quinasas efectoras: Chk1, Chk2.
Estabilizadores de la horquilla de replicacin: Claspina.

3. Protenas efectoras que incluyen la mayora de los blancos de las protenas

transductoras y as son reguladas, usualmente por fosforilacin, evitando la
progresin del ciclo.

El ciclo celular est regulado por dos vas distintas desde el punto de vista
de la regulacin gnica:

a) una va controlada por genes que actan normalmente frenando la

divisin celular, correspondientes a los genes supresores de tumores y

b) por genes que promueven la divisin celular que se denominan

protooncogenes, que funcionan normalmente promoviendo la divisin
celular.

Genes Supresores de tumores.

Las mutaciones que afectan a los genes supresores de tumores y que

produce inactividad de sus productos protecos o ausencia de ellos, las clulas
proliferan de forma descontrolada.

154
 Se ha demostrado que variados casos de cncer que afectan a familias
estn asociados a prdida de la funcin de tumores supresores causando
sndromes. Un sndrome se define como el conjunto de signos o sntomas que se
manifiestan en conjunto y que pueden asociarse a un origen o causa comn.

Algunos de estos incluyen a los genes que producen los sndromes de

susceptibilidad de retinoblastoma (RB), tumores de Wilms, neurofibromatosis tipo
I, adenomatosis de plipos de colon, von-Hippel-Lindau, y aquellos identificados
por la prdida de heterocigosidad tales como carcinoma colorectal (DCC, delecin
del carcinoma de colon) y p53.

p53.

La prdida de heterocigosidad en el brazo corto del cromosoma 17 ha sido

asociada con tumores de pulmn, colon y mama. Esta regin incluye al gen p53.
El gen p53 fue descubierto originalmente porque formaba complejos con algunos
antgenos. Se pens en un comienzo que se trataba de un oncogn ya que clones
de ADN copia (ADNc) aislados desde lneas tumorales eran capaces de cooperar
con el oncogn Ras en ensayos de transformacin. En las lneas celulares
normales, p53 es incapaz de cotransformar en presencia de ras. Las `protenas
mutantes p53 se demostr que tenan alterada su estabilidad y conformacin as
como su capacidad de unin a la chaperona hsp70. Anlisis posterior de varias
lneas celulares de leucemia demostraron que el locus p53 se pierde por insercin
o delecin de ambos alelos, lo que sugiere que el tipo silvestre es un supresor de
tumores y no un protooncogn dominante. Se ha demostrado que la mutacin en
el locus p53 es frecuente en varios tipos de neoplasias ms que cualquier otro gen
supresor o protooncogn.

La protena codificada por p53 es una fosfoprotena nuclear. Tiene un

dominio cido en el extremo N-terminal, similar a muchos factores de
transcripcin, que la define como un factor de transcripcin. La protena P53 es un
tetrmero que se puede unir al ADN para promover la sntesis de otras protenas
implicadas en la supresin del crecimiento celular. Una de las principales
protenas blanco es la protena del gen p21, que es una protena inhibitoria del
ciclo celular (denominada p21CIP) que da por resultado la detencin o arresto en
las fases G1 y G2 del ciclo celular. Tambin se ha demostrado una funcin

155
adicional de bloquear la unin de la ADN polimerasa del virus SV40, bloqueando
la replicacin del ADN viral. Se sugiere que podra regular la iniciacin de la
sntesis de ADN debido a su rol implicado tanto en la transcripcin como en la
replicacin. Varias mutaciones en este gen dan por resultado clulas mutantes
que tienen afectadas de distinta manera su ciclo celular.

La fosforilacin regula la actividad de la protena p53. El nivel de p53 es

bajo despus de la mitosis pero aumenta durante G1. Durante la fase S la protena
es fosforilada por el complejo MPF y tambin por la casen quinasa II (CKII).

Retinoblastoma (RB).

El locus del gen RB se ubica en el brazo largo del cromosoma 13 (13q14).

Este gen ha sido identificado mediante la clonacin de un transcrito de 4,7 kb. El
gen RB comprende 27 exones que promedian 180 kb en el cromosoma. Este gen
tiene dos intrones de gran tamao, aproximadamente de 35 y 70 kb. El producto
del gen es una protena de 110 kDa conformada por 928 aminocidos.
Corresponde a una protena localizada en el ncleo.

Existen muchas mutaciones que producen la prdida de la funcin del

gen. La mayor parte corresponden a deleciones. Otro tipo de mutaciones
corresponden a mutaciones de punto o errores de maduracin del transcrito
primario.

La principal funcin de pRB es la regulacin de la progresin del ciclo. Su

capacidad de regular el ciclo celular est correlacionada con el estado de
fosforilacin de pRB. La pRB es fosforilada por el complejo SPF, inactivando la
funcin de la protena. La fosforilacin es mxima al inicio de la fase S menor
despus de la mitosis y al inicio de la fase G1. La protena pRB fosforilada se
encuentra presente en las fases S y G2/M, y no fosforilada en estado G y G1 del
ciclo. La estimulacin de clulas quiescentes con sustancias que estimulan la
mitosis (mitgenos) induce la fosforilacin de pRB, sin embargo, la diferenciacin
celular es inducida por pRB no fosforilada. Por lo tanto la forma no fosforilada de
RB suprime la proliferacin celular.

156
 Por lo tanto, la pRB puede ser parte del punto de control en G 1. En clulas
en reposo G o G1 la pRB no est fosforilada y corresponde a la protena activa y
detiene el paso a travs del ciclo celular. Slo antes que la clula entre a la fase S,
pRB es modificada por fosforilacin correspondiente a la forma inactiva de la
protena, permitiendo que la clula pueda hacer mitosis.

La protena pRB est presente en todos los tipos de clulas y tejidos

examinados hasta ahora y se encuentran en todos tipos de clulas tanto las que
se encuentran en proliferacin como aquellas que estn en reposo y en todas las
fases del ciclo celular, lo que cambia solamente es su estado de fosforilacin.

A nivel molecular, pRB en el ncleo interacta con la protena EF2, un

factor de transcripcin. Cuando la clula pasa de G1 a S el complejo SPF fosforila
la pRB induciendo un cambio conformacional en la protena que induce la
liberacin del factor EF2 de la pRB. As EF2 queda libre para transcribir genes que
se necesitan para que el ciclo celular prosiga, participando incluso en su propia
transcripcin.

Por lo tanto, en clulas donde pRB no funciona a causa de mutacin, o

est ausente, el factor EF2 no est regulado y permanece activo. Esto permite una
expresin permanente de los genes necesarios para pasar a travs del ciclo
celular, ocurriendo proliferacin descontrolada. En conclusin pRB es un gen
supresor que es un punto de control importante entre ciclo celular y transcripcin
de genes.

En las formas de cncer familiar hereditario causado por pRB, los

individuos que heredan una forma mutada del gen heredada de uno de sus
padres, pueden sufrir una segunda mutacin somtico (en la lnea celular) que
inactiva el alelo normal, dando por resultado el desarrollo del retinoblastoma.

Protooncogenes y Oncogenes.

Los protooncogenes corresponden a genes que codifican protenas que

estimulan la proliferacin celular, los oncogenes corresponden a mutaciones de
los protooncogenes que pueden ser ms activos que los genes normales o ser
activos en tiempo o de una forma no apropiada.

157
 Los protooncogenes juegan un rol importante en la regulacin del ciclo celular
y la diferenciacin celular. Los protooncogenes se clasifican en varios tipos, estos
pueden ser:

Factores de crecimiento.
Receptores de tirosin quinasa y serin-treonino quinasa.
Receptores sin actividad quinasa.
Protena G asociada a la membrana activada por receptores de superficie.
Reguladores citoplasmticos.
Factores de transcripcin nuclear.

Ciclo celular y apoptosis.

Apoptosis. Apoptosis versus necrosis (Tabla 1).

La apoptosis es una muerte celular controlada que mantiene los

contenidos celulares de la clula muerta reciclndolos. Est definida por una serie
de cambios celulares:

Primero la clula se contrae, pierde contacto con las clulas vecinas o la

matriz extracelular y comienza a mostrar protenas intracelulares en su
superficie.
La cromatina del ncleo se condensa y el ADN se rompe en fragmentos
de 180 pares de bases, lo que lleva a la caracterstica escalera de ADN
cuando se somete a un gel de electroforesis.
La membrana plasmtica comienza a mostrar apariencia de burbujeo y
pequeos cuerpos vesiculares se desprenden conteniendo el material
intracelular que incluye material nuclear y organelos citoplasmticos, los
que estn usualmente inalterados.
Los fragmentos reciben el nombre de cuerpos apoptsicos o cuerpos
apoptticos y son removidos rpidamente por fagocitos o por clulas
vecinas.
Si lo anterior no ocurriese rpidamente, la membrana plasmtica y los
organelos intracelulares pueden romperse dando origen a la lisis de
fragmentos, lo que se conoce como lisis secundaria.

158
 Necrosis es una muerte celular no controlada caracterizada por:

la clula se hincha y se induce el dao mitocondrial que lleva a una rpida

disminucin de los niveles de energa.
una prdida del control homeosttico celular.
lisis de la membrana celular y liberacin de los contenidos intracelulares,
que lleva a una respuesta inflamatoria, con edemas y dao de las clulas
circundantes.
Los diferentes resultados de estas dos formas de muerte celular
(apoptosis vs necrosis) sugieren que los dos procesos son
necesariamente independientes uno de otro, pero no es as. Hay
evidencias que demuestran que son procesos complementarios como los
siguientes:
En las neuronas cerebrocorticales se ha observado que breves
exposiciones o bajas concentraciones de agonistas (agonista es una
molcula que se une selectivamente a un receptor especfico y gatilla una
respuesta en la clula) del receptor de glutamato causa que la clula entre
en la va apopttica. Sin embargo, altas concentraciones del mismo
agonista produce necrosis en la neurona.
En la muerte celular por necrosis hay una declinacin rpida de los niveles
de energa no vistas en la apoptosis y se ha demostrado de forma
experimental que el ATP es esencial para que se desencadene la
apoptosis. Las clulas pueden sufrir necrosis en respuesta a estmulos
apoptticos debido a que los niveles de ATP se encuentran agotados.
Por lo tanto, el tipo de muerte celular experimentada por la clula depende
de la intensidad del dao, la duracin de la exposicin y la posicin
espacial de la clula, como se ver ms adelante.

La apoptosis, es un tipo de muerte celular programada, un proceso donde

las clulas son eliminadas porque ya no se necesitan, como en el proceso de
desarrollo, o porque su permanencia en el organismo es negativa, como en el
caso que en la clula se originen mutaciones que afecten la homeostasis del
organismo. La eliminacin de la clula se hace en forma ordenada, evitando la
respuesta inflamatoria, que est asociada a la muerte necrtica.

As, la apoptosis es un proceso celular altamente regulado e implica la

activacin de una serie de eventos moleculares, que llevan a la muerte celular que

159
se caracterizan por cambios bioqumicos y morfolgicos. El componente central de
este proceso es un sistema proteoltico que implica a una familia de proteasas
denominadas caspasas. Las caspasas son proteasas especficas cistena
aspartato que activan y amplifican la seal en una cascada de caspasas. El efecto
clivador de las caspasas culmina en la muerte celular.

Tabla 1. Comparacin entre apoptosis y necrosis. (Informacin obtenida del sitio

www.qub.ac.uk/cm/pat/undergraduate/Basiccancer/necrosis_v_apoptosis.htm)

Apoptosis Necrosis
Fisiolgica o patolgica Siempre patolgica
Clulas nicas Conjunto de clulas
Dependiente de energa (ATP) Independiente de energa
Contraccin celular Hinchamiento de las clulas
Se mantiene la integridad de la membrana Se pierde la integridad de la membrana
Rol de la mitocondria y del citocromo C No participa la mitocondria
No se rompen los lisosomas Se rompen los lisosomas y escapan las
enzimas lisosmicas
Cambios nucleares caractersticos Prdida del ncleo
Se forman cuerpos apoptticos No se forman cuerpos apoptticos
Clivaje del ADN No se produce clivaje del ADN
Activacin de proteasas (caspasas) No hay activacin de proteasas especficas
especficas
Proceso regulado No es un proceso regulado
Proceso conservado evolutivamente No es un proceso conservado
Clulas muertas digeridas por clulas Clulas muertas ingeridas por neutrfilos y
vecinas macrfagos

Caspasas.

Las caspasas comparten similitudes en la secuencia de aminocidos,

estructura y especificidad de sustrato. Son expresadas como proenzimas o
zimgenos (30-50 kDa), que contienen tres dominios, uno N-terminal, seguido por
una subunidad de 20 kDa y otra de 10 kDa. La forma inactiva inicial da paso a una
forma activa capaz de clivar a otra caspasa para hacerla activa. Pueden ser

160
divididas en dos grupos, las caspasas iniciadoras (caspasa-2, caspasa-8,
caspasa-9 y caspasa-10) y las caspasas efectoras (caspasa-3, caspasa-6 y
caspasa-7). Ambos grupos se distinguen estructuralmente, las iniciadoras
contienen un gran motivo estructural de interaccin protena-protena en el
extremo amino terminal, mientras que las efectoras tienen un motivo estructural
muy pequeo o est ausente. La caspasa iniciadora una vez activada, activa a
las caspasas efectoras en un patrn de cascada de seales. Las caspasas
efectoras rompen las protenas de la clula dando por resultado las alteraciones
bioqumicas y morfolgicas caractersticas de la apoptosis.

Las funciones de las caspasas son las siguientes:

1. Arresto del ciclo celular e inactivacin de los sistemas de reparacin del

ADN.
2. Inactivacin del inhibidor de la apoptosis (XIAP).
3. Desmantelamiento del citoesqueleto.

Vas de activacin de las caspasas.

Hay cuatro vas en la activacin de las caspasas:

1. Va mediada por la mitocondria.

2. Va mediada por receptor apopttico.
3. Va mediada por Granzyma B.
4. Va mediada por el retculo endoplsmico.

Va mediada por la mitocondria.

La mitocondria sufre dos cambios durante la apoptosis inducida por

agentes neoplsicos, radiacin UV, agotamiento de factores de crecimiento y dao
del genoma. Uno de estos cambios es el cambio de permeabilidad de la
membrana externa, hacindose sta permeable a protenas, dando por resultado
la liberacin de las protenas desde el espacio intermembrana, el citocromo C, el
factor inductor de la apoptosis y otros. El otro cambio es la reduccin del potencial
de transmembrana de la membrana interna.

161
 La mitocondria contiene un canal en su membrana interna denominado
poro de permeabilidad transicional (PTP) que tiene dos estados de
conductancia, bajo y alto. El PTP se abre en estado de baja conductancia cuando
en la matriz mitocondrial disminuye el pH. Mediante el proceso de oscilacin del
poro se reestablece el control homeosttico del calcio intracelular. Con el aumento
de la concentracin del in calcio, la entrada de calcio a la mitocondria ocurre de
forma lenta y prolongada. Esto no causa un aumento del pH, porque no es
modulado por el sistema tampn en el interior de la matriz mitocondrial. La
acumulacin del in calcio en la matriz lleva a la unin del calcio a los sitios
orientados del PTP hacia la matriz. Cuando se unen dos iones de calcio, el poro
se abre irreversiblemente por un estado de alta conductancia, permitiendo que
molculas de tamaos menores a 1500 Da atraviesen el espacio intermembrana.
As, la mitocondria tiene un rol fundamental en la muerte celular de la clula.

Poro de permeabilidad transicional (PTP).

El poro de permeabilidad transicional se ubica en la membrana interna de

la mitocondria, que se abre en estado de alta conductancia por aumento
desmesurado de los niveles de calcio en la matriz mitocondrial. Esto da por
resultado un equilibrio no selectivo de solutos de alta masa molecular. Debido a
que la mayora de las protenas quedan atrapadas en la matriz hay un desbalance
onctico (fraccin de la presin osmtica debido a la presencia de grandes
molculas de protenas) que conduce a un notable hinchamiento del organelo in
vivo. Como resultado las crestas mitocondriales se despliegan causando la ruptura
de la membrana externa de la mitocondria. Esto ltimo lleva a la liberacin de
solutos contenidos en forma normal en el espacio intermembrana, incluyendo al
citocromo C y al factor que induce a la apoptosis (AIF). El citocromo C, es una
pequea protena que participa en la cadena de electrones en la respiracin
celular. En el citosol, el citocromo C activa a la caspasa 3. Mientras AIF activa
directamente a la caspasa 3 y a endonucleasas. La inhibicin de la liberacin del
citocromo C y la apertura de PTP es realizada por la protena antiapopttica Bcl2,
que est localizada en la membrana externa de la mitocondria.

