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La vía del glioxilato facilita el consumo de dos moléculas de acetil-ScoA; una por condensación con
oxaloacetato y otra por condensación con glioxilato. Esta entrada no sólo genera intermediarios
utilizables en la biosíntesis de aminoácidos, sino que además da por resultado la producción neta de
oxaloacetato (OAA). De este modo, si se elimina uno de los intermediarios previos al OAA, el ciclo
del glioxilato tiene una reacción anapletórica intrínseca. Además, el propio OAA puede convertirse
ya sea en aminoácidos o en carbohidratos.
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Se basan en: a. Propiedad de las proteínas de absorber luz en el UV absorción A=280nm a. Capacidad
de unirse a ciertos colorantes
Biuret Lowry Acido Bicinconínico BCA Bradford
a. Formación de derivados químicos
La mayoría de las proteínas muestran una absorción a 280 nm, la cual se atribuye al grupo fenólico
de la tirosina y al grupo indólico del triptofano
• Tiene la ventaja de que no es necesario utilizar reactivos y la muestra no se daña o destruye durante
la determinación.
Método de Biuret
• Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el ion Cu+2 y los grupos NH4 de los enlaces
pépticos en medio básico (NaOH o KOH)
Consideraciones del método de Biuret
• Reacción específica
• Color violeta se lee a 540nm contra curva estándar BSA
• La intensidad del color es proporcional a la cantidad de proteína
• Baja sensibilidad alta concentración de proteína
Los carbohidratos se logran destruir por calor y por adición de ácido y son particularmente sensibles
a ácidos fuertes y altas temperaturas. Bajo estas condiciones una serie de reacciones complejas toman
lugar empezando con una deshidratación simples, si se continúa el calentamiento y la catálisis ácida
se producen varios derivados del furano que condensan consigo mismos y con otros subproductos
para producir compuestos obscuros o compuestos coloridos producto de la condensación de
compuestos fenólicos y con heterociclos con el nitrógeno como heteroátomo. La condensación más
común es con fenol y es un método fácil, eficaz y rápido.
Se fundamenta en que los carbohidratos son particularmente sensibles a ácidos fuertes y altas
temperaturas. Bajo estas condiciones una serie de reacciones complejas toman lugar empezando con
una deshidratación simple, si se continúa El calentamiento y la catálisis ácida se producen varios
derivados del furano que condensan consigo mismos y con otros subproductos para producir
compuestos coloridos producto de la condensación de compuestos fenólicos y con heterociclos con
el nitrógeno como heteroátomo. La condensación más común es con fenol. Este método es fácil,
eficaz y rápido. Todos los azúcares como oligosacáridos y polisacáridos pueden ser determinados,
recordando que éstos bajo hidrólisis ácida producen monosacáridos.
Los lípidos se definen como un grupo heterogéneo de compuestos que son insolubles en agua pero
solubles en disolventes orgánicos tales como éter, cloroformo, benceno o acetona. Todos los lípidos
contienen carbón, hidrógeno y oxigeno, y algunos también contienen fósforo y nitrógeno.
El contenido total de lípidos se determina comúnmente por métodos de extracción con disolventes
orgánicos (por ejemplo Soxhlet, Goldfish, Mojonnier), sin embargo también puede cuantificarse por
métodos de extracción que no incluyen disolventes (por ejemplo, Babcock, Gerber) y por métodos
instrumentales que se basan en propiedades físicas o químicas de los lípidos (por ejemplo, infrarrojo,
densidad y absorción es rayos X)
Peso específico
Se define como la relación de la velocidad de la luz en el aire (técnicamente un vacío) con respecto a
la velocidad de la luz en el aceite. Se obtiene midiendo directamente en un refractómetro a 20-25ºC
para los aceites y a 40ºC para las grasas.
Índice de refracción
Los lípidos asociados pueden ser liberados si la muestra del alimento se disuelve completamente
antes de hacer la extracción con disolventes polares. La disolución del alimento se puede lograr
por hidrólisis ácida o alcalina. En el método ácido (proceso de Werner-Schmidt) el material es
calentado en baño de agua hirviente con ácido clorhídrico para romper las proteínas y separar la
grasa como una capa que flota sobre el líquido ácido. La concentración del ácido durante la
extracción debe ser aproximadamente 6M, por ejemplo, 10 gr de leche se tratan con 10 ml. de
ácido concentrado ó 1 a 2 gr de alimento sólido se mezcla con 8 a 9 ml de agua y 10 ml de ácido.
Las proteínas se disuelven en el ácido y la grasa que se separa puede ser extraída por agitación,
cuando menos tres veces, con éter dietílico o con una mezcla de éter dietílico y petróleo ligero.
En alimentos como la leche deshidratada y queso procesado es aconsejable el tratamiento del
tratamiento original con amoníaco antes de adicionar el ácido. Si el material que se analiza
contiene una elevada proporción de azúcares, el método de extracción ácida es menos
aconsejable que el método alcalino. El éter dietílico tiende a coextraer algún material no-lípido,
por lo que los lípidos extraídos y pesados en el extracto seco necesitan ser eliminados
cuidadosamente con éter de petróleo y el residuo no-lípido se vuelve a secar y pesarse para dar
por diferencia, el contenido de grasa total en la muestra. La hidrólisis ácida tiende a descomponer
los fosfolípidos, por lo cual la correlación con la extracción con cloroformo/metanol puede ser
pobre en algunos alimentos.
METODOS VOLUMETRICOS
Estos consisten en disolver la muestra en ácido sulfúrico y separar la grasa por centrifugación en
tubos de vidrio calibrados especialmente. En los EUA se usa el método de Badcock (véase libro de
métodos de la AOAC) y en los países europeos el método de Gerber es el usado comúnmente en
las determinaciones de rutina de grasa en leche y en productos lácteos. Para ciertos alimentos, en
particular los no lácteos, se obtiene una separación más limpia si se usa una mezcla de los ácidos
acético y perclórico en lugar del ácido sulfúrico.
Referencias
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