EXTRACCIN EN FASE SLIDA (SPE)

La extraccin en fase slida es una de las tcnicas de preparacin de muestras ms ampliamente utilizadas
para muestras lquidas o muestras slidas que se han puesto en forma lquida por disolucin o extraccin. SPE
tambin se puede usar para ciertas muestras gaseosas atrapndolas en un sorbente o mediante derivatizacin
in situ utilizando productos qumicos reactivos.
SPE vs. LLE
La extraccin en fase slida es una tcnica importante utilizada en el pretratamiento de la muestra para el
anlisis cromatogrfico. SPE se puede usar de modo similar a la extraccin lquido-lquido (LLE). Mientras
que LLE es un proceso de separacin de una etapa, SPE es un procedimiento cromatogrfico que se asemeja
a HPLC y tiene una serie de ventajas potenciales en comparacin con LLE:
Extraccin ms completa del analito
Separacin ms eficiente de interferencias de analitos
Mayor selectividad de separacin
Reduccin del consumo de disolventes orgnicos
Recoleccin ms fcil de la fraccin de analito total
Un proceso de enriquecimiento de trazas que ofrece un potencial de concentracin inherente
Procedimientos manuales ms convenientes
Eliminacin de partculas
Ms fcilmente automatizado
Debido a que SPE es a menudo un proceso de aislamiento ms eficiente que LLE, es ms fcil obtener una
recuperacin ms alta del analito. Los procedimientos de LLE que puedan requerir varias extracciones
sucesivas para recuperar el 99% del analito a menudo pueden ser reemplazado por mtodos SPE de un solo
paso.
Con SPE, tambin es posible proporcionar una eliminacin ms completa de las interferencias de la fraccin
de analito. Las tcnicas de SPE de fase inversa (comnmente llamadas SPE no polar o RP-SPE) son las ms
populares ya que solo se requieren cantidades menores de solvente orgnico, manteniendo una alta
concentracin de analito. Debido a que no hay necesidad de separacin de fases (como en LLE), la fraccin
de analito total es recolectada fcilmente en SPE, eliminando los errores asociados con volmenes de extracto
variables o medidos de forma incorrecta. En SPE, no hay posibilidad de formacin de emulsin. Finalmente,
las partculas ms grandes quedan atrapadas por el cartucho SPE u otro dispositivo y no pasan por la fraccin
de analito. Por lo tanto, SPE tiene una doble funcin de limpieza y eliminacin de partculas y puede eliminar
la necesidad de filtracin antes de la inyeccin. En la mayora de los casos, la SPE no polar ofrece
concentracin como un beneficio adicional.
Sin embargo, hay algunas desventajas de SPE vs. LLE que incluyen:
Pueden ocurrir mecanismos mixtos en SPE
Adsorcin irreversible de algunos analitos en cartuchos de SPE
Se requiere un desarrollo de mtodos ms complejo (3 o ms pasos involucrados)
Los disolventes utilizados en LLE suelen ser puros y bien definidos, por lo que las separaciones LLE son
bastante reproducibles. En ocasiones, las fases de SPE pueden dar lugar a mltiples mecanismos (por ejemplo,
fase inversa e intercambio de iones) y pueden confundir al operador. El rea de superficie de un dispositivo
LLE (por ejemplo, embudo de separacin) es bastante pequeo en comparacin con un cartucho de SPE, y
especialmente su empaque. Por esto y otras razones, la unin irreversible del analito (con menores
recuperaciones) es menos probable con LLE que con SPE. Hay cuatro pasos en un tpico SPE no polar:
acondicionamiento, carga, lavado y elucin, cada uno de los cuales requiere cierto grado de optimizacin
mientras la seleccin del solvente en LLE puede ser ms sencilla.
