3.

5 POMPA ELECTROGENIC ADALAH KRITIS UNTUK SELULER TRANSPORTASI AKTIF

3.5.1 ACTIVE TRANSPORT IS DRIVEN BY ATPase-PROTON POMPA

Energi untuk menggerakkan transpor aktif berasal terutama dari hidrolisis ATP. Membran-
pentransduksi energi kloroplas dan mitokondria mengandung besar, multiprotein ATPase kompleks (Bab
7, 10). Kloroplas dan mitokondria ATPase, yang dikenal sebagai F-jenis ATPase, memanfaatkan energi
yang berkaitan dengan proton gradien elektrokimia di membran untukmendorong sintesis ATP. ATPase
kompleks juga ditemukan dalam plasma dan vacuolar membran sel dan membran mungkin lain juga.
ATPase ini disebut pompa ATPase-proton (atau, H + ATPase). Dikenal sebagai P-jenis ATPase, membran
plasma pompa ATPase-proton secara struktural berbeda (Gambar 3.9) dan beroperasi di kebalikan dari
F-tipe. Daripada sintesis ATP, yang ATPase membran plasma menghidrolisis ATP dan menggunakan
energi bebas negatif untuk '' pompa '' proton dari satu sisi membran yang lain melawan gradien
elektrokimia. Pompa ATPase-proton sehingga berfungsi sebagai protein pembawa proton-translokasi
dan energi bebas dari hidrolisis ATP adalah kekal di bentuk gradien proton melintasi membran. gradien
ini proton (? pH), bersama-sama dengan potensial membran normal (??), memberikan kontribusi untuk
kekuatan proton motif (PMF) yang cenderung bergerak proton kembali melintasi membran (Persamaan
3.6). PMF = ?? -? 59 pH (3,6)
Hal ini umumnya mengakui bahwa proton motif kekuatan didirikan dengan memompa proton
melintasi membran adalah sumber utama energi untuk berbagai kegiatan pabrik. Kami akan kembali
persamaan ini dan konsep kekuatan motif proton dalam diskusi kami sintesis ATP di kloroplas dan
mitokondria (Bab 5).

Termasuk kegiatan seperti transpor aktif zat terlarut (kation, anion, asam amino, dan gula),
regulasi pH sitoplasma, pembukaan stomata dan penutupan, transportasi sukrosa selama pemuatan
floem, dan hormon-dimediasi pemanjangan sel.

Sebuah skema model berkaitan pompa ATPase-proton terlarut pertukaran melintasi membran
ditunjukkan pada Gambar 3.10. ATP dibutuhkan untuk menggerakkan pompa adalah akhirnya berasal
dari fosforilasi oksidatif di mitokondria. Protein proton-translokasi yang ditampilkan memperpanjang
melintasi membran plasma, dengan nya ATP mengikat situs di sisi sitosol. Hidrolisis dari hasil ATP dalam
translokasi satu atau lebih proton dari sitosol ke apoplastic sekitarnya dinding sel ruang.

Ada beberapa konsekuensi sangat menarik dari pompa ATPase-proton. Pertama, spesies ion
tunggal translokasi dalam satu arah. Ini bentuk transportasi akibatnya dikenal sebagai sistem Uniport.
Kedua, karena ion diangkut membawa muatan, gradien elektrokimia didirikan melintasi membran.
Dengan kata lain, pompa ATPase-proton adalah electrogenic-itu berkontribusi langsung ke beda
potensial negatif melintasi membran plasma. Bahkan, pompa proton electrogenic adalah faktor utama
dalam potensial membran dari kebanyakan sel tanaman. Dari persamaan 3.5, perbedaan sepuluh kali
lipat konsentrasi proton (satu unit pH) di 25◦C kontribusi 59mV ke potensi. Karena proton gradien
melintasi membran plasma biasanya di urutan 1,5 sampai 2 unit pH, dapat mencapai sekitar 90 sampai
120mV potensi membran keseluruhan. Ketiga, karena ion translokasi adalah proton, pompa ATPase-
proton membentuk gradien proton serta gradien listrik melintasi membran. Energi yang tersimpan
dalam elektrokimia yang dihasilkan proton gradien (atau kekuatan motif proton) kemudian dapat
digabungkan dengan pekerjaan seluler sesuai dengan hipotesis kemiosmotik Mitchell (lihat Bab 5).
Memang, ini adalah demonstrasi yang sangat baik tentang bagaimana kopling kemiosmotik tidak
terbatas pada sintesis ATP di kloroplas dan mitokondria tetapi dapat digunakan untuk melakukan
jenis lain dari pekerjaan di tempat lain dalam sel.

