Principales vías

metabólicas
fermentativas.
Cultivos anaerobios
Dra. Keiko Shirai 1
 Glicólisis
Embden- Meyerhof-Parnas (EMP)
 6 CH2OH 6 CH OPO 2
2 3
ATP ADP
5 O 5 O
H H H H
H H
4 1 4 H 1
OH H OH
Mg2+
OH OH OH OH
3 2 3 2
H OH Hexocinasa H OH
glucosa glucosa-6-fosfato
 NH2

ATP N
N
adenosina trifosfato
O O O N N

O P O P O P O CH2 adenina
O
   H H
O O O
H H
OH OH
ribosa
 6 CH2OH 6 CH OPO 2
2 3
ATP ADP
5 O 5 O
H H H H
H H
4 1 4 H 1
OH H OH
Mg2+
OH OH OH OH
3 2 3 2
H OH Hexocinasa H OH
glucosa glucosa-6-fosfato
glucosa

Hexocinasa
 6 CH OPO 2
2 3
5 6 CH OPO 2 1CH2OH
H O H 2 3
O
H
4 H 1 5 H HO 2
OH
OH OH H 4 3 OH
3 2
OH H
H OH
Fosfoglucosa Isomerasa
glucose-6-fosfato fructosa-6-fosfato
 Fosfofructocinasa
6 CH OPO 2 1CH2OH 6 CH OPO 2 1CH2OPO32
2 3 2 3
O ATP ADP O
5 H HO 2 5 H HO 2

H 4 3 OH Mg2+ H 4 3 OH
OH H OH H
fructosa-6-fosfato fructosa-1,6-bifosfato
 2
1CH2OPO3

2C O
H O
2
HO 3C H Aldolasa 3
CH2 OPO 3 1C

H 4C OH 2C O + H 2C OH
2
H C OH 1CH2OH 3 CH2 OPO 3
5
2 dihidroxiacetona gliceraldehido-3-
6 CH2 OPO 3
fosfato fosfato
fructosa-1,6-
bifosfato
Triosafosfato Isomerasa
 2
lisina 1CH 2OPO3
H
2C NH (CH2)4 Enzyme
+
H3N+ C COO HO CH
3
CH2 H 4
C OH
CH2 H 5
C OH
2
CH2 6 CH 2OPO3

CH2 Intermedio Base de Schiff o


reacción de la Aldolasa
NH3
 Triosafosfato Isomerasa
H H OH H O
+ + + +
H C OH H H C H H C
C O C OH H C OH
CH2OPO32 CH2OPO32 CH2OPO32

dihidroxiacetone enediol gliceraldehído-

fosfato intermediario 3-fosfato
 Gliceraldehído-3-fosfato
Dehidrogenasa
H O + H+ O OPO32
1C NAD+ NADH 1C
+ Pi
H C OH H C OH
2 2
2 2
3 CH2 OPO 3 3 CH2 OPO3

gliceraldehído- 1,3-bisfosfo-
3-fosfato glicerato
 Fosfoglicerato cinasa
O OPO32 ADP ATP O O
1C 1
C
H 2C OH H 2C OH
2 Mg2+ 2
3 CH2 OPO3 3 CH2 OPO3

1,3-bisfosfo- 3-fosfoglicerato
glicerato
 Fosfoglicerato Mutasa
O O O O
C
1
C
1
H 2C OH H 2C OPO32
2
3 CH2OPO3 3 CH2OH
3-fosfoglicerato 2-fosfoglicerato
 Piruvato Cinasa
O O O O
ADP ATP
1
C 1
C

2
C OPO32 2
C O

3 CH2 3 CH3
Fosfoenol piruvato piruvato
 glucosa Glucólisis
ATP
Hexocinasa
ADP
Glucosa-6-fosfato
Fosfoglucosa Isomerasa
Fructosa-6-fosfato
ATP
Fosfofructocinasa
ADP
Fructosa-1,6-bifosfato
Aldolase

