2218 ONCOLOGÍA LETRAS 15: 2218-2226, 2018
Oxibendazol inhibe el crecimiento de células de cáncer de próstata
Qiaoli CHEN 1, YUHUA LI 2, XIAOYU ZHOU 2 y Runsheng LI 2
1 Facultad de Farmacia, Universidad de Fudan, Shanghai 201203; 2 Clave Laboratorio de Reproducción Reglamento de la
Comisión Nacional de Población y Planificación Familiar, Instituto de Shanghai de Planificación de la Familia Investigación,
Shanghai 200032, República Popular China
Recibido el 25 de junio de, de 2016; Aceptado 21 sin de abril de, 2017
DOI: 10.3892 / ol.2017.7579
Abstracto. El cáncer de próstata (CaP) es una de las neoplasias más comunes entre
los hombres y es la segunda causa principal de mortalidad asociada al cáncer en el
mundo desarrollado. la terapia de privación de andrógenos (ADT) es el
tratamiento más común para el CP. Sin embargo, la mayoría de los pacientes con
CaP andrógeno-sensibles con el tiempo desarrollar resistencia a ADT y la
enfermedad se convierta en independiente de andrógenos. Hay, por lo tanto, un
requisito diata inme- para desarrollar técnicas terapéuticas eficaces hacia el
tratamiento de CaP recurrente. Oxibendazol (OBZ) es un fármaco antihelmíntico
que también ha mostrado ser prometedor en el tratamiento de tumores malignos.
En el presente estudio, la capacidad de OBZ para reprimir el crecimiento de células
de CaP se evaluó en líneas independientes de andrógenos PCa 22Rv1 y de células
PC-3 humanos. El crecimiento de la PC-3 líneas celulares 22Rv1 y, in vitro, con
valores de concentración inhibitoria semimáxima de 0,25 y 0,64 M,
respectivamente. El tamaño medio de los tumores 22Rv1 en ratones desnudos
tratados con OBZ (25 mg / kg / día) fue 47,96% más pequeño que el de los
ratones de control. El tratamiento con OBZ aumentó la expresión de microARN-
204 (miR-204), como se determina por reacción de transcripción inversa
cuantitativa en cadena de polimerasa (RT-qPCR), y el nivel de p53 como se
determina con el Western Blot, dos genes supresores de tumores bien
caracterizados . Cuando la expresión de miR-204 fue derribado por introducción
de un inhibidor de miR-204, el efecto inhibidor de OBZ se redujo notablemente;
sin embargo, cuando se sobreexpresa, la eficacia inhibidora de OBZ era
notablemente mayor, lo que indica que la regulación positiva de miR-204
Correspondencia a: Dr. Runsheng Li, clave Laboratorio de Reproducción del Reglamento
de Población y Planificación Familiar de la Comisión Nacional, Instituto de Shanghai de
Planificación de la Familia Investigación, 2140 Xie-tu Road, Shanghai 200032, República
Popular de China E-mail: runshengli2007@163.com
abreviaturas: ADT, La terapia de privación de andrógenos; ARKANSAS,
receptor de andrógenos; ASP, vía de señalización de andrógenos; NEPC, cáncer de próstata
neuroendocrino-similares; OBZ, oxibendazol; CaP, cáncer de próstata; PSA antígeno,
específico de la próstata
palabras clave: 22Rv1, microARN-204, oxibendazol, PC-3, el cáncer de próstata
es clave para la eficacia de OBZ. Además, OBZ fue trado demostrado con RT-qPCR para
reprimir la expresión del receptor de andrógenos, y por transferencia de Western para reducir
andrógenos específico de la próstata en 22Rv1 células. Los resultados sugieren que OBZ tiene
potencial para uso clínico en el tratamiento del CaP recurrente.
Introducción
El cáncer de próstata (CaP) es la neoplasia maligna más común del sistema
genitourinario masculino y principalmente se produce en hombres de edad avanzada
(1). CaP es la segunda causa principal de mortalidad asociada al cáncer en los países
desarrollados (2). Los tratamientos convencionales para CaP incluyen cirugía,
quimioterapia, terapia hormonal, terapia de radiación, la ablación por radiofrecuencia,
ultrasonidos de alta intensidad y la criocirugía (3-5) se centró. Actualmente, la terapia
de privación de andrógenos (ADT) es ampliamente utilizado para el tratamiento del
CaP; Sin embargo, la mayoría de los pacientes con CaP recaída dentro de 1 a 3 años y el
desarrollo de la enfermedad independiente de andrógenos, que no responde a ADT (6-
8). En la actualidad, no existe una terapia eficaz para recurrente (9) PCa. Por lo tanto, se
requiere un método terapéutico novedoso para CaP. Recientemente, la Administración
de Alimentos y Drogas de Estados Unidos aprobó nuevos compuestos para el
tratamiento de la PCa, incluyendo acetato de abiraterona (10), Enzalutamida
(11), sipuleucel-T (12), y Alpharadin (radio-233) (13). Un estudio propuesto que ciertos
productos químicos no antitumorales pueden tener un efecto antitumoral (14). Azufre,
que es ampliamente utilizado para desintoxicar el cuerpo y el tratamiento de la sarna en
la medicina tradicional china (15,16), se ha demostrado que suprimir el crecimiento de
CaP en vivo ( 17). Itraconzole, un fármaco antifúngico de triazol común en uso clínico
extendido, ha mostrado evidencia de efectos anticancerígenos clínicos, incluso contra
CaP (18).
Oxibendazol (metil-5-n-propoxi-2-benzimid- azol-carbamato; OBZ), se
sintetizó por primera vez en 1973 (19). OBZ es un fármaco de bencimidazol que
se utiliza para tratar la infección por ascárides, estróngilos, oxiuros, lombrices y la
infestación lungworm en caballos y otros animales (20-22). La exposición
derivados de bencimidazol, entre otros, ative anti-ulcer- (23), anti-inflamatoria
(24), antibacteriano (25), y (26) bioactividades anti-cancerígenos. Estos
medicamentos están ampliamente disponibles para uso veterinario y un número
de ellos, tales como tiabendazol, albendazol y mebendazol, se han utilizado en la
medicina humana durante varios años (27). Un estudio anterior encontró que los
benzimidazoles podrían tener potenciales efectos citostáticos, a través de la
inhibición de la formación de microtúbulos y la captación de glucosa (28). En
particular, albendazol, mebendazol y
 CHEN et al: Oxibendazol suprime el crecimiento DEL CÁNCER DE PRÓSTATA
flubendazol, que son todos los medicamentos de bencimidazol, se han observado para inhibir
el crecimiento del tumor (29).
La capacidad de OBZ para suprimir el crecimiento en el CaP se evaluó en el presente
estudio utilizando la PCa 22Rv1 y PC-3 líneas celulares. Estudios anteriores han demostrado
que el crecimiento de células de CaP recurrentes (también denominada células de CaP
independientes de andrógenos) depende de la del receptor de andrógenos (AR) o la vía de
señalización AR (ASP), aunque es independiente de los andrógenos a sí mismos (30,31). los
línea celular 22Rv1 es una línea celular de CaP epitelial independiente de andrógenos que es
representativa de CaP recurrente clínica (32). Esta línea celular expresa antígeno AR y específico
de la próstata (PSA) (33,34), que ha sido ampliamente utilizado como un biomarcador
clínicamente de diagnóstico y un factor de pronóstico clave para CaP (35). Sin embargo, las
células PC-3 independientes de andrógenos no expresan AR o PSA
(36). Los dos marcadores se utilizan con frecuencia para evaluar los efectos anti-CaP de
diversos productos químicos (37-39).
En el presente estudio, se estudiaron las células 22Rv1 in vitro y
en vivo, y se estudiaron células PC-3 in vitro. El objetivo del estudio fue investigar el