Beberapa cara kopling proton elektrokimia gradien terlarut gerakan melintasi membran yang
diilustrasikan pada Gambar 3.10. Dalam kasus pertama, electrogenic pompa kontribusi terhadap
penyerapan biaya tergantung kation melalui saluran ion-spesifik (Gambar 3.10) (B)). Kedua, kembalinya
proton ke sitosol dapat ditambah dengan pengangkutan molekul zat terlarut lainnya di saat yang sama,
atau cotransport. Transportasi dari kedua ion adalah dimediasi oleh protein pembawa yang sama dan
gerakan zat terlarut kedua secara wajib digabungkan ke ke dalam fluks proton bawah gradien
elektrokimia mereka. Jika ion kedua bergerak dalam arah yang berlawanan dari proton, metode
cotransport disebut lebih khusus sebagai antiport. Pada Gambar 3.10 (c), misalnya, fluks proton ke
dalam sel ditunjukkan digabungkan ke penghabisan yang kation lain keluar dari sel. Sini energi dari
proton elektrokimia gradien digunakan untuk mempertahankan rendah konsentrasi internal kation
tertentu. setiap kation yang melakukan kesempatan untuk '' bocor '' ke dalam sel, tidak diragukan lagi
pasif melalui saluran ion, dengan demikian dipompa keluar terhadap gradien elektrokimia mereka. Jika
dua zat terlarut bergerak dalam arah yang sama pada saat yang sama, metode cotransport disebut
sebagai symport. Dua contoh adalah ditunjukkan pada Gambar 3.10 (d, e). Dalam contoh pertama,
proton fluks ke dalam sel digabungkan dengan serapan dari anion (A-) terhadap gradien elektrokimia
mereka. Dalam Contoh kedua dari symport, gradien proton dapat digunakan untuk daya penyerapan zat
terlarut bermuatan (S), seperti sebagai gula. Ketiga contoh cotransport adalah bentuk transportasi aktif
dimediasi oleh protein pembawa tertentu.

