JURNAL PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI UMUM
IDENTIFIKASI MIKROBA METODE PEWARNAAN GRAM
NAMA : FADHIL GHIYATS
NIM : G31116516
KELOMPOK : IV (EMPAT)
ASISTEN : ERVAN TOGATOROP

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI DAN BIOTEKNOLOGI PANGAN

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN
DEPARTEMEN TEKNOLOGI PERTANIAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS HASANUDDIN
MAKASSAR
2017
JURNAL PRAKTIKUM
MIKROBIOLOGI UMUM

PERHITUNGAN JUMLAH MIKROBA

NAMA : ANDI NUR FAJRI SULOI

NIM : G31116503 (EMPAT)
KELOMPOK : IV (EMPAT)
ASISTEN : MUHAMMAD IQBAL MUSTAFA

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI DAN BIOTEKNOLOGI PANGAN

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN
DEPARTEMEN TEKNOLOGI PERTANIAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS HASANUDDIN
MAKASSAR
2017
 PERHITUNGAN JUMLAH MIKROBA
Andi Nur Fajri Suloi1,Muhammad Iqbal Mustafa2
Abstrak
Enumerasi adalah teknik yang digunakan untuk mengestimasi jumlah
mikroorganisme dalam suatu bahan atau sampel. Tujuan dari praktikum perhitungan
mikroba ialah untuk mengetahui prinsip dan prosedur perhitungan jumlah mikroba metode
TPC (Total Plate Count). Perhitungan jumlah mikroba ada dua cara yaitu secara langsung
(direct method) dan tidak langsung (indirect method). Metode yang digunakan pada
praktikum ini ialah metode TPC (Total Plate Count) yang merupakan analisis untuk menguji
cemaran mikroba dengan menggunakan metode pengenceran dan metode cawan tuang.
Prinsip dari metode TPC (Total Plate Count) adalah menumbuhkan sel mikroorganisme
yang masih hidup pada media agar, sehingga mikroorganisme akan berkembang biak dan
membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan dihitung dengan mata tanpa
menggunakan mikroskop.Sumber mikroba tomat dan media NA (Nutrient Agar) didapatkan
hasil jumlah mikroba sebesar 3 ×104 Cfu/ml.
Kata Kunci:Enumerasi, Jumlah mikroba, TPC (Total Plate Count)
I. PENDAHULUAN menghitung sel mikroorganisme yang
masih hidup pada media agar, sehingga
I. 1 Latar Belakang
mikroorganisme akan berkembang biak dan
Mikroorganisme adalah makhluk yang
membentuk koloni yang dapat dilihat
sangat kecil dan hanya dapat dilihat dibawah
langsung dan dihitung dengan mata tanpa
mikroskop. Keadaan mikroba di alam ini ada
menggunakan mikroskop. Metode ini dapat
yang bersifat menguntungkan dan ada yang
menghitung sel yang masih hidup,
bersifat merugikan. Hal tersebut perlu
menentukan jenis mikroba yang tumbuh
dipelajari agar mikroba yang menguntungkan,
dalam media tersebut serta dapat
keberadaannya (kapasitas jumlahnya) dapat
mengisolasi dan mengidentifikasi jenis
diperbanyak sedangkan untuk mikroba yang
koloni mikroba tersebut. Perhitungan
merugikan (patogen) jumlah populasinya
jumlah koloni dengan metode hitung cawan
dapat ditekan (Gobel, 2008).
(Total Plate Count) didasarkan pada
Enumerasi adalah teknik yang digunakan
anggapan bahwa setiap sel yang dapat
untuk mengestimasi jumlah mikroba dalam
hidup akan berkembang menjadi satu
suatu bahan atau sampel. Tujuan dari
koloni. Persyaratan statistik metode hitung
Enumerasi yaitu untuk mengetahui cara
cawan yaitu cawan yang dipilih untuk
penghitungan jumlah koloni mikroba dari
perhitungan jumlah koloni adalah yang
suatu media yang dibiakkan dan mengetahui
mengandung antara 30-300 koloni. Jumlah
jumlah mikroba yang terdapat pada sampel
sel bakteri yang tumbuh pada suatu sampel
makanan atau pada hal-hal yang sering kita
diketahui dengan menghitung jumlah
jumpai sehari-hari. Proses penghitungan sel
koloni yang tumbuh pada media tersebut
mikroba dapat dilakukan dengan beberapa
dikalikan dengan faktor pengenceran
metode baik secara langsung (direct method)
dengan satuan coloni forming unit (cfu/ml
maupun tidak langsung (indirect method).
atau cfu/gr) (Irianto, 2013).
Perhitungan secara langsung yaitu jumlah
mikroba dihitung secara keseluruhan, baik I. 2 Tujuan& Kegunaan
yang mati atau yang hidup. Sedangkan Tujuan dilakukannya praktikum
perhitungan secara tidak langsung yaitu perhitungan jumlah mikroba adalah untuk
jumlah mikroba yang dihitung hanya yang mengetahui prinsip dan prosedur
hidup saja (Dwidjoseputro, 2005). perhitungan jumlah mikroba metode TPC
Prinsip dari metode hitungan cawan (Total Plate Count).
atau Total Plate Count (TPC) adalah
 Kegunaan praktikum perhitungan
jumlah mikroba adalah agar kita dapat Tempe Pour Plate
16 16 × 104 TSUD
mengetahui dan menghitung jumlah (PDA) (10-4)

