ISSN 1978-9513 VIS VITALIS, Vol. 01 No.

2, tahun 2008

PEMANFAATAN JERAMI PADI DAN ALANG-ALANG

DALAM FERMENTASI ETANOL MENGGUNAKAN
KAPANG Trichoderma viride DAN KHAMIR Saccharomycess cerevisiae

Iris Mustika Sari, Noverita dan Yulneriwarni

Fakultas Biologi Universitas Nasional, Jakarta

ABSTRAK

Saat ini, etanol banyak digunakan sebagai bahan bakar alternatif, untuk membantu
mengatasi krisis energi. Etanol merupakan produk fermentasi dari tumbuhan yang
mengandung pati atau lignoselulosa, dengan bantuan aktivitas mikroorganisme.
Jerami dan alang-alang sebagai limbah pertanian dan perkebunan yang mengandung
polisakarida apakah berpotensi dikembangkan sebagai bahan penghasil etanol ?.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi jerami padi dan alang-alang sebagai
substrat dalam produksi alkohol menggunakan kapang Trichoderma viride dan khamir
Saccharomycess cerevisiae. Parameter yang diamati adalah kemampuan fermentasi
gula oleh kapang T. viride pada substrat jerami padi dan alang-alang, serta
kemampuan fermentasi etanol oleh khamir S. cerevisiae dari ekstrak gula alang-alang
dan jerami padi selama 0,3,6 dan 9 hari. Berdasarkan hasil analisis, waktu inkubasi
pada fermentasi gula hari ke 0, 3, 6 dan 9 berbeda nyata (p < 0.05) terhadap kadar
gula yang dihasilkan oleh kapang T. viride. Kadar gula sederhana jerami padi lebih
tinggi dibandingkan kadar gula sederhana yang dihasilkan oleh substrat alang-alang.
Kadar etanol yang dihasilkan oleh susbstrat jerami padi lebih tinggi dibandingkan
dengan substrat alang-alang.

Kata Kunci : jerami, alang-alang, fermentasi, etanol, kapang

PENDAHULUAN bumi dan meningkatnya biaya eksplorasi

Etanol merupakan senyawa alkohol
yang tidak bersifat racun. Etanol dapat
diproduksi dari bahan baku tanaman yang
mengandung pati atau dari bahan tanaman
yang mengandung lignoselulosa, melalui
proses fermentasi dengan bantuan mikro-
organisme (Amutha dan Gunasekaran,
2001).
Sebagian besar etanol di-
manfaatkan sebagai pelarut dalam industri
farmasi, pereaksi pada industri kimia dan
pengawet contoh-contoh biologik (hewan
dan tumbuhan) (Riawan, 1990). Namun
pada saat ini, etanol banyak digunakan
sebagai bahan bakar alternatif, karena
semakin ber-kurangnya cadangan minyak
dan eksploitasi bahan bakar, yang menye-
babkan industri petrokimia menghadapi
kesulitan untuk pengembangan lebih lanjut
(Flickinger dan Tsao, 1978).
Produksi etanol banyak dilakukan
secara biologi atau melalui teknologi
biokonversi yaitu teknologi berupa
konversi bahan baku secara enzimatik dan
biologik (melalui fermentasi). Bahan baku
yang digunakan untuk produksi etanol
dapat berupa tebu, gula bit, tapioka,
sorgum, meizena, barley, gandum, padi,
kentang dan bahan–bahan berlignoselulosa
seperti : kayu dan limbah pertanian
(Harahap, 2003).
Dewasa ini perkembangan dan
kemajuan bidang pertanian dan industri di