efecto inhibidor de oxibendazol en las células del cáncer de próstata.
materiales y métodos
Drogas y animales. OBZ se adquirió de Selleck Chemicals, Inc. (Houston, TX,
EE.UU.) y se preparó como suspensiones homogéneas en aceite de maíz y se
administró a los ratones desnudos mediante alimentación por sonda. Un total de
20 (SPF) macho libre de patógenos BALB ratones específica / c desnudos con
edades comprendidas entre 6 y 8 semanas (rango de peso, 18-25 g) se
adquirieron de Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd. (Shanghai, China),
mantenido bajo condiciones SPF con un ciclo de luz-oscuridad de 12 h y provisto
de alimentos y agua ad libitum. Los ratones en el experimento fueron divididos
aleatoriamente en dos grupos, el control y los grupos tratados con OBz, con 10
ratones en cada grupo. La aprobación ética para este estudio se obtuvo del
Comité de Ética Animal del Instituto de Shanghai de Planificación de la Familia
Investigación (Shanghai, China).
Cultivo de células y transfección. Humana CaP 22Rv1 y PC-3 líneas celulares se
adquirieron de Shanghai Institute of Cell Centro de Recursos de Ciencias de la
Vida (Shanghai, China). Las células se mantuvieron en medio RPMI-1640 (Hyclone;
Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, EE.UU.) que contenía suero bovino
fetal al 10% (FBS; Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) y 1% de penicilina-
estreptomicina, a 37ºC con una atmósfera de 5% de CO 2. La transfección con 100
nM microARN-204 (miR-204) inhibidor (cat miR20000265;.. RiboBio Co., Ltd,
Guangzhou, China) se realizó con Lipofectamina ® 2000 (Invitrogen; Thermo
Fisher Scientific, Inc.) en células 22Rv1 de acuerdo con las instrucciones del
fabricante. Una expresión de GFP-miR-204 que expresan lentivirus recombinante
y de control que expresan GFP se adquirieron de Kangchen Bio-Tech (Shanghai,
China). La entrega de miR-204 a las células 22Rv1 y PC-3 se realizó por 1x10 8
infección viral TU / ml de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
ensayos de proliferación celular. Las células se sembraron en placas de 96 pocillos a
una densidad celular de 1x10 4 células por pocillo en 100 l de medio RPMI-1640 que
contienen 10% de suero bovino fetal y 1% peni- cillin-estreptomicina, y se incubaron
a 37ºC con una atmósfera
2219
de 5% de CO 2 durante la noche. 22Rv1 y células PC-3 fueron tratados con
0,12, 0,25, 0,50, 1,00, 2,00 y 3,00? M OBZ durante 48 h, o con
0,25 y 1,00 OBZ mu M durante 96 h. Con el fin de evaluar el papel de miR-204 en
la mediación del efecto de OBZ, 22Rv1 y PC-3 se transfectaron células con el
inhibidor de miR-204 o miR-204, seguido de tratamiento con OBZ 1 M o
dimetilsulfóxido (DMSO; como un control) durante 48 h. Las células se
tripsinizaron y el número de células vivas se contaron en cuatro áreas bajo un
microscopio invertido (ampliación, x40) usando un hemocitómetro y el ensayo
de exclusión de azul de tripano.
Citometría de flujo. La apoptosis se determinó utilizando un doble tinción de
Anexina V-isotiocianato de fluoresceína (FITC) kit de detección de apoptosis (BD
Biosciences Inc., Franklin Lakes, NJ, EE.UU.). Las células 22Rv1 y PC-3 fueron
tratados con control de DMSO o 0.25 M OBZ. Después de 48 h, se recogieron las
células, se lavaron en solución salina tamponada con fosfato (PBS) y se
suspendieron en tampón de unión. Las células fueron luego teñidas utilizando
anexina V y yoduro de propidio (PI) (5 l). Tras la incubación durante 15 min a
temperatura ambiente en la oscuridad, las células se diluyeron y se analizaron
usando un citómetro de flujo (Beckman Coulter, Inc., Atlanta, GA, EE.UU.). Cuando
fluorescencia verde (FITC) se representó frente a la fluorescencia roja (PI), las
poblaciones de células podría ser detectada en un punto de parcelas que indica
las siguientes condiciones: Las células viables (FITC / PI-), primeras células
apoptóticas (FITC + / PI- ) y las células apoptóticas tardías (FITC + / PI +).
el desarrollo de tumores de xenoinjerto en ratones desnudos. En la fase de crecimiento
exponencial, se recogieron 22Rv1 células, se lavaron y se suspendieron en PBS. Un
ensayo de exclusión de azul de tripano se realizó para asegurar la viabilidad celular (>
99%) antes de la inoculación ción. Las células se contaron y 2x10 6 células suspendidas
en
0,1 ml de PBS se inyectaron por vía subcutánea en el flanco derecho de cada ratón. A
los 10 días después de la inoculación de células tumorales, cada ratón en el grupo
OBZ-tratada se proporciona con 25 mg / kg suspensión homogénea de OBZ mediante
sonda intragástrica. El tratamiento se administró una vez al día durante 14 días; ratones
en el grupo de control se proporciona con la misma cantidad de aceite de maíz. El
tamaño del tumor se midió en dos dimensiones cada dos días. El volumen del tumor
(medida en cm 3) se calculó usando la siguiente fórmula: Volumen del tumor = axb 2
x0.5 (a, longitud; b, ancho).
reacción de transcripción inversa cuantitativa en cadena de polimerasa (RT-qPCR).
El ARN total se extrajo usando el reactivo Trizol (Invitrogen; Thermo Fisher
Scientific, Inc.) según las instrucciones del fabricante. la síntesis de ADNc de
primera cadena se realizó en los ARN totales usando Quant transcriptasa inversa
(Toyobo Co., Ltd., Osaka, Japón) de acuerdo con las instrucciones del fabricante
con una máquina de PCR (cat no 580BR6819;.. RiboBio Co., Ltd, Guangzhou ,
China). amplificaciones de genes se realizaron con un sistema de PCR (modelo
EC-100-1001; Illumina, Inc., San Diego, CA, EE.UU.) Eco real tiempo utilizando
SYBR-Green (Thermo Fisher Scientific, Inc.). La expresión de genes en las células y
los tumores se midió utilizando qPCR. Las condiciones de ciclado de GAPDH, AR,
ARN1 y CD44 fueron como sigue: 95ºC durante 3 min, 95ºC durante 20 seg y 58C
durante 20 s, durante 40 ciclos. Las condiciones de ciclado de U6,
2220 ONCOLOGÍA LETRAS 15: 2218-2226, 2018
miR-204 y miR-34a eran como sigue: 95ºC durante 1 min, 95ºC durante 15 seg y
60ºC durante 15 seg, durante 40 ciclos. Bulge-loop TM
Conjuntos de cebadores miRNA QRT-PCR (un cebador RT y un par de cebadores de qPCR para
cada conjunto) específicos para miR-34a fueron diseñados por RiboBio. Los cebadores para la β-
actina, AR y 5'-3' clease exoribonu- 1 (XRN1) se adquirieron de Sangon Biotech, Inc. (Shanghai,
China). Las secuencias de los cebadores se incluyen en la Tabla I. La expresión relativa de genes
se calculó utilizando la 2- ΔΔCq método (40). La media Cq se calculó a partir PCRs por triplicado.
Western Blot. La proteína total se extrae de las células y los tumores usando tampón de
ensayo de radioinmunoprecipitación [Tris 50 mM (pH 8), NaCl 150 mM, 1% de Triton X-
100, 5% de colato desoxi- de sodio y 0,1% de SDS] suplementado con inhibidores de la
proteinasa y la fosfatasa . Las proteínas (20 g) se separaron por 12% SDS-PAGE y
después se transfirieron a una membrana de fluoruro de polivinilideno. La membrana se
bloqueó con 5% de leche desnatada durante 1 h a temperatura ambiente, se lavó con
solución salina tamponada con Tris con Tween-20 (TBST) tampón tres veces, y se
incubó noche a la mañana a 4 ° C con anti-gliceraldehído 3-fosfato ( GAPDH; gato no
