MANEJO DE INSTRUMENTOS ANALÍTICOS

MANEJO DEL REFRACTOMETRO AUTOMÁTICO

I.-OBJETIVOS

 Adquirir soltura en el manejo de instrumentos analíticos usados para medir la

radiación electromagnética, para su posterior aplicación a la determinación de
muestras problema.
 Determinar la longitud de onda a la cual la muestra o estándar posee un máximo de
absorción de radiación electromagnética.
 Graficar los valores obtenidos de absorbancia versus longitud de onda (nm).

II.-FUNDAMENTO TEORICO
La espectrofotometría comprende una serie de técnicas analíticas usadas para análisis
Cualitativo y cuantitativo. Una radiación electromagnética se puede describir como un flujo
de partículas llamadas fotones, o bien como una onda propagándose en el espacio. De esta
última descripción se toma el concepto de longitud de onda, definiéndolo como la distancia
entre dos máximos consecutivos de la onda. Esta es inversamente proporcional a la energía
de la misma, de tal manera que el espectro de radiaciones electromagnéticas abarca un
amplio rango de energías, las de menor energía son las ondas de radio y las de mayor
energía son las llamadas radiación gamma.

Todos los instrumentos analíticos utilizados en laboratorio para medir la radiación

electromagnética son de cuatro tipos básicos:
 Has simple, lectura directa
 Has simple, de compensación
 Doble has, lectura directa
 Doble has de compensación
Instrumento de has simple frente a has doble: en los primeros la radiación previamente de
la fuente solo pasa a través de una disolución, mientras que en los de doble has pasa a
través de la disolución que contiene la muestra al mismo tiempo que otro has pasa a través
de un blanco que nos da una señal de referencia.

Instrumentos de lectura directa frente a los de compensación: un instrumento de lectura

directa usa un medidor para leer absorbancia o transmitancia. Un instrumento de
compensación usa en la etapa de medida, un dispositivo de compensación que permite
comparar la señal a medir con una señal de referencia, este método es más exacto que el de
lectura de directa.

Los instrumentos comerciales adecuados para medir absorbancia o porcentaje de

transmitancia en las regiones UV_VIS pueden dividirse en:
Fotómetros o fotocolorímetros de filtro.
Espectrofotómetros manuales.
Espectrofotómetro con registro automático.

El barrido espectral es la búsqueda de la longitud de onda a la cual el analito o estándar

presenta su máxima absorción de la REM.
En la práctica se presenta el % T o A en función a la longitud de onda, manteniéndose
constante la concentración del analito y el espesor del medio absorbente. Así de acuerdo al
dato de la ordenada estas graficas obtenidas en laboratorio son consecuencia de un barrido
espectral realizado de acuerdo a la región a utilizar.
La ley de Lambert-Beer es la base del análisis cuantitativo ya que muestra que la
absorbancia es directamente proporcional a la concentración de un determinado analito.
Para aplicar esta ley es necesario seleccionar la longitud de onda óptima, y por esta razón se
realiza el barrido espectral.
III.-REACTIVOS
 Solución de dicromato de potasio al 0,01 M.
 Solución de permanganato de potasio al 0,01 M.
 Alcohol etílico al 96%.
 Alcohol etílico al 30 %.
 Agua destilada.

IV.-MATERIALES
 Vasos de precipitado de 250 ml.
 Matraces volumétricos de 10 ml.
 Pipetas graduadas de 1 y 5 ml.
 Espectrofotómetro con registro automático.

V.-PROCEDIMIENTO
Se prepara una solución de permanganato de potasio u otra de dicromato de potasio según
defina el instructor (K2Cr2O7 0.0003 M y KMnO4 0.0003 M).
Se dispone de tres cubetas que pertenecen al equipo una para el blanco que será agua
destilada, las otras dos son para las diluciones a analizar cuidando de no empañar las
paredes con huellas digitales por lo cual deba agarrarse por la zona esmerilada, se las
coloca las tres cubetas en el equipo en posición de medida una después de la otra.
Ajustar 100 % T o 0 % A con el Blanco (agua destilada) a cada longitud de onda con la
que se trabajara. Reemplazar el blanco por las muestras y leer absorbancias.
Seleccionar una nueva longitud de onda y repetir las operaciones.
Graficar Absorbancia vs longitud de onda y seleccionar aquella donde la A sea máxima. se
leerá la correspondiente absorbancia a diferentes longitudes de onda (Barrido espectral).con
el blanco el espectrofotómetro deberá medir cero de absorbancia para iniciar las mediciones
para así obtener el espectro de absorción para ambas soluciones y obtener el rango de
longitud de onda de 340 a 790 nm realizando las lecturas en incrementos de 50 nm.
VI.-DATOS DE LA PRÁCTICA
DATOS OBTENIDOS DE LAS MEDICIONES EN EL ESPECTROFOTOMETRO

