PARTEA I NOTIUNI INTRODUCTIVE uo ~* “CAPITOLULT Masuri pentru protectie si asigurare a securitatii in laboratorul de biochimie Protectia in timpul lucrului in laboratgr este o conditie esenjiala. Pentru a lucra in mediu sigur este foarte impor rs craton iscurile ce trebuie luate in considerafie.. ~~ ig se relerd la masuri de precaufie ce trebuie luate impiotriva agentilor infectiosi virali, inclusiv virusul hepatitei si imunodeficienjei (HIV) sau bacterieni. Mésuri_speciale de_utilizare_a_substanfelor_chimice, care trebuie considerate potential primejdioase (substanje corozive, inftante. toxice, inflamabile, oxidante, explozibile). Mésuri de _utilizare a aparatelor electrice, care prin folosire inadecvaté pot produce gee electric sau incendiu, si de prevenire a allo? riscuri fizice: foc, presiune, radiaii ionizante si neionizante. 1.1, REGULAMENT DE LABORATOR LLL. Masuri de protectie In laboratorul de biochimic Activitatea in laboratoarele de biochimie are particularitiqile sale si poate fi uneori Insofité de anumite pericole. De regula, activitatea poate fi primejdioas& numai atunci cénd cel ce lucreaz este neglijent sau nu cunoaste indeaproape procedeele de ménuire ale aparatelor sau proprietatile substantelor cu care se lucreaz. De aceea, este foarte important ca inca de la inceput sh se cunoascd mdsurile de precaufie in lucrarile de laborator pentru a se preveni diversele accidente si imbolnaviri cat si pentru a se executa analizele in mod cat mai exact fara a face un consum abuziv de substanfe sau a distruge aparatura gi mobilierul din laborator. 1. In laborator pentru protectia personala se va purta echipament de protectie format din: - Halat; - Manusi de protectie trebuie purtate cénd se manevreazi substanfe corozive $i material biologic cu potential infectios; - Ochelari de protectie trebuie purtati cénd exista risc de afectare a ochilor; : Masile ae istile de protectie nu sunt intotdeauna necesare, ins& trebuie purtate cand existé pulberi de substanje ¢ sau aerosoli cu microorganisme; = Personalul de sex feminin trebuie s& poarte parul siréns pentru a evita contactul parului cu materialele care se manipuleaza. 2. Este imterzis a se ménca sau fuma in laborator in timpul lucrului. Este interzis a se depozita alimente in laborator sau frigidere cu produse biologice, deoarece alimentele pot absorbi diverse mirosuri de la substantele volatile din laborator, care le fac inutilizabile prin mirosurile cat si prin toxicitatea lor sau pot fi infectate. 43. Nu este permisa pipetarea lichidelor biologice caustice sau volatile toxice decat cu ajutorul unor pipete cu mai multe bule seu rard de cauciuc, pentru a evita ingestia sau inhalarea 1lor. Pipetarea acizilor concentrai si bazelor se face cu pipeta cu voium mai mare decat volumul de pipetat si prevazute cu filtru de vata. Bromul se masoaré aumei cub niga, cu pipete cu bul, prevzute cu o pard de cauciuc pentru asigurare. 4. Toate. experienjele cu degajéri de gaze toxic® sau cu substanfe cu miros nepldcut sau usor volatile, se vor executa sub nis& cu tiraj convenabil pentru a se evita. inhalarea vaporilor toxici si deci a se evita intoxicajia (hidrogen sul furat, acid sulfuric, acid azotic fumans, acid cianhidric). Cei ce lucreazi cu substunte toxiev (cianuri, benzen, anilind etc.) dupa terminarea lucrului se vor spila bine pe maini cu apa si sipun. Sudsanjele cu miros neplacut, volatile $i toxice vor fi pastrate sub niga pentru a evita rSspandirea lor in atmosfera camerei. Nu se va lucra cu substanfe usor inflamabile ca eterul etilic, acetona, sulfura de carbon, in apropierea flicérilor, a becurilor aprinse. Exper‘entsle se vor efectua in camere cu ferestre deschise si dupa stingerea prealabila a tuturor becurilor eprinse, precum si dupa scoaterea din priz& a aparatelor cu rezistente electrice in stare Ge incandescent’, ca resouri, cuptoare electrice etc. Produsele usor inflamabile cu puncte de fierbere sub 100°C se vor inc&lzi si distila pe bai de api. 5. Tuburile de