AG019; 1:.. dilución 1000), la proteína anti-tumor 53 (p53; gato no AP062; 1:.... dilución
1000), anti-p21 (cat no
AP021; 1: 1000 dilución) y anti-PSA (cat no ab53774; 1:.. dilución 1000). Siguiente, la
membrana se lavó 3x15 min con TBST y se incubaron con los órganos de peroxidasa de
rábano conjugada secundarias anti- (anti-ratón, el gato no A0216; 1:.. dilución 3000;
anti-conejo; gato no A0208; 1:.. dilución 3000 ) a temperatura ambiente. Todos los
anticuerpos primarios fueron adquiridos de Beyotime Instituto de Biotecnología
(Haimen, China), excepto anti-PSA (Abcam, Cambridge, Reino Unido). Las bandas de
anticuerpos reactivos se visualizaron usando reactivos de quimioluminiscencia
mejorada de detección y un sistema de imagen de gel (Tañón Ciencia y Tecnología,
Co., Ltd., Shanghai, China).
Análisis estadístico. Los datos se analizaron usando el software SPSS, versión 11.5 (SPSS,
Inc., Chicago, IL, EE.UU.). Las diferencias en el 'volumen del tumor' variable continua se
compararon usando un análisis unidireccional de varianza seguido de una prueba de
Student-Newman-Keuls. Se realizó un análisis de densitometría de las transferencias
Western usando el software Image J (versión 1.37, Instituto Nacional de Salud, Bethesda,
MD, EE.UU.). Los datos se presentan como la media
± error estándar de la media. P <0,05 se consideró para indicar una diferencia
estadísticamente significativa.
resultados
OBZ inhibe el crecimiento de 22Rv1 y células PC-3. La capacidad de OBZ para inhibir el
crecimiento de 22Rv1 y las células PC-3 se determinó contando el número de células.
OBZ marcadamente inhibida la viabilidad celular de 22Rv1 y las células PC-3 de una
manera dependiente de la dosis (Fig. 1A). Tan poco como se observó 0,12 M de OBZ
para inhibir significativamente el crecimiento de la 22Rv1 y células PC-3,
respectivamente (ambos p <0,05). Las células 22Rv1 eran más sensibles al tratamiento
OBZ, con una concentración inhibidora semimáxima (IC 50) valor de 0,25? M, en
comparación con 0,64 M en células PC-3. OBZ inhibió la viabilidad celular de 22Rv1 y las
células PC-3 de una manera dependiente del tiempo (Fig. 1B y C). Estos resultados
demostraron que OBZ inhibió el crecimiento de células de CaP in vitro con variada
eficiencia.
secuencia del cebador
GAPDH Forward: 5'-CCTGTACGCCAACACAGTGC-3'
Invertir: 5'-ATACTCCTGCTTGCTGATCC-3' Forward:
5'-TTCCCTCCCTATCTAACCCTC-3' AR
Invertir: 5'-TCTAAACTTCCCGTGGCATAA-3' Forward:
5'-GGAAACAACAGGAATGGGA AGC-3' XRN1
Invertir: 5'-ACCAGCACATTAGGCACTCAC-3' Forward:
5'-AGCAACCAAGAGGCAAGAAA-3' CD44
Reverso: La transcripción inversa: 5'-CGCTTCACGAATTTG
CGTGTCAT-3' 5 'GTGTGGTTGAAATGGTGCTG-3' U6
Forward: 5'-GCTTCGGCAGCACATATACTAA AAT-3'
Invertir: 5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGT CAT-3'
miR-204 La transcripción inversa: 5'- GTCGTATCCAGTGC
GTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGAT
ACGACAGGCATA-3' Forward:
diana. gen 5'-GGTTCCCTTTGTCATCC-3' inverso: 5 '-
TGCGTGTCGTGGAGTC-3'
miR-204, microARN-204.
OBZ provoca apoptosis de 22Rv1 y células PC-3. La capacidad Tosis inductor de apop- de
OBZ en 22Rv1 y las células PC-3 se evaluó por Anexina V-FITC y PI doble tinción. Siempre
que el IC 50 valor fue de 0,25? M en 22Rv1 células, 0.25 M
OBZ se utilizó para tratar 22Rv1 y células PC-3 durante 48 h. Se observó un de ratones
desnudos. Aproximadamente secuencias de la Tabla I. cebadores para genes
aumento notable en el número de células apoptóticas en el grupo OBZ tratados en
comparación con las células tratadas con DMSO (el control negativo) (Fig. 2A y B). La tasa de
apoptosis de las células 22Rv1 fue de 1,41% en las células tratadas con DMSO y 9,45% en las
células tratadas con OBZ. La tasa de apoptosis en células PC-3 era 0,92 y 4,58% en DMSO y
células OBz tratados, respectivamente (Fig.
2C). Estos resultados indicaron que el tratamiento con OBZ resultó en un aumento de la tasa
de apoptosis en células de CaP, y la capacidad inductora de apoptosis de OBZ fue más
marcada en 22Rv1 en comparación con células PC-3.
se evaluó siguiente en vivo. En primer lugar, se inyectaron 22Rv1 células en el flanco derecho
Para investigar el mecanismo del efecto inhibidor de OBZ en células de CaP,
el efecto de OBZ en la expresión de p53 y p21 (41,42), que se sabe que son los los
reguladores clave de la apoptosis, se midió mediante análisis de transferencia
Western en las células OBz-tratada. Una dosis OBZ de ≥ 0,25 M aumentó
notablemente p53 y la expresión de p21 en 22Rv1 células (Fig. 2D). Estos
resultados sugieren que la regulación positiva de p53 y p21 sirvió un papel
importante en la apoptosis inducida por OBZ de células 22Rv1.
OBZ inhibe el crecimiento tumoral 22Rv1 en ratones desnudos. El efecto antitumoral de OBZ
 CHEN et al: Oxibendazol suprime el crecimiento DEL CÁNCER DE PRÓSTATA
Figura 1. OBZ inhibe la proliferación de 22Rv1 y células PC-3. Las células se sembraron en placas de 96
pocillos a una densidad celular de 1x10 4 células por pocillo en 100 l de medio completo y se incubaron
bajo condiciones estándar de cultivo celular durante la noche. 22Rv1 y las células (A) PC-3 fueron
tratados con las dosis indicadas de OBZ para 48 h. (B) 22Rv1 y (C) células PC-3 fueron tratados con
0,25 y
1,00 OBZ mu M, y se cosecha en los tiempos indicados para el recuento celular. Cada valor indicado
representa la media ± error estándar de la media de tres experimentos independientes. * P <0,05, **
P <0,01 y *** P <0,001 vs. 0 M OBZ. OBZ, oxibendazol.
10 días después de la inyección de las células, los tamaños de los tumores eran mensurables
capaz. En el día 10, los ratones fueron tratados con OBZ (25 mg / kg) mediante sonda
intragástrica. El tratamiento se administró una vez
2221
Figura 2. OBZ aumenta la apoptosis en 22Rv1 y las células PC-3. células (A) 22Rv1 y (B) PC-3 fueron
tratados con 0,25 OBZ mu M durante 48 h, y después se sometieron a análisis por citometría de flujo. se
informó (c) los datos como el porcentaje de células apoptóticas tempranas (FITC + / PI-) y células
apoptóticas tardías (FITC + / PI +). (D) los niveles de p53 y la proteína p21 se determinaron mediante
transferencia Western después del tratamiento OBZ durante 48 h en células 22Rv1. Cada valor indicado
representa la media ± error estándar de la media de tres experimentos independientes. OBZ,
oxibendazol; PI, yoduro de propidio; FITC, isotiocianato de fluoresceína; p53, proteína tumoral p53;
GAPDH, gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa.
al día durante 14 días. El grupo de control de ratones se trató de la misma manera, pero
OBX se sustituyó con aceite de maíz. OBZ reprimida significativamente el crecimiento del
tumor de una manera dependiente del tiempo, con una diferencia significativa identificado a
los 20 días después de la inoculación de células de cáncer
(P <0,05; Fig. 3A). El volumen medio del tumor del grupo OBZ-tratado fue de 0,63 cm 3, mientras
que en el grupo de control fue de 1,20 cm 3; OBZ inhibió el crecimiento del tumor por ~ 47,96%.
Además, el peso corporal medio de los ratones portadores de tumores fue 24,06 ± 1,28 y 23,10 ±
3,39 g
2222 ONCOLOGÍA LETRAS 15: 2218-2226, 2018