mikroba dari suatu sampel dengan

menggunakan metode TPC (Total Plate
Count). Spread
Meme-
Plate 60 6 × 105
Nuhi
(10-4)
II. METODOLOGI PRAKTIKUM
Tape

II. 1 Waktu dan Tempat (PCA)

Pour Plate Meme-
Praktikum Mikrobiologi Umum (10-4)
43 4,3 ×105
Nuhi

dengan judul “Perhitungan Jumlah

Mikroba” dilaksanakan pada hari Selasa,
14 Maret 2017 pukul 08.00 – 12.00 WITA, Pisang Pour Plate
35 3.5 ×106
Meme-
(PCA) (10-5) nuhi
bertempat di Laboratorium Mikrobiologi
dan Bioteknologi Pangan, Program Studi
Ilmu & Teknologi Pangan, Departemen Spread
Meme-
Teknologi Pertanian, Fakultas Pertanian Tomat Plate 30 30 × 104
nuhi
(NA) (10-3)
Universitas Hasanuddin, Makassar.

II. 2 Alat dan Bahan Spread

Alat-alat yang digunakan ialah Plate
4 4 × 104 TSUD

cawan petri, penggaris, dan spidol. (10-4)

Bahan-bahan yang digunakan ialah Mangga

(PCA)
media NA (Nutrient Agar), PDA (Potato Pour Plate
65 6,5 ×105
Meme-
(10-4) nuhi
Dekstrose Agar), dan PCA (Plate Count
Agar) yang telah ditumbuhi mikroba.
Sumber : Data Primer Mikrobiologi Umum,
II. 3 Prosedur Praktikum 2017
Menggambar garis kuadran pada
cawan petri yang berisi media yang telah III. 2 Pembahasan
ditumbuhi mikroba. Hitung jumlah koloni III. 2. 1 Enumerasi
mikroba per kuadran. Jumlah koloni Enumerasi adalah teknik yang
berdasarkan SPC (30 ≤ koloni ≤ 300). digunakan untuk mengestimasi jumlah
Hitung dengan rumus : ∑sel = jumlah mikroorganisme dalam suatu bahan atau
koloni/cawan × 1/Fp × 1/∑inokulum. sampel. Enumerasi mikroba bertujuan
untuk menentukan jumlah sel dari suatu
III. HASIL DAN PEMBAHASAN kultur mikroba secara kuantitatif.
Pertumbuhan mikroorganisme dapat diukur
III. 1 Hasil berdasarkan konsentrasi sel. Enumerasi
Tabel 10. Hasil Perhitungan Jumlah dilakukan dengan metode pengenceran dan
Mikroba plating. Enumerasi dilakukan pada
Sumber
Mikrob Metode Jumlah Jumlah
pengenceran tertentu yang memberikan
a dan Inokulasi koloni / Mikroba Gambar Ket. hitungan koloni 30-300. Hal ini sesuai
Jenis dan Fp cawan (CFu/ml)
Media
dengan pendapat Dwidjoseputro (2005),
yang menyatakan bahwa enumerasi
mikroba adalah teknik perhitungan jumlah
Tempe
Spread
Meme-
mikroba dalam suatu media tanpa
Plate 42 42 × 104
(PDA)
(10-4)
nuhi mengidentifikasi jenis mikroba (bakteri,
jamur, yeast) yang bertujuan untuk
menentukan jumlah sel dari suatu kultur
mikroba secara kuantitatif. Penetapan
jumlah mikroba dilakukan dengan
menghitung jumlah sel mikroba yang
mampu membentuk koloni di dalam media
biakan atau membentuk suspensi dalam
larutan biak.
III. 2. 2 Metode - Metode Enumerasi
Proses penghitungan sel mikroba
dapat dilakukan dengan beberapa metode
baik secara langsung (direct method)
maupun tidak langsung (indirect method).
Perhitungan secara langsung yaitu jumlah
mikroba dihitung secara keseluruhan, baik
yang mati atau yang hidup. Metode ini
dapat dilakukan dengan beberapa cara