SPE vs. HPLC
En su forma ms simple, SPE emplea una pequea columna o cartucho desechable de plstico, a menudo una
jeringa mdica llena con 0.1-10.0 g de adsorbente. El adsorbente es comnmente un material de fase inversa,
por ejemplo, slice C18 y la fase inversa de SPE, los cuales se asemejan tanto a LLE como a HPLC de fase
inversa en sus caractersticas de separacin. Algunas fases de SPE ms selectivas (por ejemplo, intercambio
de ion, afinidad) a veces pueden ser una mejor opcin que RP-SPE, que principalmente distingue analitos y
matriz en trminos de su hidrofobicidad relativa
Para simplificar, en las siguientes explicaciones, supondremos que se est utilizando RP-SPE, a menos que se
indique lo contrario. Aunque los empaquetamientos en fase de unin basados en gel de slice son los ms
populares, se han puesto a disposicin, en los ltimos aos, absorbentes polimricos que han ido ganando
popularidad. En comparacin con las empaquetaduras de SPE a base de slice, las empaquetaduras polimricas
tienen la ventaja de una mayor rea de superficie (por lo tanto, mayor capacidad), el equilibrio qumico de las
propiedades hidrfilas-hidrfobas (mejor humectabilidad y pueden secarse despus del paso de
acondicionamiento sin afectar la recuperacin y reproducibilidad), la ausencia de silanoles (menos posibilidad
de adsorcin irreversible de compuestos altamente bsicos), y un amplio rango de pH (ms flexibilidad en el
ajuste de los qumicos).
En su configuracin ms popular, el empaque SPE se mantiene en el cilindro de la jeringa por fritas, al igual
que una columna de HPLC. El tamao de partcula (promedio de 40 m) es tpicamente mucho ms grande
que en HPLC (1.5-10 m). Debido a longitudes de lecho ms cortas, partculas ms grandes y menor cantidad
de lechos bien rellenos, los cartuchos de SPE son mucho menos eficientes (N <100) que una columna de
HPLC. Por razones de costo, generalmente (en SPE) se usan empaquetamientos de forma irregular (en lugar
de partculas esfricas). Recientemente, las slices esfricas para SPE han llegado Al mercado, pero no han
afectado la venta de los productos ms populares. Los adsorbentes polimricos son generalmente esfricos,
pero tambin ms costosos que las empaquetaduras a base de slice. Sin embargo, algunos de los discos SPE
utilizan los empaques esfricos SPE ms costosos con dimetros de partculas en el rango de 7 m.
En general, los principios de separacin, seleccin de fase y desarrollo de mtodos para SPE son similares a
los de HPLC. Una diferencia importante entre SPE y HPLC es que el cartucho SPE generalmente se usa una
vez y se descarta, ya que las posibles interferencias pueden permanecer en el cartucho a diferencia de las
columnas de HPLC, que se utilizan una y otra vez.
Usos de SPE
SPE se utiliza para seis propsitos principales en la preparacin de muestras:
Eliminacin de interferencias
Concentracin o enriquecimiento traza del analito
Desalinizacin
Intercambio de fase
Derivatizacin in situ
Almacenamiento y transporte de muestras
1.-ELIMINACIN DE INTERFERENCIAS
Las interferencias de la matriz o la presencia de compuestos no deseados en la muestra que se superponen en
las bandas de analito pueden complicar el desarrollo del mtodo de separacin por HPLC o GC y pueden
afectar negativamente los resultados del ensayo. En algunos casos, especialmente para muestras complejas
(por ejemplo, productos naturales, alimentos, digeridos de protenas), un gran nmero de interferencias en la
muestra original puede hacer que sea casi imposible separar estos de una o ms bandas de analito con solo una
separacin por HPLC o GC. Se puede utilizar entonces SPE para reducir o eliminar aquellas interferencias.
Algunas muestras contienen componentes, como sustancias hidrofbicas (por ejemplo, grasas, aceites, grasas),
protenas y materiales polimricos, partculas que pueden tapar o desactivar la columna de HPLC. Estos
compuestos perjudiciales a menudo se pueden eliminar a travs de RP-SPE. En GC, los componentes de alto
punto de ebullicin pueden alojarse en la cabecera de la columna y salir lentamente dando picos extraos y
una desviacin de la lnea base. La tcnica de SPE tambin puede ayudar a eliminar estas interferencias antes
de la inyeccin.
