UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

Facultad de Pesquera
Departamento de Acuicultura e Industrias Pesqueras

CULTIVO DE CRUSTCEOS

Prctica N2

Evaluacin de la Calidad de Cistes de Artemia

Prctica N3

Produccin y estimacin de la cantidad de nauplios de artemia:

descapsulacin y eficiencia de eclosin

INTEGRANTES:

Bazn Gaspar, Luisa Milagros

Torres Castro, Bryan Edward

PROFESOR:

Cruz Castelln, Csar Abram

La Molina, 2017
1. Introduccin

En el presente informe se quiere dar a conocer los resultados de la prctica N2 y N3

de laboratorio del Curso de Cultivo de Crustceos, realizado en el laboratorio de
Acuicultura. La artemia es un organismo planctnico que habita en aguas hipersalinas
y cuya importancia es del inters de muchos sectores. La Artemia sp se puede utilizar
como alimento vivo, por ello es el alimento ms utilizado en cultivo de larvas de peces
y crustceos. Por lo tanto es un alimento ideal, cuya disponibilidad es un factor de
vital importancia. Existen mtodos muy sencillos para su obtencin y descapsulacin,
a partir de quistes secos. Sin embargo la principal desventaja del uso de la artemia es
el porcentaje de variabilidad de eclosin, ya que la separacin de los nauplios de su
cascara o corion, muchas veces no es posible de forma natural. El corion es una capa
muy dura que se puede eliminar sin afectar al embrin por medio de un proceso de
descapsulacin muy sencillo que se desarrollara en el presente informe. Los objetivos
principales de la segunda prctica de laboratorio son. Determinar las tallas de los
cistes de artemia y el nmero de cistes por gramo, el porcentaje y la eficiencia de
eclosin. Entre los principales objetivos de la tercera prctica se desea realizar la
eclosin de quistes de artemia y determinar el nmero de nauplios por gramo de
quiste decapsulado, adems de la eficiencia de eclosin de quistes decapsulados.
 2. Marco Terico

2.1. Valor Nutricional

La Artemia es un excelente alimento vivo en la Acuacultura por sus caractersticas de

desarrollo, su pequeo tamao de nauplio y metanauplio (adecuado para las larvas
y juveniles de crustceos y peces) y fcil manejo, etc. El valor nutritivo de los naupliosreci
n eclosionados es muy alto.
Los recursos nutricionales que posee Artemia (protenas, cidos grasos, etc.). Su
composicin qumica y su concentracin varan de una cepa a otra, dependiendo de la
alimentacin que se les da. Si los estanques de cria son ricos en alimento natural, ms
suplementos naturales de vitaminas, minerales y oligoelementos esenciales y
bioestimuladores del sistema inmunolgico, se obtendr una Artemia rica en protenas,
carbohidratos, sales minerales, etc.
2.2. Etapas durante el desarrollo de la eclosin

Una vez puestos en agua de mar, los quistes bicncavos se hidratan tomando forma
esfrica y el embrin recobra su metabolismo reversible interrumpido. Luego de 24 horas
la membrana externa de los quistes se rompe (breaking) y aparece el embrin rodeado
de la membrana de eclosin (Fig 1). Durante las horas siguientes, el embrin abandona
completamente la cscara del quiste: colgando entretanto de la cscara vaca a la cual
permanece todava unido (estado de umbrella). Dentro de la membrana de eclosin se
completa el desarrollo del nauplio, sus apndices comienzan a moverse y en un breve
periodo de tiempo la membrana de eclosin se rasga (= hatching) amergiendo el nauplio
que nada libremente (Fig 2). (Sorgeloos, 1986)

Fig. 1: Quiste en fase de ruptura. (FAO, 1986)

Fig. 2: Embrin en estado de Umbrella (parte superior derecha) y

nauplios estado I. (FAO, 1986)
PROCESO DE ECLOSIN

El fenmeno de eclosin es un fenmeno qumico puro (intercambio inico), relacionado

con la concentracin de glicerol que posee el embrin, a mayor produccin de glicerol hay
mayor absorcin de agua; en etapas crticas de presin osmtica la membrana se rompe,
y despus la concentracin de glicerol sbitamente baja a cero, el glicerol es liberado. Si
bien se ha observado que en altas densidades de quistes la presencia de glicerol es
importante, pues interviene en la sincrona de la eclosin (ya que no acta txicamente
sobre las larvas). Es recomendable cambiar esta agua antes de que transcurran diez
horas de la eclosin, ya que la presencia del glicerol incrementa las poblaciones
bacterianas. (Torrentera, 1989)

