Espectrometra

de Masas
Q. Georgina Duarte Lisci
Facultad de Qumica
UNAM
INTRODUCCIN
Cronologa de la EM
Investigador (es) Ao Contribucin

J.J. Thompson 1912 Primer espectrmetro de masas

Dempster 1918 Electro-ionizacin y enfoque magntico

Stephens 1946 Analizador de Tiempo de Vuelo (TOF)

Nier-Johnson 1952 Instrumentos de doble enfoque

Paul, Steinwedel, 1953 Analizador cuadrupolar

Raether, Reinhard y
von Zahn -58
1955 Diseo avanzado del analizador de tiempo
Wiley y McLaren de vuelo (TOF)
Gohlke y 1956 Cromatografa de Gases/Espectrometra de
McLafferty Masas
Beynon 1956 Espectrometra de Masas de alta resolucin

Munson y Field 1966 Ionizacin Qumica

INTRODUCCIN
Cronologa de la EM
Investigador (es) Ao Contribucin

Dole, Mack, Hines, M. Ionizacin por

Ferguson y Alice 1968 Electro-spray (ESI)

McLafferty Cromatografa de
1973 Lquidos/Espectrometra
de Masas
Barber, Bordoli, Sedgwick, Bombardeo de
Tyler, Surman y 1981 tomos rpidos
Vickerman (FAB)
Blakely y Vestal Ionizacin por
1983 Termo-spray

Yamashita, Fenn, Aleksandrov, Aplicacin de la

Gall, Krasnov, Nikolaev, 1984 ionizacin por Electro-
Pavlenko, Shkurov, Dokl,
spray (ESI) en
Baram y Garacher
macromolculas
J. J. Thompson, 1912
Joseph John
Thompson, 1912
Ventajas de la
Espectrometra de Masas
9Capacidad de Identificacin
Identificacin inequvoca de casi cualquier tipo de substancia, desde
tomos hasta molculas complejas de peso molecular elevado
9Anlisis cualitativo y cuantitativo
9Identificacin de una substancia en presencia de otras similares
9Alta sensibilidad
9Tcnica universal y especfica
9Informacin isotpica
9Informacin estructural, energas de enlaces, cintica,
fisicoqumica, etc.

9Tcnica rpida (anlisis en lnea en tiempos reales, control de

procesos enzimticos, metablicos, etc)
Por qu es importante la
Espectrometra de Masas?
Porque es una tcnica analtica poderosa
utilizada para:
Identificar compuestos qumicos
Cuantificar compuestos qumicos
Proveer informacin vlida en reas como la
qumica, fsica, astronoma, geologa,
biologa, criminalstica, etc.
Algunas aplicaciones especficas
de la Espectrometra de Masas:

Detectar e identificar el uso de frmacos de

abuso en atletas (antidoping)
Monitorear los gases de la respiracin en
pacientes durante ciruga
Determinar la composicin de materiales
provenientes del espacio exterior
Determinar adulteracin en la miel de abeja
Algunas aplicaciones especficas
de la Espectrometra de Masas:

Localizar depsitos petroleros (midiendo

precursores del petrleo en rocas)
Monitorear fermentaciones en lnea (industria
biotecnolgica)
Detectar contaminantes orgnicos en aire,
agua, suelo y alimentos
Determinar algunos tipos de envenenamiento
(criminalstica)
INTRODUCCIN
EM Diagrama General

Sistema Sistema
de entrada de Cmputo

Cmara
de Detector
Ionizacin Analizador

Sistema de Alto Vaco

Componentes principales de
un Espectrmetro de Masas
9 Sistema de bombeo
9 Sistema de entrada
9 Fuente de Iones (Cmara de Ionizacin)
9 ptica Inica
9 Analizador Msico
9 Detector
9 Lnea de transferencia (CG-EM)
Sistema de Bombeo
Tipos de Bombas de Vaco
Sistemas de Entrada

Muestras Puras
Entrada directa
Sonda de Introduccin Directa (DIP)
Sonda de Exposicin Directa (DEP)

