Evaluarea cromozomial a cuplurilor cu tulburri de reproducere

- Studiu retrospectiv pe un lot selecionat de 266 cupluri

Lcrmioara Butnariu, M. Covic, M. Onofriescu., Mihaela Grmescu, C.
Bujoran, Lavinia Caba, E.V. Gorduza
Universitatea de Medicin i Farmacie "Gr.T. Popa" Iai, Disciplina de
Genetic Medical
Spitalul "Sf. Spiridon" Iai, Laboratorul de Imunologie i Genetic
Spitalul Clinic de Obstetric i Ginecologie, Cuza Vod Iai

Autor desemnat pentru coresponden:

Lcrmioara Butnariu
Universitatea de Medicin i Farmacie " Gr.T. Popa" Iai, Disciplina de Genetic
Medical, Strada Universitii nr. 16, Iai, 700115
Acas: Strada Vasile Lupu, nr. 101, Bl E, sc. B. Ap. 12, Iai, 700360
Telefon: 0745388335
E-mail: lacrybutnariu@yahoo.com

CHROMOSOMAL EVALUATION IN COUPLES WITH REPRODUCTIVE

DISORDERS RETROSPECTIVE STUDY OF A SELECTED GROUP OF
266 COUPLES (Abstract): Reproductive Disorders (RD), manifested by the
biological inability to conceive (primary sterility) or inability to carry a
pregnancy to full term (infertility), affect 10-15% of reproductive-aged couples.
The genetic etiology of RD is represented, in the majority of cases, by the
chromosomal abnormalities. Aim: To retrospectively analyze the karyotype
results in a selected group of couples with RD. Material and methods: The
present study was performed in 266 couples with RD: 80 (30,07%) with primary
sterility (ST), 149 (56,01%) with Recurrent Spontaneous Abortions (RSA) and
37 (13,90%) with Stillborn Children (SC). A GTG-banded karyotype was
performed on both parteners of each couple. Results: We identified a
chromosomal abnormality in 43 individuals (16,16%): 20 cases (7,51%) with
ST, 13 cases (4,88%) with RSA and 10 cases (3,75%) with SC. The affected
partner was female in 23 cases (8,64%) and male in 20 cases (7,51%). A X
chromosome (numerical or structural) abnormality was detected in 18 cases
(6,76%), most frequent X chromosome monosomy mosaicism in female and
trisomy XXY in male; a balanced structural chromosomal abnormality (BSC)
was detected in 23 couples (8,64%); in other two males with ST, the karyotype
result was 46,XX. Conclusions: The results of our study are similar to other
reported studies and underline the major etiologic role of chromosomal
abnormalities in RD and the importance of chromosomal analysis for the
etiologic diagnosis and genetic counselling of these patients. Keywords:
REPRODUCTIVE DISORDERS, CHROMOSOMAL ABNORMALITIES,
KARYOTYPE.