Sari IM, dkk. 55


Indonesia, mengakibat-kan meningkatnya
limbah pertanian diantaranya jerami padi
dan alang-alang. Sebagian besar jerami
padi dan alang-alang umumnya dimanfaat-
kan sebagai pakan ternak, namun bila
ditelaah lebih dalam limbah–limbah
tersebut masih terdapat karbohidrat yang
dapat dimanfaatkan kembali oleh manusia
sebagai bahan baku dalam produksi etanol.
Bahan baku tersebut dapat digunakan
dalam fermentasi untuk meningkatkan nilai
ekonomi dan mengatasi pencemaran
lingkungan.
Jerami padi dan alang-alang
merupakan limbah pertanian yang mengan-
dung polisakarida dalam bentuk selulosa,
hemiselulosa, pektin dan lignin (Howard
dkk., 2003). Komponen polisakarida
tersebut dapat diuraikan melalui proses
degradasi atau fermentasi dengan meng-
gunakan aktifitas mikroba potensial seperti
kapang Trichoderma viride untuk meng-
hasilkan gula dan selanjutnya khamir
Saccharomycess cerevisiae untuk produksi
etanol.
Kemampuan kapang T. viride
dalam mendegradasi komponen polisakari-
da menjadi gula dibantu dengan enzim-
enzim yang dimilikinya seperti : enzim
selulase, dan xilanase. Gula yang
dihasilkan oleh kapang T. viride,
selanjutnya diolah lebih lanjut untuk
menghasilkan etanol dengan menggunakan
aktifitas enzim yang dihasilkan oleh
khamir S. cerevisiae. Seperti halnya
dengan kapang T. viride, khamir S.
cerevisiae sangat berperan dalam industri
fermentasi. Hal ini disebabkan kemam-
puannya dalam menghasilkan etanol yang
paling komersial saat ini (Narita, 1999).
Berdasarkan latar belakang diatas
maka penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui potensi jerami padi dan alang-
alang sebagai substrat dalam produksi
etanol menggunakan kapang T. viride dan
khamir S. cerevisiae.
Sari IM, dkk.
VIS VITALIS, Vol. 01 No. 2, tahun 2008
Hipotesis yang akan diuji dalam
penelitian ini adalah :
1). Terdapat perbedaan kemampuan
kapang Trichoderma viride dalam
memfermentasikan jerami padi dan
alang-alang menjadi gula.
2). Waktu fermentasi khamir Saccharo-
mycess cerevisiae pada substrat gula
akan mempengaruhi kadar etanol yang
dihasilkan
3). Substrat yang berbeda akan mem-
pengaruhi kadar etanol yang dihasilkan.
METODOLOGI PENELITIAN
A. Lokasi dan waktu penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di
Laboratorium Mikrobiologi dan Genetika
Fakultas Biologi dan Laboratorium Kimia
Fakultas Biologi, Laboratorium Terpadu
Universitas Nasional, Jl. RM. Harsono,
Ragunan, Jakarta Selatan. Penelitian
dilakukan pada bulan Agustus 2007 sampai
Januari 2008.
B. Bahan dan alat
1. Bahan dan alat
Bahan baku yang digunakan dalam
penelitian ini adalah jerami padi dan alang-
alang yang diperoleh dari daerah Bogor,
kapang Trichoderma viride yang berasal
dari Laboraturium Teknologi Pangan
FATETA IPB Bogor dan khamir
Saccharomyces cerevisae yang diperoleh
dari Laboratorium Mikrobiologi dan
Genetika Universitas Nasional Jakarta,
media PDA, media PDB, Pepton, Pupuk
NPK dan ZA, (NH4)2SO4, KH2PO4, Urea,
CaCl2, MgSO4, FeSO4,7H2O, ZnCl2,CoCl2,
NaOCl 1% dan NaOH 15 %, KI 20%,
H2SO4 25%, Na2S2O3 0,1 N, Zn asetat 21,9
gr, CH3COOH 3%, K4FeCN.
56