162
Oscilacin del poro de permeabilidad transitoria mitocondrial.

2+
La mitocondria tiene un complejo proceso de almacenamiento de Ca y
liberacin de calcio inducida por calcio (CICR). La secuencia de eventos que
ocurren en la mitocondria se puede resumir como sigue:

La cadena transportadora de electrones es conducida por la mantencin

del gradiente de protones. Esto causa la polarizacin de la membrana tal
que la matriz es negativa respecto al citosol.

2+
Por lo tanto, el Ca entra a la mitocondria a travs de uniportadores
transmembrana selectivos.
La cadena respiratoria da cuenta de esta entrada de carga positiva
sacando ms protones, dando por resultado la elevacin del pH que da
por resultado la elevacin del pH que gatilla la apertura de otro canal,
denominado poro de permeabilidad transitoria (PTP).
Este poro permite la entrada de protones en la matriz que lleva al colapso
2+
de la diferencia de potencial y a la salida de Ca a travs de los
uniportadores y de PTP.

2+
La combinacin de la salida de Ca y entrada de protones vuelve a
acidificar la matriz y el cierre de PTP. La entrada de protones es por lo
tanto detenida y la cadena respiratoria restablece el potencial de
membrana, llevando a la acumulacin de calcio.
La apertura y cierre de PTP se denomina oscilacin del poro. La apertura
del canal no es directamente dependiente de los niveles de calcio, sino del
pH de la matriz.
La matriz tiene un sistema tamponado debido a la concentracin de cidos
dbiles que sustenta al ciclo de Krebs. Es una accin relativamente lenta y
por lo tanto no puede tamponar exitosamente un gran volumen de
cationes que entra a la mitocondria.
Esta caracterstica permite que el almacenamiento de calcio tenga lugar
cuando la liberacin es lenta, y el CICR (del ingls, significa liberacin de
calcio inducido por calcio) ocurre cuando la liberacin es rpida.
El pH umbral in vivo de la apertura de PTP slo es alcanzada en una
neurona en estrecha asociacin con los canales que liberan calcio en el
retculo endoplsmico y por lo tanto acta para estimular la sealizacin
intracelular en estos sitios y acoplar el aumento de la actividad neuronal
con el aumento de la respiracin.

163
 Otro efecto de la apertura de PTP es la prdida de polaridad, lo que
desacopla la fosforilacin oxidativa y la disminucin de los niveles de ATP.
Por lo tanto, la gliclisis debe suplir los requerimientos energticos de la
clula, que incluye las bombas inicas de la membrana plasmtica. La
ATP sintetasa mitocondrial revierte su accin en un intento de restablecer
el gradiente de protones y as reponer los niveles de energa celular. Una
de las consecuencias extremas de disminucin severa del ATP en la
clula, ocurre en la muerte necrtica de neuronas.
Ejemplos de respuesta gradual de los niveles intracelulares de calcio se
dan en lo siguiente: Si el in calcio se encuentra levemente elevado en
una clula, la gliclisis puede aportar energa para mantener la clula
hasta que se recupere la mitocondria y la clula podra llegar a sufrir
apoptosis.
Sin embargo, si los niveles de in calcio son demasiado elevados, la
deplecin del ATP no es suficiente para sustentar la apoptosis y la clula
se necrosa.

La liberacin del citocromo C lleva a la formacin de un complejo

heptamrico semejante a una rueda de carreta denominado apoptosoma (Figura
1). Este es un complejo de alto peso molecular compuesto por citocromo C, Apaf-
1, desoxiadenosina trifosfato y procaspasa-9, que forma una plataforma para un
eficiente procesamiento y activacin de la caspasa-9. La caspasa-9 tiene un
dominio de reclutamiento asociado a caspasa (CARD) en el N-terminal, que se
une a citocromo C y APAF-1. La activacin de la caspasa-9 cliva las caspasas
efectoras caspasa-3, caspasa-6 y caspasa-7. La desregulacin de esta va lleva a
condiciones patolgicas que incluyen cncer, autoinmunidad y
neurodegeneracin.

Va del receptor apopttico.

La va del receptor apopttico implica a receptores de membrana

miembros de la superfamilia del receptor del factor de la necrosis tumoral (TNFR),
de los cuales Fas y TNFR son los mejores caracterizados y comparten un dominio
caracterstico denominado dominio apopttico (DD). Luego de la asociacin de los
receptores con los ligandos se produce un cambio conformacional en el receptor,
luego se recluta una molcula adaptadora, Fas asociado al dominio apopttico

164
(FADD) o TNF asociado al dominio apopttico (TNFADD), junto a procaspasa-8 (y
probablemente caspasa-10) forman el complejo de sealizacin inductor de la
apoptosis (DISC), desencadenando as el proceso apopttico. La caspasa 8, la
forma activa, acta como una proteasa que acta sobre la procaspasa 3, que en
su forma activa, la caspasa 3, es el principal efector caspasa de la apoptosis.

Tanto la va mitocondrial como la va del receptor desembocan en la

caspasa-3 activa. La caspasa-3 entonces puede clivar una serie de protenas tales
como PARP, una enzima reparadora de ADN, las lminas nucleares, protenas
componentes del citoesqueleto (gelsolina y fodrina). Las dos vas apoptticas
pueden estar vinculadas a travs de Bid, un miembro de la familia Bcl-2, que se
encuentra en el citosol y es clivado por la caspasa 8 para formar una protena
truncada, tBid, que se traslocara a la mitocondria. En la mitocondria, tBid activa a
Bax, iniciando la liberacin del citocromo C y la disfuncin mitocondrial. Esta
alternativa es una conexin entre la va apopttica del receptor y de la mitocondria
que puede amplificar la activacin de la caspasas.

La va del retculo endoplsmico.

Como ya se vi en el captulo III, el retculo endoplsmico es el sitio de

ensamble de los polipptidos destinados a la va secretora. Cuando la clula es
expuesta a estrs por agentes tales como la tunicamicina, un inhibidor de la N-
glicosilacin en el retculo endoplsmico y la brefeldina A, un inhibidor del
transporte retculo endoplsmico- Golgi, las protenas no plegadas o mal plegadas
se acumulan en el retculo endoplsmico. En esta va, la caspasa 12, localizada en
la cara citoplasmtica del retculo endoplsmico es la caspasa iniciadora que para
ser activada debe ser clivada por la protena cistena proteinasa m-calpaina,
pasando de la forma procaspasa-12 a caspasa-12 en condiciones de estrs. La
caspasa 12 tambin tiene un dominio de reclutamiento, como la caspasa-9 que
sirve para formar el complejo apoptosoma. As la caspasa-12 puede ser activada
por su asociacin con una protena semejante a Apaf-1. En la va del retculo
endoplsmico, JNK es traslocado en la membrana mitocondrial y estimula la
fosforilacin de Bim, una protena Bcl-2, que a la vez es crtica para la liberacin
del citocromo C dependiente de Bax. Una protena Bcl-2 marcada al retculo
endoplsmico, Bcl-2/cb5, inhibe la liberacin del citocromo C mediado por estrs
del retculo endoplsmico.

165
Va mediada por granzyma.

Los linfocitos citotxicos, como las clulas asesinas y los linfocitos T

citotxicos juegan un rol esencial en la disminucin de las clulas infectadas por
virus y las clulas tumorales. Hay dos mecanismos de citotoxicidad usados por
estas clulas que incluye la va apopttica mediada por Fas y la exocitosis
granular o vesicular. En este ltimo proceso se requieren dos protenas, la
perforina, una protena que forma poros y facilita la liberacin de los componentes
granulares en las clulas blanco, y la otra protena es la granzyma B, una serina
proteasa con especificidad de sustrato similar a la familia de las caspasas. La
granzyma B puede inducir la muerte celular en clulas blanco por medio de dos
vas complementarias: una va citoslica que implica la activacin de caspasas
proapoptticas y una va nuclear que implica a una protena reguladora del ciclo
y/o activacin de la quinasa Cdc2. Una vez que los linfocitos T citotxicos liberan
la granzyma B, esta se une a su receptor en la clula blanco y en endocitada, pero
permanece arrestada en las vesculas endocticas hasta que es liberada por la
perforina. Una vez en el citosol de la clula blanco la granzyma acta sobre la
caspasa-3, a travs de la mitocondria, iniciando la cascada de las caspasas hasta
la fragmentacin del ADN y la apoptosis. Aqu la granzyma necesita de la ayuda
de otras molculas para procesar la procaspasa-3 a caspasa-3, como el citocromo
C, Smac/Diablo y Htra2/omi que son liberados de la mitocondria.

Formacin del apoptosoma: Estructura del apoptosoma humano (Yu et al

2005) (Figura 1).

El apoptosoma es un conjunto de protenas que participan en la apoptosis

formando una estructura supramolecular. El coensamble de Apaf-1 y citocromo C
en presencia de dATP conforman el apoptosoma que se ha determinado mediante
criomicroscopa electrnica. En el apoptosoma hay un dominio de reclutamiento
de siete caspasas que forman un dominio de un anillo central denominado con la
sigla CARDs. En un radio mayor se observan siete copias de un dominio de unin
de nucletidos y oligomerizacin denominado con la sigla NOD, asociado
lateralmente al centro rodeando el anillo CARD, finalmente un dominio helicoidal
semejante a brazos une a cada NOD a un par de aspas que unen un citocromo C.
La plataforma central crea un ambiente para la activacin de la procaspasa-9.

166
Vas apoptticas.

Se pueden distinguir dos vas apoptticas, dependiendo de donde emerja

la seal de apoptosis, externa a la clula, la va extrnsica o desde el interior de la
clula la va intrnsica.

La va extrnsica se inicia en el exterior de la clula, cuando las

condiciones del ambiente extracelular determinan que una clula debe morir. Es
mediada por receptores que se ubican en la membrana plasmtica. Estos
receptores son protenas integrales de membrana de la familia de los receptores
apoptticos como el receptor Fas (CD95), el receptor TNF (factor de necrosis
tumoral), etc.

Figura 1. Modelo del apoptosoma humano (Yu et al 2005). (Con permiso de la editorial)*

La va intrnsica se desencadena cuando el dao ocurre en el interior de

la clula. Un dao en la mitocondria puede producir el inicio de la va intrnsica. El
dao puede producir necrosis y con esto llevar consigo una respuesta inflamatoria,

167
pero en su lugar la maquinaria apopttica asegura que las clulas sean eliminadas
limpiamente, a fin de evitar la inflamacin. El dao mitocondrial puede iniciar la va
intrnsica regulando el efecto de la protena Bcl-2. En esta va participa el
citocromo C de la mitocondria, que tiene como funcin ser lanzadera de electrones
en la cadena respiratoria. El citocromo C liberado de la mitocondria daada une
Apaf1, que entonces activa a las capasas iniciadoras en este caso caspasa 9 que
luego activa a las caspasas efectoras, caspasa 3. Otras protenas liberadas de la
mitocondria daada son Smac/DIABLO y Omi/HtrA2 que contrarrestan el efecto de
protenas inhibidoras de la apoptosis (denominadas con la sigla IAPs) que
normalmente se unen y evitan la activacin de la caspasa 3. La interaccin entre
miembros de la familia Bcl, IAPs, Smac/DIABLO y Omi/HtrA2, es el centro de la
va intrnsica de la apoptosis.

Envejecimiento.

El proceso de envejecimiento implica un proceso de post- maduracin que

conduce a una reducida homeostasis y aumento de la vulnerabilidad del
organismo, el trmino ms adecuado es senescencia. El envejecimiento se refiere
a cualquier proceso que es dependiente del tiempo. Este proceso implica cambios
fisiolgicos a nivel organsmico, e implica a factores intrnsicos que son de
naturaleza gentica y del desarrollo y a factores estocsticos de naturaleza
extrnsica.

El proceso de envejecimiento en mamferos implica al menos 5

caractersticas:

a) Aumento de la mortalidad con la edad posterior a la maduracin.

b) Cambio en la composicin bioqumica de los tejidos con la edad. A nivel celular
aumentan los niveles de lipofucsina (pigmento) y aumento del entramado de
colgeno en la matriz extracelular. Aumenta la tasa de transcripcin de genes
especficos y la tasa de sntesis proteca y numerosas alteraciones en relacin con
la edad como la adicin de glicanos y oxidacin de las protenas como
modificacin post-traduccional.
c) Progresiva disminucin de la capacidad fisiolgica con la edad. A nivel de rin
por ejemplo, disminuye la filtracin del glomrulo.
d) Capacidad reducida de responder adaptativamente a los estmulos ambientales

168
con la edad. Una caracterstica fundamental de la senescencia es la disminucin
de la capacidad de homeostasis.
e) Aumento de la susceptibilidad y vulnerabilidad a enfermedades.

Teoras del envejecimiento.

Estas teoras se pueden agrupar en dos categoras: Estocsticas y

Gentico-desarrollo.

Las teoras estocsticas proponen que el envejecimiento es causado por

dao producido al azar en las molculas que son importantes para la vida. El dao
se acumula a un nivel que da por resultado la declinacin fisiolgica del
organismo. Las teoras estocsticas pueden ser resumidas en cuatro categoras:

a) Mutaciones somticas y reparacin del ADN. La teora de la mutacin somtica

del envejecimiento establece que el dao gentico producido por radiaciones
produce mutaciones que se acumulan con el tiempo causan dao funcional al
organismo llevndolo a la muerte. La exposicin a radiaciones ionizantes
conducen al acortamiento del promedio de vida por aumento del cncer ms que
por envejecimiento per se.

La teora de reparacin de ADN es un ejemplo ms especfico de la teora

de mutacin somtica. Corresponde a la capacidad de reparacin de dao al ADN
inducido por radiacin ultravioleta. La capacidad de reparar el ADN no cambia con
la edad.

b) Error- catstrofe. La teora error catstrofe propone que errores al azar en la

sntesis de protenas que participan en la sntesis de ADN pueden ocurrir. El
proceso de recambio de protenas elimina estas protenas reemplazndolas por
otras sin errores. Sin embargo, errores en las protenas implicadas en la sntesis
proteca introduciran errores en las molculas que producen, lo que dara por
resultado la amplificacin y posterior acumulacin de molculas defectuosas
dando por resultado una catstrofe incompatible con la vida.

c) Modificacin de protenas. El envejecimiento es acompaado por disminucin

de la actividad especfica de muchas enzimas, estabilidad alterada a la

169
temperatura y aumento del contenido de carbonilos en las protenas. Estos
cambios pueden ser causados por oxidacin directa de residuos de aminocidos,
oxidacin catalizada por metales, modificacin por los productos de la oxidacin
de lpidos y glicosilacin. Esta glicosilacin no es mediada por enzimas dando
origen a una avanzada glicosilacin de productos finales, denominados AGEs que
aumentan con la edad y que estn implicados en la diabetes, desrdenes visuales
y acumulacin de amiliodes. El aumento del entramado del colgeno en la matriz
extracelular impide la adecuada comunicacin intercelular debido a un
entorpecimiento en la difusin de molculas esenciales.

e) Radicales libres (estrs oxidativo)/ ADN mitocondrial. Se ha propuesto que la

mayor parte de los cambios producidos en el envejecimiento se debe a dao
molecular producido por radicales libres. Los radicales libres son molculas que
contienen un electrn no apareado, lo que hace que la molcula sea altamente
reactiva. El metabolismo aerbico genera radicales superxidos que son
metabolizados por superxido dismutasas para transformar el agua oxigenada en
agua y oxgeno. El agua oxigenada puede dar origen a un radical extremadamente
activo como es el hidroxilo.

El peligro de los radicales libres es que originan reacciones en cadena que

atacan macromolculas y a la vez generan nuevos radicales libres, amplificando
su efecto nocivo. Los radicales libres derivados de oxgeno juegan un rol en la
regulacin de la expresin diferencial de genes, replicacin celular, diferenciacin
y muerte celular por apoptosis debido a que en parte actan como mensajeros
secundarios en las vas de transduccin de seales. La sobreexpresin de
superxido dismutasas y catalasas, enzimas detoxificantes de radicales libres en
la clula en organismos transgnicos lleva a un aumento del promedio de vida en
estos.

La hiptesis ADN mitocondrial / estrs oxidativo representa una sntesis de

varias teoras: se propone que las especies de oxgeno reactivas contribuyen
significativamente la acumulacin somtica de mutaciones en el ADN mitocondrial
llevando a la prdida gradual de la capacidad bioenergtica dando origen a la
muerte celular y envejecimiento. Se ha observado el aumento exponencial de
mutaciones de punto y deleciones en el ADN mitocondrial en las mitocondrias del
msculo esqueltico y en las clulas somticas con la edad. Esto aparejado con el
hecho que la mitocondria carece de mecanismos de reparacin del ADN.

