Introduccion

Las interacciones entre minerales y microbios son de cierta importancia para el desarrollo de un costo bajo
ecológico y tecnologías de procesamiento de minerales sostenibles. Dado que las reservas mundiales de
minerales de alta ley están disminuyendo, el desarrollo de la recuperación de metales a partir de minerales
minerales de bajo grado y bajo valor basado en la actividad de los microbios es muy necesario. La
bioflotación es una biotecnología mediante el empleo de microbios, en particular bacterias, que implican la
adhesión de las bacterias en los minerales que satisface las necesidades industriales de una forma más
selectiva y respetuosa con el medio ambiente separación mineral. Al adherirse a la superficie de los minerales,
la bacteria esencialmente cambia la superficie características de los minerales como resultado de la
interacción de microbios y superficies minerales seguidas de activos oxidación/reducción de elementos
minerales por bacterias. Los metabolitos microbianos y las actividades derivadas de la interacción microbio-
mineral produce la mayor eficiencia de flotación que depende de la sustancia química características de las
superficies minerales y, por lo tanto, afecta el proceso de beneficio.

La utilización de las bacterias en flotación es bastante nueva, especialmente las bacterias que producen
biosurfactantes que también son capaz de oxidar hierro (Fe) y azufre (S). Por lo tanto, en este trabajo, los
experimentos de crecimiento bacteriano por lotes para utilizar las bacterias capaces de producir
biosurfactantes y oxidar hierro y azufre se llevaron a cabo en contacto directo con pirita en condiciones
aeróbicas. Cambios en las propiedades de la superficie de la pirita representados por la tensión superficial y el
contacto ángulo fue determinado. La interacción de células bacterianas con pirita se estudió mediante
transformada de Fourier Infrarrojo (FTIR) Espectroscopia. El comportamiento agregado de las células
bacterianas y las partículas de pirita se observó mediante el escaneo de electrones microscopía (SEM),
mientras que la naturaleza de estos agregados se analizó mediante espectroscopía de energía dispersiva
(EDS). Estos resultados serían muy útiles y proporcionarían información importante sobre la mejora de la
bioflotación de sulfuro minerales. En este aspecto, las bacterias utilizadas en este estudio podrían ser
aplicables para los bioreagentes de flotación para crear procesamiento de minerales ecológico.

Materiales y método

Muestras de pirita

La pirita utilizada en este estudio se obtuvo de Singajaya, Garut, provincia de Java Occidental, Indonesia y se
Obtuvo el tamaño de grano de malla -200/+400. Un análisis de difractrometría de polvo de rayos X (XRD)
mostró la alta pureza de pirita (FeS2) y no se detectaron otros minerales de sulfuro (Fig. 1a). Además, análisis
ED-XRF de pirita muestra reveló que su composición química era SiO2 (1.63 wt.%), Al2O3 (2.29 wt.%),
TiO2 (0.009 wt.%), Fe2O3 (42.03 wt.%), MgO (0.056 wt.%), CaO (0.068 wt.%), Na2O (0.01 wt.%), K2O
(0.013 wt.%), P2O5 (0.009 wt.%), SO3 (53,81 wt.%), Cr2O3 (0.038 wt.%), CuO (0.036 wt.%), NiO (0.003
wt.%), ZnO (0.004 wt.%).

Bacteria y medio de crecimiento

Las bacterias Bacillus pumilus SKC-2 y Alicyclobacillus ferrooxydans SKC/SAA-2 utilizadas en este estudio
fueron aislado de la arena mineral laterita de Sulawesi del Sur, un cultivo de enriquecimiento de petróleo
crudo, respectivamente, que tienen la capacidad de producir biosurfactantes y oxidar hierro y azufre.
El medio de crecimiento utilizado fue el modificado Luria-Bertani (LB) medio (l-1: 10 g de peptona; 5 g de
extracto de levadura; 10 g de NaCl, suplementado con 0.5 g de Na2S2O3.5H2O y 0.25 g FeSO4.7H2O). La
fotomicrografía de las células bacterianas de las cepas se muestra en la Fig. 4b (Bacillus pumilus) y Fig. 5b
(Alicyclobacillus ferrooxydans).
Sistemas experimentales por lotes

Los experimentos bacterianos discontinuos se realizaron por triplicado en matraces Erlenmeyer

estériles de 500 ml que contenían 300 ml de medio de crecimiento suplementado con inóculo al
10% (vol/vol) de Bacillus pumilus o Alicyclobacillusferrooxidans y Pirita al 25% (p/v) a una densidad
de pulpa del 25%. Los cultivos se incubaron con agitación (150 rpm) a 30º C por 4 semanas bajo
condiciones aeróbicas. Las propiedades hidrofóbicas (medidas por la tensión superficial y el ángulo de
contacto) y el pH en solución de cada cultivo fueron monitoreados periódicamente, y se prepararon conjuntos
de muestras separadas para los análisis por microscopía electrónica de barrido: espectroscopía de rayos X de
energía dispersiva (SEM-EDS) y transformada de Fourier por infrarrojos (FTIR). La fijación y preparación de
la muestra para imágenes SEM y FTIR se han descrito anteriormente.

