Capitulo 4 Centrifugacién 4.1 Introduccién La separacién de substancias de diferente densidad mediante movimien- to giratorio se conoce como centrifugacién. La centrifugacién es una de las principales operaciones utilizada para la separacién de células de caldos biolégicos (Wiesmann y Bider, 1982), especialmente cuando los caldos no son fécilmente filtrables, o la adicién de ayudas-filtro no es recomendable por razones de costos de produccién excesiva de desechos contaminantes. La centrifugacién también es empleada en la remocién de desechos celulares de caldos de células que han sido sujetas a rompimiento, sepa- racién de precipitados proteicos (Bell ef al, 1983) y para recuperacin de productos insolubles como los cuerpos de inclusién. Estos dltimos debido a su tamafio (de 0.3 a 1 pm) y alta densidad (1.3-1.5 g/cm?) pueden ser separados de los restos celulares por centrifugacién en dos © tres pasos, utilizando agua de lavado y detergentes para facilitar la separacién. Cuando se utiliza la centrifugacién la diferencia entre la densidad de los sdlidos (células o partfoulas) y el caldo, se incrementa por la accién de las fuerzas centrifugas que se generan por las altas velocidades de rotacién de los equipos que se emplean (Bjurstrom, 1985). En la seccién 4.2 de este capitulo se presentan los fundamentos de la centrifugacién que se derivan de la Ley de Stokes la cual describe ili112 CAPITULO 4. CENTRIFUGACION los aspectos basicos det movimiento de un sélido en un liquide cuando existe un gradiente de densidad. Existen diferentes tipos de centrifugas que se utilizan tanto a nivel laboratorio como a escala industrial y su aplicacion depende de varios factores andlogos a los mencionados para la filtracién en la Tabla 3.1. En la seccién 4.3 se hace una descripcin general de estos equipos. La seccién 4.4 se centra en los aspectos basicos del disetio de centrifugas. 4.2 Fundamentos de la Centrifugacién El estudio de las separaciones sdlido-liquido por centrifugacién esta basado en Ja teorfa de la sedimentacién. Esta permite desarrollar algu- nas predicciones del comportamiento de los equipos centrifugos, no solo para poder especificarlos y dimensionarlos, sino que también ofrece un apoyo adecuado para su correcta operacion. La teorfa de la sedimentacidu esta basada en la Ley de Stokes que establece los aspectos basicos del movimiento de un sélide en un Kquide cuando existe un gradiente de densidad. Este movimiento puede ser causado por la fuerza gravitacional o por una fuerza centrifuga. En base a lo anterior, esta soccién se centra en cuatro aspectos fundamentales: @ La Ley de Stokes, « La sedimentacién por accién de la gravedad. © La sedimentacién por accién de una fuerza centrifuga. © El factor G 4.2.1 Ley de Stokes La velocidad de sedimentacién de una particula esférica en an medio continuo para Reynolds menores a 1 (regién de resistencia viscosa), est descrita por la Ley de Stokes (Figura 4.1). Se puede suponer que para las suspensioues diluidas caracteristicas de los caldos biolégicos esta ley es aplicable. La Ley de Stokes establece que cuando se aplica una fuerza a una particula en un medio continuo ésta se acelera (F = ma), hasta que4.2. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACION 3 10 J 7 2 c 4 2 10} Trt £2 fe i £10 ; ce mt foe = 10 2% a do2 1 if i yi 2 i 7 roa os ae SS eae Taha Warton iO? CG? FGF 2) PFO? Fe PGF FGe syre NinerodeFentis Ras Ou Figura 4.1: Factor de friccién para esferas. Fuente: Bird et al, 1964. Reproducida con el permiso de Reverté $.A, Copyright ©1964, Todos los derechos reservados.114 CAPITULO 4. CENTRIFUGAGION aleanza, una velocidad a la cual la resistencia a su movimiento iguala a la fuerza aplicada. En una sedimentacién libre la fuerza que actiia sobre la particula es la de la gravedad, y en una sedimentacin centrifuga la fuerza es la del campo centrifugo. Las fuerzas que se oponen al movimiento de las particulas pueden agruparse en la fuerza de empuje descrita por el principio de Arqufmi- des, y la fuerza de arrastre (resistencia de forma y de friecién) descrita por la Ley de Stokes. De acuerdo a lo anterior, el balance de fucrzas para una particula en equilibrio en un medio continuo se expresa de la siguiente manera: Fuerza de aceleracién = Fuerza de flotacién + Fuerza de arrastre Para el caso de particulas esféricas el balance anterior puede expre- sarse como: rds & — ee 4 Brrdypivg (4.1) donde: d,: Diémetro de la particula.{L]. py: Densidad de la partfenla.[M/L"). a: Aceleracién. [L/t]. pu: Densidad del fluido. [M/L°]. pe: Viscosidad del fluido. [M/L — 1). Uso? Velocidad terminal de la esfera. [L/t]. Es importante hacer notar que si la particula parte del reposo en el proceso de sedimentacién, conforme la velocidad de la particula se incrementa la fuerza de arrastre se incrementa. Al aleanzar el equilibrio de fuerzas la particula se mueve a la velocidad constante va, (velocidad terminal).4.2, PUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACION 115 La ecuacién (4.1) puede ser modificada para presentarse como una expresién de la Ley de Stokes, de la siguiente manera: nda Br dopdao = —F— (Pp ~ pt) (4.2) La velocidad de sedimentacién de una particula de acuerdo a la ecuacién (4.2) es la siguiente: _ Apa ee = TS (4.3) donde: Ap = py — pi Se puede expresar la velocidad de sedimentacién de la particula en dos casos limites de interés: - Sedimentacién por accién de la gravedad. - Sedimentacién por accién de una fuerza centrifuga. 