PREDMET: STRUČNA PRAKSA

UZIMANJE I TRANSPORT UZORAKA NA MIKROBIOLOŠKU

ANALIZU

PROF. DR. AMELA DEDEIĆ-LJUBOVIĆ

1
Opšta pravila kod uzimanja uzoraka

Sve posude u kojima se uzimaju uzorci za mikrobiološku analizu

i svi instrumenti koji se za to koriste, moraju biti sterilni i ne smiju sadržavati ni traga
dezinfekcionih sredstava, antibiotika ili hemoterapeutika.

Aseptična tehnika je neophodna ne samo da spriječi kontaminaciju, već i da zaštiti pacijenta.

Nikada se u istu posudu ne smiju uzimati dva različita uzorka od istog bolesnika npr. feces i
urin.

Uzorak za mikrobiološku obradu treba uzimati što ranije u toku bolesti, prije primjene
antibiotske terapije. Uzorak se može slati i radi provjere efikasnosti specifične terapije.U tom
slučaju na uputnici naznačiti koje je sredstvo bolesnik primao, u kojim dozama i koliko dugo.
Uzorak uzeti sa mjesta infekcije, u pravo vrijeme i u dovoljnoj količini, izbjegavajući
kontaminaciju normalnom florom.

Kod sumnje na anaerobne uzročnike infekcije koristiti transportnu podlogu.

Uzorak treba što je moguće prije poslati u laboratorij.

Sterilne tjelesne tečnosti; likvor, krv, urin, sputum, aspirat, bronholavat, gastrolavat, treba
transportovati do 30 min. od momenta uzimanja. Ukoliko nije moguće uzorak odmah
transportovati, držati ga u frižideru: uzorke urina, krvi na serološku analizu, sputum, aspirat,
bronholavat, gastrolavat, briseve rana i uzorke stolice.
Na sobnoj temperaturi držati do transporta uzorke liquora i krvi na kulturu (bočice za
hemokulturu).
Ime bolesnika treba ispisati i na posudi u kojoj je uzorak, kako bi se izbjegle eventualne
zamjene.

Svaki uzorak se šalje sa propratnom listom na kojoj se nalaze svi podaci bolesnika
napisani čitko sa pečatom i potpisom ljekara koji traži analizu.

Propratnica mora sadržavati:

● naziv klinike ili odjela koji šalje uzorak

● lične podatke bolesnika

● starost bolesnika

● matični broj-broj istorije bolesti

● uputnu dijagnozu

● terapiju koju bolesnik prima-antibiotsku

● naziv analize koja se traži

2
● datum i vrijeme uzimanja uzorka

● pečat klinike

● potpis ordinirajućeg ljekara

Uzorci koji su suspektni kao visoko infektivni moraju biti posebno obilježeni oznakom za
visoki rizik tj. žutom trakom.

Oznaku visoki rizik (žuta traka) trebalo bi da imaju slijedeći uzorci:

● sputum na M. tuberculosis;

● uzorci fecesa koji mogu sadržavati Vibrio cholerae ili Salmonella typhi;

● tečnost ulcusa ili pustule, koji mogu sadržavati bacil antraksa ili treponeme;

● uzorci pacijenata sa suspektnom HIV infekcijom, hepatitisom,

virusnom hemoragijskom groznicom, kugom, oboljeli od SARS-a i sl.

Odmah nakon uzimanja ovi uzorci bi se trebali upakovati u plastičnu vrećicu ili posudu sa
čvrstim poklopcem.

Propratnicu bi trebalo odvojiti od uzorka.

3
TEHNIKA UZIMANJA UZORAKA

Krv

Krv za hemokulturu uzima se iz kubitalne vene pod najstrožijim klauzulama asepse, u

odgovarajuće sterilne bočice sa podlogom (BACTEC; aerobna, anaerobna i pedijatrijska) i
šalje odmah u laboratorij. Ukoliko to nije moguće, treba je do transporta držati na sobnoj
temperaturi. Preporučuje se uzeti dva uzorka. Prvi kod skoka temperature ili još bolje prije
skoka temperature kada pacijent osjeća jezu (groznicu) a drugi uzorak 4-6 sati kasnije.