170
 En comparacin con el ADN nuclear, el ADN mitocondrial est sujeto a
una mayor tasa de mutacin que el nuclear porque su tasa de replicacin es
mayor tanto en clulas en divisin como en aquellas que no se dividen y adems
porque es en la mitocondria donde se genera la mayor cantidad de radicales libres
por efecto de la respiracin celular. Defectos en la respiracin mitocondrial
asociada con la edad se ha encontrado en tejidos normales y especialmente en
aquellas personas que sufren enfermedades de Parkinson, Alzheimer, corea de
Huntington.

Las teoras Gentico-Desarrollo consideran que los procesos de

envejecimiento son parte de un continuo controlado del desarrollo y la maduracin.
Es un programa gentico que forma parte del desarrollo. Pueden ser resumidas en
seis puntos:

a) Genes de longevidad.

Hay una amplia evidencia que el envejecimiento es hereditario. Las

mutaciones genticas pueden modificar la senescencia. Los productos de estos
genes que modifican la senescencia actan en diversas formas:

modulando la respuesta al estrs.

sensando en estatus nutricional.
aumentando la capacidad metablica.
silenciando genes que promueven el envejecimiento.

En Caenorrhabditis elegans se han descrito algunos genes que modifican

la respuesta al estrs, intervienen en el desarrollo, en la transduccin de seales y
la actividad metablica estos son:

age-1 modifica la tasa de envejecimiento.

daf-2 y daf-3 retrasa el envejecimiento.
spe-26 reduce la fertilidad.
clk-1 altera el reloj biolgico.

171
 Otros genes que afectan el envejecimiento, ejemplo, el gen daf-16, un
regulador transcripcional, expresado en hepatocitos. La protena de este gen da
resistencia a la luz UV y aumenta la longevidad. Acta sobre el gen daf-2 que
codifica un miembro de la familia de los receptores de insulina.

La longevidad en mamferos depende del sistema inmune. El gen p66

(shc) mutado incrementa la resistencia a estrs oxidativo y aumenta la longevidad
en 30%.

b) Sndromes que aceleran el envejecimiento.

Algunos sndromes de envejecimiento acelerado en humanos como el

sndrome de Werner, sndrome de Down, sndrome de Hutchinson-Gilford. El
sndrome de Werner es de tipo recesivo autosmico, ubicado en el cromosoma 8
que codifica helicasa, una enzima que desestabiliza la doble hlice antes que se
inicie la duplicacin del ADN. Algunos de los sntomas observados en estas
personas son intolerancia a la glucosa, osteoporosis, prdida del pelo,
menopausia precoz, tumores sarcomatosos, cataratas, atrofia de la laringe,
aterosclerosis, atrofa de la piel.

c) Neuroendocrina.

La teora neuroendocrina propone que los decrementos funcionales en las

neuronas y las hormonas asociadas son parte central del envejecimiento. Una
importante versin de esta teora sostiene que el eje hipotlamo-pituitaria-adrenal
es el regulador maestro del envejecimiento de un organismo. Esto es debido a que
el sistema neuroendocrino regula el desarrollo temprano, el crecimiento, la
pubertad, el control de los sistemas reproductores, el metabolismo y otros
aspectos de la fisiologa normal, los cambios funcionales de este sistema ejercen
efectos en todo el organismo.

172
d) Inmunolgica.

La teora inmunolgica del envejecimiento se basa en dos puntos:

La capacidad funcional del sistema inmune declina con la edad, lo que es
evidente en la disminucin de la respuesta de los linfocitos T a mitgenos
y menor resistencia a enfermedades infecciosas.
La autoinmunidad aumenta con la edad con el aumento de
autoanticuerpos en el plasma sanguineo. Hay un aumento de la
proporcin de las clulas T de memoria.

e) Senescencia celular.

Algunas de las caractersticas mostradas por las clulas senescentes son

las siguientes:
menor respuesta a mitgenos.
respuesta distinta en clulas jvenes en cultivo a factores de crecimiento.
telmeros ms cortos e inestabilidad cromosmica.

Se debe sealar que la funcin de los telmeros en la clula es muy

importante. Los telmeros son estructuras de nucleoprotenas localizadas en los
extremos de los cromosomas que son necesarios para mantener la estabilidad del
cromosoma. En la mayor parte de los organismos el ADN telomrico consta de
secuencias repetitivas ricas en G que termina en un corto trecho de secuencias de
ADN repetitivas ricas en guanina formando un asa. En los mamferos el asa puede
invadir una regin ms proximal de los telmeros para formar una regin D-loop
conocido como T-loop.

Las protenas funcionalmente importantes asociadas a los telmeros son

incorporadas a los telmeros a travs de interacciones ADN-protena y protena-
protena. Tanto el ADN como las protenas componentes del telmero son
esenciales para mantener la estabilidad del cromosoma.

En cada ronda de divisin celular se produce acortamiento de los

cromosomas debido al problema de replicacin de los extremos del cromosoma.
El telmero acta como reloj biolgico que detiene la divisin celular y causa el
envejecimiento.

173
 Hasta ahora se han identificado dos mecanismos compensatorios que
contrarrestan la perdida del telmero:

1) Adicin de nucletidos a la hebra rica en G de los telmeros por la accin

de una transcriptasa inversa denominada telomerasa.

La telomerasa es una ribonucleoprotena que consta de una unidad

cataltica proteca denominada TERT y un molde de ARN. En algunas clulas
cncerosas y las clulas reproductivas tienen telomerasa activa que evita el
acortamiento del telmero y es uno de los factores que las clulas cancerosas
aumenten en nmero sin control.

En las levaduras Saccharomyces cerevisiae, el complejo que conforma la

telomerasa est constitudo por dos subunidades Est1p y Est3p, ambas
necesarias para la extensin del telmero. Est1p tiene la funcin de reclutamiento
del complejo de la telomerasa en los extremos de los telmeros interactuando con
la protena Cdc13p, que tiene funcin activante.

2) Por recombinacin.

En aquellas clulas con deficiencia de telomerasa, la prdida de la

telomerasa es acompaada por acortamiento progresivo del telmero y
senescencia (envejecimiento). Las pocas clulas que sobreviven es porque son
capaces de activar un mecanismo basado en la recombinacin que les permite
alargar el telmero.

La protena p53 se une con mayor frecuencia al ADN en clulas

envejecidas que en clulas ms jvenes. Las protenas p16 y p21 estn
sobreexpresadas en clulas envejecidas, ambas protenas impiden la progresin
del ciclo celular, manteniendo la clula en la etapa G1 de la interfase, los ciclos
celulares se detienen. La interrupcin del aumento de concentracin de p21, evita
el envejecimiento de fibroblastos en cultivo.

174
f) Muerte celular.

Mutaciones que afectan la estabilidad del genoma: Protena p53 es

esencial para el punto de control que detiene el ciclo celular en la etapa G1 de la
interfase, en clulas que tienen daado el ADN. Si hubiera replicacin celular se
perpetuara la mutacin.

La protena p53 es un factor de transcripcin que induce la expresin del

gen p21, una protena que es un inhibidor del complejo cdkc- G1 50% de casos de
cncer humanos se deben a dao en la protena p53. Esta protena es un
tetrmero. Existe otra protena expresada en tumores, la protena MDM2 (en
ingls, murino doble diminuto), que inhibe la capacidad de la p53 de controlar la
proliferacin de tumores. La protena MDM2 se fija al extremo N-terminal de p53,
por lo tanto se impide la transcripcin del gen p21.

Existe en pacientes que sufren el sndrome de Li-Fraumeni que son

heterocigotos para el gen p53, los fibroblastos en cultivo pierden el alelo normal
para el gen p53, resultando homocigotos para el defecto, por lo tanto no expresa
el gen p21 y envejecen de igual forma que los pacientes normales, por lo tanto, el
envejecimiento no depende de p53. Sin embargo, el producto del oncogen ras
induce la senescencia que es acompaada por acumulacin de las protenas de
los genes p53 y p16.

* Agradecimientos: Agradecemos al autor y a la editorial la facilitacin de la figura

1 para la publicacin en este captulo.

175
Referencias.

Troen BR. 2003. The biology of aging. The Mount Sinai Journal of Medicine 70 (1):
3- 22.

Yu X, D Acahan, JF Menetret, CR Booth, SJ Ludtke, SJ Riedl, Y Shi, X Wang, CW

Akey. 2005. A structure of the human apoptosome at 12.8 A resolution provides
insights into this cell death platform. Structure 13: 1-10.

176
 CAPITULO V
MATERIAL CROMOSMICO Y FORMAS DE ESTUDIO

Fidelina Gonzlez. Depto Biologa Celular. Facultad de Ciencias Biolgicas.

Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile.

Como se ha visto en un captulo anterior en el ncleo reside la informacin

gentica diploide proveniente de los padres (de la madre y el padre) y en la
mitocondria la informacin gentica haploide heredada maternalmente. Esta
informacin es expresada en diferentes etapas de la vida del organismo y de esta
informacin depende que un ser humano sea completamente sano.

Hay varios niveles en los cuales se puede detectar alteraciones en la

organizacin de la informacin gentica. Estas alteraciones pueden ser a nivel de
nmero o forma de los cromosomas metafsicos u ordenacin de los genes en los
cromosomas. Tambin podemos tener defectos en la secuencia de nucletidos en
un gen lo que da por resultado un producto alterado, que puede ser una protena
que ha perdido total o parcialmente su funcin.

En la actualidad hay varias formas de detectar estas variaciones en el

genoma. A nivel de cromosomas, se puede confeccionar cariotipos. A nivel de
genes existen marcadores asociados a los genes de inters.

Confeccin de cariotipos.

Cariotipo: ordenamiento de los cromosomas de una placa metafsica

fotografiada luego de ser teidos con Giemsa u orcena actica. Ambas tinciones
tien uniforme a los cromosomas.

Este ordenamiento se hace emparejando los cromosomas homlogos de

acuerdo al tamao y posicin del centrmero. Se denomina al brazo por sobre el
centrmero, brazo corto y se le asigna la letra p (del francs ptite) y brazo largo
por debajo del centrmero, asignndose la letra q. Es un ordenamiento
decreciente de acuerdo al tamao. A cada par de cromosomas que ha sido puesto
en orden de acuerdo a los criterios sealados se les asigna un nmero con el cual
se identifica. Se emparejan los autosomas y luego los cromosomas del par sexual.

177
 Un ordenamiento ms preciso de los cromosomas implica el uso de
tcnicas de bandeo cromosmico, los cromosomas homlogos muestran el mismo
patrn de bandeo. Se definen las bandas como regiones del cromosoma que se
tien ms intensamente que otras. Estas sirven de referencia para ubicar los
genes en los cromosomas, lo que ha sido empleado en el Proyecto Genoma
Humano.

Patrones de bandeo cromosmico.

Bandas G. Son aquellas bandas que se visualizan al ser tratados con calor
o con enzimas proteolticas para digerir parcialmente las protenas cromosmicas
y posteriormente teir con el colorante Giemsa. Las bandas G estn conformadas
por secuencias ricas en desoxiAdenosina y desoxiTimidina. El cariotipo humano
tiene alrededor de 300 bandas G, es decir en los cromosomas metafsicos existe
este nmero de bandas G. Cabe sealar que en los cromosomas profsicos se
han identificado alrededor de 2000. Ayudan a diferenciar constricciones primarias
(centrmero) o secundarias (regiones organizadoras del nuclelo, NOR).

Bandas Q. Son regiones que se tien con quinacrina, colorante que se

une preferentemente a regiones ricas en AT, son visualizadas con microscopa de
fluorescencia.

Bandas R. Corresponden a bandas reversas, y dan el bandeo inverso a

bandas G o Q. se obtienen a travs del tratamiento de los cromosomas con lcali
a 80-90C y posterior tincin con Giemsa o fluorescencia.

Bandas C. Permite reconocer la ubicacin de la heterocromatina

centromrica, la regin organizadora del nuclelo y la porcin distal del
cromosoma Y. La tcnica implica un tratamiento con hidrxido de sodio y posterior
tincin con Giemsa.

Polimorfismo cromosmico humano.

Un cariotipo humano se caracteriza por presentar 23 pares de

cromosomas, de los cuales 22 pares corresponden a autosomas y un par sexual.
Por ser diploide, la especie humana tiene dos cromosomas en un par de

178
homlogos, siendo en nmero haploide de 23 y el diploide de 46 comosomas. El
cariotipo de un hombre normal tiene 22 pares de autosomas y un par sexual
conformado por un cromosoma X, que hereda de la madre y un cromosoma Y que
hereda del padre. Una mujer normal por su parte tiene tambin 22 pares de
autosomas y dos cromosomas X en el par sexual, uno heredado del padre y el
otro de la madre. En las diferentes lneas celulares somticas de la mujer en el
transcurso del desarrollo se inactiva al azar uno de los cromosomas X, dando
origen a un cuerpo que es posible ser visualizado al microscopio ptico al ser
teido adecuadamente y que corresponde al cromosoma X inactivado que se
encuentra profusamente condensado al que se le denomina cuerpo o corpsculo
de Barr. Las clulas somticas del varn no presentan este corpsculo.

Alteraciones en el nmero de cromosomas en el cariotipo se denominan

aberraciones cromosmicas y corresponden a mutaciones. Ejemplo de esto
podemos mencionar a alteraciones en autosomas como el sndrome de Down. En
este caso se presentan 3 cromosomas 21 en lugar de 2, dando origen a una
trisoma 21.

Figura 1. Cromosoma 7 de un cariotipo humano mostrando el bandeo del cromosoma 7 y la

ubicacin del gen que codifica para la fibrosis qustica. A la derecha se muestra la delecin
que es la mutacin responsable de un tipo de fibrosis qustica. Esta delecin de 3
desoxinucletidos produce una lectura en la protena carente de la fenilalanina en la
posicin 508 del canal de cloruros. (Tomado de Welsh J & Smith AE. 1996. Fibrosis
qustica. Investigacin y Ciencia, Febrero: 16-24).

179
 Aberraciones que implican a los cromosomas sexuales como ejemplo
mencionaremos a continuacin: sndrome de Turner que afecta a mujeres que
tienen un solo cromosoma X, siendo su frmula cromosmica de 22 autosomas +
X0 y el sndrome de Klinefelter que afecta a hombres que tienen cromosomas X
supernumerarios, su frmula cromosmica puede ser 22 autosomas + XXY; 22
autosomas +XXXY; 22 autosomas + XXXXY. En estos casos las clulas somticas
de estos hombres tienen uno o ms corpsculos de Barr, dependiendo del nmero
de cromosomas X presentes en las clulas, en el caso del sndrome de Turner, no
hay corpsculo de Barr.

Ubicacin de un gen en un cromosoma.

La ubicacin de un gen en un cromosoma se denota con la siguiente

nomenclatura Ejemplo el gen de la fibrosis qustica se encuentra ubicado en el
brazo largo del cromosoma 7, entre las bandas o subregiones 2 y 3 de la regin 31
del cromosoma 7, entonces se denota como 7q31.2-q31.3

De manera experimental se puede localizar una regin especfica de un

cromosoma mediante la tcnica de hibridacin ADN-ADN que consiste en realizar
una hibridacin in situ sobre una placa metafsica obtenida desde un cultivo de
linfocitos con una sonda de ADN marcado ya sea con marca fluorescente. Esta
tcnica tiene el acrnimo FISH (hibridacin fluorescente in situ).

Secuenciacin del ADN.

El Proyecto Genoma Humano iniciado a mediados de los aos 90 tuvo

como objetivo conocer la secuencia de los genes humanos, con el fin de conocer
de forma exacta el origen a nivel de informacin gentica los defectos que
promueven la aparicin de enfermedades.

Con el uso de la reaccin de la ADN polimerasa de origen procarionte en

cadena (PCR) y la construccin de secuenciadores automticos se ha dado gran
impulso a este conocimiento. La secuenciacin tiene como objetivo conocer el
ordenamiento de la secuencia de nucletidos de un gen, y por lo tanto proporciona
informacin sobre la organizacin de los genes y los sucesos mutacionales que

180
alteran los genes y sus productos gnicos. La secuencia alterada de un gen puede
producir una protena defectuosa porque su estructura est alterada, y por lo tanto
no puede cumplir con la funcin que normalmente desarrolla en el organismo.
Adems, estos estudios han llevado a la dilucidacin de la secuencia de regiones
reguladoras no codificantes necesarias para conservar la homeostasis de la
clula.

Anlisis de PCR.

La reaccin en cadena de la polimerasa ha permitido adems disponer de

cantidades mayores de un fragmento especfico de ADN. Esta tcnica tiene tres
pasos de un ciclo fundamentales en un tubo de reaccin:

1. Apertura de la doble hebra de ADN molde por accin de calor.

2. Hibridacin con cebadores o partidores, por descenso de la temperatura. Los

partidores son secuencias de 15 a 25 desoxinucletidos que complementan con
las secuencias expuestas de ADN molde.

