Lampiran 1.

Komposisi dan Prosedur Pembuatan Medium

1. Medium Starch Casein Nitrat (SCN)

Bahan g/L
Soluble starch 10
Kasein 1
KNO3 1
K2HPO4 0,5
MgSO4,7H2O 0,5
NaCl 0,5
FeSO4,7H2O 0,01
Agar 20
Akuades 1000 mL
pH akhir 6,8-7,0

2. Medium cair Yeast Extract Malt Extract (YEME)(Nurkanto et al., 2008)

Bahan g/L
Yeast extract 4
Malt extract 10
Glukosa 4
KNO3 1
K2HPO4 0,5
MgSO4,7H2O 0,5
NaCl 0,5
FeSO4,7H2O 0,01
Akuades 1000 mL
pH akhir 7,3

3. Medium cair Oatmeal(Nurkanto et al., 2008)

Bahan g/L
Oatmeal komersial 20
Yeast extract 1
KNO3 1
K2HPO4 0,5
MgSO4,7H2O 0,5
NaCl 0,5
FeSO4,7H2O 0,01
Akuades 1000 mL
pH akhir 7,2

4. Medium Starch Agar (SA)(Bridson, 1998)

Bahan bio.unsoed.ac.id
g/L
Meat extract 3
Peptic digest of animal 5
tissue
Soluble starch 2
Agar 15
Akuades 1000 mL
pH akhir 7,2 ± 0,1

43
5. Medium Urea Broth (UB)(Bridson, 1998)
Bahan g/L
Yeast extract 0,1
Dipotassium hydrogen phosphate 9,5
Potassium dihydrogen phosphate 9,1
Urea 20,0
Phenol red 0,01
Akuades 1000 mL
pH akhir 6,8 ± 0,2

6. Medium Sulfide Indole Motility (SIM)(Bridson, 1998)

Bahan g/L
Tryptone 20
Peptone 6,1
Ferrous ammonium sulphate 0,2
Sodium thiosulphate 0,2
Agar 3,5
Akuades 1000 mL
pH akhir 7,3 ± 0,2

7. Medium Tryptone Soya Agar (TSA)(Bridson, 1998)

Bahan g/L
Tryptone 15,0
Soya peptone 5,0
Sodium chloride 5,0
Agar 20,0
Akuades 1000 mL
pH akhir 7,3 ± 0,2

8. Medium Basal
Bahan Dalam 1 L
K2HPO4 1,0 g
MgSO4 0,5 g
FeSO4 50 mg
Na Molibdat 0,005 g
Akuades 1000 mL
pH akhir 7,3 ± 0,2

Prosedur Pembuatan Medium

bio.unsoed.ac.id
Semua bahan dilarutkan dalam akuades sampai volume 1000 mL. Larutan
dididihkan dan terus diaduk hingga homogen. Kemudian pH medium diukur, apabila
terlalu asam ditambahkan NaOH dan apabila terlalu basa ditambahkan HCl. Medium
dimasukkan dalam labu Erlenmeyer dan disterilisasi dengan autoklaf pada suhu
121oC dengan tekanan 2 atm selama 15 menit.