Peralatan yang digunakan adalah :
Blender, Tabung reaksi, labu ukur 250 ml,
Botol fermentasi, gelas Erlenmeyer
berukuran 100 ml ,250 ml dan 500 ml,
jarum Ose, lampu spirtus, kompor,
penangas air, pipet ukur, bulb, oven,
mikropipet, bilik hitung, kaca objek,
mikroskop, gelas ukur 500ml dan 100 ml,
autoklaf dan vortex.
C. Cara kerja
1. Persiapan kultur
Kultur yang digunakan adalah T.
viride dan S. cerevisiae yang berasal dari
biakan murni, kemudian diremajakan
dengan menginokulasikan ke dalam
masing-masing 5 tabung PDA miring yang
telah disterilkan. Kemudian dari 5 tabung
PDA miring dibagi menjadi : 2 tabung
untuk stok dan 3 tabung dijadikan sebagai
kultur kerja.
2. Persiapan substrat fermentasi gula
Substrat fermentasi yang digunakan
yaitu jerami padi dan alang-alang, yang
sebelumnya dilakukan delignifikasi ter-
lebih dahulu menggunakan NaOCl 1 %
selama 5 jam pada suhu 28oC. Selanjutnya
dilakukan pencucian dan penyaringan,
kemudian substrat jerami padi dan alang-
alang dikeringkan pada suhu 50oC selama
48 jam. Setelah itu dilakukan perendaman
dalam NaOH 15 % selama 24 jam pada
suhu 28oC dan disaring, sehingga
dihasilkan ampas dari jerami padi dan
alang-alang. Ampas tersebut dicuci dan
dikeringkan pada suhu 50oC selama 48
jam, sehingga dihasilkan substrat alang-
alang dan jerami padi.
Selanjutnya sebanyak 250 gr
substrat alang-alang dan jerami padi
tersebut ditambahkan 500 ml buffer sitrat
pH 4,8 dan 500 ml nutrien, dimasukkan ke
dalam wadah tertutup sebanyak 24 buah.
Selanjutnya disterilisasi pada suhu 121oC
selama 20 menit.
Sari IM, dkk.
VIS VITALIS, Vol. 01 No. 2, tahun 2008
a. Fermentasi gula
T. viride sebanyak satu ose
digoreskan pada agar PDA miring dan
diinkubasi dalam suhu kamar selama 7
hari. Spora biakan jamur T. viride yang
sudah berumur 7 hari sebanyak satu agar
miring disuspensikan dalam 10 ml akuades
steril.
Suspensi konidiospora seba-nyak
10% (v/v) diinokulasi ke dalam substrat
fermentasi yang sudah disediakan.
Kemudian diinkubasi pada suhu kamar
selama 6 hari. Sebelum dilakukan
ekstraksi, ditambahkan Tween 80 sebanyak
0,1%. Ekstraksi cairan fermentasi
dilakukan dengan jalan memisahkan filtrat
dari biomassa menggunakan penyaring dan
sentrifus. Filtrat yang dihasilkan kemudian
disterilisasi, dipucatkan menggunakan
arang aktif 2%, disaring dan dipekatkan
hingga diperoleh konsentrasi gula yang
diinginkan.
b. Fermentasi etanol
Substrat fermentasi yaitu sirup gula
dari jerami padi ataupun alang-alang
sebanyak 100 ml dimasukkan dalam botol
fermentasi, kemudian ditambahkan pupuk
NPK dan ZA masing-masing sebanyak
0,04 g dan 0,15 g, pH cairan substrat diatur
4,8 menggunakan NaOH dan HCl
kemudian dipasteurisasi pada suhu 85oC
selama 5 menit setelah itu didinginkan
hingga 30oC.
Sebanyak 10% volume subs-trat
stater khamir Saccharomyces serevisiae
yang sudah disiapkan, dimasukkan ke
dalam media fermentasi berupa substrat
gula dari jerami padi dan alang-alang
dalam kondisi anaerob. Fermentasi
dilakukan pada suhu kamar selama 0, 3, 6
dan 9 hari. Hasil fermentasi kemudian
dianalisa.
57
 VIS VITALIS, Vol. 01 No. 2, tahun 2008

D. Rancangan penelitian dan analisis Analisis data dilakukan dengan

data menggunakan program SPSS (Statistical
Product and Service Solution) 11.5 for
Rancangan penelitian dalam windows. Apabila terdapat perbedaan yang
penelitian ini terbagi atas dua, yaitu pada nyata pada taraf pengujian 5 % (p< 0,05)
tahap fermentasi gula oleh T. viride dilakukan analisis lanjutan dengan LSD (
menggunakan Rancangan Acak Lengkap Least Significant Difference).
dengan jenis substrat fermentasi sebagai
perlakuan yakni jerami pada dan alang-
alang. Atas petimbangan kebutuhan jum- HASIL DAN PEMBAHASAN
lah sampel dalam fermentasi berikutnya
(fermentasi etanol), maka ulangan A. Kemampuan fermentasi gula oleh
dilakukan sebanyak 12 kali, sehingga kapang T. viride pada jerami padi
jumlah unit percobaan adalah sebanyak 24 dan alang-alang
unit. Selanjutnya pada fermentasi etanol
diguna-kan Rancangan Acak Lengkap Berdasarkan pada data kadar
Faktorial dengan substrat berupa gula glukosa dari penelitian pendahuluan,
jerami padi dan gula alang-alang sebagai bahwa hari terbaik dalam fermentasi gula
faktor pertama dan waktu inkubasi (lama yaitu hari ke-6. Oleh karena dilakukan
fermentasi etanol oleh S. cerevisiae) penelitian lanjutan dengan fermentasi gula
sebagai faktor kedua yakni hari ke 0, 3, 6 pada jerami padi dan alang-alang selama 6
dan 9. Setiap perlakuan dibuat 3 kali hari. Sehingga diperoleh kadar gula rata-
ulangan, sehingga jumlah percobaan adalah rata dari masing-masing substrat yang
sebanyak 24 unit. ditunjukan pada gambar 1.
Parameter yang diukur dalam
penelitian ini adalah kadar gula dan kadar
etanol.

