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La contamination se fait :
1) Gnralement par infiltration des eaux uses dans les EAP (cross-connexion) ;
2) Infiltration des eaux de pluie par les fausses septiques (Cholra, Typhode) ;
3) Contamination des nappes phratiques par les lessivages des eaux ou bien par les matires
fcales ;
4) Naturellement c'est--dire consommation des plantes mal laves dont larrosage a t fait par
des eaux uses non traites.
1) Hpatite A +++ :
= hpatite infectieuse ; virus de la famille des Picornaviridae ; maladie transmission fcale,
eaux uses, consommation des produits contamins par les eaux uses.
Evolution : ictre hpatique svre et prolong.
2) Adnovirus :
Conjonctivites et maladies respiratoires.
3) Rotavirus : gastroentrite.
4) Rhinovirus : Eruptions cutanes, affections respiratoires.
5) Poliovirus : Poliomylite ; contamination dans les piscines.
6) Papillomavirus : Responsable de verrues plantaires (eaux de baignade).
7) Entrovirus humain : Mningites, encphalites, infections respiratoires, ruptions cutanes,
conjonctivites, hmorragie, fivre.
Analyse :
- Lanalyse nest significative que si le prlvement a t fait dans des bonnes conditions ;
- Le prlvement doit tre fait par des personnes qualifies ;
- Le prlvement doit tre reprsentatif ;
- Flacons en verre, striles (striliss lautoclave 180C pendant 30 min) ;
- Transport dans des glacires portatives, rapidement, ne dpassant pas 72 h ;
- Le prlvement au robinet laisser leau couler pendant 4-5 min ;
- Chaque prlvement doit tre accompagn dune fiche de renseignement ;
- Lexamen doit tre fait 2 h aprs larrive au laboratoire.
Mthode par immersion (ou incorporation) : compter les colonies dans la glose.
Ce test consiste prparer dans une boite de ptrie :
1 ml deau analyser, ensuite on va dune manire aseptique incorporer du glose (non
spcifique) talement de leau lintrieur du glose 24h 30C ou 72h 22C.
Ce procd permet de dnombrer les microorganismes prsents dans une culture :
Germes anarobies ;
Germes arobies facultatifs.
Mthode par talement (ou flottation) : compter les colonies la surface de la glose.
Glose (Hecktoen, GN) + 1cc eau analyser Etaler de manire homogne la
surface du glose.
Cette mthode est prconise pour les Germes arobies strictes.
Lecture : 37C, compter le nombre des colonies soit la surface soit dans la glose (selon la
technique).
Le dnombrement se fait sur les boites comportant entre 50 300 colonies.
Pour une bonne lecture, on divise la boite en cadrans le nombre obtenu est multipli par 4 puis
par linverse de la dilution (x 10, x 102, x 103).
Hydro-bromatologie 2010/2011
Intrt :
- Mthode dorientation ;
- Ce test est indicateur de pollution dans des conditions naturelles (milieu naturel : eaux
souterraines, nappes profondes ou eaux de surface) ; si cette eau est protg => le nombre de
germes retrouvs est stable, mais volution du nombre des germes => pollution externe.
- Cest un test dalerte (de surveillance) ;
- Permet la surveillance des eaux de consommation dans les rseaux ;
- Permet aussi de mesurer lefficacit des traitements (leau est toujours soumise aux traitements
physico-chimiques analyse de leau brute puis aprs traitement si leau est bien traite
diminution significative du nombre de germes) ;
- Permet aussi de surveiller les eaux embouteilles mesurer une mauvaise hygine de
lquipement ou de lenvironnement de lusine (pollution au niveau de la source ou des
quipements).
Ces germes sont mises en vidence par Colimtrie, cest un test qui consiste dceler et dnombrer
les germes coliformes particulirement E. coli dorigine fcale. Ce dernier sil est prsent, il est
souvent accompagn dautres germes pathognes.
2 techniques :
En milieu liquide NPP (Nombre le plus probable possible).
En milieu solide MF (Filtration sur membrane).
NPP :
Mthode alatoire. Le dnombrement se fait laide des tables de dnombrement.
Le milieu utilis (liquide) tant le BCPL = Bouillon Lactos au Pourpre de Bromcrsol.
Le BCPL peut se prsenter sous forme de :
Flacons (doublement concentrs en BCPL)
Tubes (simplement ou doublement concentrs en BCPL)
Munis de cloches de Durham (permettant de dceler ventuellement le dgagement de gaz).
2) Etape confirmative :
Recherche et dnombrement des coliformes fcaux, essentiellement E. coli.
Parmi ces 14 coliformes totaux, on dnombre les coliformes fcaux.
Pour chaque Flacon (+) et Tube (+), on prend un milieu disolement = milieu Schubert =
milieu mannitol-indole (transparent).
Tout tube prsentant : gaz(+), indole(+), contenait lorigine au moins un coliforme fcal.