2.-CONCENTRACIN O ENRIQUECIMIENTO DEL ANALITO
SPE a menudo se puede utilizar para aumentar la concentracin de un componente de rastreo. Si se puede
seleccionar un cartucho SPE para que k>>1 para el analito - un volumen relativamente grande de muestra - se
puede aplicar antes de que el analito sature (sobrecargue) la fase estacionaria y comience a eluir del cartucho.
El resultado neto es un aumento considerable en la concentracin de analito cuando se eluye con un solvente
fuerte (k <1), lo que implica un aumento en la sensibilidad de deteccin (llamado enriquecimiento traza). Un
ejemplo de este enriquecimiento es el uso de SPE para enriquecer concentraciones de subpartes por billn de
hidrocarburos aromticos polinucleares o pesticidas de muestras de agua ambiental usando un cartucho RP-
SPE. Un solvente fuerte (por ejemplo, ACN o MeOH) eluye estos analitos del cartucho en un pequeo
volumen concentrado, que tambin ahorra tiempo de evaporacin. Si se lleva a secado, el residuo de la muestra
puede redisolverse (reconstituirse) en un disolvente compatible para la posterior separacin por HPLC o GC.
Alternativamente, se puede agregar un solvente dbilmente miscible al eluyente SPE para diluir el solvente
ms fuerte y quizs permitir la inyeccin directa de la muestra resultante en una columna de HPLC.
3.-DESALINIZACIN
RP-SPE se usa a menudo para desalar muestras biolgicas y otras muestras con alto contenido de sal,
especialmente antes de la HPLC de intercambio inico. Se seleccionan condiciones de pH y % -orgnico para
retener el analito inicialmente, lo que permite que las sales inorgnicas se laven del cartucho con agua. El
analito puede eluirse (sin sal) con disolvente orgnico.
4.-INTERCAMBIO DE FASE
Aunque se usa con menos frecuencia que los anteriores, el intercambio de fase se puede realizar aislando el
analito de inters en el cartucho SPE, luego haciendo fluir aire o nitrgeno seco a travs del cartucho para
eliminar el lquido inicial. Luego, un segundo solvente no compatible se puede usar para eluir el analito en un
dispositivo de recoleccin para la posterior preparacin o inyeccin de la muestra en un cromatgrafo.
5.-DERIVATIZACIN IN SITU
En uno de los procedimientos de derivatizacin in situ, un reactivo de derivacin activo se absorbe en un
cartucho SPE y una muestra que contiene un analito activo se pasa a travs del cartucho. Dependiendo de la
cintica de la reaccin, el analito puede ser simultneamente derivatizado y concentrado. Entonces se puede
usar un solvente fuerte para eluir el compuesto derivatizado que luego se puede manipular
cromatogrficamente. Un ejemplo prctico de tal procedimiento es la derivatizacin in situ de compuestos que
contienen carbonilo con 2,4-dinitrofenilhidrazina. Otro enfoque para la derivatizacin in situ implica la
derivatizacin en solucin en presencia de un sorbente SPE que asla el analito derivatizado en solucin.
Posteriormente, el compuesto derivatizado se eluye para el anlisis. Un ejemplo de este enfoque involucr la
hidrlisis trmica y la metilacin directa de cidos grasos bacterianos con hidrxido de tetrametilamonio de
una muestra de lpidos bacterianos. Los steres metlicos de cidos grasos derivatizados se sometieron luego
a espectrometra de masa de movilidad de ion GC para anlisis. Otro ejemplo de este enfoque es la
derivatizacin in situ de pesticidas cidos que se hicieron reaccionar con butilcloroformiato en un ambiente
acuoso y luego se extrajo usando la limpieza en lnea de SPME con una fibra de PDMS y posterior desorcin
trmica en un GC / MS6.
