Professional Documents
Culture Documents
SSA Obat Cacing
SSA Obat Cacing
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
SKRIPSI
Oleh:
Anak Agung Istri Yulianty Suryasmi
NIM : 098114029
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2013
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
SKRIPSI
Oleh:
Anak Agung Istri Yulianty Suryasmi
NIM : 098114029
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2013
i
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJII
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJII
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJII
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJII
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
Almamaterku
vi
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
PRAKATA
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa karena atas berkat kasih dan
skripsi yang berjudul “Optimasi dan Validasi Metode Analisis Timbal (Pb)
Kadar Timbal (Pb) pada Sediaan Kapsul Cacing Obat”. Skripsi ini disusun untuk
memenuhi salah satu persyaratan memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.) di
mendapatkan dukungan dari berbagai pihak. Maka dari itu, penulis ingin
1. Ipang Djunarko, M.Sc., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma Yogyakarta.
2. C.M. Ratna Rini Nastiti, M.Pharm., Apt. selaku Ketua Program Studi Fakultas
3. Prof. Dr. Sri Noegrahati Apt, selaku dosen pembimbing yang telah memberikan
pengarahan, bantuan, nasihat, kritik, dan saran sejak awal penelitian hingga akhir
4. Enade Perdana Istyastono, Ph.D., Apt. selaku dosen penguji atas segala masukan
dan bimbingannya.
5. Dra. M.M. Yetty Tjandrawati, M.Si., selaku dosen penguji atas segala masukan dan
bimbingannya.
vii
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJII
6. Rini Dwiastuti, M.Sc., selaku dosen pembimbing akademik serta atas segala
8. Segenap dosen yang telah berkenan membagikan ilmu kepada penulis selama
9. Staf sekertariat Fakultas Farmasi Mas Dwi dan Mas Narto atas segala bantuannya.
10. Mas Bimo, Pak Parlan, Mas Kunto, Mas Kethul Ismadi, Mas Ottok dan seluruh
11. Teman seperjuangan skripsi: Jimmy Chua, Rachelia Octavia untuk perjuangan,
12. Teman seperjuangan skripsi bimbingan Ibu Prof. Dr. Sri Noegrohati Apt. : Topan
14. Teman-teman FST A 2009 dan seluruh angkatan 2009 atas dukungan,
kebersamaan dan suka duka yang diberikan, khususnya Wanda, Kenny, Putra,
Deny, Aldo, Mikhael, Danu, Jenny, Dina, Felix, Dinda, Raras, Hera, Lambang.
Semoga pengalaman yang telah kita lalui bersama bisa menjadi kenangan di masa
depan.
15. Teman-teman kos Dewi 2 atas kebersaaman, suka dukanya, khususnya kepada
Ningsih, Realita, Raisa, Chisa, Pipin, Adel, Lani, Nindy, Mariteh, Riri.
viii
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
16. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu yang telah
sangat diharapkan adanya masukan dan saran yang membangun untuk penulis.
Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca dan berguna bagi dunia ilmu
pengetahuan.
Penulis
ix
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN PERSEMBAHAN………………………………...... vi
PRAKATA………………………………………………………… vii
DAFTAR ISI………………………………………………….......... x
DAFTAR TABEL………………………………………………….. xv
ABSTRACT………………………………………………………….. xix
BAB I. PENGANTAR………………………………………………. 1
A. Latar Belakang………………………………………………. 1
1. Permasalahan...........………………………………………. 4
x
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
2. Kapsul......................................................................................... 7
B. Timbal. ............................................................................................ 8
1. Definisi… ................................................................................... 8
C. Destruksi. ........................................................................................10
2. Instrumentasi. ............................................................................ 12
c. Monokromator. ..................................................................... 13
d. Detektor. ............................................................................... 14
e. Readout ................................................................................. 14
1. Linearitas. ................................................................................... 15
xi
3. Presisi….......................................................................................16
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
4. Akurasi.........................................................................................18
G. Hipotesis…........................................................................................ 21
2. Definisi Operasional.......................................................................23
C. Bahan..................................................................................................24
D. Alat ..................................................................................................... 24
b. Penyaringan… ....................................................................... 27
a. Linearitas… ............................................................................ 30
a. Akurasi… ............................................................................... 30
b. Presisi… .................................................................................. 30
1. Pemilihan Sampel…........................................................................32
3. Destruksi. ........................................................................................33
1. Linearitas. ....................................................................................... 43
1. Presisi..............................................................................................46
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
2. Akurasi…........................................................................................47
E. Penetapan Kadar................................................................................. 51
A. Kesimpulan .........................................................................................52
B. Saran ................................................................................................... 52
LAMPIRAN ................................................................................................... 56
xiv
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
DAFTAR TABEL
Halaman
xv
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 8. Kurva Baku Standar dan Kurva Baku Standar Adisi Replikasi 3 49
xvi
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Powerfit.................................................................................... 66
Powerfit.................................................................................... 78
Lampiran 14. Significant test Kurva Baku Validasi dan Penetapan Kadar ... 84
xvii
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
INTISARI
Kata kunci : timbal, kapsul cacing obat, parameter optimasi, parameter validasi,
spektrofotometri serapan atom
xviii
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
ABSTRACT
xix
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
pengobatan suatu penyakit. Hal ini tidak saja terjadi pada negara-negara
berkembang seperti Indonesia, akan tetapi juga pada negara-negara maju. Dengan
adanya kemajuan ilmu pengetahuan dan teknologi informasi, makin banyak hasil
penelitian obat bahan alam dapat diakses dengan mudah melalui berbagai media
menggunakan obat bahan alam dipercaya berkhasiat serta efek samping yang
Obat bahan alam dapat berasal dari hewan atau tumbuh-tumbuhan. Salah
satu obat bahan alam yang sering digunakan oleh masyarakat berasal dari cacing.
Pada umumnya cacing tanah dianggap sebagai hewan yang menggelikan bahkan
stroke dan trombosis. Sebagai obat tradisional untuk mengobati tifus dan diare,
cacing tanah biasanya dikonsumsi dengan cara direbus lalu diminum airnya, cara
1
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 2
lainnya cacing tersebut dikeringkan di oven hingga kering lalu ditumbuk hingga
halus dan dikonsumsi bubuk atau tepungnya. Ada juga yang dipanggang di api
Salah satu jenis cacing yang memilki khasiat, yaitu Lumbricus rubellus.
Di RRC, Korea, Vietnam, dan banyak tempat lain di Asia Tenggara, cacing jenis
Lumbricus rubellus sudah biasa digunakan sebagai obat sejak ribuan tahun lalu.