44
Lampiran 2. Spesifikasi Peralatan dan Bahan

1. Alat

No Nama Alat Merek/Tipe Kegunaan Tempat

IWAKI Pyrex®,
1 Cawan petri Menumbuhkan biakan Lab. Mikrobiologi
Japan
IWAKI Pyrex®,
2 Tabung reaksi Uji-uji biokimiawi Lab. Mikrobiologi
Japan
Mengambil larutan dengan
3 Mikropipet Socorex, Swiss Lab. Mikrobiologi
volume  1000 µl
Biologix,
4 Tip Memindahkan larutan Lab. Mikrobiologi
Amerika
IWAKI Pyrex®,
5 Labu Erlenmeyer Tempat pembuatan media Lab. Mikrobiologi
Japan
IWAKI Pyrex®,
6 Gelas ukur Mengukur volume cairan Lab. Mikrobiologi
Japan
IWAKI Pyrex®,
7 Beaker glass Tempat preparasi media Lab. Mikrobiologi
Japan
Mengamati struktur hifa
8 Optilab Miconos Lab. Mikrobiologi
isolat dan untuk foto
Mengambil larutan yang
9 Pipet tetes Stera, Indonesia Lab. Mikrobiologi
volumenya tidak diketahui
Thermo electron
Mengukur derajat keasaman
10 pH meter coorpoeation/ Lab. Mikrobiologi
larutan atau media
Russel RL060P
Tipe EO 2140
11 Timbangan analitik (Ohaus Co,, Mengukur massa bahan Lab. Mikrobiologi
USA)
Refrigerated Hitachi-himac
12 Sentrifugasi Lab. Riset
centrifuge CR7
Mengamati mikromorfologi
13 Mikroskop cahaya Olympus C110 Lab. Mikrobiologi
isolat
Mengamati morfologi koloni
14 Mikroskop stereo Olympus SZ30 Lab. Mikrobiologi
isolat
Model HL36AE
(Hirayama
15 Autoklaf Manufacturing Sterilisasi bahan dan alat Lab. Mikrobiologi
Corporation,
Japan)
Mengeringkan kertas saring
16 Oven Memmert Lab. Mikrobiologi
dan miselium
Hotplate dan stirrer Ika® C-MAG Menghomogenkan media
17 Lab. Mikrobiologi
bar HS 10 atau larutan
18 Desikator - Menstabilkan suhu Lab. Mikrobiologi

Memeram biakan pada suhu

19 Inkubator
bio.unsoed.ac.id
Memmert
terkontrol
Lab. Mikrobiologi

20 Rotary evaporator Stuart RE300 Menguapkan pelarut Lab. Riset

Shimidzu/ UV Menentukan maksimum
21 Spektrofotometer Lab. Biokimia
1800 pigmen
22 Pembakar spirtus - Menciptakan suasana aseptis Lab. Mikrobiologi
Membuat cetakan isolat
23 Bor gabus - Lab. Mikologi
berukuran seragam
24 Rak tabung reaksi - Meletakan tabung reaksi Lab. Mikrobiologi
25 Jarum inokulum - Inokulasi biakan Lab. Mikrobiologi
26 Sprayer alkohol Nagata Untuk kerja aseptis Lab. Mikrobiologi
27 Object glass Sail brand Untuk pengamatan Lab. Mikrobiologi

45
 mikromorfologi pada
mikroskop cahaya
28 Cover glass Sail brand Pasangan object glass Lab. Mikrobiologi
Untuk memudahkan
29 Corong - Lab. Mikrobiologi
memasukkan larutan
National®
30 Kulkas Menyimpan media Lab. Mikrobiologi
model B22AF
31 Microwave Menumaster Memanaskan media Lab. Mikrobiologi
32 Kompor Listrik Rinai Proses Sokletasi Lab. Biokimia
33 Soxhlet extractor Pyrex Ekstraksi pigmen Lab. Biokimia

2. Bahan
No, Nama bahan Spesifikasi Kegunaan
1 Isolat aktinomisetes Isolat uji
Sebagai medium produksi pigmen isolat
2 Medium SCN 2000 ml
aktinomisetes
Sebagai medium produksi pigmen isolat
3 Medium YEME 600 ml
aktinomisetes
Sebagai medium produksi pigmen isolat
4 Medium Oatmeal 600 ml
aktinomisetes
5 Medium SA 100 ml Untuk uji hidrolisis amilum
Untuk uji kemampuan menghasilkan
6 Medium Urea Broth 50 ml
urease
7 Medium PA 100 ml Untuk uji hidrolisis protein
8 Medium MM + lemak 100 ml Untuk uji hidrolisis lipid
9 Medium SIM 50 ml Untuk uji produksi H2S
Sebagai medium tumbuh isolat
10 Medium TSA 50 ml
aktinomisetes
11 Medium Basal 600 ml Untuk uji penggunaan karbohidrat
12 Galaktosa 1g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi
13 Sukrosa 1g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi
14 Raffinosa 1g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi
15 Mannitol 1g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi
16 Arabinosa 1g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi
17 Xylosa 1g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi
18 KNO3 0,1 g Sebagai sumber nitrat
19 NaOH 2N Untuk menaikan pH larutan
20 HCl 2N Untuk menurunkan pH larutan
21 Nystatin Sebagai antijamur
22 Larutan A (asam sulfanilat) 10 ml Reagen dalam uji reduksi nitrat
23 Larutan B (alfanaftilamin) 10 ml Reagen dalam uji reduksi nitrat
24 Lugol’s iodine 10 ml Reagen dalam uji hidrolisis amilum
25 Serbuk Zn Indikator dalam uji reduksi nitrat
26 Alkohol 70% Desinfektan
27 Etil asetat Pelarut
28
29
Etanol 90%
Kertas Whatman No, 1
bio.unsoed.ac.id Pelarut
Untuk menyaring miselium aktinomisetes
30 Alumunium foil Penutup tabung
31 Spirtus Bahan pengisi Bunsen
32 Kapas Pembuat sumbat
33 Tisu Membersihkan atau mengeringkan alat
34 Label Labeling
35 Wrapper Pelapis

