redad de wejas, ef que son idos. Es. ae male = ito, ign. = Capitulo 10 te Las ma- bez. - * © vials Genética microbiana: itituir ua ee sot Funci6n de los genes y mutacion oe a GaN ie roel cae ener eeen nero rer In Fraen- que determina, a traves del proceso de transeripcion, la secuencia de nucledtidos de una Plenum molécula de RNA, 9 bien, a traves de los procesos de transcripcion y traduccion, la se- acterio- genes es una molecula de proteina: en tales casos, 1a molecula de RNA. Hamada RNA - de un total de unos 3500, en el casode E. coli). Las moleculas de RNA producidas por estos genes se deaominan RIVA estable y comprenden los RNA de tansferencia (tRNA) ¥ los RNA componentes de los ribosomas (rRNA). Los RNA estables no puede actuar como. moldes para la traduccion, ophage EL GENOMA BACTERIANO La mayoria de los genes bacterianos estan codificados en una sola molecula circular, grande. de DNA. el genforo bacteriano. En, coli esta molecula tiene aproximadamente ‘iimm de circunferencia y una masa molecular relativa de 2,56 X 10": es decir que contiene unos 3.8 X 10" pares de kilobases (kb), La mayoria de las bacterias contienen geaoforos {que tienen aproximadamente el mismo tamano que el de E. coli, pero en casos espe- Giales existen variaciones significativas (tabla 10.1). Generaimente el tamano del geno foro procariotico esta en correlacion con la fisiologia o la.complejidad morfologica de ta celula. Por ejemplo, el genoforo de Desulfovibrio un aerobio estricto con capacidad meta- bolica relativamente restringida, tiene un tamano inferior a la mitad del genoforo de E. coli 251 + Ricsetncte gia sped ee, Ly r Pogee ¥ sxeirec Town Le Engel Page A. Candee S Meek Ve ANKE BL Ane eddEl genoforo de algunas cepas de Mycoplasma (capitu- o 25), que carecen de pared celular y son metabolica- ‘mente sencilla, poseen un genoforo cinco 0 seis veces menor que el de E. coli. Por 2l contrario, el penoforo de Myxococcus xanthus (capitulo 18), que tiene un ciclo de desarrollo complejo, es aproximadamente una vez y me- dia mayor que el gonoforo de E. coli. Sin embargo, los, mayores genoforos procarioticos encontrados hasta el ‘momento son los de la cianobacteria Calochrix que tienen un tamafo tres veces mayor que el gendforo de E. coli Catothrix tiene un ciclo de desarrollo complejo si se ‘ompara con la mayoria de los procariontes, pero esta ‘complejidad no puede explicar por si solaeltamanode su gendforo ya que ciertas especies de Anabaena que estan estrechamente relacionadas con Calothrix y parecen .gualmente complejas, tienen gen6foros que son solo l- sramente mayores que el de E. coli Admitiendo que la masa molecular de una proteina, bacteriana de tipo medio es de 45 000, se puede calcular ‘que el promedio del gen que la codifica tiene unos 1,1 kb de longitud y por ello que el genoforo de E. coli tiene capacidad suficiente para codificar unos 3500 genes. Sin embargo, no esta nada claro que el genoforo de E.coli contenga tantos genes. Hasta ahora solo se haa identifi ado unos 1000 genes en al genoforo de esta bacteria, que es la que se ha estudiado mas meticulosamente genes corresponden a la mayoria de los enzimas requeridos para todas las reacciones conocidas encargadas de proporcionar combustible ala célula, alas reaceiones biosintéticas de polimerizacion y ensamble, asi como a las proteinas estructurales y las asociadas con la motili- dad, {as respuestas por tactismo y los mecanismos de transporte. Esta discrepancia de unos 2500 genes entre lacapacidad codificante y los genes identificados podria ser un verdadero reflejo del numero de genes bacteria- ‘0s, (correspondiendo, por lo tanto, afunciones eelulares {que atin quedan por descubri), o bien indicar que el au- ‘mero de genes que contiene el genoforo podria ser signifi- sativamente menos de 3500 porque el genoforo podria presentar regiones que no contienen genes. Todavia no