Fig. 3: Ciclo de vida de Artemia

2.3. Tasa de Eclosin

Sobre la tasa de eclosin, Versichele et al. (1991) menciona que se puede utilizar agua de
mar diluida hasta 5ppm de salinidad para acelerar la velocidad de eclosin de algunas
cepas de quiste. (Cisneros, 2002).
Uso de hipoclorito

La superficie externa de la cscara de los quistes puede estar cubierta con esporas de
bacterias y hongos o estar contaminada con impurezas orgnicas. Es evidente que a una
densidad elevada de quistes en el medio de eclosin a una temperatura alta, el desarrollo
bacteriano puede ser considerable, lo que ocasiona que el medio de eclosin se ponga
turbio dando como resultado, eventualmente, una mala eclosin. Por otro lado existen
bacterias, que pueden ser per judiciales para las larvas del predador y que pueden ser
introducidas en el medio de cultivo de esas larvas junto con los nauplios de Artemia recin
eclosionados.

Con esta finalidad es muy recomendable hacer uso del hipoclorito de sodio o de calcio.
Para esto se introducen los quistes durante 1 o 2 horas en una solucin de 20 ppm de
hipoclorito en agua dulce; manteniendo una aireacin fuerte para exponer todos los
quistes a la solucin desinfectante. Tras este tratamiento, los quistes sern lavados con
agua dulce sobre un tamiz y posteriormente puestos a eclosionar. Se completa la
eliminacin del corion de los quistes por descapsulacin con hipoclorito, se produce una
reaccin exotrmica con un cambio de color que va hasta el naranja en el caso del de
sodio y hasta gris en el caso del de sodio.

2.4. Factores que afectan la descapsulacin de cistes

La FAO nos da ciertos parmetros ptimos para la eclosin de los cistes de artemia, entre
estos estn:

Temperatura ptima de eclosin de quistes: 25 a 30C.

Salinidad: 5 ppm (lmite variable). A mayor S de 30 ppm, los quistes no alcanzan
el perodo crtico de ruptura o eclosin, y en tal caso no se consigue sta.
Descapsulacin: En la descapsulacin se controla el proceso de osmo-regulacin.
Permitindose la descapsulacin es ms fcil conseguir la eclosin.
pH: A un pH de 8.0 hay una buena eficiencia de eclosin. Debajo de ste la
eclosin disminuye. Se recomienda el uso de 2 g de NaHOO 3/1 para asegurar una
mayor eclosin.
Oxgeno: En el metabolismo de Carbohidratos de Artemia, la presencia de O2 es
relevante. Para conseguir una eclosin eficiente se recomiendan altos niveles de
O2 (condiciones anaerbicas afectan la eclosin y el metabolismo de
Carbohidratos).

Con respecto a la temperatura se Ruiz (2008) menciona que la temperatura adecuada

para la sobrevivencia de Artemia est alrededor de los 25-27C y en trminos generales
los umbrales mnimos y mximos de supervivencia se sitan en 5 y 35C,
respectivamente, aunque estos lmites no son fijos y estn ligados a las caractersticas de
cada poblacin (Ruiz, 2008).

2.5. Conteo de nauplios:

(Vanegas, C. Robles, C. 2008: 414) Colocar a los organismos colectados en un vaso de

precipitado de volumen conocido con agua de mar. Agitar suavemente para que la
distribucin de los organismos sea homognea y con una pipeta serolgica tomar 1 mL
del medio con nauplios. Debido a que la distribucin de los organismos en la pipeta es
irregular, se recomienda contar los nauplios que se encuentren en 0.1 mL de la parte
inicial, media y final de la pipeta. Realizar al menos 10 conteos, obtener el promedio de
organismos en 0.1 mL y extrapolar la densidad a 1 mL.

Prctica N2
3. Objetivos

Determinar las tallas de los cistes de artemia.

Determinar el nmero de cistes por gramo.
Determinar el porcentaje de eclosin.
Determinar la eficiencia de eclosin.

4. Materiales

6 gramos de cistes de artemia

1 frasco de leja comercial
Papel filtro
Estereoscopio
2 pipetas de 1 mL y 10 mL
Hidrxido de sodio (NaOH) al 40%
cido actico
Agua de mezcla a 16 ppm