1
 Tulburrile de reproducere umane (TR) se caracterizeaz prin
incapacitatea unui individ/cuplu de a concepe natural (sterilitate primar) ori
prin incapacitatea de a menine o sarcin sau de a da natere unui copil viu,
sntos (infertilitate) (1, 2).
Sterilitatea primar (ST) este definit ca fiind imposibilitatea unui
individ de a forma gamei viabili sau inabilitatea unui cuplu de a concepe un
copil dup un an de via sexual normal, regulat, n absena folosirii
oricrui mijloc contraceptiv (2, 3, 4). ST reprezint o problem medical
important i frecvent, afectnd 10-15% dintre cuplurile cu vrst
reproductiv (2, 3).
Infertilitatea (pierderile de sarcin) este caracterizat prin sarcini
finalizate cu producerea de avorturi spontane (AS)/avorturi spontane recurente
(ASR) ( 2 AS) sau naterea unor copii mori (NM) (2, 3, 4).
Avorturile spontane (AS) reprezint pierderea inexplicabil a unei
sarcini, nainte de mplinirea a 20 de sptmni complete de gestaie (18
sptmni dup fertilizare) sau, dac nu este cunoscut vrsta gestaional,
pierderea unui ft cu greutatea sub 400 grame (4). Se estimeaz c aproximativ
15-20% din sarcinile recunoscute clinic, se elimin prin AS, dar frecvena real
este probabil mai mare, 2/3 dintre AS producndu-se pe parcursul unor sarcini
nedecelate clinic (avorturi biochimice) (2, 3).
Avorturile spontane recurente (ASR) se caracterizeaz prin apariia a 2
sau mai multe avorturi spontane consecutive la acelai cuplu (2, 3).
Moartea fetal intra-uterin (nou-nscui mori, NM), definit ca fiind
moartea in utero a unui ft cu vrsta gestaional mai mare de 20 de sptmni,
are o frecven de circa 6,5/1000 nou-nscui (4).
Cauzele TR sunt multiple: genetice, malformative, endocrine,
imunologice sau de mediu (1, 2). TR pot afecta ambii parteneri ai cuplului,
etiologia putnd fi feminin, masculin sau de cuplu (2). Incidena factorilor
etiologici implicai n producerea TR umane a fost apreciat ntr-un raport al
Societii Americane de Medicin Reproductiv din 2006: 25% cauze
masculine, 27% cauze ovulatorii, 22% cauze uterine/tubare, 9% endometrioza
i 17% cauze idiopatice (2).
Rolul factorilor genetici, reprezentai n principal de anomaliile
cromozomiale, n producerea TR umane, a fost dovedit fr echivoc (5).
Cauzele genetice ale sterilitii primare (ST) sunt reprezentate de
anomaliile cromozomiale (numerice i structurale ale gonozomilor i
anomaliile de structur echilibrate ale autozomilor) i, mai rar, de boli
monogenice sau multifactoriale (2, 6).
Circa 50-60% dintre avorturile spontane recurente (ASR) precoce (0-8
sptmni) sunt determinate de o aneuplodie prezent la ft, n timp ce odat
cu creterea vrstei gestaionale, incidena anomaliilor cromozomiale scade,
acestea fiind decelate n aproximativ 1/3 (35%) din ASR din trimestrul II de
sarcin i doar la 5% dintre nou-nscuii mori din trimestrul III de sarcin (5,
7, 8).
In circa 5% dintre avorturile recurente, la produii de avort au fost
identificate aneuploidii segmentale (monosomii pariale, trisomii pariale sau

2
asocierea de trisomii i monosomii pariale), care n cea mai mare parte au fost
rezultatul unei malsegregri a cromozomilor derivativi, n cazul unei anomalii
cromozomiale de structur echilibrat (ACSE) prezent la unul dintre prini
(9, 10).
Scopul studiului a fost analiza retrospectiv a rezultatelor analizei
cromozomiale, n cazul unui lot selecionat de 266 cupluri cu tulburri de
reproducere (TR).

MATERIAL I METOD
Pacienii
In perioada ianuarie 1998 - decembrie 2009 au fost evaluate clinic n
cadrul Centrului de Genetic Medical Iai, 266 cupluri cu tulburri de
reproducere: 80 cazuri (30,07%) cu sterilitate primar (ST), 149 cazuri
(56,01%) cu avorturi spontane recurente (ASR) i 37 cazuri (13,90%) cu nou
nscui mori (NM).
Metode
In cazul fiecrui cuplu cu TR a fost efectuat analiza cromozomial
folosind un marcaj n benzi de tip G (450-550 benzi/metafaz).
S-a urmrit evidenierea unor anomalii cromozomiale numerice sau
structurale. Analiza cromozomial s-a bazat pe o cultur stimulat, de scurt
durat a limfocitelor T i a fost realizat conform tehnicii Moorhead (1960)
(11), adaptat n cadrul Laboratorului de Citogenetic al Universitii de
Medicin i Farmacie "Gr. T. Popa" Iai. Analiza a cuprins mai multe etape:
recoltarea sngelui periferic pe heparin sodic; punerea sngelui n cultur
(mediul de cultur este RPMI 1640 (9 ml), suplimentat cu ser de viel fetal
(1ml) i glutamin (0,1 ml)); hipotonizarea, fixarea, etalarea i colorarea.
Metafazele au fost examinate cu microscopul Nikon, iar imaginile au fost
captate cu un sistem automat de cariotipare Cytovision (Applied Imaging).
Pentru fiecare caz au fost analizate un numr de minim 16 metafaze. In
situaiile n care au fost depistate anomalii, numrul de celule analizate a fost
crescut la 32, 64 sau chiar 96.