6.-ALMECENAMIENTO Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA
El almacenamiento y / o transporte de muestras es una aplicacin interesante de los cartuchos SPE. A menudo,
analitos adsorbidos a un soporte slido estn estabilizados con relacin a su estabilidad en solucin. Esta
observacin permite que las muestras se almacenen en un cartucho sorbente que permite almacenamiento y
para el transporte (a travs del correo, por ejemplo). Antes de usar este enfoque, deben estudiarse los trminos
de estabilidad a largo plazo del conjunto individual de analitos cuando se absorbe a un soporte slido.
DISPOSITIVOS Y FORMATOS SPE
Hay varios diseos que se utilizan para SPE:
Cartucho (Figura 9.1)
Disco (Figura 9.2)
Punta de pipeta (Figura 9.3)
Placa de 96 pocillos (Figura 9.4)
Fibra recubierta (microextraccin en fase slida, SPME, figura 9.5) o barra de agitacin recubierta
(extraccin con sorbente de barra de agitacin, SBSE, figura 9.6)

1.-CARTUCHOS SPE
La configuracin ms popular para un dispositivo SPE es el cartucho. Un cartucho desechable SPE tpico
(formato de barril de jeringa) es representado en la figura 9.1. El cilindro de la jeringa es generalmente de
polipropileno de grado mdico, elegido por su pureza. Si niveles traza de impurezas como plastificantes,
estabilizadores o agentes de desmoldeo estn presentes en el plstico utilizado para los cartuchos, pueden
extraerse durante el proceso SPE y contaminar la muestra, quizs dando resultados inapropiados o causando
la supresin de iones en la espectrometra de masas. La salida del cilindro de la jeringa normalmente tiene una
punta Luer para que una aguja pueda fijarse directamente al efluente en un pequeo contenedor o vial.
Las fritas que mantienen el lecho de partculas en el cartucho estn construidas en PTFE, polietileno, acero
inoxidable o titanio (rara vez) con porosidad de 10-20 m, lo que ofrece poca resistencia al flujo. Los cartuchos
SPE pueden variar en diseo para adaptarse a un instrumento automtico o un sistema robtico. Los cartuchos
ms caros, pero ms inertes son de vidrio o PTFE virgen y estn disponibles para anlisis ultratraza (subpartes
por billn) cuando los plsticos del barril de jeringa estndar pueden producir concentraciones inaceptables
de interferencias extrables o adsorcin en las paredes plsticas.
Con la excepcin de los cartuchos especiales mencionados anteriormente, en general, los cartuchos de SPE
empaquetados con slice o sorbente unidos las empaquetaduras son relativamente baratas. Generalmente se
usan una sola vez y se descartan debido a la potencial contaminacin cruzada de la muestra.
Para acomodar una amplia gama de aplicaciones SPE, tambin estn disponibles cartuchos estndar con
volmenes de depsito (el volumen anterior al del empaque en el cartucho) de 0.5-10mL con pesos de
empaque de 35 mg-2g. Para muestras muy grandes, los cartuchos "mega" tienen hasta a 75 g de embalaje y
un depsito de 150 ml. Estos cartuchos tambin pueden considerarse para su uso en aplicaciones de
cromatografa instantnea, aunque esta y la SPE "verdadera" difieren tanto en teora como en la prctica.
Cartuchos con una mayor la cantidad de embalaje debe usarse para muestras sucias que pueden sobrecargar
un cartucho de baja capacidad. Sin embargo, se prefieren los cartuchos que contienen 100 mg de empaque o
menos para muestras lquidas relativamente limpias donde la capacidad del cartucho no es un problema, para
el anlisis de trazas ni para pequeos volmenes de muestra. Debido a las reas de superficie ms altas de
empaques de SPE polimricos y a sus capacidades retentivas potencialmente mayores por unidad de rea, las
masas de lecho empaquetado se encuentran tpicamente en el rango de 5-60 mg, lo que conduce a volmenes
ms pequeos de muestra y solvente. En la mayora de los casos, es conveniente recolectar el analito en el
volumen ms pequeo posible, lo que significa que el cartucho SPE en general, tambin debe ser lo ms
pequeo posible. Volmenes ms pequeos tambin toman menos tiempo para evaporar el solvente de elucin
cuando se lo reconstituye a un solvente que sea ms compatible con el mtodo analtico.
