Manual Analisis de Ensayo

PROYECTO:MEJORAMIENTO OPERATIVO DE LAGUNAS
CORTIJO Y COVICORTI
MODULO 5: MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE

ANALISIS DE AGUAS RESIDUALES
Versión N° 1.0
Trujillo, Febrero del 2000
SISTEMA 1 ¡Error!Vínculo TECNICO
TECNICO
no válido. TECNICO
TECNICO MTO C2
SUBSISTEMA 01
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO 7/7
CONTENIDO
N° DE PAG
1 Objetivo del análisis 2
2 Fundamento 2
3 Almacenamiento y preservación 2
4 Materiales y equipos 2
5 Reactivos 3
6 Procedimientos 4
7 Cálculos 6
8 Referencias 7
VISTOS VERSION FECHA

1 17/10/2017 19:55:00
TECNICO
no válido. TECNICO
TECNICO MTO C2
SUBSISTEMA 01
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
Método Winkler o Modificación de Azida
1. Objetivo del análisis
Determinar los requerimientos de oxígeno para una población microbiana

heterogénea y establecer la cantidad de materia orgánica biodegradable
presente en un agua residual y efluentes de aguas poluidas.
2. Fundamento
El ensayo de DBO5 consiste en determinar el oxígeno disuelto antes y después

de un periodo de incubación de cinco días, debido a que un porcentaje alto de
la DBO5 total se ejerce en 5 días a 20°C. Por lo tanto la DBO 5 representa una
medida indirecta de la concentración de materia orgánica e inorgánica que
puede ser degradada o transformada biológicamente.
Esta determinación tiene su mayor aplicación en la medición de la carga
orgánica de aguas residuales y en la evaluación de la eficiencia del tratamiento
de aguas residuales, puesto que las aguas residuales domésticas consisten
principalmente en excretas orgánicas que pueden ser utilizadas como
nutrientes por otros organismos. Estos organismos metabolizan los
compuestos orgánicos del agua servida a través de reacciones de oxidación y
consumen durante el proceso el oxígeno disuelto en el agua.
3. Almacenamiento y preservación
Para reducir el cambio en la DBO5 que ocurre entre el muestreo y la prueba,

mantener todas las muestras a menos de 4°C y empezar la incubación no más
de 6 horas después que la muestra ha sido colectada.
4. Materiales y Equipos
a) Frascos de incubación de DBO5 de 300 ml de capacidad con tapa de vidrio

y boca especial para sello de agua para prevenir la entrada de aire durante
la incubación.
b) Frascos de 1 litro de Polietileno.
c) Botellón de 20 litros de capacidad para el agua de dilución.
d) Bureta graduada de 50 ml
e) Matraces erlenmeyer de 500 ml
f) Frascos volumétricos de 201 ml (fiola)

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TECNICO
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TECNICO MTO C2
SUBSISTEMA 01
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
g) Pipetas graduadas de 5, 10 ml.
h) Frascos ámbar de 1L, para los reactivos preparados.
i) Equipo de filtración: Embudo de filtración, matraz Kitasato.
j) Bomba compresora
k) Filtros de fibra de vidrio
l) Incubadora regulada a 20°C  1 que excluya la luz para prevenir

crecimiento de algas.
5. Reactivos
a) Agua destilada
b) Solución Amortiguadora: Disolver 8.5 g de fosfato monopotásico, KH2PO4;

21.75 g de fosfato dipotásico, K2HPO4; 33.4 g de fosfato disódico
heptahidratado, Na2HPO4.7H2O y 1.7 g de cloruro de amonio, NH 4Cl; en
500 ml de agua destilada; diluir a un litro. El pH de esta solución debe ser
7.2 sin ajuste adicional.
c) Solución de sulfato de magnesio: Disolver 22.5 g de MgSO4.7H2O en un

litro de agua destilada.
d) Solución de cloruro de calcio: Disolver 27.5 g de CaCl 2 en un litro de

agua destilada.
e) Solución de cloruro férrico: Disolver 0.25 g de FeCl3. 6 H2O en agua

destilada y diluir a un litro.
f) Solución ácida y básica: 1N, para neutralizar la basicidad o acidez de las

aguas residuales.
g) Solución de sulfato de manganeso: Disolver 480 g de MnSO4.4H2O (400

g MnSO4.2H2O ó 364g MnSO4.H2O) en agua destilada, se filtra y se diluye
a 1 litro. La solución de sulfato manganoso no debe dar color cuando se le
adiciona a una solución acidificada de KI.
h) Solución de álcali, yoduro, nitruro: Se disuelven 500 g de NaOH y 135 g

de NaI en agua destilda y se diluye a 1 litro. Se adiciona 10 g de azida de
sodio disuelta en 40 ml de agua destilada. Esta solución no debe dar color
con la solución de almidón cuando está diluida y acidificada.
i) Acido sulfúrico concentrado: 1 ml es equivalente a 3 ml de solución

álcali, yoduro, nitruro.

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SUBSISTEMA 01
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
j) Solución de almidón: Se adiciona una suspensión de 5 g de almidón en

agua fría a 800 ml de agua destilada hirviendo con agitación, se diluye a un
litro y se deja sedimentar toda la noche. Se usa el sobrenadante y se
preserva con una gotas de tolueno.
k) Solución de tiosulfato de sodio 0.025 N: Disolver 6.205 g de

Na2S2O3.5H2O en agua destilada recientemente hervida fría y diluir a 1 litro.
Preservar añadiendo 5 ml de cloroformo.
l) Solución estándar de dicromato de potasio 0.025 N: Pesar 1.226 g de