3. Extensin de la cadena complementaria del partidor por ADN polimerasa.

La tcnica de PCR es ampliamente utilizado en laboratorios de

investigacin y tiene muchas aplicaciones en gentica humana, terapia del cncer,
diagnstico prenatal, identificacin de agentes infecciosos como bacilo de la
tuberculosis, virus del SIDA. La limitacin es que es fcil contaminar las muestras
de pacientes con ADN proveniente de personal del laboratorio u hospital por lo
que se requiere de adecuados controles.

Una tcnica vlida para el estudio de la variabilidad gentica es RFLP que

significa polimorfismo en la longitud de fragmentos de restriccin. Esta tcnica
consiste en cortar la secuencia de ADN con enzimas de restriccin. Estas enzimas
provienen de procariontes y cortan en forma especfica la secuencia de ADN ya
que reconocen secuencias de 4 a 6 pares de bases de forma especfica. Esto
produce fragmentos de ADN de distinta longitud que pueden ser resueltos en un
gel de agarosa o poliacrilamida. La ubicacin de estos marcadores asociados a
cromosomas humanos ha ayudado a la localizacin de genes en los cromosomas.

181
En la actualidad el anlisis de RFLP hace posible obtener mapas de ligamiento de
alta resolucin de cada uno de los cromosomas humanos, y se dispone de mapas
de marcadores RFLP de los 23 pares de cromosomas humanos. Cabe sealar
que se entiende por genes ligados como aquellos que se encuentran en la misma
cromtida. Mapas de ligamiento son aquellos mapas que ubican los genes en los
cromosomas sobre la base del resultado de cruzamientos dirigidos en forma
experimental. Esto no se puede hacer en la especie humana.

Cartografa de un gen en un cromosoma.

La forma de identificar en qu cromosoma especfico se encuentra un gen

ha sido posible con el advenimiento de las tcnicas moleculares. Genes como
aquellos que producen la fibromatosis tipo I (NF1) se logr cartografiar mediante
mapas de exclusin que indicaban en que cromosoma o en que regin
cromosmica no estaba ubicado el gen sobre la base de la herencia de NF1 y
usando marcadores de RFLP.

182
Tabla 1. Caractersticas de los cromosomas humanos. La longitud relativa del cromosoma
es de la longitud del cromosoma en relacin al total haploide del genoma. El ndice
centromrico es la relacin del brazo corto (p) en relacin a la longitud total del cromosoma.
De acuerdo a esas caractersticas es posible agrupar los cromosomas en 7 grupos
denominados con las letras A, B, C, D, E, F, G.

Nmero del Par Longitud Indice Forma Grupo

cromosmico relativa centromrico
1 9,08 48,0 Metacntrico A
2 8,45 38,1 Metacntrico A
3 7,06 45,9 Metacntrico A
4 6,55 27,6 Submetacntrico B
5 6,13 27,4 Submetacntrico B
6 5,84 37,7 Submetacntrico C
7 5,28 37,3 Submetacntrico C
X 5,8 36,9 Submetacntrico C
8 4,96 35,9 Submetacntrico C
9 4,83 33,3 Submetacntrico C
10 4,68 31,2 Submetacntrico C
11 4,63 35,6 Submetacntrico C
12 4,46 30,9 Submetacntrico C
13 3,64 14,8 Acrocntrico D
14 3,55 15,5 Acrocntrico D
15 3,36 14,9 Acrocntrico D
16 3,23 40,6 Submetacntrico E
17 3,15 31,4 Submetacntrico E
18 2,76 26,1 Submetacntrico E
19 2,52 42,9 Metacntrico F
20 2,33 44,6 Metacntrico F
21 1,83 25,7 Acrocntrico G
22 1,68 25,0 Acrocntrico G
Y 1,96 16,3 Acrocntrico G

183
Resumen del Cariotipo Humano.

Grupo Par de Caractersticas

Cromosomas
A 123 Cromosomas metacntricos de gran tamao
B 45 Cromosomas submetacntricos de tamao mediano
C 6 7 8 9 10 11 12 Cromosomas submetacntricos de tamao mediano
X
D 13 14 15 Cromosomas acrocntricos. Los cromosomas 13 y 14 tienen
satlites en el brazo corto
E 16 17 18 Cromosomas de pequeo tamao metacntricos o
submetacntricos
F 19 20 Cromosomas pequeos metacntricos
G 21 22 Y Cromosomas acrocntricos de tamao pequeo

184
Referencias.

Welsh J & Smith AE. 1996. Fibrosis qustica. Investigacin y Ciencia, Febrero: 16-
24.

185
186
 CAPITULO VI
HERENCIA Y GENOMA HUMANO. ENFERMEDADES GENTICAS Y
CONSEJO GENTICO. RBOL GENEALGICO O PEDIGR

Fidelina Gonzlez. Depto Biologa Celular. Facultad de Ciencias Biolgicas.

Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile.

Consejo Gentico.

El Consejo Gentico es proceso de comunicacin que trata de problemas

humanos asociados con la ocurrencia y riesgo de ocurrencia de un desorden
gentico en una familia (Mahowald et al. 1998). El consejo gentico es un proceso
de consentimiento mutuo. Los consejeros genticos conforman un equipo de
profesionales de la salud que tiene la facultad de dar a un individuo o familia la
informacin actualizada y el apoyo (consejo o gua) considerando los problemas
de crecimiento, desarrollo y salud que podra tener una base gentica. Esto puede
ayudar a las familias y a los individuos a entender y adaptarse a la diagnosis de un
desorden gentico.

Los consejos genticos estn conformados por una o ms personas que

conocen el fundamento mdico, tienen el diagnstico, conocen la evolucin de la
enfermedad y el posible tratamiento. Conocen como contribuye la herencia a la
recurrencia de una anormalidad entre parientes. Pueden discriminar entre
alternativas al riesgo de ocurrencia. Al visualizar el riesgo eligen acciones
apropiadas desde la perspectiva familiar, religiosa y tica. Realizan un programa
de adaptacin del individuo afectado a la vida familiar o como evitar el riesgo de
ocurrencia de la anomala.

Una diagnosis de un desorden gentico se puede hacer o confirmar en un

embarazo, despus del nacimiento, en la infancia o ms tarde en la vida. La
diagnosis podra ser realizada sobre la base de las caractersticas clnicas, test
bioqumicos o test genticos. Esta diagnosis podra significar que otros miembros
de las familias estn en riesgo. Por otro lado, un miembro de una familia podra
reasegurar encontrar que ella o el no tiene o probablemente es improbable que
desarrolle, el desorden en particular. La susceptibilidad o predisposicin a una
enfermedad puede requerir el anlisis de genes mltiples y de factores
ambientales.

187
 La orientacin supone la conformacin del grupo consejero, el uso de
folletos para informacin, acceso a medios informativos y el respeto de los
principios ticos sobre la base de autonoma, privacidad, confidencialidad y
equidad.

Anlisis de un rasgo gentico.

El anlisis de un rasgo gentico puede implicar a uno o todos los

siguientes pasos.

I. Mecanismo de transmisin y expresin de los genes.

1. Transmisin y posicin del gen.

Tipo de herencia nuclear o citoplasmtica.
Se trata de herencia autosmica o ligado a cromosomas sexuales.
Posicin del gen o genes en el cromosoma (ligamiento, factorial,
citogentica).
2. Expresin del gen.
a) Tipos de interaccin allica.
Dominancia.
Recesividad.
Herencia intermedia.
Codominancia.
b) Interaccin no allica del gen.
Interaccin factorial.
Epstasis.
c) Efectos del ambiente externo e interno sobre el carcter estudiado.
Variacin.
fenocopias (modificacin fenotpica no hereditaria).

II. Sobre la fisiologa del gen.

1. Accin gentica.
2. Gentica del desarrollo.

188
III. Sobre la dinmica del gen.

1. Distribucin poblacional.
2. Mutaciones.
3. Valor adaptativo.
4. Flujo gentico.

Las Leyes o Principios de la Herencia postulados por Mendel

redescubiertos en el inicio del siglo XX ha constituido el inicio de los estudios de la
herencia en todos los campos de la biologa. El progreso cientfico se divide en
cuatro fases:

a) Establecer las bases de la herencia: Los genes se ubican en los cromosomas.

b) Definicin de la base molecular de la herencia: la doble hlice.
c) La base de la informacin gentica de la herencia con el descubrimiento de los
mecanismos biolgicos por los cuales las clulas leen la informacin contenida en
los genes.
d) La invencin de las tecnologas de ADN recombinante de clonacin y
secuenciacin de la informacin gentica por lo cual se puede comprobar la
funcin de los genes.

Algunas caractersticas del Genoma Humano de acuerdo al Consorcio

Internacional de Secuenciacin del Genoma Humano (2001) son:

a) Alrededor de 30.000 genes que codifican protenas componen el genoma

humano.
b) Los genes humanos muestran los mismos mecanismos de maduracin en los
procesos transcripcionales que los de otros organismos eucariontes.
c) El conjunto de protenas (proteoma) codificadas por el genoma humano es ms
complejo al compararlo con organismos invertebrados, ya que en los vertebrados
hay dominios arquitectnicos de las protenas son ms ricos que en invertebrados.
d) Cientos de genes han resultado de transferencia horizontal de genes desde
bacterias y docenas de genes parecen haber derivado de elementos
transposables. Estos elementos transposables han sido ms numerosos pero han
derivado en elementos inactivos.
e) Las regiones telomricas y centromricas han derivado de duplicacin reciente.

189
f) La tasa de mutacin del genoma nuclear es dos veces ms alta en los hombres
que en las mujeres.
g) El anlisis citogentico de los clones secuenciado confirma la sugerencia que
grandes regiones pobres en CG estn correlacionadas con las bandas G de los
cariotipos.
h) Las tasas de recombinacin tienden a ser ms altas en las regiones distales de
los cromosomas (alrededor de 20 megabases) y en los brazos de los cromosomas
ms cortos en general, en un patrn que promueve la ocurrencia de al menos un
retrocruzamiento por brazo cromosmico en cada meiosis.

El Proyecto Genoma Humano ha contribuido a la identificacin de los

genes que contribuyen a las enfermedades. Jimnez-Snchez et al. 2001
propusieron una clasificacin funcional de los genes que producen enfermedades
y sus productos que definen algunos principios de la manifestacin de las
enfermedades consideradas. Han agrupado genes que causan enfermedades y
demostraron correlacin entre la funcin del producto de un gen determinado y
algunos de los rasgos de la enfermedad como la edad de aparicin de la
enfermedad y la forma de herencia.

Los resultados de esta clasificacin funcional de genes comprenden genes

que codifican enzimas, es de alrededor del 31 % del total, aquellos que modulan
las funciones de protenas son de alrededor de un 13 % que incluyen la
estabilizacin, la activacin, el plegamiento de las protenas. Otras doce
categoras contabilizan menos del 10% de la muestra.

Las funciones de productos proteicos de genes que producen enfermedades son

las siguientes:

Enzimas.
Moduladores de protenas.
Receptores.
Factores de transcripcin.
Protenas de la matriz intercelular y extracelular.
Transportadores transmembrana.
Canales.
Seales celulares.

190
 Hormonas.
Transportadores transcelulares.
Inmunoglobulinas.

La forma de herencia de las enfermedades relacionadas a:

codificacin de enzimas.
modificadores de la funcin proteica.
receptores defectuosos.
genes que codifican factores de transcripcin.

Corresponden a un casi 80% en el caso de 278 enfermedades

relacionadas a genes que codifican enzimas como autosmicas recesivas. De 124
enfermedades de genes que modifican la funcin de la protena son alrededor del
45% autosmicas dominantes o recesivas. De forma parecida es la distribucin de
los genes que codifican las 82 enfermedades analizadas y debidas a
malfuncionamiento de receptores. Por otro lado, de las 83 enfermedades debidas
a genes que codifican factores de transcripcin cerca del 70 % son autosmicas
dominantes, y un poco ms del 20% son autosmicas recesivas. Enfermedades
ligadas al cromosoma X en la mayor parte de los casos es de alrededor o menos
del 10%.

Edad de aparicin de las enfermedades relacionadas a genes.

Enfermedades relacionadas a:
codificacin de enzimas
modificadores de la funcin proteica
receptores defectuosos
genes que codifican factores de transcripcin

La edad de aparicin de las enfermedades se inicia en la etapa uterina en

el caso de las enfermedades debidas a factores de transcripcin, para las enzimas
defectuosas es al ao de vida, para los receptores es entre un ao y la pubertad y
para los modificadores de protenas es en la adultez. Los desordenes en los
receptores es en la infancia debido al rpido crecimiento y durante la pubertad por
el intenso flujo de seales en clulas y tejidos del organismo. Los desordenes que

191
implican a modificadores de protenas pueden aparecer ms tarde ya que implican
que no perturban completamente la homeostasis del sistema en una edad
temprana agravndose paulatinamente en el tiempo.

Construccin de pedigrs.

A fin de establecer la base gentica de un rasgo familiar, su transmisin

de acuerdo a los principios mendelianos debe ser demostrado. Sin embargo,
obtener patrones de herencia es muy difcil debido a los prolongados tiempos
generacionales a nivel de vida humana, pequeos grupos familiares y la
imposibilidad que los cientficos puedan realizar experimentos de cruzamiento.
Una metodologa ampliamente utilizada es la confeccin de pedigr de familias,
sobre la base de la informacin multigeneracional. Generalmente se obtiene la
forma de herencia de un rasgo ligado al sexo versus autonmica, autonmica
versus dominante.

En el anlisis de la transmisin gentica humana se comienza por la

identificacin de un individuo afectado, denominado propsitus, seguido por la
construccin histrica gentica o pedigr de los individuos de la familia.

En una representacin grfica los hombres se representan con cuadrados

en tanto que las mujeres con crculos. Las reas blancas representan a los
individuos no afectados en tanto las ennegrecidas a los afectados. Las reas
mitad ennegrecidas son los individuos heterocigotos en general y representan los
individuos sanos portadores de un gen recesivo que al estado homocigoto es
afectado, es decir su fenotipo corresponde a la manifestacin de su genotipo
afectado en el estado homocigoto. Tambin los heterocigotos (diferentes alelos en
un locus) u homocigotos (el mismo alelo en un locus) de un rasgo dominante que
d fenotipos afectado se representan con reas ennegrecidas. Las generaciones
de un pedigr son numeradas con nmeros romanos. Los diferentes individuos que
componen una generacin se numeran de derecha a izquierda con numeracin
arbiga, como se observa en la Figura 1.

192
Figura 1. Representacin grfica de un rbol genealgico, indicando la smbologa usada.

193
 Los miembros de una pareja se unen con una lnea horizontal y las
generaciones con lneas verticales. El propsitus o probando que es el individuo
con el que se inicia el pedigr, se indica con una flecha.

En el anlisis de un rasgo gentico a nivel humano usando la construccin

de pedigrs para determinar la transmisin y expresin de genes, se pueden
plantear dos problemas:

a) Transmisin y posicin del gen: en este caso hay que distinguir entre herencia
nuclear y herencia citoplsmica, lo otro es si se encuentra asociado a autosomas o
a cromosomas ligados al sexo y finalmente la posicin o lugar que ocupa un gen
en un cromosoma, definido como locus (plural loci).
b) Expresin del gen: en este caso hay que discriminar entre las interacciones
allicas: dominancia, recesividad, co-dominancia, herencia intermedia; las
interacciones no allicas como epstasis, interaccin factorial; y finalmente los
efectos del ambiente externo e interno sobre el carcter estudiado que afecta la
variacin de la expresin del carcter, las fenocopias.

Tipos de herencia que es posible distinguir.

Autosmico dominante: un gen autosmico con expresin regular tiene un

modelo que es fcil identificar. El carcter se manifiesta en todas las
generaciones y los hijos de una pareja formada por un individuo afectado y uno
normal (que casi siempre es heterocigoto, si la enfermedad no es muy frecuente)
da una proporcin de 1:1 entre hijos normales y afectados. Ambos sexos estn
afectados en la misma proporcin.

Autosmico recesivo: se establece una herencia de un carcter determinado por

un gen recesivo cuando hay consanguinidad de los padres de los individuos
afectados. La mayor parte de los individuos afectados tienen padres normales. De
padres heterocigotos la proporcin entre hijos normales y afectados es 3:1. Todos
los hijos de padres afectados son afectados. Los hijos de un heterocigoto normal
con una pareja normal no son afectados.

Recesivo ligado al sexo: afecta principalmente a varones que provienen de

padres normales. La madre es normal pero es portadora del gen ligado al

194
cromosoma X que produce el defecto. En la familia hay hermanos, primos o tos
afectados.

Ligado al cromosoma Y: presente exclusivamente en varones, todos los hijos

varones de un hombre afectado estarn afectados (herencia holndrica).

Dominante ligado al sexo: los varones afectados con esposas normales

transmiten el defecto slo a las hijas.