4.2.2 Sedimentacién por Accién de la Gravedad En varios procesos de separacién sdlido-liquido la fuerza impulsora de la sedimentacién es sdlo la de la gravedad. La velocidad de sedimentacién por gravedad de una sustancia, proporciona informacidén basica nece- saria para el disefio de cualquiera de los procesos de sedimentacién. De acuerdo a la Ley de Stokes si la aceleracién de la sedimentacién es la de la gravedad, la velocidad de sedimentacién que se obtiene por medio de la ecuacién (4.3) es: . GApg ae 4.4 18ye (4) donde: a=: Aceleracién de la gravedad. [L/0]. vg: Velocidad terminal en un campo gravitacional. {L/t}.116 CAPITULO 4. CENTRIFUGACION 4.2.3 Sedimentacién Centrifuga En las separaciones centrifugas sdlido-liquido la velocidad de sedimen- tacién es mayor que la sedimentacidn libre o gravitacional, debido a que los equipos al girar producen una mayor aceleracién de las particulas (Brunner y Herafort, 1988). Bajo estas condiciones la velocidad de sedimentacién derivada de la ecuacién (4.3) es: BA pute be = (4.5) : Aceleracién centrifuga. [L/12]. w: Velocidad de rotacién en radianes. [#1]. r: Distancia radial del eje de rotacién a la particula. [L]. Vatias aplicaciones importantes pueden obtenerse de los principios inherentes a las ecuaciones (4.4) y (4.5), a continnacién se presentan algunas de ellas: Fl diémetro aparente de las bactetias es del orden de diez veces menor que el de las levaduras, por Io que su velocidad de sedimentacién es cien veces menor, ya que ésta es proporcional al cuadrado del diémetro de la partfcula, Las células contienen mas del 70 % de agua por lo que su densidad es muy semejante a la de los caldos, por lo tanto el parémetro Ap puede ser muy bajo. Algunos caldos biolégicos son muy viscosos propiedad que dificulta la sedimentacién. La velocidad de sedimentacién puede ser incrementada en un equipo centrifugo aumentando la velocidad de rotacién o la distancia de sedimentacién (didmetro de la centrifuga),4.2. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACION 7 Para obtener una expresién para flujo no laminar la ecuacién (4.2) puede ser expresada como: 6 rdlaAp 6 rélaAp [ss nee | donde: A: Area caracteristica. [L7]. K: Energia por unidad de volumen. [M/Lt?]. fi: Factor de friccién. [Adimensional.] En la Figura 4.1 también se presentan correlaciones de factores de friccién para casos diferentes a la Ley de Stokes. Ejemplo 4.1.- Separacién centrifuga diferencial. El principio de separacién por centrifugacion diferencial se basa en las diferentes velocidades de sedimentacién de las particulas.En el caso de homogeneizados biolégicos las diferentes particulas celulares suelen ser separadas por centrifugacién diferencial. Estimar el tiempo de sedimentacidn relativo de una particula celular de diémetro 5 um (micleo) con respecto al de una de didmetro de 1 ym (mitocondria), suponiendo que ambas tienen la misma densidad y estan sujetas al mismo campo centrifugo' en una centrifuga de tubos (Figura 4.2) los cuales giran perpendicularmente al eje Solucién: De acuerdo a la ecuacién (4.5) y a la geometria del sistema, la velocidad de sedimentacién esta dada por: dr BApw'r w= “dt 1818 CAP{TULO 4. CENTRIFUGACION Fuerza Centrifuga Figura 4.2: Centrifugacién diferencia. Fuen: Reproducidacon el permiso de Me Graw Hill Inc, Copyright @19: Bailey y Ollis, 1986 ‘Todos los derechos reservados. La expresién anterior puede ser utilizada para el célculo del tiempo de sedimentacién integrando entre los limites: t=0 r=R, t r=h, una vez realizada la integracin se obtiene la expresin siguiente: e= —1BH i, he * EXpw "RP, Aplicando Ja expresién anterior a cada particula, (al nticleo N y a la mitocondfa M) se pueden obtener las siguientes proporciones: ty Gar tng (@)w 1 pm? ly = N (tar) ( i) ww = i 254.2. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACION 119 donde ty es el tiempo que tarda la particula N en avanzar de Ry a Fy. Andlogamente, tay es el tiempo que tarda la particula M en avanzar de Ry a Rp. Ejemplo 4.2.- Tiempo de sedimentacién. La centrifuga del ejemplo anterior va a ser utilizada para separar levaduras con didmetro de Stokes de 10 ym y 1.05 g/cm* de densidad, Las propiedades del caldo se pueden suponer iguales a las del agua, La distancia del eje de giro a la superficie del liquido en los tubos es Ry = 3 cm y la longitud del tubo es de 10 cm . La centrifuga gira a 400 rpm . Estimar el tiempo para lograr una sedimentacién completa de las levaduras de la suspension. Solucién: Se debe estimar el tiempo que tardan en sedimentar las levaduras que estén mas apartadas del fondo del tubo, es decir en la superficie del liquido del tubo. Aplicando la expresién desarrollada para el tiempo de sedimentacién en el ejemplo anterior se tiene: 18 Ry = =! nn 1 Bape R, t 18 x 0.01 2 x In 2 © (10. 