Postupak uzimanja krvi za hemokulturu

Prebrisati mjesto 70% alkoholom i ostaviti da djeluje 30 sec. Nanijeti jodnu tinkturu u
koncentričnim krugovima počevši od centra prema periferiji (alternativna metoda za pacijente
koji su osjetljivi na jod: 70%- tnim alkoholom djelovati 60 sec.) Sačekati 30 sec da se mjesto
osuši i onda pristupiti venepunkciji bez ponovnog palpiranja vene.
Otkloniti metalni poklopac bočice za hemokulturu i prebrisati sa 70% alkoholom. Drugom
sterilnom iglom ubrizgati krv u bočice (aerobna i anaerobna) u svaku po 5 ml.

Postupak uzimanja krvi za serološke reakcije

Koristi se zatvoreni tj. vakuum sistem za vađenje krvi u epruvetu bez antikoagulansa. Ako se
ne može odmah transportovati treba se do momenta slanja čuvati u frižideru na + 4˚ C.
Za većinu seroloških pretraga potrebno je oko 5 ml krvi.
Poštovati pravilo parnog uzorka. Prvi uzorak uzeti 10-14 dana od početka bolesti, a drugi 2
sedmice nakon prvog. Ikterični i hilozni serumi nisu pogodni za ispitivanje.

Postupak uzimanja krvi za molekularnu dijagnostiku

Za PCR analizu, uzeti krv vakuum tehnikom. Ako je u pitanju DNA virus, krv uzeti u
epruvetu bez antikoagulansa, ako je u pitanju RNA virus, krv uzimati u epruvetu sa
antikoagulansom. Ikterični i hilozni serumi nisu pogodni za ispitivanje.

Krvni razmaz

Za spravljanje krvnog razmaza uzima se periferna krv.

Krvni razmaz spravlja osoba koja je uzela krv i to na sljedeći način:
Mjesto punkcije prebriše se 70% alkoholom. Sačeka se da se mjesto osuši i u njega se ubode
Frankovom iglom ili iglom od šprice. Bez pritiskivanja se čeka da se pojavi kapljica krvi.
Prva se kapljica obriše sterilnom vatom i čeka da se javi druga. Na nju se prisloni čisto
predmetno staklo tako da ona ostane na njemu.

Drugim predmetnim staklom, kome je jedan ugao odbijen da bude uže pravi se razmaz tako
što se rubom dotakne kap krvi i pod uglom od 45° razvuče do kraja pločice na koju je uzeta.

Razmaz mora biti jednoličan. Njegovi rubovi treba da budu od ruba predmetnog stakla
udaljeni najmanje nekoliko milimetara. Radi sigurnosti napraviti nekoliko razmaza (3-4).

4
Gusta kap

Pravi se tako što se na predmetno staklo prisloni prst iz koga je uzeta krv kako je prethodno
opisano i njime se malo protrlja. Na pločici treba da ostane u sredini gusta kap a oko nje zona
razmazane krvi.

Liquor
Uzeti 1-5 ml uzorka dobivenog punkcijom u sterilnu epruvetu i poslati u laboratorij odmah.
Poželjno je obavijestiti mikrobiološki laboratorij prije izvođenja punkcije.

Uzorak iz guše
Uzima se pomoću sterilnog brisa tako da se rotacijom brisa prebrišu oba nepčana luka i
tonzile, a onda vrhom brisa stražnji zid farinksa.Jezik treba pritisnuti špatulom.

Uzorak iz nosa
Uzima se pomoću brisa. Pri tome treba paziti da se ne dotaknu zidovi atrijuma. Bris treba
uzeti ispod i iznad donje i gornje nosne školjke sve do nazofarinksa.

Uzorak iz nazofarinksa
Uzima se žičanim brisom. Bris se uvlači i lagano gura sve dublje dok se ne osjeti otpor, zatim
se rotacijom protrlja sluzokoža nazofarinksa i bris oprezno izvadi pazeći da ne dotakne zidove
nosnog atrijuma.