REZULTATE
n cazul a 43 de cupluri (16,16%), cariotipul a relevat prezena unei
anomalii cromozomiale (numerice sau structurale) la unul dintre parteneri: 20
cazuri (7,51%) la cuplurile cu ST, 13 cazuri (4,88%) la cuplurile cu ASR i 10
cazuri (3,75%) la cuplurile cu NM. In 23 cazuri (8,64%) anomalia a fost
decelat la femeie, iar n 20 cazuri (7,51%, la brbat (tabelul I).

TABELUL I
Anomalii cromozomiale decelate la cele dou sexe n cazul
a 266 cupluri cu tulburri de reproducere (TR)
Femeie Brbat
Tip anomalie cromozomial Numr (%) Numr (%) Numr (%)
Aneuploidii gonozomale 14 (5,26) 7 (2,63)) 7 (2,63)
Anomalii structurale echilibrate 23 (8,64) 10 (3,75) 13 (4,88)
- translocaii robertsoniene 3 (1,12) 3 (1,12) -

3
 - translocaii reciproce 2 (0,75) 1 (0,37) 1 (0,37)
- inserii 3 (1,12) 1 (0,37) 2 (0,75)
- inversii 15 (5,63) 5 (1,87) 10 (3,75)
Anomalii structurale gonozomale 4 (1,50) 4 (1,50) -
Alte anomalii 2 (0,75) - 2 (0,75)
Numr total anomalii 43 (16,16) 21 (7,89) 22 (8,27)
Variante polimorfice normale 3 (1,12) 1 (0,37) 2 (0,75)

Cele mai frecvente anomalii decelate au fost anomaliile cromozomiale

de structur echilibrate (ACSE), prezente la 23 cupluri (8,64%), urmate de
anomaliile de numr i de structur ale cromozomului X, identificate n cazul a
18 cupluri (6,76%), majoritatea lor find reprezentate de monosomia X n
mozaic, la femeie i de trisomia XXY (sindromul Klinefelter) la brbat (tabelele
II, III i IV). In alte 2 cazuri a fost decelat un cariotip 46,XX la brbat, iar la 3
cupluri (1,12%) au fost decelate variante cromozomiale polimorfice, considerate
normale: 9qh+ (2 cazuri) i 1qh+ (1 caz) (tabelele I, II , III).
La 20 de cupluri cu sterilitate (ST) (25% dintre cuplurile cu ST) a fost
decelat o anomalie cromozomial, frecvena acestora fiind de aproape dou ori
mai mare la brbai (13 cazuri- 16,25%), fa de femei (7 cazuri- 8,75%). Cele
mai frecvente anomalii decelate n aceste cazuri, au fost anomaliile de numr i
de structur a cromozomului X (12 cazuri- 15%), urmate de ASCE, reprezentate
de inversii (6 cazuri- 7,50%) (tabelul II).

TABELUL II
Anomalii cromozomiale decelate la 80 de cupluri cu sterilitate (ST)
Femei Brbai
Tip anomalie Nr. Nr. Cazuri (%) Nr. Cazuri (%)
cromozomial Total
(%) *
Aneuploidii 8 (10) 2 (2,50) 6 (7,50)
gonozomale 1 45,X/47,XXX 6 47,XXY
1 45,X
Anomalii 4 (5) 4 (5) -
structurale 1- 46,X,i(Xq)
gonozomale 1- 46,X,del(X)(p22.2pter)
2- 45,X/46,X,i(X)(q10)
Anomalii 6 (7,50) 1 (1,25) 5 (6,25)
structurale 1-46,XX,inv(9)(p13;q21.2) 2-46,XY,inv(9) (p13;q21.2)
echilibrate 1-46,XY,inv(9)(p13;q22)
- Inversii 2- 46,XY,inv(16)(p11.1;q21.1)
Alte anomalii 2 (2,50) - 2 (2,50)
2- 46,XX
Nr total 20 (25) 7 (8,75) 13 (16,25)
anomalii
Variante 1 (1,25) - 1 (1,25)
polimorfice 1-46,XY,9qh+
normale
* procentele au fost calculate n raport cu numrul de cupluri cu ST