5. Metodologa
Nmero de cistes
Pesar en una balanza analtica 20 mg de cistes secos.
Luego llevar al microscopio contar la cantidad contenida en ese peso.
Dimetro de cistes
Pesar por triplicado 0.250 mg de cistes secos e incubar por una hora en un tubo cnico de
1 L, en agua de mar a 16 ppm, con iluminacin permanente de 1000 lux y una
temperatura de 25C
Colocar la aireacin desde el fondo para mantener los cistes en suspensin durante la
incubacin.
Luego se debe filtrar los cistes mediante un tamiz de 60 um y luego con la ayuda de una
pipeta traspasar los cistes a una placa Petri.
Llevar a un microscopio con ocular micromtrico para medir el dimetro.
Porcentaje de eclosin
Pesar 0.250 mg de cistes secos e incubar por 1 hora en un tubo cnico de 1 L, en agua
de mar a 35 ppm, con iluminacin permanente de 1000 lux y una temperatura de 25C
Luego tomar de 5 a 10 submuestras de 100 cistes cada uno aproximadamente.
Colocar cada submuestra en un papel filtro y luego contar el nmero de cistes y sacar un
promedio de las submuestras.
Re incubarlos, y luego de 48 horas fijar los nauplios con cido actico, contarlos
nuevamente y sacar un promedio
Para el conteo se debe filtrar en una mala de 40 um y luego con la ayuda de una piceta
trasvasarlos a una placa Petri.
( 100)
(%) =

Dnde:
E (%): Porcentaje de eclosin
nn: Promedio de nauplios de cada muestra
nc: nmero total de cistes de cada muestra
Eficiencia de Eclosin
Realizar la incubacin de cistes ya mencionada por triplicado.
Luego de haber incubado con las condiciones anteriormente mencionadas durante un
periodo de 48 horas, se debe fijar los nauplios con lugol.
Luego se debe contar los nauplios de cada botella y sacar un promedio

= =

Dnde:
EE: Eficiencia de eclosin
N: Promedio global
Pci: peso de cistes

6. Resultados
Nmero de cistes

Conteo de cistes en 10.05 mgr: 3024 cistes

Entonces en 1 gr de cistes habran: 288000 cistes

Dimetro de cistes

Hora de inicio de incubacin: 2:40 pm

Peso del total de cistes: 0.0242 gr
Duracin: 1 hora
Medicin del dimetro (mm):

0.16 0.15

0.14 0.14

0.15 0.13

0.10 0.16

0.10 0.19

0.15 0.15

0.20 0.15

0.12 -

Promedio del dimetro: 0.153 mm

Porcentaje de eclosin
Hora de inicio de incubacin: 2:48 pm
Peso total de los cistes: 0.0250 gr
Conteo de nauplios luego de 48 horas:

Submuestra Nmero de nauplios

1 0

2 0

3 10

Por lo tanto se obtuvieron 10 nauplios por 250 mg

Es decir que en un 1 gramo eclosionarn 40 nauplios.
En un gramo hay 288000 cistes, en 250 mgr habr 72000
(10 100)
(%) = = 0.013%
72000

Eficiencia de Eclosin
Peso total de los cistes: 0.0250 gr
 0
= = =0
0.0250

7. Discusiones

Con respecto a la longitud del dimetro de los cistes tericamente esta entre 170
micrometros, el valor determinado en el laboratorio fue de 0.153 mm en promedio,
el cual se encuentra cerca del valor terico, por lo cual se podra decir que es
correcto.
El nmero de cistes de artemia por gramo determinado fue de 288000, el cual se
encuentra muy cerca del promedio que tericamente es de 300000.
Con respecto al porcentaje de eclosin este fue de 0.013%, lo cual es un valor
muy bajo, posiblemente se debe haber incubado los cistes por 24 horas ms, ya
que al realizar la descapsulacin de cistes sin algn otro reactivo para facilitar el
desprendimiento del corion, se debe dar un tiempo ms largo para permitir que los
cistes eclosionen, entre otros factores que pudieron haber afectado la eclosin de
las artemias pudo haber sido la luz ya que no era la adecuada. La temperatura
ambiental dentro del laboratorio donde se realiz la incubacin es de 30C, esta
temperatura es adecuada para poder influenciar en la solucin donde se
encontraban los cistes, otro parmetro que al parecer estaba a favor del
experimento era la aireacin, por lo cual se descarta que esto haya podido influir
en el bajo porcentaje de eclosin y la eficiencia de eclosin.

8. Conclusiones

Se determin una longitud de 0.153 mm de dimetro de los cistes de artemia.

Se determin un nmero de 288000 cistes por gramo.
Se determin un 0.013% de porcentaje de eclosin.
Se determin una eficiencia de eclosin de 0.
Prctica N3

9. Objetivos

Realizar la eclosin de quistes de artemia.

Determinar el nmero de nauplios por gramo de quiste decapsulado.
Determinar la eficiencia de eclosin de quistes decapsulados.

10. Materiales

2 gr. de cistes de Artemia.