Herencia mitocondrial: en este caso las mutaciones que producen enfermedades

estn relacionadas con el genoma haploide mitocondrial que se hereda
maternalmente. Ejemplo de esto se ha visto en pases asiticos donde el uso
indiscriminado de antibiticos ha causado mutaciones en el genoma mitocondrial
de una abuela cuyos nietos y bisnietos hijos de sus hijas y nietas son sordos.
Cabe sealar que el genoma mitocondrial codifica para genes que determinan
audicin.

Al determinar un tipo de herencia determinado en la especie humana con mayor

precisin se debe recurrir a estudios histricos. Las complicaciones que puedan
surgir se deben a penetracin incompleta del carcter, fenocopias (fenotipo
inducido ambientalmente, en este caso no hereditario que es muy parecido al
fenotipo producido por un gen conocido), factores raciales, edad.

195
Referencias.

International Human Genoma Sequencing Consortium. 2001. Initial sequencing

and analysis of the human genome. Nature 409: 860-921.

Jimnez-Snchez G, B Childs, D Valle. 2001. Human Disease genes. Nature 409:

853-855.

196
 ANEXO: CUESTIONARIOS

ANEXO 1: CUESTIONARIOS DE CLASES

CUESTIONARIO 1

1. Qu es una clula? Qu distingue a las clulas procariticas de las clulas

eucariticas?
2. Cmo se hace el estudio de la clula?
3. Haga un paralelo entre clula procaritica y eucaritica desde el punto de vista
de la estructura.
4. Cmo relaciona Ud el concepto estructura- funcin a nivel celular? D
ejemplos.
5. Mencione las principales macromolculas que componen la clula.
6. Mencione los principales procesos metablicos que cumple la clula.
7. Mencione los principales procesos fisiolgicos que cumple una clula.
8. Mencione los principales roles biolgicos que cumple una clula.
9. Cules son las molculas que dan las caractersticas fsicas a una
membrana celular?
10. Ilustre la forma en que una protena transmembrana est ubicada, refirase
especficamente a canales inicos y fuerzas hidrofbicas.
11. Qu es la difusin simple, difusin facilitada y transporte activo? D
ejemplos.
12. Cules son las funciones de la membrana plasmtica?

197
 Cuestionario 2

1. Qu rol juega el estado fsico de la bicapa lipdica en las propiedades

biolgicas de la membrana?
2. Discuta el efecto de: a) longitud de cadena del cido graso, b) grado de
insaturacin de los cidos grasos y c) colesterol, en la bicapa lipdica.
3. A qu se refiere el movimiento de flip-flop (difusin transversal) de los
fosfolpidos de membrana y cul es su funcin en las clulas?
4. Comente papel que cumple el colesterol en las membranas de clulas
animales.
5. Seale el tipo de protenas presente en las membranas biolgicas. Mencione
las diversas funciones que desempean las protenas de membrana.
6. Indique y comente las caractersticas principales del modelo de mosaico fluido
de la membrana biolgica.
7. Qu tipo de interacciones mantienen la estructura de las membranas? Se
requieren uniones covalentes?
8. Qu se entiende por permeabilidad selectiva de una membrana biolgica?
9. Qu es un canal inico dependiente de voltaje? Qu tipo de transporte
realiza? Cmo selecciona los iones que lo atraviesan? D dos ejemplos de
este tipo de canal.
10. Qu es un canal inico ligando dependiente? Cmo funciona? Seale un
ejemplo de esta clase de canal.
11. Hay enfermedades producto de canales inicos defectuosos de tejidos
excitable y epitelial. Al respecto seale qu tipo de canal est afectado en:
a) fibrosis cstica o fibrosis qustica, b) parlisis peridica hipercalmica,
c) sndrome del QT prolongado.
12. Cmo ocurre el paso de sustancias liposolubles a travs de la membrana
plasmtica? Cul es la fuerza impulsora para este tipo de transporte?
13. Mencione las caractersticas del proceso de difusin facilitada. D un ejemplo
de este tipo de proceso.
14. Qu tiene de particular el transportador de glucosa denominado GluT 4?
Cmo opera? Qu podra suceder eventualmente si el GluT4 es defectuoso
o completamente ausente?
15. Indique las caractersticas de un proceso de transporte activo primario. D un
ejemplo.
+
16. Cul es el rol de la fosforilacin en el mecanismo de accin de ATPasa Na -
+
K (bomba de sodio)?

198
 + +
17. Cmo afecta la ouabana la actividad de la ATPasa Na -K ? Seale qu
aplicacin tienen los digitlicos como la ouabana.
18. Qu son las acuaporinas y dnde se encuentran? Qu sucedera si la AQP-
2 faltara o fuera defectuosa?
19. De dnde proviene la energa para los procesos de transporte activo
secundario: cotransporte y de intercambio?
20. Cmo se efecta la absorcin de azcares en el epitelio intestinal? Comente
el proceso de absorcin de fructosa.
21. Muchos tipos diferentes de clulas poseen receptores que unen hormonas
esteroidales. En qu sitio de la clula piensa Ud. que podran residir esos
receptores? Y el receptor de insulina? Por qu?

199
 Cuestionario 3

1. Qu funciones desempea el retculo endoplsmico?

2. Cules son los organelos que participan de la sntesis de los componentes
de las membranas?
3. Cules son las funciones del retculo endoplsmico liso?
4. Cmo ocurre la sntesis de lpidos en el REL?
5. Cmo se realiza la detoxificacin en el REL?
6. Cul es la participacin del REL en la sntesis de hormonas esteroidales?
7. Cmo ocurre el transporte de Calcio en el REL y qu diferencias hay entre el
REL de la fibra muscular y otras clulas?
8. Qu tipos de Transportadores funcionan en le REL en relacin con el calcio?
9. Dnde ocurre la formacin de las lipoprotenas?
10. Qu importancia tiene la desfosforilacin de la glucosa en los hepatocitos del
hgado y en qu organelo ocurre?
11. Qu son los polirribosomas, donde se pueden encontrar, y cul es su
funcin?
12. Cules son las estructuras de una protena? Explique.
13. Hacia qu lugares son direccionadas las protenas que son sintetizadas en el
citosol, cul es el mecanismo de direccionamiento de protenas?
14. Mencione los pasos de la sntesis de una protena multipaso?
15. Qu es el PRS y cual es su funcin?
16. Cules son los aminocidos hidrofbicos y qu caractersticas tiene una
secuencia proteica que es rica en este tipo de aminocidos?
17. Cules son los pasos que llevan a la sntesis de protena, una vez que est
unido el ribosoma al mensajero?
18. Qu es un traslocn y que funcin desempea?
19. Qu funcin tiene la riboforina?
20. Qu significa que el cdigo gentico sea redundante?
21. Qu es un anticodn?

200
 Cuestionario 4

1. Qu es la glicosilacin de protenas, en qu organelos ocurre y cmo se

realiza?
2. Cules son las funciones del Golgi y por qu se le puede relacionar con el
servicio postal?
3. Por qu algunas protenas se fosforilan en el Golgi?
4. Cmo explica el procesamiento de la insulina, explique? Por qu se le
denomina procesamiento post- traduccional?
5. Mencione las enzimas que participan en las modificaciones a los azcares en
el Golgi y en el RE.
6. Cules son los componentes del Golgi?
7. Cmo se originan los lisosomas?
8. Cules son las vas de las protenas que pasan desde RE a Golgi? Explique
cuales son las diferencias de cada uno de los destinos.
9. Qu es KDEL, en que proceso participa y para qu sirve?
10. Cul es la diferencia de los destinos de una protena que sigue la va
citoslica?
11. Si una protena que va al ncleo es superior a 20 kDa, cmo entra al
ncleo? y si una protena tiene un peso menor a 20 kDa?
12. Qu es la clatrina y cul es la diferencia con un coatmero? En qu proceso
participa? Cul es su funcin?
13. Cules son las funciones del RE liso?
14. En qu proceso es posible recuperar los receptores en el Golgi?
15. Qu es la transcitosis, endocitosis y exocitosis?
16. Cuntos pptidos seales o secuencias seales tiene una protena integral
de la membrana plasmtica que forma parte de un canal multipaso? Cules son
y con qu elementos interactan?
17. Dnde ocurre la sulfatacin de protenas en la porcin de los oligosacridos?
Para qu sirve la sulfatacin?
18. Qu son las adaptinas y en qu proceso participan?

201
 Cuestionario 5

1. Qu determina que una protena sintetizada en el RER sea soluble (sea

liberada a la cavidad del RER) o sea insertada en la membrana?
2. Qu se entiende por preproinsulina, proinsulina e insulina? a qu proceso
celular se atribuye esta secuencia de eventos y dnde ocurre?
3. Dnde ocurre la glicosilacin inicial de las glicoprotenas y en qu consiste
este proceso?
4. Qu son las vesculas transportadoras y cul es su funcin?
5. Cmo ocurre la secrecin regulada de protenas, y la secrecin constitutiva?
Haga un paralelo.
6. Qu son los endosomas y cul es su funcin?
7. Qu es la traslocacin cotraduccional de protenas y dnde se produce?
8. Cmo las protenas que son sintetizadas en el RER, modificadas y
diferenciadas dentro del Golgi son dirigidas a los lisosomas?
9. Cmo ocurre el proceso de fusin de membranas entre una vescula y el
organelo de destino?
10. Porqu las enzimas contenidas en los lisosomas no destruyen las
membranas de los lisosomas?
11. Indique y comente las 4 vas por las cuales llega material a los lisosomas para
su degradacin.
12. Qu son los peroxisomas y qu funciones cumple en la clula?
13. Qu rol cumple la dinamina y la adaptina?
14. Cul es la funcin del pptido seal KDEL y del pptido seal KFERQ en las
protenas que los llevan?
15. Qu rol tiene el REL en el proceso de autofagia?
16. Qu es la Transcitosis? D un ejemplo.
17. Cul es la importancia de la glicosilacin en la clula?
18. Dnde ocurre la sntesis de lpidos en la clula?
19. Haga una lista con los aminocidos hidrofbicos.
20. Haga una lista con los aminocidos hidroflicos. Cules son los aminocidos
bsicos y cules los cidos. Cuales son los aminocidos que participan en la
formacin de puentes o enlaces disulfuro.
21. Qu es la traslocacin cotraduccional?
22. Nombre cules son las protenas transmembrana que participan en la
traslocacin cotraduccional que ocurre en el retculo endoplsmico rugoso y
que rol cumple cada una de ellas.

202
23. Qu rol cumplen los oligosacridos en la glicosilacin primaria que ocurre en
el retculo endoplsmico?
24. Cmo ocurre la glicosilacin primaria en el retculo endoplsmico?

203
 Cuestionario 5 (continuacin)

1. A qu estructuras corresponden las uniones intercelulares?

2. Qu funcin tienen las uniones intercelulares?
3. Cuntos grupos de uniones intercelulares pueden distinguirse y cules son?
4. Cmo est formada una unin oclusiva y qu protenas la componen?
5. Cuntos tipos de uniones anclantes pueden distinguirse y qu funcin
cumplen?
6. Cules son las protenas que forman las uniones anclantes?
7. Qu funcin cumplen las uniones comunicantes o nexos?
8. Cuntos tipos de protenas cumplen la funcin de adhesin celular y dnde?

204
 Cuestionario 6

1. A qu tipo de especializacin de la membrana plasmtica corresponde la

unin oclusiva y qu rol desempea en la clula? En qu tejido est
presente?
2. En qu estructuras celulares es posible encontrar actina, una protena
citoslica que forma parte de diversas estructuras?
3. Dnde se encuentran presentes las cadherinas y las cateninas y qu funcin
cumplen?
4. Cmo funcionan los nexos y cmo estn conformados?
5. Qu es la enfermedad de Glanzmann y el pnfigo vulgar?
6. Describa cmo est conformada una unin oclusiva.
7. Qu funcin desempean las protenas conocidas como chaperonas?
8. Qu son las integrinas y qu funcin cumplen?
9. Qu funcin desempean las protenas en la formacin de peroxisomas?
Qu caractersticas presentan estas protenas?
10. Cuntas vas tiene una protena codificada en el ncleo y sintetizada en los
polirribosomas libres de llegar al espacio intermembrana de la mitocondria?
11. En qu se diferencia la composicin lipdica de la membrana interna de la
mitocondria de la membrana externa y de otras membranas presentes en la
clula?
12. Dnde estn situadas las porinas, qu son y qu funcin cumplen?
13. Qu funcin se desarrolla en cada uno de los compartimentos de la
mitocondria: a) membrana externa, b) membrana interna, c) espacio
intermembrana, d) matriz mitocondrial? En cules de estos compartimentos
es posible encontrar protenas integrales y en cules protenas solubles?
14. Con qu funcin es posible asociar las protenas TIM y las protenas TOM?
Desde el punto de vista de secuencia de la protena ser posible encontrar
dominios de la protena que sean fuertemente hidrofbicos? Por qu?
15. A qu se le denomina enfermedades lisosmicas de almacenamiento o
acumulacin? Cul es la causa? Qu efectos tiene sobre la clula?
16. Cules son los destinos que tienen las protenas en la va citoslica? Qu
mecanismos permiten que las protenas no se equivoquen y lleguen al
destino para cumplir sus funciones?
17. Qu funciones desempean las protenas que se quedan en el citosol y no
se incorporan a algn organelo?
18. Qu protenas componen la lmina nuclear?

205
19. Qu es la estructura de poro?
20. Qu dimensiones deben tener las sustancias que atraviesan la envoltura
nuclear y por donde lo hacen y las sustancias que atraviesan la membrana
externa de la mitocondria?
21. Qu es el citoesqueleto? Qu funciones celulares desempea? Cules
son sus componentes?
22. Qu es el nuclelo y qu funcin desempea? Cmo est conformado?
23. Qu es la cromatina, eucromatina y heterocromatina?
24. Qu son las histonas y cul es su rol en la formacin de la cromatina?
25. Qu se entiende por transporte activo secundario y qu diferencias hay con
el transporte activo secundario?
26. Qu son los transportadores GLUT y cuantos tipos existen?
27. Cmo se forman los glicolpidos o glicoesfingolpidos y dnde ocurre el
proceso? Cuntos tipos de estas molculas existen, dnde se encuentran y
en que se diferencian?
28. Qu funcin cumple el dolicol en la sntesis de glicoprotenas? dnde se
encuentra?
29. Qu son los cuerpos residuales?
30. Qu componentes macrololculares es posible encontrar en la matriz de la
mitocondria?
31. Qu rol cumple el ADN mitocondrial?
32. Qu funciones anexas se realizan en la mitocondria, adems de la
respiracin celular?
33. Mencione al menos seis protenas integrales de membrana que cumplan una
funcin preponderante en las mitocondrias, peroxisomas, nucleo, lisosomas,
golgi, retculo endoplsmico.
34. Mencione organelos donde es posible encontrar protenas traslocadoras.
35. Qu se entiende por traslocacin del ribosoma? Explique.

206
 Cuestionario 7

1. Cules son las caractersticas genticas de las enfermedades atribudas a

defectos en los genes?
2. Qu importancia tiene la informacin para los sistemas biolgicos?
3. Cmo se define genoma?
4. Qu son las ciclinas y cmo regulan el ciclo celular?
5. Cules son los tipos de proliferacin celular y cul es la importancia de
estos?
6. Cmo acta la protena p53 en el ciclo celular?
7. Qu eventos promueve el factor promotor de la sntesis de ADN?
8. Qu eventos regulan los factores promotores de la mitosis?
9. Cul es el producto de un ciclo celular?
10. Cmo se define G1?
11. Qu es un nucleosoma?
12. Qu es la cromatina y qu diferencia hay con un cromosoma metafsico?

207
 Cuestionario 7 (continuacin)

1. Nombre las etapas de la profase I y describa cmo ocurre cada una de ellas.
2. A qu corresponde el complejo sinaptonmico? Cmo est formado? Qu
funcin cumple?
3. Qu importancia biolgica tiene la meiosis desde el punto de vista de la
variabilidad gentica? En qu etapas se genera esta variabilidad?
4. Dnde ocurre la reduccin del nmero diploide en la meiosis (2n a n)?
5. Qu estructura del cromosoma une a los cromosomas a la lmina perifrica
de la envoltura nuclear en el leptonema?
6. Qu es un cariotipo?
7. Qu es la heterocromatina? Cuntos tipos de heterocromatina existen?
8. Cul es la estructura de un cromosoma metafsico? Cuntos tipos de
cromosoma existen de acuerdo a la posicin del centrmero?
9. Qu son los ndulos de recombinacin? Qu funcin cumplen?
10. Qu es el corpsculo de Barr?
11. Cuntos compartimientos nucleares existen? Cmo se define un
compartimiento en el ncleo y en la clula?
12. Qu es el nuclelo? Qu funcin cumple? Cul es su estructura? A qu
cromosomas se encuentra asociado?
13. Qu son los cuerpos de Cajal?
14. Qu son los territorios cromosmicos y cmo se distribuye la cromatina en
los territorios?
15. Qu es el complejo del factor de splicing?
16. Cmo est formado el poro nuclear y cul es su funcin?
17. Qu son las importinas y las exportinas? Qu funcin cumplen?
18. Cmo est conformada la lmina nuclear? Cul es la funcin de la lmina?
19. Cmo define la matriz nuclear y cmo est conformada?