Mezclas
Cromatografa de Gases
Cromatografa de Lquidos
Electrocromatografa
Electroforesis Capilar
Extraccin de Fludos Supercrticos
Entrada Directa
Sonda de Insercin Directa (DIP)
La muestra en disolucin se coloca en un tubo capilar de vidrio
Temperatura mxima: 300oC
Diferentes velocidades de Calentamiento
Posibilidad de calentamiento directo de la muestra (sin solubilizar)

Sonda de Esposicin Directa (DEP)

La muestra en disolucin se coloca en un filamento
Calentamiento balstico
Rampas de temperatura programables
Alcanza hasta 1000oC
Tipos de Ionizacin
9 Ionizacin en Fase Gaseosa:
9 Ionizacin y Desorcin:
9 Bombardeo de Partculas:
9 Ionizacin a Presin
Atmosfrica:
9 Desorcin Lasser
Electroionizacin (EI)
Ionizacin Qumica (CI)
Desorcin de Campo (FD)
Ionizacin de Campo (FI)
Bombardeo de Atomos Rpidos
(FAB)
Espectrometra de In Msico
Secundario (SIMS)
Electroespray (ESI)
Termospray
Ionizacin Qumica a Presin
Atmosfrica (APCI)
Ionizacin por desorcin lasser en
matriz asistida (MALDI)
CMARA DE IONIZACIN
Ionizacin Electrnica
Magneto

Filamento

Repeledor - +
+- -- +++++ + Hacia el Analizador
+ +
-
Target

Magneto
CMARA DE IONIZACIN
Ionizacin Electrnica
Las molculas de la muestra son ionizadas
por un haz de electrones (70 eV)
Los iones son expulsados de la cmara y
dirigidos al analizador
Se producen iones positivos y negativos:
M. + 2 e-
+
90% M + e -

10% M + e - M.
-
Espectro Electromagntico

70 eV
Ionizacin Electrnica

Excitacin electrnica (similar a la teora de UV) en

orden decreciente se ionizan preferentemente
los electrones:
n .. > > .
+
n R-O-R R-O-R
R-CH :: CH-R R-CH : . CH-R
+

R-CH 2 : CH 2-R R-CH 2 . CH 2 -R

+
Ionizacin Electrnica
70 eV de energa
Produce el Ion Molecular y una gran cantidad de iones
con diferentes estados de energa
Aquellos iones con gran cantidad de energa interna
(vibracional, rotacional y electrnica) liberan esta
energa por medio de la fragmentacin
Los iones con baja energa permanecen intactos (Ion
Molecular)
Es la tcnica de ionizacin ms comn
Es la tcnica de ionizacin de la que se obtiene ms
informacin
Todas las bibliotecas comerciales disponibles estn
basadas en los espectros obtenidos por esta ionizacin
Es la ionizacin que ms se utiliza con el sistema CG-EM
CMO SE GENERA UN
ESPECTRO DE MASAS POR IE?
Filamento

Analizador Detector

Cmara de Ionizacin

Espectro de Masas m/z

Ionizacin Electrnica
Metanol (CH3OH, P.M. 32)

12C 31
16O
29 32
1H

13C

15
30
17 33
Ionizacin Qumica
Es una tcnica de ionizacin significativamente ms
suave que IE.
Se utiliza cuando en el espectro por IE no aparece el ion
molecular, para confirmar el ion molecular o para
aumentar la intensidad de algunos iones fragmento a
masas altas.
Se utiliza un gas reactivo (metano, isobutano,
amonaco, etc.) que es ionizado por IE. Los iones
resultantes reaccionan con las molculas del analito
que se encuentran en la fuente, con transferencia de
carga (protn) las molculas neutras del analito se
transforman en iones.
Algunos iones moleculares son demasiado inestables
para permanecer intactos an utilizando esta tcnica.
Ionizacin Qumica
Reacciones

CH4 + e - CH4
+ . + 2 e-

.
+ +
.
CH4 + CH4 CH5 + CH3

CH5+ + M MH +
+ CH4
analito Protonacin
Ionizacin Qumica
Ejemplo
IE IQ

Malatin
(Pesticida)
P.M. 330
Ionizacin por FAB

La energa para desorcin es

suministrada por un haz de tomos de
Xenn Argn de alta energa (6-10
KeV)
Se utiliza para ionizar molculas polares
y/o lbiles (Ej.organometlicos)
Ionizacin por FAB
Ionizacin por FAB
Voltaje de aceleracin