46
 Lampiran 3. Pengamatan Makroskopis Aktinomisetes

Isolat Hari ke- Koloni tampak atas Koloni tampak bawah

K-4B

14

U3-3B

bio.unsoed.ac.id
14

47
Lampiran 4. Tabel Pengamatan Morfologi Koloni Aktinomisetes

1. Isolat K-4B

Hari ke-
Karakteristik
2 4 6 8 10 12 14
Ukuran 1 mm 3 mm 4 mm 5 mm 6 mm 7 mm 7 mm
(sedang) (sedang) (besar) (besar) (besar) (besar) (besar)
Pigmentasi ke - ada ada ada ada ada ada
medium
Bentuk circular circular circular irregular irregular irregular irregular
Permukaan mengkilap mengkilap dan berbeludru berbubuk berbubuk berbubuk berbubuk
berbeludru
Elevasi flat crateriform crateriform flat raised raised raised
Margin entire entire entire undulate undulate undulate undulate
Miselium aerial putih putih krem krem krem krem krem
Miselium substrat kuning kuning kemerahan merah merah merah merah merah
Gambar atas koloni

Gambar bawah
koloni

bio.unsoed.ac.id

48
2. Isolat U3-3B

Hari ke-
Karakteristik
2 4 6 8 10 12 14
Ukuran 2 mm 3 mm 4 mm 4 mm 6 mm 6 mm 6 mm
(sedang) (sedang) (besar) (besar) (besar) (besar) (besar)
Pigmentasi ke - - ada ada ada ada ada
medium
Bentuk circular circular circular circular circular circular circular
Permukaan berbeludru berbeludru berbubuk berbubuk berbubuk berbubuk Berbubuk
Elevasi convex convex convex convex convex convex convex
Margin entire entire entire entire entire entire entire
Miselium aerial putih putih abu-abu muda abu-abu abu-abu abu-abu abu-abu
Miselium substrat kuning muda kuning muda kuning kuning-oranye kuning-oranye kuning-oranye kuning-oranye
Gambar atas koloni

Gambar bawah
koloni

bio.unsoed.ac.id

49
Lampiran 5. Gambar Hasil Uji Biokimiawi
Uji K-4B U3-3B

Hidrolisis
Amilum

Hidrolisis Lipid

Hidrolisis Kasein

bio.unsoed.ac.id
Hidrolisis Urea

Kontrol Kontrol

50
Reduksi Nitrat

Kontrol
K-4B U3-3B

Produksi H2S

Kontrol
Kontrol

Penggunaan
Raffinosa

Penggunaan
Arabinosa
bio.unsoed.ac.id

51
Penggunaan
Galaktosa

Penggunaan
Mannitol

Penggunaan
Sukrosa

Penggunaan
Xylosa
bio.unsoed.ac.id

52
 Lampiran 6.Produksi Pigmen pada Berbagai Medium Pertumbuhan

1. Isolat K-4B

Medium Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21

SCN

YEME

Oatmeal

bio.unsoed.ac.id

53
2. Isolat U3-3B

Medium Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21

SCN

YEME

Oatmeal

bio.unsoed.ac.id

54
Lampiran 7.Proses Ekstraksi Pigmen Aktinomisetes

1. Isolat K-4B
Medium pH 12 Setelah sentrifugasi pH 2

SCN

YEME

Oatmeal

bio.unsoed.ac.id

55
2. Isolat U3-3B
Medium pH 12 Setelah sentrifugasi pH 2

SCN

YEME

Oatmeal

bio.unsoed.ac.id

56
Lampiran 8. Tabel Biomassa Miselium Aktinomisetes

Bobot awal Bobot akhir Biomassa

Isolat Medium
(g) (g) (g)
SCN 0,0292 1,5792 1,5500
K-4B YEME 0,0292 1,2127 1,2127
Oatmeal 0,0292 1,5094 1,5094
SCN 0,0285 1,7111 1,6825
U3-3B YEME 0,0285 2,3044 2,2759
Oatmeal 0,0285 2,2887 2,2602