La 13 (8,72%) dintre cele 149 de cupluri cu avorturi spontane

recurente (ASR), a fost decelat o anomalie cromozomial, 8 (5,36%) dintre

4
acestea fiind prezente la femeie. Cele mai frecvente anomalii decelate au fost
ACSE ( 9 cazuri - 5,38%), majoritatea fiind inversii (6 cazuri - 4,02%), urmate
de aneuplodii gonozomale (monosomia X n mozaic, 4 cazuri - 2,68%). (tabelul
III).
TABELUL III
Anomalii cromozomiale decelate la 149 cupluri cu avorturi spontane
recurente (ASR)
Femei Brbai
Tip anomalie Nr. Nr. cazuri (%) Nr. cazuri (%)
cromozomial total
(%)*
Aneuploidii 4 4 (2,68) -
gonozomale (2,68) 4 - 45,X/46,XX
Anomalii 9 4 (2,68) 5 (3,35)
structurale (5,38)
echilibrate
- translocaii 1 1 (7,69) -
robertsoniene (0,67) 1 -46,XX,rob(13;14)(q10;q10)
- translocaii 1 1 (7,69) -
reciproce (0,67) 1-46,XX,t(4;7)(q31.3;q31.2)
- inserii 1 - 1 (7,69)
(0,67) 1-46,XY,ins(5;4)(q13;q27q31)
- inversii 6 2 (1,34) 4 (2,68)
(4,02) 1-46,XX,inv(9)(p13.3l;q21.2) 1- 46,XY,inv(1)(p11;q12)
1-46,XX,inv(10)(p11.22;q21.2) 1-46,XY,inv(1)(p13;q23)
1- 46,XY,inv(9)(p13q21.2)
1-46,XY,inv(15)(p11.2;q13)
Nr total 13 8 (5,36) 5 (3,35)
anomalii (8,72)
Variante 2 1 (0,67) 1
polimorfice (1,34) 1- 46,XX,9qh+ 1- 46,XY,1qh+
normale
* procentele au fost calculate n raport cu numrul de cupluri cu ASR

In cazul cuplurilor cu nou-nscui mori (NM), au fost decelate 10

cazuri cu anomalii (27,02%), cele mai frecvente fiind ACSE (8 cazuri-21,62%),
urmate de aneuploidii gonozomale (2 cazuri- 5,40%) (tabelul III).

TABELUL III
Anomalii cromozomiale decelate la 37 cupluri cu
nou-nscui mori (NM)
Femei Brbai
Tip anomalie Numr Nr. cazuri (%) Nr. cazuri (%)
cromozomial (%)*
Aneuploidii 2 (5,40) 1 (2,70) 1 (2,70)
gonozomale 1- 46,XX/47,XXX/48,XXXX 1- 46,XY/47,XYY
Anomalii 8 (21,62) 5 (13,51) 3 (8,10)
structurale
echilibrate
- translocaii 2 (5,40) 2 (5,40) -
robertsoniene 1- 46,XX,rob (14;21)(q10;q10)
1-46,XX, rob (13;22)(q10;q10)

5
 - translocaii 1 (2,70) - 1 (2,70)
reciproce 1- 46,XY,t(6;8)

- inserii 2 (5,40) 1 (2,70) 1

1-46,XX,ins(7;6) 1- 46,XY, ins (9;21)
(p13;q25.2q25.3) (p22;q22qter)

- inversii 3 (8,10) 2 (5,40) 1 (2,70)

1 - 46,XX,inv (9)(p22;q22) 1- 46,XY,inv (9)
1- 46,XX,inv(9) (p13;q21.3)
(p13;q21.2),1qh+
Nr total 10 (27,02) 6 (16,21) 4 (10,81)
* procentele au fost calculate n raport cu numrul de cupluri cu NM

DISCUII

Ponderea anomaliilor cromozomiale decelate la lotul selecionat al

cuplurilor cu TR, a fost mai mare (16,16%), dect cea citat n alte studii
similare: 8,9% - Pal (12), 9,04% - Nazmy (13), 5,53% - Espinoza et al (14) i
1,97% Clementini et al (15,) probabil, datorit seleciei clinice riguroase fcut
anterior investigaiei citogenetice. Per total, ponderea ACSE a fost mai mare
(8,64%), fa de cea a anomaliilor numerice i structurale ale cromozomului X
(6,76%), ns aneuploidiile i anomaliile de structur ale cromozomului X au
fost principala cauz a sterilitii la cuplurile cu ST, n timp ce ACSE au
reprezentat principalul factor etiologic genetic n cazul cuplurilor cu ASR i NM
(tabelele II, III i IV). Datele obinute sunt concordante cu cele din literatura de
specialitate (2, 5, 6).
Din totalul de 43 de anomalii cromozomiale decelate la cuplurile
studiate, n 48,83% din cazuri, anomalia a fost prezent la femeie, iar n 51,16%
din cazuri, la brbat, aceste rezultate fiind concordante cu cele prezentate n
studii similare de Espinoza et al (54,7% la femei i 54,3% la brbai) (14) i
Clementini et al (51,82% la femei i 48,78% la brbai) (15).
Inversiile (15 cazuri - 5,63%) au fost cele mai frecvente anomalii
cromozomiale structurale echilibrate (ACSE) decelate, urmate de translocaii (5
cazuri - 1,87%). Cea mai frecvent inversie a fost cea a cromozomului 9 (2,63%
- 7 cazuri), frecven similar cu cea ntlnit n populaia general (1-3%)
(tabelele II, III i IV). Inversia cromozomului 9 a fost ntlnit la toate cele trei
categorii de cupluri cu TR (ST, ASR, NM), att la femeie (4 cazuri), ct i la
brbat (5 cazuri) (tabelele II, III i IV).
Implicarea inversiilor pericentrice ale cromozomului 9, inv(9)(p11q12)
sau inv(9)(p11q13) n producerea TR este controversat, acestea fiind
considerate variante normale. Numeroase studii efectuate de-a lungul timpului
au ncercat s elucideze mecanismul patogenic, lundu-se n considerare
necesitatea identificrii purttorilor inversiei inv(9) produse de novo sau a
cazurilor familiale de inversie a cromozomului 9 (16, 17, 18, 19). Studiile
privind organizarea heterocromatinei din regiunea pericentromeric i din
regiunea proximal a braelor scurt (p) i lung (q) ale cromozomului 9, au
relevat o omologie ntre cele dou regiuni 9p12 i 9q13-21.1, n care se produc

6
cel mai frecvent rupturi (hotspots), implicate n producerea recombinrilor
cromozomiale (20). Multe secvene sunt duplicate n regiunea pericentromeric,
fiind identificate blocuri mari de duplicaii segmentale in interiorul i ntre cele
dou regiuni pericentromerice 9p1112 i 9q1112/13. Astfel, cele dou regiuni
cromozomiale conin secvene identice n proporie de 97%, ceea ce favorizeaz
recombinrile cromozomiale aberante (21).
Cele mai frecvente translocaii decelate, au fost translocaiile
robertsoniene (1,12% - 3 cazuri), toate fiind identificate la femei. Aceste
rezultate au fost similare cu cele gsite n alte studii, raportul dintre puttorii de
translocaii robertsoniene gsit de Espinoza et al fiind n favoarea femeilor (F:M
=3,5:1) (14), la fel i cel gsit de i Orozco Quinono et al (F:M= 5,5:1) (22).
La 2 dintre brbaii cu ST i azoospermie a fost identificat un sindrom de
inversiune sexual (brbai 46,XX), determinat cel mai probabil de translocaia
genei SRY de pe cromozomul Yp pe cromozomul Xp n timpul crossing over-lui
din meioza patern.
Datele noastre sunt, n ansamblu, concordante cu alte studii i relev
importana analizei cromozomiale la cuplurile cu TR, mai ales n situaia n
care, din ce n ce mai multe cupluri apeleaz la tehnici de reproducere asistat
(fertilizare in vitro, FIV), ale cror protocoale impun obligatoriu efectuarea
cariotipului la ambii membri ai cuplului, naintea efecturii tehnicii respective
(23, 24).

CONCLUZII
In concluzie, rezultatele studiului nostru retrospectiv, concordante cu
datele din literatur, evideniaz rolul major pe care l au anomaliile
cromozomiale, n producerea TR umane, subliniind n acelai timp importana
analizei cromozomiale pentru diagnosticul etiologic, managementul i sfatul
genetic acordat acestor cupluri, inclusiv n contextul aplicrii n viitor a unei
tehnici de reproducere asistat (FIV).

BIBLIOGRAFIE

1. Makar RS, Toth TL. The evaluation of infertility. Am J Clin Pathol

2002;117: 95103.
2. Schorge J, Schaffer J, Halvorson L, Hoffman B, Bradshow K, Cunningham
FG. Evaluation of the Infertile Couple. In: Schorge J editor. Williams
Gynecology. New York: McGraw-Hill's Access Medicine, 2008: 870-871.
3. Jose-Miller AB, Boyden JW, Frey KA. Infertility. Am Fam Physician 2007;
75(6):849-56.
4. Zegers-Hochschild F, Adamson GD, de Mouzon J et al. International
Committee for Monitoring Assisted Reproductive Technology (ICMART) and
the World Health Organization (WHO) revised glossary of ART terminology,
2009. Fertil Steril 2009;92(5):1520-4.
5. Cunningham G, Leveno K, Bloom S, Hauth J, Rouse D, Casey B. Abortion.
In: Cunningham G editor. Williams Obstetrics, Twenty-Third Edition. New
York: McGraw-Hill's Access Medicine, 2010; 1115-1120.

