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Identificación
Aislamiento
de un Obtención de Reproducción Selección de Preparación Incubación de
del hongo Extracción del
espécimen una muestra in Vitro de T. una cepa de de un la cepa de T.
Taxomyces Taxol.
sano de Taxus de floema. andraenae. T. andraenae. biorreactor. andraenae
andraenae.
brevifolia.
Para aislar el hongo de la muestra del floema, se desinfecta el tejido celular con una solución de
etanol al 80%, después se transfieren las hifas a un agar micológico modificado.
La reproducción in vitro se lleva a cabo en cajas de Petri con el agar modificado, manteniendo una
temperatura de 25 C, sin agitación y teniendo un radio de superficie-volumen de 1.3 cm2:ml.
Se seleccionan las hifas con mejor desarrollo y se repite el proceso de reproducción in vitro.
Después de 21 días de incubación, el medio de cultivo se filtra con una tela de nylon de 200 micras,
el residuo se mele en una omni mezcladora Sorvall y se filtra nuevamente.
Los fluidos combinados se extraen con un volumen equivalente de cloroformo-metanol (10:1v/v).
Este solvente se elimina por evaporación rotativa a 30 C.
El extracto se disuelve en 2 ml de cloroformo y se coloca en una columna de gel de sílice. La
columna se baña con cloroformo y se extrae con 20 ml de acetonitrilo, el cual será secado y
sometido a una cromatografía en una placa TLC para comprobar su contenido de Taxol.
Un método de modificación genética implica mejorar los niveles de expresión de las enzimas de
biosíntesis de Taxol Geranil-geranil pirofosfato sintasa (GGPPs) y taxadienosintasa (TS) aplicando
un estimulante conformado de compuestos de metil jasmonatos, ácido salicílico y elicitores fúngicos.
Los genes clave identificados en la producción de Taxol son los siguientes:
El impacto que tienen los elicitores fúngicos se muestra en la siguiente imagen (Figure 3):
Bibliogafía:
Badi, H.N., et al (2015). New approach to improve taxol biosynthetic. Bulgaria: Trakia Journal of Sciences.
Sohn, H., Okos, M. (1998). Paclitaxel (Taxol): from nutt to drug. Estados unidos de norteamérica:
Journal of microbiology and biotechnology.
Stierle, A., Strobel, G., Stierle, D. (1993). Taxol and Taxane production by Taxomyces andreanae, an
Endophytic Fungus of Pacific Yew. Estados unidos de norteamérica: Science magazine.