10-4)? em? x (1.05 = 1) By x (saxaey? g2 t = WL s 4.2.4 Factor G En la caracterizacién y escalamiento de centrifugas frecuentemente se emplea el factor G, que es una medida relativa de la velocidad de sedi- mentacién de una particula en un campo centrifugo con respecto a su velocidad de sedimentacién en el campo gravitacional. De acuerdo a lo anterior mediante las ecuaciones (4.4) y (4.5) se obticne:120 CAPITULO 4. CENTRIFUGACION 2 G=wivr (4.6) Uy g G puede ser referida a un radio caracteristico el cual generalmente es el radio exterior del campo centrifuge. Esto permite desarrollar expresiones prdeticas para estimar la G como la siguiente: G=5.6 x 10-7 N*D donde N esté en rpm, el didmetro del tazén de la centrifuga (o punto de interés) D en mm y G es adimensional, 4.3 Equipo de Centrifugacién La filtracién y la sedimentacién centrifuga coustituyen los prineipios basicos de los principales equipos de centrifugacién que se emplean para separar liguidos, o I{quidos de sélidos (Svarousky, 1979). La principal clasificacién de los equipos de centrifugacién se basa en el disefio de su tazén o tina, y en la forma como se descargan de los sélidos sedimentados (Figura 4.3). En esta seccién se presentan los principales cquipos de gacién existentes de acuerdo a su clasificacién, en dos grupos: centrifu- ¢ Equipos de Centrifugacién-Filtracién, # Equipos de Sedimentacién Centifuga: Centrifugas tubulares, de cémara miltiple, de tazén sélido, decautadoras y de discos. 4.3.1 Equipos de Filtracién-Centrifuga Los equipos de filtracién centrifuga constan de una tina o canasta per- forada la cual esta reoubierta con un medio filtrante (una tela o mem- brana). La suspensién de sélidos es alimentada a la tina que al girar a altas velocidades provoca el depésito de sdlidos sobre el medio filtrante y la salida de liquido claro. Estos equipos funcionan como un filtro, sélo que la fuerza impulsora del filtrado es la centrifuga y no una diferencia de presién (Figura 4.4).4.3. EQUIPO DE CENTRIFUGACION 121 Tubular Camara milliple Sedimentadoras Tazén sélide Decantadoras. Discos Cenvifugas Fillrantes Figura 4.3: Clasificacién de centrifugas. 4.3.2 Equipos de Sedimentacién Centrifuga En los equipos de sedimentacién centrifuga también Hamados de tazén sélido © canasta. no-perforada (para distinguirlos de los de canasta per- forada), la suspensién se alimenia a un tazén que se hace girar provo- cando que los sélidos se colecten sobre una pared y el sobrenante se recupere por rebosamiento o por accién de un colector de liquido. En relacién a la forma de descargar los s6lidos las centrifugas se- dimentadoras pueden operar en forma intermitente, semintermitente 0 continua. Las centrifugas sedimentadoras se pueden utilizar en operaciones de separacién sdlido-liquido tanto para remocién de biomasa (clarificacién) como para recuperar sdlidos durante la cosecha celular. En las operaciones de clarificacién el caldo a procesar gencralmente contiene una baja cantidad de sélidos, del orden del 1 %, y el objetivo es producir un Iiquido claro de tal manera que en las operaciones de separacién posteriores la interferencia por sdlidos sea minima. En Jas operaciones de recuperacién de sdlidos las corrientes de salida pueden122 CAPITULO 4. CENTRIFUGACION Alimentacién 4 = S rato Tora Figura da: Contrifuga de canasta perforada. Facute: Jacobs y Penney, 1987. Reproducia con of perm ste fol Wiley and Sons, Cappeight QUIT, “Paes tow denuelos4.3. EQUIPO DE CENTRIFUGACION 123 Figura 4.5: Centrifuga tubular. contener hasta un 40 % de sélidos en volumen, A continuacién se efectia una breve descripcién de los principales tipos de centrifugas sedimentadoras utilizadas en las bioseparaciones, Centrifuga Tubular Las Centrifugas Tubulares (CT) consisten bésicamente de un tubo ver- tical esbelto que gira a altas velocidades por la accién de un motor eléctrico, o una turbina de aire o vapor (Figura 4.5). Este tipo de centrifuga es uno de los més eficientes y sencillos, capaz de separar partfculas hasta de 0.1 pm. Las CT pueden contar con un sistema de enfriamiento por lo que son empleadas en el manejo de caldos con enzimas o protefnas. Como se observa en la Figura 4.5, durante la operacién de la CT la suspensién es alimentada por la parte inferior y los sélidos sedimentan en la pared del tubo. El Iiquido claro se colecta por rebosamiento en la parte superior, Conforme se forma la torta el drea de flujo se reduce y el tiempo de residencia del Kiquido disminuye. Esto se traduce en un aumento gradual del contenido de sdlidos en el sobrenadante que puede ser determinado por mediciones de turhides. La torta tiene que124 CAPiTULO 4. CENTRIFUGACION ser descargada manualmente, por lo que su operacién es intermitente. Un modeto tipico de laboratorio consta de un tubo de 4.5 cm de didmetro por 25 cin de longitud, cl cual puede girar a una velocidad de hasta 50,000 rpm, desarrollando campos hasta de 62,000 G, con una capacidad de hasta 100 1/h. Los modelos industriales t{picos cuentan con un tubo de 11.5 cm de didmetro por 76 cm de longitud, el cual puede girar hasta con 15,000 rpm desarrollando campos de hasta de 12,000 G, con capacidad entre 500 y 3,500 I/h. La capacidad de sélidos es de 2 a 4 Kg por lote. Este tipo de centrifugas presentan algunos modelos completamente sellados para minimizar problemas de formacién de espuma y aerosoles, Jo cual puede ocasionar fugas del sistema y debe ser evitado cuando se trabaja con sustancias téxicas 0 céhulas recombinantes. Centrifugas de Camara Multiple Las centrifugas de cdmara miltiple (Figura 4.6) fueron ercadas para incrementar la capacidad de manejo de solidus de las ceutrifugas tubu- lares. Estas centrifugas consisten de una serie de tazones concéntricos con deflectores que provocan un flujo en serie de Ja suspensién. Su ope- racién permite la clasificacion