12,1
12
11,9
Rata-rata Kadar Gula (%)

11,8
11,7 12
11,6 Jerami padi
11,5 Alang-alang
11,4
11,3
11,39
11,2
11,1
11
Jerami padi Alang-alang
Substrat

Gambar 1. Nilai rata-rata gula (%) jerami padi dan alang-alang dari fermentasi
yang dihasilkan kapang T. viride.

Sari IM, dkk. 58


Kadar gula rata-rata yang
dihasilkan kapang T. viride pada substrat
jerami padi sebesar 12 % lebih besar
dibandingkan kadar gula yang dihasilkan
dengan meng-gunakan substrat alang-alang
sebe-sar 11,39%. Hal ini disebabkan oleh
perbedaan komposisi dari penyusun
dinding sel yang dimiliki oleh masing-
masing substrat; diantaranya : selulosa,
hemiselulosa dan lignin. Menurut Jackson
(1977) dan Komaryati (1995) jerami padi
memiliki kandungan selulosa sebesar 33
%, yang lebih tinggi dibandingkan selulosa
alang-alang, yakni sebesar 25,10 %,
sedangkan hemiselulosa pada jerami padi
sebesar 26 % dan alang-alang sebesar
26,86 %, selain itu jerami padi memiliki
kandungan lignin yang lebih rendah yaitu 7
% dibandingkan dengan kandungan lingin
alang-alang yaitu 33,4 %.
Kadar gula sederhana yang dihasil-
kan pada substrat jerami padi dan alang-
alang, juga dipengaruhi oleh jumlah
kapang T. viride yang tumbuh dalam
substrat. Kadar gula sederhana yang
dihasilkan dari degradasi lignoselulosa
pada substrat, akan berbanding lurus
dengan jumlah kapang. Jumlah spora
kapang pada hari ke-6 pada substrat jerami
padi adalah sebanyak 13,09 x 107
sedangkan pada substrat alang-alang
adalah sebanyak 10,43 x 107 (tabel
lampiran 4). Pertumbuhan kapang dalam
substrat jerami padi atau alang-alang,
tergantung pada suplai zat gizi, antara lain
gula sebagai sumber karbon dan energi.
Untuk memenuhi kebutuhan sumber
karbon tersebut kapang akan mensintesis
enzim yang dapat mendegradasi sumber
karbohidrat (lignoselulosa) yang terdapat
dalam substrat. Menurut Moore (2003)
dan Yudhabuntara (2003) kapang meman-
faatkan karbohidrat yang terdapat dalam
bahan makanan sebagai sumber energi.
Kapang dapat mendegradasi karbohidrat
berupa selulosa dan hemiselulosa
menggunakan enzim yang dihasilkannya.
Sari IM, dkk.
VIS VITALIS, Vol. 01 No. 2, tahun 2008
Selulosa didegradasi dengan enzim selula-
se menghasilkan glukosa, sedangkan hemi-
selulosa didegradasi dengan enzim xilanase
menghasilkan gula pentosa (xilosa, arabi-
nosa), gula heksosa (mannosa, glukosa,
galaktosa) dan asam gula (Saha, 2003).
Berdasarkan hasil analisis sidik
ragam terlihat bahwa kadar gula jerami
padi yang dihasilkan dari fermentasi gula
dengan menggunakan kapang T. viride
berbeda nyata (p < 0.05) dengan alang-
alang (Tabel lampiran 5). Hal ini
menunjukkan bahwa jerami padi mem-
punyai potensi lebih baik sebagai substrat
dalam fermentasi gula oleh kapang T.
viride, dibandingkan dengan menggunakan
alang-alang sebagai substrat.
B. Kemampuan fermentasi etanol
oleh khamir S. cerevisiae dari
ekstrak gula alang-alang dan
jerami padi
Kadar etanol jerami padi yang
dihasilkan selama fermentasi oleh khamir
S. cerevisiae pada hari ke 0, 3, 6 dan 9
adalah sebesar 0 %; 0,77%; 0,64 %; 0,37
%, sedangkan pada alang-alang adalah
sebesar 0 %; 0,73 %; 0,64 %; 0,55%
(Gambar 2). Pada grafik terlihat bahwa
kadar etanol tertinggi terjadi pada hari ke-3
sebesar 0,77% pada substrat jerami padi
dan 0,73 % pada substrat alang-alang. Hal
ini terjadi karena pada hari tersebut, khamir
mengalami peningkatan jumlah sel sebesar
16,10x107 pada substrat jerami padi dan
17,46x107 pada alang-alang. Peningkatan
jumlah sel khamir diikuti pening-katan
enzim yang dihasilkan untuk merombak
gula menjadi etanol (Mulyono, 1991).
Katabolisme glukosa menjadi etanol oleh
khamir, merupakan suatu upaya untuk
mendapatkan energi yang diperlu-kan
dalam pertumbuhan. Adams (1985)
menyatakan bahwa jumlah etanol yang
dihasilkan tergantung pada banyaknya gula
yang tersedia di dalam substrat.
59
 VIS VITALIS, Vol. 01 No. 2, tahun 2008