K2Cr2O7, previamente secado a 103°C por 2 horas, y disolver en un litro de
agua destilada.
m) Estandarización del tiosulfato con dicromato de potasio: Se disuelven

aproximadamente 2 g de KI en un erlenmeyer con 100 ó 150 ml de agua
destilada. Se adiciona 1 ml de H2SO4 concentrado, luego 10 ml de solución
estándar de dicromato de potasio 0.025N; Se diluye a 200 ml. Se pone en
un lugar oscuro por 5 minutos y se diluye a aproximadamente 400 ml y se
titula con la solución de tiosulfato 0.025N.
n) Semilla: La finalidad de la semilla es introducir dentro de la muestra una

población biológicamente capaz de oxidar la materia en el agua residual.
Donde están presentes tales organismos como es en las aguas residuales
domésticas o efluentes no clorados y aguas superficiales, la semilla es
innecesaria.
6 Procedimiento
6.1 Preparación del agua de dilución
1) Medir el volumen de agua destilada necesaria para realizar el análisis de

DBO5 (10 a 20 L apróx.) en un frasco adecuado con una entrada de aire
de una fuente de aire comprimido para mantener el agua saturada de
oxígeno disuelto. La temperatura del agua debe ser de 20°C  1.
2) Adicionar 1ml de cada una de las siguientes soluciones por litro de agua
destilada:
a) Solución Amortiguadora.
b) Solución de sulfato de magnesio
c) Solución de cloruro de calcio.
d) Solución de cloruro férrico.
Mezclar vigorosamente.

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OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
6.2 Pretratamiento
Según el pH de las muestras neutralizar a aproximadamente 7 con

H2SO4 1N ó NaOH 1N. Las muestras que tienen cloro residual se deben
dejar en reposo por una o dos horas para que este elemento se disipe.
6.3 Técnica de dilución
Las diluciones que dan lugar a un contenido de oxígeno disuelto

residual de al menos 1 mg/L ó 2 mg/L después de 5 días de incubación,
producen los resultados más fiables.
Hacer varias diluciones de la muestra preparada para obtener un
contenido de oxígeno disuelto en dicho intervalo.
Un análisis más rápido, tal como la demanda química de oxígeno, DQO,
presenta una correlación aproximada con la DBO 5 y sirve como una
guía para seleccionar las diluciones. En ausencia de datos previos,
utilizar las siguientes diluciones:
a) 0.1 a 1 % para residuos industriales fuertes

b) 1 a 4 % para aguas residuales crudas
c) 4 a 20 % para efluentes tratados biológicamente
d) 20 a 100 % para aguas fluviales contaminadas
d
6.3.1 Las alícuotas tomadas de acuerdo al % de dilución son:
Muestra % dilución V. alícuota V. dilución

ml ml
Efluente Industrial
0.5 3.5 700
Desagüe Crudo
2 14 700
Efluente tratado
5 35 700
Aguas fluviales
contaminadas 30 210 700
6.3.2 En una probeta de 1 litro añadir agua de dilución hasta la mitad sin arrastre
de aire.
6.3.3 Añadir la cantidad apropiada de muestra y diluir hasta 700 ml con agua de
dilución.
6.3.4 Mezclar bien evitando la entrada burbujas de aire.

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SUBSISTEMA 01
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
6.3.5 Verter rápidamente la solución mezclada en dos frascos de DBO hasta rebosar
evitando la formación de burbujas de aire.
6.3.6 Tapar los frascos herméticamente usando sello de agua y tapas especiales
para evitar la evaporación del agua del sellado y se incuba una de estas
muestras por cinco días a 20°C y en la oscuridad.
6.4 Determinación de DBO soluble
6.4.1 La DBO soluble generalmente se realiza en muestras de efluentes para evitar

consumo de oxígeno que proporciona el contenido de algas en el agua.
6.4.2 Tomar una alícuota adecuada y filtrarla con filtro de fibra de vidrio.
6.4.3 Coger la solución de filtrado y añadir la cantidad apropiada de muestra filtrada a

la probeta de 1L, diluir hasta 700 ml con agua de dilución.
6.4.4 Mezclar bien y verter en los frascos de DBO hasta rebose evitando la formación
de burbujas de aire.
6.4.5 Tapar los frascos herméticamente usando sello de agua y tapas especiales
(capuchones), para evitar la evaporación del agua del sellado.
6.5 Determinación del contenido de oxígeno disuelto por el método Azida de

sodio (Winkler)
6.5.1 Realizar la medición del contenido de oxígeno en uno de los dos frascos
sembrados
6.5.2 Realizar un blanco de agua de dilución por duplicado, incubar uno de los
frascos por cinco días a 20°C, dejar el otro para determinar el OD1 por Winkler.
6.5.3 A una muestra de 300 ml contenida en una botella de DBO, se le adiciona 1ml
de solución de sulfato de manganeso seguido por 1 ml de solución de álcali,
yoduro - nitruro bajo la superficie del líquido. Se tapa cuidadosamente para
eliminar todas las burbujas de aire, se mezcla por inversión por lo menos 15
veces y se deja reposar.
6.5.4 Cuando el sedimento ha dejado una superficie sobrenadante clara sobre los
flocs de hidróxido de manganeso, se agita otra vez.
6.5.5 Después de por lo menos dos minutos de que ha sedimentado nuevamente y

ha quedado por lo menos 100 ml de sobrenadante transparente,
cuidadosamente se remueve la tapa e inmediatamente se agrega 1 ml de
H2SO4 concentrado, se deja correr por el cuello de la botella. Se tapa
nuevamente y se mezcla invirtiendo varias veces hasta que la disolución sea

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SUBSISTEMA 01
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
completa. Se distribuye el yodo uniformemente antes de retirar de la botella la
cantidad necesaria para la titulación.
6.5.6 Se toma un volumen de 201 ml en una fiola previamente calibrada a esta

medida y se vierte a un matraz erlenmeyer de 500 ml.
6.5.7 Se titula con solución de tiosulfato 0.025 N hasta alcanzar un color amarillo
pálido. Se adiciona 1 ml de solución de almidón y se continua la titulación
hasta la primera desaparición del color azul. No se toma en cuenta las
siguientes recoloraciones debido a efectos catalíticos de sustancias
interferentes.
7. Cálculos
DBO5 mg/L = (Gasto inicial * f – Gasto final * f ) x 100

%Dilución
f = factor del tiosulfato en el momento de la titulación.
8. Referencias
8.1 Standard Mehods for the examination of water and wasterwater, 19 th edition,
1995, 5-2 al 5-7.
8.2 Manual de análisis de aguas de Sunass 1998.