Figura 3. OBZ inhibe el crecimiento tumoral 22Rv1 en vivo. Un total de 2x10 6 22Rv1 células se inocularon en el flanco de cada ratón desnudo. Los volúmenes tumorales se midieron en los tiempos indicados. (A) se
detectó El volumen de los tumores 22Rv1 cada dos días en ratones desnudos tratados con 25 mg / kg OBZ o vehículo. los niveles de (B) de proteína de p53, PSA y p21 se detectaron por transferencia de western
en los grupos OBz tratados y de control. (C y D) El ARN total se preparó a partir de tumores. La expresión de AR (C) y XRN1, y (D) miR-204 y miR-34a se midieron por la reacción en cadena de la polimerasa con
transcripción inversa cuantitativa. * P <0,05,
**
P <0,01 vs. el control. OBZ, oxibendazol; PSA, antígeno específico de la próstata; p53, proteína tumoral p53; AR, receptor de andrógenos; XRN1, 5'-3'exoribonuclease 1; Mir, microARN.

en los grupos de OBz tratados y control, respectivamente. Sin embargo, esta diferencia
no fue estadísticamente significativa, lo que demuestra que OBZ no ejerció un efecto
tóxico general significativa en vivo,
en consonancia con los resultados de un estudio anterior (43).
El mecanismo para el efecto-tumor supresor de OBZ
OBZ afecta el eje AR-miR-204-XRN1 en 22Rv1 tumores se investigó. Los niveles de AR, miR-204
y XRN1 en los tumores de ratón se midieron mediante qPCR. La expresión de AR y XRN1 fue
significativamente menor en los tumores tratados con OBZ que en el control (ambos P <0,01;
Fig. 3C). Por el contrario, OBZ planteó la expresión de miR-204 ~ 115% (Fig. 3D). En conjunto,
estos resultados indicaron que OBZ interfirió con el eje de AR-miR-204-XRN1 en los tumores