sha identificado ninguna de estas regiones y su existen- sia no parece verosimil ya que, si verdaderamente est- vieran carentes de funcion, habrian supuesto una des- ventaja evolutiva para la célula. ‘No tados los zones bacterianos estan codificados den- two del genoforo. Muchas bacterias, pero no todas, con- tienen una o mas moleculas eireulares pequenias de DNA, Namadas pldsmidos, Estos elementos, cuyo tamafio va ioticos unsolo Ge unos equeio tienen “ado los cise ‘mo una rel ge- es que iframe namo «ra for- > Este sato de sypa ciona lama genie la fre ‘orma- ancion, os BHD ons le ra \ ema spe 20 = Lage oe sae ‘eo gine 7/5 2 2) rage va Chap Mitek a # Jad 3 nat » a * A wae Kt aor 5505 (104 20-4 aot ive J poe Une "GD. WD soem | bere FIGURA 101 Localizsign flatva de genes que codifican enzimas en las rues metabieas. en las gendoras de (al Escherichia col o Salmonella unitaslam (01 Sacillossubtlis yc) Pseudomonas aeruginnsa, Ca daaignscion Ge ins ganesimpieados en asrutae oiosintsteas 2 3°. (inina ar. nmingeeidos arometcos: be, botna’ eye. csteina gy. glcin: gua. guanina: hrs. histidine: Hv, Yealeucina-valin: le. ina, isine: met metionna. phe, fenlalasine: pro, proina pur, purse pyr, okemsina ser sina thiamin tr. reanins: thy TEU uiptatane ye, roana. Los gones atdenados en operones ea rapresentan raumdos por una lina Horzonial 0 vertca as facnat indian fa Urecen Ge la wanseneién, Segun B.. Dachmann sLinkege Map of Etcheriehis col, Eaion 7», Micriol. Rov. 47. 180 (1905;0°3 Hornerys.A Hoch, Tha avian subtis Chromosome.-Mierobiol Rev 44,57 (1960): yP.L Royia.H Mstsumotoy 8 W Hottowan, senate Crcutenty ofthe Pseudomonas eruginasa PAO Chromosomes J. Becton), 145, 148 (19810.284 alin y que porlo tanto requieren una regulacién de la ex- presi similar, reduce el nimerode sistemas reguladores. Como se expuso en elcapitulo 5, laorientacion de un promotor en el gendforo determina que cadena (la cade~ na weon sentido») sera transerita y por lo tanto la direc cionen la que vaa tener higarla ranscripeion. No parece haber preferencia en cuanto a cuil de las cadenas del DNA genoforico va aservirde cadenacon sentido: endi- ferentes puntos dl genoforo una cadena u otra son util zadas aparentemente con igual probabilidad. Se ha determinade la posicion relativa de varies ge- res en los genoforos bacterianos. La bacteria mejor es- tudiada en este aspecto (asi como en la mayor parte de otros) es Escherichia cali, Como ya se ha dicho, en esta bacteria ha sido determinada la localizacion relativa en el genoforo de mas de 900 senes diferentes (es decir, s2 han mapeado). Un numero de genes ligeramente infevior ha sido mapeado en el gendforo de la bacteria Salmone. Ua typhimurium, jatimamente relacionada, En el ge- noforo de Bacillus subrilis se han mapeado mas de 300 tenes y en el de Pseudomonas aeruginosa unos 100 genes. Tambien se han construido mapas geneticos me- ‘08 complejos de diversas otras bacterias Es posible hacer ciertas generalizaciones al compa. rar varios mapas de ligamiento de genoloros bacterianos 2.10.1). A gran escala no existe ningun parecido apreciable entre los mapas gensticos debacterias tan dis- tantes como Escherichia coli, Bacillus subtilis y Pseu domonas aeruginosa, pero con frecuencia el ordena” siento de penes dentro de operones homologos, por eet plo en los que codifican la biosintesis del eiptOTanOr es notablemente similar. La distribucion de los genes ena sen6foro de bacteras intimamente celacionadas, como por ejemplo tas del grupo enterica, es bastante sim. lar, pero se desconoce la presion selectiva que conser. vael orden de los genes. Con gran probabilidad, elre- cuenteintercambio genetico no constitaye ana de-estas presiones selectivas porque E. coll y S. typhimurium {que divergen lo suficiente con respecto a la secuencia de bases en genes homologos como para hacer que lare- combinaciéa sea exiremadamente