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SISTEMA Página 1 de 321 ¡Error!Vínculo TECNICO
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SUBSISTEMA 02
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO 6/5
CONTENIDO
N° DE PAG
1 Introducción 2
2 Interferencia 2
3 Rango y limite de detección 2
4 Equipos 3
5 Reactivos 3
6 Procedimientos 3
7 Cálculos 5
8 Referencias 5

1 17/10/2017 19:55:00
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SUBSISTEMA 02
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
Método de reflujo con dicromato
1. Introducción
La demanda química de oxígeno ( D.Q.O.) Se utiliza como una medida del

equivalente de oxígeno contenido en la materia orgánica de muestras
susceptibles a oxidación por un oxidante químico fuerte. Para las muestras de
una fuente especifica, el DQO puede relacionarse empíricamente con el DBO y
el carbono orgánico. La prueba es útil para monitorear y controlar después de
haber establecido la correlación.
Para determinar la DQO se prefiere el método del reflujo con dicromato a los
procedimientos que utilizan otros oxidantes debido a su mayor capacidad
oxidante, a su aplicabilidad, a su mayor variedad de muestras y a su fácil
manipulación.
2. Interferencias
Los compuestos alifáticos de cadena lineal volátiles no se oxidan de forma

preciable. Esto ocurre en parte porque los compuestos orgánicos volátiles
están presentes en forma de vapor y no entran en contacto con el líquido
oxidante. Los compuestos alifáticos de cadena lineal se oxidan con mayor
eficacia cuando se añade sulfato de plata (Ag2SO4 ) como catalizador. Sin
embargo el sulfato de plata reacciona con el cloro, el bromo y el yodo para
producir solo parcialmente precipitados oxidados. Las dificultades causadas por
la presencia de haluros pueden ser superadas en gran medida, aunque no del
todo, mediante la formación de un complejo con el sulfato de mercurio (HgSO 4)
antes del procedimiento de reflujo. No se debe utilizar esta prueba para
muestras que contengan más de 2000 mg de Cl- /L. Se dispone de técnicas
diseñadas para medir el DQO en aguas saladas.
El nitrito (NO2- ) ejerce un DQO de 1.1 mg O 2/ mg de NO2-- N. Ya que las

concentraciones de NO2- en el agua raramente exceden de 1 o 2 mg de NO 2- -
N/l, la interferencia se considera no significativa y suele ser ignorada. Para
eliminar una nterferencia significativa debido al NO 2- añadase 10 mg de ácido
sulfámico por cada mg de NO 2- - N presente en el volumen de muestra
utilizado.
Las sustancias inorgánicas como los iones ferroso (Fe ++2), sulfuros ( S--2 ),
sulfitos (SO3-- ), tiosulfatos ( Na2S2O3 -) se oxidan bajo ciertas condiciones y
crean un DQO inorgánica, la cual interfiere cuando se estima el contenido
orgánico del agua residual.
3. Rango y límite de detección
El rango de medición es de 10 a 500 mg O2/L. El límite de detección es de 3.50

mg O2/L.

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SUBSISTEMA 02
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
4. Equipos
a) Equipo de reflujo: consiste en un balón de 250 ml con cuello esmerilado

24/40 y condensadores de tipo Liebig. West o equivalente de chaqueta de
300 mm con cuello esmerilado 24/40.
b) Cocinilla eléctrica: que produzca por lo menos 1.4 W/cm2 de superficie de

calentamiento o equivalente para asegurar una ebullición adecuada en el
frasco de reflujo
5. Reactivos
a) Solución estándar de dicromato de potasio, 0.250 N : Se disuelven 12.259

g de K2Cr2O7, patrón primario, previamente secado a 103°C durante dos
horas, en agua destilada y se diluye a 1 litro en una fiola volumétrica.
b) Reactivo de ácido sulfúrico-Ag2SO4: Disolver 9.0 g de sulfato de plata

Ag2SO4 en 1 litro de ácido sulfúrico, disolver bien antes de enrasar.
c) Titulante de sulfato amónico ferroso, 0.1 N: Se disuelven 39 g de

Fe(NH4)2(SO4)2.6H20 en agua destilada. Se adicionan 20 ml de H 2SO4
concentrado, se enfría y diluye a 1 litro. Se estandariza esta solución
diariamente contra una solución estándar de dicromato de potasio.
d) Indicador ferroína: Se disuelven 1.485 g de 1.10-fenantrolina monohi

-dratada, junto con 695 mg FeSO4.7H2O en agua y se diluye a 100 ml.
e) Sulfato de mercurio, HgSO4 en cristales.
f) Estandarización: Se diluye 10.0 ml de solución estándar de K2Cr2O7 a

cerca de 100 ml. Se adicionan 30 ml de H2SO4 concentrado y se enfría. Se
titula con la solución de sulfato amónico ferroso, usando de 2 a 3 gotas
(0.10 a 0.15 ml) del indicador ferroína.
g) Ácido sulfámico: se requiere sólo si se va a eliminar interferencias de

nitritos.
6. Procedimiento
Tratamiento de muestras con valores de DQO sobre los 50 mg/L:
a) Se colocan varias perlas de vidrio dentro del balón de 250 ml
b) Se ponen 20 ml de muestra o una alícuota menor diluída a 20 ml en un

balón de reflujo de 250 ml.
c) Se adiciona 0.4 g de HgSO4, y 5 ml del reactivo de H2SO4-AgSO4.