bio.unsoed.ac.id

57
Lampiran 9.Tabel Bobot Pigmen Intraseluler dan Ekstraseluler Aktinomisetes

1. Pigmen Intraseluler
Miselium setelah Pigmen
Isolat Medium Miselium (g)
ekstraksi (g) Terekstrak (g)
SCN 1,5500 0,6436 0,9064
K-4B YEME 1,2127 0,5718 0,6409
Oatmeal 1,5094 0,7915 0,7179
SCN 1,6825 1,2473 0,4352
U3-3B YEME 2,2759 1,7638 0,5121
Oatmeal 2,2602 1,7528 0,5074

2. Pigmen Ekstraseluler
Endapan setelah Pigmen
Isolat Medium Endapan (g)
ekstraksi (g) terekstrak (g)
SCN 0,0608 0,0317 0,0291
K-4B YEME 0,0667 0,0284 0,0383
Oatmeal 0,1247 0,0621 0,0626
SCN 0,0693 0,0226 0,0467
U3-3B YEME 0,1863 0,1007 0,0856
Oatmeal 0,2590 0,1036 0,1554

bio.unsoed.ac.id

58
Lampiran 10. Tabel Perbandingan Warna Ekstrak Pigmen dengan Standar
Warna Universal

Warna
Isolat Medium Intraseluler Ekstraseluler
pH 4 pH 7 pH 10
Red Red Red Red
SCN
10R 4/6 10R 4/8 10R 4/8 10R 4/6
Red Red Red Red
K-4B YEME
2,5YR 4/8 2,5YR 5/8 2,5YR 5/8 10R 4/6
Red Red Red Light red
Oatmeal
2,5YR 5/8 2,5YR 4/8 2,5YR 4/8 10R 6/8
Yellow Yellow P Pale yellow Yellow
SCN
2,5Y 8/6 2,5Y 8/6 2 2,5Y 8/4 2,5Y 7/8
U3- Yellow Yellow Yellow Reddish yellow
YEME
3B 2,5Y 8/6 2,5Y 8/6 2,5Y 8/6 7,5YR 7/8
Yellow Yellow Yellow Reddish yellow
Oatmeal
2,5Y 8/6 2,5Y 8/6 2,5Y 8/6 7,5YR 7/8

bio.unsoed.ac.id

59
Lampiran 11. PanjangGelombang Maksimum Pigmen Aktinomisetes

maks(nm)
Isolat Medium Intraseluler Ekstraseluler
pH 4 pH 7 pH 10
SCN 525,00 523,00 523,00 526,50
K-4B YEME 523,00 523,00 523,00 527,50
Oatmeal 523,50 523,00 523,00 526,00
SCN 452,80 403,40 403,20 363,20
U3-3B YEME 353,00 403,40 Not detected 373,60
Oatmeal Not detected 403,40 354,40 354,20

bio.unsoed.ac.id

60
 BIODATA PENULIS

Penulis bernama lengkap Eka Sindy Pradanti, dilahirkan

di Jakarta pada tanggal 04 Agustus 1992 dari ayah
Suparjo dan ibu Zaidah. Penulis merupakan anak
pertama dari dua bersaudara. Penulis saat ini bertempat
tinggal di Perumahan Griya Bukit Jaya blok M 8/16
RT/RW 005/027, Kecamatan Gunung Putri - Kabupaten
Bogor (16962). Penulis memulai pendidikan di TK Putra
07 Gunung Putri - Bogor lulus tahun 1998, kemudian
melanjutkan pendidikan tingkat dasar di SD Negeri
Tlajung Udik 02 lulus tahun 2004, jenjang tingkat menengah dilalui di SMP Negeri
01 Cileungsi lulus tahun 2007. Tahun 2010 penulis lulus dari SMA Negeri 01
Cibinong, Bogor dan pada tahun yang sama lulus Seleksi Nasional Masuk Perguruan
Tinggi Negeri di Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman.