antara lain adalah dengan membuat preparat
dari suatu sampel dengan menggunakan
ruang hitung (counting camber). Sedangkan
perhitungan secara tidak langsung yaitu
jumlah mikroba yang dihitung hanya yang
hidup saja. Diantaranya dengan metode
hitung pada cawan petri (standart plate
coun/TPC), perhitungan melalui
pengenceran, perhitungan jumlah terkecil
atau terdekat (MPN methode). Hal ini
sesuai dengan pendapat Dwidjoseputro
(2005) yang menyatakan bahwa
perhitungan jumlah mikroba ada dua cara
yaitu secara langsung (direct method) dan
tidak langsung (indirect method).
Perhitungan jumlah mikroba secara
langsung yaitu jumlah mikroba dihitung
secara keseluruhan, baik yang mati atau
yang hidup sedangkan perhitungan jumlah
mikroba secara tidak langsung yaitu jumlah
mikroba dihitung secara keseluruhan baik
yang hidup maupun yang mati atau hanya
untuk menentukan jumlah mikroba yang
hidup saja.
III. 2. 3 Metode TPC (Total Plate Count)
Metode hitung cawan (Total Plate
Count) merupakan metode yang digunakan
untuk menghitung jumlah mikroba dalam
bahan pangan. Pertumbuhan mikro-
organisme yang membentuk koloni dapat
dianggap bahwa setiap koloni yang tumbuh
berasal dari satu sel, maka dengan
menghitung jumlah koloni dapat diketahui
penyebaran mikroba yang ada pada
sampel.Syarat perhitungan koloni yaitu
cawan yang dihitung adalah cawan yang
mengandung 30-300 koloni. Beberapa
koloni yang bergabung menjadi satu dapat
dihitung sebagai satu koloni. Metode TPC
merupakan analisis untuk menguji cemaran
mikroba dengan menggunakan metode
pengenceran dan metode cawan tuang.
Prinsip dari metode TPC (Total Plate
Count) adalah menumbuhkan sel
mikroorganisme yang masih hidup pada
media agar, sehingga mikroorganisme akan
berkembang biak dan membentuk koloni
yang dapat dilihat langsung dan dihitung
dengan mata tanpa menggunakan
mikroskop. Hal ini sesuai dengan pendapat
Dwijoseputro (2005), yang menyatakan
bahwa metode TPC merupakan analisis
untuk menguji cemaran mikroba dengan
menggunakan metode pengenceran dan
metode cawan tuang. Metode ini dilakukan
dengan mengencerkan sumber isolate yang
telah diketahui beratnya ke dalam 9 ml
larutan garam fisiologis, larutan yang
digunakan sekitar 1 ml suspensi ke dalam
cawan petri steril. Cawan yang dipilih
untuk menghitung koloni adalah cawan
yang mengandung antara 30-300 koloni.
III. 2. 4 Faktor - Faktor yang Memenga-
ruhi Enumerasi Metode TPC
Ada beberapa faktor yang
mempengaruhi perhitungan koloni metode
TPC (Total Plate Count), seperti tingkat
pengenceran terlalu tinggi sehingga
menyebabkan koloni tidak muncul, tingkat
pengenceran terlalu rendah sehingga koloni
yang muncul terlalu banyak (> 300)
sehingga tidak bisa dihitung,
ketidaksesuaian media yang digunakan,
adanya kontaminasi. Kontaminasi bisa
disebabkan karena alat yang digunakan,
lingkungan dan diri yang tidak aseptis,
kondisi pH dan suhu yang tidak sesuai. Hal
tersebut sesuai dengan pendapat Faridiaz
(2005), yang menyatakan bahwa salah satu
yang mempengaruhi perhitungan mikroba
ialah pengenceran, dimana pengenceran
yang terlalu tinggi menyebabkan koloni
tidak muncul, sedangkan pengenceran yang
terlalu rendah menyebabkan koloni muncul
terlalu banyak.
III. 2. 5 Jumlah mikroba TBUD dan
TSUD
TSUD (Terlalu sedikit untuk
dihitung) adalah batasan terkecil untuk
menghitung suatu mikroba. Tujuan TSUD
yaitu mempermudah perhitungan jika
mikroba kurang dari 30 koloni. Apabila
melewati batas perhitungan yaitu diatas 300
koloni, maka dikategorikan ke dalam
TBUD (Terlalu Banyak untuk Dihitung).
Salah satu yang menyebabkan terjadinya
TSUD dan TBUD tersebut ialah pengaruh
suhu pada saat inkubasi media Hal ini
sesuai dengan pernyataan Fatmarina (2000),
yang menyatakan bahwa masing-masing
mikroba yang tumbuh mempunyai suhu
optimum, minimum dan maksimum untuk
pertumbuhannya, hal ini disebabkan
pengaruh aktivitas enzim yang bekerja pada
suhu tersebut dari masing-masing mikroba.
III. 2. 6 Mikroorganisme pada Tomat
Busuk
Tomat (Solanum lycopersicum L.)
merupakan salah satu komoditas
hortikultura. Tomat mengandung beberapa
komponen kimia yang sangat penting untuk
kesehatan yaitu antioksidan seperti likopen,
beta-karoten dan lutein. Ada beberapa
faktor yang menyebabkan terjadinya
kontaminasi pada buah antara lain
penanganan, pengemasan dan waktu
pemanenan buah pascapanen yang tidak
tepat menyebabkan buah mudah
terkontaminasi terutama oleh jamur dan
bakteri, salah satunyaE. carotovora.Erwinia
carotovora adalah bakteri gram negatif,
berbentuk batang hidup soliter atau
berkelompok dalam pasangan atau rantai.
Merupakan bakteri tanpa spora berflagela.
Bakteri ini termasuk jenis fakultatif
anaerob. Erwini carotovora menghabiskan
hidupnya pada temperatur yang berkisar
27˚C-30˚C. Hal ini sesuai dengan pendapat
Schaad et al (2001), yang menyatakan
bahwa E. Carotovora merupakan salah satu
spesies bakteri yang umumnya
menyebabkan gejala busuk lunak pada
beberapa tanaman hortikultura.
III. 2. 7 Hasil Perhitungan Mikroba
Perhitungan jumlah mikroba dengan
sampel tomat dan media NA hanya berhasil
pada metode spread plate. Pengenceran 10-
3
diperoleh 30 koloni dan melalui
perhitungan sesuai rumus diperoleh hasil 30
× 104 Cfu/ml. Kegagalan pada metode Pour
Plate dimungkinkan karena terjadinya
human error dan kurang aseptis saat
melakukan praktikum. Hal tersebut juga
disebabkan karena adanyasistem aerasi.
Metode sebar (spread plate) mendapatkan
udara yang lebih banyak daripada metode
pour plate yang sampelnya ada di bawah
media, dipengaruhi juga oleh faktor
pengenceran. Semakin banyak dilakukan
pengenceran semakin mudah didapatkan
koloni terpisah atau tunggal dalam media.
Hal ini sesuai dengan Hadioetomo (2001),
yang menyatakan bahwa perhitungan