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SUBSISTEMA 02
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
d) Se adiciona el reactivo H2SO4 muy lentamente para disolver el HgSO4. Se

enfría mientras se produce la mezcla para evitar posibles pérdidas de
materiales volátiles presentes en la muestra.
e) Se adiciona 10 ml de la solución de K2Cr2O7 0.250N y se mezcla otra vez.
f) Se adiciona el ácido remanente 25 ml, se continúa revolviendo la mezcla

mientras se adiciona el ácido, enfriar con chorro de agua fría.
g) Se coloca el condensador. Se asegura de que la mezcla ha sido completa

antes de aplicarle calor, porque podría ocurrir un calentamiento localizado
en la base del balón con proyección de la mezcla por el condensador.
Alternativamente, se usa volúmenes de muestra entre 10 ml y 50 ml, y los
volúmenes, pesos y normalidades de los reactivos se ajustan
convenientemente, según el siguiente cuadro:
Cuadro N° 1
CANTIDADES DE REACTIVO Y NORMALIDADES PARA DIFERENTES

CANTIDADES DE MUESTRA
Solución Volumen
Tamaño estándar H2SO4 Normalidad final
de la 0.25 N de con HgSO4 de antes de
muestra dicromato Ag2SO4 Fe(NH4)2(SO4)2 la
ml ml ml titulación
10.0 5.0 15 0.2 0.05 70
20.0 10.0 30 0.4 0.10 140
30.0 15.0 45 0.6 0.15 210
40.0 20.0 60 0.8 0.20 280
50.0 25.0 75 1.0 0.25 350
h) Para dar una máxima de DQO, la mezcla debe estar en reflujo durante dos
horas. Para muestras específicas de aguas residuales pueden emplearse
periodos más cortos.
i) Se cubre la parte abierta del condensador con un pequeño vaso para

prevenir la contaminación con materiales extraños a la muestra sometida a
reflujo, se enfría y lava la base del condensador con agua destilada. Se
diluye la mezcla con agua destilada a cerca del doble de su volumen, se
enfría a la temperatura del cuarto y se titula el exceso de dicromato con la
solución de sulfato amónico ferroso 0.1 N, usando 2 a 3 gotas del indicador
ferroína, cantidad que no es crítica pero que debe mantenerse constante.
Se toma como punto final el viraje del color verde - gris a rojo – marrón, aún
cuando el verde – gris puede reaparecer dentro de algunos minutos.

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TECNICO
no válido. TECNICO
TECNICO MTO C2
SUBSISTEMA 02
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
j) Se somete en la misma manera el blanco de reactivo que consiste de agua

destilada, en igual volumen que la muestra, junto con los reactivos usados
con la muestra.
Determinación de DQO con soluciones estándar
a) Evaluar la calidad de los reactivos con una solución estándar de glucosa o

biftalato de potasio.
b) Para la glucosa el DQO teórico es de 1.06701 gO 2/g y se prepara
disolviendo 425.1 mg de biftalato de potasio en agua destilada y diluyendo
a 1 litro para obtener 500 mg/L DQO.
c) El biftalato de potasio tiene un valor teórico de DQO de 1.176g O 2/g y se
prepara disolviendo 468.6 mg de glucosa en agua destilada y diluyendo a 1
litro para obtener 500 mg/L DQO. Para la solución de biftalato de potasio
se espera tener una recuperación de 98 a 100%.
7. Cálculos
mg/L DQO = ( B – M ) * f * N * 8000

ml de muestra
donde:
DQO = demanda química de dicromato

B = ml de Fe(NH4)2(SO4)2 usado para titular el blanco
M = ml de Fe(NH4)2(SO4)2 usado para titular la muestra
N = Normalidad de Fe(NH4)2(SO4)2 (0.10 N)
Para 20 ml de muestra:
mg/L DQO = ( B – M ) * f * 40
8. Referencias
8.1 Standard Methods for the examination of water and

wasterwater, 19 th edition, 1995,
8.2 Manual de análisis de aguas de Sunass 1ª Edición 1998.

1 17/10/2017 19:55:00
TECNICO
no válido. TECNICO
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SUBSISTEMA 02
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA

1 17/10/2017 19:55:00
TECNICO
no válido. TECNICO
TECNICO MTO C2
SUBSISTEMA 03
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
SOLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES 4/4
CONTENIDO
N° DE PAG
2 Interferencia 2
3 Rango de trabajo 2
4 Reactivos 2
5 Materiales 2
6 Equipos 2
7 Procedimientos 3
8 Cálculos 3
9 Referencias 4

1 17/10/2017 19:55:00
TECNICO
no válido. TECNICO
TECNICO MTO C2
SUBSISTEMA 03
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
Método gravimétrico
1 Objetivo del análisis
Determinar el contenido de sólidos suspendidos totales en aguas por el método

gravimétrico.
“Sólidos suspendidos totales”, es la porción de sólidos totales que queda
retenido por un filtro de fibra de vidrio, después de secar la muestra en estufa a
temperatura definida.
Sólidos suspendidos totales es la sumatoria de sólidos suspendidos volátiles y
los sólidos suspendidos fijos.
SST = SSV + SSF
2 Interferencias
Muestras altamente mineralizadas con un contenido alto de calcio, magnesio,

cloruros y/o sulfatos, pueden ser higroscópicas y exigir un secado prolongado,
un grado de desecación adecuado y una pesada rápida. Las muestras ricas en
bicarbonatos requieren un secado cuidadoso y probablemente prolongado a
105°C.
3 Rango de trabajo
Puesto que un residuo excesivo sobre el filtro puede formar una costra hidrófila,
el tamaño de muestra debe proporcionar un residuo no mayor que 200 mg.
4 Reactivos
a) Agua destilada
5 Materiales
a) Filtros de fibra de vidrio

b) Pipetas volumétrica de 50 ml
c) Probeta de 50 ml
d) Cápsula de porcelana 100 ml
e) Pinza
6 Equipos
a) Equipo de filtración
b) Estufa a T° = 103 – 105°C
c) Mufla a 550°C