3.5.2 ATPase-PROTON POMPA PLASMA MEMBRAN DAN MEMBRAN vakuolar BERBEDA

Banyak dari karya eksperimental perintis pada membran ATPase telah dilakukan dengan kecil,
bulatvesikel yang diperoleh dari membran sel yang terisolasi. Ketika membran terganggu, potongan
alami menutup untuk membentuk vesikel karena mereka sangat alam hidrofobik. Sedangkan teknik
yang relatif langsung, persiapan vesikel dari satu sumber membran, dan dengan demikian mengandung
satu jenis dari ATPase, menyajikan beberapa kesulitan. Kontaminasi oleh ATPase kloroplas dapat
dihindari dengan mengisolasi membran dari jaringan gelap tumbuh, etiolated, sedangkan mitokondria
biasanya dapat dipisahkan dari membran lain dengan sentrifugasi diferensial. Ini lebih sulit, namun,
untuk memisahkan membran plasma dari membran sel lain seperti vacuolar yang membran dan,
akibatnya, banyak studi awal yang ditandai dengan hasil yang tidak konsisten dari berbagai
laboratorium. inkonsistensi ini diselesaikan ketika menjadi jelas bahwa persiapan membran sering
berisi dua jenis electrogenic ATPase-proton pompa: satu berhubungan dengan membran plasma dan
satu dengan membran vacuolar. teknik ditingkatkan telah diaktifkan di pemisahan parsial setidaknya
dari dua membran dengan gradien densitas sentrifugasi dan itu adalah Sekarang mungkin untuk
mengkarakterisasi ATPase masing-masing. Plasma membran-jenis proton-memompa ATPase
adalah khas dihambat oleh ion vanadat (VO- 3) tapi umumnya tidak sensitif terhadap anion lain seperti
NO- 3. Vanadate bersaing dengan fosfat untuk mengikat situs, menunjukkan bahwa ATP transfer gugus
fosfat ke ATPase protein (Gambar 3.9). dihasilkan energi kaya phosphoenzyme kemudian mengalami
konformasi Perubahan yang mengekspos situs proton-mengikat ke di luar. Bukti sejauh ini menunjukkan
bahwa satu proton translokasi untuk setiap ATP dihidrolisis. The vacuolar-jenis pompa ATPase-proton
(atau V-jenis) berbeda dari plasma membran-ketik beberapa cara. Hal ini, misalnya, tidak sensitif
terhadap Vanadate tapi sangat dihambat oleh nitrat. Dalam hal ini adalah mirip dengan mitokondria,
atau F-jenis, ATPase, yang juga tidak sensitif terhadap Vanadate. Haruskah persiapan terkontaminasi
dengan ATPase mitokondria, Namun, aktivitasnya dapat diblokir oleh termasuk oligomycin atau azida
dalam media uji. kedua menghambat ATPase mitokondria tanpa mempengaruhi aktivitas dari tonoplast-
jenis. Secara struktural, vacuolar-jenis ATPase juga lebih mirip dengan mitokondria F-jenis ATPase dari
membran plasma ATPase. Seperti F-jenis, V-jenis dapat dipisahkan menjadi kompleks subunit hidrofobik
tertanam dalam membran (analog dengan F0) dan kompleks larut, subunit hidrofilik (analog dengan F1).
Meskipun kompleks yang larut berisi situs ATP-mengikat, ketidakpekaan dari V-jenis ATPase untuk
Vanadate menunjukkan bahwa itu tidak membentuk menengah terfosforilasi. Versi vacuolar juga
tampaknya berbeda di dalamnya yang mengangkut dua proton untuk setiap molekul ATP yang
dihidrolisis. Fungsi dari vacuolar ATPase adalah untuk memompa proton dari sitosol ke dalam vakuola,
sehingga akuntansi untuk fakta bahwa potensi vakuola lebih positif daripada sitosol oleh beberapa 20
sampai 30mV (Gambar 3.10). Dalam kasus ekstrim, gradien pH besar bisa dipertahankan di membran
vacuolar dan vacuolar getah mungkin menjadi sangat asam. Sebagai contoh, pH jus lemon (yang
didominasi vacuolar getah) biasanya sekitar 2,5. Seperti membran plasma pompa pompa vacuolar juga
electrogenic, kecuali bahwa akumulasi proton berfungsi untuk mengurangi potensi vakuola relatif sitosol.
Itu dihasilkan beda potensial berfungsi untuk mendorong anion (Misalnya, Cl- atau malat) ke vakuola,
yang kurang negatif daripada sitosol. The elektrokimia proton gradien juga dapat digunakan untuk
menggerakkan kation (misalnya, K + atau Ca2 +) ke dalam vakuola oleh pembawa antiport. Keduanya
kegiatan ini membuat kontribusi penting untuk perubahan turgor yang mendorong gerakan sel penjaga
stomata dan sel-sel motorik khusus yang mengontrol nyctinastictanggapan (Bab 23). Selain + -ATPases H,
beberapa membran, seperti membran plasma, amplop kloroplas, yang retikulum endoplasma, dan
membran vacuolar, juga berisi ATPase kalsium-memompa (Ca2 + - ATPase). Ca2 + -ATPases beberapa
hidrolisis ATP dengan translokasi dari Ca2 + melintasi membran. Dalam kasus ini dari membran plasma,
kalsium dipompa keluar dari sitosol. Ini berfungsi untuk menjaga sitosol Ca2 + konsentrasi rendah, yang
diperlukan untuk menghindari mempercepat fosfat dan untuk menjaga Ca2 + -tergantung jalur sinyal
beroperasi dengan benar (Bab 16 dan 17).

3.5.3 K + EXCHANGE dimediasi oleh DUA KELAS ANGKUTAN PROTEIN

Sejak tahun 1950-an, penyerapan K + ke dalam sel-terutama akar sel-telah dipelajari lebih teliti
daripada spesies ion lainnya. Banyak dari karya awal dilakukan oleh Emanuel Epstein, yang memelopori
penggunaan 86Rb +, K radioaktif + analog, untuk mengikuti K + serapan di akar rendah garam. Epstein
juga yang pertama untuk mengobati transporter ion sebagai enzim dan untuk menganalisis data dengan
menggunakan metode kinetika enzim klasik. Analisis tingkat awal dari K + penyerapan pada konsentrasi
eksternal yang berbeda menunjukkan bahwa K + penyerapan biphasic.
Atas dasar hasil ini, Epstein mengusulkan bahwa ada dua jenis K + transport sistem dalam sel tanaman:
sistem transportasi afinitas tinggi (HAT) yang aktif di K + konsentrasi rendah (≤ 200 M), dan sistem
transportasi afinitas rendah (LAT) yang aktif di K tinggi + konsentrasi. sistem transportasi seperti miliki
sekarang telah diidentifikasi untuk ion makronutrien segudang termasuk Ca2 +, NO- 3, SO2- 4 dan PO2-
4. Sebuah fitur yang konsisten dari semua topi adalah mereka menengahi tingkat lambat penyerapan ion
ketika konsentrasi eksternal ion rendah. Ini berarti bahwa topi menunjukkan kapasitas rendah untuk
penyerapan ion. Namun, meskipun kapasitas mereka untuk penyerapan ion rendah, efisiensi mereka
untuk penyerapan ion sangat tinggi karena afinitas mengikat tinggi untuk ion tertentu. Dengan demikian,
kinetika serapan untuk topi menunjukkan nonlinear, kinetika jenuh. Sebaliknya, meskipun LATs
menunjukkan afinitas rendah untuk penyerapan ion dalam ketergantungan konsentrasi linear, kapasitas
LATs untuk penyerapan yang tinggi. Konsentrasi ion yang biasanya menginduksi transisi dari LATs topi
adalah tentang 1mM untuk sebagian besar ion makronutrien. studi genetik biofisik dan molekuler telah
membenarkan adanya beberapa transporter dengan afinitas substrat yang berbeda. studi fisiologis,
biokimia, dan molekuler mosts transportasi ion makronutrien telah difokuskan pada karakterisasi topi.
Namun, mengingat bahwa konsentrasi tanah pertanian dari K +, NO- 3, dan NH + 4 dapat melebihi 1mM,
LATs mungkin juga penting dalam mempertahankan produktivitas tanaman di bawah kondisi lapangan.