en vivo También se estudió. En primer lugar, la expresión de p53 y p21 en los tejidos de PCA.

tumorales de ratones OBz-tratada y su control negativo se midió usando análisis de

transferencia Western. La densidad de las dos proteínas aumentó en 821,34 y 75,18%,
respectivamente, en el tumor OBZ tratadas en comparación con las muestras de control
(Fig. 3B). Por lo tanto, la en vivo resultados son consistentes con los observados in vitro.
Dado que el PSA es un biomarcador clínicamente diagnóstico y factor pronóstico
clave para CaP (35), productos químicos anti-CaP también han sido evaluados por su
efecto en la reducción del nivel de PSA, ya sea en células de CaP o en la sangre (44). El
nivel de PSA en los tumores tratados con 22Rv1 OBZ se midió a través de Western ting
blot- en el presente estudio. La concentración de PSA disminuyó en un 78,16% más en los
tumores OBz-tratado en comparación con el control, lo que indica que OBZ reprime la
expresión de PSA.
El AR sirve un papel crítico en la progresión y recurrencia de CaP (45), y es
también el activador transcripcional de la expresión de PSA (46). Por lo tanto, la
regulación por disminución de PSA por OBZ indica que OBZ afecta a la AR o
ASP. Recientemente, un estudio informó de la existencia del eje de AR-miR-204-
XRN1 en células de CaP, que tiene una función reguladora dual en la mediación
del crecimiento de diferentes células de CaP (47). En este eje, andrógenos / AR
eleva el nivel de XRN1, un objetivo de miR-204, mediante la inhibición de la
expresión de miR-204. En consecuencia, si
miR-34a se ha informado de que un supresor de tumor miARN (48). miR-
34a reprime el crecimiento de células de CaP por la orientación de la AR (49,50).
Como tal, el nivel de miR-34a en tumores 22Rv1 OBz tratados se midió en el
presente estudio. tratamiento OBZ planteó la expresión de miR-34a por ~ 5
veces (Fig. 3D). Estos resultados, por lo tanto, fueron consistentes con la hipótesis
de que OBZ suprime la expresión AR elevando el nivel de miR-34a en 22Rv1
células.
expresión manipulada de miR-204 afecta a la sensibilidad de las células 22Rv1 a
OBZ. Para evaluar el papel de un perturbados eje AR-miR-204-XRN1 en la
inhibición del crecimiento de tumores 22Rv1 utilizando OBZ, el efecto de OBZ en
miR-204 expresión se estudió en 22Rv1 células cultivadas y células PC-3. miR-
204 ha sido ampliamente demostrado que es un gen supresor de tumor en
múltiples tipos de cáncer, incluyendo células de CaP AR expresan (47,51-53). Sin
embargo, miR-204 se ha informado de que un oncomiR en la línea celular PC-3
(47), que es AR-negativa y representa un CaP (NEPC) de células
neuroendocrinas-como (54). Los presentes resultados, basados en datos de RT-
qPCR, mostraron que

1,00? M OBZ elevó significativamente la expresión de miR-34a

 CHEN et al: Oxibendazol suprime el crecimiento DEL CÁNCER DE PRÓSTATA 2223

Figura 4. La expresión alterada de miR-204 afecta a la sensibilidad de las células 22Rv1 al tratamiento OBZ. Tras el tratamiento con OBZ 1,00 M durante 48 h, el RNA total se preparó a partir de células PC-3 (A) 22Rv1 y (B). El nivel relativo de expresión de miR-

34a y miR-204 se determinó con RT-qPCR. (C) Después del tratamiento con 0,25 o 1,00 OBZ mu M durante 48 h, el nivel relativo de CD44 se determinó con RT-qPCR en células PC-3. (D) 22Rv1 y (E) células PC-3 fueron transfectadas de forma estable con un

control de virus miR-204 o (GFP). A las 24 h después de la transfección, se añadió 1,00 M OBZ durante otras 48 h. La viabilidad celular se determinó mediante un ensayo de exclusión con azul de tripano. células (F) 22Rv1 fueron transfectadas transitoriamente
con un inhibidor de miR-204 o nucleótido NC. A las 8 h después de la transfección, se añadió 1,00 M OBZ durante otras 48 h. La viabilidad celular se determinó mediante un ensayo de exclusión con azul de tripano. Todos los valores son la media ± error

estándar de la media de tres experimentos independientes.

* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001. miR-204, microRNA 204; OBZ, oxibendazol; RT-qPCR, inversa de la reacción en cadena de polimerasa de transcripción-cuantitativo; CD44, grupo de diferenciación 44; GFP,
proteína fluorescente verde; NC, control negativo.

y miR-204 en células 22Rv1 por 197,07 y 185,11%, respectivamente (ambos p
<0,05; Fig. 4A). Adicionalmente, 1,00 M OBZ elevó significativamente la
expresión de miR-34a y miR-204 en las células PC-3 por 44,77 y 87,46%,
respectivamente (ambos p <0,05; Fig. 4B).
redujo significativamente la expresión de CD44 en comparación con el control
(por 60,22%; P <0,01). la expresión de CD44 fue casi completamente reprimido
en células PC-3 que fueron tratados con
1,00? M OBZ (Fig. 4C). Estos resultados apoyaron la hipó- tesis de que OBZ
reprime la expresión CD44, elevando el nivel de miR-34a en células PC-3.

Grupo de diferenciación 44 (CD44) es un marcador de células madre PCa

que se expresa en células NEPC, incluyendo las células PC-3, pero no en células
de CaP AR-expresión de (54-56). Un informe previo demostró que CD44 es el gen
diana de miR-34a (57). Teniendo en cuenta que OBZ planteó la expresión de miR-
34a en células PC-3 en el presente estudio, se especuló que OBZ puede suprimir
la expresión de CD44. Notablemente, OBZ 0,25 M
Si la regulación al alza de miR-204 es esencial para la inhibición del crecimiento mediada
por OBZ, a continuación, la expresión ectópica de miR-204 debe mejorar su eficiencia
inhibidora. Para probar la hipótesis, las células 22Rv1 y las células PC-3 fueron infectadas de
forma estable con un lentivirus recombinante que expresa miR-204 y la proteína verde
fluorescente (GFP). Como control, las células eran de forma estable
2224 ONCOLOGÍA LETRAS 15: 2218-2226, 2018
infectado con un lentivirus recombinante que expresa solamente GFP. La
sobreexpresión de miR-204 aumentó significativamente el efecto inhibidor de OBZ (por
22,77%; P <0,05; Fig. 4D), lo que sugiere que miR-204 es importante para el efecto-
tumor supresor de OBZ en 22Rv1 células. Sin embargo, la expresión ectópica de miR-
204 no cambió significativamente el efecto de OBZ en células PC-3 (P = 0,1595; Fig. 4E).
Para excluir adicionalmente cualquier potencial efecto artificial ejercida por la
sobreexpresión de miR-204 en células 22Rv1, el estudio también evaluó si desmontables
de miR-204 podría cambiar efecto de OBZ. 22Rv1 células fueron transfectadas
transitoriamente con un inhibidor de miR-204 o un control no la orientación antes del
tratamiento con OBZ. OBZ ejerce su efecto inhibidor con una inferior (por 36. 11%)
eficacia en las células que se transfectaron con el inhibidor de miR-204 que en las
transfectadas con el control (Fig. 4F). En conjunto, estos resultados indicaron que la
regulación positiva de miR-204 es la clave para el efecto-tumor supresor de OBZ en
22Rv1 células.
Discusión
El presente estudio demostró que OBZ notablemente inhibió el crecimiento de células de CaP
independientes de andrógenos en células cultivadas y modelos de xenoinjerto (. Las figuras 1 y
3), al menos parcialmente, mediante la inducción de la apoptosis de las células de CaP (Fig. 2).
AR sirve un papel clave en la progresión del CaP (45), y es el blanco de los
medicamentos utilizados en la terapia de CaP. AR genes regulados han sido
ampliamente estudiados en el CaP primaria y recurrente, pero los genes clave bajo el
control de AR han sido difícil de alcanzar. La activación de la AR en el miR-204 / /
bucle de retroalimentación positiva PCa AR / XRN1 miR-34a (47) regula al alza la
expresión XRN1 por la represión de miR-204 de expresión, mientras que XRN1 degrada
selectivamente miR-34a, resultando eventualmente en la expresión elevado de AR, ya
que AR es un gen diana de miR-34a.
La regulación de la AR / miR-204 / XRN1 / miR-34a posi- tiva bucle de
realimentación es gravemente perturbado en OBZ-tratada 22Rv1 tumores, dado
que OBZ upregulated la expresión de miR-204 y miR-34a, pero inhibió la
expresión de AR y XRN1 en el presente estudio (Fig. 3B y C). miR-204 se ha
informado de actuar como un supresor de tumores, y está marcadamente
downregu- se precisan en varios tipos de tumores sólidos malignos (51-53) y los
tumores CaP AR-positivos (47). La actividad supresora de tumores de miR-204
está mediada no sólo por su capacidad de reducir la apoptosis e inhibir la transi-
ción epitelial-a-mesenquimal (EMT), pero también por su poder para aumentar la
eficacia de la quimioterapia del cáncer (58-60 ). Por ejemplo, la sobreexpresión de
miR-204 aumentó la capacidad de respuesta de células de cáncer gástrico a
5-fluorouracilo y tratamiento con oxaliplatino en el cáncer gástrico (52). Similar,
la expresión ectópica de miR-204 MARK EDly planteó la sensibilidad de las
células 22Rv1 a OBZ en el presente estudio (Fig. 4D). De acuerdo con estos
hallazgos, desmontables de miR-204 promueve la resistencia OBZ (Fig. 4F).
Estos resultados, junto con la observación de que el tratamiento OBZ
upregulated miR-204, indica que miR-204 sirve un papel clave en Ating Medi el
efecto anticancerígeno de OBZ.
Además de interferir con la / bucle regulatorio / XRN1 / miR-34a AR miR-204,
OBZ también upregulated la expresión de p53 y p21. El evento aguas arriba inducida
por OBZ en 22Rv1 células es actualmente desconocido. Se ha observado que el efecto
de OBZ sobre la expresión de miR-34a es marcadamente más fuerte en las células
22Rv1, que expresan p53 de tipo salvaje, que en el PC3 p53 nulo
las células (Fig. 4A y B) (61). La discrepancia es consistente con la hipótesis de que
OBZ plantea la expresión de miR-34a por p53 Lating upregu- en 22Rv1 células. Sin
embargo, se justifica un enfoque de estudio adicional.
ADT se ha utilizado clínicamente para tratar el CaP de> 70 años. Sin embargo, ADT sólo
puede inducir apoptosis en células AR-positivo (o células de adenocarcinoma de próstata) en
cáncer primario, pero no tiene un efecto marcado en células de CaP AR-negativas, tales como
los de NEPC (62). Aunque las células NEPC solamente representan una población pequeña (~
1%) de células de CaP, que están distribuidos al azar dentro de adenocarcinomas prostáticos y
secretan una variedad de factores de crecimiento que puede promover la proliferación de
células de adenocarcinoma prostático adyacentes a través de un mecanismo paracrino en una
ablación de andrógenos ción ENTORNO (63,64). Por lo tanto, se ha propuesto que las células
NEPC deben ser dirigidos por el tratamiento con el fin de prevenir la recurrencia de CaP (65).
las células PC-3 anteriormente se han caracterizado como células de carcinoma
neuroendocrino de células pequeñas, un subtipo de células NEPC (54). Notablemente, in vitro,
una observación que requiere más estudio en vivo. CD44 es un marcador de células NEPC y es
altamente expresado en células PC-3 (54-56). La investigación reciente encontró que CD44 es
importante para la tumorigenicidad de las células PC-3 (66). la expresión de CD44 es reprimida
notablemente en células PC-3 tratados con 1,00 M OBZ (Fig. 4C), lo que indica que CD44
desempeña un papel indispensable en el efecto contra el cáncer de OBZ.
Cabe señalar que la capacidad de OBZ para causar apoptosis e inhiben el
crecimiento es notablemente mayor en las células 22Rv1 de células PC-3. Esto es
probable que sea causada por los dos mecanismos siguientes, una asociada con p53 y
la otra con miR-204. La apoptosis puede ser inducida por diferentes estímulos,
incluyendo la quimioterapia, lo que permite p53 para regular el destino celular
mediante la activación de la transcripción de varios miembros de la familia BCL2 pro-
apoptóticas (67). Como se ha mencionado, es probable que sea el paso fundamental la
mediación del efecto contra el cáncer de OBZ en 22Rv1 células regulación al alza de
p53. Sin embargo, el gen p53 no está presente en células PC-3 (61). Como se informó