Karya Ilmiah :
1. Usaha Pembuatan Sirup Jambe (Areca catechu L.) Kaya Manfaat, dan
Menyehatkan dengan Rasa yang Enak Serta Menyegarkan (Program
Kreativitas Mahasiswa, 2011)
2. Isolasi dan Karakterisasi Molekuler Aktinomisetes dari Sampel Tanah Asal
Kupang (Laporan PKL, 2012)
3. Evaluasi Kualitas Udara Ruangan Ditinjau dari Aspek Bakteriologis(Program
Kreativitas Mahasiswa, 2013)
4. Identifikasi Aktinomisetes Asal Tanah Rawa Segara Anakan Cilacap dan
Kemampuannya dalam Produksi Pigmen pada Berbagai Medium

bio.unsoed.ac.id
Pertumbuhan (Skripsi, 2014)

Kegiatan pengembangan diri yang dilakukan :

1. Peserta Kegiatan Orientasi Pengenalan Kampus (OSPEK) “SYNAPS”
Fakultas Biologi Tahun 2010
2. Pelatihan dan Pengembangan Karakter Mahasiswa (PKKM) UNSOED Tahun
2010
3. Asisten Praktikum Mikrobiologi Dasar Fakultas Biologi Unsoed Tahun 2012

61
 4. Asisten Praktikum Mikrobiologi Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan
Ilmu-ilmu Kesehatan Unsoed Tahun 2012
5. Praktik Kerja Lapangan (PKL) di LIPI Cibinong Bogor, 21 Januari – 22
Februari 2013
6. Asisten Praktikum Mikrobiologi Universitas Terbuka Tahun 2013
7. Asisten Praktikum Mikrobiologi Industri Fakultas Biologi Unsoed Tahun
2013
8. Koordinator Asisten Praktikum Mikrobiologi Kelautan Prodi Kelautan
Jurusan Perikanan dan Kelautan Fakultas Sains dan Teknik Unsoed Tahun
2013
9. Asisten Praktikum Mikrobiologi Dasar Prodi Manajemen Sumberdaya
Perairan Jurusan Perikanan dan Kelautan Fakultas Sains dan Teknik Unsoed
Tahun 2013
10. Asisten Praktikum Mikrobiologi Dasar Prodi Budidaya Perikanan Jurusan
Perikanan dan Kelautan Fakultas Sains dan Teknik Unsoed Tahun 2013
11. Kuliah Kerja Nyata (KKN) Posdaya Desa Karanggedang, Kecamatan
Sumpiuh Kabupaten Banyumas Universitas Jenderal Soedirman tahun 2013
12. Asisten Praktikum Bakteriologi Fakultas Biologi Unsoed Tahun 2013
13. Asisten Praktikum Mikrobiologi Dasar Fakultas Biologi Unsoed Tahun 2013
14. Asisten Praktikum Mikrobiologi Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan
Ilmu-ilmu Kesehatan Unsoed Tahun 2013
15. Asisten Praktikum Mikrobiologi Jurusan Kesehatan Masyarakat Fakultas
Kedokteran dan Ilmu-ilmu Kesehatan Unsoed Tahun 2014
16. Asisten Praktikum Mikrobiologi Ligkungan Fakultas Biologi Unsoed Tahun
2014
17. Asisten Praktikum Virologi Fakultas Biologi Unsoed Tahun 2014

bio.unsoed.ac.id
Pengalaman Organisasi dan Kepanitiaan :
1. Anggota Unit Kegiatan Mahasiswa Bioma Fakultas Biologi Unsoed Tahun
2010-2011
2. Kepanitiaan Expo Unit Kegiatan Mahasiswa BIOMA Fakultas Biologi Tahun
2011
3. Kepanitiaan Malam Keakraban BIOMA sebagai Sie. Acara Tahun 2011

62
4. Kepanitian LOKOMOSI (Lomba Kreasi Bioma Poster dan Fotografi) Tahun
2011 sebagai sie Publikasi Dekorasi dan Dokumentasi
5. Sekretaris Umum Unit Kegiatan Mahasiswa Bioma Fakultas Biologi Unsoed
Tahun 2012
6. Kepanitiaan Expo Unit Kegiatan Mahasiswa BIOMA Tahun 2012
7. Kepanitiaan Malam Keakraban BIOMA sebagai Sie. Acara Tahun 2012-2013
8. Kepanitiaan Lomba Fotografi dan Desain Grafis Tahun 2012
9. Divisi Usaha dan Dana Unit Kegiatan Mahasiswa Bioma Fakultas Biologi
Unsoed Tahun 2013

bio.unsoed.ac.id

63