Uji Antidiabetes

Secara In Vitro
NOV 10

Posted by Nadjeeb
Uji Efek Antidiabetes
Uji efek antidiabetes dilakukan pada ekstrak,
setelah itu dilanjutkan pada tiap isolat yang
diperoleh.
Preparasi Ekstrak
Sampel ditimbang sebanyak 2 mg dan dilarutkan
dengan 200 µL dimetil sulfoksida (DMSO).
Sampel di pipet 5 µL dan diencerkan dengan 200
µL dapar fosfat pH 7. Sampel dibuat dalam
berbagai konsentrasi yaitu 3,125 ppm, 6,25 ppm,
12,50 ppm dan 25 ppm.

Preparasi Enzim
Larutan enzim dibuat dengan melarutkan 1,0 mg
α-glukosidase dalam 100 ml dapar fosfat pH 7
yang mengandung 200 mg bovin serum albumin.
Sebelum digunakan sebanyak 1 mL larutan enzim
tersebut diencerkan 25 kali dengan dapar fosfat
pH 7.
Pengujian Blangko
5 µL DMSO ditambah dengan 495 µL dapar
fosfat pH 7 dan 250 µL 20 mM p-Nitrofenil α-D-
glukopiranosa (PNP), blangko diinkubasi selama
5 menit pada suhu 37oC. Kedalam sampel
ditambahkan 250 µL enzim yang telah
diencerkan, sampel diinkubasi kembali selama 15
menit pada suhu 37oC. Setelah masa inkubasi
selesai ditambahkan 1000 µL 200 mM Na¬2CO3.
Sampel diukur absorbansinya dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang 400 nm.
Pengujian Sampel
5 µL sampel ditambah dengan 495 µL dapar
fosfat pH 7 dan 250 µL 20 mM p-Nitrofenil α-D-
glukopiranosa (PNP), sampel diinkubasi selama 5
menit pada suhu 37oC. Kedalam sampel
ditambahkan 250 µL enzim yang telah
diencerkan, sampel diinkubasi kembali selama 15
menit pada suhu 37oC. Setelah masa inkubasi
selesai ditambahkan 1000 µL 200 mM Na¬2CO3.
Sampel diukur absorbansinya dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang 400 nm.
Pengujian Sampel Tanpa Enzim
5 µL sampel ditambah dengan 495 µL dapar
fosfat pH 7 dan 250 µL 20 mM p-Nitrofenil α-D-
glukopiranosa (PNP), sampel diinkubasi selama 5
menit pada suhu 37oC. Kedalam sampel
ditambahkan 250 µL dapar fosfat pH 7 100 mM,
sampel diinkubasi kembali selama 15 menit pada
suhu 37oC. Setelah masa inkubasi selesai
ditambahkan 1000 µL 200 mM Na¬2CO3.
Sampel diukur absorbansinya dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang 400 nm.
Perhitungan Persen Inhibisi Dan IC50
% Inhibisi dihitung dengan rumus = {[Absorban
Blangko-Absorban Sampel]: Absorban Blangko}
x 100%
IC50 dihitung dengan menggunakan persamaan
regresi linear, konsentrasi sampel sebagai sumbu
x dan % inhibisi sebagai sumbu y. Dari
persamaan
y = a + bx dapat dihitung nilai IC50 dengan
menggunakan