jumlah mikroba sering kali menggunakan
pengenceran. Namun pengenceran yang
terlalu tinggi akan menghasilkan
lempengan agar dengan jumlah mikroba
yang umumnya relatif rendah, sedangkan
pengenceran terlalu rendah menghasilkan
lempengan agar dengan jumlah mikroba
yang umumnya relatif tinggi.
IV PENUTUP
IV. 1 Kesimpulan
Berdasarkan praktikum dapat
disimpulkan bahwa :
1. Metode TPC merupakan analisis untuk
menguji cemaran mikroba dengan
menggunakan metode pengenceran dan
metode cawan tuang. Prinsip dari
metode TPC (Total Plate Count)
adalah menumbuhkan sel mikro-
organisme yang masih hidup pada
media agar, sehingga mikroorganisme
akan berkembang biak dan membentuk
koloni yang dapat dilihat langsung dan
dihitung dengan mata tanpa
menggunakan mikroskop
2. Metode TPC (Total Plate Count) di- LAMPIRAN
lakukan dengan mengencerkan sumber
isolate yang telah diketahui beratnya ke Lampiran 01 Perhitungan
dalam 9 ml larutan garam fisiologis, jumlah koloni 1 1
larutan yang digunakan sekitar 1 ml ∑sel = × ×
cawan Fp ∑inokulum
suspensi ke dalam cawan petri steril.
Cawan yang dipilih untuk menghitung Kelompok 1 (Tempe) media PDA
koloni adalah cawan yang mengandung Spread Plate
1
antara 30-300 koloni. ∑sel = 42 × −4× 1= 42 × 104 CFu/ml
10
Pour Plate
IV. 2 Saran 1
Saran untuk format dan isi penulisan ∑sel = 15 × −4 × 1= 15 × 104 CFu/ml
10
jurnal sebaiknya diseragamkan semua Kelompok 2 (Tape) media PCA
asisten.Saran untuk praktikum, diperlukan Spread Plate
ketelitian yang tinggi dalam perhitungan 1
serta harus menguasai prosedur kerja bagi ∑sel = 43 × −4× 1= 4,3 × 105 CFu/ml
10
praktikan Pour Plate
1
∑sel = 60 × −4× 1= 6 × 105 CFu/ml
DAFTAR PUSTAKA 10
Kelompok 3 (Pisang) media PCA
Dwidjoseputro, D. 2005. Dasar-Dasar Pour Plate
1
Mikrobiologi. Djambatan, Jakarta ∑sel = 35 × −5× 1= 35 × 105 CFu/ml
10
Fardiaz S., 2001. Mikrobiologi Pangan I. Kelompok 4 (Tomat) media NA
Gramedia Pustaka Utama, Spread Plate
Jakarta. 1
Fatmarina S. 2000. Penuntun Praktikum ∑sel = 30 × −3× 1= 3 × 104 CFu/ml
10
Mikrobiologi Dasar. Jakarta: PT. Kelompok 5 (Mangga) media PCA
Multazam Mitra Prima Spread Plate
Gobel, Risco, B. 2008. Mikrobiologi Umum 1
Dalam Praktek. Unviversitas ∑sel = 4 × −4× 1= 4 × 104 CFu/ml
10
Hasanuddin, Makassar. Pour Plate
1
Hadioetomo, R.S. 2001. Mikrobiologi ∑sel = 65 × −4× 1= 65 × 104 CFu/ml
10
Dasar Dalam Praktek. Gramedia,
Jakarta
Irianto, K. 2013. Mikrobiologi Jilid 1.
Yrama Widya, Bandung
Schaad NW, Jones JB & Chun W. 2001.
Laboratory Guide for
Identification of Plant Pathogenic
Bacteria. APS Press, St Paul,
Minnesota
Lampiran 02 Diagram Alir

Media agar pada cawan petri

yang ditumbuhi mikroba

Penggambaran garis kuadran

pada cawan petri

Perhitungan jumlah koloni

mikroba per kuadran

Jika < 30 Jumlah koloni berdasarkan Jika > 300

(TSUD) SPC (30 ≤ koloni ≤ 300) (TBUD)

Perhitungan dengan rumus

TPC

Jumlah koloni/
cawan (CFU/
ml)