de las particulas conforme pasan de una cimara a otra. Bl liquido claro se obtiene por rebosamiento en la tiltima camara. Este arreglo genera un mayor tiempo de residencia del liquido, en relacién al de la centrifuga tubular, asf como inayor capacidad de manejo de sdlidos, El didmetro de los equipus de camara miliiple varia de 335 a 615 mm, con velocidades de rotacién entre 5,000 ¥ 8100 rpm, produciendo campos entre 5,000 y 9,000 (, respectivamente, Los tipos mas comunes constan de 2a 6 camaras La eapacidad de manejo de s6lidos varia entre 2.5 y 60 litres dependiendo del material y el ntimero de cdmaras. La descarga de sélidos y mantenimicnto de estos equipos es mas diffeil que el de las centrifugas tabulares, ya que la centrifuga tiene que ser desmantelada para sacar los sdlidos. Este tipo de equipo no permite el lavado de la torta,4.3. EQUIPO DE CENTRIFUGACION 125 Figura 4.6: Centrifuga de camara miiltiple. Fuente: Axelsson, 1985. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright ©1985. ‘Todos los derechos reser- vados,126 CAPITULO 4, CENTRIFUGACION Alimentacion —=| Rasador Torta | Sobrenadante Figura 4.7: Centrifuga de tazén sdlido. Centrifugas de Tazén Sélido Las centrifugas de tazén sélido (Figura 4.7) 0 centrifugas intermitentes son muy similares a las centrifugas tubulares pero menos esbeltas; su relacién de longitud a didmetro es de alrededor de 0.6 mientras que el de las tubulares es de 4-8 Las centrifugas de taz6n sdlido normalmente son operadas con su eje en posicién vertical. La alimentacion de la suspensidn se efectiia en el fondo de el tazén, el cual al girar permite que los sdlidos se depositen sobre la superficie de la pared del tazén y cl sobrenadante se obtenga por rebosamiento eu Ja parte superior en forma continua. En algunos modelos el ciclo se controla por medio de un detector del espesor de la forta. El liquido residual sobre fa torta puede ser removide utilizando un tubo rasador movil La forma de descarga de los sélides depende de su naturaleza, Los sélidos muy fluidos pueden descargarse sin parar la ceutrifuga y los sdlidos muy compactos pueden descargarse utilizando una cuchilla in- terior de la centrifuga que permite raspar la pared del tazén para des-4.3. EQUIPO DE CENTRIFUGACION 127 CY Alimentacion Figura 4.8: Centrifugas de tazén triple. Fuente: Svarousky, 1979. Reproducidacon el permiso de Mc Graw Hill Inc. Copyright ©1979. ‘Todos los derechos reservados. prender la torta. Ambos tipos de descarga se realizan a través de la parte inferior de la centrifuga. Un tipo especial de centrifuga intermi- tentes es la de tazon triple (Figura 4.8). Las centrifugas intermitentes en su versin de laboratorio presentan tazones de 15 cm de didmetro y las de planta piloto entre 23-53 em, con capacidades volumétricas de 2.7 a 27 litros. Las industriales tienen tazones entre 95-125 cm con capacidades volumétricas de 100 a 300 litros. Centrifugas Decantadoras 0 de Tornillo Las centrifugas decantadoras (Figura 4.9)’se caracterizan por un tazén horizontal con una seccién cilindrica y una seccién cénica, con una relacién de longitud a didmetro entre 1.5-3.5. El tazén contiene un tornillo transportador que gira en la misma direccién, pero a una ve- locidad ligeramente superior o inferior que el tazén (entre 5 - 100 rpm de diferencia). Las velocidades de rotacién son de 1,600 a 6,000 rpm por lo que los campos centrifugos son menores que los de los otros equipos. En las centrifugas decantadoras la suspension es introducida a través de perforaciones por un tubo axial concéntrico a la flecha del tornillo, al128 CAPITULO 4. CENTRIFUGACION Figura 4.9: Centrifuga decantadora. Fuente: Axelsson, 1985. Reproducida con el permise de Elsevier Science Inc. Copyright ©1985. Todos los derechos reser- vados. final de la seccin cénica o de compresién de sdlidos. Los sélidos que se depositan en la pared son transportados y descaryados continuamonte por el extremo cénico de la centrifuga, donde escurren antes de salir. El liquido claro se obtiene por rebosamiento en el exiremo opuesto a través de orificios de descarga que fijan el nivel del liquido en la centrifuga. Existen diversos disefios de ccutrifugas decantadoras. Los diémetros de los tazones varian de 15 @ 140 cm para los modelos pilote ¢ indus- triales. La descarga de sdlidos varia de 30 Kg/h hasta 60 Ton/h, con alimentaciones entre 3.8 y 1890 I/min, respectivamente. La lougitud de la seccién cilindrica y Ja seccién céniea pueden variar de acucrdo a las aplicaciones. Entre mas larga sea la seccién cilindrica mayor es la clarificacion aleanzada. Por otro lado, el atimento de longitud en la seccién cénica permite la obtencién de tortas con menor contenido de agua. Entre mayor sea el nivel de liquide dentro de la centrifuga se ob- cin, pero un menor escurrimiento de la torta cién cénica. La disminucién de la velocidad de retacién del Jad de desagite de la torta tendré una mejor clarifi en la se lornillo transportador atmenta la capaci4.3. EQUIPO DE CENTRIFUGACION 129 Figura 4.10: Centrifugas de discos. a) Retencién de sélidos. b) Tazén abierto, Fuente: Jacobs y Penney, 1987. Reproducida con el permise de John Wiley and Sons. Copyright ©1987, Todos los derechos reservados pero disminuye la capacidad de manejo de sdlidos. La centrifuga de tornillo es una de las més utilizadas en biosepa- raciones principalmente para mancjo