K2Cr2O7 KMnO4

ƛ(nm) A ƛ(nm) A
340 0,277 340 0,851
390 0,061 390 0,401
440 0,029 440 0,131
490 0,243 490 0,038
540 0,479 540 0,001
590 0,063 590 0
640 0,035 640 0
690 0,014 690 0
740 0,004 740 0
790 0,002 790 0

VII.-CALCULOS

a) Preparación de una solución de dicromato de potasio al 0,0003 M a partir de una

solución al 0,01 M
𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2
𝐶2∗𝑉2
V1= 𝐶1
0.0003 𝑚𝑜𝑙/𝐿∗10 𝑚𝑙
V1= 0.01 𝑚𝑜𝑙/𝐿
0.0003 𝑚𝑜𝑙/𝐿∗10 𝑚𝑙
V1= 0.01 𝑚𝑜𝑙/𝐿
V1= 0.1 ml
Para preparar una solución de dicromato de potasio al 0.0003M hemos de medir 0.1 ml de
una solución del mismo a 0.01 M de concentración con una pipeta y trasvasamos el
contenido a un matraz aforado de 100 ml y finalmente enrazar con agua destilada hasta
aforo.

b) Preparación de una solución de permanganato de potasio al 0,0003 M a partir de

una solución al 0,01 M.
𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2
𝐶2∗𝑉2
V1= 𝐶1
0.0003 𝑚𝑜𝑙/𝐿∗10 𝑚𝑙
V1= 0.01 𝑚𝑜𝑙/𝐿
0.0003 𝑚𝑜𝑙/𝐿∗10 𝑚𝑙
V1= 0.01 𝑚𝑜𝑙/𝐿
V1= 0.1 ml

Para preparar una solución de permanganato de potasio al 0.0003M hemos de medir

0.1 ml de una solución del mismo a 0.01 M de concentración con una pipeta y trasvasamos
el contenido a un matraz aforado de 100 ml y finalmente enrazar con agua destilada hasta
aforo.

VIII.-RESULTADOS Y CONCLUSIONES

GRÁFICA DEL KMnO4

1
0.9
0.8
Absorbancia (A)

0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
340 390 440 490 540 590 640 690 740 790
LONGITUD DE ONDA

Series1
Linea de Absorción
 GRAFICA DEL K2Cr2O7
1
0.9
0.8
Absorbancia (A)

0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
290 340 390 440 490 540 590 640 690 740 790
LONGITUD DE ONDA

Series1
Linea de Absorción

Se realizó las medición de absorbancia a diferentes longitudes de onda, para nuestros dos
analitos KMnO4 y K2Cr2O7 de concentración 0.0003 M en el espectrofotómetro
UV-VIS (Ultravioleta-Visible), se tomaron 10 mediciones de cada compuesto.

Para el KMnO4 el valor más alto de absorbancia fue de 0,479 A a 540 nm, la experiencia
puede simplificarse si se tiene en cuenta la regla de que una solución posee el color
complementario de la radiación que absorbe, esto cuando se trabaja en la región visible.
Los colores complementarios son útiles para predecir la longitud de onda de absorción de
los compuestos coloreados. Tal es el caso para el KMnO4 una solución purpura (Tenue)
absorberá luz Verde aproximadamente a 500-560 nm. Afirmativamente el máximo de
absorción se dió en ese rango de longitud de onda.

Para el K2Cr2O7 la absorbancia máxima se da a una longitud de onda 340 nm, siendo
0.851 A.
Concluimos afirmando que la curva espectral de cualquier solución permite decidir la zona
espectral más adecuada para el trabajo cuantitativo ya que se puede obtener la λ óptima de
trabajo.
 MANEJO DEL REFRACTÓMETRO

I.-OBJETIVOS
Adquirir destrezas en el manejo del refractómetro de Abbe.

II.-FUNDAMENTO TEORICO
REFRACTOMETRIA

Generalidades: Cuando la radiación atraviesa un medio transparente, se produce acción

recíproca entre el campo eléctrico de la radiación y los electrones de enlace de la materia,
como consecuencia la velocidad de propagación del haz es menor que en el vacío. La
radiación se refracta cuando al incidir de un medio a otro en forma no perpendicular, se
desvía de su dirección y cambia su velocidad. En forma experimental, se observa un
cambio brusco en la dirección, cuando la radiación incide con un ángulo en la interfase
entre dos medios transparentes que tienen densidades diferentes; fenómeno conocido como
refracción el cual es el fundamento de la técnica analítica refractométrica.

Refracción: La radiación se refracta cuando al incidir de un medio a otro en forma no

perpendicular, se desvía de su dirección y cambia su velocidad. En forma experimental, se
observa un cambio brusco en la dirección, cuando la radiación incide con un ángulo en la
interfase entre dos medios transparentes que tienen densidades diferentes.