Xe+ Xe+
Xe Xe Xe+ Xe+ Xe Xe Xe
Xe+ Xe+ Xe+ Xe

Ionizacin Intercambio de carga

Xe+ Xe
M M+ M M+H+
M+ M+
Xe+ M-H-
M M-
Xe
Procesos primarios Procesos secundarios
Ionizacin por transferencia de carga
ANALIZADORES
El objetivo del analizador de masas es resolver los
iones despus de que fueron formados en la fuente
de ionizacin.
La diferencia entre GC/MS y LC/MS son las tcnicas
de ionizacin utilizadas (no el analizador)
Analizadores ms utilizados:
Sector Magntico
Cuadrupolo
Trampa de Iones
Tiempo de Vuelo
Sector Magntico

Magneto

Cmaradedeionizacin
Cmara
Ionizacin

Detector
Sector Magntico
y Sector Elctrico
Sector magntico: El campo magntico ejerce una
fuerza perpendicular al movimiento del ion para
deflectar los iones de acuerdo a su momento.
Sector elctrico: El campo elctrico ejerce una fuerza
perpendicular al movimiento del ion para deflectar los
iones de acuerdo a su energa cintica.
Al salir los iones de la cmara de ionizacin tienen
diferente velocidad, para obtener una mejor
resolucin es necesario adicionar un sector elctrico
que colime o rena los iones de acuerdo a su energa
cintica.
Doble Sector

m/z=B2r2/2V
Sector Magntico
Doble sector
Geometra
Sector Electrosttico
Nier - Johnson

Geometra Inversa:
1. Sector Magntico
2. Sector Elctrico
Sector Magntico

Ventajas:
Excelente resolucin de masa
Excelente exactitud de masa
Excelente sensibilidad

Desventajas:
Precio: Sistemas de alto costo
Adquisicin espectral lenta
(tiempos de anlisis largos)
Cuadrupolo
Cuadrupolo
Un valor
de m/z
sale

-
+
Todos los
valores de m/z +
entran -

Separacin basada en la estabilidad del valor de m/z dentro

de los campos de RF y CD sobre las barras cuadrupolo
Cuadrupolo
 Cuadrupolo

Ventaja:
Precio: el sistema menos caro del mercado

Desventajas:
Los lmites de deteccin no son
tan buenos como en otros sistemas
Adquisicin espectral lenta
(tiempos de anlisis largos)
Rango de masas limitado
 Trampa de Iones

Parte superior del electrodo

Filamento

Paso de los electrones

Centro de la trampa

Salida de los iones

Parte inferior del electrodo

Detector
Trampa de Iones
 Trampa de Iones
Ventajas:
Capacidad para MS/MS
Precio: no tan bajo como los
cuadrupolares
Lmites de deteccin mejores que
los cuadrupolares
Desventajas:
Reacciones ion-molcula
Adquisicin espectral lenta
(tiempos de anlisis largos)
Rango de masas limitado
Tiempo de Vuelo (TOF)
Con Reflectrn
Reflectrn

Detector
El detector es colocado en el punto focal
para asegurar una ptima resolucin msica
Tiempo de Vuelo (TOF)
Ventajas:
Potencial para rangos de masas ms grandes
Buena resolucin y exactitud de masas
Excelente sensibilidad
La mas rpida adquisicin espectral (los tiempos ms
cortos de anlisis)
Desventaja:
Precio: tiende a ser ms caro que los
sistemas cuadrupolares y algunas
trampas de iones pero menos costoso
que los de sectores
 Sistema CG/EMTOF

En el sistema MS/TOF las abundancias de los iones permanecen

constantes a travs de todo el pico cromatogrfico. Esto es la clave
de los algoritmos automatizados que permiten descubrir
seales de compuestos que coeluyen.
 Algoritmo de Deteccin
Automtica de Picos