Beakers, pipetas y recipientes graduados.
Botellas de plstico de 2 litros.
Placas Petri.
Hipoclorito de sodio (leja comercial).
Malla de 125 .
Equipo de iluminacin.
Estereoscopio.
Picetas, baguetas, esptula.
Aireadores y manguerillas de aireacin.
Agua salobre (agua de mar).
Cmara de Sedwick Rafter.
cido actico

11. Metodologa
A. DESCAPSULACION.
1. Hidratacin de los cistes.

2 gr. de cistes de Artemia con aireacin constante por dos horas

aproximadamente.
Recoger los cistes en una malla de 125 micras para poder escurrir el agua.
2. Preparacin de solucin descapsuladora.

Requerimientos de cloro activo. 0.5 gr. de Cl activo por cada gr. de cistes como se
trabajar con 2 gramos de cistes de Artemia, por lo tanto el requerimiento de Cl
activo es de 1 gr.
Colocar los cistes en la solucin descapsuladora preparada con aireacin por un
lapso de 125 segundos.
Verificar la temperatura, la descapsulacin es una reaccin exotrmica, por lo cual
habr generacin de calor y la temperatura debe ser siempre menor a 40C, si se
presenta una mayor temperatura, adicionar hielo.
Observar la descapsulacin durante el tiempo requerido. El cambio de color de los
cistes variar de color caf, a gris y finalmente a anaranjado que ser el color del
 embrin. Cuando la proporcin de color de los cistes anaranjados sea mayor a los
cistes de color blanco, detener la aireacin y traspasar los cistes a una malla.(
Lavar los cistes contenidos en una malla de 125 micras con agua dulce
Escurrir el agua sobrante y sumergir los cistes en la malla en una solucin de HCl
0,1 N por 15 20 min.
Seguidamente se lava con abundante agua hasta que el olor a leja desaparezca
del todo el olor fuerte a leja

Fig. 4. Lavado de los cistes en agua dulce

B. Cosechar los embriones rpidamente.

C. determinacin de nmero de quistes decapsulados.

Tomar 3 submuestras de 1 ml y colocarlas en placas Petri

Aplicar cido actico a cada una de las sub-muestras.
Luego de realizar el conteo en una placa sacar un promedio y determinar el
nmero de quistes decapsulados por gramo.
12. Resultados:
Esquema de Proceso de eclosin de artemia

HIDRATACION DE LOS CISTES x 2

horas (aireacion constante)

filtrar el agua por medio de una

malla de 125 micras

trasferir los cistes al recipiente con

la solucion descapsuladora x 125 seg

filtrar la solucion y separla de los

cistes

lavar con abundante agua en una

malla de 125 micras

sumergir la malla con las artemias

en HCl

escurrir el HCL

Lavar con abundante agua

colocar los cistes en agua de mar

filtrada (1g cistes cada litro de agua)

mantenerlos con aereacion costante

por 12- 18 h

contar nauplios
TABLA 1.

Estimacin de: E-1 E-2

N de quistes descapsulados por

0 0
gramo de nauplios obtenidos

Eficiencia de la eclosin 0 0

13. Discusiones

Dados los resultados en la tabla anterior, se puede observar el conteo

realizado en los dos embaces donde se sembr los cistes fue de 0 para
ambos casos es decir no eclosiono ni una sola artemia al realizar la
observacin de estas despus de las 12 horas, de la misma manera
eficacia de eclosin fue cero por dicho motivo.
Se pudo observar algunos individuos en estadio I pero lamentablemente
estos no sobrevivieron, ya que al pasar los das se observ que no pasaban
al estadio 2. (Degado et al , 1988 ) afirma que esto puede ser posible que
los cistes no hayan eclosionado totalmente debido a que no estuvieron
cerca dela temperatura ptima de eclosin de quistes: 25 a 30C, de igual
manera la deficiencia de oxgeno pudo ser otro factor que impidi la
eclosin de los cistes. Puesto que en el metabolismo de Carbohidratos de
Artemia, la presencia de oxigeno es relevante. Para conseguir una eclosin
eficiente se recomiendan altos niveles de Oxigeno (condiciones
anaerbicas afectan la eclosin y el metabolismo de Carbohidratos (Wa,
1992).

14. Conclusiones

Se realiz la eclosin de cistes de artemia.

Se determin que el nmero de nauplios fue de 0 para ambos grupos de
trabajo.
Se determin que la eficiencia de eclosin fue 0 gracias a que no hubo
cistes que eclosionaron completamente.

15. Bibliografa
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Sorgeloos, Patrick. 1986. Manual p ara el cultivo y uso de artemia en
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Torrentera Blanco, Laura, 1989. La produccin de alimento vivo y su
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Vanegas, C. Robles, C. 2008. Ensayos toxicolgicos para la evaluacin de
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WA, M. F. (1992). Efecto de la hidratacin, descapsulacin y salinidad, para
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de camaron de rio Macrobrachium rosenbergii.