2.-DISCOS SPE
Otra configuracin popular es el disco SPE (figura 9.2). Los discos SPE combinan las ventajas de las
membranas y la extraccin en fase slida. En su aspecto, los discos se parecen mucho a los filtros de
membrana: son planos, generalmente de 1mm o menos de espesor, con dimetros que van desde 4 a 96 mm.
El embalaje SPE en estos discos generalmente comprende 60-90% del total del peso de la membrana. Algunos
discos se venden individualmente y deben instalarse en un portafiltros reutilizable. Sin embargo, los discos
ms populares se venden precargados en soportes o cartuchos desechables con accesorios Luer para facilitar
la conexin a las jeringas. La construccin fsica de los discos SPE difiere de los filtros de membrana. Los
discos SPE constan de:
Redes de PTFE flexibles o expandidas que se llenan con empaquetaduras de resina o de slice
Discos rgidos de fibra de vidrio con material de embalaje incrustado
Polivinilcloruro impregnado de embalajes/empaquetaduras
Membranas derivadas
Los discos y cartuchos SPE difieren principalmente en su relacin longitud/dimetro (L/d): los discos tienen
L/d<1 y los cartuchos tienen L/d> 1. En comparacin con los cartuchos SPE, esta caracterstica del disco
permite velocidades de flujo ms altas y una extraccin ms rpida. Por ejemplo, un litro de agua relativamente
limpia puede pasar a travs de un disco de 45 mm de dimetro en aproximadamente 15-20 minutos, pero puede
requerir 2 horas cuando se utiliza un lecho de cartucho de 15 mm x 8 mm. El agua "sucia" o las partculas que
contienen agua, como las aguas residuales, pueden taponar los discos porosos, al igual que en el caso de los
cartuchos. En cualquier caso, se debe usar un prefiltro antes del tratamiento SPE si las muestras contienen
sustancias particuladas. Algunos productos de disco vienen con un prefiltro ya incorporado. Ya que el material
de embalaje est incrustado en la matriz del disco, la canalizacin (que puede causar caractersticas de flujo
desigual con posterior recuperacin de analitos ms baja con cartuchos pobremente empaquetados) est
ausente. Sin embargo, debido a la delgadez del disco (tpicamente 0.5-2 mm), los compuestos con valores
bajos de k tienden a tener menores volmenes de penetracin que para los cartuchos SPE.
Se ha descubierto que los discos SPE son tiles para aplicaciones medioambientales, como el anlisis de trazas
orgnicas en aguas superficiales, que a menudo requieren un gran volumen de muestra para obtener la
sensibilidad necesaria. La Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos ha aprobado la tecnologa
de disco SPE (Mtodo 3535A) como alternativa para LLE en la preparacin de muestras de agua para anlisis
por HPLC. Una ventaja importante de SPE frente a LLE convencional es el consumo reducido de disolventes
orgnicos. Los discos y cartuchos SPE requieren solo unos pocos mililitros de disolvente por ensayo, en
comparacin con cientos de mililitros para separaciones LLE de varios pasos comparables.
Los discos rgidos de fibra de vidrio de baja masa de lecho con 1,5-30 mg de material de empaquetado
incrustado son tiles para pretratar muestras clnicas pequeas (por ejemplo, plasma o suero). Aqu, la masa
de sorbente reducida y el rea de seccin transversal pequea reduce el consumo de disolvente. Una ventaja
de este tipo de discos es un extracto ms limpio debido a la reduccin del volumen del disolvente de elucin,
menos interferencia de compuestos dbilmente retenidos y la ausencia de fritas que son una posible fuente de
contaminacin. Ejemplos de tales discos son las fases de SPEC de alta capacidad que estn disponibles en
cartuchos o placas de 96 pocillos (consulte la Figura 9.4). Fase inversa (C2, C8, C18, C18AR, y fenilo), fase
normal (NH2, CN, Si), intercambio inico (SAX, SCX) y modo mixto (no polar y SCX) estn disponibles en
el formato de disco SPEC.