El software identifica automticamente las posiciones de los picos

en el cromatograma an aqullos que esten bajo la lnea base.
Enmascaramiento y Coelucin

Propylene Glycol
Anlisis Tradicional de Petrleo
(Nafta)
95
95Analitos
Analitos
11hora
hora15
15minutos
minutos

139
139Analitos
Analitos
16
16minutos
minutos
Anlisis Elemental
(Combustin-Reduccin)

La informacin
obtenida se reporta
como porcentajes de
elementos (C, H, N, S,
y O). Hay rompimiento
de todos los enlaces
Anlisis por
Espectrometra de Masas
En Espectrometra de
Masas la energa
impartida por el haz
de electrones a la
molcula rompe
algunos de los
enlaces. Porciones
grandes de la
estructura de la
molcula
permanecen intactas
permitiendo la
identificacin del
analito.
Resolucin
Clculo de Masa
3 diferentes formas de calcular el Peso Molecular:
Masa Promedio: Se utiliza el peso atmico (es el
promedio de todos los istopos) para cada
elemento. C=12.01115, H=1.00797, O=15.9994,
N=14.00674
Masa Monoisotpica: Se utiliza la masa exacta
del istopo ms abundante de cada elemento.
C=12.000000, H=1.007825, O=15.994915,
N=14.003074
Masa Nominal: Se utiliza la masa ntegra del
istopo ms abundante de cada elemento. C=12,
H=1, O=16, N=14
Resolucin
Es la capacidad de un espectrmetro
para distinguir entre dos iones con
masas cercanas.
Se expresa como R=m/m, donde m es
la diferencia de masas entre los dos
iones y m la masa nominal del in de
menor masa.
Resolucin

Baja Resolucin Alta Resolucin

CO
+
. + .
N2
CO . .
+ +
C2H4
N2 .
+

C2H4 .
+

27 28 29 27.9949 28.0061 28.0313

Resolucin
Ejemplo

Masa Masa Masa Promedio

Nominal Monoisotpica

C17H32 236 236.2504 236.44459

C16H28O 236 236.2140 236.40096
C15H28N2 236 236.2252 236.40389
Resolucin
Ejemplo
C17H32 y C16H28O
C17H32 y C15H28N2
C15H28N2 y C16H28O
Diferencia entre Masas
Monoisotpicas
236.2504-236.2140=0.0364
236.2504-236.2252=0.0252
236.2252-236.2140=0.0112

Resolucin = R = m / m
Resolucin necesaria
C 17H 32 y C 16H 28O 236.2140 / 0.0364= 6,489
C 17H 32 y C 15H 28N 2 236.2252 / 0.0252= 9,374
C 15H 28N 2 y C 16H 28O 236.2140 / 0.0112= 21,090
Exactitud de Masa
Exactitud de Masa = m/z Calculada m/z Observada x 106
m/z Calculada

Ejemplo:
400.0020 400.0000 = 0.002 x106 = 4.99 ppm
400.0020 400.0020

Exactitud: 2 mmu (miliunidades) o 5 ppm

Sensibilidad
Es una medida de la respuesta del
instrumento para iones de un compuesto en
particular
Indica el valor de la corriente inica
detectada en el colector
Siempre debe estar referida a un compuesto
determinado (relacin seal-ruido)
Disminuye al aumentar la resolucin y la
velocidad de barrido
Est determinada por la eficiencia de la
ionizacin, eficiencia de la transmisin y
respuesta del detector
Sensibilidad y
Detectores para CG
DETECTOR
MS-SIM
MS-Scan
1

FPD-
S

TCD

ECD-CC
3

0.1
NPD
0.1

FID

0 20 40 60 80 100 500 1000 2500 5000 50000

pg
Diagrama Muestra Pura

Muestra Se obtuvo M .
+
pura
DIP

Voltil? S IE +
DEP No se obtuvo M.

No
PM < 3000 IQ
PM > 3000

Otras tcnicas
FAB (ESI, MALDI)
Diagrama Mezcla
+
Se obtuvo M .
Mezcla
IQ
S CG IE +.
Voltil? No se obtuvo M
HPLC
No
ECZ

Otras tcnicas
Electroespray, , Frit FAB