anteriormente, miR-204 es un gen supresor de tumor en 22Rv1 células, pero actúa
como un oncomiR en células PC-3 (47). En consecuencia, el mento upregu- OBZ
dependiente de miR-204 debería, en teoría, neutralizar parcialmente el efecto inhibidor
del crecimiento de OBZ en células PC-3. Sin embargo, el método por el cual OBZ
plantea expresión de miR-204 en células PC-3 es actualmente desconocido.
Estudios anteriores han demostrado que OBZ es seguro para su uso en rumiantes, en
animales de laboratorio y en seres humanos en las concentraciones de hasta 30 mg / kg
(43,68), la evidencia que apoya el estudio adicional de OBZ como una novela anti-PCa drogas .
El presente estudio demostró que OBZ notablemente inhibió el crecimiento
de los tumores independientes de andrógenos por la regulación al alza de miR-
204 in vitro y en vivo. Estos hallazgos apoyan la aplicación potencial de OBZ solo
o en combinación con otros fármacos, tales como Enzalutamida, en el tratamiento
clínico del CaP, en particular recurrente CaP.
Expresiones de gratitud
Este estudio fue apoyado por becas de la Fundación Nacional de Ciencias de
China (Nos. 81270760 y 81571495), el Programa Nacional de Investigación Básica
de China (. 2014CB943104 hay) y la
 CHEN et al: Oxibendazol suprime el crecimiento DEL CÁNCER DE PRÓSTATA
Comité Municipal de Shanghai de Ciencia y Tecnología (n.
° 15431902800).
referencias
1. Jemal A, Bray F, Centro de MM, Ferlay J, Ward, E y D Forman: estadísticas de
cáncer global. CA Cáncer J Clin 61: 69-90, 2011.
2. Siegel R, Ma J, Zou Z y Jemal A: estadísticas de cáncer, 2014. CA Cáncer J Clin 64: 9-
29, 2014.
3. Peyromaure M, Valéri A, Rebillard X, Beuzeboc P, Richaud P, Soulié M y Salomon L;
CCAFU: Características de cáncer de próstata en los hombres menores de 50 años
de edad. Prog Urol 19: 803-809,
2009.
4. Crouzet S, O Rouviere, Martin X y Gelet A: de alta intensidad ultrasonidos focalizados
como terapia focal de cáncer de próstata. Curr Opin Urol 24: 225-230, 2014.
5. Zhao X y Chua KJ: Regulación de la región de la crio-congelación de tejido
biológico con un dispositivo térmico controlado. Med Eng Phys 36: 325-334, 2014.
6. Smaletz O, Scher HI, pequeño EJ, Verbel DA, McMillan A, K Regan, Kelly WK y Kattan MW:
Nomograma para la supervivencia global de los pacientes con cáncer de próstata
metastásico progresivo después de la castración. J Clin Oncol 20:
3972-3982, 2002.
7. Asmane I, CERALINE J, Duclos B, Rob L, Litique V, Barthélémy P, Bergerat JP, Dufour P y
Kurtz JE: Nuevas estrategias para el tratamiento médico de cáncer de próstata resistente
a la castración. Oncología 80: 1-11, 2011.
8. Saad F y SJ Hotte: Directrices para el tratamiento del cáncer de próstata
resistente a la castración. Can Urol Assoc J 4: 380-384,
2010.
9. Petrylak DP: Estado actual del cáncer de próstata resistente a la castración. Am J Manag
Care 19 (Supl 18): S358-S365, 2013.
10. De Bono JS, Logothetis CJ, Molina A, K Fizazi, Norte S, L Chu, Chi KN, Jones RJ,
Goodman OB Jr, Saad M, et al: Abiraterona y el aumento de la supervivencia en el
cáncer de próstata metastásico. N Engl J Med 364: 1995-2005, 2011.
11. Scher HI, Fizazi K, Saad F, Taplin ME, Sternberg CN, Miller K, de Wit R, Mulders P, KN Chi,
Shore ND, et al: El aumento de la supervivencia con Enzalutamida en cáncer de próstata
después de la quimioterapia. N Engl J Med 367: 1187-1197, 2012.
12. Tanimoto T, Hori A y Kami M: Sipuleucel-T inmunoterapia para el cáncer de próstata
resistente a la castración. N Engl J Med 363: 1966; autor respuesta 1967-8, 2010.
13. Joung JY, Ha y Kim YS IY: Ra del radio 223 dicloruro de cáncer de próstata
resistente a la castración. Drugs Today (Barc) 49: 483-490, 2013.
14. Pantziarka P, Bouche G, Meheus L, Sukhatme V y Sukhatme VP: Reutilización
de fármacos en su botiquín: oportunidades sin explotar para la terapia del
cáncer? Futuro Oncol 11: 181-184, 2015.
15. Pruksachatkunakorn C, Damrongsak M y Sinthupuan S: azufre para la sarna
brotes en orfanatos. Pediatr Dermatol 19: 448-453, 2002.
16. Kenawi MZ, Morsy TA, Abdalla KF y el Hady HM: El tratamiento de la sarna
humana por azufre y permetrina. J Egipto Soc Parasitol 23: 691-696, 1993.
17. Duan F, Li Y, Chen L, Zhou X, Chen J, Chen H y Li R: azufre inhibe el crecimiento del cáncer
de próstata independiente de andrógenos. Oncol Lett 9: 437-441, 2015.
18. Pantziarka P, Sukhatme V, Bouche G, Meheus L y Sukhatme VP: Reutilización de
fármacos en oncología (rehacer) -itraconazole como un agente anti-cáncer.
Ecancermedicalscience 9: 521, 2015.
19. Theodorides VJ, Chang J, DiCUOLLO CJ, Hierba GM, Parish RC y Scott GC: Oxibendazol,
un nuevo amplio espectro antihelmíntico eficaz contra los nematodos
gastrointestinales de los animales domésticos. Br Vet J 129: xcontdvii-scvi, 1973.
20. Kates KC, Colglazier ML y Enzie FD: Oxibendazol: ensayos críticos antihelmínticos
en équidos. Vet Rec 97: 442-444, 1975.
21. Theodorides VJ, Nawalinski T, Freeman JF y Murphy JR: Eficacia de oxibendazol
contra los nematodos gastrointestinales de ganado. Am J Vet Res 37:
1207-1209, 1976.
22. Overgaauw PA y Boersema JH: la eficacia antihelmíntica de oxibendazol contra
algunos nematodos importantes en perros y gatos. Vet Q 20: 69-72, 1998.
23. Rao PS, Ray Reino Unido, Gupta PB, Rao DV, Islam A, Rajput P y Mukkanti K:
Identificación, aislamiento y caracterización de nuevos impureza en rabeprazol de
sodio. J Pharm Biomed Anal 52: 620-624, 2010.
2225
24. Gaba M, Singh S y Mohan C: bencimidazol: Un andamio emergente para agentes
analgésicos y anti-inflamatorios. Eur J Med Chem 76: 494-505, 2014.
25. Y, Yang J, Wu B, resucitado L y Swayze EE: Síntesis y evaluaciones biológicas de los
nuevos bencimidazoles como agentes antibacterianos potenciales. Bioorg Med
Chem Lett 14: 1217-1220, 2004.
26. Li Y, Tan C, Gao C, Zhang C, Luan X, Chen X, Liu H, Chen Y y Jiang Y: Descubrimiento de derivados
de bencimidazol como novela EGFR multi-objetivo, los inhibidores de VEGFR-2 y la quinasa del
PDGFR. Bioorg Med Chem 19: desde 4529 hasta 4535, 2011.
27. Velik J, Baliharová V, Fink-Gremmels J, Bull S, Lamka J y Skálová L: bencimidazol
drogas y la modulación de las enzimas mación biotransfor-. Res Vet Sci 76: 95-
108, 2004.
28. Králová V, Hanušová V, Staň ková P, Knoppová K, Canova K y Skálová L: efecto
antiproliferativo de tics anthelmin- bencimidazol albendazol, ricobendazole, y
flubendazol en líneas celulares de cáncer intestinal. Anticancer Drugs 24:
911-919, 2013.
29. Hanusova V, Skalova L, Kralova V y Matoušková P: fármacos contra el cáncer potenciales
comúnmente utilizados para otras indicaciones. Curr cáncer Drug Targets
15: 35-52, 2015.
30. Sridhar SS, Freedland SJ, Gleave ME, Higano C, Mulders P, Parker C, Sartor O y Saad
F: cáncer de próstata resistente a la castración: De nuevo fisiopatología para nuevo
tratamiento. Eur Urol 65: 289-299, 2014.
31. Debes JD y Tindall DJ: Mecanismos de cáncer de próstata refractario a los andrógenos. N
Engl J Med 351: 1488-1490, 2004.
32. Nagabhushan M, Miller CM, Pretlow TP, Giaconia JM, Edgehouse NL, Schwartz S, Kung HJ,
de Vere WR, Gumerlock PH, Resnick MI, et al: CWR22: El primer injerto xeno cáncer de
próstata humano con cepas fuertemente dependientes de andrógenos y recaída tanto in
vivo como en agar blando. Cancer Res 56: 3042-2046, 1996.
33. Shen mm y Abate-Shen C: Genética molecular de cáncer de próstata: Nuevas
perspectivas para viejos desafíos. Genes Dev 24: 1967-2000, 2010.
34. Sramkoski RM, Pretlow TG II, Giaconia JM, Pretlow TP, Schwartz S, Sy MS, SR
Marengo, Rhim JS, Zhang D y JACOBBERGER JW: Una nueva línea celular de
carcinoma de próstata humano, 22Rv1. In Vitro Cell Dev Biol Anim 35: 403-409,
1999.
35. esturión CM, Hoffman BR, Chan DW, Ch'ng SL, Hammond E, Hayes DF, Liotta LA,
Petricoin EF, Schmitt M, Semmes DO, et al:
Academia Nacional de Laboratorio de Bioquímica guías de práctica clínica para la
medicina uso de marcadores tumorales en la práctica clínica: Los requisitos de calidad.
Clin Chem 54: E1-E10, 2008.
36. Sardana G, Jung K, Stephan C y Diamandis EP: El análisis proteómico de los medios de
condicionado de los PC3, líneas celulares de cáncer de próstata LNCaP y 22Rv1:
Descubrimiento y validación de biomarcadores de cáncer de próstata candidato. J
Proteoma Res 7: 3329-3338, 2008.
37. Li G, Petiwala SM, Nonn L y Johnson JJ: Inhibición de CHOP acentúa el efecto
apoptótico de α-mangostin de la de mangos Steen fruta (Garcinia mangostana)
en células de cáncer de próstata 22Rv1. Biochem Biophys Res Commun 453: 75-
80, 2014.
38. Kasimsetty SG, Bialonska D, Reddy MK, Thornton C, Willett KL y Ferreira D:
Efectos de la entos constituciones química granada / metabolitos microbianos
intestinales en CYP1B1 en células de cáncer de próstata 22Rv1. J Agric Food
Chem 57: 10636 hasta 10644,
2009.
39. Yang F, Jiang X, Song L, Wang H, Mei Z, Xu Z y Xing N: quercetina inhibe la
angiogénesis a través de trombospondina-1 upregulation para antagonizar el
crecimiento de células humanas de cáncer de próstata PC-3 in vitro e in vivo.
Oncol Rep 35: 1602-1610, 2016.
40. Livak KJ y Schmittgen TD: Análisis de los relativos de genes expresiones datos Sion
utilizando en tiempo real el método 2 (-Delta Delta C (T)) PCR cuantitativa y. Métodos 25:
402-408, 2001.
41. McDonald ER III, Wu GS, Waldman T y El-Deiry WS: defecto de reparación en p21 WAF1 /
CIP1 - / - células cancerosas humanas. Cancer Res 56: 2250-2255, 1996.
42. Smith ML, Chen TI, Zhan Q, Bae I, Chen CY, Gilmer TM, Kastan Mo, O'Connor PM y
Fornace AJ Jr: Interacción de la proteína p53 regulada Gadd45 con antígeno nuclear de
proliferación celular. Science 266: 1376-1380, 1994.
43. Theodorides VJ, DiCuollo CJ, Nawalinski T, Miller CR, Murphy JR, Freeman JF,
Killeen JC Jr y Rapp WR: Toxicologic y estudios teratológicos de oxibendazol
en rumiantes y animales labo- ratorio. Am J Vet Res 38: 809-814, 1977.
44. Stenman UH: El antígeno prostático específico, el uso clínico y puesta en escena: una visión
general. Br J Urol 79 (Suppl 1): S53-S60, 1997.
45. Heinlein CA y Chang C: Receptor de andrógenos en el cáncer de próstata. Endocr Rev 25:
276-308, 2004.
46. Kim J y Coetzee GA: Prostate regulación génica específica de antígeno por el receptor de
andrógenos. J Cell Biochem 93: 233-241, 2004.
2226 ONCOLOGÍA LETRAS 15: 2218-2226, 2018
47. Ding M, Lin B, Li T, Liu Y, Li Y, Zhou X, Miao M, Gu J, Pan H, Yang F, et al: Una función
reguladora del crecimiento dual todavía opuesto de miR-204 y su XRN1 diana en células
de adenocarcinoma de próstata y células de cáncer de próstata neuroendocrinos-
similares. Oncotarget 6: 7.686-7.700, 2.015.
48. Hermeking H: La familia miR-34 en el cáncer y la apoptosis. La muerte celular Differ 17:
193-199, 2010.
49. Östling P, Leivonen SK, Aakula A, Kohonen P, Mäkelä R, Hagman Z, Edsjö A,
Kangaspeska S, Edgren H, Nicorici D, et al:
El análisis sistemático de microRNAs dirigidos al receptor de andrógenos en células de
cáncer de próstata. Cancer Res 71: 1956-1567, 2011.
50. Shi XB, Xue L, Ma AH, Tepper CG, Gandour-Edwards R, Kung HJ y DeVere WR:
tumorales supresores miR-124 objetivos del receptor de andrógenos e inhibe la
proliferación de células de cáncer de próstata. Oncogene 32: 4.130 a 4.138, 2.013.
51. Mikhaylova O, Stratton Y, Hall D, Kellner E, Ehmer B, Drew AF, Gallo CA, Plas DR,
Biesiada J, Meller J y Czyzyk-Krzeska MF: BVS-regulada miR-204 suprime el
crecimiento tumoral a través de la inhibición de la LC3B autofagia mediada en
células claras noma carci- renal. Cancer Cell 21: 532-546, 2012.
52. Sacconi A, Biagioni F, Canu V, Mori M, Di Benedetto A, Lorenzon L, Ercolani C, Di
Agostino S, Cambria AM, Germoni S, et al: miR-204 se dirige a la expresión de
Bcl-2 y mejora la capacidad de respuesta del cáncer gástrico. La muerte celular
Dis 3: E423, 2012.
53. Ying Z, Li Y, Wu J, Zhu X, Yang Y, Tian H, Li W, Hu B, Cheng SY y Li M: Pérdida de miR-
204 expresión aumenta glioma migración ción y el tallo fenotipo de células similares.
Cancer Res 73: 990-999, 2013.
54. Tai S, Sun Y, Squires JM, Zhang H, OH WK, Liang CZ y Huang J: PC3 es una característica
línea celular de carcinoma de células pequeñas prostático. Próstata 71: 1668-1679, 2011.
55. Palapattu GS, Wu C, Silvers CR, Martin HB, Williams K, Salamone L, Bushnell T,
Huang LS, Yang Q y Huang J: expresión selectiva de CD44, un cáncer de próstata
marcador de células madre putativa, en células de tumor neuroendocrino de
cáncer de próstata humano. Próstata 69: 787-798, 2009.
56. Simon RA, di Sant'Agnese PA, Huang LS, Xu H, Yao JL, Yang Q, Liang S, Liu J, Yu R, Cheng L,
et al: la expresión de CD44 es una característica de carcinoma de células pequeñas de la
próstata y la distingue de sus imitadores. Hum Pathol 40: 252-258, 2009.
57. Liu C, Kelnar K, Liu B, Chen X, Calhoun-Davis T, Li H, Patrawala L, Yan H, Jeter C,
Honorio S, et al: El microARN miR-34a inhibe las células madre del cáncer de
próstata y metástasis mediante la represión directa CD44. Nat Med 17: 211-215,
2011.
58. Yin Y, Zhang B, Wang W, Fei B, Quan C, Zhang J, Song M, Bian Z, Wang Q, Ni S, et
al: miR-204-5p inhibe la proliferación y la invasión y aumenta la sensibilidad
quimioterapéutico de células de cáncer colorrectal mediante la regulación
negativa RAB22A. Clin Cancer Res 20: 6187-6199, 2014.
59. Ryan J, Tivnan A, Fay J, Bryan K, Meehan M, Creevey L, Lynch J, Bray IM, O'Meara A,
Tracey L, et al: MicroARN-204 aumenta la sensibilidad de las células de
neuroblastoma con cisplatino y se asocia con un resultado clínico favorable. Br J
Cancer 107: 967-976, 2012.
60. Liu J y Li Y. tricostatina A y tamoxifeno inhiben el crecimiento de células de cáncer
de mama por miR-204 y ER reduciendo vía AKT / mTOR. Biochem Biophys Res
Commun 467: 242-247, 2015.
61. van Bokhoven A, Varella-Garcia M, Korch C, Johannes WU, Smith EE, Miller HL,
Nordeen SK, Miller GJ y Lucia MS: Caracterización molecular de líneas celulares de
carcinoma de próstata humano. Próstata 57: 205-225, 2003.
62. Wen S, Niu Y, Lee SO y Chang C: receptor de andrógenos (AR) positiva vs papeles negativos en las muertes
celulares de cáncer de próstata incluyendo la apoptosis, anoikis, entosis, necrosis y muerte celular
autofágica. Tratar el cáncer Rev 40: 31-40, 2014.
63. Vashchenko N y Abrahamsson PA: neuroendocrino diferenciación en cáncer de
próstata: Implicaciones para las nuevas modalidades de tratamiento. Eur Urol 47:
147-155, 2005.
64. Jin RJ, Wang Y, Masumori N, Ishii K, Tsukamoto T, Shappell SB, Hayward SW, Kasper S y
Matusik RJ: NE-10 cáncer neuroendocrino promueve el crecimiento de xenoinjertos
LNCaP en ratones castrados. Cancer Res 64: 5489-5495, 2004.
65. Beltrán H, Rickman DS, Parque K, Chae SS, Sboner A, MacDonald TY,
Wang Y, Sheikh KL, Terry S, Tagawa ST, et al:
Caracterización molecular de cáncer de próstata neuroendocrino y la identificación de nuevas
dianas de fármacos. El cáncer Discov 1: 487-495, 2011.
66. Li W, Cohen A, Sun Y, Squires J, Braas D, Graeber TG, Du L, Li G, Li Z, Xu X, et al: El papel
de CD44 en el metabolismo de la glucosa en el carcinoma neuroendocrino de células de
la próstata. Mol Cancer Res 14: 344-353, 2016.
67. Chi SW: penetraciones estructurales en la vía apoptótica independiente de la
transcripción de p53. BMB Rep 47: 167-172, 2014.
68. Huang YX, Zhou JX, Xue ZQ, Wu YX, Chen JY, Wu HZ, Ji MH, Shen YP, Cao GQ, Wu
ZX, et al: Las observaciones clínicas en el tratamiento de la anquilostomiasis,
Ascaris y Trichuris infección con oxibendazol. Zhongguo Ji Sheng Chong Xue Yu Ji
Sheng Chong Bing Za Zhi 8: 100-103, 1990 (en chino).
Este trabajo es bajo licencia de Creative Commons
Reconocimiento-No comercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
(CC BY-4.0 NC-ND) Licencia.