rara, todavia tienen unorden casi idéntico en los genes nomologos de sus ge- noforos. Sin embargo gran parentesco entre bacterias 0 esti siempre asociado a una similar distribucion de los genes en el genoforo. Por ejemplo, no existe semejanza aparente entre Pseudonomas aeruginosa y Pseudomo~ nas putida aunque ambas especies pertenecen al misino srupo de pseudomonas fluorescentes Ta disposicion de los genes en el genoforo de este il- timo organismo es muy sorprendente, por presentar una sagrupacion supraoperonica de genes que codifiean fun- ciones metabolicas similares, es dect, ls genes que co- difican funciones biosintticas estan restringidos en gran ‘manera auna region de genoforo y los que codifican fin- Genética microbiana: Funcidn de los genes y mutacién -B. Duplicaciones EPC. Inversiones Zs _D. Inserciones ©, Translocaciones wae {CROLESIONES HL pcginituctons de pares de bases —® (ansicones y eansversiones) (Nesta > Con sentido errno 5 Sirsemido B, Por desfase 1 Hot? 210-2 jemplo, uanosina-citocina (C-G)], se denomina muta- por sustituciom de un par de bases. A causa de las fiferencias fundamentales en los mecanismos de forma- fon, las mutaciones por susttacion de bases se subdiv den en mutaciones de iransicion y de transversion de pendiendo de si una base purinica de un par se cambi Dor oira base purinica transicion) o bien por una base Fimidinica (transversion) (figura 10.2), ‘Las macrolesiones abazcan una sran variedad de cam- biosen el DNA: la completa eliminacion de unseemento eDNA (delecién: a replicacion en tandem de un ses- mento de DNA (duplicacidn la inversion de un see mentode DNA (inversién): la introduccion de un nuevo gegmento de DNA dentro de una secuencia ya existente {inserciin) y el desplazamicnto de un segmentode DNA {ou sitio del genoma (translocacién). Solo recientemente se ha advertido la elevada fre- ‘euencia con que se praducen las duplicaciones porque, a ‘menos que se produzca totalmente dentro de un solo gen operon, no causa la pérdida de ainguna funcion gene tice. Aproximadamente una celula de cada mil leva una copia duplicada de un gen cualquiera porque las ccc JAN seuss: Susttcionse do pares de base tas tossussnes de ae purine Serava pronto. 9 na Srimire porove promi arr ‘eens, se taman sranncones bor na piimina, 0 neevesa <= Transicionos = tranevorsiones fica mierobiana: Funcién de los genes y mutacién 285 duplicaciones se forman con una frecuencia elevadisi- ‘ma, pero solo existen de manera transitoria, porque tam- bien se pierden con una alta frecuencia. (Los mecanis- ‘mos mediante los cuales se forman y se pierden las dupli- ccaciones desempenan una funcion importante en la evo- lucion porque proporcionan un mecanismo mediante el cual se incorpora DNA aicional al geneforo de una calula. Consecuencias de la mutacién El conjunto completo de genes codificados dentro de un. penoma constituye el genotipo de una célula; los produc- tos expresados de estos genes y sus actividades consti- tuyen el fenotipo. Las mutaciones cambian el genotipo de Ia celuta por los caminos discutidos en la seccion pre- cedente; también puede afectar al fenotipo de la célula por una gran variedad de caminos que varian desde un cambio no detectable hasta Ia letalidad. Consideremos en primer lugar las posibles conse- cuencias fenotipicas delas mutaciones porsustitucion de pares de bases sobre le proteina producto de un gen. Re- los genes se fabrica enen lugar ausa de la ones que shaven 3 s genes en ‘genesque Las inver- uacion del nattanslo- vel que se imente lo transloca: slocacién © Nombre -AGENOS QUE SE ASOCIAN CON EL DNA 0 QUEDAN INCORPORADOS A EL ‘A. Analogos de una base 2-Aminopurina B. Agentes intercalantes = ICRIM cr IL MUTAGENOS QUE REACCIONAN CON EL DNA A. Agentes alquilantes nirosoguaniding® °. B, Otros modificadores del DNA hidroxilamina ica microbiana: Funcién de los genes y mutacién Gendt | TABLA 