Gliceraldehido-3-fosfato + dihidroxiacetona-fosfato
Triosafosfato
Isomerasa
 Gliceraldehido-3-fosfato
NAD+ + Pi Gliceraldehido-3-fosfato
NADH + H+ Deshidrogenasa
1,3-bisfosfoglicerato
ADP
Fosfoglicerato cinasa
ATP
3-fosfoglicerato
Fosfoglicerato Mutasa
2-fosfoglicerato

H2O Enolasa
Fosfoenolpiruvato
ADP
Piruvato Cinasa
ATP
piruvato
¿Cuántos ATP ~P enlaces se gastan?

¿Cuántos enlaces ~P ATP se producen?

Producción neta de enlaces ~P de ATP por glucosa

Balance para enlaces ~P de ATP:
 2 ATP gastados
 4 ATP producidos (2 por cada uno de los dos fragmentos
de 3C fragments por glucosa)
 Producción neta de 2 enlaces ~P de ATP por glucosa.
Glucólisis – ruta total, sin considerar H+:
glucosa + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi 
2 piruvato + 2 NADH + 2
ATP
En organismos aerobios:
 piruvato producido con la Glucólisis es oxidado a CO2 via
Ciclo de Krebs
 NADH producido con Glucólisis & Ciclo de Krebs es
reoxidado via cadena respiratoria con producción de
mucho ATP.
Fermentación:
Organismos anaerobios carecen
de cadena respiratoria.
 Lactato Dehidrogenasa
O O O O
C NADH + H+ NAD+ C
C O HC OH
CH3 CH3
Piruvato lactato
 Piruvato Alcohol
Decarboxilasa Dehidrogenasa
O O
CO2 H NADH + H+ NAD+ H
C O
C O C H C OH

CH3 CH3 CH3

piruvato acetaldehido etanol
Glucosa a lactato
¿Cuántos ATP ~P enlaces se gastan?

¿Cuántos enlaces ~P ATP se producen?

Producción neta de enlaces ~P de ATP por glucosa

 Transformación de glucosa a
piruvato

Ruta (Glucólisis) Embden-Meyerhof-

Parnas
Ruta de Hexosa monofosfato
Ruta Entner-Doudoroff
Ruta de la fosfocetolasa
• Embden-Meyerhoff-Parnas
• Se encuentra en casi todos los organismos
• Hexosa monofosfato (Warburg-Dickens)
• También se encuentra en casi todos los organismos
• Responsable de la sintesis de pentosas empleadas en la síntesis de
nucleotidos
• Entner-Doudoroff
• Se encuentra en Pseudomonas y géneros relacionados
• Fosfocetolasa
• Se encuentra en Bifidobacterium y Leuconostoc
Ruta Hexosa monofosfato (HMP)

(Ruta fosfogluconato o Ruta

Warburg-Dickens)

Emplea
pentosas y
NADPH

Opera con
glucólisis
Ruta Pentosa Fosfato
• produce precursores (ribosa y deoxiribosa) para síntesis de ácidos
nucleicos
• produce eritrosa fosfato que es precursor para la síntesis de
aminoácidos aromáticos
• NADPH es producido como la principal fuente de electrones para
biosíntesis
 Ruta de la Pentosa Fosfato

• En esta ruta, G-6-P es convertida a ribulosa-5-

fosfato y CO2.
• Ribulosa-5-fosfato es mantenida en equilibrio con
ribosa-5-fosfato y xilulosa-5-fosfato mediante
isomerasa y epimerasa
• Se requieren 3 vueltas del ciclo para producir una
triosa fosfato (más 3 CO2) por cada hexosa a
través de una serie de reacciones de transcetolasa
y transaldolasa
• Esta ruta produce eritrosa-4-P y gliceraldehído-3-P
que pueden entrar a la ruta EMP.