de grandes cantidades de sdlidos como es el caso del tratamiento de aguas residuales. Centrifuga de Discos , La centrifuga de discos consta de un eje vertical sobre el cual se montan un conjunto de discos en forma de conos truncados, uno sobre otro. E} rotor de la centrifuga provoca el giro tanto de los discos como del tazén de Ja centrifuga (Figura 4.10). Las centrifugas de discos son las mas utilizadas en BSL. Los discos constan de bordos internos que permiten mantener pequefias separa- ciones entre ellos, del orden de 0.5 a 2.0 mm. El dngulo que forman los conos con Ia vertical varia entre 35 y 50° dependiendo de la apli-130 CAP/TULO 4. CENTRIFUGACION Alimentacion Sobrenadante Tigura 4.10: Continuacién ... cacién particular. Entre la pila de discos y el tazdn existe un espacio que permite la acumulacién de los sélidos, Durante la operacién de la centrifuga de discos la suspensién es alimentada continuamente en el fondo del tazin a través de la parte central de la flecha, y fluye hacia a en la parte central superior del equipo. Debido a la fuerza centrifuga los sélidos se depositan en la cara interna de los discos, resbalando hacia la cémara colectora debido al dnigulo de los discos. Existen diferent descarga de sdlidos, las principales ba entre las placas hacia la salida. s centrifugas de discos en relaciéu a ta forma de s siguiente son | Las de operacién intermitente con respecto a la descarga de sélidos, también Hamadas de retencidn de sdlidos. Las de tazén abierto de descarga intermitente de sdlidos. Las de valvula tipo boquilla de descarga intermilente de sdlidos. dlidos. Las de boquilla para la descarga continna de s4.3, EQUIPO DE CENTRIFUGACION 131 En las centrifugas de retencién de sdlidos (Figura 4.10a) éstos se acumulan hasta que la cémara se Ilena. La centrifuga tiene que ser detenida y descargada manualmente o con auxilio de un forro que se coloca previamente sobre la pared del tazén. Debido a la forma de su descarga de sélidos, este tipo de centrifuga es recomendable sélo para suspensiones diluidas conteniendo alrededor de 1% en volumen de sélidos. El diémetro de los tazones de las centrifugas de retencién de sélidos varia de 24 a 44 cr y las fuerzas centrifugas de 5,000 a 8,000 G. La capacidad de sdlidos varia de 5-20 litros y los flujos de 0.4 a 1,500 I/min. Las centrifugas de disco de tazdn abierto (Figura 4.10b) constan de dos piezas cénicas unidas horizontalmente por sus caras mas grandes, La descarga de sdlidos se realiza por medio de un sistema hidréulico que permite abrir y cerrar los orificios de descarga entre las piezas. La duracién y frecuencia de la apertura de la descarga depende de la cantidad y fluidez de los sdlidos. Los valores t{picos son de 0.13 a 0.3 segundos de apertura por mimuto de operacin, Esta frecuencia es controlada con relojes acoplados a medidores de lodo o medidores de turbidez en el liquido de salida. Este tipo de centrifugas permite manejar caldos con contenido de sdlidos hasta del 10% . Las fuerzas centrifugas varian de 5,000 a 7,000 G y los gastos de 3.8 @ 1,500 I/min. En las centrifugas con valvulas tipo boquilla la descarga de sélidos se controla con este tipo de valvulas situadas en la periferia del tazén. Sus ciclos varian de 0.07 a 0.10 segundos de apertura por minuto de operacién. Tal precisién no puede ser lograda por las centrifugas de tazén abierto. La ventaja de este tipo de centrifugas, debido a que generan campos de hasta 15,000 G, es que son especialmente titiles para caldos biolgicos donde el diferencial de densidad suele ser bajo y la viscosidad alta. Las suspensiones que pueden ser manejadas, aleanzan hasta un 10% en volumen de sdlidos. En las centrifugas de boquillas con descarga continu en la periferia del tazén. El mimero y el tamaio de las boquillas se ajusta de tal manera que exista un flujo continuo de sélidos, sin que éstos se acumulen. El espaciamiento de las boquillas debe prevenir zonas muertas de depositos de sdlidos. La principal ventaja de este tipo de unidades es que pueden manejar suspensiones mas concentradas. Las centrifugas de discos en general poseen una gran capacidad de as sc situan132 CAPITULO 4. CENTRIFUGACION sedimentacién debido principalmente a su gran érea, a sus cortas dis- tancias de sedimentacién y a los altos campos centrifugos que generan. Por otro lado, requieren de medidas de higiene y seguridad especiales como: Manejo mecdnico seguro. Proteccién contra ruido y dafios corporales. Proteccién contra incendios, explosiones o diseminacién de sustancias téxicas o contaminantes. 4.4 Diseiio de Equipo de Centrifugacién El disefio de los equipos de centrifugacién esta basado en la teoria de sedimentacidn, lo cual puede visualizarse mas facilmente en el caso de las centrifugas tubulares debido a la sencillez de su geometria. Este andlisis puede ser extendido al caso de las centrifugas de discos, Por otro lado, los equipos que operan por filtracién centrifuga presentan variantes de diseio respecto a los dos anteriores. En base a lo anterior esta seccién se centra en cuatro aspectos : © Dis iio de Centrifugas Tubulares. # Diseito de Centrifugas de Discos. © Escalamiento de Centrifugas. ® Diseiio de Equipo de Filtracién Centrifuga. 