103 -rprnvos de pos de mtigenorquimics y su modo de acion 257 Estructura Accion Se incorpora al DNA: ‘causa mutaciones por transicion Causa mutaciones por desfase ‘Alquila purinas: causa NNO: transiciones, transversiones y desfases de tipo —1 HONH, Hidroxila grupos 6-amino ‘dela citosina: causa twansiciones GC a AT © Nombre vulgar de la N-metibN'-niuo-N-nitrosopuanidina, — replicativa, despues de la cual el fragmento transtocado fe encuentra en su sitio original y en el nuevo. ‘Mutégenos Los mutagenos son productos quimicos o agentes fisicos ‘que incrementan la frecuencia a que se producen las ‘mutaciones durante el crecimiento de un cultivo. Estos fagentes actuan de una u otra de estas dos maneras su- mamente diferentes: (1) algunos mutagenos quimicos ‘quedan asociados al DNA (agentes intercalantes) 0 que Tan corporados en el (andlogos de bases).(2) una gran Tiocad de OOS mitagenos reaceronan quimicamen “corer DNA = geTeralinente con una de Sus bases pun nicaso picimidinicas. Ba la tabla 10.3 se indican los mu- quimiess cominmente utilizados. ‘Como ya se dijo en el capitulo 5, las bases del DNA alcanzan el mayor erado de estabilidad energetice cua ‘sus sustituyentes oxigenados estan en la forma cetonica (£0) y sus sustituyentes eon nitrogeno reducido estan en Ja forma aminica (—NH,). En estos estados, a adenina se aparea con la timina y la suanina con la citosina. Sin embargo, con una frecuencia significativamente baja, las bases sufremum Cambro tautomerico asus formas enolica_ (OF) e mminica(=NH. Eneste estado, cambran sus tanto Tos patrones de formacron de pare} SOR conlaciiosna yi puanina GpaTa a [a Sieuaido Gene ugar la replicacion, una base esta emGuanina ™ forma endtca) Adenina (forma iminic) corce / GCx GG, \ @ o ‘ncorporacién carce cambio tastomreo Genética microbiama: Funcién de los genes y mutacién 4. GGT ee GCxGG su forma enol-iminica, se introducira una base inadecua, “Ga en Ta cadena Tecien Tabricada ya menos que sac ‘eliminada por tas propiedades correctoras de pricbasde~ la DNA polimierasa, en este punto del genoma se intro ‘ducira una mutacion por transicion (figura 10.4), Los -palosns de bases son mutdgenos efeaces pordue use incorporados én el DNA y suf‘ea cambios tautome “Hieos mas recuentemente que las bases naturales, Elie: anismo de accion miutagenica de los mutagenos anal 0s de bases puede ilustrarse al considerar un mutagen de este tipo comunmente utilizado, la 2-aminopurina, En su forma aminima habitual se aparea con la timina; en su forma iminica, menos frecuente, se aparea con la cito- sina. Por ello, habitualmente tiene las propiedades de apareamiento de la adenina, pero tambien existe la pro- babilidad de que este en a forma inminica. Es un analo- 20 Suficientemente proximo de la adenina como para ‘constituir un sustrato para los enzimas de la ruta que incorpora adenina exdgena al DNA, por lo cual si se afiade 2-aminopurina a un medio de crecimiento, pasa a ‘raves de esta ruta y queda incorporada en el DNA. Sien el momento de su incorporacion esta en su forma amini- ca, entra en la doble Aelice en lugar de un residuo de ade- nina y si este analogo de-base sufre posteriormente un ‘cambio tautomérico durante la replicacion, la consecuen- cia que puede producirse es una mutacion por transicion deun par A/T a otro G/C. Sila 2-aminopurina entra en Figuaa 105 ecto mutagénico de los andio: 305 de bases, (a) Cuando To 2. Sminopurins Pe incororada on Sitforma aminics (Pam cambio = Gece uUtoménce postend: onginaune EGCCC vansicindeat soe (0) Cusnde hun eambio tavtomérieo posterior ongina una transicion Secc sar ceausan 0 fica yagt grupos (¢ aicos en tienen pt bases or} este mut Lose Jos agent a los atc Aungue Tos que ¢ sultado e Por ejert sutacio se —1( Vari genos. L se vuelv ‘causand luz ura gia liber eemtes d presence desenca separa cortare Tambie puesta imero cion de Mamad ducido: produc