oxigen, dioxid de carbon si azot lickid se depoziteaza in afara laboratorului. Cénd sunt strict necesare anumiter operatii in laberator, ele se ancoreazé cu lant in locuri anume previzute. Solvengii si acizii se depoziteazA in subsolul cladirii la care s& existe cdi de acces cf. ‘mai largi. Substanjele toxice se {in sub cheie si in borcane sau sticle prevazute cu etichete specifice acestor tipuri de substante. < 6. La aprinderea unor substanje inflamabile in pahare, capsule sau alt vas, acestea se acopera bine cu un obiect de porjelan sau metal. Daca lichidul s-a varsat jos, se stinge aruncnd nisip uscat peste el. Nu este permis a se sufla in flacdr& sau a turna apd. In caz de incendii mai mari se vor folosi extinctoarele. 7. Fiecare laborator trebuie sa fie dotat cu extincior; s& se faci instructaj periodic de utilizare a extinctorului si s& fie precizaté o echipd care sd intervind in caz de incendiu. ~Dacd descoperii inceputul unui incendiu actionagi rapid: = nu intrafi in panica; = dati alarma; - evacuafi laboratorul; - opriti sursa de gaz si curent electric; + recunoastefi tipul de incendiu pentru a folosi extinctorul potrivit; - daca aveti indoieli in ceea ce priveste modul de actiune, parasiti locul 8. Aparatele elecirice (ultracenirijuga, iermostate, frigidere, spectrofotometru etc.) trebuie sé aiba prizele impamantate si izolare etectrica perfect8. Fixarea lor in prizé se face numai cu ména uscatd. Este absolul interzis a repara sau manipula aparatele electrice defecte. Centrifugele electrice nu vor fi puse in functiune decat dupa ce se va asigura echilibrul cuvelor de centrifuga. Nu se va pomi centrifuga decét dupa inchiderea ei cu capac. Nu este permis a se opri sau a incetini cu mana centrifuga in timpul mersului. Persoanele care lucreaz8 cu aparate sub presiune sau fac distilari in vid, vor urméri cu atentie manometrele pentru ca presiunea sa nu ddeptiseasca limita periculoasa. Cromatografia $i electroforeca se efectueaza in incaperi izolate de restul laboratorului si prevazute cu ventilatoare electrice. Balanjele analitice si tehnice vor fi jinute in cea mai perfectd ordine si curdfenie. Nu se vor face cantiriri dacd balanfa este dereglat. Nu se vor cAntari substantele asezandu-le direct pe platanele balantei, ci vor fi puse pe sticle de ceas, hartie sau in fiole. Nu se efectueazA cAntirirea fiolei cu substana cénd balanta este deschis8. Nu este permis s& se cAntareasc& peste capacitatea 2maxima de cdntarire pe balanta. 9. Podelele laboratoarelor nu se maturd, ci se spala cu detergenti sau solujii antiseptice. 10. Chiuveiele vor fi finute in stare de curafenie, nu se vor arunca in ele hartii, sticle sparte, substanfe solide, insolubile si nici acizi tari sau baze caustice. De asemenea nu vor fi deversate lichide care conjin miatétial biologic potenjial infectios. Acestea se vor colecta in vase separate, si eliminate din laborator i incinerate de firme specializate- II, Mesele de lucru se vor mentine in ordine si curafenie, si anume: pe mas& se vor fine numai vasele si aparatele necesare pentru operatile in curs, departe de marginea mesei, pentru a nu incomoda in timpul lucrului sau a se sparge; nu se lasi pipetele in pahare sau sticle ce se pot astfel rasturna. Dac in timpul lucrului s-au varsat solutii sau substanfe pe masa de lucru sau pe pardoseala, acestea se vor sterge cu o carp pentru a nu impurifica substanfele de analizé sia denatura rezultatele. Dac& pe masi sau pe pardoseala se varsé acizi sau baze concentrate, se toarnd peste ele nisip care absoarbe lichidul, apoi se indeparteaza cu o lopafic& si se spalA locul cu apa. 12. fnainte de a paréisi laboratorul se vor ageza tcate obiectele la locul lor dup& ce au fost in prealabil spalate; de asemenea se vor cerceta robinetele de gaz si de apa sé fie inchise. +13. Fiecare laborator trebuie si fie dotat cu 0 trusé de prim ajutor care s& contind me- dicamente si materialul sanitar strict necesar (entinevralgice, cardiotonice, antibioti calmante, fesi, tifon etc.). 