4.4.1 Diseno de Centrifugas Tubulares de los equipos de centrifugaciéu se debe cousiderar los De acuerdo con la tworia de sedimentacién desarrollada en la seccién 4.2, las propiedades del caldo (lamatio de particula, diferencia de iscosidad del Ifquido), densidad entre el sélido y el liquido, y la4.4. DISENO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACION 133 Torta * Interfase Trayectoria de oui se L. i t Alimentacion Figura 4.11: Esquema de una centrifuga tubular. la velocidad de rotacién y el radio del giro de la centrifuga, deter- minan la velocidad de sedimentacién que se puede lograr en un equipo de sedimentacién centrifugo. La velocidad de sedimentacién cojuntamente con la distancia de sedi- mentacién, determinan el tiempo de sedimentacién. El gasto determina el tiempo de residencia de las partfculas en un equipo dado. EI gasto manejable en una sedimentacidn centrifuga depende de la geometria especifica del equipo, de su velocidad de gito y de las propiedades del caldo. Para producir un liquido libre de sdlidos, el tiempo de sedimentacién en el equipo debe ser igual o menor al tiempo de residencia de las particulas impuesto por el flujo 0 gasto volumétrico. Esto constituye una condicidn de disefio para este tipo de centrifugas. La Figura 4.11 muestra una centrifuga tubular que al girar forma una capa anular de liquido sobre la pared del tazn. La posicin de las134 CAPITULO 4, CENTRIFUGACION particulas en esta capa varfa tanto por el flujo convectivo axial como por la sedimentacién, radial. Se puede desarrollar un andlisis sencillo e ilustrativo de la centrifuga tubular mediante las siguientes suposiciones: - La alimentacién es una solucién diluida. - Las particulas se distribuyen uniformemente en la capa anular. - Las particulas sedimentan de acuerdo a la Ley de Stokes. - La distancia entre la superficie del Ifquido y la pared de la centrifuga es constante, - No existe retroflujo (flujo tapén). En el andlisis primero se desarrolla una expresién para el tiempo de residencia en la centrifuga, posteriormente una expresién para el tiempo de sedimentacién y finalmente se combinan ambas expresiones para relacionar el gasto volumétrico manejable con las propiedades del caldo y la geomerttia de la centrifuga. Tiempo de Residencia La velocidad del fluido en el sentido axial esta dada por: =G-4 at) donde: Q: Gasto volumétrico. [L9/¢]. A: Area de flujo. [12]. vz: Velocidad de la partieula.cn el sentido axial. (L/t]. El drea de flujo es igual a la seccién transversal de la capa anular de fluido y esta dada por: As aR. xR} = 1(R?— RB) (4.8) donde:4.4. DISENO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACION 135 Ay: Distancia radial del eje de giro a la superficie del liquido. [L]. Rp: Distancia del eje de giro a la pared del tazén. [1]. Con los limites de integracién apropiados se puede obtener una ecuacién para el tiempo de residencia de las particulas dentro de la centifuga empleando las ecuaciones (4.7) y (4.8), esto es: fe = am f at (4.9) L: Longitud de la centrifuga. [1]. donde: 1,: Tiempo de residencia de la particula. [t]. La integracion de la ecuacién anterior permite obtener la expresién para el tiempo de residencia de la particula siguiente: (R2 — RL Q t= (4.10) Tiempo de Sedimentacién y Gasto Volumétrico Para desarrollar la expresién del tiempo de sedimentacién de una par- ticula, que a su vez permita desarrollar una expresidn para el gasto manejable en una centrifuga tubular, se consideran dos casos de interés: - Tiempo para el 100 % de sedimentacién. - Tiempo para el 50 % sedimentacidn. Tiempo para el 100% de Sedimentacién y Gasto Volumé- trico .- El tiempo de sedimentacidn t, de una particula localizada en la superficie de la capa anular del fluid en Ry (que es la més alejada de la pared, o més dificil de sedimentar), puede ser obtenido a partir de la Ley de Stokes considerando el movimiento de la particula en el sentido radial,136 CAPITULO 4. CENTRIFUGACION dr — Ap wr y= a (4.11) dt 18y en este caso inicialmente la particula se localiza en fy y en el mo- mento t, de alcanzar la pared en R,, de tal manera que: Rody — BApu® pie Se 4.12) rtm ft (4.12) y la expresion para el tiempo de sedimentacién de la particula en este caso es: Su Re +" Bip Be (4.13) Es més conveniente expresar la ecuacién (4.13) en términos de v, dada por la ecuacién (4.4), para obtener: 91, Re vw?” Ry (4.14) La condicién de diseiio donde el tiempo de sedimentacién debe ser menor 0 igual al ticmpo de residencia, puede alcanzarse mediante la igualacion de las ecuaciones (4.10) y (4.14). Este resultado permite obtener una expresién para el gasto manejable eu una centrifuga tubular para producir un liquido claro o lograr un 100% de sedimentacién. Esta expresidn cs la siguiente: adrado de la icas de la centrifuga contenidas en el paréntes derecha. Tiempo para el 50 % de Sedimentacién y Gasto Volumé- trico.