El índice de refracción: que se simboliza por la letra (n) es igual a la relación de la

velocidad de la radiación en el vacío (V vacío), con relación a la velocidad de la radiación
en el medio i, (Vi ) valor que es constante a una longitud de onda (l) y a una temperatura
dada, cuando el medio es un gas la presión debe ser también constante. n= Vvacío / Vi ;
Cuando el medio es el vacío todas las radiaciones se propagan con igual velocidad, dicha
velocidad se simboliza por la letra ( C ), conocida como la constante de la velocidad de la
luz = 2.9979 X 1010 cm s-1 aproximadamente igual a 3 X 1010 cms-1; por lo tanto
n= C / Vi. Relación conocida también como constante de refracción.
El índice de refracción (n) no tiene unidades, por ser una relación de velocidades las
unidades se cancelan, es igual o mayor que la unidad, es difícil encontrar una sustancia
donde la radiación tenga una velocidad mayor que en el vacío para que éste fuera menor
que la unidad. El índice de refracción varia para muchos líquidos entre 1.3 y 1.8 y en
sólidos entre 1.3 y 2.5; en conjunto con La densidad, el punto de fusión y el punto de
ebullición, el índice de refracción es una de las constantes físicas usadas para describir una
especie química. Aunque es una propiedad no específica, pocas sustancias tienen índices de
refracción idénticos a una temperatura y longitud de onda dada.

El refractómetro de Abbe: es el más comúnmente usado, su sensibilidad es de 0.0001

(cambio en el n) y normalmente cubre el rango de 1.3000 a 1.7100, puede operar con luz de
lámpara de sodio o con luz blanca común y corriente, requiere sólo dos o tres gotas de
muestra para efectuar la determinación del índice de refracción.

III.-REACTIVOS
 Agua destilada.
 Alcohol etílico 96 %
 Alcohol etílico 30 %

IV.-MATERIALES
 Vasos de precipitado
 Piceta
 Refractómetro de Abbe
V.-PROCEDIMIENTO

Primeramente conectar el refractómetro a una red eléctrica, activar el interruptor principal

“power”, luego abrir la unidad del prisma refractivo y quitar el papel protector situado entre
los dos prismas, seguidamente limpiar cuidadosamente ambas superficies tanto inferior
como superior con agua destilada o alcohol y secar con papel absorbente.
Después colocar una o dos gotas de agua destilada de una piceta, con la ayuda de una
varilla o gotero.
Con el fin de conseguir una igualdad de iluminación hacer girar el brazo rotativo y como
colector de la lente de la unidad de intensidad de luz situada en la parte posterior.
Cerrar la cabeza prismática superior de entrada de luz y presionar ligeramente hasta que
esté asegurada, posteriormente observar el campo de visión a través del ocular principal.
Si observamos que el campo de visión es oscuro, giramos la rueda de ajuste óptico en
contrasentido de las agujas del reloj.
Si observamos que el campo de visión es brillante debemos girar la rueda de ajuste óptico
en sentido de las agujas del reloj.
Girar la rueda correctiva de dispersión del ajuste telescópico en la muestra bajo la manga
del ocular para una mejor visión.
Girar la rueda de ajuste óptico para que la línea divisoria entre el área brillante y oscura
quede correctamente alineada con el punto de cruce de las líneas divisorias con se muestra
en la figura.

Presionar el botón de lectura “read” después de unos segundos el índice de refracción del
agua destilada saldrá indicado en la pantalla del display, debiendo dar un valor que se
encuentre tabulado en tabla.
Después de la calibración limpiar nuevamente la superficie inferior y superior con papel
absorbente, luego situar la muestra en la superficie de trabajo en la superficie inferior .
 Si la muestra es líquida tendrá que ser depositada una o dos gotas a través de una
varilla o cuentagotas.
para saber el valor del BRIX tenemos dos opciones presionar el botón BX obtendremos la
lectura BRIX sin corrección dela temperatura.
Presionando BX-TC obtendremos la lectura BRIX mediante la corrección de la
temperatura.
Si deseamos saber el valor de la temperatura de la muestra presionaremos el botón TEMP y
esta aparecerá en el display.
Una vez finalizados la medición de la muestra de la unidad del prisma refractivo tendrá que
limpiarse cuidadosamente con a alcohol o agua si la muestra es un azúcar.

VI.-DATOS DE LA PRÁCTICA
 ALCOHOL AL 96%

BRIX T IR CORRECCION
(°C)
18.7 19.1 1.3617 18.60

 ALCOHOL AL 30%

BRIX T IR CORRECCION
(°C)
07.7 19.1 1.3443 07.6

VII CONCLUCIONES

Se pudo concluir con la mediciones en el refractómetro de diferentes concentraciones de

alcoholes (96%-30%) ya que este equipo corrige de manera automática los errores de los
grados BRIX todo esto se realizó a una temperatura de 19,1ºC para ambas
concentraciones.