Aunque el cloruro de polivinilo impregnado (PVC) y las membranas derivatizadas disponibles en formato de
disco o cartucho se utilizan en aislamientos de muestras biolgicas, se usan muy poco en aplicaciones SPE y
no se discutirn aqu.
3.-PUNTA DE PIPETA SPE
El avance hacia la miniaturizacin en la qumica analtica ha impulsado el desarrollo de nuevos formatos para
SPE. El formato de la punta de la micropipeta (MPT) (Figura 9.3) permite el manejo de cantidades de
submicrolitros de muestra tales como fluidos biolgicos. La extraccin en fase slida (SPE) se ha realizado
con varias fases empaquetadas, incrustadas o revestidas en las paredes internas de la pipeta. La arquitectura
de flujo abierto permite que las muestras de lquido se muevan y transfieran sin deshacer la cada de presin
o taponamiento. Se han demostrado tcnicas SPE que incluyen fase inversa, intercambio inico, interaccin
hidrofbica, interaccin hidroflica, afinidad de metal inmovilizado y cromatografa de afinidad. La SPE
basada en punta de micropipeta (MPT-SPE) se ha usado principalmente para purificacin, concentracin y
aislamiento selectivo (afinidad, quelato de metal) de protenas y pptidos. El diseo nico de punta de pipeta
est basado en tecnologa de sorbente monoltico. Las puntas OMIX de pequeo volumen (10L y 100L) y
pequeas masas (0.25-2 mg) estn diseadas principalmente para aplicaciones de protemica. Tmbin estn
disponibles la fase inversa (C4, C18) y una fuerte fase de intercambio catinico (SCX). Los formatos MPT
estn disponibles para robots automatizados especficos, como Hamilton Microlab Star Series (volumen de
punta de 300 ml) y el Tomtec Quadra (volumen de punta de 450 L).
En los ltimos aos, interconectar los aparatos del pequeo volumen MPT-SPE a MS o LC / MS ha sido un
aislamiento popular/tcnica de limpieza e identificacin en protemica. Dos tcnicas para el anlisis de
espectrometra de masas (MS) de las protenas incluyen ionizacin por electrospray (ESI) y asistida por matriz
desorcin/ionizacin por lser (MALDI). ESI es utilizado para ionizar biomolculas en solucin, mientras que
se usa MALDI para sublimar e ionizar una muestra en una matriz cristalina y seca a travs de un pulso de
lser. MPT-SPE es ahora una herramienta esencial para MALDI y para otras tcnicas avanzadas de EM. Una
de las principales ventajas de las puntas de las micropipetas es que pueden ser utilizadas con micropipetas o
en la automatizacin de manejo de lquidos. Esto ha resultado en el uso rutinario de MPT-SPE en laboratorios
bioanalticos y se adapta fcilmente para su uso en aplicaciones de deteccin de alto rendimiento con sistemas
comerciales disponibles de manejo de lquidos x-y-z.

