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En la figura 2 se presenta el
nmero de clulas en escala logartmica versus
Crecimiento Microbiano tiempo en escala aritmtica (Grfico semilog) lo que
da una lnea recta, este es un inmediato indicador
Es un incremento en el nmero de clulas o de que las clulas estn creciendo
aumento de la masa microbiana. El crecimiento es exponencialmente. Este tipo de grficos semilog es
un componente esencial de la funcin microbiana, util para la estimacin de tiempos de generacin a
ya que una clula individual tiene un perodo de vida partir de datos experimentales, el tiempo de
determinado en la naturaleza y la especie se generacin puede leerse directamente a partir del
mantiene solamente como resultado del crecimiento grfico figura 3.
continuo de la poblacin celular. En muchas
situaciones prcticas es necesario el control de la
poblacin celular, el conocimiento de cmo se Tiempo Nmero total
expande es til para el diseo de mtodos de (horas) de clulas
control para el crecimiento microbiano. Una 0 1
bacteria es una mquina capaz de duplicarse as 0.5 2
misma. Los procesos sintticos de crecimiento 1 4
celular bacteriano implican no menos de 2000 1.5 8
reacciones bioqumicas de una gran variedad de 2 16
tipos. Las reacciones principales de la sntesis 2.5 32
celular son de polimerizacin, luego se ensamblan 3 64
las macromolculas, se forman las estructuras 3.5 128
celulares: pared celular, membrana citoplasmtica, 4 256
flagelos etc. 4.5 512
5 1.024
El crecimiento microbiana ocurre por fisin binaria,
5.5 2.048
bajo las mejores condiciones de E. coli puede
6 4.096
completar su ciclo en 20 minutos. El control de la
. .
divisin celular est ntimamente ligado a los
. .
acontecimientos de replicacin cromosmica.
10 1.048.576
Crecimiento de poblaciones
Tabla 1. Incremento del nmero de clulas en el
La velocidad de crecimiento es el cambio en el tiempo.
nmero de clulas por unidad de tiempo. El tiempo
requerido para que a partir de una clula se formen
dos clulas o el tiempo requerido para duplicar una
poblacin de clulas se llama tiempo de generacin Data: Data1_B
Model: Boltzman
Chi^2 = 1.8733E-7
Crecimiento exponencial
1000
Tiempo ( horas )
nmero de clulas es lenta inicialmente pero
despus incrementa constantemente. Como
muestra la figura 1, tpica curva de crecimiento
exponencial expresada aritmticamente, la Figura 1. Velocidad de crecimiento de un cultivo
pendiente va incrementando progresivamente. Esta microbiano. Escala lineal. Datos de la poblacin
figura se obtuvo de un crecimiento de una nica duplicada cada 20 minutos.
clula que tiene un tiempo de generacin de 30
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ln X ln Xo = t (1)
Data: Data1_B
X
ln = t
Model: Boltzman
1000
Numero total de clulas
Chi^2 = 1.8733E-7
A1 -0.05074 0.00493
Xo
A2 0.09273 0.00037
x0 3.25278 0.38573
dx 5.84933 0.14841
100
X t
=e
Xo
10 Nmero de clulas en escala logaritmica t
X = Xo e
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5
Tiempo ( horas )
Duplicacin de la poblacin
1E8 ln 2 = tgen
ln 2 1
= = (ln 2 )
tgen tgen
Clulas / ml
t
dX X = Xo e
= dt
X se pueden convertir los logaritmos neperianos a los
logaritmos base 10 y sustituir la constante
instantnea por K:
X t
dX
Xo X = o dt
LEOQ 10
log 10 X t log10 X o Por lo tanto el tiempo de generacin, g = t/n = 2/1 =
K= 2 horas. El tiempo de generacin puede calcularse
0.301t de la pendiente en un grfico semilog de
crecimiento exponencial, como pendiente = 0.301/g.
Con el conocimiento de n y t se puede calcular g
para microorganismos creciendo exponencialmente,
Clculo del tiempo de generacin bajo diferentes condiciones de crecimiento.
n = 9 - 8.69 / 0.301 = 1
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incremento en el nmero de clulas, esto se conoce
como crecimiento crptico.
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Para la observacin microscpica; se cuentan todas se vierte se mexcla e incuba. El organismo debe
las clulas en un cuadrado; por ejemplo 12 clulas resistir 40-45 C. Se cuentan tanto las colonias de
(en la prctica se halla la media de varios superficie como las que estn sumergidas en el
cuadrados), cada rejilla tiene 25 cuadrados grandes medio.
2
y un rea total de 1 mm y un volumen de 0.02
3
mm . Para calcular el nmero por mililitro de El nmero de colonias debe oscilar entre 30-300. Si
muestra: se obtiene este nmero en la dilucin 1/1000, por
3
ejemplo 159 colonias x factor de dilucin (10 ), es el
3 7 -3 5
12 clulas x 25 cuadrados x 50 x 10 =1.7 x 10 reciproco de la dilucin (10 ), se reporta 1.59 x 10
UFC/ml de muestra.
2
nmero por mm Medidas de masa celular y de turbidez
3
nmero /mm A veces es ms importante estimar la masa celular
que el nmero. Como son proporcionales se
3
nmero /cm (ml) determina un parmetro para estimar el otro. La
masa seca obtenida por peso seco es
Cuando la muestra no est teida se requiere un aproximadamente el 10% y el 20% de la masa
microscopio de contraste de fases. hmeda. Otro mtodo son las medidas de turbidez,
aunque muestras por encima de 0.5 de D.O pierden
-Contaje de viables linearidad.
Figura 6. Tcnica de contaje en placa (2). Figura 7. Espectrofotometro para medir difraccin
de la luz (3)
Se pude hacer de dos maneras:
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nutricionales y fsicos afectan el crecimiento de los
microorganismos nos permite predecir el tipo de
microorganismo que predomina en cierto hbitat,
cada microorganismo debe ser aislado en un cultivo
puro y ser determinados los requerimientos. Este
conocimiento es esencial para el control de los
habitantes microbianos en un hbitat natural.
Regresin lineal
Los factores fsicos actan en general como
ptica = -0.31705 +1.38771 agentes selectivos, porque determinan el tipo de
C microorganismo capaz de crecer y su influencia
R= 0.98808
sobre la tasa de crecimiento en otros
microorganismos.
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de la Arquea Pyrodictium brokii. El rango habitual de
crecimiento es de unos 30 C, aunque no es
constante para todos los microorganismos.
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Actividad del agua y Osmosis
Oxgeno
Basados en los requerimientos de oxgeno
molecular las bacterias se pueden dividir en 5
a) balance de agua positivo grupos:
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Anaerobios aerotolerantes: pueden crecer en
presencia o ausencia de oxgeno, pero la energa la
obtienen por fermentacin. No pueden utilizar el
oxgeno.
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-
(H2O2) hasta (O2 ) que es altamente reactivo y
puede oxidar cualquier compuesto orgnico
incluyendo las macromolculas. Los (H2O2) pueden
daar componentes celulares, pero no son txicos
- -
como (O2 ) y los (HO ), estos ltimos constituyen la
forma ms txica del oxgeno, afortunadamente es
una forma transitoria y slo producidos por
radiaciones ionizantes. Se pueden originar
-
pequeas cantidades de (HO ) a partir de (H2O2),
figura 12, pero cuando no se acumulan estos
perxidos, se elimina la fuente de radicales
hidrxilo-
Carbono
Figura 12. Reduccin del oxgeno hasta agua
mediante la incorporacin secuencial de electrones. Este elemento puede aportarse a los
Todos los compuestos intermediarios que se microorganismos en forma muy diversa
forman son altamente reactivos y txicos para las dependiendo del tipo de metabolismo que posean.
clulas (5). El carbono es utilizado por los microorganismos
para sintetizar los compuestos orgnicos requeridos
para las estructuras y funciones de la clula.
Enzimas que destruyen las formas txicas del Los microorganismos se pueden dividir en
oxgeno categoras nutricionales en base a dos parmetros:
naturaleza de la fuente de energa y naturaleza de
Con tantas formas txicas los microorganismos han la fuente principal de carbono (Estas propiedades
desarrollado formas enzimticas capaces de metablicas fueron seleccionadas arbitrariamente y
destruirlas, figura 13. la ms comn es la catalasa, no brinda una descripcin completa de las
destruye el perxido de hidrgeno, figura 13 a), otra necesidades nutricionales de un organismo).
enzima que acta sobre esta forma txica es la
peroxidasa, que difiere de la catalasa en que Fototrofos: utilizan luz como fuente de energa.
requiere un agente reductor normalmente el NADH,
originando agua como producto, figura 13 b), La Quimiotrofos: la fuente de energa es qumica.
superxido dismutasa (SOD), combina dos
molculas de superxido para formar una molcula
de perxido de hidrgeno y una molcula de Autotrofos: utilizan como fuente de carbono al CO2
oxgeno, figura 13 C), la SOD y la catalasa trabajan y a partir del cual sintetizan los esqueletos
juntas para llevar a cabo la conversin de carbonados de los metabolitos orgnicos.
superxidos de vuelta al oxgeno, figura 13 d). Los
aerobios y aerobios facultativos, generalmente Heterotrofos: utilizan compuestos orgnicos como
contienen SOD y catalasa. La ausencia de SOD en fuente de C y electrones.
anaerobios obligados es la razn por la que el
oxgeno es txico para ellos. Combinndose estos dos parmetros se pueden
establecer cuatro categoras principales de
organismos:
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3
Fotoautotrofos: dependen de la luz como fuente Asimilacin de NH y sales de amonio: el
de energa y utilizan CO2 como principal fuente de nitrgeno es transferido con este estado de
carbono. Vegetales superiores, bacterias oxidacin a los aminocidos por la va de la
fotosintticas, algas eucariticas, etc. glutamato/glutamina.
Azufre
Factores de Crecimiento
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Auxtrofos: microorganismos que requieren Mestra. Universidad Nacional de Colombia.
una fuente exgena de factores de crecimiento Sede Medelln, 2001.
debido a que son incapaces de sintetizarlos.
Iones Inorgnicos
Son esenciales para el crecimiento porque
estabilizan los compuestos biolgicos como
enzimas, ribosomas, membranas, etc. Los iones
requeridos para el crecimiento bacteriano son
aportados en el medio a travs de sales que
+ 2+ 2+ 2+ + 3- 2+
contienen K , Mg , Mn , Ca , Na , PO4 , Fe ,
3+ 2+ 2+ 2+
Fe y trazas de Cu , Co y Zn .
Bibliografia
En lnea:
1.
http://bacterio.cbm.uam.es/jlsanz/docencia/teoria.ht
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2.
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4.
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de 2002.
6.
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7.
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ev=/search%3Fq%3DPetroff-
Hausser%26start%3D30%26hl%3Des%26ie%3DU
TF8%26oe%3DUTF8%26sa%3DN Consulta en
Mayo de 2002.
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