Sputum
Ispljuvak se uzima u sterilne posude sa širokim grlom koje se dobro zatvaraju (flakon).Uzima
se jutarnji sputum prije jela. Bolesnik treba prvo da ispere usta sterilnom fiziološkom
otopinom, a zatim da iskašlje sadržaj iz dubljih dijelova respiratornog trakta u pripremljenu
posudu. Ukoliko je sekret gust, iskašljaj se može olakšati udisanjem aerosola (sterilne
fiziološke otopine). Uzima se oko 5ml sputuma. Preporučuje se da se uz sputum uzme bris
guše i nosa.

Uzorak iz uha
Uzima se kroz spekulum pomoću sterilnog brisa.
Ukoliko je moguće uzeti ili aspirirati sekret u sterilnu epruvetu.

Uzorak iz oka
Uzima se sterilnim brisom iz unutrašnjeg ruba kantusa prije upotrebe antibiotika.
Transportovati što prije do laboratorija, jer sekret iz oka sadrži antibakterijske enzime.

Bris rane
Uzeti sadržaj sterilnim brisom. Ukoliko nema sadržaja, navlažiti bris sterilnim fiziološkim
rastvorom. Ukoliko je tkivo ulcerozno i nekrotično aspirirati sadržaj sa zida ulcusa sterilnom
iglom i špricom.

Sterilne tjelesne tekućine

dobivene punkcijom: žuč, pleuralni, perikardijalni, peritonealni eskudat, tekućina iz zglobova
i sinusa uzeti aspiriranjem špricom 2-3 ml ili više i ako je moguće prije uzimanja uzorka
očistiti spoljašnji dio. Ukloniti iglu, zatvoriti špricu i transportovati u laboratorij odmah.

5
Sadržaj apscesa
Aspirirati iz najdubljeg dijela lezije izbjegavajući kontaminaciju sa površine rane; ako je
uzorak uzet u toku operativnog zahvata za kulturu se uzima i dio zida apscesa.Uzeti oko 5 ml
sadržaja.

Urin
Uzima se prvi jutarnji urin, tehnikom srednjeg mlaza, kateterizacijom, ili suprapubičnom
aspiracijom.
Prije uzimanja uzorka neophodno je oprati se mlakom vodom i sapunom i posušiti. Žene se
trebaju prati od sprijeda prema natrag da bi se izbjegla kontaminacija.
Prvi mlaz urina ispustiti, a slijedeći uzeti u epruvetu.Uzeti 1-10 ml urina u sterilnu epruvetu
( tj. ne više od 2/3 epruvete).

Transportovati urin do mikrobiološkog laboratorija odmah ili ga pohraniti u frižider na + 4°C.

Maksimalno vrijeme pohranjivanja u frižideru iznosi 24 h. Šalju se tri uzorka urina u tri dana.

Uzimanje urina pedijatrijskih bolesnika

Za skupljanje urina kod male djece koriste se pedijatrijske vrećice, koje se stavljaju nakon
pranja genitalija i odstranjuju odmah nakon dobijanja urina. Ako se urin ne pojavi u roku od
45 min. stavlja se nova kesica nakon ponovnog pranja genitalija.

Sekret uretre

Uzorak je najbolje uzeti ujutro prije prvog mokrenja ili najranije 1 h nakon što je bolesnik
urinirao.

Pretraga na Naisseria gonorrhoeae i na genitalne mikoplasme:

Ako postoji iscjedak treba ga pokupiti na bris i staviti u transportnu podlogu, posebno za
N.gonorrhoeae, a posebno za genitalne micoplasme.

Kod žena, ako nema purulentnog eksudata cervixa i uretre, za izolaciju gonokoka treba uzeti i
analni bris i to pažljivo ga rotirajući u analnom kanalu i ostavljajući ga za 20-30 sec na
mjestu.

Kod homoseksualaca se takođe uzima analni bris kod pretrage na N. gonorrhoeae.