0,9
0,8
0,773
0,73
0,7

Kadar Alkohol (%)

0,643
0,64
0,6
0,55
0,5 Jerami padi
0,4 Alang-alang
0,373
0,3
0,2

0,1
0 0
0 3 6 9
Waktu Inkubasi (hari)

Gambar 2. Nilai rata-rata kadar etanol (%) jerami padi

dan alang-alang selama fermentasi.

Penurunan kadar etanol terjadi pada fermentasi tidak berbeda nyata (p > 0.05)
hari ke 6 dan ke 9 dari subtrat jerami padi dengan etanol yang dihasilkan pada substrat
dan alang-alang. Hal ini terjadi karena alang-alang. Hal ini berarti, jerami padi
etanol dikonversi oleh khamir menjadi memiliki potensi yang sama baiknya
suatu senyawa seperti ester, sehingga dengan alang-alang sebagai substrat dalam
mengakibatkan penurunan kadar etanol fermentasi etanol. Sedangkan waktu
dalam substrat jerami padi dan alang-alang. inkubasi mem-berikan pengaruh yang
Kadar etanol yang diperoleh berbeda nyata (p < 0.05) terhadap kadar
cendrung bernilai rendah. Hal ini terjadi etanol yang dihasilkan oleh khamir (tabel
karena khamir tidak dapat memfermentasi lampiran 12). Hasil lanjut dengan uji LSD
gula xilosa dan arabinosa menjadi etanol waktu inkubasi pada hari ke 3 berbeda
(Saha, 2003). Sehingga tidak semua gula nyata (p < 0.05) dengan hari ke 6 dan 9,
yang terdapat pada jerami padi dikonversi sehingga hari ke 3 merupakan hari yang
oleh khamir menjadi etanol. Musapahaji terbaik untuk produksi etanol
(2007) menyata-kan gula-gula yang dapat
didegra-dasi oleh khamir berupa glukosa,
fruktosa dan sukrosa. Selain itu, sebagian KESIMPULAN DAN SARAN
gula juga digunakan sebagai nutrien untuk
pertumbuhan khamir. Menurut Berry A. Kesimpulan
(1983) dalam Deker (1989) menyatakan
bahwa hampir 40% bahan kering dari 1. Etanol dapat dihasilkan dari jerami padi
khamir dapat menyimpan cadangan dan alang-alang melalui proses
karbohidrat di dalam sel. Cadangan gula fermentasi secara bertahap (tahap 1
tersebut digunakan oleh khamir untuk fermentasi gula dengan menggunakan
melakukan budding, sehingga khamir kapang T. viride dan tahap 2 fermentasi
meng-alami peningkatan sel. etanol dengan menggunakan khamir S.
Hasil analisis sidik ragam cerevisiae).
menunjukkan bahwa etanol yang dihasilkan 2. Lama inkubasi terbaik untuk fermentasi
khamir pada substrat jerami padi dalam gula sederhana oleh T. viride pada