1.1.2, Masuri privind manipularea vaselor de laborator Majoritatea lucrarilor de laborator se efectueazé in vase si aparate de sticld care sunt subfiri si fragile, se sparg usor si de aceea pot produce pagube si raniri grave, Pentru aceasta: 1. Vasele de laborator se vor manui cu atentie, nu se vor strénge cu mana, nu se vor aseza pe marginea mesei, nu se vor aseza brusc sau trdnti pe masa de lucru 2. Jn timpul agitarii lichidelor din vasele de sticlé cu baghete de sticld, se va evita ciocnirea peretilor sau trantirea baghetelor in vase. 3. Vasele de sticla (cu exceptia eprubetelor) ny se vor inedilzi direct in flacdrd, ci se vor folosi pentru aceasta sita de azbest sau bdi de apd. incalzirea vaselor de sticla se va face cu atentie si treptat. 4. Nu se vor incalzi vase de sticlé cu peretii exteriori sau fundul umed, deoarece se sparg ugor. 5. Ined'zirea eprubetelor de sticld se va face direct ia flacdrd cu urmatoarele precau! ~ Eprubeta se va prinde la partea superioars cu un cleste de lemn sau o hartie indoita de maj multe ori si nu se va prinde nic‘odaté cu mara. ~ Eprubeta se clatina ugor in timpul incalzirii, pentru ca lichidul s& se inc&lzeasc& uniform si sa fiarb& regulat, sau s& nu se formeze puncte supraincdlzite care s& arunce lichidul afara. ~ Eprubeta nu va fi indreptata niciodata cu gura spre cel care lucreazd cu ea $i ni vecinii lui, pentru a nu proiecta lichidul fiesbinte pe acestia. 6. Incalzirea direct la flacdré se poate face numai in cazul vaselor de porfelan $i cuart uscate sau vaselor metalice. 7. Vasele de sticlé inadlsite nu se vor apuca eirect A izoleze mana de vasul fierbinte. 8. Obiectele incdlzite puternic, creuzete. ccpsule de portelan, resouri, nu se vor aseza pe mesele de lucru, ci vor fi puse pe placi sou site de azbest i spre "ana ci cu ajutorul unei ménusi care 39. Vasele incalzite nu se vor aseza in jocuri umede pentru a se evita spargerea lor. 10. La lucrarile care se efectueaza cw refrigerente de sticla (ca distildrile) nu se va trece lt fierberea lichidului destinat distilarii, decdt dup§ ce se va umple cu apa reftigerentul spre a st evita spargerea lor. LI. Pentru efectearea analizelor se vor iolosi numai vase perfect spdlate si uneori § uscate, 13, Spalarea se face in mai multe etape: - Spalarea preliminard: Imediat dupa intrebuintare, pipetele se vor introduce intr-un vas cu apa curatd. Restul vaselor de laborator se vor clati cu apa pentru a evita uscarea pe pereti & substantelor sau lichidelor biologice cu care s-a lucrat. Dac sticlaria este contaminaté cu substanfe grase, in loc de ap se foloseste putina acetona. = Spalare ew acizi si baze: 2) Solutiile de baze folosite curent pentru spalarea sticlériei sunt: KOH 10% sau KOH alcoolic (100 g KOH dizolvat in 100 ril ap, se raceste si se adaug& 900 ml alcool etilic de 70%). b) Amestecul sulfocromic este cel mai frecvent folosit pentru spalarea sticlariei de laborator. intr un vas cu capacitatea de I litru se introduc 500m! apa distilat8. Se adauga cu grija 250 ml H,SOs concentrat, prelingand pe perefi si amestecdnd continu. Daca solutia se incalzeste foarte mult se Hiceste sub curent de apa. Cénd solutia este rece se adauga 100 g bicromat de potasiu (K2Cr207), se amestecd bine pnd la dizolvare si se adauga apa pnd la | litru. Solutia este foarte caustic’ si trebuie evitat sé ajungii pe piele. Pipetele ce contin urme de sfnge se introduc in solutie de KOH 10%, timp de 24 ore. Pipetele, biuretele, tuburile de centrifugd, eprubetele etc. se introduc in amestec sulfocromic 12-24 ore = Spalarea mecanicé si cu detergenti: | apoi perefii vasului se spala cu ajutorul unei perii. = Spalarea cu apd: Dup& spalarea cu acizi, baze etc., vasele de laborator se clitese cu multd apa, dupa care de 3-4 ori cu apé distilata. 