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Practica nº3
Profesor:
ANTONIO INSIGNARES
Programa de farmacia
2017-1
Resumen
En esta práctica se realizó la tinción diferencial, técnica que se usa para diferenciar los
microorganismos. En práctica se busca adquirir destreza en la técnica de coloración de
Gram así como diferenciar las bacterias Gram positivas de las Gram negativa y sus
diferentes aplicaciones. Para empezar la práctica se limpió el portaobjeto, lo cual es
esencial para la preparación del frotis y remover la grasa o aceite de dedos que puede
estar sobre este, lavándolo con agua y detergente y enjuagándolo con alcohol al 95%.
Luego se procedió a realizar el frotis, para realizar esto se colocó una gota de solución
salina al 0.85% y con la ayuda de un asa de inoculación estéril se tomó una muestra de
una colonia. Posteriormente homogenizar las células con la gota de solución salina y con
movimientos circulares realizar un esparcido de aproximadamente un centímetro de
diámetro, dejar secar y fijar al calor para evitar la pérdida de la muestra durante la tinción.
Luego de realizar la fijación se debe cubrir el extendido con cristal violeta y dejarlo actuar
durante un minuto y lavar el exceso con agua. Seguido a esto se cubre el extendido con
lugol durante un minuto y vuelva a lavar con agua. El siguiente procedimiento es decolar
con alcohol acetona durante aproximadamente 30 segundos y lave con agua.
Posteriormente cubra el extendido con safranina durante un minuto lave y seque y
observe en el microscopio.
Introducción
Ejemplos: Tinción de Gram, Tinción de Ziehl-Neelsen, etc. Los colorantes más utilizados
son: azul de metileno, cristal violeta, safranina, los cuales son catiónicos y se combinan
fuertemente con componentes celulares cargados negativamente, como los ácidos
nucleicos y los polisacáridos ácidos
Tinción de Gram: Esta tinción es denominada así por el bacteriólogo Christian Gram,
quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las
bacterias pueden dividirse en dos grupos, gram positivas y gram negativas, lo que no tiene
nada que ver con su carga eléctrica.
Objetivos
Primero que todo se debió lavar el portaobjeto para poder remover la grasa de los dedos
que podría tener este. Se dejó secar hasta que estuvo listo para usarlo. Luego se preparó
el frotis añadiendo una gota de solución salina al portaobjeto y tomando una muestra de
una colonia con un asa de inoculación, previamente esterilizada con mechero, dicha
muestra se homogenizo con la solución salina esparciéndola con movimientos circulares
de aproximadamente un centímetro de diámetro y se dejó secar. Luego se realizó la
fijación en calor, pasando rápidamente dos a tres veces el frotis sobre la llama del
mechero.
• Cubrir el extendido con cristal violeta, dejarlo actuar durante un minuto y lavar el exceso
con agua.
•Añadir lugol, el cual actúa como mordiente, durante un minuto. Lavar con agua.
• Decolorar con alcohol acetona durante 20-30 segundos y lave con agua.
• Cubrir el extendido con safranina. Dejar actuar durante un minuto. Lave, seque y observe
en el microscopio con el objetivo de inmersión.
En la anterior imagen podemos apreciar las bacterias con forma de cocos ordenados en
racimos, y por su coloración violeta podemos identificar estas bacterias como Gram
positiva.
Conclusión
Bibliografía
- http://www.pucmmsti.edu.do/websise/estudiante/materias/201220132/ST-
BIO-231-P-071/BIO-231%20PRACTICA%202%202-12-13.pdf
- https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnolo
gia.pdf
Preguntas