208
 Cuestionario 8

1. Describa la va apoptsica en un tejido nervioso.

2. Indique en forma precisa cuales son las formas de regulacin de la protena
p53 a nivel celular.
3. Qu es un oncogn?
4. Qu es un gen supresor de tumores?
5. En qu consiste la metstasis?
6. Cul es el mecanismo general a nivel molecular que se regula la apoptosis y
qu genes participan en Caenorhabditis elegans y en vertebrados?
7. Indique las posibles funciones normales que en una clula puede cumplir un
protooncogn.
8. Qu es APC y qu regula y cmo regula?
9. Qu importancia tiene la poliubiquitinacin de una ciclina cuando est
formando parte de un complejo regulador del ciclo celular?
10. En la fibrosis qustica las mutaciones que se producen a nivel de ADN
corresponden en la mayora de los casos a la falta de un nucletido en la
secuencia del ADN, Cmo explica que este pequeo cambio lleve a una
catstrofe en el funcionamiento de las clulas donde se expresa el gen?.

209
 Cuestionario 9

1. Qu aspectos se consideran importantes en la teora del envejecimiento?

2. Cul es el aspecto gentico del envejecimiento?, refirase a genes y su
accin.
3. Qu es el sndrome de Werner?
4. Qu es un locus?
5. Qu es un alelo?
6. Qu es una serie allica?
7. Qu es dominancia, codominancia y recesividad? Refirase a sistema AB0
8. Qu es ligamiento y cmo se relaciona con la distancia entre los genes en un
cromosoma?
9. Qu es haplotipo? Ejemplifique con el sistema Rh de acuerdo a Fisher y
Race.
10. Cmo influye el sistema H en la expresin del sistema AB0?

210
 Cuestionario 10

1. Cules son los principios mendelianos y en qu casos se aplican a la

herencia humana?
2. Qu se entiende por segregacin independiente de los caracteres?
3. Qu diferencia existe entre 2 caracteres codifcados por dos loci que se
encuentran en el mismo cromosoma y caracteres codificados en dos loci
ubicados en cromosomas distintos?
4. En qu consiste la herencia ligada al sexo? Explique.
5. Cmo se define mutacin y cuntos tipos de mutacin se reconocen de
acuerdo a las distintas clasificaciones que existen?
6. Qu son las traslocaciones cromosmicas?
7. Qu son las aneuploidas?
8. Qu son las poliploidas?
9. A qu se debe el sndrome de Down?
10. Qu es un corpsculo de Barr?

211
 Cuestionario 11

1. Indique el significado del primer y segundo principio mendeliano de la

herencia.
2. Cul es la consecuencia principal del ligamiento en trminos de proporcin
gamtica en la generacin F1? Haga un paralelo con lo que sucede en un
dihibridismo.
3. Cmo explica la herencia de la hemofilia en el que gran parte de los varones
de una familia son hemoflicos?
4. Cmo explica que en una mutacin de punto, donde hay ausencia de un par
de nucletidos en la secuencia de ADN que codifica el gen se produzca un
defecto tan importante como es la falla de un canal de cloruro en la fibrosis
qustica?
5. Cmo explica la diversidad de combinaciones que forman los haplotipos del
sistema HLA?
6. Cmo explica la incompatibilidad entre hermanos en trminos de
transplantes?
7. Cmo explica la diversidad de anticuerpos que es capaz de producir el
sistema inmunolgico de un individuo en respuesta al medio externo?
8. Qu se entiende por individualidad gentica?
9. Qu es aglutinacin?

212
 Cuestionario 12

1. Qu es el Sistema HLA? Qu significa etimolgicamente? Cul es su

funcin en el organismo?
2. Cmo se hereda el sistema HLA? En qu cromosoma se encuentra?
3. Cuntos genes participan en la formacin de los anticuerpos? En qu
cromosomas se encuentran?
4. Qu son las inmunoglobulinas?
5. Cmo estn formadas las inmunoglobulinas?
6. Cuntos tipos de cadenas polipeptdicas forman las inmunoglobulinas?
7. Explique brevemente cmo se genera el gran nmero de anticuerpos en el
organismo.
8. Qu se entiende por recombinacin somtica y qu diferencia tiene con la
meitica?
9. Qu es un pedigr? cmo se representan o visualizan las distintas formas
de herencia en un pedigr?
10. Qu es consejo gentico? Cmo puede integrarse un enfermero o
enfermera a los equipos de trabajo de consejeros genticos?
11. Una familia cuyo padre tiene grupo A, Rh positivo y la madre tiene grupo 0 y
Rh negativo tienen tres hijos con grupo 0 y Rh negativo. Explique. Construya
el pedigr. Asigne los genotipos correspondientes a cada miembro de la
familia. Defina genotipo. A qu tipo de herencia corresponde?
12. Usando un tablero de Punnett resuelva la siguiente situacin de compatibilidad
en una familia, usando los loci A y B. Asigne alelos arbitrarios. Recuerde que
los alelos son numerosos y prcticamente no hay situaciones de
homocigosidad. Defina adems en este contexto qu entiende por haplotipo.
A qu tipo de herencia corresponde?.
13. Haga los esquemas de aglutinacin para los siguientes genotipos en el
sistema Rh. A qu tipo de herencia corresponde.
a) CcDDEe
b) CC Dd ee
c) CcDd EE
d) ccddEe

213
14. Dibuje y rotule una molcula de Inmunoglobulina, indicando los posibles pasos
que la originaron desde el punto de vista gentico y molecular.
15. Explique cmo funcionan los linfocitos T, linfocitos B y macrfagos en la
produccin de anticuerpos. Relacione con lo que ocurre en el SIDA y el resfro
comn. Relacione con la produccin celular de anticuerpos y receptores de
membrana cmo funciona? Intente una hiptesis. Por qu los linfocitos
detienen su ciclo celular y en qu etapa?
16. Relacione la informacin relacionada con las mutaciones, el cncer, factores
de crecimiento, transduccin de seales intracelulares, proliferacin celular,
apoptosis, cariotipo. D ejemplos.
17. Relacione regulacin del ciclo celular con apoptosis, envejecimiento y
cromosomas. Refirase a las teoras de envejecimiento.
18. Relacione consejo gentico, proyecto genoma humano, construccin de
pedigrs y hemofilia.
19. Haga un paralelo entre profase meitica de espermatognesis y ovognesis y
mittica a nivel molecular y celular. Describa cmo los factores de proliferacin
controlan la mitosis y relacionelo con cncer. Refirase tambin al rol que
cumplen las clulas foliculares y de Sertoli, comparelas.

214
 ANEXO 2: CUESTIONARIOS DE LABORATORIOS

CUESTIONARIO LABORATORIO 1

1. Qu pasa con el tamao del campo visual a medida que pasamos desde el
aumento menor al mayor?
2. Con qu componentes del microscopio se realiza el examen topogrfico?
3. Cules son los dispositivos del microscopio que permiten variar la intensidad
de luz que incide en la muestra?
4. Cul es el lmite de resolucin del ojo humano? y del microscopio prico?
5. En qu consiste el sistema parafocal?
6. Enumere los componentes del sistema esttico.
7. Cules son los pasos necesarios a seguir para ubicar una preparacin en el
microscopio y enfocar con objetivo mayor?
8. Cules son las propiedades del microscopio ptico compuesto?

215
 Cuestionario Laboratorio 2

1. Qu es un frotis? en qu casos se utiliza? D ejemplos.

2. Qu tipos de clulas se pueden distinguir en la sangre? Enumere y d las
carctersticas de cada uno.
3. Qu es la osmosis? Qu es la presin osmtica? De qu depende?
4. Qu es la plasmlisis? Qu es la crenacin? Explique cmo se realizaron
los experimentos en el laboratorio.
5. Por qu el cloruro de sodio no puede atravesar la membrana plasmtica, y
de qu manera es posible que entren los iones a la clula?
6. Por qu en el experimento de las levaduras algunas estaban teidas y otras
no? Cul es el rol de la membrana plasmtica?
7. Cmo explica que la sntesis de protenas sea vital para que nuestras
neuronas permanezcan funcionales a lo largo de nuestra vida? Argumente
desde el punto de vista de la estructura celular.
8. Qu tcnica se usa para teir el lobulillo de hgado de cerdo? Qu
elementos celulares puede distinguir?
9. Las clulas renales que conforman el epitelio de tbulo renal tienen la funcin
de absorber contra gradiente Cmo se apoya esta observacin desde el
punto de vista de la estructura celular?
10. Enumere las funciones de las siguientes estructuras y organelos celulares:
a) Membrana plasmtica.
b) Ncleo.
c) Mitocondria.
d) Complejo de Golgi.
e) Peroxisomas o microcuerpos.
f) Lisosomas.
g) Retculo endoplsmico liso.
h) Retculo endoplsmico rugoso.
i) Ribosomas.

216
 ANEXO 3: CUESTIONARIOS DE LAS PELCULAS

CUESTIONARIO PELCULAS 1

1. Qu funcin desempean las protenas en la clula?

2. Cules son los tipos de protenas mencionadas en la pelcula y cul es su
funcin?
3. Cules son los pasos generales que llevan a la sntesis de protenas?
Cules son las principales enzimas que participan en este proceso?
4. Cules son las diferencias entre ARN y ADN? Cuntos tipos de ARN
existen?
5. Cundo una protena adquiere su forma tridimensional?
6. Cmo se puede explicar que un organismo procarionte tenga protenas
similares en estructura y funcin a las de un eucarionte?
7. Qu se entiende por porcentaje de similitud en una protena?
8. Qu problema de salud tiene Christopher Nance? Cmo se relaciona con la
estructura de la hemoglobina que tiene en sus glbulos rojos? De qu forma
se relaciona con la hemoglobina normal?
9. Cmo se relaciona el estudio de las protenas con el estudio del cncer?
10. Qu significa expresin diferencial del desarrollo?
11. Qu rol cumple la protena NM 26?
12. Qu es un opern y en que clase de organismos est presente?
13. Qu diferencia hay entre las protenas de la piel y las protenas de las uas?

217
 Cuestionario Pelculas 2

1. De acuerdo a la pelcula cul es la definicin de vida?

2. Cmo estn organizados los seres vivos?
3. Qu es el metabolismo?
4. Cules son las caractersticas de la vida?
5. En qu consiste el segundo principio de termodinmica y cmo se
relaciona con la vida.
6. Qu tipos de clulas son mencionadas en la pelcula y cules son sus
caractersticas?
7. Por qu existen tantos tipos de clulas en un organismo?
8. Cmo se define tejido, rgano y sistema de rganos?
9. Cul es la razn que exista la reproduccin sexual en la naturaleza?
10. Qu es el mtodo cientfico?
11. Cules son los pasos del mtodo cientfico?
12. Qu es una hiptesis?
13. Cmo se define teora?
14. Cmo se comprueba (aprueba o rechaza) una hiptesis?

218
 Cuestionario Pelculas 3

1. Qu es la materia? Cules son los componentes ms pequeos de la

materia?
2. Qu son los istopos?
3. Cmo afecta el ozono a la salud humana?
4. Cmo se forma un enlace inico?
5. Qu tipo de tomos forman las protenas?
6. Por qu la molcula de agua tiene cargas parciales?
7. Cmo se forman los enlaces o puente hidrgeno?
8. Qu es la cristalografa? Para qu sirve?
9. Cules son las molculas de la vida?
10. Qu son las grasas?
11. Qu son las protenas?
12. A qu se debe el plegamiento especfico de las protenas?
13. Qu tipo de fuerzas favorecen el plegamiento de una protena?
14. Qu rol cumplen las cinasas o quinasas en la clula?
15. Qu enfermedades se encuentran asociadas a quinasas o cinasas
defectuosas?

219
 Cuestionario Pelculas 4

1. Cules son las razones de hacer cortes histolgicos?

2. Cmo se toma una muestra? Qu cuidados hay que tener?
3. Cules son las etapas de la tcnica de corte histolgico?
4. En qu consiste la etapa de fijacin y cuales son los principales fijadores?
5. Cul es el objetivo de la etapa de fijacin?
6. En qu consiste la etapa de deshidratacin y sustitucin? Cul es el
objetivo de esta etapa?
7. En qu consiste la etapa de inclusin? Cul es el objetivo? En qu
material se incluye?
8. En qu consiste la etapa de corte? Cul es el objetivo? En qu
instrumento se realiza?
9. En qu consiste la etapa de tincin? Cmo se realiza? Cules son las
tinciones usadas?
10. En qu consiste la etapa de montaje? Qu materiales son necesarios para
hacer este paso?

220
 Cuestionario Pelcula 5

1. Cul es la unidad de la vida?

2. Cmo se ilustra la relacin estructura funcin en la audicin?
3. Qu organelos se mencionan en la pelcula y cul es su funcin?
4. Cul es la funcin del retculo endoplsmico rugoso?
5. Cul es la funcin del Golgi?
6. Cul es la composicin del ncleo y cul es su funcin?
7. Cmo la funcin de una clula determina la abundancia de cierto organelos?
D ejemplos.
8. Cul es el rol de la membrana plasmtica? Cules son sus caractersticas?
9. Cules son las protenas integrales responsables del intercambio inico?
10. Qu es el transporte pasivo y el transporte activo?
11. Qu es la endocitosis?
12. Qu es la exocitosis?
13. De dnde se originan las vesculas que se fusionan con la membrana
plasmtica?
14. Cules son las diferencias entre clula procariticas y eucariticas?
15. Desde el punto de vista qumico Cules son las funciones de los organelos
de las clulas eucariticas?
16. Cules son las funciones del citoesqueleto de la clula eucaritica y cmo
est conformado?

221
 Cuestionario Pelculas 6

1. Cuntos reinos existen en ela naturaleza?

2. Qu criterios se usan para ordenar las especies en un determinado
sistema de clasificacin?
3. Considerando la existencia de todas las bacterias qu porcentaje relativo
es daino al hombre?
4. Cules son los tipos de monera que existen?
5. Para qu sirve la tincin Gram?
6. Qu criterios sirven para diferenciar bacterias?
7. Qu es la fisin binaria? Cmo ocurre? Cunto tiempo dura?
8. Qu son los virus? Cuntos tipos de virus se mencionan en la pelcula?
9. Qu caractersticas tienen los antibiticos para combatir las bacterias?
10. Cmo estn conformados los virus?
11. Qu necesitan los virus para reproducirse?
12. Cmo infecta un virus a una clula?
13. Qu problema causan los virus a la salud humana?
14. Cul es la mejor forma de evitar las enfermedades?
15. Qu es la marea roja? A qu tipos de organismos corresponden?
16. Qu es la teora endosimbitica?

222
 Cuestionario Pelculas 7

1. Cmo se reproducen los virus?

2. Cmo estn conformados los virus?
3. Qu son los retrovirus?
4. Qu enfermedades son producidas por virus?
5. Por qu es difcil observar y diagnosticar virus?
6. Qu es una pandemia?
7. Cul fue la contribucin de la Primera Guerra Mundial a la pandemia de
infuenza?
8. Cmo se reproduce el bacteriofago T4?
9. Qu son las vacunas?
10. Cmo surgieron las vacunas?
11. Cules son las funciones del sistema inmune?
12. Cmo se fabrica una vacuna?
13. A qu razn se atribuye el cambio de cepas de virus que a lo largo del
ao producen la gripe?
14. Cmo se transmite la poliomelitis?
15. Qu es el rotavirus y en qu circunstancias y lugar se ha hecho ms
frecuente?
16. Cmo se extingui la viruela en el mundo?
17. Por qu se piensa que la viruela contribuy a la conquista de Amrica?
18. Qu es la emergencia viral? En qu circunstancias ocurre?
19. Cmo se rastrea un virus en la selva?
20. Qu rganos ataca el virus hanta en humanos?
21. De acuerdo a la pelcula Cmo se origin y disemin el virus del SIDA?
22. Dnde surgi el virus ebola o virus del mono verde?
23. Cul es la utilidad potencial de los virus para curar enfermedades como
la fibrosis qustica? Cmo se procedera?

