14 LABORATORIO COLUMNA DE WINOGRADSKY INTRODUCCION Este experimento relativamente “simple” consiste en incu: bar agua de pantano o suelo, enriquecido con materia orgi- nica, azufre, etc. en una columna de vidrio y en presencia de luz, dando lugar al cabo de un tiempo, a una excelente demostracién de un enriquecimiento selectivo de diferentes grupos de microorganismos. También ilustra la diversidad de rutas bioquimicas o funciones que existen y de las venta jas selectivas que éstas les confieren a ciertas especies bacte- rianas permitiéndoles asi dominar en un hébitat. La columna es predominantemente anaerdbica. Inicialmen- te las bacterias heterdtrofas usan el ox(geno presente para la oxidacién aerébica de material orginico (ej.: celulosa). Bajo las condiciones anaerdbicas que suceden, la utilizacion de celulosa da lugar a que se produzca CO y moléculas orgéni- ‘as simples (dcidos grasos, lactatos). Estos compuestos de ‘arbén actdan como una fuente de energfa (donadores de electrones), para una flora secundaria de bacterias reducto- ras de azufre (ejemplo cesulfovibrio spp). La flora secunda- ria reduce et SOg (un aceptor final de electrones) a expen- sus del lactato produciendo diéxido de carbono y sulfuro de hridrogeno, Estos gases en presencia de luz, permiten el des rollo de una flora terciaria fotosintética de bacterias del azufte. Esta incluye bacterias del azufre, tanto parpuras (Thiorhodacea) como verdes (Chlorobacteriaceae) las cuales son capaces de utilizar HS como una fuente de poder re- ductor (donadores de electrones) en la fotosfntesis, aunque Gte es téxico para la mayorfa de otros organismos. Las «apas superficiales de la colummna son aerébicas 0 microaer- filas y en ellas pueden desarrollarse los pratozoos y las algas verdes y verde azules, DEMARCACION DE ZONAS Debe llevarse a cabo de una completa investigacién de la columna, £1 grupo hard columnas y observaré los cambios que ocurran en ellas por 6 a 8 semanas demarcando las zonas encontradas. Fig. 1. Por: L. F: Veldsquez V. (1) En la Figura 1 solo se ha presentado un posible esquema de lo que se puede encontrar. Las especies que se desarrollan, dependerdn de varios factores, tal como la concentracién de sulfuro de hidrogeno. Ademds hay que considerar otras va- riaciones incluyendo el pH (5.5-9.0), la temperatura, ta luz {intensidad y longitud de onda), otros donadores de electro- nes (Hp, tiosulfato y otros dcidos orginicos) y quizds el filtrado lento en la columna, Se debe estar preparado para detectar cambios grandes o sutiles como por ejemplo pérdida de color en las bacterias del azufre (Beggiatoa, Thiothrix, Thiobacillus, etc. MATERIALES 1. Fango, preferiblemente negro y tomado de la orilla de tun medio acuatico, aunque también puede servir suc- lo de jardin o de-un bosque. Ademas una buena canti- dad de agua de estanque, rfo o mar, 2. Una columna de vidrio con un tapén de caucho en la tease o en su defecto una probeta (EI didmetro mini- mo es de 3.5 cms. y una altura de 15-20 cms.). Se deben preferir las columnas con posibilidades de re mocién del fango para su estudio por ejemplo aque Nas que tengan un tapén de caucho que pueda quitar- ‘se y por donde la columna de fango puede ser empu: jada con un émbolo. Sulfato de calcio (yeso), carbonato de calcio, celulosa ‘0 materia orgdnica muerta. 4. pH metro. 1N. NaOH y IN. HEp. 5. Papel de aluminio. 