4.-PLACAS SPE DE 96 POCILLOS

La configuracin de la placa de 96 pocillos (Figura 9.4) consiste en un arreglo de 8x12 pocillos SPE pequeos
de flujo reducido, con la empaquetadura contenida por fritas superiores e inferiores. Estas placas son bastante
susceptibles a la automatizacin y la mayora de los equipos modernos de manejo de lquidos podr acomodar
los diversos pasos requeridos para la operacin SPE. Hay tres tipos de placas SPE de 96 pocillos, la mayora
basadas en la dimensin externa estndar: 1) pozo fijo redondo, 2) pozo cuadrado fijo, y 3) pozo cuadrado
removible. La configuracin del pozo redondo viene en volmenes fijos (usualmente 0.5-1.0 mL) con varias
cantidades de empaque SPE (slice: 25-100 mg, polmero: 2-25 mg). El empaque en cada pozo generalmente
es del mismo material. La configuracin de pozo cuadrado puede acomodar grandes volmenes de muestra
(hasta a 2.0 ml) y generalmente contiene material de empaque fijo en cada pocillo. Las placas de pocillos
cuadrados extrables son adecuadas para aquellos que desean ensamblar sus propias configuraciones de fase
de 96 pozos. Usando una palca base universal, pequeos cartuchos con las mismas o diferentes fases
estacionarias y con diferentes masas de embalaje se pueden colocar en cualquier orden. Este tipo de placa
permite que coincida la cantidad de cartuchos con el nmero de muestras, por lo que no se sacrifica una placa
completa por menos de 96 muestras Los "agujeros" no utilizados se pueden enchufar con los tapones
disponibles para que se pueda aplicar un vaco. Tales placas son bastante tiles para el desarrollo de mtodos
cuando se trata de encontrar la fase estacionaria ptima y/o la masa sorbente.
Tambin estn disponibles placas SPE de 96 pocillos para el desarrollo de mtodos. Estos pozos fijos estn
llenos de diversos sorbentes o discos con diferentes fases estacionarias. El usuario puede configurar varias
condiciones de carga, lavado y elucin con una serie de fases para encontrar las mejores combinaciones para
aislar analitos de compuestos de matriz. Por ejemplo, las placas de desarrollo de mtodos SPEC contienen las
siguientes fases estacionarias basadas en slice: C2, C8, C18, C18AR (resistente a los cidos), ciano, fenilo,
MP1 (modo mixto C8 +SCX) y MP3 (similar a MP1 pero con retencin polar adicional).

5.-MICROEXTRACCIN EN FASE SLIDA

Las fibras recubiertas se usan para SPME. En este diseo (Figura 9.5), una fina fibra de slice fundida slida
est recubierta con una fase estacionaria polimrica, como un polidimetilsiloxano (PDMS) o un poliacrilato.
La fibra se sumerge en la solucin que se analizar, y los analitos se difunden y se fraccionan en el
revestimiento como una funcin de sus coeficientes de distribucin. Una vez que se logra el equilibrio, que
puede tomar 10 minutos, la fibra se retira de la solucin y se coloca en el puerto de inyeccin de una entrada
de GC donde los analitos son desplazados por desorcin trmica. La tcnica SPME-GC ha demostrado ser
muy verstil y se ha utilizado para muchas aplicaciones en reas ambientales y de alimentos para analitos
voltiles. Para los no voltiles, est disponible una versin de HPLC donde los analitos se desorben de las
fibras por desorcin de solvente (elucin), pero este mtodo ha demostrado ser menos til que la versin de
GC.

6.-EXTRACCIN CON BARRAS DE AGITACIN ABSORBENTES (SBSE)

El concepto de una barra de agitacin revestida es similar al de una fibra de SPME recubierta, pero el rea de
superficie muy aumentada permite mayor sensibilidad de masa (ver Figura 9.6). La barra de agitacin, con un
revestimiento de sorcin polimrico, se coloca en un lquido acuoso y la solucin es agitada mientras tiene
lugar la particin analito/matriz. Despus del equilibrio, que nuevamente requiere decenas de minutos, la barra
de agitacin es removida, secada para eliminar trazas de agua, y luego transferida a un dispositivo de desorcin
trmica donde los analitos son desplazados en la columna GC. Para HPLC, la desorcin de disolvente fuera
de lnea es el enfoque preferido para la liberacin de analito desde la barra de agitacin.
Tanto la fibra revestida como los dispositivos con barra de agitacin son ms populares en GC donde la
desorcin trmica es ms eficiente en la volatilizacin de analitos sorbidos en la fase gaseosa que la desorcin
del solvente en la fase lquida. En ambos dispositivos, los analitos muy voltiles pueden perderse debido a la
evaporacin durante el proceso de transferencia.
Para efectos prcticos, el dispositivo de separacin SPE descrito en el resto de la seccin SPE ser referido
como un tpico "cartucho de SPE". En la mayora de los casos, los otros dispositivos SPE funcionarn de
manera similar.

APARATOS PARA SPE

El equipo necesario para realizar el experimento SPE puede ser muy simple (Figura 9.7). La gravedad se puede
usar como la fuerza motriz, pero el flujo a travs del cartucho con muestras "reales" es a veces extremadamente
lento y poco prctico para uso general. Por lo tanto, el sistema bsico ms til (Figura 9.7A) emplea una
jeringa para empujar manualmente el disolvente o la muestra a travs del cartucho. Este mtodo puede ser
difcil si la muestra es viscosa o contiene partculas. En este caso, se puede usar un matraz al vaco que puede
manejar un cartucho a la vez en su lugar (Figura 9.7B). Sin embargo, cuando varias muestras deben procesarse
simultneamente, se recomienda usar un colector de vaco o un sistema de presin positiva para procesar
mltiples cartuchos a la vez (Figura 9.7C). Los sistemas que estn disponibles pueden acomodar hasta 24
dispositivos SPE. Estos sistemas mltiples estn construidos de vidrio transparente resistente a los qumicos,
al vaco. El vidrio transparente permite controlar todo el proceso de recoleccin de muestras. Un estante
extrable, ajustable en altura y resistente a los solventes est ubicado dentro del colector de vaco para contener
varios tamaos de tubos de ensayo o viales para la recoleccin del eluyente o para contenedores de desecho
para acondicionamiento, carga y lavado de solventes. Las agujas de administracin que conectan los cartuchos
con los tubos/viales de recoleccin son construidos de polipropileno, PTFE o acero inoxidable, y estn
alineados para que el solvente se dirija al dispositivo de recoleccin apropiado. De esta manera, se puede
evitar la contaminacin cruzada durante la etapa de elucin del analito.
En algunas unidades, estn incorporadas una vlvula de purga de vaco, una vlvula de control de vaco y un
vacumetro para permitir un mejor control del flujo de solvente En las unidades ms sofisticadas, se
proporcionan controles individuales para cada cartucho para garantizar que haya una distribucin de flujo
uniforme entre todos estos. Finalmente, un matraz al vaco de brazo lateral se coloca entre el colector de vaco
y la fuente de vaco para recoger el enjuague y lavado del solvente y evita que los lquidos contaminen la
bomba de vaco. En el mercado, tambin hay colectores de presin positivos y sistemas de flujo constante que
brindan control de flujo individual para cada uno de los cartuchos. A medida que el grado de sofisticacin va
en ascenso, tambin lo hace el precio del aparato. La centrifugacin ha sido menos comnmente utilizada para
conducir el lquido a travs del cartucho (Figura 9.7D)
Si se utilizan placas SPE de 96 pocillos, se requiere un colector de vaco especial. La figura 9.7E muestra un
sistema colector de este tipo; en la parte inferior de la figura, una placa SPE real de 96 pozos est montada en
el colector, y una placa colectora de 96 pozos se usa para recolectar los eluyentes finales. Contenedores de
residuos especiales tambin estn disponibles para los pasos de carga y enjuague.

Independientemente del mtodo utilizado para empujar la solucin de muestra a travs del cartucho SPE u
otro dispositivo SPE, la velocidad de flujo no debera ser demasiado rpida. De lo contrario, puede haber una
cantidad de tiempo insuficiente para la interaccin de la muestra con la fase estacionaria; la cintica de la
transferencia de masa en SPE es la misma que en HPLC. Para aplicaciones SPE tpicas, se recomienda que la
velocidad de flujo sea de 10 ml/min o menos para un cartucho de 6 ml y 50 ml/min para un disco de 90mm.
De lo contrario, pueden producirse prdidas de muestra debido a la lenta cintica de sorcin.