Percobaan menggunakan microelectrodes yang mengukur konsentrasi K + sitoplasma dan

membran potensial secara bersamaan dalam sel akar tunggal telah dikonfirmasi bahwa ketika
konsentrasi eksternal rendah, ada K kuat + gradien elektrokimia menyeberangi membran plasma. Agar K
+ untuk pindah ke sel dalam kondisi seperti itu, sistem penyerapan afinitas tinggi harus didorong oleh
mekanisme transpor aktif. sistem penyerapan afinitas tinggi ini mungkin H + -ATPase-linked K + -H +
symporter. Studi patch-clamp, di sisi lain, telah menetapkan bahwa sistem penyerapan afinitas rendah
melibatkan saluran yang bergerak K + baik ke (K + di saluran) atau keluar (K + keluar saluran) dari sel.
Sementara fokusnya cenderung pada K + di saluran, saluran yang memungkinkan K + untuk keluar dari
sel juga penting dalam mengendalikan penyesuaian osmotik, menjaga fungsi stomata, dan mengemudi
gerakan nyctinastic daun (Bab 23).

K + transporter yang sangat efisien dan, akibatnya, kelimpahan relatif mereka dalam membran
sel sangat rendah. Hal ini membuat sulit untuk mengisolasi dan memurnikan transporter dengan teknik
biokimia tradisional. Beberapa gen yang mengkodekan transporter K + dan protein transport tanaman
lainnya telah diidentifikasi oleh kloning gen dalam mutan transportasi-kekurangan ragi (Saccharomyces
cerevisiae). Sebuah mutan ragi kekurangan dari afinitas tinggi K + transporter, misalnya, akan tumbuh
pada media dengan K tinggi + konsentrasi, tetapi tidak pada media-konsentrasi rendah. Namun,
transformasi ragi dengan KAT1 (gen yang mengkode afinitas tinggi K + transporter dari sel penjaga dan
jaringan pembuluh darah dari Arabidopsis), akan mengembalikan kapasitas ragi untuk tumbuh pada
rendah K +. Eksperimen jenis ini telah menyebabkan identifikasi setidaknya selusin K diduga
+transporter serta transporter untuk gula, amino asam, NH + 4, dan SO2-4..
 Sebuah model untuk membran plasma H + ATPase. Enzim adalah
rantai tunggal dengan 10 hidrofobik, domain membran-spanning. Hanya tiga yang ditampilkan di sini
sebagai kumparan heliks, sedangkan sisanya tujuh secara skematik direpresentasikan sebagai silinder.
Menghubungkan domain membran-spanning berdekatan adalah loop hidrofilik
bahwa proyek ke dalam sitosol (dalam) dan apoplast dinding sel (luar). Situs ATP-mengikat residu asam
aspartat (D) yang terletak di lingkaran hidrofilik antara domain membran-spanning keempat dan kelima.
H + -binding situs terletak di domain hidrofobik. Hidrolisis ATP di situs pengikatan diduga mengubah
konformasi enzim, sehingga mengekspos H + situs -binding ke luar membran mana H + dilepaskan.
(Bandingkan dengan Gambar 5.9.)

Schematic diagram relating the activity of a membrane ATPase-proton

pump to solute exchange. The proton pump (a) uses the energy of ATP to establish

both a proton gradient and a potential difference (negative inside) across the membrane. The energy of
the proton gradient may activate an ion channel (b), or

drive the removal of ions from the cell by an antiport carrier (c), or drive the uptake of ions or uncharged
solute by a symport carrier (d, e). Similar pumps and carriers operate across the vacuolar membrane. C+,
cation; A−, anion; S, uncharged solute