223
 Cuestionario Pelcula 8

1. Cul es el objetivo de la pelcula?

2. Qu es un cariotipo? Cmo se confecciona un cariotipo?
3. Qu caractersticas tienen las diferentes especies desde el punto de vista del
nmero de cromosomas?
4. Qu funcin cumple la heparina?
5. Qu funcin cumple la colchicina?
6. Qu funcin cumple la fitohemoaglutinina?
7. Por qu los linfocitos son sometidos a shock osmtico luego de ser
cultivados?
8. Con qu tincin se tien los crosmosomas?
9. Qu elementos es posible visualizar al microscopio luego de hacer la tcnica
del goteo sobre el portaobjeto y teirlos?
10. Qu es el sndrome de Turner, a qu se debe? Cules son las
caractersticas que presenta la persona afectada?
11. Qu es el sndrome de Klinefelter, a qu se debe? Cules son las
caractersticas que presenta la persona afectada?
12. Qu es el sndrome de Down, a qu se debe? Cules son las
caractersticas que presenta la persona afectada?
13. Qu es el sndrome de maullido de gato (cri du chat), a qu se debe?
Cules son las caractersticas que presenta la persona afectada?
14. Cul es la causa del tumor gstrico desde el punto de vista cromosmico?
15. Cul es la causa de la leucemia mieloide crnica desde el punto de vista
cromosmico?
16. Cul es el efecto de las sustancias mutagnicas sobre la forma de los
cromosomas?
17. Qu efectos tienen los virus sobre el genoma?
18. Por qu se decanta la muestra de sangre antes de hacer los cultivos de
linfocitos?

224
 Cuestionario Pelculas 9

1. Cul fue el aporte de Mitchel al estudio del ADN?

2. Cul fue la contribucin de Hershey y Chase al estudio del ADN?
3. Cules son las bases nitrogenadas del ADN?
4. Qu es un nucletido y cmo est conformado?
5. Cmo estn conformados los pasamanos de la escalera de ADN?
6. Qu es lo que identifica a una especie desde el punto de vista del ADN?
7. Cmo se realiza la duplicacin del ADN y en qu etapa del ciclo celular
ocurre?
8. Cundo son sintetizadas las cromtidas hermanas?
9. Qu es lo que pasa con el nio Andrew Gobea? Qu enfermedad tiene y
por qu?
10. Desde el punto de vista gentico cul es la constitucin gentica del padre, la
madre y la hermana de Andrew?
11. Qu es la terapia gnica? Cmo se aplic a Andrew?
12. Dnde se encontraba inserto el gen ADA? Qu se trat de hacer para
introducir el gen sano?
13. Qu es un vector? De qu naturaleza es?
14. A qu corresponden las enzimas de restriccin y qu funcin cumple?
15. Qu es una ligasa y que funcin cumple?
16. A qu corresponde el ADN recombinante?
17. Cmo se evalu el tratamiento aplicado a Andrew?
18. Qu es el PCR?

225
 Cuestionario Pelculas 10

1. Cul es la funcin de la divisin celular?

2. Qu son los cromosomas? Qu es la cromatina?
3. Qu son las cromtidas?
4. Qu son los centrmeros? Qu funcin cumplen?
5. Por qu razn la molcula de ADN siendo tan larga, puede estar
contenida en el ncleo de una clula?
6. Qu es el cariotipo y para qu sirve?
7. Cul es el nmero haploide de la especie humana?
8. Qu son los cromosomas homlogos?
9. Desde el punto de vista del nmero de cromosomas cmo se diferencias
las distintas especies?
10. Cules son las etapas de la mitosis?
11. Cmo se mantiene el nmero de cromosomas de una clula a travs del
ciclo celular, y a travs de las generaciones?
12. Qu caractersticas tiene la interfase?
13. Qu caractersticas tiene la mitosis?
14. Cules son los eventos que ocurren en la profase de una clula?
15. Qu permite que los cromosomas se muevan en la anafase?
16. Qu funcin cumple la mitosis en distintos organismos?

226
 Cuestionario Pelculas 11

1. Cul es el enfoque de Mendel al iniciar sus estudios sobre herencia en

las arvejas?
2. Qu evento vital es intervenido para producir los caracteres deseados en
la frutilla?
3. Qu significa dominancia y recesividad en trminos de expresin
gentica?
4. A qu corresponden los factores de Mendel? Dnde se encuentran
fsicamente?
5. Qu es un alelo?
6. Qu es la homocigosis y la heterocigosis?
7. Qu pasa cuando se cruzan dos homocigotos o cuando los parentales
son heterocigotos?
8. Qu es un octoploide, y qu es un diploide?
9. A qu corresponde una cruza monohbrida?
10. Cmo se explica que de padres a hijos se traspase la informacin
gentica?
11. Qu es el cuadrado y para qu sirve?
12. Haga un Tablero de Punnet con T= alto y t= enano de un cruzamiento
entre padres heterocigotos Qu proporcin de fenotipos altos hay en la
generacin F1 o descendencia directa?
13. Qu es un cruce dihbrido? Cul fue el enunciado de la ley o principio
mendeliano que surgi de los estudios de Mendel?
14. Cuntos tipos de gametos distintos resultan de un cruzamiento dihbrido
entre padres heterocigotos altos y prpura?
15. Cmo se logra que las palomas sean blancas puras?
16. Cmo se denomina este tipo de interaccin entre genes para el color?
17. Cmo se explica que las palomas jaspeadas den colores blanco puro en
las palomas?
18. Qu es la codominancia? Qu ejemplos se dan en la pelcula?
19. Qu es la dominancia incompleta? Explique el ejemplo de las flores
dragones.
20. Por qu no se ve el color rojo o negro azulado en las palomas?
21. Qu es la interherencia polignica?

227
 Cuestionario Pelcula 12

Primera Parte.

1. En qu consiste el Proyecto genoma Humano?

2. Cmo se defina Genoma?
3. Cuntos pares de cromosomas hay en el genoma Humano?
4. Qu es un gen?
5. Cul fue la contribucin de Watson y Crick?
6. Por qu los travesaos son ms importantes que los pasamanos de la
escalera del ADN, desde el punto de vista gentico?
7. Cmo se hace la lectura contenida en la molcula de ADN?
8. De dnde se obtiene la muestra para el anlisis de ADN de una persona?
9. Cul es la ventaja gentica de la familia Limone proveniente de Miln?
10. Cmo se explica esta ventaja gentica?
11. Por qu esta caracterstica est slo presente en algunas familias y no en
otras?
12. Qu nombre recibe el gen responsable de esta caracterstica y en qu
cromosoma se ubica?
13. Cmo transcurre la transcripcin de un gen?
14. Qu es el ADN mitocondrial y cules son sus caractersticas? Cules son
las consecuencias del proyecto Genoma Humano?

Segunda Parte.

1. Qu son los chips de ADN?

2. Cul es el principal objetivo del Proyecto Genoma Humano?
3. Qu es el cncer? Qu es la metastasis?
4. Cul es el problema de salud que afecta a la enfermera y cul es la causa?
5. Qu funcin cumple la protena p53 en la clula?
6. Qu funcin cumple la protena ras?
7. En el caso de la enfermedad que padece la enfermera Cul es la causa
gentica especfica? Qu causa esto en el mal funcionamiento de la protena
p53?
8. Desde el punto de vista gentico Cmo se puede mejorar una clula
cancerosa?

228
9. Qu rol cumple el virus del resfro comn en el experimento de terapia
gnica?
10. Qu causas o evento celular provoca el envejecimiento?
11. Qu efectos tienen los radicales libres sobre el ADN?
12. Cul es el evento celular desencadenado por la protena p53 cuando esta
protena detecta algn evento extrao en la clula?
13. Qu son los telmeros? Cules son sus caractersticas?
14. Por qu razn no funciona la dicisin celular cuando los telmeros son
demasiado cortos?
15. Qu funcin cumple la telomerasa? En qu etapa del desarrollo se
encuentra activa?
16. En qu cromosoma se ubica la informacin (locus) para la telomerasa?

229
 ANEXO 4: CUESTIONARIO DE SEMINARIOS 1

CUESTIONARIO- SEMINARIO DE VIRUS 1

CAP 23 VIRUS

1. Cmo es la estructura de un virus?

2. A qu se les denomina bacteriofago?
3. Qu son los virus virulentos o lticos?
4. Cuales son los virus temperados o lisognicos?
5. Cmo se realiza un cultivo de virus?
6. Cul es la secuencia de un ciclo ltico? Explique cada etapa
7. Qu es un profago?
8. A qu se le conoce como conversin lisognica?
9. Qu es la transduccin?
10. Cul es la secuencia de una infeccin lisognica?
11. Qu es un viroide?
12. Cmo ocurre la coexistencia con virus?
13. Qu es la cpside?
14. Qu es la transcriptasa inversa?
15. Qu enfermedades virales hay en animales y por qu se desarrollan?
16. Qu relacin hay entre virus y cncer?
17. Qu son los priones?
18. Qu tratamientos son posibles en las enfermedades producidas por virus?
19. Cul es el origen de los virus?
20. Qu rol tiene un profesional de la salud como un (a) enfermero (a) en la
prevencin de este tipo de afecciones causadas por virus?

230
 Cuestionario- Seminario de virus 2

La gripe y sus virus

1. A qu familia pertenecen los virus de la gripe? Cules son sus

caractersticas?
2. Cules son las caractersticas moleculares de estos virus?
3. Qu protenas es posible distinguir?
4. Qu produce la hemaglutinina en los glbulos rojos y por qu?
5. Qu enzimas es posible encontrar en estos virus?
6. Cmo es posible diferenciar los virus de las gripes A, B y C?
7. Cules son las etapas del ciclo biolgico de un virus de la gripe?
8. Qu caractersticas tiene el ARN viral? Cmo puede proliferar un virus si
tiene ARN, y no ARN, como es el caso de los retrovirus?
9. Cmo y por qu se producen las epidemias y pandemias de la gripe?
10. Qu problema presenta la vacunacin con virus atenuados? Cmo se
soluciona?
11. Qu son los adyuvantes?
12. En qu consisten las vacunas nuevas? Qu son los liposomas?
13. En qu consisten las vacunas recombinantes?
14. Qu es la amantadina y la rimantadina?
15. Cul es la relacin entre virus y lisosoma?
16. Cul es la importancia de este tema para un profesional enfermero o
enfermera en formacin?

231
 Cuestionario- Seminario de virus 3

Desarme de los virus de la gripe

1. Qu es una pandemia? D ejemplos.

2. Qu problemas presentan las vacunas contra la gripe? Cunto se demora
desarrollar una vacuna contra una nueva variante de virus?
3. Qu origen tuvo la gripe de Hong Kong?
4. Qu frmacos pueden ser administrados contra la gripe? Cul es su efecto
sobre el organismo? Cul es la diferencia con otros frmacos o curaciones
tradicionales?
5. Cul es el mecanismo de accin de estos frmacos?
6. Qu problemas presenta el uso de los frmacos amantadina y rimantadina?
7. Qu es la neuraminidasa? Qu relacin hay con los frmacos contra la
gripe?
8. Qu clulas son atacadas de preferencia por los virus de la gripe?
9. Cuntos tipos gripales existen? Cules son las caractersticas de cada tipo?
10. Explique detalladamente el ciclo biolgico de un virus gripal.
11. Qu es al cido silico? Cul es su rol?
12. Qu es la deriva antignica y el desplazamiento antignico? Explique y
ejemplifique.
13. Cul es la causa posible de la pandemia gripal de 1957 y 1968?
14. Qu es un reservorio viral?
15. Por qu se menciona la frase barrera de especies?
16. Qu estudios se realizaron en neuraminidasa?
17. Qu caractersticas del sitio activo de la neuraminidasa permiten mejorar el
anclaje de una molcula de cido silico?
18. Qu problemas present el GS4071?
19. Cmo se administra en zanamivir?
20. Qu es la M2 vrica? En qu tipos de virus es posible encontrarla?
21. Cul es el impacto social de una epidemis gripal?
22. Cuntos tipos de vacunacin se sealan en el texto? Cmo se hace la
vacuna de ADN?
23. Qu es la hemaglutinina?
24. Qu pasa cuando un retrovirus queda atrapado en un endosoma de la
clula?

232
 Cuestionario- Seminario de virus 4

El primer retrovirus humano

1. Qu es la retrotranscriptasa o transcriptasa inversa?

2. Qu enfermedades humanas se deben a retrovirus?
3. Qu caractersticas tienen los virus HTLV, y los virus FeLV? Qu
enfermedades producen?
4. A qu se refiere con secuencias de ADN endgeno y con virus exgeno?
5. Qu es un provirus? En qu cromosomas se integra? Por qu se dice que
las clulas de un tumor son clonales?
6. Explique el ciclo de vida de un retrovirus.
7. De cuntas formas es posible detectar un retrovirus en la clula? Cul es la
herramienta ms sensible?
8. En qu consiste el ensayo de la retrotranscriptasa?
9. Qu avances se logr con el descubrimiento de los factores de crcemiento?
10. Qu es la fitohemoaglutinina (PHA)? Cul es su accin sobre el cultivo de
clulas T?
11. Cul es el mecanismo propuesto en la aparicin de la leucemia?
12. Qu relacin hay entre leucemia y HTLV? Qu sntomas presentan los
pacientes?
13. Cul es la distribucin geogrfica del virus HTLV-I? Qu relacin hay con la
leucemia adulta de las clulas T (ATL)?
14. Cules son los mecanismos de induccin de la leucemia?
15. Qu diferencias hay entre el virus HTLV-I y los que producen la leucemia
crnica (ALVy MuLV)?
16. A qu se refiere con actuacin en trans?

233
 Cuestionario- Seminario de virus 5

Los nuevos virus

1. A qu se debe la aparicin de "nuevos virus", es esto un fenmeno casual?

2. Cmo se define una "enfermedad emergente"? D ejemplos.
3. Qu virus son responsables de las fiebres hemorrgicas? A qu familias
pertenecen?
4. Cmo se contagia una persona con estos virus? Explique cada caso
sealado en el trabajo.
5. Cmo influye la devastacin del medio ambiente para la aparicin de nuevas
virus? Explique los casos sealados en el trabajo.
6. Por qu se les denomin Arenaviridae?
7. Qu es el hantavirus? Cmo es transmitido al hombre?
8. Cmo la industria biolgica ha contribudo a la aparicin de nuevos virus?
Cmo visualiza este aspecto como futuro profesional de la salud? Qu
cuidados debera tener en el manejo de este tipo de vacunas si Ud los tuviera
que manipular?
9. Explique claramente cmo se han producido las contaminaciones
accidentales por virus y por qu casos fueron conocidos?
10. Qu caractersticas en cuanto a conformacin tienen los Bunyaviridae,
Arenaviridae y Filoviridae?
11. Qu caractersticas son observables en los individuos que son infectados por
estos virus?
12. Qu problemas hay al momento de manipular estos virus en un laboratorio?
13. Con que herramienta es posible verificar un contagio con estos virus?
14. Qu son los reservorios virales, explique en relacin al virus hanta?
15. Qu medicamentos preventivos existen en la lucha contra estos virus?
16. Qu acciones es posible desarrollar para evitar nuevos problemas virales en
nuestro medio?

234
 Cuestionario- Seminario de virus 6

El virus del SIDA

1. Cul es el nombre del virus que produce el SIDA?

2. Cmo se produce la infeccin?
3. Cul es la clula afectada?
4. Qu es el sarcoma de Kaposi y qu relacin tiene con el SIDA?
5. Por qu concluyeron que asociado al SIDA hay una deficiencia
inmunolgica?
6. Cuntos tipos distintos de virus que producen SIDA existen y cmo se
transmiten?
7. Cmo est conformado el virin del HTLV-III?
8. A qu se debe la disminucin de clulas T4?
9. Qu funciones desempea la clula T4 en la respuesta inmunitaria?
10. Qu rol tiene la endocitosis en el proceso de infeccin del virus?
11. Cules son genes reguladores de los retrovirus y cuales son caractersticos
de HTLV-III, qu funcin tienen estos genes?
12. Qu son los LTR?
13. Qu efectos patognicos tiene el virus HTLV-III?
14. Qu es el AZT y para qu se usa?
15. Cul es la caracterstica principal del virus del SIDA desde el punto de vista
de la variabilidad gentica?
16. Qu diferencias hay entre virin, profago, cpside y virus?

235
 Cuestionario- Seminario de virus 7

Infeccin por HIV: cuadro celular

1. Cmo ocurre un proceso de infeccin vrica en el caso de HIV? Qu es el

CD4?
2. Qu efecto tiene el virus sobre las clulas auxiliares T?
3. Qu es el gp120?
4. Qu son los antgenos monoclonales?
5. Qu es la prueba de pseudotipo?
6. Qu pruebas fueron ms slidas para corroborar que el CD4 era receptor
vrico? Por qu?
7. Cmo penetra el material gentico de HIV a la clula?
8. Qu rol tiene la acidez en el endosoma cuando penetra el virus? Explique los
pros y contras.
9. Cmo participa el mecanismo de endocitosis mediada por receptor en la
infeccin vrica?
10. Cmo se forman los sincitios o sincicios?
11. Cul es el mecanismo propuesto por el autor del trabajo?
12. Qu es un provirus?
13. Qu significa que un virus se integre a un genoma? En este caso, qu
caminos puede seguir?
14. cmo se visualiza la infeccin por el virus HIV en algn organismo?
15. Qu rol juegan los monocitos en el organismo?
16. Qu evidencias hay que apoye una regin especfica con alto grado de
conservacin de la protena gp120 que participa en ms de un tipo de virus?
Explique.

