UNIVERSIDAD NACIONAL DE SANTA

FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE AGROINDUSTRIA

PROYECTO DE INVESTIGACIN

Estudio Fitoqumico de las flores de

Laccopetalum Giganteum
(Pacra-Pacra)

ASESOR : Smpalo

NUEVO CHIMBOTE

2016
 Agradecimientos

Agradecemos en primer lugar, al ser Supremo, nico dueo de todo saber y verdad, por
iluminarnos durante este trabajo y por permitirnos finalizarlo con xito; y en segundo
lugar, pero no menos importante, a nuestros queridos padres, por su apoyo incondicional y
el esfuerzo diario que realizan por brindarnos una buena educacin.

Los esfuerzos mayores, por ms individuales que parezcan, siempre estn acompaados de
apoyos imprescindibles para lograr concretarlos.

En sta oportunidad, nuestro reconocimiento y agradecimiento a nuestro profesor por su

oportuna, precisa e instruida orientacin para el logro del presente trabajo.

2
NDICE:

I. AGRADECIMIENTOS...2
II. NDICE.3
III. DATOS GENERALES.4
IV. RESUMEN5
V. INTRODUCCIN
5.1 Realidad Problemtica.....7
5.2 Trabajos Previos.......8
5.3 Formulacin del problema..11
5.4 Importancia y justificacin.....12
5.5 Definicin de trminos bsicos..12
VI. OBJETIVOS-HIPTESIS..13
VII. METODOLGA DE ESTUDIO
7.1 Mtodo de investigacin.14
7.2 Estrategia de estudio....14
7.3 Universo o poblacin...14
7.4 Diseo y caractersticas de la muestra14
7.5 Descripcin y acondicionamiento de las unidades
experimentales.14
7.6 Tcnicas de recoleccin, procesamiento y anlisis de los
datos..15
7.7 Tcnicas de procesamiento y anlisis de datos..15
VIII. PRESUPUESTO....21
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS....23
X. ANEXOS26

3
 PROYECTO DE INVESTIGACIN

I. DATOS GENERALES
1.1 TTULO :
ESTUDIO FITOQUMICO DE LAS FLORES DE
LACCOPETALUM GIGANTEUM (PACRA-PACRA)

1.2 EQUIPO INVESTIGADOR:

Asesor : Smpalo
Responsables :
Carrasco Huayanay Jeyner Guillermo
Cueva Granados Leydi Patricia
Lopez Herrera Ciro Nalter
Matta Canova Yuleisy
Rina Valera Vsquez
1.3 FACULTAD Y DEPARTAMENTO ACADMICO A LA QUE PERTENECE
EL PROYECTO:
Facultad : Ingeniera
Departamento : Dep. Acadmico de Ingeniera Agroindustrial

1.4 REA Y LNEA DE DESARROLLO DE LA INVESTIGACIN:

rea : Recursos naturales y medio ambiente
Lnea : Conservacin y uso de la biodiversidad

1.5 TIPO DE INVESTIGACIN:

Segn su aplicabilidad : Bsica
Segn su Naturaleza : Descriptiva

1.6 LUGAR DONDE SE DESARROLLAR EL PROYECTO:

Regin : Ancash
Provincia : santa
Distrito : Nuevo Chimbote
Lugar : Laboratorio de bioqumica
Universidad Nacional del Santa
4
II. RESUMEN

La Pacra Pacra, cientficamente conocida como Laccopetalum, es un gnero con una

especie de planta de flores perteneciente a la familia Ranunculaceae. Su nombre deriva del
griego lakkos= agujero, cavidad y petalon=ptalo, en alusin a los numerosos nectarios
que se distribuyen en cada ptalo (Soukup, 1970). (1)

Laccopetalum, es un gnero monoespecfico y endmico de la flora peruana (Tamura,

1993, 1995), el cual como nica especie Laccopetalum giganteum, se encuentra
restringida a unas pocas localidades en el norte andino de nuestro pas. Presenta unas hojas
espinosas, suculentas, grandes, glaucas, con unas flores muy grandes y verdosas.
(Lehnebach et al., 2007). (2)(3)

Actualmente esta planta ha recibido diversos nombres vulgares como: Pacra

(Macbride, 1937); Pacra Pacra (Sagstegui et al, 1999); Pagra Pagra o
Huamanripa (Soukup, 1970); Huamanrripa (Sagstegui et al, 1999) y tambin
Rima Rima (Cano et al, 2006). (1) (4) (7) (8)

Esta planta endmica, crece en las regiones ecolgicas del pramo, de la puna hmeda
y de la zona alto andina; entre los 3900 y 5300 m de altura (Brako & Zarucchi, 1993; Len,
2006). (5).

Hasta mediados del siglo XX la mayora de los especmenes conocidos provenan de

localidades en el norte del Departamento de Ancash, Provincia de Pallasca y
Departamento de Cajamarca, Provincia de Hualgayoc (Macbride, 1937; Weberbauer,
1945). Sin embargo, excursiones botnicas demuestran que algunas de estas poblaciones
de plantas persisten en algunas localidades como Pelagatos y Conchucos en la zona de
Pallasca, como tambin en otras localidades del Departamento de La Libertad y una zona
contigua en el Departamento de San Martn con proteccin estatal. (Len 5165-USM,
2006). (6) (7) (9).