7
6. Covic M, Dimofte I, Gorduza EV. Bolile cromozomiale. Editori: Covic M,
Stefnescu D, Sandovici I. Genetic Medical. Iai: Polirom, 2004: 347-351.
7. Korteweg FJ, Bouman K, Erwich JJ. Cytogenetic analysis after evaluation of
750 fetal deaths: proposal for diagnostic workup. Obstet Gynecol.
2008;111(4):865-74.
8. Committee on Genetics. ACOG Committee Opinion No. 383. Evaluation of
stillbirths and neonatal deaths. Gynecol 2007;110(4):963-6.
9.Fryns JP, Van Buggenhout G. Structural chromosome rearrangements in
couples with recurrent fetal wastage. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 1998;
81:171-176
10.Ward KJ. Genetic factors in recurrent pregnancy loss. Semin Reprod Med
2000;18(4):425-32.
11.Moorhead PS, Nowell PC, Mellman WI, Battips DM. Chromosome
preparation of leucocyte cultured from human perpherial blood. Exp Cell Res,
1960;20: 613-618.
12. Pal S, Ma SO. Normohasiman M et al. Chromosomal abnormalities and
reproductive outcome in Malaysian couples with miscarriages. Singapore Med J
2009;50(10):1009-1013.
13.Nazmy NA. Cytogenetic studies of couples with reproductive failure in
Alexandria. Egypt. J Egypt Public Health Assoc. 2008;83(3-4):255-271.
14. Espinoza JP, Anguiano L, Rivera H. Chromosomal Abnormalities in
Couples with Reproductive Disorders. Gynecol Obstet Invest 2008;66:237-
240.
15. Clementini E, Palka C, Iezzi I, Stuppia L, Guanciali-Franchi, Tiboni GM.
Prevalence of chromosomal abnormalities in 2078 infertile couples referred
for assisted reproductive techniques. Hum Rep 2005;2 (2): 437-442.
16. Etem EO, Yce H, Erol D. Deveci D, Ceylan GG, Elyas H. Cytogenetic
analysis in infertile males with sperm anomalies, Marmara Med J
2009;22(3):217-224.
17. Rao BV, Kerketta L, Korgaonkar S, Ghosh K. Pericentric inversion of
chromosome 9[inv(9)(p12q13)]: Its association with genetic diseases. Indian
J Hum Genet 2006;12:129-32.
18. De la Fuente-Corts BE, Cerda-Flores RM, Dvila-Rodrguez MI, Garca-
Vielma C, De la Rosa Alvarado RM, Corts-Gutirrez EI. Chromosomal
abnormalities and polymorphic variants in couples with repeated miscarriage in
Mexico. Reprod Biomed Online 2009;18(4):543-8.
19.Mozdarani H, Meybodim AM, Karimi H. Impact of pericentric inversion of
Chromosome 9 [inv (9) (p11q12)] on infertility. Indian J Hum Genet 2007;(13):
26-29.
20.Starke H, Seidel J, Henn W et al. Homologous sequences at human
chromosome 9 bands p12 and q13-21.1 are involved in different patterns of
pericentric rearrangements. Eur J Hum Genet 2002;10(12):790-800.
21. Humphray SJ, Oliver K, Hunt AR et al. DNA sequence and analysis of
human chromosome 9. Nature 2004;429(6990):369374.
22. Orozco Quiyono M, Grether P, Zavaleta MJ, Manzanero J. Cytogenetic
study in disorders of human reproduction. Ginecol Obstet Mex 1994;(62):23-26.

8
23. Mozdarani H, Meybodi MA, Zari-Moradi S. A cytogenetic study of couples
with recurrent spontaneous abortions and infertile patients with recurrent
IVF/ICSI failure. Indian J Hum Genet 2008;(14): 1-6.
24. Capkov P, Adamov K, Santav A et al. Importance of genetic testing in
couples with reproductive disorders. Ceska Gynekol 2004;(69): 66-71.