236
 ANEXO 5: CUESTIONARIO SEMINARIO 2

AS COMIENZA LA MITOSIS

1. Cules son las etapas del ciclo celular?

2. Cules son los eventos que ocurren al principio de la mitosis?
3. Para qu usaron la tcnica de microinyeccin? Averigue en qu consiste.
4. Qu es el factor promotor de la mitosis?
5. Cmo ocurre el empaquetamiento del ADN?
6. Qu se ilustra en la Figura 1, compare ambas situaciones en el embrin
normal y el mutado de la Drosophila?
7. Qu importancia tienen las mutaciones en la determinacin de los eventos de
la mitosis?
8. Cules son los agentes mutgenos mencionados en el trabajo?
9. Qu efectos tiene la mutacin sobre la protena y para qu sirve al
experimento?
10. Cules fueron los resultados de los experimentos? Cules son los genes
responsables de la regulacin del ciclo y en qu etapa regulan?
11. Cmo se descubrieron los genes wee qu significa etimolgicamente el
trmino? A qu se debe que las clulas de levadura sean ms pequeas?
12. Qu pas cuando se hizo cruzamiento de mutantes wee con jmutantes cdc2?
13. Qu es una genoteca?
14. Qu significa homologa funcional de genes? cul es su aplicacin?
15. Cmo se regula la actividad del complejo cdc2/ciclina?
16. Cmo se comprob la veracidad del modelo?
17. Cul es la funcin de cdc25?
18. Qu funcin tiene la lamin B o lmina B y qu ocurre con esta protena en el
inicio de la mitosis?

237
 Cuestionario seminario 2

El telmero humano

1. Qu son los telmeros?

2. Cul es la importancia del telmero?
3. Para qu se ha usado la clonacin del telmero?
4. Qu significa cartografiar el genoma humano?
5. Por qu el acortamiento telomrico es nefasto en las clulas somticas, pero
no es un peligro para la sobrevivencia de la especie?
6. Qu porcentaje del genoma presenta secuencias repetitivas, dnde se
ubican estas secuencias en el cromosoma y por qu tienen esa ubicacin,
obedecer a la funcin de esa regin?
7. Qu significado tiene el trmino tndem y el trmino clster? Explique.
8. Cmo se realiz la construccin de una biblioteca genmica de ADN
telomrico? Qu tipo de problema tuvieron que solucionar? Cul fue el
organismo de modelo que se sigui para caracterizar el telmero humano?
9. Qu son las enzimas de restriccin? Por qu no se usaron en el caso de la
construccin de la biblioteca genmica humana? Qu tcnica reemplaz la
accin de las enzimas de restriccin?
10. Cul es la unidad bsica del telmero humano?
11. Para qu se us la construccin de cromosomas artificiales de levadura
(CAL) para clonar ADN humano? Describa cmo se hizo la construccin
gentica.
12. Qu significa ADN quimrico?
13. Cul fue la conclusin que obtuvieron de los experimentos con CAL?
14. Cmo se propone medir la distancia de los genes en este trabajo? Cmo se
haba hecho hasta antes de los resultados de estos experimentos?
15. Qu caractersticas tiene el ADN en la regin vecina al telmero (regiones
subtelomricas)?
16. Qu relacin existe entre el acortamiento de los telmeros y el
envejecimiento? Por qu ocurre?
17. Qu rol cumple la telomerasa? Cul es el mecanismo molecular conocido
para la funcin de esta enzima?

238
 Cuestionario seminario 3

Telmeros, telomerasas y cncer

1. Qu son los telmeros?

2. Qu funcin tiene la telomerasa?
3. Cul es la composicin de los telmeros?
4. De acuerdo a la lectura cul es la definicin de gen.
5. Cul es la funcin de la telomerasa?
6. Cmo ocurre la replicacin de los extremos?
7. Cmo se comportan en cultivo las clulas provenientes de personas de ms
edad comparada con aquellas provenientes de personas ms jvenes, a qu
se atribuye esto?
8. Qu relacin existe entre la longitud del telmero y el nmero de divisiones
celulares de clulas somticas?
9. Qu relacin hay entre telmeros, envejecimiento y telomerasa y cncer?
10. Qu relacin existe netre telomerasa e inhibidores de la telomerasa como
posible terapia anticncer?
11. Cules son las perspectivas en el tratamiento del cncer mediante la terapia
gnica?
12. Qu es el Tetrahymena y qu importancia tiene en relacin a los telmeros?

239
 Cuestionario seminario 4

Bases genticas del cncer

1. Cmo se genera el cncer? Cmo funciona una clula normal? Qu es la

metstasis?
2. Cmo pudieron comprobar que haban daos en los cromosomas de las
clulas cncerosas?
3. Es el cncer hereditario? Cmo lo han comprobado?
4. Cul es la hiptesis de Knudson? Qu estudios realiz para postular la
hiptesis? Qu mecanismo postul en relacin con la hiptesis?
5. Qu son los protooncogenes, qu funcin cumplen y qu son los
oncogenes? a qu tipo de herencia pertenecen?
6. Qu son los genes supresores de tumores? qu funcin cumplen?
7. Qu es el retinoblastoma? en qu cromosoma se encuentra ubicado?
Cul es la causa que produce la enfermedad?
8. Qu es la evolucin clonal? Ejemplifique con el cncer de colon. Refirase a
la planificacin del estudio para demostrar la evolucin clonal.
9. Dnde se sita el gen APC, en qu cromosoma? Cul sera su funcin? A
qu tipo de protena codifica?
10. Dnde se encuentra el gen p53, en qu cromosoma? Cul es su funcin?
11. Dnde se encuentra el gen DCC, en qu cromosoma? Cul es su funcin?
12. Qu comportamiento sufre el astrocitoma, cuando lo comparamos con el
cncer de colon?
13. Qu alteraciones se evidencian a nivel gentico en la aparicin y desarrollo
del astrocitoma?
14. A nivel celular qu pasa con los receptores que son cifrados por
protooncogenes?
15. Qu condiciones mnimas alteradas facilitan la formacin de tumores
cerebrales y probablemente tumores de colon?
16. Cules son las conclusiones del trabajo?

240
 Cuestionario seminario 5

Suicidio celular en la salud y en la enfermedad

1. Qu es la apoptosis? Qu patologas surgen cuando este proceso est

alterado?
2. Qu fenmenos biolgicos estn relacionados con la apoptosis?
3. Qu diferencias hay entre apoptosis y necrosis?
4. Qu son los cuerpos apoptsicos?
5. Cmo est formado el cristalino del ojo y las capas superiores de la
epidermis?
6. Cmo se gatilla la apoptosis?
7. Qu son las proteasas de tipo ICE?
8. Cules son las clulas apoptsicas en el adulto?
9. Por qu los timocitos y clulas T sufren apoptosis, y en qu circunstancias?
10. Qu mecanismos permiten la entrada a la apoptosis en las clulas T?
11. Cmo afecta la diferenciacin al gatillamiento de la apoptosis?
12. Cules son las protenas bloqueadoras de la apoptosis?
13. Qu mecanismos han desarrollado los virus para bloquear la apoptosis?
14. Por qu en el trabajo se menciona que el sistema inmunitario tiene algunas
estrategias para contrarrestar algunas artimaas vricas?
15. Por qu la induccin apoptsica de las clulas sanas contribuye al
hundimiento inmunitario en los enfermos de SIDA? Cul es la razn?
16. Qu rol desempean los radicales libres en la apoptosis de las clulas T?
17. Por qu se produce la autoinmunidad?
18. Cundo se desarrolla el cncer? Qu rol desempea la protena p53?
19. Indique otras enfermedades que seran causadas por apoptosis desregulada.

241
 Cuestionario Seminario 6

Terapia gnica contra el cncer

1. Qu es la terapia gnica? Cmo ha sido considerada en el tratamiento de

cncer?
2. En qu se basa la terapia gnica?
3. Cules han sido los enfoques de la terapia gnica?
4. En qu consiste la leucemia? Cmo se ha tratado hasta la fecha? Cul es
el nuevo enfoque?
5. Qu se entiende por marcador inocuo, en qu consiste y por qu se usa?
6. En qu consisten las vacunas gnicas? Qu problema trae consigo el
tratamiento por este mtodo de prevencin?
7. Qu es la respuesta inmunitaria? Cmo participan las citoquinas en esta
respuesta?
8. Cul es el enfoque ms moderno que ha sido ensayado? En qu consiste?
Cul ha sido la respuesta de esta fase preliminar? y por qu no se
considera ptima?
9. Se podr aplicar el concepto tradicional de vacuna a algunos tipos de
cncer, a cul y por qu?
10. Cmo se ha concebido y aplicado el concepto de vacunas antioncolgicas o
vacunas de ADN?
11. En qu consiste el modelo de terapia gnica basada en anticuerpos?
12. A qu se le denomina vacuna reforzada?
13. Cul sera el aporte de la tcnica de ADN recombinante?
14. Qu es un oncogn y qu es un gen supresor?
15. Qu avances se han obtenido con la insercin del gen supresor p53 sano en
clulas cancerosas?
16. En qu consiste el fenmeno de solidaridad?
17. Cmo se realiz la experiencia del suicidio gnico?
18. En qu consiste la terapia gnica en el SIDA?
19. Cmo se aplica la terapia de los genes suicida en el sida?
20. Qu otras terapias se han desarrollado contra el sida?

242
 Cuestionario seminario 7

Radiacin solar y cncer de piel

1. Cul es la estadstica para el cncer de piel en EEUU y en cuntas formas se

manifiesta, a qu forma corresponde cada uno, cul es la gravedad de cada
tipo?
2. Cmo se produce una mutacin permanente a causa de la luz ultravioleta?
3. Cul es la poblacin de mayor riesgo en Australia? a qu se debe la
susceptibilidad a contraer cncer de piel?
4. Cmo es la gnesis de un tumor de piel? Cmo se producen las
mutaciones genticas inducidas por los rayos ultravioleta en genes de las
clulas epiteliales?
5. Cules son los dos tipos de efectos nocivos de origen solar en las clulas de
la piel?
6. Por qu se escogi el gen p53? Qu relacin hay con el ADN del
papilomavirus humano? Qu se concluy luego de comparar tumores de
diverso origen?
7. Qu son los puntos calientes de un gen?
8. Qu incidencia muestra el gen p53 a la mutacin en tumores no vinculados a
la radiacin solar?
9. Por qu no se reparan los puntos de mutacin en algunas clulas donde la
secuencia del gen p53 se ha alterado, como ocurre en otros casos?
10. Qu relacin hay entre la protena P53 en altas concentraciones dentro de la
clula y la apoptosis?
11. Qu sucede cuando la protena P53 est ausentes en ratones sometidos a
radiacin ultravioleta, comparados con ratones normales?
12. Por qu prolifera una clula con el gen p53 mutado en tanto las clulas
normales que la rodean sufren apoptosis?
13. Qu es un agente carcinognico?
14. Qu es la enfermedad de Gorlin?

243
 Cuestionario seminario 8

Lucha contra el Cncer de prstata

1. Cul es la incidencia del cncer de prstata en la poblacin masculina

norteamericana?
2. En qu consiste la prueba de cribado no invasiva? Qu otras pruebas
existen para la deteccin de este tipo de cncer?
3. Cul es el problema de la deteccin del antgeno PSA?
4. Qu es la velocidad del antgeno especfico?
5. Qu significado tiene el NPI?
6. Qu relacin existe entre cncer de prstata y cncer de mamas?
7. Cules son los estadios del cncer de prstata? Describir y caracterizarlos.
Qu es el TNM?
8. Qu es la metstasis? En cual de los estadios hay ya indicios de
metstasis?
9. Cules son los tratamientos que deben seguirse en cada estadio del cncer
de prstata?
10. Qu es el ndice de Gleason?
11. Qu herramientas moleculares se usan para predecir el comportamiento de
un tumor a nivel experimental?
12. Cul es el rol del gen p53 en el comportamiento tumoral?
13. Qu resultados se logran con la radioterapia clsica en el tratamiento de
tumores prostticos?
14. En qu consiste la radioterapia conformacional tridimensional (RTC 3-D)?
15. Qu es la braquiterapia? Qu es la criociruga?
16. En qu consiste la terapia hormonal?
17. Qu es la terapia combinada? Qu significa el trmino neoadyuvante?
18. Cul es la relacin entre cncer de prstata y consumo de grasas en la
dieta?
19. Cules son los potenciales marcadores de virulencia en el cncer de
prstata?

244
 Cuestionario seminario 9

Envejecimiento

1. Qu es la memoria molecular de las clulas?

2. Qu genes confieren mayor longevidad a las levaduras? y cules en
Caenorhabditis?
3. Qu causa produce en Drosophila una mayor longevidad?
4. Cules son las teoras imperantes sobre la naturaleza del envejecimiento?
5. Cules son los procesos moleculares responsables del envejecimiento?
qu evidencias existen?
6. Qu relacin hay entre los genes que regulan el ciclo celular y el
envejecimiento?
7. Cmo enfrenta la humanidad el envejecimiento?
8. Cules son los eventos celulares del envejecimiento?
9. Cmo se ha probado que el gen tin2 participa en el acortamiento del
telmero?
10. Cules son los efectos de las mutaciones mitocondriales?
11. Qu efecto tiene el envejecimiento sobre los sistemas de rgano?
12. Cul es el aporte de los temas de este seminario a su labor de enfermera o
enfermero?

245
 Cuestionario seminario 10

Genes que oponen resistencia al SIDA

1. Qu datos apoyan la tesis que existen genes que protegen contra el SIDA?
2. A qu se refiere con la frase estirpes diferentes de virus que producen
SIDA?
3. Qu quiere decir que el gen que codifica una protena sea polimrfico?
4. Compare exogamia y endogamia qu significado tiene en la bsqueda de
alelos con resistencia al SIDA? qu es un alelo?
5. Qu es la cartografa gentica?
6. qu estrategia pusieron en prctica para lograr el objetivode encontrar los
genes que son protectores contra el SIDA?
7. Cul es el mecanismo de interaccin del virus con los macrfagos?
8. Cul es la historia natural del alelo de resistencia al SIDA?
9. Cmo se distribuye en la poblacin humana el alelo de resistencia?
10. Cul es la perspectiva de los frmacos contra el SIDA?
11. Cul es la contribucin de los temas tratados en este trabajo a su formacin
de enfermero o enfermera?

246
 ANEXO 6

EL CDIGO GENTICO

Primera Segunda posicin Tercera

posicin posicin
U C A G
UUU-Phe UCU-Ser UAU-Tyr UGU-Cys U
U UUC-Phe UCC-Ser UAC-Tyr UGC-Cys C
UUA-Leu UCA-Ser UAA-Stop UGA-Stop A
UUG-Leu UCG-Ser UAG-Stop UGG-Trp G
CUU-Leu CCU-Pro CAU-His CGU-Arg U
CUC-Leu CCC-Pro CAC-His CGC-Arg C
C CUA-Leu CCA-Pro CAA-Gln CGA-Arg A
CUG-Leu CCG-Pro CAG-Gln CGG-Arg G
AUU-Ile ACU-Thr AAU-Asn AGU-Ser U
AUC-Ile ACC-Thr AAC-Asn AGC-Ser C
A AUA-Ile ACA-Thr AAA-Lys AGA-Arg A
AUG-Met ACG-Thr AAG-Lys AGG-Arg G
GUU-Ala GCU-Ala GAU-Asp GGU-Gly U
GUC-Ala GCC-Ala GAC-Asp GGC-Gly C
G GUA-Ala GCA-Ala GAA-Glu GGA-Gly A
GUG-Ala GCG-Ala GAG-Glu GGG-Gly G

247
 ANEXO 7

SMBOLO DE LOS AMINOCIDOS

A Ala Alanina M Met Metionina

B Asx Asparagina o N Asn Asparagina
cido asprtico
C Cys Cistena P Pro Prolina
D Asp cido asprtico Q Gln Glutamina
E Glu cido Glutmico R Arg Arginina
F Phe Fenilalanina S Ser Serina
G Gly Glicina T Thr Treonina
H His Histidina V Val Valina
I Ile Isoleucina W Trp Triptfano
K Lys Lisina Y Tyr Tirosina
L Leu Leucina Z Glx Glutamina o cido Glutmico

248