1 17/10/2017 19:55:00
TECNICO
no válido. TECNICO
TECNICO MTO C2
SUBSISTEMA 03
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
d) Desecador, provisto de un desecante que contiene un indicador de
color para concentración de humedad.
e) Bomba de vacío
f) Balanza
7 Procedimiento
7.1 Sólidos suspendidos totales secados a 105°C (SST)
7.2 Preparación del filtro de fibra de vidrio: El filtro de fibra de vidrio se lleva a
calentar a 550°C  2°C por una hora. Dejar enfriar en un desecador por
una hora y pesar, anotar el peso (A).
7.3 Selección del tamaño de muestra: escoger el volumen de muestra que

pueda pasar por el filtro sin romperlo, apróx. 50 ml. Si se requiere más
de 10 minutos para realizar el filtrado, disminuir el volumen de muestra.
7.4 Transferir el filtro dentro de una porcelana, llevar a secar a 103-105°C por
espacio de 1 hora, luego enfriar en un desecador por 30 minutos,
finalmente pesar en balanza analítica hasta obtener peso constante,
anotar (B).
7.5 Transferir el filtro cuidadosamente dentro de la porcelana y llevarlo a la

Mufla a 550 °C por 1 hora, apagar la mufla y dejar enfriar hasta 200-
300°C, luego transferir a un desecador y dejar enfriar por una hora,
luego pesar, anotar (C).
8 Cálculos
8.1 Sólidos suspendidos totales (SST)
mg/L Sólidos suspendidos totales (SST) = ( B – A ) x 1000

Vol de muestra (ml)
Donde:
A = Peso del filtro
B = Peso de residuo seco más filtro.
8.2 Sólidos suspendidos fijos (SSF)
mg/L Sólidos suspendidos fijos (SSF) = ( C – A ) x 1000

Vol de muestra (ml)
Donde:
A = Peso del filtro

C = Peso de residuo calcinado más filtro.

1 17/10/2017 19:55:00
TECNICO
no válido. TECNICO
TECNICO MTO C2
SUBSISTEMA 03
OPERACIONES
PROCEDIMIENTO HOJA
8.3 Sólidos suspendidos volátiles (SSV)
mg/L Sólidos suspendidos volátiles (SSV) = SST – SSF
9 Referencias
9.1 Total disolved solids dried at 103°C, Standard Methods for the
examination and wasterwater, 18 th edition 1992, 2-55, 2-56.

1 17/10/2017 19:55:00
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SISTEMA ¡Error!Vínculo no válido. TECNICO
TECNICO
TECNICO
SUBSISTEMA
MTO C2
OPERACIONES 04
PROCEDIMIENTO HOJA
ACEITES Y GRASAS 3/3
CONTENIDO
N° DE PAG
2 Interferencia 2
3 Reactivos 2
4 Materiales 2
5 Equipos 2
6 Procedimientos 3
7 Cálculos 3
8 Referencias 3

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TECNICO
TECNICO
SUBSISTEMA
MTO C2
OPERACIONES 04
PROCEDIMIENTO HOJA
Método de extracción con solvente
1 Objetivo del análisis
Determinar el contenido de aceites y grasas en muestras de aguas por el

método de extracción con solvente.
Aceite y grasa es cualquier material recuperado como sustancia soluble en
solvente hexano.
Ciertos componenetes medidos por análisis de aceite y grasa pueden influir en
los sistemas de tratamiento de las aguas residuales. Si se presentan en
cantidades excesivas, pueden interferir en los procesos biológicos arobios y
anaerobios y llevar a reducir la eficiencia del tratamiento de las aguas
residuales.
2 Interferencias
El hexano no sólo tiene la capacidad de disolver aceite y grasa sino también

otras sustancias orgánicas. Ningún disolvente conocido disolverá de forma
selectiva sólo aceite y grasa. La eliminación del disolvente tiene como resultado
la pérdida de los hidrocarburos de cadena corta y aromáticos sencillos por
volatilización.
3 Reactivos
a) Ácido clorhídrico, HCl, 1+1.

b) Hexano
c) Sulfato de sodio, Na2SO4, cristal anhidro.
4 Materiales
a) Embudo de separación: 1L con llave de paso de TFE.

b) Papel de filtro Whatman o similar
c) Dedal de extracción:Papel
d) Balón de 250 mal de boca esmerilada
e) Probeta de 50 ml
f) Embudo de vidrio
g) Pinza
5 Equipos
a) Aparato de extracción Soxhlet

b) Funda de calentamiento eléctrico o cocinilla.
c) Estufa
d) Balanza analítica

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OPERACIONES 04
PROCEDIMIENTO HOJA
6 Procedimiento
6.1 Recoger aprox. 1L de muestra de agua en una botella, marcar el nivel

de la muestra en la botella para determinar el volumen exacto.
6.2 Acidificar hasta pH 2 ó inferior, en general 5 ml de HCl es suficiente.
6.3 Transferir a un embudo de separación y agregar con cuidado 30 ml de
hexano.
6.4 Agitar vigorosamente durante 2 minutos. Sin embargo si se sospecha
que se formará una emulsión estable agitar con suavidad durante 5 a 10
minutos.
6.5 Dejar que se separen las fases.
6.6 Abrir la llave de paso y eliminar la fase acuosa, luego
6.7 Drenar la capa de disolvente a través del embudo que contiene papel de
filtro humedecido con el disolvente en un balón limpio y previamente
pesado (P1).
6.8 Si no es posible obtener una capa clara de disolvente añadir 1 g de
Na2SO4 al cono de papel de filtro y drenar lentamente el disolvente
emulsionado sobre los cristales. Añadir más Na2SO4 si es necesario.
6.9 Coger con una pinza el papel de filtro y ponerlo en una luna de reloj,
añadir todos los papeles de filtro utilizados recogiendo todo el material
sólido.
6.10 Enrollar todo el papel de filtro que contenga muestra y ponerlo dentro de
un dedal de extracción , añadiendo cualquier resto de material que
quede en la luna de reloj.
6.11 Poner a secar el dedal lleno en estufa a 103ºC durante 30 minutos,
luego colocarlo dentro del Soxhlet y extraer el aceite y la grasa,
utilizando hexano a una velocidad de 20 ciclos / hora durante 4 horas.
6.12 Regular el tiempo desde el primer ciclo.
6.13 Recuperar el disolvente y evaporar en baño María la mínima cantidad
posible. (Si se tiene equipo de destilación destilar el disolvente del balón
de extracción en un baño de agua a 70ºC durante 15 minutos).
6.14 Llevar a secar el balón de extracción a 103ºC por 1 hora, luego enfriar
en un desecador por 30 minutos
6.15 Finalmente pesar el balón en balanza analítica y anotar (P2).
7 Cálculos
mg/L Aceites y Grasas = ( P2 – P1) x 1000