Ako nema jako izraženog iscjetka, treba vanjsko ušće uretre oprati sapunom i vodom
(sterilnom fiziološkom otopinom) i tankim brisom ući dva do tri cm u uretru, nježno obrisati
kružnim pokretom, staviti u odgovarajuću epruvetu i poslati u laboratorij.

Pretraga na Chlamidia trachomatis

Kod muškaraca:
Prvim se brisom ukloni iscjedak iz uretre. Bris se ili odbaci ili se upotrijebi za pretragu na
N.gonorrhoeae ili genitalne micoplasmae ili pak za prikaz prisutnosti upalnih ćelija.
Zatim se drugim tankim brisom uđe 2-3 cm u uretru i obriše se snažnim pokretom kako bi se
skinuo površinski sloj epitelnih stanica, ali pri tom ne smije biti krvarenja.

6
Za genitalne micoplasme bris je potrebno inokulirati u transportnu podlogu (uroniti bris u
transportnu podlogu, otkloniti ga, zatvoriti transportnu podlogu ) i takvu poslati u
mikrobiološki laboratorij.

Kod žena:
Za cervikalni bris se koristi set za Chlamidiu koji se može dobiti u mikrobiološkom
laboratoriju.
Četkicom koja se nalazi u setu otkloniti sadržaj cervixa, ( pri tom ne smije biti krvarenja ),
zatim sterilnim brisom, skinuti sloj epitelnih stanica rotirajućim pokretom.
Takođe rotirajućim pokretom nanijeti bris na obilježeno mjesto na predmetnom staklu koje se
nalazi u setu. Sačekati da se osuši pa to fiksirati fiksativom koji je takođe u setu. Fiksativ se
aktivira jačim pritiskom prstiju na sredinu ambalaže.
Predmetno staklo vratiti u kartonsku ambalažu i poslati u mikrobiološki laboratorij.

Stolica na bakteriološki pregled

Stolica se uzima pomoću kašičice koja je pričvršćena na zapušač flakona.Treba uzeti stolicu
sa više mjesta (birati krvavo-sluzave dijelove stolice). Pacijentu treba naglasiti da izbjegava
kontaminaciju fecesa sa urinom.

Uzeti 1-2 g stolice (puna kašičica koja je pričvršćena na zapušač) u flakon koji mora biti čist.
Uzorak dostaviti u laboratorij što je moguće prije. Ako nije moguće odmah dostaviti uzorak
potrebno pohraniti u frižider na + 4°C, najduže 24 h.

Ako nije moguće poslati feces, može se uzeti i bris rektuma, iako se smatra inferiornijim
dijagnostičkim materijalom. Uzima se tako što se bris ubaci kroz rektalni sfinkter, rotira i drži
u rektumu oko 10 sec.
Pri tome treba voditi računa da se izbjegne kontaminacija uzorka sa bakterijama kože anusa.

Ukoliko je uzorak potrebno duže transportovati do mikrobiološkog laboratorija: treba ga

prenijeti brisom u epruvetu sa transportnom podlogom.

Kod sumnje na koleru 1 ml uzorka se prenese u 10 ml sterilne peptonske vode i šalje u roku
od 8 sati od momenta uzimanja.

Peptonska voda se može dobiti u mikrobiološkom laboratoriju.

Stolica na viruse

Tečni uzorci stolice pedijatrijskih bolesnika

Da bi se spriječilo upijanje tečne stolice u pelenu ista se preokrene te tako upotrijebi, ili se
unutar čiste pelene stavi sloj plastične folije.

Kao alternativa se može upotrijebiti čista pedijatrijska kesica za urin koja se stavi preko
analne regije.

Tečna stolica upijena u pelenu se može prikupiti pritiskom pamučnih briseva na pelenu dok se
bris potpuno ne natopi stolicom. Preporučljivo je upotrijebiti 2 ili više briseva.

7
Kod odraslih, uzorci stolice se uzimaju na isti način kao i za bakteriološki pregled.

Brisevi rektuma se ne bi trebali slati u laboratorij jer bi mogli sadržati nedovoljno viriona
potrebnih za detakciju.