6. Papel de filtro. Profesor Departamento de Biologfa, Facultad de Ciencias y Humanidades, Universidad de Antioquia, Enero/ Junio 1979Figura. RK. lade inicial PROCEDIMIENTO. ‘A. Columna de fango. Primero se debe remover del suelo © del fango todos los elementos grandes que existan (piedra, madera), ‘Se recomienda la utifizacién de un cedazo o malla para obtener un conjunto uniforme, El fondo de la columna se prepara mezclando fango con 1-2 g de CaSO4 y, 1 g CaCOg y algunas tiras de papel de filtro. Este conjunto se vierte dentro de la columna formando una capa de 2-3 cms. Lucgo se vierte el resto de fango hasta aleanzar una ‘apa de 15 cms. El fango debe mezctarse bien durante el vertido para prevenir la formacién de burbujas de aire en la columna, Ajuste el pH si es necesario. Al final de la operacién se decanta el agua de la parte superior dejando s6lo una capa de 1 em. de agua. Cubra con un plistico para evitar la evaporacién, ilu: mine usando preferiblemente una lampara incandes- cente, Si se utiliza luz solar se necesita una incubacién or més tiempo. Haga observaciones periddicas. B. Columna acuosa: Prepare el fango enriquecido inicial, agregindole CaSOq, CaCO3, 0 celulosa, come se ex: plic6 en la parte A. Para esta primera parte es necesa- rio doblar la cantidad de fango para formar una capa de 46 cms, en la columna. Luego cuidadosamente agregue el agua de pantano. Cubra e incube como en la parte A Usted puede hacer otras variaciones, como cambiar el pH o usar muestras del mar 0 desechos de una fabrica, etc. Actualidades Bioldgicas, Vol.8, Nos.27y 28 15 ancerstios: B. Estado final INTERPRETACION DE RESULTADOS ‘Aunque observaciones ecoldgicas simples pueden algunas veces ser diffciles para interpretarlas sin ambigtiedades, se puede llegar a seleccionar entre las posibles alternativas la mis satisfactoria 0 por medio de un andlisis juicioso. Un ‘aso quesirve de ejemplo en este punto es el suministrado por la ecologta de las bacterias del azure. Estos organismos son encontrados en ambientes que contienen sulfuro de hi drageno y muchos de ellos se pueden reconocer facilmente porque contienen cuerpos de inclusién en forma de gotas de azufre. Por muchos afios la interpretacién de las relaciones ecolégicas significaban que las bacterias del azufre eran la causa de la produccidn del sulfuro de hidrégeno. Nunca se Pens6 en otra posibilidad hasta que Winograsky Hevé a cabo sus experimentos maestros, fos cuales permitieron revolu- cionar los conceptes de Jos Quimoautétrofos (Winograsky 1887-1888). Demostré que el crecimiento de las bacterias del azufre depende de la presencia del sulfuro de hidrégeno y fue asf como resolvié la ambigiteded de esta situacién evol6gica, Aunque hay que reconocer que las nuevas inter- pretaciones fueron favorecidas por los experimentos fisiolé- ¢gic0s, los estudios ecoldgicos figuran en un papel significati- vo. Tan pronto como la nueva interpretacién habfa sido conce bida, Winograsky realiz6 lo que implicé una consecuencia verificable. Si las bacterias del azure crecfan en ambientes especiales porque éstas contenfan sulfuro de hidrégeno, es- tos organismos también deberfan encontrarse en lugares donde estos constituyentes estuvieran presentes como resuk tado de actividades no microbiolégicas tales como manan- les azufrados. Se encontré que ésto era correcto, Bacte- rias del azufte eran aisladas en todos los manantiales azufra- dos.16 PREGUNTAS 1, Por qué se forman manchas negras en el fango? 2 GEn cual posicién se encuentran las bacterias verdes azufradas? Por qué? BIBLIOGRAFIA 5 iDiferencia entre las Athiorodeceas y las Thiorods eas, La columna de Winogradsky se ha hecho tradicional- ‘mente con fango negro y de fuerte olor. éPor qué? ‘Si ef HS de la columna no es completamente utiliza- do, iCudl secuencia de eventos se pucde predecir? N. Pfenning, 1957, Photosynthetic bacterie, Ann. Rev. Microbiol. 21:285. J. R Posgate, 1966. Media for sulfur bacteria. Lab. Pract. 15:1239-44, Niel, CB. van, 1954, The chemostotrophic and Photosynthetic bacteria. Ann. Rev. Microbiol, 8:105. H. Truper. 1970, Culture and isolation of Phototrophic sulfur bacteria from the marine environment. Helgolander Wiss. Meersunters, 20:6-16, Enero/Junio 1979