V (L)
8 Referencias
8.1 Métodos Normalizados para el análisis de aguas potables y residuales.

Ediciones Díaz de Santos, S.A. 1992

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OPERACIONES 05
PROCEDIMIENTO HOJA
DETERMINACION DE CROMO 4/4
CONTENIDO
N° DE PAG
1 Objetivo y principios del análisis 1
2 Interferencia 1
3 Rango de trabajo y limite de deteccion 1
4 Reactivos 1
5 Materiales 2
6 Equipos 2
7 Toma de muestra 2
8 Preparacion de estandares 2
9 Procedimiento - digestion 3
10 Medicion 3
11 Calculos 4
12 Referencias 4

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MTO C2
OPERACIONES 05
PROCEDIMIENTO HOJA
DETERMINACIÓN DE CROMO
1 Objetivo y principio del análisis
Determinar la concentración de los metales presentes en una fracción de

muestra previamente digerida, usando el espectrofotómetro. La muestra es
colocada en una celda para ser medida a una determinada longitud de onda
por el equipo, el elemento analizado absorbe una cantidad de energía en forma
proporcional a su concentración.
3 Rango de trabajo y límite de detección

El rango de trabajo es de 0 hasta 0.6 y de 0.5 hasta 5 mg Cr/L, dependiendo
del método de trabajo escogido.
4 Reactivos
a) Estándar Patrón de Cromo: disolver 0.1414 g de K 2Cr2O2 en agua

bidestilada y diluir a 1000 ml, 1 ml = 50 µg Cr.
b) Ácido nítrico, HNO3, concentrado libre de metales ó con trazas
mínimas del elemento a analizar, para la preparación de estándares.
c) Agua bidestilada ó ultrapura libre de metales
5 Materiales
a) Fiolas de 100 ml, clase A

b) Fiola de 1000 ml, clase A
c) Pipetas de 2, 5, 10, 20 y 100 ml, clase A.
d) Vasos de 250 ml
e) Luna de reloj
f) Probeta 100 ml
6 Equipos
a) Espectrofotómetro Hach modelo DR 2000

b) Plancha de calentamiento
c) Campana con sistema de extracción de gases
d) Balanza analítica
7 Toma de muestra y transporte
Para la determinación de metales en muestras de agua, la muestra debe ser

recolectada en envase de vidrio neutro o polietileno de alta densidad y
acidificada con 2 ml de HNO3 por litro de muestra hasta pH < 2. Las muestras
deben ser enviadas refrigeradas al laboratorio. Volumen mínimo de muestra
500 ml.
8 Preparación de estándares

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OPERACIONES 05
PROCEDIMIENTO HOJA
8.1 Estándar patrón de 5 mg/L: Medir 10 ml del estándar Patrón, adicionar 1

ml de HNO3 concentrado para análisis de metales y diluir a 100 ml con
agua bidestilada. Tiene una duración de 3 meses. Conservar en frascos
de polietileno de alta densidad debidamente etiquetados. Indicar la
fecha de preparación, la concentración, el medio final y la fecha de
duración.
8.2 Estándar de 0.5 mg/L: Medir 10 ml del estándar patrón de 5 mg/L,

adicionar 1 ml de HNO3 concentrado ultrapuro y diluir a 100 ml con
agua bidestilada. Tiene una duración de 1 mes, Conservar en frascos de
polietileno de alta densidad debidamente etiquetados. Indicar la fecha
de preparación, la concentración, el medio final y la fecha de duración.
8.3 Estándares de calibración: Medir 1ml, 2 ml y 5 ml del estándar de 500

mg/L, transferir a fiolas de 50 ml y enrasar con agua bidestilada para
obtener concentraciones de 1.0mg/L, 2.0 mg/L y 5.0 mg/L
respectivamente. Tiene una duración de 1 mes, Almacenar en envases
de polietileno de alta densidad debidamente etiquetados. Indicar la
fecha de preparación, la concentración, el medio final y la fecha de
duración. Prepara un blanco de calibración con agua ultrapura.
8.4 Blanco de calibración: Tomar un volumen de agua bidestilada y

proceder igual que los estándares
9 Procedimiento - Digestión
9.1 Medir 100 ó 200 ml de muestra con pipeta volumétrica y llevar a un vaso
de 250 ml, agregar 3 ml de HNO3 para análisis de trazas, cubrir el vaso
con una luna de reloj. Llevar a una plancha caliente para su
evaporación. La evaporación debe ser ajustada a una temperatura de
85°C, colocar en el centro de la plancha un vaso con 100 ml de agua
para controlar la temperatura que no debe de exceder de 85 °C, (una
vez que el vaso es cubierto con la luna de reloj la temperatura del agua
puede subir hasta apróximadamente 95 °C).
9.2 Dejar reducir el volumen de la alícuota hasta 20 ml, a temperatura

moderada de 85°C. No llevar a ebullición. Este paso demora
apróximadamente 2 hr. (un vaso disponible con 20 ml de agua puede
ser usado como guía de medida). Dejar cubierto con la luna de reloj
para evitar que se siga evaporando la muestra y mantenerla a reflujo
suave por 30 minutos más para completar la digestión, evitar que llegue
a sequedad.
9.3 Dejar enfriar y lavar bien las paredes del vaso, con varias porciones de
agua bidestilada. Filtrar si es necesario con papel de filtro (Whatman 41
ó similar) transferir el filtrado cuantitativamente a una fiola de 100 ml y

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OPERACIONES 05
PROCEDIMIENTO HOJA
completar hasta la marca con agua bidestilada, mezclar agitando

vigorosamente.
9.4 Preparar un blanco reactivo usando agua bidestilada, siguiendo el

mismo procedimiento que las muestras.
9.5 Preparar un blanco fortificado por duplicado: SpX, SpY; usar un blanco
reactivo y adicionarle una concentración conocida del analito, luego
analizar como una muestra.
9.6 Agregar a la muestra el reactivo cromover y esperar el tiempo de

reacción antes de medir.
10 Medición
10.1 Prender el espectrofotómetro Hach DR 2000, colocar el número del

método del elemento a analizar, llevar a la longitud de onda señalada,
dar el tiempo de reacción del reactivo con la muestra dentro de la celda
y medir.
10.2 Medir un blanco antes de cada muestra.
10.3 Medir cada muestra luego de cumplir inmediatamente el tiempo de

reacción.
11 Cálculos
La concentración del elemento en la muestra se determina por medio de la

siguiente ecuación y se expresa en mg/L.
Concentración (mg/L) = Vf x lectura

Vm
12 Referencias
12.1 Methods for the Determination of Metal in Environmental Samples.

United States Environmental Protectión Agency, EPA. 1994
12.2 Procedimientos de Análisis de Agua de Sunass, Vol – 2. 1998.

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MTO C2
OPERACIONES 06
PROCEDIMIENTO HOJA
DETERMINACION DE COLIFORMES TERMOTOLERANTES 4/4
CONTENIDO
N° DE PAG
1 Objetivo y principios del análisis 2
2 Equipos 2
3 Materiales 2
4 Reactivos 2
5 Procedimiento 3
6 Referencias 4

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OPERACIONES 06
PROCEDIMIENTO HOJA
Método por Tubos Multiples (NMP)
1 Objetivo y principios del análisis
Determinar el NMP de bacterias coliformes presentes en una muestras de

agua.
El grupo coliforme está formado por todas las bacterias aerobias y anaerobias
facultativas gramnegativas no formadoras de esporas y con forma de bastón
que fermenta la lactosa, produciendo gas y ácido en 24 y/ó 48 horas a 35ºC.
Debido a su elevada calidad nutritiva y al tampón de fosfatos que contiene el

laurilsulfato este medio garantiza el rápido crecimiento y la intensa formación
de gas, incluso en el caso de Coliformes que fermenten lentamente la lactosa.
2 Equipos
a) Autoclave
b) Baño María
c) Estufa
d) Balanza
3 Materiales
a) Tubos de ensayo con capuchón de polietileno

b) Campanas de Durham
c) Gradilla
d) Balón de 1L
e) Vaso de 200 ml
4 Reactivos
a) Agua de dilución, Agregar 1.25 ml de solución A y 5.0 ml de solución B

en 1000 ml de agua destilada, distribuir 90 ml del agua en frascos de dilución y
esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presión (121ºC).
b) Solución A: Disolver 34.0 g de fosfato monopotásico (KH2PO4) en 500

ml de agua destilada, ajustar a pH 7.2  0.1, y completar a 1000 ml.
c) Solución B: Disolver 81.1 g de Cloruro de magnesio (MgCl 2.6H2O) en

1000 ml de agua destilada. Conservar en refrigeración.
e) Caldo Laurilsulfato: Disolver 35.5 g de caldo laurilsulfato en un litro de

agua destilada, distribuir en tubos de ensayo provistos de campanas de
DURHAM y esterilizar en autoclave (15 min. a 121ºC).
f) Caldo lactosado Verde brillante-bilis (BRILA broth)

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MTO C2
OPERACIONES 06
PROCEDIMIENTO HOJA
Disolver 40 g de caldo Brila en 1000 ml de agua destilada, distribuir en

tubos de nsayo provisto de campanas de DURHAM y esterilizar en
autoclave (15 min. a 121ºC).
g) Caldo EC: Disolver 37 g de caldo EC en 1000 ml de agua destilada,

distribuir en tubos de ensayo provisto de campanas de DURHAM y
esterilizar en autoclave (15 min. a 121ºC).
5 Procedimiento
Prueba Presuntiva
5.1 Agrupar los tubos de fermentación en hileras de cinco en una gradilla

para tubos de ensayo.
5.2 Seleccionar el rango de dilución de la muestra, según la carga

contaminante. Se sugiere entre 10-4 – 10-7, con cinco tubos por serie
para aguas residuales crudas. Para vigilar la remoción bacteriana en
lagunas primarias se sugiere 10-3 – 10-6 y en lagunas secundarias 10-2 a
10-5.
5.3 Tomar 10 ml de muestra y vertir en 90 ml de agua de dilución, seguir

hasta las diluciones seleccionadas.
5.4 Sembrar 1 ml de cada una de las diluciones seleccionadas en los tubos

de ensayo que contienen 10 ml del caldo lauril sulfato triptosa (LST), la
siembra se realizara en serie de 5 tubos.
5.5 Incubar a 35 – 37ºC, durante 24 –48 horas.
5.6 Realizar la primera lectura de la prueba a las 24 horas, la producción de

gas en los tubos y la turbiedad se toma como resultado positivo. Los
tubos negativos deberán ser incubados 24 horas adicionales.
Prueba confirmativa para Coliformes totales
5.7 Elegir 3 series de diluciones consecutivas que incluya la serie que tenga
el mayor número de tubos positivos y la serie de las dos diluciones
subsiguientes.
5.8 confirmar en caldo Verde brillante-bilis lactosa (BRILA), sembrar un
inóculo de cada tubo positivo de las tres series seleccionadas en igual
número de tubos de Brila, realizar la inoculacioón con asa de siembra,
(5 asadas).
5.9 Incubar a 35-37ºC durante 24-48 horas.
5.10 Realizar la primera lectura a las 24 horas, tomar como positivos en los
cuales se observa la producción de gas y turbiedad. Los tubos negativos
deberán ser incubados por 24 horas adicionales.