Ukoliko se odmah ne transportuju uzorke čuvati na + 4˚C.

Materijal se treba sakupiti po mogućnosti do 48 h od pojave simptoma gastroenteritisa.

Stolica na parazitološki pregled

Mora biti svježa, poslana u adekvatnoj providnoj ambalaži

( plastični flakon ) i u dovoljnjoj količini ( 1/3 ambalaže ).

Šalju se tri uzorka sa razmakom od 2-3 dana i to prije drugih dijagnostičkih procedura
( irigografije, holecistografije).
Uzorak dobiven iz crijeva sigmoidoskopijom ili rektoskopijom se odmah šalje na pregled.

Provokacija stolice

Radi se kada se u običnoj stolici ne nađu paraziti.

Najbolje je pacijentu dati 1-3 velike kašike gorke soli (MgSO4)
u zavisnosti od starosti bolesnika.
Popije se sa 1-3 čaše mlake vode uvečer, prije spavanja. Uzima se zadnji tečni dio stolice i
šalje u mikrobiološki laboratorij odmah.

Veći crvi i proglotide se mogu poslati u istoj ambalaži kao i stolica:

u fiziološkoj otopini, ili 70% alkoholu ili 10 % formalinu.

Analni otisak

Uzima se ljepljivom celofanskom trakom, ujutro rano prije defekacije.

Celofanska traka se zalijepi preko analnog otvora zatim preko predmetnog stakla i pošalje u
laboratorij umotana u mekani papir.
Kod male djece se otisak može uzeti i sa labia maiora.
Celofanska traka se dobije u mikrobiološkom laboratoriju.

Uzorci na mikološku analizu

Ljuske i dlake

Uzorci se uzimaju sterilnom pincetom. Na predmetno staklo laganim pokretima se sastružu

ljuske, pažljivo, da se uzorak ne rasipa. Zatim se prekrije drugim predmetnim staklom,
pričvrsti flasterom sa obje strane (da se ne pomjera). Nije potrebno slati cijelu dužinu dlake,
važno je poslati korijen i 2-3 cm dlake.

Za uzimanje brisa oko nokatne ploče i ljuski sa kože i nokta,

radi lakšeg uzimanja uzorka, sterilni bris prethodno uroniti u sterilni fiziološki rastvor.

8
Uzorak stolice na mikološku analizu uzima se na isti način kao i uzorak stolice na
bakteriološku analizu, s tim da se ne biraju krvavo sluzavi dijelovi stolice.

Ako nije moguće odmah dostaviti uzorak u laboratorij, ostavlja se u frižider na + 4˚C,
najduže 24 h.

Brisevi na mikološku analizu uzimaju se na isti način kao i za bakteriološku.

OPŠTA PRAVILA ZA TRANSPORT UZORAKA

-Za transport uzoraka najpogodniji su plastični ili metalni kontejneri, koji su iznutra
pregrađeni, tako da svaka vrsta uzorka ima poseban pregradak. Kontejnere je neophodno
redovno čistiti i dezinfikovati. Dezinficijens za svakodnevnu upotrebu treba da ima
koncentarciju od 1 g/l hlora (0,1%). Jača koncentracija koja sadrži 5 g/l hlora (0,5%) se
preporučuje kod veće kontaminacije i prisustva veće količine organskih materija. Rastvor
treba biti svježe pipremljen, a dezinfekciju treba izvršiti prebrisavanjem.

-Posude u kojima se uzimaju i transportuju uzorci ne smiju biti oštećene ili zaprljane
uzorkom izvana. Svaki uzorak mora biti propisno zatvoren.

-Uzorak za mikrobiološku analizu ne smije se nositi u ruci, nazaštićen od loma i prosipanja

prilikom transporta.

-Ako je uzorak tečnog karaktera za zaštitu koristiti materijal koji ima sposobnost apsorbcije u
slučaju da dođe do pucanja ambalaže.

-Osoba koja transportuje uzorke mora biti adekvatno zaštićena što podrazumijeva radni mantil
i rukavice.