• La ruta completa produce:

• dióxido de carbono
• NADPH e intermediarios de biosíntesis tales
como eritrosa-4-P y ribosa-5-P.
• ¿Se produce ATP?
• NO produce ATP pero si NADPH+H que en la cadena respiratoria
puede producir ATP

• ¿Cómo opera esta ruta sin producir energía?

Regulación

• NADPH regula la ruta.

• fructosa 6-fosfato:
• es convertida a glucosa 6-fosfato para regresar a la ruta
pentosa fosfato

• gliceraldehído 3-fosfato:
• a. mediante la ruta EMP se convierte a piruvato que puede
entrar a ciclo de Krebs
• b. se puede transformar a hexosa fosfato y regresar a
la ruta pentosa fosfato

• La reacción global es:

• 6 glucosa 6-fosfato +12NADP++3H2O → 5 glucosa 6-
fosfato + 6CO2+12NADPH+12H++Pi
•
3) Entner-Doudoroff ruta (ruta KDPG )

1952, Entner-Doudoroff ：Pseudomonas saccharophila

proceso (4 pasos)
ATP
1 glucosa glucosa 6-fosfatos 6-fosfogluconato

6-fosfogluconato dehidratasa

2 ceto-3 deoxi-6-fosfoglunato

2-oxo-3-deoxi-6-fosfogluconato aldolasa

gliceraldehído 3-fosfato + piruvato

Produce NADPH y 1 ATP

No involucra glucólisis
Pseudomonas, Rhizobium, Agrobacterium
 Ruta Entner-Doudoroff
• Esta ruta no se encuentra en eucariotas
• Esta ruta es activa en E. coli y muchas otras bacteriass Gram
negativas
• Dos enzimas claves: 6-fosfogluconato dehidratasa (reacción 2) y
2-ceto-3-deoxi-6-fosfogluconato aldolasa (reacción 4)
 Ruta Entner-Doudoroff
Se puede considerar que es una ruta alterna a la ruta de
hexosa monofosfato.
Provee un mínimo de 5 intermediarios biosintéticos
críticos:
- glucosa-6-P
- triosa fosfato
- 3-fosfoglicerato
- fosfoenol piruvato (PEP)
- piruvato
 Ruta Entner-Doudoroff
Inicia con la ruta HM hasta ácido fosfoglucónico. Entoces en
lugar de convertirse a pentosa y dióxido carbono, se deshidrata
a ácido 2-ceto-3 dehidro 6 fosfoglucónico.

piruvato gliceraldehído-3-P

La mitad de una
molécula de glucosa
 Ruta Entner-Doudoroff
La EMP y la ruta ED convierte una molécula de glucosa a dos
moléculas de piruvato.

piruvato gliceraldehído-3-P

La mitad de una molécula de

glucosa
En la ruta EM, piruvato se obtiene por la formación como
intermediario de gliceraldehído-3-P. En la ruta ED a partir de la
mitad superior de la molécula de glucosa.
 Ruta Entner-Doudoroff

El rendimiento energético por fosforilación de

substrato por molécula de hexosa degradada por
la ruta EMP es el doble que la que se obtiene por
la ruta ED.
 4) Ruta fosfocetolasa (PK)

a.Ruta de la pentosa fosfocetolasa

G xilulosa 5-fosfato
fosfocetolasa
acetil fosfato + gliceraldehído 3-fosfato

piruvato
etanol
ácidoláctico

1 G  ácido láctico + etanol + 1 ATP+ NADPH + H+

b.Ruta hexosa fosfocetolasa (HK)
(Bifidobacterium bifidum )
G fructosa 6-fosfatos
fosfocetolasa
eritrosa - 4-P + acetil-fosfatos
fructosa 6-fosfatos
acetocinasa
xilulosa -5-P ribulosa-5-P
acético ácido
fosfocetolasa
gliceraldehído 3-fosfato + acetil-fosfatos

ácido láctico ácido acético

1 G  ácido láctico + 1.5 ácido acético + 2.5 ATP
2 fermentación
1. genera ATP mediante fosforilación por substrato;
2. glucosa es pacialmente oxidada en energía;
3. poca energía;
4. genera muchos tipos de productos de fermentación
C. fermentación

• ácido pirúvico es reducido a ácidos orgánicos o alcoholes.