Hydro-bromatologie 2010/2011
Cette mthode de colimtrie en milieu liquide peut tre confirme par une colimtrie en milieu solide.
- A partir de chaque flacon et tube positif, on ensemence sur glose BCPL,
- Incubation 24h 37C,
- Virage du rouge au jaune colonies lactose (+),
- Les colonies positives sont repiques sur TSI,
- Et lidentification se fait par le test IMVIC :
I : recherche de lindole,
M : recherche de rouge de mthyle,
V : VP,
I : identification de linositol,
C : citrate de Simmons.
2) Etape confirmative :
A partir de chaque tube et flacon positifs ensemencement dans un milieu spcifique = milieu
EVA (Ethyle violet azide de Na) ;
Incubation 37C pendant 24 h ;
Tous les tubes et les flacons prsentant une louche microbienne sont considrs comme positifs ;
On note aussi gnralement la prsence au fond des tubes dune pastille violette (facultative).
Le dnombrement se fait comme prcdemment sur table de Mac Grady.
Dosage :
Aprs destruction des formes vgtatives par chauffage 80C pendant 10 min, lchantillon
analyser est incorpor dans un milieu de base de couleur verte GVF (Glose Viande Foie) additionne
de sulfite de Na et Alun de fer.
Aprs solidification et incubation ; la prsence de germes sulfitorducteur est traduit par un halo noir
du sulfure de fer autour des colonies.
Lecture :
Les spores apparaissent sous forme des grains de caf dans la masse de la glose.
A partir de 48 h, possibilit que tout le tube se noircit.
Si leau est charge tubes noirs.
Le calcul : le nombre de spores pour 100 ml deau (ex : 7 colonies pour 100 ml qui est = 25 ml x 4
tubes).
Cette technique est valable pour les eaux et les aliments.
Principe :
Cette technique consiste filtrer une quantit deau travers une membrane dester de cellulose, de
marque Millipore ou Sartorius, de porosit dfinie 0,45 m, le diamtre du filtre est de 25 mm.
Cette porosit est susceptible de retenir les particules.
Cette membrane est ensuite dpose sur milieu glos appropri qui va permettre aux coliformes de se
dvelopper de manire prfrentielle.
1) Etape prsomptive :
Lappareil utilis sappelle : la rampe de filtration.
Hydro-bromatologie 2010/2011
On peut avoir un appareil form de plusieurs entonnoirs permettant ainsi une analyse rapide de
plusieurs eaux (4 5 analyses).
Rq :
Eaux potables, de source, de pluie on utilise une quantit de 100 ml ;
Mais 20 ml uniquement pour les eaux pollues puis complter 100 ml avec de leau distille strile.
NPP MF
Eaux peu pollues ou pollues ; Eaux claires, potables, de source (non pollues)
Coteuse ; sinon colmatage du filtre ;
Mobilise beaucoup le personnel ; Plus adapte ;
Encombrante. Moins encombrante ;
Moins dquipements ;
Moins de personnels ;
Cot plus conomique ;
Rsultats sont meilleurs.
Les salmonelles :
Ce sont des entrobactries qui peuvent survivre plusieurs semaines en milieu sec et plusieurs mois
dans leau.
Les salmonelles peuvent tre vhicules par les volailles, les animaux sauvages
Il existe des porteurs sains.
La contamination se fait par les eaux pollues par les excrments des animaux porteurs.
Peuvent aussi se retrouver dans les aliments (viande et ufs), essentiellement Salmonella typhi et
Salmonella paratyphi A, B et C.
Ces germes pntrent par voie digestive ;
Aprs une longue incubation, traversent la muqueuse intestinale et envahissent les tissus lymphodes ;
Se transmettent dans la lymphe et passent dans la circulation sanguine septicmie.
Gnralement, ce schma se fait par consommation dune eau riche en Salmonelle.
Les plus exposs sont : enfants, femme enceinte et personnes immunodprimes.
Lingestion dune faible quantit diarrhe, fivre et vomissements, rtablissement en quelques
jours.
Diagnostic :
A. Hmoculture :
Ralise aprs une semaine ; ncessite une quantit de sang assez importante.
B. Coproculture :
Milieux slectifs :
Decoxylate citrate ;
Vert brillant.
Ces milieux donnent des rsultats ngatifs avec les autres germes.
C. Eaux :
4 tapes :
Hydro-bromatologie 2010/2011
1) Pr-enrichissement :
Ensemencer lchantillon deau sur milieu non slectif :
Flacon SFM doublement concentr,
Tubes simplement et doublement concentrs.
Incubation 24 h 37C ; cette tape permet de revivifier les bactries.
2) Enrichissement :
A partir du milieu de pr-enrichissement, on ensemence sur SFM simplement concentr.
Incubation 24 h 37C.
3) Isolement :
A partir du SFM, on ensemence sur une glose slective Hecktoen (3 isolements)
Incubation 24 h 37C.