- Es una practica comin en las bioseparaciones sélido-liquido, el que los cquipos se especifiquen para la remocién del 50 % de las particulas de una suspensién de un tamaiio dado 0 tamaiio de corte.4.4. DISENO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACION 137 Otra interpretacién del tamaiio de corte, es la de especificar el tamaiio de particula para el cual todas las particulas mayores sedimentan en mayor proporcién y todas las menores de ese tamatio sedimentan en menor proporcién. Si se considera que en la capa anular del liquide de una centrifuga tubular las particulas del sélido se distribuyen uniformemente, éstas se encontrardn en cantidades iguales en subcapas anulares de caldo de igual Area transversal. El radio Ryo que divide la capa anular en dos subcapas de igual volurnen puede obtenerse de la igualdad siguiente: 7 (Re — Bo) L = (Ry ~ RL (4.16) de tal manera que: 2 2 1/2 Rso = (22) (4.17) La ecuacién (4.11) debe ser integrada para este caso con limites nuevos para expresarla en la forma siguiente: Bo dp foe” fy fo 4.18 so 18; (4.18) El resultado de la integracién anterior expresado en términos de vy es: (4.19) donde #, es el tiempo para lograr un 50 % de sedimentacién. Combinando las ecuaciones (4.17) y (4.19) se obtiene la expresién para el tiempo de sedimentacidn en términos de pardmetros medibles. tn — (4.20) yw (2) La igualacién de las ecuaciones (4.10) y (4.20) permite obtener una expresin para el flujo para este caso:138 CAPITULO 4. CENTRIFUGACION OL Re Re meh Ro Mh (4.21) Ro g in 1a Ge) donde Q! es el flujo para sedimentar el 50 % de las particulas de djémetro dsp en una centrifuga tubular. La ecuacidn (4.21) puede ser expresada de otra forma considerando la siguiente igualdad: a para obtener: ae (4.22) g In Tene Definicién de Sigma.- E] concepto sigma ha sido muy utilizado en el campo de la sedimentacién centrifuga desde que éste fue desarro- Hado (Ambler, 1957). Sigma es un area caracterfstica de cada tipo de centrifuga y se utiliza para cfectuar comparaciones y escalamiento de equipo. En el caso de fa centrifuga tubular el valor de sigma puede ser definido a partir de la ecuacién (4.22) de la siguiente manera: Q! = 2n,8 (4.23) donde: (4.24) La ecuacidn (4.24) es la expresin b: es una constante que conticne sélo param ‘a del concepto sigma, el cual Lros relacionados a la geome- tria de la centrifuga y su velocidad angular (es independiente del tipo de caldo). Por otro lado», se relaciona slo con las propiedades del caldo y es independiente del tipo de contrifuga.4.4. DISENO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACION 139 En la subseccién (4.4.2) se presenta para las centrifugas de discos un desarrollo andlogo al efectuado para la centrifuga tubular, obteniéndose también una expresién para sigma. La aplicacién de este concepto a problemas de escalamiento se revisa en la siguiente seccién. Ejemplo 4.3.- Separacién Centrifuga. Al separar células de E. coli de un caldo diluido en una centrifuga tubular, se obtiene un Nquido claro bajo las siguientes condiciones: Propiedades del caldo | Carac. Centrifuga pw [0.001 N—s/m? | N | 20,000 rpm Ap [50 Kg]m® R; [0.022 m Ry | 0.011 m d, [10m LC [o.2m Se desea utilizar la misma centrifuga para separar restos celulares de diémetro promedio 0.5 x 10-8 m. Se estima que la viscosidad del caldo se incrementa a 0.004 N—s/m? al salir del equipo de rompimiento celular. Se pide : a) Calcular el flujo manejado en la separacién de células. b) Calcular Ja relacién de flujos para claridad completa de sobre- nadante con respecto al flujo para 50 % de corte, en la separacién de células. ¢) Calcular el flujo para separacién completa de los restos celulares, Solucién: a) Para el célculo del flujo manejado en la separacion de células se supone que todas las particulas de la suspensidn sedimentan, entonces se utilizaré la ecuacién (4.15), para lo cual es necesario caleular primero v5. Sustituyendo datos en la ecuacién (4.4) se tiene: (10-8rn)2(50) 18 x 0.001 + Ug140 CAP{TULO 4. CENTRIFUGACION vy = 27x 198 3 v, = Tx 19-6 5 Mediante ecuacién (4.15): 2.7 x 108 SE x mx (2282.00)? 5-2 20 cr = 980 227-0 UP? a Q= 3.97 om i @ = Wasi 5 b) Para el caleulo del flujo para un corte del 50 % se utiliza la ecuacién (4.22), sustituyendo valores se tiene: 2x 27 x LOWE 2 3 we x (PEABO)? 52 9 ore yo ra e@ 080 = (2.2)? = (LA)? em? x In 2@3F TH 3 = un 3 Q Ul i 42.19 — h por lo tanto:4.4. DISENO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACION 141 También puede ser demostrado utilizando las ecuaciones (4.15) y (4.22) que: " Ro Q _ 2In R 7 2R2 Q lege En la expresién anterior es importante hacer notar que cuando la pelicula de fluido al interior de la centrifuga es muy delgada, R, tiende a R, entonces: Q=2Q c) Para facilitar los célculos se puede calcular el cociente de los flujos de cada tipo de caldo empleando la ecuacién (4.15) y obtener: te Qn _ ite Qe & he Donde el subindice R se refiere a los restos celulares y el C a las células enteras de tal manera que: _ Qedkuc Qu = Bap 3.97 x (0.5 x 10-4)? em? x 0.01 —2— Qa = “(1x 10"4)? em? x 0.00 3.97 cm* Qn = ES Qr = 0.89 L h La reduccién del tamaio de particula y el aumento de viscosidad reduce dramaticamente la capacidad de la centrifuga. 