Sari IM, dkk. 60


penelitian ini adalah pada hari ke 6.
Sedangkan lama inkubasi terbaik untuk
fermentasi etanol oleh S. cerevisiae
adalah pada hari ke 3.
3. Kadar gula sederhana yang dihasilkan
secara fermentasi oleh kapang T. viride
lebih tinggi pada substrat jerami padi
yaitu sebesar 12% dibandingkan dari
alang-alang yaitu sebesar 11,39 %.
4. Jerami padi dan alang-alang memiliki
potensi yang sama sebagai substrat
dalam fermentasi etanol. Kadar etanol
tertinggi yang dihasilkan secara
fermentasi oleh khamir S. cerevisiae
pada jerami padi adalah sebesar 0,77%
dan alang-alang sebesar 0,73%.
B. Saran
Untuk meningkatkan efisien-si
konversi jerami padi dan alang-alang
menjadi etanol, perlu dilakukan penelitian
untuk hidrolisis substrat secara enzimatik
menggunakan enzim selulase dan xilanase
yang dihasilkan oleh kapang T. viride,
supaya gula sederhana yang dihasilkan
lebih terakumulasi. Dengan semakin tinggi
kadar gula yang dapat difermentasi oleh S.
cerevisiae maka akan semakin tinggi juga
kadar etanol yang dihasilkan.
DAFTAR PUSTAKA
Adams MR. The Small Scale Production of
Vinegar From Bananas. Tropical
Products Institut. London.1985.
Amutha R, Gunasekaran P. Production of
Ethanol from Liquefield Cassava Starch
Using Co – Immobilized Cells of
Zymomonas mobilis and Sacharomyces
diastaticus. Department of Microbial
Technology, School of Biological
Sciences, Madurai Kamaraj University,
Madurai 625 021, India. 2001.
Sari IM, dkk.
VIS VITALIS, Vol. 01 No. 2, tahun 2008
Deker M. Fermentation Process
Development of Industrial Organism.
Cetus Corporation Emeryville. New
York.1995.
Flickinger, Tsao MC dan GT Tsao.
Fermentation Substrate From Cellulosic
Material. In Annual Reports on
Fermentation Process volume 2.
Acedemic Press : New York. 1978.
Harahap H. Produksi Etanol. Karya Ilmiah.
Fakultas Teknik Sumate-ra Utara. 2003.
http://library.-
usu.ac.id/download/ft/tkimia-
hamidah.pdf.
Howard RL, Abotsi E, Jansen van
Rensburg EL and Howard S.:
Lignocellulose biotechnology: issues of
bioconversion and enzyme production.
African Journal of Biotechnology Vol.
2 (12), pp. 602-619, 2003
Http://www.academicjournals.org/AJB
Jackson JMG. The Alkali Treament of
Straws Animal Feed Science Tecnology
2:105-130.1977.
Komaryati. Pemanfaatan Alang-Alang
(Imperata cylindrical Beauv) Sebagai
Penghasil Gas Bio. Puslitbang
Bioteknologi. Bogor. 1995
Moore E. Fundamentals of Fungi. Prentice-
Hall Inc. New York University. 1972.
Mulyono M. Hidrokarbon di dalam
Lingkungan Perairan. Pusat Penelitian
dan Pengembangan Teknologi Minyak
dan Gas Bumi. Lemigas. Jakarta. 1991
Musapahaji M. Mengganti BBM dengan
Bioetanol. Suara Merdeka . Jakarta.
2007
Narita V. Saccharomyces cerevisiae Super
jamur yang memiliki sejarah luar biasa.
61
 VIS VITALIS, Vol. 01 No. 2, tahun 2008

Pusat Peng-kajian dan Penerapan Saha BC. Hemicellulose Bioconver-sion.

Teknologi Farmasi dan Medica. Badan LJ Ind Microbiol Biotechnol . 2003. 30
Pengkajian dan Penerapan Teknologi : 279-291.
(BPPT).2005.
Yudhabuntara. Pegendalian mikro-
Riawan S, Kimia Organik. Penerbit organisme dalam bahan makan-an asal
Binarupa Aksara. Jakarta. 1990. hewan. Bina Produksi Peternakan.
Departemen Pertani-an. Cisarua. Bogor.
2003

Sari IM, dkk. 62