Resultados y discusión

El crecimiento bacteriano y la actividad en los sistemas experimentales tendieron a reducir el pH de

las soluciones que gradualmente disminuyó a ~ 3 (Fig. 1b). La reducción fue supuestamente
facilitada por el papel bacteriano como resultado de la aceleración de oxidación de pirita oxidando
hierro y azufre que generan H2SO4, lo que reduce el pH de las soluciones acuosas. La actividad
bacteriana en los sistemas experimentales también dio como resultado un cambio significativo en
la naturaleza de la hidrofobicidad de pirita después de la interacción con la bacteria según lo
determinado por el ángulo de contacto y las mediciones de tensión superficial (Figs. 1c, 1d). En el
transcurso de los experimentos, la tensión superficial de las suspensiones en los sistemas experimentales en
general disminuido con el tiempo; desde un valor inicial de 67.5 mN/m hasta 51.6 mN/m para B. pumilus y
hasta 55.7 mN/m para A. ferrooxidanos (basados en los valores promedio obtenidos de los cultivos por lotes
se ejecutan por triplicado) (Fig. 1c). Esta disminución puede ser debido a la producción de biosurfactante por
la cepa, apoyando así más evidencia de la capacidad de la cepa de ser una agente espumante.

A medida que la tensión superficial disminuía, los valores del ángulo de contacto aumentaban con
el tiempo, lo que demostraba una naturaleza hidrofóbica mayor, y posteriormente disminuía a los 5
días de incubación que exhibía una naturaleza hidrófila mayor. (Fig. 1d). El aumento y disminución
del valor del ángulo de contacto observado en las mediciones de contacto de pirita ángulo después
de la interacción con las cepas podría atribuirse a la adhesión de células bacterianas y/o productos
metabólicos interacciones sobre la superficie de la pirita. Del mismo modo, las mediciones del ángulo
de contacto mostraron una mayor adhesión de la célula en la superficie de pirita, demostrando una adhesión
preferencial de las cepas a los minerales de pirita.

Las observaciones por microscopía electrónica de barrido del complejo de pirita-célula revelaron la formación
de células en la red con agregados de partículas de pirita después de 30 días de reacción (Figuras 2, 3). Las
células bacterianas se cubrieron con grandes agregados de partículas de pirita de grano fino que se adhieren a
sus paredes celulares. La mayoría de los complejos constan de pirita altamente dispersada células bacterianas
asociadas con la pirita agregada. Los filamentos observados dentro de las partículas de pirita y las células
bacterianas son indicativas de exudados orgánicos alrededor de la superficie de la célula bacteriana. La
formación de filamentos es atribuido a lisis microbiana o residuos de exudado o sustancias poliméricas
extracelulares bacterianas (EPS).

los espectros SEM-EDS de los complejos mostraron los altos contenidos de C, O, S y Fe y bajos contenidos
de Si y Ca (para B. pumilus) y Al (para A. ferrooxidans). Además, los compuestos orgánicos tales como EPS
en asociación con pirita son considerado responsable de cambiar las propiedades de la superficie de la pirita,
volviéndose más hidrofílico o hidrofóbico una función del tiempo (figuras 1c, 1d). Esto se debe a su alta
funcionalidad (por ejemplo, ácidos carboxílicos) como también se confirma por Espectros FTIR (figuras 4, 5).
Había una banda ancha centrada alrededor de 3376 - 3426 cm-1 que puede atribuirse a hydrogenbonded (O-
H) grupos hidroxilo, grupos N-H-amina. Las bandas de absorción en el rango 1610 -1652 cm-1 pueden ser
alqueno asignado (C = C), carbonilo (C = O), grupos C = N y fosfato de Fe. Las bandas en la región 1399 cm-
1 surgen debido a la interacción superficial de pirita y bacterias, banda C-H vibración de metales.

Cuatro resultados obtenidos por FTIR los análisis están especialmente interesados en los picos a
1536 cm-1 (C-N-H y amidas resultantes de proteínas de células bacterianas) y a 1028 cm-1 hasta
1104 cm-1, las bandas asignadas a modos de vibración complejos de polisacáridos, éster C-O o
vibraciones de ácido carboxilato (resultantes de células bacterianas para muestras en los días 7,
14 y 30) y estiramiento Si-O (para muestras en el inicio del experimento y el inicio de la pirita). Más
interesante, los picos en 741-797 aparecieron para el muestras después de interactuar con
bacterias (7, 14 y 30 días de incubación). Las bandas se atribuyen a óxidos de hierro como
resultado de la acción bacteriana en la oxidación de hierro y azufre, proporcionando así más
evidencia de la oxidación de pirita debido a la actividad bacteriana. Esto, obviamente, confirmó el
papel de ambas bacterias en servir como depresores de la bioflotación.

Imágenes y mas imagenes

Las cepas bacterianas producen EPS o biosurfactantes (materiales de superficie activa) que mejoran el
contacto entre las bacterias y pirita, mejorando así el cambio de las superficies de pirita. Además, las
capacidades de las bacterias para oxidar el hierro y el azufre también apoyó sus cambios como más hidrófilo o
hidrófobo. Basado en SEM-EDS y FTIR análisis, también es posible que el contacto directo entre las células y
la pirita también pueda crear microambientes (piritabacteria) complejos) donde las condiciones de pH
favorecen la producción bacteriana de EPS, la formación de la matriz de biopelícula y la formación de óxidos
e hidróxidos de hierro que pueden cambiar la química y las propiedades de las superficies de pirita.

Conclusion

El presente estudio revela que las bacterias Bacillus pumilus SKC-2 y Alicyclobacillus ferrooxidan
SKC/SAA2 fueron capaces de cambiar las propiedades químicas de la superficie de la pirita debido a la
producción de biosurfactantes, como lo demuestra su alta actividad superficial y frothability para pirita.
Debido a su capacidad de oxidar el hierro y el azufre, las bacterias también son aplicables para servir como
depresores. Se concluye que el uso de estas cepas es prometedor para el medio ambiente amistosos
biorreactores, siendo así aplicables para el desarrollo ecológico de la bioflotación de minerales de sulfuro.

Expresiones de gratitud

Este trabajo fue financiado por una subvención del Programa de Investigación e Innovación 2015, Instituto de
Investigación y Servicios comunitarios, Institut Teknologi Bandung, Indonesia.