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MTO C2
OPERACIONES 06
PROCEDIMIENTO HOJA
5.11 Anotar el número de tubos confirmados como positivos.
5.12 Leer en la tabla de NMP.
5.13 Expresar el resultado como NMP/100ml.
Prueba confirmativa para Coliformes Termotolerantes
5.14 seleccionar 3 series de tubos positivos de la prueba presuntiva (Caldo

lauril sulfato triptosa), siguiendo el mismo criterio de selección que se
usó para la prueba confirmativa de coliformes totales.
5.15 Confirmar en caldo EC, media para Escherichia coli , sembrar un inóculo
de cada tubo positivo de las tres series seleccionadas en igual número
de tubos de caldo EC.
5.16 Incubar en baño María a 44.5ºC durante 24-48 horas.
5.17 Realizar la primera lectura a las 24 horas, considerar como positivos los
tubos donde se observe producción de gas dentro de las campanas
DURHAM, los tubos negativos dejarlos 24 horas adicionales.
5.18 Anotar el número de tubos confirmados como positivos, leer en la tabla

del NMP.
5.19 Expresar los resultados en NMP/100ml.
6 Referencias
Métodos Normalizados para el análisis de aguas potables y residuales ; APHA,

AWWA, Ediciones Diaz Santos, S.A. 1992.

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Manual Analisis de Ensayo

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PROYECTO:MEJORAMIENTO OPERATIVO DE LAGUNAS

MODULO 5: MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE

1 Objetivo del análisis 2

VISTOS VERSION FECHA

Método Winkler o Modificación de Azida

1. Objetivo del análisis

Determinar los requerimientos de oxígeno para una población microbiana

El ensayo de DBO5 consiste en determinar el oxígeno disuelto antes y después

Para reducir el cambio en la DBO5 que ocurre entre el muestreo y la prueba,

a) Frascos de incubación de DBO5 de 300 ml de capacidad con tapa de vidrio

b) Frascos de 1 litro de Polietileno.

c) Botellón de 20 litros de capacidad para el agua de dilución.

e) Matraces erlenmeyer de 500 ml

f) Frascos volumétricos de 201 ml (fiola)

VISTOS VERSION FECHA

h) Frascos ámbar de 1L, para los reactivos preparados.

i) Equipo de filtración: Embudo de filtración, matraz Kitasato.

k) Filtros de fibra de vidrio

l) Incubadora regulada a 20°C  1 que excluya la luz para prevenir

b) Solución Amortiguadora: Disolver 8.5 g de fosfato monopotásico, KH2PO4;

c) Solución de sulfato de magnesio: Disolver 22.5 g de MgSO4.7H2O en un

d) Solución de cloruro de calcio: Disolver 27.5 g de CaCl 2 en un litro de

e) Solución de cloruro férrico: Disolver 0.25 g de FeCl3. 6 H2O en agua

f) Solución ácida y básica: 1N, para neutralizar la basicidad o acidez de las

g) Solución de sulfato de manganeso: Disolver 480 g de MnSO4.4H2O (400

h) Solución de álcali, yoduro, nitruro: Se disuelven 500 g de NaOH y 135 g

i) Acido sulfúrico concentrado: 1 ml es equivalente a 3 ml de solución

VISTOS VERSION FECHA

j) Solución de almidón: Se adiciona una suspensión de 5 g de almidón en

k) Solución de tiosulfato de sodio 0.025 N: Disolver 6.205 g de

l) Solución estándar de dicromato de potasio 0.025 N: Pesar 1.226 g de

m) Estandarización del tiosulfato con dicromato de potasio: Se disuelven

n) Semilla: La finalidad de la semilla es introducir dentro de la muestra una

6.1 Preparación del agua de dilución

1) Medir el volumen de agua destilada necesaria para realizar el análisis de

VISTOS VERSION FECHA

Según el pH de las muestras neutralizar a aproximadamente 7 con

6.3 Técnica de dilución

Las diluciones que dan lugar a un contenido de oxígeno disuelto

a) 0.1 a 1 % para residuos industriales fuertes

6.3.1 Las alícuotas tomadas de acuerdo al % de dilución son:

Muestra % dilución V. alícuota V. dilución

6.3.4 Mezclar bien evitando la entrada burbujas de aire.

VISTOS VERSION FECHA

6.4 Determinación de DBO soluble

6.4.1 La DBO soluble generalmente se realiza en muestras de efluentes para evitar

6.4.3 Coger la solución de filtrado y añadir la cantidad apropiada de muestra filtrada a

6.5 Determinación del contenido de oxígeno disuelto por el método Azida de

6.5.5 Después de por lo menos dos minutos de que ha sedimentado nuevamente y

VISTOS VERSION FECHA

6.5.6 Se toma un volumen de 201 ml en una fiola previamente calibrada a esta

DBO5 mg/L = (Gasto inicial * f – Gasto final * f ) x 100

f = factor del tiosulfato en el momento de la titulación.

8.2 Manual de análisis de aguas de Sunass 1998.

VISTOS VERSION FECHA

3 Rango y limite de detección 2

VISTOS VERSION FECHA

Método de reflujo con dicromato

La demanda química de oxígeno ( D.Q.O.) Se utiliza como una medida del

Los compuestos alifáticos de cadena lineal volátiles no se oxidan de forma

El nitrito (NO2- ) ejerce un DQO de 1.1 mg O 2/ mg de NO2-- N. Ya que las

3. Rango y límite de detección

El rango de medición es de 10 a 500 mg O2/L. El límite de detección es de 3.50