INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INGENIERÍA EN SISTEMAS AMBIENTALES

PRÁCTICA 4 Y 5

“CINETICA ENCIMATICA”
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

EQUIPO NO. 1 SECCION: 1 Grupo: 4AV1

 Alcántara Campos Daniel

 Aparicio Almazán Brenda Guadalupe

PROFESOR(ES):

 QFI Roció del Carmen Guzmán Ibarra

 M. en C. Pedro Antonio Loyola Abitia
 Dra. Doris Neri Cortés
 Dr. Carlos Wong Baeza

FECHA DE ENTREGA: 3 de Abril del 2018

INTRODUCCIÓN.

La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios
proporcionan información directa acerca del mecanismo de la reacción catalítica y de la especifidad del enzima.
La velocidad de una reacción catalizada por un enzima puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos
casos no es necesario purificar o aislar el enzima.

OBJETIVOS.

1. Determinar el efecto de la variación del pH sobre la velocidad de la reacción catalizada por la invertasa.
2. Demostrar que la velocidad de la reacción enzimática es directamente proporcional a la concentración
de enzimas.

RESULTADOS.

Tabla 1. EFECTOS DEL pH SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCION

Absorbencia μM 𝑨𝑹⁄𝟐𝒎𝒍 Vo (VI) pH

0 0.1169 0.2338 3
0 0.1169 0.2338 4.5
0.474 10.9438 2.1888 5
0.533 12.2914 2.4583 6.5
0.299 6.9465 1.3893 7.5
Imagen 1. Serie de tubos antes de ver al espectofotometro

2.5

2
Vo

1.5

0.5

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
pH

Grafica 1. Velocidad en función del pH

Equipo 1. Curva Tipo de Azucares Reductores Página 1

Tabla 2. EFECTO DE LA CONCENTRACION DE ENZIMAS SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCION

μM CONCENTRACION
Absorbencia 𝑨𝑹⁄ Vo (VI) DE ENZIMA
𝟐𝒎𝒍

0.055 1.3732 0.2746 1

0.181 4.2512 0.8502 2

0.439 10.1443 2.0289 3

0.534 12.3143 2.4629 4

0.784 18.0247 3.6049 5

Imagen 2. Serie de tubos antes de ver al espectofotometro 0.952 21.8620 4.3724 6

Grafica 2. Velocidad inicial en función de la concentración de la enzima

4
Vo

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5

μg/2ml
A continuación, se muestra un ejemplo de cómo se calculó el numero µmol AR/2ml en la serie de tubos
preparados.

 Para tubo 1

Se utiliza la absorbancia obtenida para extrapolar en la curva tipo de azucares reductores o sustituir su valor en
la ecuación de la curva

Equipo 1. Curva Tipo de Azucares Reductores Página 2

 0.5 0.465
0.45

0.4

0.35
absornancia (nm)

0.306
0.3

0.25

0.2 y = 0.0438x - 0.0051

0.155
R² = 0.9692
0.15 0.111
0.1
0.032
0.05

0
0 2 4 6 8 10
micromoles de AR/2ml

Grafica 3. Absorbencia en función de los micromoles de AR/2ml

𝑦 = 0.04378𝑥 − 0.00512

𝑠𝑖 𝑦 = 0

𝑒𝑛𝑡𝑜𝑛𝑐𝑒𝑠 𝑥 = 0.1169 µ𝑚𝑜𝑙 𝐴𝑅/2𝑚𝑙

El dato de micro mol de AR/2ml se sustituye en la fórmula de velocidad inicial

µ𝑚𝑜𝑙 𝐴𝑅/2𝑚𝑙
𝑉𝑜 =
𝑚𝑖𝑛.

Tomando como tiempo el trascurrido en la incubación el cual fue de 5 minutos

𝐴𝑅
0.1169 µ𝑚𝑜𝑙
𝑉𝑜 = 2𝑚𝑙
5 𝑚𝑖𝑛.

𝑉𝑜 = 0.2338

Para el cálculo de la concentración de enzima para el segundo experimento se sustituye los µ𝑔/𝑚𝑙 de enzima
agregados (X) en la siguiente ecuación.

(10µ𝑔/𝑚𝑙)(𝑋µ𝑔/𝑚𝑙)
µ𝑔/𝑚𝑙 =
1𝑚𝑙

Para el tubo 1:

(10µ𝑔/𝑚𝑙)(0.1µ𝑔/𝑚𝑙)
1µ𝑔/2𝑚𝑙 =
1𝑚𝑙

Equipo 1. Curva Tipo de Azucares Reductores Página 3

BIBLIOGRAFÍA.

Equipo 1. Curva Tipo de Azucares Reductores Página 4