4.4.2 Centrifuga de Discos En esta seccién se desarrolla un andlisis para la centrifuga de discos andlogo al efectuado para la centrifuga tubular. La geometria del sis- tema es diferente (Figura 4.12), entonces se puede intuir que la ex- presién para el calculo del flujo en este caso también es diferente.142 CAPITULO 4. CENTRIFUGACION Figura 4.12: Esquema. de una centrifuga de discos. En el anélisis se supone que el flujo global Q se divide equitativa- mente entre los espacios formados por todos los discos, de tal manera que el flujo en cada espacio es Qn = Q/n, donde n es el mimero de espacios formados entre los discos . El flujo se presenta tanto en la direccién angular como en direccidu paralela a los discos. En el sentido angular se supone que el liquide gira a la misma velocidad que los discos. Primero se desarrolla una expresion para el tiempo de residencia en la centrifuga, posteriormente una expresion para el tiempo de sedi- mentacién, y finalmente se combinan ambas expresioucs para relacionar el gasto volumétrico manejable con las propiedades del caldo y Ia goo metria de la centrifuga Tiempo de Residencia en una Centrifuga de Discos En una centrifuga de discos la particula que se desea sedimentar se mueve por conveccién y por sedime tacién. El movimiento convective es paralelo a los discos y el movimiento por sedimentacién es en sentido horizontal. Si los cjes de referencia se fijan come aparece en la Figura 4.12, el4.4, DISENO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACION 143 Figura 4.13: Perfil de velocidades en una centrifuga de discos. movimiento producido por sedimentacién tiene componentes tanto en x como en y, de tal manera que la velocidad neta de la partfcula en la direccién «, es la resultante de la velocidad convectiva del fluido (aqui se supone que la particula se mueve a la misma velocidad que el fluido) y la componente en x de la velocidad de sedimentacién que se opone a este movimiento. Una condicién necesaria para alcanzar una separacién efectiva, es que la velocidad convectiva de la particula sea mucho mayor que el componente de la velocidad de sedimentacién que actiia cn sentido o- puesto. En el siguiente desarrollo se parte de este supuesto cuando se analiza la velocidad de la particula en el sentido 2. Expresién para v,.- Para obtener wna expresién del tiempo de residencia de una particula en una centrifuga de discos es necesario primero desarrollar una expresién para la velocidad de la particula en el sentido x, ve. En el desarrollo de la expresién para vy se supone un arreglo geo- métrico sencillo como se muestra en la Figura 4.13. La velocidad v, varia con la distancia # dado que el gasto es constan- te en toda la seccién de cada pelicula y dado que la seccién transversal de flujo disminuye conforme x aumenta (se supone que el liquide es incompresible). La velocidad v, también varia en el sentido y formando144 CAPITULO 4. CENTRIFUGACION un perfil de velocidades con v, = 0 en las superficies de los discos. Si se considera una seccién de pelicula de longitud L, donde la velocidad vz sdlo depende de y pero no de 2; cuando se desprecian los efectos inerciales, se considera que el sistema se encuentra en el estado estacionario y el flujo es laminar, la ecuacién de movimiento para este sistema puede ser escrita de la siguiente forma: dP @u, o phe de ay Esta expresién puede ser integrada dos veces entre los limites: (4.25) Para y = 5 sv, =0 Para y = > pts =0 y obtener la expresién: vp, = Seat [ - (2) (4.26) Bul @ donde a es el espesor de Ia pelicula y P la presién. La ecuacién (4.26) se pucde expresar en términos de Qy si se integra a lo largo del area de flujo con los limites apropiados. Considerando que la area de flujo puede ser aproximada por un rectangulo de ancho ay largo 2xr entonces: a= fe) awe any se Suh donde Q, es el flujo volumétrico entre dos discos de la centrifuga. La integracion de la ecuacién (4.27) conduce a Q nAPaer Geb naciones (4.26) y (4.28) se tiene que: (4.28) Combinando las (4.29)4.4, DISENO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACION M5 o bien en términos del flujo volumétrico total: ve = (=) - (2)] (4.30) La ecuacion (4.30) describe el perfil de la velocidad de Ja pelicula asf como su comportamiento en diferentes planos en funcidn de la velocidad promedio. De la ecuacidn (4.30) se puede obtener una expresién para un dife- rencial de tiempo de residencia de la siguiente forma: da: O p-e (4.31) Calculo del Tiempo de Sedimentacién y el Gasto Volumétrico Para desarrollar la expresién del tiempo de sedimentacién de una par- ticu la, que a su vez permita desarrollar una expresién para el gasto manejable en una centrifuga de discos, al igual que en en las centrifugas tubulares se consideran dos casos de interés: - Tiempo para el 100 % de sedimentacién - Tiempo para el 50 % sedimentacién. Tiempo para el 100 % de Sedimentacién y Gasto Volumé- trico.- En este caso la particula més dificil de capturar se localiza en la parte inferior derecha de la pelicula en (w@ = 0, y = 2), y la parte més lejana en la que puede sedimentar es en la parte superior izquierda de la pelicula en [x =(R. — Ri)/send , y = 4]. La velocidad de sedimentacién en el sentido radial esta dada por la Ley de Stokes: dr wr are (4.32) por lo tanto:146 CAPiTULO 4. CENTRIFUGACION dr se (4.33) di, = 2p vyw?r La condicién de diseiio que establece que el tiempo de sedimentacién debe ser menor o igual que el tiempo de residencia puede lograrse igua- lando las ecuaciones (4.31) y (4.33) para obtener la expresion: gdr dx: mate ET a de acuerdo a a geometria del sistema se puede efectuar el siguiente cambio de variables: dy = cosOdr r= R,—xsend con estas nuevas variables la ecuacién (4.34) se transforma en: 3 2y\? Qanv,w? s fl— (=) | dy = |] (8, — asend)? x cc 4.35 | (Ca) ly Gg | Mia send) x cosdda (4.35) la ecuacién (4.35) puede scr integrada utitizando el cambio de va- riable u = (R, ~ rsend) y los limites siguicntes: Para x =0, y= Ro Ry a Para a= =f Oe Een V3 obteniendose: Irnw? Q = 05 | (RE — RY) cold (4.36) y La ecuacién anterior también puede ser expresada en funcién del pardmetro © de la siguiente manera: