INSTITUTO DE EDUCACIN SUPERIOR TECNOLGICO

PBLICO TRUJILLO

LABORATORIO CLNICO IV

MTODOS Y TCNICAS DE ESTUDIO MICROBIOLGICO II

PROFESOR:

BLGO. MBLGO. FREDDY VALLEJO LEN

ALUMNO (A):

TEMA:

MTODOS DE ESTUDIO DE LOS HONGOS

TRUJILLO PER

2017
I. INTRODUCCIN:

Los hongos constituyen un grupo diverso de organismos unicelulares o

pluricelulares que se alimentan mediante la absorcin directa de nutrientes. Los
alimentos se disuelven mediante enzimas que secretan los hongos; despus se
absorben a travs de la fina pared de la clula y se distribuyen por difusin simple en
el protoplasma. Junto con las bacterias, los hongos son los causantes de la
putrefaccin y descomposicin de toda la materia orgnica. Hay hongos en cualquier
parte en que existan otras formas de vida. Algunos son parsitos de organismos vivos
y producen graves enfermedades en plantas y animales. La disciplina cientfica que
estudia los hongos se llama Micologa.
Los hongos figuraban en las antiguas clasificaciones como una divisin del
reino Plantas (Plantae). Se pensaba que eran plantas carentes de tallos y de hojas
que, en el trascurso de su transformacin en organismos capaces de absorber su
alimento, haban perdido la clorofila, y con ello, su capacidad para realizar la
fotosntesis. Sin embargo, en la actualidad los cientficos los consideran un grupo
completamente separado, que evolucion a partir de flagelados sin pigmentos.
Ambos grupos se incluyen dentro del reino Protistas, o bien se coloca a los hongos
como un reino aparte, debido a la complejidad de su organizacin. Hay unas cien mil
especies conocidas de hongos. Se cree que los grupos ms complejos derivan de los
tipos ms primitivos, los cuales tienen clulas flageladas en alguna etapa de su ciclo
vital.
Los mohos y las levaduras se encuentran ampliamente distribuidos en el
ambiente, pueden encontrarse como flora normal de un alimento, o como
contaminantes en equipos mal sanitizados. Ciertas especies de hongos y levaduras
son tiles en la elaboracin de algunos alimentos, sin embargo tambin pueden ser
causantes de la descomposicin de otros alimentos. Debido a su crecimiento lento y a
su baja competitividad, los hongos y levaduras se manifiestan en los alimentos
donde el crecimiento bacteriano es menos favorable. Estas condiciones pueden ser
bajos niveles de pH, baja humedad, alto contenido en sales o carbohidratos, baja
temperatura de almacenamiento, la presencia de antibiticos, o la exposicin del
alimento a la irradiacin. Por lo tanto pueden ser un problema potencial en alimentos
lcteos fermentados, frutas, bebidas de frutas, especias, oleaginosas, granos, cereales
y sus derivados y alimentos de humedad intermedia como las mermeladas, cajetas,
especias, etc.
El trmino moho se suele aplicar para designar a ciertos hongos filamentosos
multicelulares cuyo crecimiento en la superficie de los alimentos se suele reconocer
fcilmente por su aspecto aterciopelado o algodonoso, a veces pigmentado.
Generalmente todo alimento enmohecido se considera no apto para el consumo. La
identificacin y clasificacin de los mohos se basa en observaciones macroscpicas y
microscpicas.
El trmino levadura se refiere a aquellos hongos que generalmente no son
filamentosos, sino unicelulares y de forma ovoide o esferoide, y que se reproducen
por gemacin o por fisin. Las levaduras que se encuentran en los alimentos pueden
ser benficas o perjudiciales. Las levaduras se utilizan en la elaboracin de alimentos
como el pan, la cerveza, vinos, vinagre y quesos, tambin se utilizan en la obtencin
de enzimas y alimentos fermentados. Las levaduras son perjudiciales cuando
producen la alteracin del sauerkraut, de los zumos de frutas, de los jarabes, de la
melaza, de la miel, de las carnes, del vino, de la cerveza y de otros alimentos. Los
caracteres morfolgicos de las levaduras se determinan mediante su observacin
microscpica. Su forma puede ser desde esfrica a ovoide, alimonada, piriforme,
cilndrica, triangular e incluso alargada
Las micosis son enfermedades producidas por el crecimiento de un hongo en el
organismo o sobre la superficie corporal. En la mayora de la gente sana las
infecciones por hongos son leves, afectan slo a la piel, el cabello, las uas, u otras
zonas superficiales, y se resuelven espontneamente. Comprenden la tia y el pie de
atleta. Sin embargo, en las personas con un sistema inmunolgico deteriorado, este
tipo de infecciones, denominadas dermatofitosis, pueden persistir durante largo
tiempo. Los organismos responsables de las dermatofitosis pertenecen al gnero
Microsporum, Epidermophyton y Trichophyton.
Los hongos tambin pueden invadir los rganos internos del organismo, en
especial los pulmones, donde las infecciones se parecen a la neumona o a la
tuberculosis pulmonar. Son tpicas de enfermos cuyo sistema inmune ha quedado
deprimido por procesos como el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA),
frmacos antitumorales, o radiacin. Tambin aparecen en pacientes tratados con
hormonas esteroideas, como el cortisol, en sujetos con diabetes y en quienes han
seguido tratamiento antibitico durante mucho tiempo. Los dos hongos que se suelen
aislar en estos casos son Cryptococcus y Aspergillus, los cuales reciben el nombre de
patgenos oportunistas.
Los hongos que pertenecen al gnero Candida, en especial Candida albicans
(el cual produce candidiasis), pueden infectar los rganos internos y las membranas
mucosas de la boca, garganta y tracto genital. En las personas con inmunidad
deteriorada, este organismo puede originar una infeccin crnica.
Entre los principales mtodos de estudio de los hongos tenemos los mtodos
directos como la observacin macroscpica de la muestra y la observacin
microscpica que son el examen en fresco (con hidrxido de potasio, lactofenol, tinta
china o cinta de celulosa), la coloracin diferencial (Gram, Ziehl Neelsen o Giemsa).
Tambin se emplean los cultivos (en medios comunes como el agar Sabouraud o en
medios mejorados como agar sangre o BHI), inoculaciones en animales (ratones,
cobayos, conejos, ratas) y el estudio anatomopatolgico (con coloraciones para
tejidos como hematoxilina eosina, cido para amino saliclico). Entre los mtodos
indirectos se emplean las intrademorreacciones, reacciones serolgicas (aglutinacin,
precipitacin, fijacin de complemento) e inmunofluorescencia.
Los objetivos de la presente prctica son:
1. Demostrar la existencia de hongos ambientales.
2. Aislar e identificar algunos hongos ambientales.
3. Familiarizar al estudiante con las principales estructuras fngicas.
4. Identificar algunos hongos causantes de micosis.
5. Adiestrarse en el diagnstico de laboratorio de algunas micosis.
II. MATERIAL Y MTODOS:

A) Materiales:
1. Material Biolgico:
Muestras de secreciones, raspados de piel, pelo o cualquier otro fluido
biolgico.
Muestras de frutas, pan u otro alimento hongueados.
Bebida fermentada naturalmente (chicha de jora, vino, etc).
2. Material de Laboratorio:
Placas de Petri. Lminas portaobjeto.
Asa de bacteriolgica. Laminas cubreobjetos.
Hisopos estriles. Azul de lactofenol.
Mechero. Tinta china.
Alcohol. Microscopio.
Agar Sabouraud. Incubadora.
Hidrxido de Potasio al 10%. Barra de coloracin.
Solucin salina fisiolgica. Aguja N 21 o lanceta.
Azul de metileno al 1%. Algodn.

B) Procedimiento:
1. Preparacin de material:
a) Preparacin de hisopos estriles:
Emplear hisopos largos de 20 cm y cortos de 7 cm de longitud los
cuales sern empaquetas individualmente en papel molde que sern
esterilizados en autoclave.
Depositarlos en una bandeja y en un lugar seco hasta su uso.
b) Preparacin de placas Petri:
Ensamblar (tapa y caja) y ser colocarlas dentro de un cilndrico de metal
inoxidable con tapa, fabricado especficamente para ese uso, o en su
defecto, las placas sern empaquetadas con papel de molde,
individualmente, en parejas o en grupos de no ms de 5 placas.
Esterilizar en estufa de esterilizacin.
Depositarlos en una bandeja y en un lugar seco hasta su uso.
c) Preparacin de tubos de ensayo:
Taponear con algodn los tubos de ensayo y se envuelven con papel de
molde en grupos de 5 a 10 tubos.
Esterilizar en estufa de esterilizacin.
Depositarlos en una bandeja y en un lugar seco hasta su uso.
d) Preparacin de solucin salina estril:
Preparar en un matraz erlenmeyer 500 mL de solucin salina fisiolgica
(0,9 g de NaCl en 1 litro de agua destilada).
Repartir pequeos volmenes 1 a 1,5 mL de est solucin en frasco de
penicilina los que sern tapados y amarrados correctamente y apilados
en un frasco de metal, el resto se esteriliza en el mismo matraz.
Esterilizar en estufa autoclave.
Depositarlos en una bandeja y en un lugar seco hasta su uso.
e) Preparacin de agar Sabouraud:
Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada.
Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para
disolver completamente los ingredientes. Evitar el sobrecalentamiento.
 Esterilizar a 121C durante 15 minutos. Distribuir y enfriar a
temperatura ambiente antes de su utilizacin.
Sus componentes son:
Glucosa..40 g/L
Pluripeptona...10 g/L
Agar15 g/L
Cloranfenicol..0,05 g/L (si se quiere ser ms
selectivo)
pH final 5,6 0,2
2. Observacin de estructuras fngicas de hongos ambientales y de
alimentos:
Realizar preparados en fresco en SSF de las muestras (frutas, pan u otro
alimento hongueados) de hongos ambientales con el asa en forma de L
para mohos y en forma de aro en levaduras.
Observacin a menor y mediano aumento identificando el micelio
cenoctico, septado, estructuras especiales, etc.), el tipo de esporas.
En caso de levaduras observar su morfologa y sus blastosporas.
3. Aislamiento de Hongos ambientales:
En placas de agar Sabouraud, exponerlas a diferentes ambientes (bao,
jardn, laboratorio, etc.) o de las muestras tradas sacar un inoculo con el
asa en forma de L para mohos y en forma de aro en levaduras.
Incubar dichas placas a temperatura ambiente por 5 a 7 das
(dependiendo de la temperatura ambiente).
Observar el crecimiento de las colonias anotando sus caractersticas.
Realizar observaciones microscpicas de las colonias para identificar el
gnero al que pertenecen.
4. Coloracin de hongos ambientales:
a) Coloracin Gram:
Realizar un preparado en seco mezclando una gota de SSF y la
muestra fijando la muestra, luego fijar al calor del mechero.
Realizar una coloracin Gram de las muestras en lminas portaobjeto
utilizando la llama de un mechero para fijar la muestra
Aadir cristal violeta o violeta de genciana por 1 o 2.
Lavar con agua de cao.
Luego aadir lugol dbil 2 a 3.
Lavar con agua de cao.
Decolorar con alcohol acetona hasta no observarse desprendimiento
del colorante anterior.
Lavar con agua de cao.
Aadir safranina por 20 a 30.
Lavar con agua de cao.
Secar y observar a menor aumento y luego a inmersin.
b) Coloracin con azul de metileno:
Realizar una coloracin con azul de metileno en preparado en fresco
agregando una gota diluida de azul de metileno con la muestra a
observar y observar con menor y mediano aumento
Realizar un preparado en seco mezclando una gota de SSF y la
muestra fijando la muestra, luego fijar al calor del mechero.
Colorear la lmina por 30 segundos o 5 minutos, eliminar el exceso de
colorante con agua y luego dejar secar.
 Observar al microscopio primero con objetivo de menor aumento y
despus agregar una gota de aceite de inmersin y observar con
objetivo de inmersin (100X).
c) Coloracin con tinta china:
Hacer una suspensin ligera en solucin salina de una levadura (de
preferencia que posea cpsula) y mezclar una gota de esta suspensin
con una pequea gota de nigrosina o tinta china en el borde central del
portaobjetos.
Con el extremo de otro portaobjetos extender la gota a lo ancho del
primer portaobjetos. Prepare un frotis delgado y otro grueso.
Deje secar al aire. NO SE DEBE FIJAR AL CALOR.
Observe a menor aumento y luego con el objetivo de inmersin.
5. Aislamiento de hongos causantes de micosis:
Realizar una observacin microscpica de la muestra. Si es secrecin
vaginal u otro fluido biolgico se pueden realizar coloraciones Gram o
exmenes en fresco, en el caso de raspados de piel o pelo se observan con
KOH al 10% (dejar que acte por 20 o calentarlo a la llama del
mechero).
Hay que tener presente que las levaduras son Gram positivas y que en los
dermatofitos se observan hifas artrosporadas.
Si alguna observacin es positiva realizar el aislamiento en agar
Sabouraud. Los raspados de pelo son colocados en el agar y se incuban a
temperatura ambiente observando el crecimiento a los 5 a 7 das y si es
una levadura proceder al aislamiento en siembra como en el caso de
bacterias incubando a 37C por 1 a 2 das o a temperatura ambiente por 2
a 3 das.
Realizar observaciones macroscpicas y microscpicas de las colonias
para identificar el gnero al que pertenecen.
 * RESUMEN

III. RESULTADOS:
IV. DISCUSIN:
V. CONCLUSIONES:
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

BALCELLS, Alfonso. (1968):La Clnica y el Laboratorio. 10 Edicin.

Editorial Marn. Espaa.
INGRAHAM, J. ( 1998): Introduccin a la Microbiologa. Tomo I. Edit. Revert,
S.A. Barcelona.
JAWETZ, E. (2000): Microbiologa Mdica. 16 edicin. Edit. El Ateneo. Buenos
Aires.
KINGSBURY, D. (1989): Microbiologa Mdica. Edit. Noriega Limusa. Mxico
D.F.
GARCA, J. (1996): Microbiologa Clnica. Tomo II. Edit. Mosby Doyma Libros.
Madrid.
GUERCI, A. (1989): Laboratorio Mtodos de Anlisis Clnicos y su
Interpretacin. 4ta. Edicin Editorial El Ateneo. Buenas Aires Argentina.
LYNCH, M. (1983): Mtodos de Laboratorio Clnico. 2da. Edicin. Editorial
Interamericana S.A.
 MIMS, C. (1995): Microbiologa. Edit. Mosby Doyma Libros. Madrid.
MURRAY, P. (1993): Microbiologa. Edit. Mosby. 2 edicin. Barcelona.
PELZCLAR, M y REID, R. (1993): Microbiologa General. 4 edicin. Edit. El
Ateneo. Buenos Aires.
PRIETO, J. (2010): La Clnica y el Laboratorio: Interpretacin de Anlisis y
Pruebas Funcionales. 21 edicin. Editorial Elsevier. Barcelona.
RAMIREZ, R. (1988): Mtodos Prcticos de Laboratorio Clnico Bsico 2da.
Edicin. Lima
SIACHOQUE, H. (2006): Inmunologa: Diagnstico e Interpretacin de Pruebas
de Laboratorio. Centro Editorial Universidad de Rosario. Bogot.
TORTORA, G. (1993): Introduccin a la Microbiologa. 3 edic. Edit. Revert,
S.A. Barcelona.
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. DEPARTAMENTO DE
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA.(1982): Gua de prcticas. UNT.
Trujillo.

VII. CUESTIONARIO:

1. Elabora un mapa conceptual que clasifique a los hongos con sus principales
caractersticas, y su divisin en mohos y levaduras.
2. Representa a travs de esquemas las principales estructuras que conforman a un
hongo y describe brevemente la funcin que tienen en este microorganismo:
micelio, hifa, septo, espora, esporangio, conidio, etc.
3. En el siguiente cuadro escribe las principales caractersticas de los mohos
presentes en los alimentos: Mucor, Rhizopus, Aspergillus, Penicillium.

GNERO CARACTERSTICAS PRINCIPALES

Mucor

Rhizopus

Aspergillus

Penicillium
 4. Escribe la composicin de los medios de cultivo: a) Agar papa dextrosa, b) Agar
dextrosa Saboraud y c) Agar Micosel, sealando en cada uno de ellos cul es el
componente responsable de la inhibicin del crecimiento de bacterias en estos
medios.
AGAR PAPA AGAR DEXTROSA AGAR MICOSEL
DEXTROSA SABORAUD

5. Seale algunas de las aplicaciones industriales de los hongos.

6. Qu funcin tiene el hidrxido de potasio al 10% para la observacin de
estructuras fngicas en algunas muestras clnicas?
7. Indica la funcin de cada componente del agar Sabouraud.
8. Dibuja el tipo de esporas asexuales y sexuales en los hongos.
9. Qu son las micotoxinas y cual es su importancia?
10. Qu estructura en los hongos ambientales es la responsable que posean color?

ANEXO
AGAR SABOURAUD DEXTROSA
Se utilizan para el cultivo de hongos y levaduras y para la numeracin de estos
microorganismos en alimentos, muestras clnicas y otros materiales. Los medios lquidos o
caldos estn indicados para pruebas de esterilidad; los agares Sabouraud con glucosa estn
especialmente indicados para dermatofitos, mientras que los que contienen maltosa se favorece
el crecimiento de hongos filamentosos. Se aconseja utilizar un medio suplementado con
antibitico cuando las muestras estn altamente contaminadas.
Fundamento
En estos medios la peptona es la fuente nitrogenada para el crecimiento de hongos y levaduras,
el carbohidrato (glucosa o maltosa) es la fuente energtica. La maltosa, cumple con los
requerimientos nutritivos, deforma general, de hongos y levaduras patgenos y no patgenos. El
medio Agar Maltosa Sabouraud tambin permite la diferenciacin de Pseudomonas en
poblaciones mixtas,ya que potencia la produccin de piocianina. El medio lquido de Sabouraud
se prepara segn los procedimientos oficiales para realizar pruebas de esterilidad. El
crecimiento selectivo que se da en los medios Sabouraud que no contienen antibitico, depende
por completo del pH cido de estos medios. Sin embargo, se recomienda la utilizacin de
antibiticos de amplio espectro en muestras muy contaminadas. El Cloranfenicol inhibe la
mayor parte de contaminantes bacterianos y la Cicloheximida inhibe el desarrollo de
hongos saprofitos. Los medios de Sabouraud pueden ser adicionados con otros productos, para
mejorar su selectividad:
Potasio telurito al 0,015% concentracin final, inhibe el crecimiento bacteriano.- 2,3,5-
Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro a 100 mg/l, permite diferenciar Candida albicans de las otras
Candidas.
 Penicilina a razn de 20.000 UI/l, inhibe la mayor parte de bacterias. Pueden utilizarse otros
antimicrobianos, as como indicado-res que puedan hacer que el medio sea selectivo y/o
diferencial.
Frmula (por litro)
Glucosa Sabouraud, Agar
D(+) Glucosa..............................................40,0g
Mezcla de Peptonas.....................................10,0g
Agar..........................................................15,0g
pH final: 5,6 0,2-
Maltosa Sabouraud, Agar
D(+) Maltosa...............................................40,0g
Peptona.......................................................10,0g
Agar...........................................................15,0g
pH final: 5,6 0,2-
Glucosa Sabouraud + Cloranfenicol, Agar
D(+)-Glucosa..............................................40,0g
Mezcla de Peptonas.....................................10,0g
Agar..........................................................15,0g
Cloranfenicol..............................................0,5g
pH final: 5,6 0,2-
Sabouraud, Medio Lquido
D(+)-Glucosa..............................................20,0g
Peptona......................................................10,0g
pH final: 5,6 0,2-
Glucosa Sabouraud + Cicloheximida, Agar
D(+)-Glucosa..............................................40,0g
Cicloheximida...............................................0,4g
Mezcla de Peptonas......................................10,0g
Agar...........................................................15,0g
pH final: 5,6 0,2