Dalam pengobatan tradisional cina cacing Lumbricus rubellus ini cukup efektif
fibrinolitik dan antitrombotik pada kasus trombosis (Verma dan Pulicherla, 2011).
media tumbuh yang digunakan serta pangan yang diberikan. Hal tersebut penting
karena cacing tanah dapat menoleransi logam berat dalam konsentrasi yang cukup
tinggi dan terjadi akumulasi logam berat di dalam jaringan cacing tanah (Ulfa,
Chua (2013) mengenai “Pengaruh Pangan yang Dicemari Logam Berat Timbal
(Pb) terhadap Kadar Timbal pada Cacing Lumbricus rubellus” dan Endrastiana
Timbal (Pb) yang Disemprotkan pada Daun Murbei yang Digunakan sebagai
Di pasaran beredar kapsul cacing obat yang berisi serbuk dari cacing
Lumbricus rubellus yang dikeringkan. Akan tetapi ada beberapa jenis kapsul
cacing obat yang beredar dipasaran tidak memiliki izin dari BPOM. Maka hal ini
menjadi suatu keraguan bagi peneliti terhadap pangan cacing dan proses dari
pembuatan kapsul cacing ini. Apabila pembudidayaan cacing tanah yang tidak
tepat pemberian pangannya, maka cemaran yang ada dipangan cacing tersebut
timbal yang ada didedaunan yang diambil dari tempat yang berpolusi. Polusi ini
terutama polusi dari kendaraan bermotor. Bahan bakar bensin yang banyak
TEL (tetra ethyl lead) yang digunakan untuk meningkatkan angka oktan dari
bensin tersebut. TEL (timbal) ini akan ikut keluar ke udara bersama gas buang
Hal ini sungguh berbahaya terutama adanya cemaran dari logam berat
timbal (Pb). Dampak dari timbal sendiri sangat mengerikan bagi manusia,
Pemaparan yang tinggi dapat menyebabkan kerusakan otak yang parah atau
berat timbal pada kapsul cacing obat yang beredar di salah satu toko obat Kota
instrumen ini spesifik terhadap logam, dengan setiap logam memiliki garis
penetapan kadar dilakukan optimasi dan validasi metode agar diperoleh kondisi
optimum analisis serta diperoleh validitas yang baik terkait akurasi, presisi,
1. Permasalahan
sebagai berikut :
a. Apakah terdapat logam berat timbal dalam sediaan kapsul cacing obat yang
b. Apakah penetapan kadar logam berat timbal pada sediaan kapsul cacing obat
c. Berapa kadar logam berat timbal dalam sediaan kapsul cacing obat yang
berasal dari salah satu toko obat di Yogyakarta dan apakah kadar logam berat
2. Keaslian penelitian
logam berat timbal pada sediaan kapsul cacing obat menggunakan SSA belum
Timbal (Pb) dan Kadmium (Cd) dalam Jamu Galian Singset Serbuk Kemasan
3. Manfaat penelitian
berikut :
alternatif dalam penetapan kadar logam berat timbal pada suatu sediaan
farmasetika.
kapsul cacing obat yang tidak memiliki izin BPOM yang beredar di masyarakat.
B. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Mengetahui keamanan kapsul cacing obat dari salah satu toko obat di
kota Yogyakarta yang digunakan sebagai obat tifus, diare, stroke dan trombosis
2. Tujuan khusus
a. Mengetahui apakah terdapat logam berat timbal dalam sediaan kapsul cacing
b. Mengetahui apakah penetapan kadar logam berat timbal pada sediaan kapsul
c. Mengetahui berapa kadar logam berat timbal dalam sediaan kapsul cacing obat
yang berasal dari salah satu toko obat di Yogyakarta dan mengetahui apakah
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
1. Obat tradisional
Obat tradisional adalah obat jadi atau ramuan bahan alam yang berasal
dari tumbuhan, hewan, mineral, sediaan galenik atau campuran bahan tersebut
2. Kapsul
atau lunak. Cangkang kapsul dibuat dari Gelatin dengan atau tanpa zat tambahan
kapsul, kemudian timbang lagi kapsul satu persatu. Keluarkan isi semua kapsul,
timbang seluruh bagian cangkang kapsul, hitung bobot isi kapsul dan bobot rata-
rata tiap isi kapsul. Perbedaan dalam persen bobot isi tiap kapsul terhadap bobot
rata-rata tiap isi kapsul tidak boleh lebih dari yang ditetapkan kolom A dan untuk
7
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 8
logam tersebut oleh manusia. Logam digunakan pada alat-alat yang banyak
dipakai oleh manusia, misalnya peralatan rumah tangga, batu baterai, tempat
Pencemaran logam dapat juga berasal dari proses produksi, misalnya pembakaran
batu bara, pemurnian minyak, pembangkit listrik (Buchari, Arka, Putra dan Sri,
2001).
C. Timbal
1. Definisi
Timbal atau yang kita kenal sehari-hari dengan timah hitam dan dalam
bahasa ilmiahnya dikenal denganPlumbum dan logam ini memiliki simbol kimia
timbal (Pb). Logam ini termasuk kedalam kelompok logam-logam golongan IV–A
pada tabel periodik unsur kimia. Mempunyai nomor atom (NA) 82 dengan massa
atom (MA) 207,2. Timbal adalah suatu logam berat berwarna kelabu kebiruan dan
lunak, dengan titik leleh 327°C dan titik didih 1.620°C. Pada suhu 550-600°C
timbal (Pb) menguap dan dengan oksigen dalam udara membentuk timbal oksida.
Bentuk oksidasi yang paling umum adalah timbal (II). Walaupun bersifat lunak
dan lentur, timbal (Pb) sangat rapuh dan mengkerut pada pendinginan, sulit larut
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 9
dalam air dingin dan air panas. Timbal (Pb) dapat larut dalam asam nitrat, asam
2. Keracunan timbal
kation esensial, terutama kalsium, zat besi dan seng; dan dengan mengubah
lelah, malaise, sakit kepala, depresi, kelemahan otot kaki dan tangan, anemia,
ginjal dalam mengabsorbsi glukosa, fosfat, dan asam amino. Efek jangka
3. Batas maksimum
cemaran logam berat atau tidak melebihi batas maksimum yang diperbolehkan
D. Destruksi
memanaskan asam atau campuran asam atau dengan pengabuan kering pada
temperatur tinggi (400-700 C°) pada tungku api. Pada destruksi basah, hasil
oksidasi dari zat organik akan menjadi karbon dioksida, air, dan zat lain yang
mudah menguap, yang didorong keluar, meninggalkan garam atau asam dari
digunakan dalam frekuensi yang hampir sama oleh analis organik dan material
biologik, pengabuan sederhana tanpa bantuan bahan kimia mungkin adalah teknik
asam perklorat adalah prosedur oksidasi yang paling sering dipakai. Biasanya
sejumlah kecil dari asam sulfat digunakan dengan volume asam nitrat yang lebih
besar (20-30 mL). Destruksi basah biasanya dilakukan dengan labu Kjehdahl.
Asam nitrat menghancurkan zat organik, tetapi tidak cukup panas untuk
proses destruksi sampai hanya asam sulfat yang tersisa bersama sampel, kemudian
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 11
asap SO3 putih terbentuk dan mulai berefluk dalam labu. Pada titik ini cairan akan
sangat panas, dan asam sulfat bereaksi terhadap sisa bahan organik. Destruksi
Campuran dari asam nitrat dan asam perklorat bisa digunakan. Asam
penguapan dari asam perklorat hingga hampir mengering atau ledakan keras akan
material organik atau biologis. Selalu tambahkan asam nitrat pertama kali.
peroksida dan asam berubah warna menjadi gelap sebelum ledakan (Christian,
2004).
unsur logam dalam jumlah sekelumit (trace) dan sangat kelumit (ultratrce). Cara
analisis ini memberikam kadar total unsur logam dalam suatu sampel dan tidak
tergantung pada bentuk molekul dari logam dalam sampel tersebut. Cara ini cocok
untuk analisis kelumit logam karena mempunyai kepekaan yang tinggi (batas
sedikit. Spektroskopi serapan atom didasarkan pada penyerapan energi sinar oleh
atom-atom netral, dan sinar yang diserap biasanya sinar tampak atau ultraviolet.
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 12
Dalam garis besarnya prinsip spektroskopi serapan atom sama saja dengan
radiasi, energi kimia dan energi listrik selalu memberikan sifat-sifat yang
yang terjadi biasanya sebanding dengan jumlah unsur atau persenyawaan yang
interaksi itu antara lain cara analisis spektrofotometri atom yang bisa berupa cara
2. Instrumentasi
katoda berongga (hollow cathode lamp). Lampu ini terdiri atas tabung kaca
tertutup yang mengandung suatu katoda dan anoda. Katoda berbentuk silinder
berongga yang terbuat dari logam atau dilapisi dengan logam tertentu. Tabung
logam ini diisi dengan gas mulia (neon atau argon) dengan tekanan rendah (10-15
torr). Neon biasanya lebih disukai karena memberikan intensitas pancaran lampu
yang lebih rendah. Salah satu kelemahan penggunaan lampu katoda berongga
adalah satu lampu digunakan untuk satu unsur, akan tetapi saat ini telah banyak
dijumpai suatu lampu katoda berongga kombinasi, yakni satu lampu dilapisi
beberapa unsur sehingga dapat digunakan untuk analisis beberapa unsur sekaligus
(Watson, 2007).
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 13
sampel yang dianalisis harus diuraikan menjadi atom-atom netral. Ada berbagai
macam alat yang dapat digunakan untuk mengubah suatu sampel menjadi uap
atom-atom yaitu dengan nyala (flame) dan dengan tanpa nyala (flameless).
cairan menjadi bentuk uap atomnya, dan juga berfungsi untuk atomisasi. Nyala
o
biasanya berupa udara/asetilen, menghasilkan suhu ± 2500 C. Dinitrogen
nyala dinilai kurang peka karena atom gagal mencapai nyala, tetesan sampel yang
masuk ke dalam nyala terlalu besar, dan proses atomisasi kurang sempurna. Oleh
karena itu, muncullah suatu teknik atomisasi yang baru yakni atomisasi tanpa
nyala. Pengatoman dapat dilakukan dalam tungku dari grafit seperti tungku yang
pita radiasi yang sedang diperiksa sehingga diatur untuk memantau panjang
gelombang yang sedang dipancarkan oleh lampu katode rongga. Hal ini
menghilangkan interferensi oleh radiasi yang dipancarkan dari nyala tersebut, dari
gas pengisi di dalam lampu katode rongga, dan dari unsur-unsur lain di dalam
monokromator juga terdapat suatu alat yang digunakan untuk memisahkan radiasi
dua cara yang dapat digunakan dalam sistem deteksi yaitu memberikan respon
terhadap radiasi resonansi dan radiasi kontinyu serta memberikan respon terhadap
diartikan sebagai sistem pencatatan hasil. Pencatatan hasil dilakukan dengan suatu
alat yang telah terkalibrasi untuk pembacaan suatu transmisi atau absorbsi. Hasil
pembacaan dapat berupa angka atau berupa kurva dari suatu recorder yang
obatdan degradasi produk obat, termasuk penentuan kuantitatif dan uji batas.
1. Linearitas
hasil-hasil uji yang secara langsung proporsional dengan konsentrasi analit pada
kurva kalibrasi yang menghubungkan antara respon (y) dengan konsentrasi (x).
yang berbeda-beda. Data yang diperoleh berupa nilai kemiringan (slope), intersep,
2. Kisaran (Range)
terendah dan tertinggi dalam suatu sampel yang mana telah memenuhi linearitas,
presisi dan akurasi dalam suatu metode. Kisaran-kisaran konsentrasi yang diuji
utama, maka konsentrasi baku harus diukur di dekat atau sama dengan konsentrasi
3. Presisi
dapat dilihat sebagai simpangan baku relatif dari sejumlah sampel yang berbeda
dapat dilakukan dengan membuat tiga konsentrasi yang berbeda-beda dengan tiga
koefisien variasi (CV), dan kisaran kepercayaan. Pengujian presisi pada validasi
SD
%RSD = x 100%
Mean
4. Akurasi
terukur dengan nilai yang diterima baik nilai konvensi, nilai sebenarnya, atau nilai
rujukan. Akurasi diukur sebagai banyaknya analit yang diperoleh kembali pada
suatu pengukuran dengan melakukan spiking pada suatu sampel. Untuk pengujian
pengumpulan data dari 9 kali penetapan kadar dengan 3 konsentrasi yang berbeda
LOD merupakan jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi
dapat dihitung secara statistic melalui garis regresi linier dari kurva kalibrasi.
Sa
LOD 3,3 (Ermer and Miller, 2005).
b
suatu konvensi metode signal to noise ini, dan dua metode pilihan lain untuk
menentukan LOD, yaitu metode non instrumental visual dan dengan metode
lapis tipis dan pada metode titrimetri. LOD juga dapat dihitung berdasarkan pada
standar deviasi (SD) respon dan kemiringan (slope) kurva baku pada level yang
mendekati LOD sesuai dengan rumus. Standar deviasi respon dapat ditentukan
berdasarkan pada standar deviasi blanko, pada standar deviasi residual dari garis
regresi, atau standar deviasi intersep y pada garis regresi (Gandjar dan Rohman,
2007).
ditentukan dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima pada kondisi
sebagai suatu konsentrasi pada signal to noise ratio, rasio yang digunakan
merupakan suatu kompromi antara konsentrasi dengan presisi dan akurasi yang
dipersyaratkan. Jadi, jika konsentrasi LOQ menurun maka presisi juga menurun.
Jika presisi tinggi dipersyaratkan, maka konsentrasi LOQ yang lebih tinggi harus
dilaporkan(GandjardanRohman, 2007).
ICH mengenalkan suatu konvensi metode signal to noise ini, dan dua
metode pilihan lain untuk menentukan LOQ, yaitu metode non instrumental visual
dan dengan metode perhitungan. LOQ dapat dihitung berdasarkan pada standar
deviasi (SD) respon dan kemiringan (slope) kurva baku sesuai dengan rumus.
Standar deviasi respon dapat ditentukan berdasarkan pada standar deviasi blanko,
pada standar deviasi residual dari garis regresi, atau standar deviasi intersep y
LOQ dapat dihitung secara statistic melalui garis regresi linier dari kurva
Sa
LOQ 3,3 (Ermer and Miller, 2005).
b
G. Landasan Teori
antipiretik (Dina, 2012) serta mengobati stroke dan thrombosis (Verma dan
dari pinggir jalan maka akan ada kemungkinan terdapat cemaran logam berat
bentuk kapsul. Kapsul cacing obata dalah bentuk sediaan obat terbungkus
cangkang kapsul, yang berisi obat kering (cacing kering). Sediaan kapsul cacing
obat yang dianalisis adalah produk yang tidak memiliki izin BPOM/tanpa merek
mengganggu dari pembacaan alat ini (Beaty and Kerber, 1993). Destruksi yang
dengan pelarut yang digunakan untuk destruksi adalah H2SO4 dan HNO3
(Christian, 2004). Untuk mendapatkan hasil yang optimal maka perlu dilakukan
optimasi sistem SSA. Optimasi yang dilakukan antara lain optimasi tinggi burner
dan optimasi untuk perbandingan bahan bakar dan udara. Selain itu juga perlu
H. Hipotesis
1. Metode penetapan kadar logam berat timbal pada sediaan kapsul cacing obat
2. Terdapat cemaran logam berat timbal pada kapsul cacing obat yang berasal dari
Timbal (Pb)
Tidak Terdapat
Cemaran
Cemaran
Logam Berat
Logam Berat
Timbal
Timbal
Hipotesis
BAB III
METODE PENELITIAN
rancangan acak.
1. Klasifikasi variabel
a. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah kadar seri larutan baku
b. Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah aborbansi dari seri larutan
baku Pb(NO3)2, absorbansi dari sampel kapsul cacing obat dan parameter
2. Definisi operasional
a. Kapsul cacing obat adalah bentuk sediaan obat terbungkus cangkang kapsul,
yang berisi obat kering (cacing kering). Sediaan kapsul cacing obat yang
dianalisis adalah produk yang tidak memiliki izin BPOM dan tidak
23
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 24
b. Cemaran logam berat adalah cemaran logam berat timbal pada kapsul cacing
dalam ppm (part per million). Dalam penelitian ini ppm yaitu µg/g.
ini dianalisis logam berat timbal pada resonance lines 283,3 nm.
C. Bahan
sediaan kapsul cacing obat yang berasal dari salah satu toko obat di Yogyakarta,
Universitas Sanata Dharma), Pb(NO3)2 p.a Merck®, H2SO4 p.a. Merck®, HNO3
D. Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain alat-alat gelas
Perkin Elmer ® dengan tipe nyala udara : asetilen, neraca analitik dengan kepekaan
0,001 (Ohaus Carat Series PAJ 1003) dan kertas Whatman No.42.
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 25
Sediaan kapsul cacing obat diperoleh dari salah satu toko obat di
kapsul. Dihitung bobot isi kapsul dan bobot rata-rata tiap isi kapsul. Perbedaan
dalam persen bobot isi tiap kapsul terhadap bobot rata-rata tiap isi kapsul tidak
boleh lebih dari yang ditetapkan kolom A dan untuk setiap 2 kapsul tidak lebih
ditimbang kemudian dipanaskan kembali dalam oven pada suhu 105oC selama 1
jam. Cara ini dilakukan berulang kali sampai diperoleh bobot tetap. Bobot tetap
berarti selisih dua kali penimbangan sampel berturut-turut tidak lebih dari 0,5 mg
tiap g sisa yang ditimbang. Penimbangan bobot kering juga dilakukan terhadap
1974).
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 26
Alat-alat gelas yang akan digunakan untuk analisis, dibilas dengan asam
bikromat 1% dan H2SO4 kemudian didiamkan pada lemari asam selama 24 jam
lalu dibilas dengan aquabidest. Setelah kering, alat ini dimasukkan dalam kantong
plastik dan disimpan dalam ruang bebas debu. Sebelum digunakan, peralatan
dikeringkan). Ditambahkan 7,5 mL H2SO4 pekat diikuti oleh 12,5 mL HNO3 pekat
tersebut hilang, maka akan mucul asap putih dari H2SO4. Hal ini menunjukkan
proses penguraian H2SO4 dan sampel akan berwarna lebih gelap. Dengan segera
pekat sedikit demi sedikit (catatan: suhu cairan dalam erlemenyer tidak boleh
turun hingga sama dengan suhu kamar). Erlenmeyer diletakkan kembali pada
pemanas dan HNO3 dididihkan lagi. Dilanjutkan sampai warna larutan menjadi
jernih, yaitu berwarna kuning jerami. Jika larutan itu masih gelap warnanya
ditambahkan HNO3 pekat kembali dan dididihkan lagi. Proses ini diulangi sampai
larutan tersebut jernih, kuning jerami dan ketika dimasukkan kedalam wadah yang
burner dan kertas Whatman No.42. Kertas saring dijenuhkan dengan HNO3 1 M
lalu diletakkan di bagian dalam corong. Corong diletakkan pada mulut labu hisap
dalam erlenmeyer yang berisi timbal hasil destruksi basah kemudian saring.
Prosedur ini dilakukan sebanyak tiga kali hingga tidak ada sampel yang tertinggal
untuk mengantisipasi adanya sampel yang tertinggal di kertas saring dan corong.
Lalu HNO3 1 M ditambahkan hingga batas tanda pada labu ukur 50 mL. Labu
ukur ditutup, lalu dikocok dan dipindahkan ke wadah plastik. Larutan siap
diujikan ke SSA pada kondisi optimum (dilakukan tiga kali replikasi) (AOAC,
2007).
diatur sampai nyala api stokiometrik nyala berwarna kuning tipis. Tekanan
dinaikkan sampai nyala berpijar kuning kuat. Larutan Pb 5 ppm disiapkan dan
Tinggi burner diatur hingga cahaya tampak melalui ujungnya dengan tombol.
tipe nyala udara : asetilen dengan perbandingan 20:5 dan 20:10. Tekanan udara
dijaga konstan dan tekanan bahan bakar diatur bertahap dari kaya bahan bakar
Tekanan bahan bakar dipilih yang optimum dan tekanan udara diubah dengan cara
yang sama. Absorbansi vs tekanan udara diplot, dengan catatan satu dibuat
hingga batas tanda pada labu. Konsentrasi 1000 µg/mL didapat dari:
Ar Pb
x n Pb(NO 3)2
Mr Pb(NO 3)2
g
207,2
= nol x 0,3197 g/200nL
g
331,2098
nol
= 999,9982 μg/nL
Kemudian dibuat seri kurva baku yaitu 0,1 ; 0,5 ; 1,0 ; 1,5 ; 2,0 ; 2,5 dan 3,0
mengukur serapan larutan standar unsur pada kondisi optimum. Kurva kalibrasi
blangko yang berisi 2,5 g sampel kapsul cacing obat kemudian didestruksi dan
Pb(NO3)2 p.a dengan konsentrasi 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm dan 10 ppm.
Setelah didestruksi kemudian disaring dengan kertas Whatman no.42 dan diukur
9. Penetapan kadar logam berat timbal pada sediaan kapsul cacing obat
menggunakan SSA dengan kondisi optimum pada resonance lines 283,3 nm.
F. Analisis Hasil
a. Korelasi signal/linearitas
b. Sensitivitas/limit of detection
3 ,3 x Sa
b
Sa = standar deviasi dari intersep kurva baku, b adalah slope dari kurva
baku.
c. Kisaran (Range)
a. Akurasi
kadar terukur
Perolehan Kembali (recovery) = kadar diketahui
x 100%
b. Presisi
Pengaruh prosedur analisis terhadap sampel dapat dilihat dengan plot kurva
baku standar dan kurva baku adisi kemudian kedua kurva tersebut
d. Limit of Quantitation
3,3 x Sa
b
Sa = standar deviasi dari intersep kurva baku adisi, b adalah slope dari kurva
baku.
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I
BAB IV
1. Pemilihan sampel
Sampel yang digunakan pada penelitian ini merupakan kapsul cacing obat
yang diperoleh dari salah satu toko obat di Yogyakarta. Pengambilan sampel
dilakukan secara acak namun sebelumnya dipilih sampel dengan kode produksi
yang sama. Hal ini dilakukan untuk menjamin kesamaan kondisi sampel selama
penetapan kadar cemaran logam berat timbal pada sampel tersebut. Kesamaan
kondisi sampel ini diharapkan dapat mencegah keragaman kadar yang akan
dihasilkan. Terdapat dua sampel yang digunakan yaitu sampel cacing obat
bermerek dan sampel cacing obat tanpa merek. Pada sampel kapsul cacing obat
bermerek terdapat no.registrasi dari BPOM, komposisi kapsul cacing obat, aturan
pakai dan peringatan. Namun, pada sampel kapsul cacing obat tanpa merek hanya
Dari kedua sampel tersebut dapat dibandingkan kadar yang akan dihasilkan.
dilakukan terhadap wadah dan sampel yang akan digunakan. Penyimpanan wadah
32
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 33
dan bahan dalam ruangan akan memberikan lembab (air) yang berasal dari udara
penimbangan bobot kering untuk mengetahui bobot yang sebenarnya dari wadah
atau sampel yang akan digunakan. Penimbangan bobot kering dilakukan dengan
melakukan penimbangan bobot berulang kali hingga diperoleh bobot tetap. Bobot
tetap yang dimaksud adalah bobot dengan selisih antara tiap penimbangan tidak
lebih dari 0,5 mg tiap gram sisa yang ditimbang. Prosedur ini dilakukan dengan
pemanasan dalam oven selama satu jam dengan suhu 105oC, kemudian
didinginkan dalam desikator. Desikator merupakan suatu wadah yang terbuat dari
bahan gelas yang kedap udara dan mengandung desikan yang dapat menyerap air.
Kadar air dari sampel kapsul cacing obat yaitu sebesar 0,16 %. Setelah didapatkan
3. Destruksi
Pada tahap preparasi sampel kapsul cacing obat, setelah serbuk ditimbang
SSA, sampel yang akan dianalisis harus tidak mengandung molekul atau senyawa
organik yang dapat menimbulkan jelaga (arang) dan tidak mengandung partikel
tidak larut yang dapat menyumbat saluran kapiler instrumen. Karena itu setiap
sampel yang akan diukur harus mengalami proses destruksi untuk menghilangkan
tersusun dari rantai karbon, seperti lemak, protein dan karbohidrat. Penggunaan
intrumen SSA melibatkan proses pembakaran pada suhu tinggi agar terjadi
karbon) yang ikut terbakar dapat menimbulkan noda jelaga (arang) pada
pengoksidasi sehingga molekul organik yang ada pada sampel dapat teroksidasi
dan berubah menjadi fase gas dalam bentuk karbondioksida dan air. Destruksi
ikatan antara senyawa organik dengan logam yang akan dianalisis terputus.
Terdapat dua cara destruksi yaitu destruksi basah (wet ashing) dan destruksi
kering (dry ashing). Pada destruksi basah biasanya digunakan kombinasi dari
beberapa pengoksidasi seperti asam nitrat, hidrogen peroksida, asam perklorat dan
Dalam penelitian ini digunakan destruksi basah karena untuk unsur dalam
konsentrasi rendah akan lebih dapat terbaca dibandingkan dengan destruksi kering
pada suhu 550-600°C timbal (Pb) menguap dan dengan oksigen dalam udara
membentuk timbal oksida. Saat proses destruksi kering terjadi pemanasan hingga
o
temperatur 500-550 C, hal tersebut kemungkinan akan mengakibatkan
kehilangan Pb (Hseu, 2004). Selain itu pada destruksi kering digunakan wadah
yang terbuat dari silika atau porselin karena itu bisa terjadi proses adsorpsi unsur-
unsur ke permukaan wadah dan membentuk suatu silika yang tidak dapat
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 35
dihancurkan seluruhnya oleh asam. Hal tersebut membuat hasil yang diperoleh
Pada proses destruksi ditambahkan 7,5 mL H2SO4 pekat diikuti oleh 12,5
Mulainya proses oksidasi akan ditandai dengan munculnya gas kuning kecoklatan
dari larutan sampel. Apabila asam nitrat habis menguap ditandai dengan berhenti
atau berkurangnya gas kuning kecoklatan yang muncul, dan digantikan gas putih
yang menunjukkan adanya penguapan gas SO3 dari asam sulfat. Pada tahap ini,
organik yang tersisa. Bila gas putih telah berhenti, dilakukan penambahan sedikit
asam nitrat untuk menjaga suasana oksidasi pada larutan di dalam erlenmeyer.
Pemanasan larutan di atas hot plate dilanjutkan sampai warna larutan menjadi
jernih. Jika warna larutan berubah menjadi hitam atau coklat yang menandakan
masih terdapat molekul organik pada sampel maka harus ditambahkan asam nitrat
kembali. Proses ini diulangi sampai larutan jernih dalam beberapa jam dan
penambahan asam nitrat tidak menimbulkan reaksi secara kasat mata pada sampel.
HNO3 karena sifat logam (Pb) larut dalam HNO3. Asam nitrat pekat ditambahkan
sedikit demi sedikit karena apabila sekaligus sampel akan meluap. Penambahan
asam dalam jumlah banyak biasanya dapat dilakukan setelah sebagian besar
protein dan lemak yang mungikn terdapat dalam sampel teroksidasi. Penambahan
logam (Pb) dari senyawa organik yang ada di dalam sampel kapsul cacing obat.
Reaksi antara asam nitrat dan asam sulfat yang terjadi adalah sebagai berikut :
H2SO4
3Pb + 8HNO3 3Pb2+ + 6NO3- + 2NO + 4H2O (1)
tidak larut air yang tertinggal, agar tidak menyumbat instrumen pada proses
pengukuran.
proses destruksi bergantung pada jumlah molekul organik yang akan dioksidasi.
radiasi berupa sinar UV (200 – 400 nm) atau sinar tampak/visibel (400 – 800 nm)
di luar nyala, oleh atom-atom netral dalam keadaan gas yang berada dalam nyala.
keadaan gas, dimana diperlukan panas yang sesuai yang dihasilkan dari nyala api.
Pada proses ini bila suhu terlalu tinggi kemungkinan akan terjadi ionisasi, karena
keadaan dasar yang paling banyak dalam nyala api yang dilewati oleh radiasi.
Atom-atom tersebut akan menyerap tenaga radiasi yang khas dan kemudian
berubah ke keadaan tereksitasi. Semakin banyak atom pada keadaan dasar maka
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 38
radiasi yang diserap makin banyak pula. Pada kondisi yang optimum akan
Fakultas MIPA UGM meliputi resonance lines, lebar celah monokromator, kuat
arus lampu katoda (Hollow Cathode Lamp), laju alir udara, laju alir asetilen dan
tinggi burner. Kondisi optimum yang digunakan dalam penelitian ini adalah
sebagai berikut :
ini merupakan panjang gelombang paling kuat menyerap garis untuk transisi
elektronik dari tingkat dasar ke tingkat eksitasi. Apabila atom pada tingkat energi
dasar diberi energi yang sesuai maka energi tersebut akan diserap dan atom-atom
tersebut akan tereksitasi ke tingkat energi yang lebih tinggi. Pada keadaan
tereksitasi, atom tidak stabil sehingga akan kembali ke tingkat energi dasar
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 39
dengan melepas sejumlah energi dalam bentuk sinar. Karena itu setiap garis
Lebar celah yang digunakan pada penelitian ini adalah 0,7 mm. Lebar
terabsorpsi dari gas pengisi lampu katoda cekung, garis-garis yang tidak
terabsorpsi dari logam katoda, dan pita-pita molekul dalam nyala. Pengaturan
sinar yang masuk mengurangi gangguan ini, tetapi tidak seluruhnya efektif.
noise ratio. Lebar celah dalam spektrofotometri serapan atom harus kecil yang
Lebar celah yang sangat sempit diperlukan hanya bila spektra emisi sumber
Kuat arus lampu katoda pada kondisi optimum dalam penelitian ini yaitu
10 mA. Lampu katoda terdiri atas tabung kaca tertutup yang mengandung suatu
katoda dan anoda. Katoda berbentuk silinder berongga yang terbuat dari logam
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 40
atau dilapisi dengan logam tertentu. Tabung logam ini diisi dengan gas mulia
(neon atau argon) dengan tekanan rendah (10-15 torr) (Watson, 2007).
Bagian katoda yang berbentuk cekung dilapisi logam yang sesuai dengan
logam yang akan dianalisis. Anoda diberi tegangan sehingga bila sejumlah kecil
arus yang besarnya beberapa mA diberikan diantara katoda dan anoda akan
mengakibatkan gas argon yang ada di dalam tabung akan mengalami ionisasi,
akibatnya ion gas argon tersebut akan tertarik ke arah katoda (yang bermuatan
negatif) dengan kecepatan yang sangat tinggi dan terjadi tumbukan yang
berlaku hukum emisi atom yang menyatakan bila atom mempunyai kelebihan
tenaga maka akan melepaskan kembali tenaga yang berupa sinar panjang
gelombang yang karakteristik. Dengan demikian sinar dari lampu katoda cekung
ini mempunyai spektrum yang spesifik sesuai dengan garis resonansinya yaitu
Kuat arus lampu katoda cekung yang dianjurkan tergantung pada unsur
yang akan dianalisis dan bervariasi. Pemakaian kuat arus diusahakan seoptimal
mungkin, karena pemberian kuat arus yang terlalu rendah akan menyebabkan
intensitas lampu menjadi terlalu rendah sehingga energi yang diberikan juga
rendah.
intensitas ini ada batasnya, karena hal sebaliknya mungkin saja terjadi, yaitu
jumlah atom-atom yang tidak tereksitasi dalam awan atom dan menyerap emisi
yang dipancarkan sehingga dapat terjadi apa yang disebut penyerapan dini dan hal
Tipe nyala untuk Pb yaitu udara : asetilen dengan suhu 2200 oC (Gandjar
dan Rohman, 2007). Laju alir asetilen-udara yang digunakan pada penelitian ini
sebagai bahan pembakar dan oksida untuk logam Pb adalah 3 L/menit dan 2
masuk ke dalam sistem pengkabutan yang akan mengubah sampel larutan menjadi
aerosol halus (uap) yang siap masuk ke dalam sistem nyala untuk atomisasi.
memberikan hasil yang maksimal, digunakan untuk berbagai unsur dan memiliki
sensitifitas dan kecermatan yang tinggi. Laju alir gas pembakar dan oksidator
komponen sampel).
terdapat beberapa daerah panas. Untuk mengatasi hal ini maka dilakukan optimasi
pada tinggi burner. Tinggi burner yang digunakan adalah 1,2 cm.
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 42
disebabkan oleh konduksi dan radiasi panas dari daerah C. Dalam daerah C ini
terjadi penguapan dan penguraian menjadi atom. Pada daerah ini pula dimulai
proses serapan dan emisi. Atom yang berubah menjadi oksida dalam daerah C,
akan keluar melalui daerah D, setelah itu dibuang ke kuncup luar. Optimasi tinggi
detection (LOD) atau sensitivitas. Kurva baku Fakultas MIPA UGM dibuat
sampel dibawah konsentrasi kurva baku Fakultas MIPA UGM kemudian dibuat
kurva baku dengan konsentrasi yang lebih rendah yaitu dengan konsentrasi 0,1 ;
0,5 ; 1,5 ; 2,0 ; 2,5 dan 3,0 ppm dalam 10 mL. Hal ini dilakukan untuk mencegah
detection (LOD).
1. Linearitas
yang proporsional antara jumlah analit dengan respon yang dihasilkan. Linearitas
suatu metode ditunjukkan oleh besarnya koefisien korelasi (r) dari kurva baku.
yang terbentuk dari populasi data yang ada. Koefisien korelasi diperoleh dengan
Persamaan regresi yang diperoleh dari kurva baku Fakultas Farmasi USD yaitu
Y = 0,0126x + 0,0027 ; r = 0,9992. Menurut Chan, Lam, Lee dan Zhang (2004)
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 44
0,025
0,02
0,015
0,01
0,005
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5
Konsentrasi (ppm)
2. Kisaran (Range)
Merupakan interval antara level terendah dan level tertinggi dari jumlah
analit dalam sampel yang digunakan dalam suatu metode analisis dan telah
memenuhi linearitas, presisi dan akurasi yang dapat diterima. Level terendah
dalam penelitian ini yaitu sebesar 0,1 ppm dan untuk level tertinggi sebesar 3
ppm. Dalam penelitian ini konsentrasi tersebut telah memenuhi linearitas, presisi
Suatu alat dapat dikatakan cukup sensitif apabila alat tersebut mampu
mendeteksi konsentrasi terkecil dari suatu analit, semakin kecil konsentrasi yang
terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi dan masih memberikan respon
berbeda signifikan terhadap respon blangko. LOD dapat dihitung secara statistik
melalui garis regresi linear dari kurva kalibrasi. LOD dapat dihitung dengan
menggunakan rumus :
Sa
LOD = 3,3 x
b
Sa merupakan standar deviasi dari intersep dan slope (b) merupakan kemiringan,
dengan konsentrasi.
0,0005 dan b sebesar 0,0126, sehingga diperoleh LOD sebesar 0,1309 µg/mL.
Nilai LOD tersebut merupakan kadar analit terendah yang memberikan respon
berbeda signifikan dari respon blanko. Dari nilai LOD tersebut dapat ditentukan
nilai absorbansi terkecil dari sistem ini, yaitu dengan mensubstitusikan nilai x =
standar Pb(NO3)2 p.a dengan konsentrasi 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm dan 10
ppm ke dalam 2,5 g sampel sebelum proses destruksi dilakukan dan dibuat larutan
blangko dari kapsul cacing obat. Prosedur ini dilakukan sebanyak tiga kali
replikasi. Setelah destruksi selesai, sampel disaring dan diencerkan dalam labu
ukur 50 mL sehingga konsentrasi analit dalam sampel menjadi 0,4 ; 0,8 ; 1,2 ; 1,6
dan 2,0 µg/mL. Konsentrasi tersebut di plot dengan absorbansi yang dihasilkan
1. Presisi
dapat dilakukan dengan membuat tiga konsentrasi yang berbeda-beda dengan tiga
dan 1 blangko dengan tiga replikasi. Konsentrasi yang dibuat yaitu 2 ; 4 ; 6 ; 8 dan
sebanyak 50 mL sehingga jumlah analit dalam sampel menjadi 0,4 ; 0,8 ; 1,2 ; 1,6
SD
%RSD = x 100%
Mean
memenuhi syarat, dimana syarat dari %RSD yang diperbolehkan untuk jumlah
2. Akurasi
menggunakan rumus :
kadar terukur
Perolehan Kembali (recovery) = x 100%
kadar diketahui
Nilai % Recovery yang diperoleh dalam penelitian ini memenuhi syarat, dimana
syarat dari range % Recovery yang diperbolehkan untuk jumlah analit yang
yang digunakan terhadap analit yang diukur. Dari analisis pengaruh prosedur
dapat dilihat metode tersebut apakah mempengaruhi hasil analit yang didapatkan,
pengaruh yang dimaksud seperti hilangnya analit atau bertambahnya analit karena
dengan cara membandingkan kurva baku standar dengan kurva baku standar adisi.
Gambar 8. Kurva Baku Standar dan Kurva Baku Standar Adisi Replikasi 3
Hasil tersebut didapatkan dengan cara melakukan uji F terlebih dahulu, dimana uji
F berfungsi untuk melihat perbedaan dari Sb kedua kurva baku (kurva baku
standar dan kurva baku standar adisi) apakah berbeda signifikan atau tidak,
dimana Sb merupakan simpangan dari slope (b). Setelah uji F dilanjutkan dengan
melakukan uji t. Uji t digunakan untuk membandingkan slope (b) dari kedua
kurva baku, apakah berbeda signifikan atau tidak. Dari ketiga replikasi didapatkan
hasil perbedaan dari kedua kurva baku yaitu berbeda signifikan. Hal tersebut
3,3 x Sa
b
Sa merupakan standar deviasi dari intersep dan slope (b) merupakan kemiringan,
dengan konsentrasi. Dari ketiga replikasi diperoleh hasil LOQ sebagai berikut :
LOQ tersebut menunjukkan bahwa kadar terkecil yang dapat dikuantifikasi yaitu
µg
4,373 . Metode ini memenuhi syarat untuk penetapan kadar logam berat timbal
g
karena LOQ yang diperoleh dibawah persayaratan dari BPOM, dimana kadar
yang diperbolehkan untuk sediaan obat bahan alam sebesar Pb ≤ 10,0 ppm (µg).
g
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 51
E. Penetapan Kadar
validasi telah terpenuhi. Optimasi dan validasi yang telah dilakukan memenuhi
syarat sehingga dapat dilakukan penetapan kadar logam berat timbal (Pb) dalam
sediaan kapsul cacing obat. Penetapan kadar dilakukan terhadap dua sampel yaitu
kapsul cacing obat bermerek dan kapsul cacing obat tanpa merek. Sampel
didestruksi dan disaring ke dalam labu ukur 50 mL kemudian diukur dalam SSA
Pada kapsul cacing obat bermerek tidak terdapat logam berat timbal (Pb)
sedangkan pada kapsul cacing obat tidak bermerek terdapat logam berat timbal
µg
(Pb) sebesar 12,647 . Kadar tersebut melebihi persyaratan dari BPOM, dimana
g
untuk suatu sediaan obat bahan alam dipersyaratkan tidak boleh mengandung
cemaran logam berat atau tidak melebihi batas maksimum yang diperbolehkan
BAB V
A. Kesimpulan
meliputi presisi dan akurasi yang memenuhi syarat, linearitas dengan koefisien
korelasi sebesar 0,9992, Limit of Detection sebesar 0,1309 µg/mL, dan Limit of
Kadar logam berat timbal (Pb) dalam sediaan kapsul cacing obat tanpa
µg
merek sebesar 12,647 , dimana kadar tersebut melebihi dari persyaratan BPOM
g
yaitu Pb ≤ 10,0 ppm (µg), sedangkan pada sediaan kapsul cacing obat bermerek
g
B. Saran
digestion.
Lumbricus rubellus yang berkhasiat sebagai antipiretik, tifus, diare dan stroke.
52
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 53
DAFTAR PUSTAKA
Ahuja, S., dan Rasmussen, H., 2007, HPLC Method Developments for
Pharmaceuticals, Elsevier Academic Press, Italy, pp.444, 446.
Albalak, R., 2001, Pemaparan Timbal dan Anemia pada Anak-anak di Jakarta,
Indonesia, 1.
Andalusia, S., Hidayat, S., Wahyuni, S., 2008, Tumbuhan Obat, PT Elex Media
Komputindo, Jakarta, 10.
Buchari, Arka, W.I., Putra, K.G., dan Sri, I.G.A., 2001, Buku Ajar Kimia
Lingkungan, Depdiknas, Jakarta, 5.
Chan, C.C., Lam, H., Lee, Y.C., Zhang, X-M., 2004, Analytical Method
Validation and Instrument Performance Verification, A John Wiley and Sons,
Inc, Kanada, pp. 16, 18-20.
Cho, J.H., Park, C.B., Yoon, Y.G., Kim, S.C., 1998, Lumbricin I, a Novel Proline-
rich Antimicrobial Peptide from The Earthworm : Purification, cDNA
Cloning and Molecular Characterization, Biochimica et Biopshysica, 67.
Christian, G.D., 2004, Analytical Chemistry, sixth edition, John wiley and Son
Inc, Danvers, pp.55-57.
Chua, J.P., 2013, Pengaruh Pangan yang Dicemari Logam Berat Timbal (Pb)
terhadap Kadar Timbal pada Cacing Lumbricus rubellus.
Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1974, Ekstra Farmakope
Indonesia, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, XXIX.
Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2011, Info POM, Vol.12
No.3, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, 4.
Gandjar, I.G., Rohman, A., 2007, Kimia Farmasi Analsis, cetakan kedua, Pustaka
Pelajar, Yogyakarta, 298-320, 465-469.
Hseu, Z.Y., 2004, Evaluating Heavy Metal Contents in Nine Composts Using
Four Digestion Methods, Bioresource Technology, 54.
Katzung, B.G., 2004, Farmakologi Dasar dan Klinik, EGC, Jakarta, 428-429.
Miller, J.N., Miller, J.C., 2010, Statistics and Chemometrics for Analytical
Chemistry, sixth edition, Ashford Colour Press, UK, pp.37.
Mundrikah, 2011, Analisis Logam Timbal (Pb) dan Kadmium (Cd) dalam Jamu
Galian Singset Serbuk Kemasan Secara Spektrofotometri Serapan Atom.
Palar, H., 2004, Pencemaran dan Toksikologi Logam Berat, Rineka Cipta,
Jakarta, 56-57.
Snyder, L.R., Kirkland, J.J., and Glajh, J.L., 2010, Introduction to Modern Liquid
Chromatography, 3rd ed., John Wiley Sons, Inc., New York, pp.546.
Ulfa, S.F., 2010, Analisis Kandungan Timbal (Pb) dan Kadmium (Cd), dalam
Cacing Tanah secara Spektrofotometri Serapan Atom (SSA).
Verma, K.M., Pulicherla KK, 2011, Lumbrokinase-A Potent and Stable Fibrin-
Spesific Plasminogen Activator, International Journal of Bio-Science and
Bio-Technology, 57.
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 55
LAMPIRAN
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 57
Ar Pb
x n Pb(NO 3) 2
Mr Pb(NO 3)2
g
207,2nol
= g x 0,3197 g/200nL
331,2098
nol
= 999,9982 µg/nL
Penimbangan Pb(NO3)2 :
Mean = 0.53455
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 60
Kolom A :
0.53455 ± 0,04009
Kolom B :
0.53455 x 15 %= 0,08018
0.53455 ± 0,08018
Selisih
Penimbangan Alat Penimbangan (g) Penimbangan
(mg)
Sebelum pemanasan 0,2810 -
Sesudah pemanasan 1 0,2802 2,8551
Sesudah pemanasan 2 0,2798 1,4296
Sesudah pemanasan 3 0,2797 0,3575
Berat Selisih
wadah berat
Penimbangan Sampel wadah penimbangan
+sampel (g) sampel (g)
(g) (mg)
Sebelum dipanaskan 1,2812 1,0015 -
Sesudah pemanasan 1 1,2798 1,0001 1,3999
0,2797
Sesudah pemanasan 2 1,2798 1,0001 0
Sesudah pemanasan 3 1,2796 0,9999 0,2000
(1,0015 g –0,9999 g)
Kadar air = x 100% = 0,16 %
1,0015 g
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 62
Korelasi signal/linearitas
Linearitas ditentukan dari koefisien korelasi (r) yang diperoleh dari kadar
dan serapan dari data penentuan kurva baku ke dalam regresi linear.
Konsentrasi Absorbansi
(ppm)
0 0,000
1,0 0,011
2,0 0,021
4,0 0,043
8,0 0,085
10,0 0,106
Y = 0,0106x + 0,0002 r = 0,9999
0,06
0,04
0,02
0
0 2 4 6 8 10 12
Konsentrasi (ppm)
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 65
Konsentrasi Absorbansi
(ppm)
0,1 0,0036
0,5 0,0093
1,5 0,0223
2 0,0270
2,5 0,0343
3 0,0406
Y = 0,0126x + 0,0027 r = 0,9992
0,025
0,02
0,015
0,01
0,005
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5
Konsentrasi (ppm)
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 66
Sensitivitas/Limit of Detection
3,3 x Sa
b
Sa = standar deviasi dari intercept kurva baku, b adalah slope dari kurva baku.
Konsentrasi Absorbansi
(ppm)
0,1 0,0036
0,5 0,0093
1,5 0,0223
2 0,0270
2,5 0,0343
3 0,0406
= 0,1309 µg/mL
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 67
Sa
LOD = 3,3 x
b
0,0002
= 3,3 x
0,0106
= 0,0623 ppm
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 68
Absorbansi :
Contoh Perhitungan :
kadar terukur
Perolehan Kembali (recovery) = x 100%
kadar diketahui
Replikasi I :
= 0,365 µg/mL
= 91,25 %
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 70
Contoh Perhitungan :
= 15,44%
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 71
Dilihat dengan plot kurva baku standar dan kurva baku standar adisi.
Replikasi I :
y = 0,0099x + 0,0053
0,025
R² = 0,9863
0,02
0,015
0,01
0,005
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5
Konsentrasi (µg/mL)
Baku Adisi
b 0,0126 0,0099
Sb 0,0002 0,0006
n 6 6
a. Uji signifikansi
2 standar deviasi dengan uji F
F = S1 (S 2 = Standar deviasi slope adisi ; S 2 = Standar deviasi slope baku)
1 2
S22
0,00062
F= =9
0,00022
b. Uji t
(b1–b2)
t= 2
(b
2
1 = slope adisi ; b2 = slope baku standar)
Js1 +s2
n1 n2
(0,0099–0,0126)
t= 2 2
J0,0006 +0,0002
6 6
t = 10,457
Perhitungan df : 6,09
s12 s22
( n1 n2
+ )2
df : s14 s24
+
n12(n1—1) n22 (n2—1)
Replikasi II :
Baku Adisi
b 0,0126 0,0089
Sb 0,0002 0,0004
n 6 6
b. Uji t
((n1–1)s12+(n2–1)s22)
S2 =
(n1+n2–2)
((6–1)x(0,0004)2+(6–1)x(0,0002)2)
S2 =
(6+6–2)
(8x10—7+ 2x10—7)
S2 =
10
S2 = 1 x 10-7
Perhitungan nilai t :
(b1–b2)
t= (b1 = slope kurva adisi ; b2 = slope kurva baku)
1 1
sJ +
n1 n2
(0,0089–0,0126)
t=
1 1
3,162 x 10–4J +
66
3,7 x 10–3
t=
3,162 x 10–4 s 0,5774
t = 20,266
Perhitungan df :
df :n1 + n2 - 2
df : 6+6-2 = 10
Replikasi III :
Baku Adisi
b 0,0126 0,0097
Sb 0,0002 0,0006
n 6 6
b. Uji t
(b1–b2)
t= 2
(b
2
1 = slope kurva adisi ; b2 = slope kurva baku)
Js1 +s2
n1 n2
(0,0097–0,0126)
t= 2 2
J0,0006 +0,0002
6 6
t = 11,232
Perhitungan df : 6,09
s12 s22
( n1 n2
+ )2
df : s14 s24
+
n12(n1—1) n22 (n2—1)
b. Uji t
((n1–1)s12+(n2–1)s22)
S2 =
(n1+n2–2)
((6–1)x(0,0005)2+(6–1)x(0,0002)2)
S2 =
(6+6–2)
(1.25x10—6+ 2x10—7)
S2 =
10
S2 = 1.45 x 10-7
3,3 x Sa
b
Sa = standar deviasi dari intercept kurva baku adisi, b adalah slope dari kurva
baku.
Replikasi I
0,015
0,01
0,005
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5
Konsentrasi (µg/mL)
Konsentrasi
Absorbansi (y)
(µg/mL)
0 0,0056
0,4 0,0103
0,8 0,0120
1,2 0,0166
1,6 0,0210
2 0,0260
Sa
LOQ = 3,3 x
b
0,0007
= 3,3 x
0,0099
= 0,233 µg/mL
Replikasi II :
0,015
0,01
0,005
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5
Konsentrasi (µg/mL)
Konsentrasi
Absorbansi (y)
(µg/mL)
0 0,0050
0,4 0,0093
0,8 0,0120
1,2 0,0163
1,6 0,0206
2 0,0223
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 80
Sa
LOQ = 3,3 x
b
0,0005
= 3,3 x
0,0089
= 0,185 µg/mL
Replikasi III :
0,015
0,01
0,005
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5
Konsentrasi (µg/mL)
Konsentrasi
Absorbansi (y)
(µg/mL)
0 0,0046
0,4 0,0093
0,8 0,0116
1,2 0,0150
1,6 0,0196
2 0,0250
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 81
Sa
LOQ = 3,3 x
b
0,0007
= 3,3 x
0,0097
= 0,238 µg/mL
µg 50 nL
LOQ = 0,233 x
nL 2,5 g
µg
= 4,660
g
PPLLAAGGIA
IATTMMEERRUUPPAAKKAANNTTIN
INDDAAKKAANNTTID
IDAAKKTTEERRPPUUJJI I 82
Konsentrasi Absorbansi
(ppm)
0,1 0,0036
0,5 0,0073
1,5 0,0210
2 0,0293
2,5 0,0327
Y = 0,0128x + 0,0018 r = 0,9956
µg 50 nL
Kadar = 0,615 x
nL 2,5 g
= 12,300 µg
g
Lampiran 14, Significant test Kurva Baku Validasi dan Penetapan Kadar
Validasi Penetapan
Kadar
b 0,0126 0,0128
Sb 0,0002 0,0007
n 6 5
(b1–b2)
t= 2 2
(b1 = slope penetapan kadar ; b2 = slope validasi)
Js1 +s2
n1 n2
(0,0128–0,0126)
t= 2 2
J0,0007 +0,0002
5 6
t = 0,618
Perhitungan df : 4,54
s12 s22
( n1 n2
+ )2
df : 4 4
s1 s2
2
+ 2
n1 (n1—1) n2 (n2—1)
Validasi Penetapan
Kadar
a 0,0027 0,0018
Sa 0,0005 0,0011
n 6 5
((n1–1)s12+(n2–1)s22)
S2 =
(n1+n2–2)
((5–1)x(0,0011)2+(6–1)x(0,0005)2)
S2 =
(5+6–2)
(4,84x10—6+ 1,25x10—6)
S2 =
9
S2 = 6,76 x 10-7
Perhitungan nilai t :
(a1–a2)
t= 1
(b1 = slope kurva adisi ; b2 = slope kurva baku)
1
sJ +
n1 n2
(0,0018–0,0027)
t=
1 1
8,22 x 10–4J +
56
9 x 10 –4
t=
8,22 x 10–4 s 0,6055
t = 1,80
Perhitungan df :
df :n1 + n2 - 2
df : 5+6-2 = 9
BIOGRAFI PENULIS
bersaudara, dari pasangan Anak Agung Gede Surya Raditya dan Ni Luh Gede
aktif dalam berbagai kegiatan dan kepanitiaan antara lain sebagai volunteer acara
volunteer acara KIO (Kampanye Informasi Obat) Farmasi untuk Sekolah Dasar
(2009), sebagai koordinator sie.humas dalam acara KIO (rangkaian acara Dies