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Atividade Experimental
Procedimento
1. Descascar e cortar o material biolgico em pequenos pedaos (cerca de 5 mm)
e coloca-los no almofariz.
2. Num gobel, adicionar o sal (NaCl), o detergente e um pouco de gua
destilada. Dissolver cuidadosamente evitando a formao de espuma. Adicionar
a restante gua destilada.
3. Colocar a mistura obtida no almofariz e triturar.
4. Filtrar a mistura, recorrendo ao funil, ao papel de filtro e a um tubo de ensaio.
Ter cuidado para a espuma na superfcie do lquido no contaminar o filtrado.
5. Inclinar o tubo de ensaio e verter cuidadosamente na sua parede uma
quantidade de lcool gelado a 95% semelhante do filtrado.
6. Deixar repousar cerca de 5 minutos.
7. Observar o DNA, insolvel no lcool, que precipita e forma uma massa
filamentosa esbranquiada. Com o auxlio de um palito retirar uma poro de
DNA e observar.
Discusso
1. Explica porque se utiliza na extrao do DNA:
a) Detergente.
b) cloreto de sdio.
c) lcool 95% gelado.
Notas:
O detergente causa a rutura das membranas celulares. As ligaes moleculares
das membranas so destrudas, os lpidos e protenas constituintes formam
complexos com o detergente e precipitam. Desta forma possvel o contacto do DNA
com a soluo exterior.
A molcula de DNA possui carga negativa devido presena do grupo fosfato,
pelo que as molculas individualizadas de DNA repelem-se entre si. O cloreto de
sdio ao fornecer ies de carga positiva permite neutralizar a carga negativa das
molculas de DNA, sendo possvel que estas se condensem numa massa gelatinosa
quando em contacto com uma soluo alcolica.
O DNA menos denso do que a gua e os resduos celulares. Desta forma as
diferenas de densidade possibilitam que o DNA flutue na interface existente entre a
soluo de extrato e a soluo alcolica, j que o DNA insolvel no etanol gelado.