• El aceptor final de electrones se reduce a un derivado de ácido
pirúvico
• NADH es oxidado a NAD: Esencial para que las rutas glucolìticas
puedan operar.
• O2 es no requerido.
• No se sintetiza ATP adicional.
• CO2 y/o H2 puede ser liberado
C. fermentación
• ejemplos de rutas fermentativas
• fermentación ácido láctica
• se encuentra en muchas bacterias;
e.g. Streptococcus cremoris, Lactobacillus acidophilus
• fermentación ácido mixta
• e.g. Escherichia coli
• Prueba de rojo de metilo
• fermentación 2,3-butanodiol
• e.g. Enterobacter aerogenes
• reacción Voges-Proskauer
C. fermentación
• Otros ejemplos
• etanol
Saccharomyces cerevisiae
• ácido propiónico
Propionibacterium
• acetona, buteraldehído, y butanol
Clostridium acetobutylicum
1） fermentación alcohólica
a. levaduras
1G 2 piruvato  2 aldehído + CO2
（EMP）  2 etanol + 2 ATP
condición：pH 3.5~4.5 ,sin O2
Cepa: Saccharomyces cerevisiae, unas pocas bacterias (Erwinia amylovora,
Sarcine vintriculi)
fermentación de glicerol:
dihidroxiacetona como aceptor de hidrógeno que es hidrolizado hasta
glicerol
b. bacterias (Zymomonas mobili, Pseudomonas saccharophila )
Fermentación homoalcohólica
1G 2 piruvato etanol + 1ATP
（ED）

fermentación heteroalcohólica (Thermoanaerobacter etanolicum)

1G 2 piruvato

（ piruvato formato liasa ）

Ácido formico + acetil-CoA

Sin piruvato decarboxylasa
aldehído  etanol
Sin aldehído dehidrogenasa
 2）fermentación ácido láctico
Fermentación Homoláctica
For ejemplo, Lactobacillus delbruckii, Streptococcus faecalis

—— ruta EMP （piruvato a lactato ）

fermentación Heteroláctica （ ruta PK ）

Leuconostoc mesenteroides （PK）
genera energía：1ATP

Bifidobacterium bifidum （PH、HK）

genera energía： 2G  5 ATP, 1G  2.5ATP
3) Fermentación ácido mixta, butanodiol
a. fermentación ácido mixta ：
——E. coli, Salmonella , Shigella

CO2 + H2
lactato dehidrogenasa
lactato
piruvato formata liasa acetil-CoA +formil
fosfotransacetilasa
1G piruvato aldehído dehidrogenasa
acetocinasa
Alcohol dehidrogenasa

acetato etanol
Metil malonil CoA ácido
oxaloacetato
carboxiltransferasa propiónico
b. Fermentación a butanodiol
—— Enterobacter, Serratia
(acetolactato dehidrogenasa)
piruvato acetolactato 3-hidroxi butanona

Prueba （OH-、O2）
bioquímicaVogues
Proskauer Coloración roja diacetilo butanodiol
neutral
Dos reacciones importantes con Vogues Proskauer
(VP) y rojo de metilo (RM):
Enterobacter aerogenes: RM （-）
E.coli: V.P. （-）, RM （+）
4) fermentación mixta a acetona-butanol

（ mixta, acetona:butanol : etanol = 3：6：1）

——Clostridium acetobutyricum

2 piruvato 2 acetil-CoA
acetil-CoA acetiltransferasa
acetoacetil-CoA
（acetato CoA transferasa）

（acetoacetato descarboxilasa）
butanol
acetona +CO2