4) Identification :
Sur milieu TSI ; incubation 24 h 37C.
Hydro-bromatologie 2010/2011
Prophylaxie :
- Contrle bactriologique ;
- Dpistage des porteurs sains ;
- Vaccination : vaccin TABC
75% typhique (3 injections SC 15 J dintervalle) ;
25% paratyphique.
Vibrio cholerae :
Bactrie gram ngatif de la famille des vibrionaceae ;
2 biotypes : V .c .var El Torr,
V .c .var Cholerae.
En forme de virgule (btonnet incurv), non capsul, non sporul, flagell, arobie fermentative.
Responsable de maladies pidmiques trs contagieuses transmission hydrique.
Germe limination fcale => selles liquides (15-20 selles/jour) => mort par dshydratation.
Source de contamination importante : contamination interhumaine (djections humaines -porteurs-).
Rservoirs :
Hommes : manque dhygine collective ou individuelle ; manque deau, catastrophes
naturelles.
Mouches : jouent un rle important dans la transmission du Vibrio
Diagnostic :
A. Coproculture :
Pr-enrichissement des selles dans le milieu EPA (eau peptone alcaline) qui est 10 fois
concentr (milieu hypersal), pH = 8,5 germes halotolrants supportant des concentrations
de 36 de NaCl, flacon de 500cc. Incubation 24 h 37C.
Enrichissement sur TCBS ou GNAB.
Isolement sur TSI ou Krigler.
Identification : galerie biochimique ou diagnostic srologique (srums agglutinants : Inaba,
Agawa).
B. Hydrologie :
Hydro-bromatologie 2010/2011
Les colonies sont rondes, plates, bords rguliers, surface lisse brillante, translucides sous forme de
goutte de rose.
INFECTIONS BACTERIENNES :
Atteintes ORL :
Rhinite, rhinopharyngites, amygdalites, angines, otites, conjonctivites.
Les germes incrimins responsables : Pseudomonas aeroginusa, responsables des otites externes +
ruptions cutanes (tte et cou).
Lincidence de ces maladies 5 fois plus importante chez les baigneurs que chez les non baigneurs
(eaux de baignade).
Affections cutanes :
Plaie, blessure contamination des baigneurs ;
Infection Staphylocoques (eaux de baignade) ;
Aeromonas (eaux douces) ;
Vibrion parahmolyticus (milieu marin) ;
Mycobactries : Mycobactrium marinum
Mycobactrium fortuitum
Mycobactrium kansasii
Granulomes des piscines.
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Infections virales :
Tous les entrovirus : virus Polio,
Coxackievirus,
Adnovirus,
virus de lhpatite A,
Rnovirus,
Echovirus.
Mycoses :
Dermatoses mycosiques trs frquentes dans les eaux de baignade ;
Epidermophities interdigitalaires ou interplantaires (pieds dathlte) ;
Eczma margine de Hebra ;
Champignons :
Tricophyton mentagraphytes
Tricophyton rubrum
Epidermophyton flocosum
La contamination se fait par contact des pieds avec le sol, cabines douches, bains de vapeurs
Candidoses vaginales, orales, cutanes ;
Amibes : Naegleria, Entamoeba histolytica.
Lgionellose :
1976 : Pneumopathie broncho-alvolaire asphyxiante, mortalit dpasse 15%.
La contamination tait faite par la climatisation.
1977 : isolement dune bactrie Legionella pneumophila.
Aujourdhui : on dnombre 43 espces de lgionelles dont plus de 20 sont pathognes pour lhomme.
Legionella pneumophila srotype LP1 le plus violent pour lhomme.
Ce sont des bactries naturellement prsentes dans leau et les bouts, elles sont frquemment
rencontres dans les rseaux deaux chaudes, les humidificateurs, arosols, nbulisateurs, l o il y a
de leau condense : tours de refroidissement et de climatisation
Cibles : ce sont :
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Rservoirs :
Elle vit des les dpts calcaires, canalisations (eaux stagnantes).
Recherche :
- Filtration dune quantit deau sur BCYE travers une membrane en polycarbonate ;
- Incubation 3-10 J 37C ;
- La prsence de lgionella est confirme par repiquage sur milieu slectif, on recherche surtout
lexigence en L-cystine ;
- Les bactries se caractrisent par une coloration gris bleu pouvant devenir blanchtre aprs
vieillissement, bords nets et ross, aspect de verre fritt caractristique.
Rglementation algriennes :
Normes : qualit bactriologiques des eaux de boissons.
Unit : Bactrie / 100 ml.
- Eau traite nombre de CF et CT doit tre nul.
- Eau non traite CT < 10, CF = 0 (deux prlvements conscutifs).
- Eau prleve partir dun rseau absence totale de CF et CT.
- Eaux embouteilles CF et CT nul.
- Dans tous ces cas Clostridium et streptocoque doivent tre nul.