14, Uscarea: . = Uscarea se face in etuva la 160°C, timp de 1-2 ore. in acest fel sticlaria se si sterilizeaza. = Uscarea se face prin scurgerea direct& a apei in stative de uscare sau prin suflare cu aer cald. OBSERVATIE: Daca vasele nu sunt uscete, se vor clati, inainte de utilizare, de 2-3 ori cu solufia cu care vor fi umptute, interiorul vasului se introduce apa si detergent, 1.1.3, Pastrarea si manipuiarea reaciivilor chimici Succesul unei analize depinde de starea de curdjenie a vaselor de sticlé dar si de pastrarea puritayii reactivilor intrebuinfafi la analizd. Pentru aceasta, toate sticlele de laborator ‘cu reactivi vor fi etichetate 5! aranjate cu eticketele in fata, pentru a nu se produce confuzii. Daca o etichetd se desprinde si cade, ea va fi lipita sau inlocuitd imediat. Reactivii se pdstreazi in sticle brune bine inchise cu dopuri slefuite pentru a nu se impurifica sau a se volatiliza din substante sau a se modifica concentrafia solutiilor. De aceea, dupa intrebuintare, sticlele se inchid imediat cu dopuri. 1. Nu este permis a schimba dopurile de la sticle, de a le trece de la o sticla la alta. Cand este necesar a se lucta cu mai multi reactivi care se adauga in mod succesiy, sticlele cu solufii se vor utiliza pe rand, acoperindu-se imediat cu dopuri si apoi se va trece la alt reactiv care trebuie addugat imediat. Dopul se ageaz’ pe mas pe un loc curat, cu partea mai latd si plana sprijinita pe masi spre a se evita astfel impurificarea. 2. Solupia sau subsianja solidé scoasa dintr-un borcan sau sticla mu se toarnd inapoi la 4loc, deoarece vasul in care a fost pusa ar putea s& nu fie perfect curat. 3. fn cazul cand banuim o reactie violent&. cu degajare de gaz, care ar putea impurifica reactivul, atunci nu se toama acesta direct in eprubeta cu solutie de analizat ci in alt, eprubet& ccuratd si dup’ aceea, din aceasta se trece in solufia de analizat. ‘4, Pipetele folosite, pentru scoaterea unui lichid dintr-o sticlé mu se vor mai folosi la pipetari de alte lichide decét dupa o prealabilé spélare si uscare a lor. Pentru a nu se impurifica reactivul din sticla, pipetele vor fi foarte curate si uscate; in caz contrar se va transvaza o cantitate din reactivul din sticlé {ntr-o eprubeta si de aici se va pipeta apoi lichidul. 5. Turnarea solutiilor dintr-o slicla se face intctdeauna pe partea opusé etichetei pentru a nu se sterge sau murdari eticheta si a se produce astfel confuzii 6. Toate transvazérile de solujii se vor fece deasupra mesei de lucru sau in cazul lichidelor caustice, deasupra chiwvetelor, cu mare grij pentru a nu curge pe jos si a pita pardoseala sau imbrécdmintea. 7. Vasele care conjin substante toxice sau caustice se vor transporta si ménui cu deosebitd precautie, deoarece prin spargerea si impréstieres confinutului lor pot provoca foarte grave accidente. La diluarec acizilor, in spezicl a acidulvi sulfuric, se va turna intotdeauna acidul in apa si nu invers, deoarece reactia este puternic exoterma si s-ar produce o pulverizare a acidului care ar provoca arsuri grave. 9. Hidroxizii alcalini caustici soliz! mu se vor manipula niciodata direct cu ména, ci rnumai cu o lingurifa, spatula sau pensetd speciala 10. Sticlele cw hidroxizi alcalini vor avea intotzeauma dopuri de cauciue si mu vor fi schimbate cu dopuri de sticla deoarece acestea se intepenesc. Dopurile infepenite nu vor fi fortate, ci se va incalzi usor numai gatul sticlei ca s& se dilate, apoi se va mise usor dopul sau daca este posibil se va cufunda gatul sticle’ in ap& c#lduj& pentru un interval de timp sau se va lovi usor dopul de sticlé cu un obiect de len. in caz ca nu cedeazd, nu se va forta, deoarece se pot sparge si varsa provocand arsuri grave “11. Nu se vor astupa cu dopuri de plutd sticlele cw aeisi concentragi, deoarece sunt atacate si carbonizate. 712. Nu se vor inchide cu dopuri de ceucive sticlele cu acizi conrentrati sau cu solventi organici, decarece acestia le ataci iar dopurile se uml 93. Ny se vor mirosi niciodati solustile duccind sticla direct la nas, mai ales cand nu se cunose proprietatile reactivutui, ci se scoate dopul, se ve tine sticla la distant& si cu mana se va agita aerul de la gatul sticlei inspirand foarte usor.