UNIVERSIDAD ESTATAL PENINSULA DE SANTA ELENA

FACULTAD DE CIENCIAS DEL MAR

CARRERA DE BIOLOGIA MARINA

Practica #2

Tema: clulas procariotas (tincin de Gram)

Introduccin:

En 1884 el fsico dans Christian Gram desarrollo una tincin especial que es probablemente las
ms importante que se usa en bacteriologa es una tincin diferencia, ya que divide a las
bacterias en dos grupos fisiolgicos, facilitando la identificacin de los grupos bacterianos.
Durante el procedimiento el empleo de tintura de violeta y yodo forman un agregado complejo,
algunos gneros de bacterias se decoloran con facilidad al lavarlos con alcohol (95%) y se
denominan Gram negativos, aquellos que retienen el complejo se conocen como Gram
positivos. Debido a que las bacterias Gram negativas son incoloras despus de lavarlas con
alcohol, se deben volver a teir con un color diferente antes de observar el frotis bajo el
microscopio (Volk, 1996).

Objetivo:

Identificar las clulas procariotas, mediante tincin de Gram, para el reconocimiento de los
tipos celulares bacterianos.

Materiales:

Mechero de alcohol, microscopio compuesto, lmina porta y cubreobjetos, violeta de genciana

o cristal violeta, fsforos, gotero, yodo, alcohol etlico al 95% safranina o caf Bismark, muestra
biolgica.

Procedimiento:

Las bacterias se pueden obtenerse mediante carios procedimientos, por ejemplo, de cultivos
bacterianos o directamente de la boca, agua, intestinos, etc. En todo caso, siempre hay que
procurar que las bacterias con las que se van a manipular no sean patgenas. Una vez escogida
la muestra, se procede de la siguiente manera:

Desengrase la placa portaobjetos utilizando algodn empapado en alcohol.

Toma de muestra: Con un gotero coloque una gota de agua en la placa, o si la muestra proceder
de la boca, use un palillo de dientes y tome la muestra bacteriana de las uniones de los dientes
con las encas.

Preparacin de frotis: El material obtenido de la boca, colquelo sobre una gota de agua y realice
un frotis delgado mediante movimientos circulares, extindalo y deje secar al ambiente.

Fijacin fsica: al calor esto se hace tomando el portaobjetos con las pinzas y pasndolo
lentamente a travs de la flama del mechero, aproximadamente 3 veces, no debe permitir que
el vidrio se caliente tanto que resulte doloroso al tacto.

Fijacin qumica: con alcohol, a la preparacin (frotis) coloque 2gotas de alcohol etlico al 96% y
deje actuar 1 minuto, deje secar al aire.

El proceso de tincin tiene 4 etapas:

1. El frotis se rocia con violeta de genciana o cristal violeta, deje actuar por 5 minutos.
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2. Despus de sesenta segundos se lavan la tintura de violeta y el frotis se sumerge en una

solucin de yodo.
3. Sesenta segundos ms tarde se lava el yodo y la laminilla se limpia con alcohol etlico
por 15 o 30 segundos.
4. La laminilla se vuelve a teir por otros treinta segundos con safranina.

Lave la preparacin dejando caer lentamente el agua por un extremo del portaobjetos, de tal
manera que el agua arrastre el exceso de colorante.

Seque la preparacin a temperatura ambiente y coloque la placa sobre la platina del

microscopio.

Se recomienda usar una mezcla de acetona y alcohol etlico de 50:50 para la etapa de
decoloracin, debido a que esta mezcla acta ms rpido que el alcohol al 95% por si solo.

Observe y dibuje.

Observaciones:

Conclusiones:

Fuentes de consulta:

Volk, W. 1996. Microbiologia bsica. 7ma edicin. Editorial harla. Mexico D.F.