Laccopetalum giganteum habita zonas pedregosas y rocosas (Weberbauer, 1945);

tambin se conoce que ocupa sitios de arenisca en Conchucos en Ancash y zonas aledaas,
donde est asociada con especies diversas mayormente arbustivas y herbceas altas tpicas
de la jalca. Por su hbitat en alturas muy elevadas se supone un crecimiento y una
regeneracin muy lentos, y dada su depredacin continua; actualmente se encuentra

5
catalogada como una especie en Peligro Crtico y considerada en El Libro Rojo de las
plantas endmicas del Per. (D.S. 043-2006-AG). (6) (9)

Varias partes de la flor de Laccopetalum giganteum son empleadas en medicina

folclrica para usos tanto en seres humanos, como para empleo veterinario. (11)

El uso de las flores en medicina folclrica humana, tiene mucha fama, en forma de
infusin especialmente como remedio contra la tos (antitusgeno), y se venden en los
pueblos para combatir afecciones de la garganta y pulmones (Soukup, 1970; Brack Egg,
1999; Sagstegui et al., 1999; Cano et al., 2006). Inclusive autores afirman que fue
empleada de esta forma por los antiguos peruanos del incanato (Fernndez & Rodrguez,
2007). (1) (4) (8)

Las flores, en la medicina folclrica veterinaria, son mezcladas con sal y se dan al
ganado, porque se considera como un remedio eficaz para aumentar la fecundidad.
(Soukup, 1970; Sagstegui et al, 1999). (1) (8).

En la comunidad de Conchucos, Dpto. Ancash, las flores son cortadas en pedazos o

trozos pequeos y se combinan con las hojas de chocho silvestre Lupinus sp.
Denominado copcho, la mezcla es guardada 24 horas, tiempo en el cual emite un calor
(elevadas temperaturas), luego se extiende en mantas y se les da de comer al ganado
vacuno, especialmente al que no entra en celo y a los machos para ser ms fecundos,
aadiendo sal. En esta misma comunidad se ha comprobado que sirve tambin como
purgante eficaz (diarreico) en el ganado ovino y caprino. (Fernandez & Rodrguez, 2007)
(10).

Igualmente se tiene la creencia popular de que la Pacra Pacra acta como un

afrodisiaco y que aumenta la potencia sexual masculina; as mismo para poder tener
progenie las mujeres. Para tal efecto, los chamanes o falsos curanderos mesclan la flor
en depsitos mezclndola con aguardiente (alcohol de caa de azcar), algarrobina (miel
de algarrobo), chuchuhuasi (licor de Maytenus spp.) entre otras, para lograr la fertilidad
deseada. (Fernndez & Rodrguez, 2007) (10).

Sin embargo, Pera et al. (2004) reportaron toxicidad para cierto uso de flores entre
usuarios en la zona de Conchucos, la que se produce cuando los lugareos (pastores),
prueban el nctar emitido por los nectarios de los ptalos, presentando fuertes dolores de

6
cabeza y alucinaciones. Tambin se conoce que la planta tiene accin vesicante,
produciendo ampollas y quemaduras al poner en contacto con la piel humana hasta de
tercer grado; tal es as que se han reportado casos de quemaduras de tercer grado con daos
irreversibles al colocar los ptalos de la planta, previo vendaje, para tratar supuestas
enfermedades de artritis y reumatismo. (11)

En el 2007, J. Arroyo y Colab. Facultad de medicina y bioqumica UMSM.

Realizaron un estudio experimental para determinar si la administracin por va oral del
extracto etanlico de flores de Laccopetalum giganteum (Pacra-pacra) en ratas normales
aumenta la fertilidad. El cual se realiz en una muestra de 48 animales, divididos
aleatoriamente en 2 grandes grupos (experimental y control con SSF) de 24 machos y 24
hembras. Al trmino fueron sacrificados, para observar la presencia de fetos en el tero; y
a los animales que estuvieron separados, se les extrajo muestra de sangre, para conocer el
nivel de testosterona en machos y LH, FSH, estrgenos y progesterona en hembras. Como
resultado obtuvieron que los flavonoides, compuestos fenlicos y taninos estuvieron en
mayor cantidad en el extracto etanlico y el 100% de ratas que recibi el extracto etanlico
de la planta y estuvo junto a los machos result grvida; y, las separadas que recibieron el
mismo extracto, presentaron incremento de FSH en las hembras y testosterona en los
machos, comparativamente a los controles respectivos. Por lo que en condiciones
experimentales, el extracto etanlico de las flores de Laccopetalum giganteum (pacra-
pacra) increment la fertilidad en ratas normales. (12)

III. INTRODUCCIN
3.1 REALIDAD PROBLEMTICA
El Per es depositario de una extraordinaria y variada flora cuyas aplicaciones
teraputicas y nutritivas en la medicina tradicional cobran importancia hoy en da
con la ideologa ecolgica en la cual se trata de rescatar todo lo til que la sabia
naturaleza nos brinda.
Los componentes de una planta se subdividen en dos grandes grupos: Los
Metabolitos Primarios y los Metabolitos Secundarios o Productos Naturales. Los
primeros conformados por carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos,
estn universalmente distribuidos y participan en la actividad celular de todo ser
viviente; mientras que los ltimos comprenden principios activos, compuestos
qumicos de estructura compleja y de distribucin ms restringida, cuyo

7
 conocimiento estructural permite disear reacciones para producir derivados
semisintticos con utilidad bioqumica y teraputica. Es entonces de gran
importancia, aislarlos y localizarlos en los ensayos biolgicos adecuados.
Solo se puede conocer el valor nutritivo de una planta o producto, y por ende
recomendar o no su consumo, sino se sabe su composicin qumica.

3.2 TRABAJOS PREVIOS

En el 2007, J. Arroyo y Colab. Facultad de medicina y bioqumica UMSM.
Realizaron un estudio experimental para determinar si la administracin por va
oral del extracto etanlico de flores de Laccopetalum giganteum (Pacra-pacra) en
ratas normales aumenta la fertilidad. El cual se realiz en una muestra de 48
animales, divididos aleatoriamente en 2 grandes grupos (experimental y control con
SSF) de 24 machos y 24 hembras. Al trmino fueron sacrificados, para observar la
presencia de fetos en el tero; y a los animales que estuvieron separados, se les
extrajo muestra de sangre, para conocer el nivel de testosterona en machos y LH,
FSH, estrgenos y progesterona en hembras.
Como resultado obtuvieron que los flavonoides, compuestos fenlicos y taninos
estuvieron en mayor cantidad en el extracto etanlico y el 100% de ratas que
recibi el extracto etanlico de la planta y estuvo junto a los machos result
grvida; y, las separadas que recibieron el mismo extracto, presentaron incremento
de FSH en las hembras y testosterona en los machos, comparativamente a los
controles respectivos. Por lo que en condiciones experimentales, el extracto
etanlico de las flores de Laccopetalum giganteum (pacra-pacra) increment la
fertilidad en ratas normales.
El procedimiento experimental fue el siguiente:
- Las flores de la planta Laccopetalum giganteum (pacra-pacra) fueron
recolectadas en Huaraz, departamento de Ancash. La identificacin
taxonmica de la planta fue realizada en el Museo de Historia Natural de la
Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
- Para la preparacin del extracto alcohlico, las flores frescas fueron lavadas
y sometidas a deshidratacin, a 40 C, por 48 horas; luego, fueron trituradas
en un molino elctrico, hasta obtener un polvo fino, macerndose con
alcohol a 60 C. Luego de los 15 das, se filtr y se llev a estufa, a 40 C,
en placas grandes, para la desecacin respectiva, por 4 das, para llevarlo a

8
 extracto seco. Y al extracto seco se le realiz reacciones de identificacin o
coloracin para determinar la presencia o ausencia de metabolitos
secundarios haciendo uso de reactivos especficos, en los resultados se
indic presencia o ausencia del metabolito: 5 mg de extracto problema con
5 gotas de reactivos.
- El estudio farmacolgico in vivo se realiz a las ratas hembras y machos
que recibieron SSF y extracto etanlico de las flores de la planta
Laccopetalum giganteum (pacra-pacra) y estuvieron en jaulas separadas; se
les extrajo muestra de sangre, para dosaje de hormonas: testosterona en
machos y en las hembras LH, FSH, estrgenos y progesterona,
expresndose en g/dL. El dosaje hormonal se hizo mediante el mtodo
electro quimioluminiscencia, que es una forma qumica seca, con una
sensibilidad y especificidad de 99%. Las ratas hembras que recibieron el
extracto, as como las ratas hembras que recibieron suero fisiolgico y
estuvieron en jaulas junto a los machos, fueron sacrificados para retirarles el
tero y evaluar la fecundidad o gravidez, por medio de la observacin de los
fetos presentes.
- Se determin los niveles de urea, creatinina y transaminasas, como
indicadores de la funcin renal y heptica, mediante los mtodos
convencionales realizados en el Instituto de Investigaciones Clnicas de la
Facultad de Medicina de la UNMSM.
- Los datos obtenidos al evaluar el aumento de la actividad fertilizante fueron
sometidos al anlisis de varianza, y comparacin de medias; para los
diferentes anlisis se consider la p<0,05.
El ex sistema neuroendocrino y a las gnadas, que presentan dos funciones bien
diferenciadas, espermatognesis y esteroidognesis. Ambas funciones son
controladas por va endocrina, desde la hip- fisis anterior, que secreta dos
gonadotropinas, la hormona folculo estimulante (FSH) y la hormona luteinizante
(LH).
Sus funciones son: FSH acta sobre las clulas de Srtoli, localizadas en el interior
de los tubos seminferos, estimulando la espermatognesis o produccin de
espermatozoides; LH acta sobre las clulas de Leydig, en el tejido intersticial,
provocando el proceso de esteroidog-nesis o produccin de hormonas masculinas
(andr- genos), cuyo principal producto es la testosterona. La testosterona regula la

9
secrecin de LH, actuando sobre el hipotlamo y la hipfisis anterior, en un
proceso de homeostasis negativa. Con los hallazgos descritos, se postula que el
extracto etanlico de las flores de Laccopetalum giganteum (pacra-pacra) podra
actuar directamente sobre el hipotlamo y la hipfisis, favoreciendo la liberacin de
los factores de la FSH, y sobre la hipfisis, permitiendo la produccin de
gonadotropina hipofisiaria FSH. Por otro lado, al administrar el extracto alcohlico
de las flores de Laccopetalum giganteum (pacra-pacra), en ratas normales machos
estimula la produccin de testosterona (Figura 3), posiblemente por metabolitos
secundarios presentes en la planta (Tabla 1), que actuaran a nivel del hipotlamo
liberando la neuregulina (Nrg). Este, a su vez, actuara a nivel hipofisario, liberando
inicialmente LH y activando las clulas de Leydig (12). Posteriormente, la LH
caera por retroalimentacin negativa, debido al incremento de la testosterona. Este
incremento de los niveles de testosterona pudo tracto etanlico de las flores de
Laccopetalum giganteum (pacra-pacra).

10
3.3 FORMULACIN DEL PROBLEMA:
El Per es depositario de una extraordinaria y variada flora cuyas aplicaciones
teraputicas y nutritivas en la medicina tradicional cobran importancia hoy en da
con la ideologa ecolgica en la cual se trata de rescatar todo lo til que la sabia
naturaleza nos brinda. (13)

11
 Los componentes de una planta se subdividen en dos grandes grupos: Los
Metabolitos Primarios y los Metabolitos Secundarios o Productos Naturales. Los
primeros conformados por carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos,
estn universalmente distribuidos y participan en la actividad celular de todo ser
viviente; mientras que los ltimos comprenden principios activos, compuestos
qumicos de estructura compleja y de distribucin ms restringida, cuyo
conocimiento estructural permite disear reacciones para producir derivados
semisintticos con utilidad bioqumica y teraputica. Es entonces de gran
importancia, aislarlos y localizarlos en los ensayos biolgicos adecuados. (14).
Solo se puede conocer el valor nutritivo de una planta o producto, y por ende
recomendar o no su consumo, sino se sabe su composicin qumica.

Por lo descrito anteriormente sobre la planta Laccopetalum Giganteum, es

necesario plantear la siguiente pregunta:
Cules son los efectos de las propiedades fitoqumicas de las flores de
Laccopetalum Giganteum (Pacra-Pacra), procedente de la zona de Conchucos
Ancash, en la fertilidad del ser humano?

3.4 IMPORTANCIA Y JUSTIFICACIN DEL ESTUDIO

Nuestra regin Ancash presenta un alto porcentaje de los trabajos etnobotnicos del
Pas, en los pisos de vegetacin entre 3.000 y 3.500 m, siendo los estudios en el
Callejn de Huaylas y Conchucos los que abarcan mayor rango. (18)
Y siendo Laccopetalum Giganteum Pacra Pacra es una especie endmica y
en peligro de extincin, pero con grandes propiedades con fines reproductivos, que
se encuentra en nuestra regin y a nuestro acceso; el presente estudio pretender
determinar las caractersticas fitoqumicas para responder a los efectos que se le
atribuyen desde el punto de vista de la bioqumica, y con ello tambin aprovechar
en un futuro sus componentes para la elaboracin y/o produccin de nuevos
productos alimentarios.

3.5 DEFINICIN DE TRMINOS BSICOS:

A. LACCOPETALUM GIGANTEUM: Planta perenne erguida, 1 m de alto, hojas
crasas y glaucas de las Jalcas (3.900 m 4.500 m). Es un gnero con una

12
 especie de planta de flores perteneciente a la familia Ranunculaceae, endmico
de la flora peruana. (15)
B. PACRA PACRA: nombre vulgar que se asigna a la planta Laccopetalum
Giganteum en la zona andina (jalca) del Per.
C. FLOR: Es el conjunto de antfilos perinticos ms o menos vistoso; tienen la
funcin de contener y proteger los rganos de reproduccin de la planta. Una
flor completa consta de pednculo, cliz, corola, androceo y gineceo. (16)
D. ESTUDIO FITOQUMICO: Tiene como objetivo determinar los metabolitos
secundarios presentes en la especie vegetal a estudiar, aplicando una serie de
tcnicas de extraccin, de separacin y purificacin y de determinacin
estructural. (17)
3.6 OBJETIVOS
2.4.1 OBJETIVO GENERAL:
Determinar la influencia de las propiedades fitoqumicas de las flores de
Laccopetalum Giganteum Pacra Pacra, procedente de la zona de
Conchucos Ancash, en el ser humano.
2.4.2 OBJETIVOS ESPECFICOS:
Determinar las caractersticas macroscpicas de las flores de
Laccopetalum Giganteum Pacra Pacra procedente de la zona
de Conchucos Ancash.
Determinar las caractersticas microscpicas de las flores de
Laccopetalum Giganteum Pacra Pacra procedente de la zona
de Conchucos Ancash.
Determinar las caractersticas fisicoqumicas de las flores de
Laccopetalum Giganteum Pacra Pacra procedente de la zona
de Conchucos Ancash.
Elaborar un extracto a base las flores de la planta Laccopetalum
Giganteum Pacra Pacra procedente de la zona de Conchucos
Ancash.
3.7 HIPTESIS
a. HIPTESIS POSITIVA:

13
 El extracto etanlico de las Flores de Laccopetalum
giganteum (pacra-pacra) aumenta la fertilidad en Seres vivos, por su alto
contenido en cido flico.

b. HIPTESIS NEGATIVA:
El extracto etanlico de las Flores de Laccopetalum giganteum
(pacra-pacra) no aumenta la fertilidad en Seres vivos, por su alto contenido
en cido flico.

IV. METODOLOGA DE ESTUDIO

A. MTODO DE INVESTIGACIN
Investigacin descriptiva.

B. ESTRATEGIA DE ESTUDIO
Se emplear el estudio comparativo entre unidades de muestreo de Laccopetalum
Giganteum Pacra Pacra tanto en su estado seco como fresco.

C. UNIVERSO O POBLACIN
Flores de Laccopetalum Giganteum Pacra Pacra comercializados en el
Callejn de Conchucos.

D. DISEO Y CARACTERSTICAS DE LA MUESTRA

Diseo : Se emplear el diseo descriptivo simple.
Caractersticas de la muestra: Se emplear Flores de Laccopetalum Giganteum
Pacra Pacra tanto en su estado seco como fresco.

E. DESCRIPCIN Y ACONDICIONAMIENTO DE LAS UNIDADES

EXPERIMENTALES
Las unidades experimentales son las Flores de Laccopetalum Giganteum Pacra
Pacra del callejn de Conchucos, las cuales sern previamente seleccionadas y
tratadas antes de su uso en los anlisis bioqumicos propuestos con las medidas de
bioseguridad adecuadas para su manipulacin.

14
F. TCNICAS DE RECOLECCIN, PROCESAMIENTO Y ANLISIS DE
LOS DATOS
Se realizar un muestreo simple, con una sola muestra, debido a la escasez de este
producto y a su situacin de peligro crtico.
Recoleccin: Se recoger una muestra de 10 Kg. de las Flores de Laccopetalum
Giganteum Pacra Pacra del callejn de Conchucos en su estado fresco y seco,
en depsitos de almacenamiento previamente preparados y adecuados.
Procesamiento: Se realizarn los registros de las caractersticas fitoqumicas
encontradas en las flores de Laccopetalum Giganteum Pacra Pacra tanto
macroscpicas, microscpicas, fisicoqumica y fitoqumicas.
Anlisis de Datos: Los datos tanto de muestreos parciales como finales se
procesarn matemticamente y estadsticamente, mediante el diseo descriptivo
clsico, mostrndose en tablas comparativas.

G. TCNICAS DE PROCESAMIENTO Y ANLISIS DE DATOS

A. DETERMINACIN DE LAS CARACTERSTICAS MACROSCPICAS:

El estudio macro-morfolgico se realizar a simple vista, determinando las
caractersticas macroscpicas como: Forma, textura, superficie, color, olor,
dimensiones y condicin de las flores de Laccopetalum Giganteum Pacra
Pacra. (19)

B. DETERMINACIN DE LAS CARACTERSTICAS MICROSCPICAS:

Se realizar mediante el mtodo de la observacin al microscopio de los tejidos
de la flor fresca para determinar su estructura y elementos celulares que
permitirn la identificacin de la planta.
Para lo cual se realizarn cortes histolgicos superficiales y transversales, de la
manera ms fina posible con un bistur, sobre lminas portaobjetos. Luego para
la clarificacin y reblandecimiento de la muestra se proceder a colocar
safranina al 1% o azul de metileno al 1%. Una vez coloreada la muestra, se
fijar la muestra a la laminilla para ser observada al microscopio binocular de
menor a mayor aumento. (19)
Ensayos Histoqumicos:
a) Reconocimiento de materias albuminoideas:

15
 o Reaccin Xantoproteica: Se tratar un corte histolgico con HNO3 y
aplicando calor para observar el color amarillo caracterstico, luego se
aplicar una gota de solucin de NaOH, para observar el color
caracterstico que indique la presencia de protenas.
o Reaccin de Biuret: Someteremos los cortes histolgicos durante 10
en solucin acuosa de sulfato de cobre al 1%, lavaremos y agregaremos
solucin de KCH al 10% para observar clulas de color violeta que
indicar la presencia de protenas.
o Reaccin de Milln: se agregar este reactivo a los cortes histolgicos,
y despus de calentar suavemente se observar la coloracin rojo
caracterstica, en el caso de ser positivo. (20)
b) Reconocimiento de Alcaloides: Se observarn en los cortes histolgicos al
ser tratados con los reactivos de Dragendorff, Mayer y Bouchardat, si son
positivos evidenciarn presencia de alcaloides.
c) Reconocimiento de Resinas y muslagos: Se agregarn solucin
alcohlica de violeta de anilino y de fuccina en partes iguales sobre los
cortes histolgicos para observar cambios de color, que indiquen la
presencia de resinas y muslagos.
d) Reconocimiento de grasas: Se agregar reactivo de Sudan III a los cortes
histolgicos, para que luego se observe si la coloracin cambia a ms o
menos rojo, lo que indicar presencia de grasas.
e) Reconocimiento de Almidn: Se agregar una gota de Lugol diluida a un
corte histolgico, en el caso de teirse de azul, comprobar la presencia de
almidn. (20)

C. DETERMINACIN DE LAS CARACTERSTICAS FISICOQUMICAS:

Determinacin de las materias Extraas:
Para ello se emplear 100 g de muestra los cuales se esparcirn sobre el
papel y se separarn manualmente las materias extraas con una lupa. El
material separado se pesar y se determinar su porcentaje en relacin a la
muestra de ensayo aplicando la siguiente frmula:

= 100 (%)
M
Donde:

16
 Me = Porcentaje materia extraa
M = masa inicial de la muestra de ensayo (g)
m = Masa de materia extraa (g)
100 = Factor matemtico para los clculos
Luego de la separacin de sustancias extraas, se proceder a lavar las
flores con agua potable a chorro y despus con agua destilada. (21)
Secado a temperatura a estufa:
Para este tipo se secado se tomar 100 gramos de las flores, previamente
determinando la cantidad de materia extraa, luego de ser lavadas y
colocadas dentro de bolsas de papel kraft y se llevan a la estufa a 40C. Se
medir el tiempo de secado y se cuantificar la perdida de agua. Esto se
realizar por 3 veces hasta valores constantes. (20)
Pulverizacin y Tamizaje:
Se pulverizar lo ptalos de las flores de Laccopetalum Giganteum Pacra
Pacra, con la ayuda de un molino mecnico y luego se tamizar con la
ayuda de un set de tamices hasta obtener partculas homogneas de tamao
5mm. (21)

D. DETERMINACIN DE LAS CARACTERSTICAS FITOQUMICAS:

Las caractersticas fitoqumicas de determinarn empleando el extracto
etanlico de la flor de Laccopetalum Giganteum Pacra Pacra.
Extracto etanlico: es un extracto con olor caracterstico, obtenido a partir de
materia prima desecada de origen vegetal, por maceracin o percolacin en
contacto con etanol, seguida de la eliminacin de dicho solvente por un
procedimiento fsico. Para el presente estudio se obtendr este extracto por
percolacin con el fin de preservar los compuestos termolbiles que pudiera
contener la muestra. Consiste en colocar el material fragmentado en un embudo
o recipiente cnico y hacer pasar un disolvente adecuado a travs del mismo.
(22)

Las tcnicas de procesamiento bioqumico que se utilizarn son las siguientes:

Ensayo de Catequinas: Tomaremos una gota de extracto etanlico con la
ayuda de una pipeta calibrada y se aplicar sobre papel filtro. Luego sobre

17
 la mancha se aplicar una solucin de carbonato de calcio. La aparicin de
una mancha verde carmelita a la luz UV, indicar un ensayo positivo. (21)
Ensayo de Resinas: Se aadir 2 ml de extracto etanlico a 10 ml de agua
destilada. La aparicin de un precipitado indicar positivo. (23)
Ensayo de Fehing: permite conocer la presencia de azcares reductores;
para ello en una alcuota se evaporar el extracto etanlico en bao mara y
al residuo se agregar 2 ml de agua, luego 2 ml del reactivo y se calentar
a bao mara durante 5 minutos. El resultado ser positivo si aparece un
precipitado rojo. (24)
Ensayo de Baljet: Permite reconocer en un extracto la presencia de
compuestos con agrupamiento lactnico, en particular coumarinas, aunque
otros compuestos lactnicos pueden positivo al ensayo. Para ello en una
alcuota del extracto etanlico se adicionar 1 ml de reactivo,
considerndose positivo la aparicin de una coloracin o precipitado rojo.
Ensayo de Liebermann Burchard: Permite conocer en un extracto
etanlico la presencia de triterpenos y/o esteroides; para lo cual en una
alcuota se evaporar el extracto etanlico en bao mara y el residuo se
disuelve con 1 ml de cloroformo. Luego se agrega de anhdrido actico y
se mezcla bien. Por la pared del tubo de ensayo de agrega III gotas de
cido sulfrico concentrado sin agitar. el ensayo es positivo cuando:
o Rosado azul : muy rpido
o Verde intenso: visible aunque rpido.
o Verde oscuro negro: final de la reaccin.
Ensayo de Espuma: permite conocer la presencia de saponinas, tanto del
tipo esteroidal como triterpnica. Para ello en una alcuota con extracto
etanlico, se diluir con cinco veces su volumen en agua y se agitar la
mezcla fuertemente durante 10 minutos. Se considera positivo cuando
aparece espuma en la superficie de la mezcla de ms de 2mm y persiste
por ms de 2 minutos.
Ensayo del Cloruro Frrico: Permite reconocer la presencia de
compuestos fenlicos y/o tanino en un extracto vegetal. En una alcuota
de extracto etanlico se agregar III gotas de solucin tricloruro frrico al
5% en solucin salina fisiolgica. El ensayo es positivo cuando:
o Coloracin rojo-vino: compuestos fenlicos en general.

18
 o Coloracin verde intensa: taninos del tipo pirocateclicos.
o Coloracin azul: taninos pirogalotnicos.
Ensayo de ninhidrina: permite conocer en los extractos vegetales, la
presencia de aminocidos libres o de aminas en general. Para ello, en una
alcuota de extracto etanlico se agrega 2 ml de solucin al 2% de
ninhidrina, luego la mezcla se calienta aprox. 10 minutos en bao mara.
El ensayo es positivo cuando se desarrolla un color azul violceo.
Ensayo de Barntrger: permite reconocer la presencia de quinonas. Para
ello en una alcuota con extracto etanlico se agregar 1 ml de hidrxido
de sodio. Se agita mezclando las fases y se deja en reposo hasta su ulterior
separacin. Se considera positivo cuando la fase acuosa alcalina superior
se colorea: Coloracin rosada = (++); Coloracin roja = (+++).
Ensayo de Shinoda: permite conocer la presencia de flavonoides. Para
ello, en una alcuota con extracto etanlico se diluye con 1 ml de cido
clorhdrico concentrado y un pedacito de cinta de magnesio metlico.
Despus de la reaccin se espera 5 minutos y se aade alcohol amlico, se
mezclan las fases y se deja reposar hasta que se separen. El ensayo es
positivo cuando el alcohol amlico se colorea de amarillo, naranja,
carmelita o rojo intenso en todos los casos.
Ensayo de Kedde: Permite reconocer la presencia de glucsidos
cardiotnicos. Para lograrlo, en una alcuota de extracto etanlico se
mezcla con 1 ml del reactivo y se deja reposar durante 10 minutos. El
ensayo es positivo cuando desarrolla una coloracin violcea persistente
durante 1 a 2 h.
Ensayo de antocianidinas: Permite reconocer flavonoides de estructura de
secuencia C6-C3-C6. Para ello se calienta 2ml del extracto etanlico con 1
ml de HCl durante 10 minutos y se deja enfriar. Luego se aade 1ml de
agua y 2 ml de alcohol amlico. Se agita y deja separar las dos fases. La
aparicin de color rojo a marrn en la fase amilica indica positivo.
Ensayo de Dragendorff: Permite reconocer en el extracto etanlico la
presencia de alcaloides. Para ello, en una alcuota con el extracto etanlico
se aade I gota de cido clorhdrico concentrado, cuya mezcla se calienta
suavemente y se deja enfriar. Luego con esta solucin, se aade III gotas

19
 del reactivo de Dragendorff. Se considera positivo de la siguiente manera:
Opalescencia (+), Turbidez definida (++) y Precipitado (+++).
Ensayo de Mayer: En una alcuota con el extracto etanlico se aade I
gota de cido clorhdrico concentrado, cuya mezcla se calienta
suavemente y se deja enfriar. Se aade luego una pizca de cloruro de sodio
en polvo, se agita y filtra. Se aade III gotas de la solucin reactiva de
Mayer y se comprueba positivo: Opalescencia (+), Turbidez definida (++)
y Precipitado coposo (+++).
Ensayo de Wagner: En una alcuota con el extracto etanlico se aade I
gota de cido clorhdrico concentrado, cuya mezcla se calienta
suavemente y se deja enfriar. Se aaden III gotas del reactivo de Wagner
y los resultados se clasifican: Opalescencia (+), Turbidez definida (++) y
Precipitado (+++).
Ensayo de Hager: En una alcuota con el extracto etanlico se aade I
gota de cido clorhdrico concentrado, cuya mezcla se calienta
suavemente y se deja enfriar. Se aaden III gotas del reactivo de Hager y
los resultados tambin se clasifican: Opalescencia (+), Turbidez definida
(++) y Precipitado (+++). (25)

20
V. PRESUPUESTO
5.1 RECURSOS
A. Asignacin Econmica a Investigadores:
La realizacin del presente estudio estar a cargo del docente asesor y los
estudiantes de 3er ciclo de Ingeniera Agroindustrial con el 100% de
participacin.
B. Bienes y Servicios:

MONTO (S/.)
DESCRIPCIN
Unitario Parcial Total
BIENES S/. 3,600.00
Materiales de Ambientacin S/. 500.00
Materiales de Oficina S/. 160.00
12 marcadores indeleble S/. 36.00
03 plumones marcadores S/. 18.00
01 millar de papel bond S/. 30.00
01 docena de lapiceros S/. 15.00
06 cuadernos de apuntes S/. 24.00
02 cintas maskyntape S/. 6.00
06 Sobres manila S/. 3.00
01 docena de papel kraft S/. 10.00
06 resaltadores S/. 18.00
Materiales de Laboratorio S/. 2,240.00
02 Baldes PVC de 40 litros S/. 50.00
10 Kg de Flor de Laccopetalum
S/. 200.00
Giganteum Pacra Pacra
Solventes S/. 300.00
Set de reactivos S/. 1,500.00
04 Cajas de Guantes de
S/. 120.00
examinacin
06 Lentes de proteccin S/. 60.00
03 docenas de Bistu S/. 10.00
Materiales de impresin S/. 150.00
Material Fotogrfico S/. 100.00
Material de Cmputo S/. 50.00
Insumos para la preparacin S/. 400.00
SERVICIOS S/. 5,450.00
Viticos y asignaciones S/. 4,500.00
Pago de refrigerios para salida de
S/. 500.00
campo
Impresin y digitacin S/. 300.00
Revelado de fotografas S/. 150.00

21
 C. Costos del Proyecto:

MONTO (S/.)
DESCRIPCIN
Total
BIENES S/. 3,600.00
Materiales de Ambientacin S/. 500.00
Materiales de Oficina S/. 160.00
Materiales de Laboratorio S/. 2,240.00
Materiales de impresin S/. 150.00
Material Fotogrfico S/. 100.00
Material de Cmputo S/. 50.00
Insumos S/. 400.00
SERVICIOS S/. 5,450.00
Viticos y asignaciones S/. 5,500.00
Impresin y digitacin S/. 450.00
TOTAL S/. 9,050.00

D. Financiamiento:
Universidad Nacional del Santa

5.2 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

MESES
ACTIVIDADES
Julio Agosto Setiembre Octubre Noviembre Diciembre

1. Revisin Bibliogrfica
X X

2. Preparacin, tcnicas,
X X
instrumentos.

3. Recoleccin de muestra.
X X

4. Procesamiento de la
X X
muestra.

5. Anlisis e interpretacin
X X
de resultados

6. Elaboracin de Informe
X
final

22
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1) SOUKUP, J. (1970). Vocabulario de los Nombre Vulgares de la Flora Peruana.
Edit. Salesiana S.A. Lima Per.
2) TAMURA, M. (1993). Ranunculaceae. Pp. 563-583. En K. Kubitzki, J.G. Rohwer
& V. Bittrich (Eds). Flowering Plants. Dicotyledons: Magnoliid, Hamamelid and
Caryophyllid Famies. The Families and Genera of Vascular Plants. Springer-
Verlag. Berlin.
3) LENEBACH, C.; A. Cano; C. Monsalve; P. McLenachan; E. Hrandl, and
P. Lockhart. (2007). Phylogenetic relationships of the monotopyc Pruvian genus
Laccopetalum (Ranunculaceae). Plant Syst. Evol 264 (1-2) : 109 -116. En lnea
disponible en: http://link.springer.com/article/10.1007/s00606-006-0488-8#/page-1
4) CANO, A; M. La Torre; S. Castillo; H. Aponte; M. Morales; W. Mendoza; B.
Len; J. Roque, I. Salinas; C. Monsalve & H. Beltrn. (2006). Las plantas
comunes del Callejn de Conchucos (Ancash, Per). Gua de Campo. Museo de
Historia Natural (UNMSM). Serie de Divulgacin 13:1-303. Lima - Per.
5) BRAKO, L. & J. Zarucci. (1993). Catlogo de las Angiospermas y
Gimnospermas del Per. Monogr. Syst. Bot Missouri Bot. Garden. Vol. 45.
6) LEN, B. (2006). Ranunculceas endmicas del Per. Libro rojo de las plantas
endmicas del Per. Rev. Per Biol. Per. Disponible en:
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/biologia/v13n2/pdf/a100.pdf
7) MACBRIDE, (F. 1937). Flora of Per. Bot. Ser. Field Museum of Natural Histoy.
Vol 13 Part 2(2): 660 -661. Disponible en:
http://www.sacha.org/macbr/intro_sp.htm
8) SAGSTGUI, A.; M. O. Dillon; I. Snchez Vega; S. Leiva & P. Lezama.
(1999). Diversidad Florstica del Norte del Per. Graficart. Tomo I. Pg. 194.
Disponible en: http://www.sacha.org/envir/peru/peru_sp.htm
9) WEBERBAUER, A. (1945). El mundo Vegetal de los Andes Peruanos. Estudio
Fitogrfico. Edit. Lumen. Ministerio de Agricultura. Lima Per.
10) FERNNDEZ, A. & E. RODRGUEZ. (2007). Etnobotnica del Per Pre
Hispano. Ediciones Herbarium Truxillense (HUT). Universidad Nacional de
Trujillo. Trujillo Per. Disponible en:
https://static1.squarespace.com/static/54b98e1ee4b0b6572f801af7/t/5579e0dfe4b00

23
 046e7a025df/1434050783296/ETNOBOTANICA+DEL+PERU+PRE-
HISPANO_Fern%C3%A1ndez+y+Rodriguez.pdf
11) R. RODRGUEZ; M. Wigend.; B. Len; E. Altivez; J. Pera & S. Arroyo.
(2007). Laccopetalum giganteum (Ranunculaceae) una especie endmica en
peligro del Norte del Per, que necesita plan de conservacin urgente. Universidad
Nacional de Trujillo. Part 14(1): 123-130. Trujillo Per. Disponible en:
https://www.academia.edu/2922480/Laccopetalum_giganteum_Ranunculaceae_una
_especie_end%C3%A9mica_En_Peligro_del_norte_del_Per%C3%BA.
Sitio web: http://ericrodriguezr.blogspot.pe/2008/02/laccopetalum-giganteum-
wedd-ulbr.html
12) J. ARROYO; A. Barreda; E. Rez; B. Jurado; G. Moral; J. Matnez & C.
Palomino. (2007). El Extracto etanlico de las flores de Laccopetalum giganteum
(pacra pacra) aumenta la fertilidad en ratas. Faculta de Medicina y F. Bioqumica.
UMSM. Pg. 238 234. Lima Per. Disponible en:
http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/anales/article/view/1209
13) VILLAR M. Vargas O. (2001). Manual de fitoterapia. Per. OPS/OMS. Pg. 7-9,
25,27. Lima Per.
14) LOCK O. (1998) Investigacin Fitoqumica. 1 Edic. Pontificia Universidad
Catlica del Per. Pg. 1-3. Lima Per.
15) S. VEGA. y O. Dillon (2006). Jalcas. Pg. 77:90. Universidad Nacional de
Cajamarca. Cajamarca Per. Pdf.
16) R. FERREIRA y E. Cerrate. (2002). BOTANICA. Capitulo III. Museo de
Historia Natural de la UNMS. Lima Per. Disponible en Pdf.
17) LOCK de Ugaz O. (2000). Anlisis Fitoqumico y Metabolitos Secundarios.
Capitulo IV. Pontificia Universidad Catlica del Per. Lima Per. Pdf.
18) LA TORRE C. y Albn C. (2006). Etnobotnica del Per. Botnica Econmica
de los Andes Centrales. Pg. 239-243. UMSM. Lima Per. Pdf.
19) RONCAL R. y Saldaa C. (2014). Caractersticas farmacognsticas de las hojas y
tallos de la Paperomia dolabriformis Kunth congona de zorroprocedentes del
Cerro Campana del distrito de Huanchaco La Libertad. UNT. Trujillo Per.
20) SILVA E. (1995). Estudio Fitoqumico y Bromatolgico del fruto Solanum Topiro
(cocona). UNT. Trujillo Per.

24
21) RAMOS C. y Solrzano R. (2016). Caractersticas farmacognsticas de las hojas
de Alternanthera lanceolata Shinz lancetilla proveniente del distrito de Urpay
provincia de Snchez Carrin regin la Libertad. UNT. Trujillo Per
22) GONZALEZ V. (2004). Obtencin de aceites y extractos etanlicos de Plantas del
Amazonas. Universidad de Colombia. Colombia. Pdf.
23) RAMOS C. y Solrzano R. (2016). Caractersticas farmacognsticas de las hojas
de Alternanthera lanceolata Shinz lancetilla proveniente del distrito de Urpay
provincia de Snchez Carrin regin la Libertad. UNT. Trujillo Per.
24) IBAEZ D. (1964). Contribucin al estudio Fitoqumico de las Semillas de
Hylocereus sp Extraccin del aceite y su estudio. UNT. Trujillo Per.
25) MENDOZA V. y Minaya P. (2014). Estudio Fitoqumico e Histoqumico de la
raz, tallo y hoja de Krameria lappaceae ratania procedente de la provincia de
Huaraz Ancash. 2013. UNT. Trujillo Per.

25
VII. ANEXOS
6.1. Imagen de la planta Laccopetalum giganteum vista por planos:

26
 6.2.Tabla de Tamizaje Fitoqumico del extracto etanlico de las flores de
Laccopetalum giganteum (pacra pacra):

EXTRACTO
METABOLITOS ENSAYO
ETANLICO
Catequinas Ensayo de Catequinas:
Resinas Ensayo de Resinas:
Azcares reductores Ensayo de Fehling:
Cumarinas Ensayo de Baljet:
Ensayo de Liebermann
Triterpenos y esteroides
Burchard:
Saponinas Ensayo de Espuma:
Compuestos fenlicos y Ensayo del Cloruro
taninos frrico:
Aminocidos Ensayo de Ninhidrina:
Quinonas Ensayo de Borntrager:
Flavonoides Ensayo de Shinoda:
Glucsidos Cardiotnicos Ensayo de Kedde:
Antocianidinas Ensayo de antocianidinas:
Ensayo de Dragendorff:
Ensayo de Mayer:
Alcaloides
Ensayo de Wagner:
Ensayo de Hager

Intensidad: Identificacin:
+ Baja + Positivo
++ Mediana - Negativo
+++ Alta

27