IDENTIFIKASI SEROLOGIS VIRUS INFECTIOUS LARYNGOTRACHEITIS ISOLA "MANGESTONI FARM DENGAN UJI AGAR GEL PRESIPITASI DAN UJI NETRALISASI ‘SEROLOGICAL. IDENTIFICATION OF INFECTIOUS LARYNGOTRACHEITS VIRUS "MANGESTONI FARM ISOLATE USING AGAR GEL PRECIPITATION TEST ‘AND NEUTRALIZATION TEST Micha Haryoat Wibowe {ars Mab Faas Katee eva, Universe Gad Msp Ul, Balm, “era S38, Tepe 27 S083 ABSTRAK Peoltan int eran melsukan peneshan diagnosis virus ifecious langarackeis (LT) isl “Mangeson farm (MF) mecgguaaan ugar gl presi (AGP) dan uj eval. Uj seb didaeckan pada terme Komplete ntgen nods Jang Teams sebagn gars preps pads media semisolid dan prsst Denghanbwian perma vir po menban karan lr um teenbeo at 942 aU ete ‘Skjlan scars berpsananiomolg dan dsanglaeterlog ment posed bt, doris 500d fk 30. Haai ut AGP anaravirs TT lt MF dengan serum an lat MF dan sum a aka post ben gai breast ant suman angen dan anbodl tenet. Hast nels teat nye peng Perth vin adn mention Kosmos er tyam Bere. Makin ing pegsnces se ak seman ‘Shut auvias hintuon pencewanan pk pads maser Korcaswols taser hci petcia I apet Simul nwa is I bolt Mtb cara eos eu ps cba vs LT. " ‘Kata kame: infections laryngoachis,kompleksantige-anbod, pak membeanhovialnois ‘AusTRACT “The purposd of thi research was done to enti infectou Larnporchets is Nangesn farm saat by serological method using our ge respon (AGP) tel andnewalzaon est These est wre based on forming of antigen-antibody complex ich were visuliaed on semiaid das 4 precptation ne ad he cate of Plaque formation on chovcalanois membrane of 9-12 dys old chicken embsonatng eg, Neavalzaton test Was fared out by beurpocedire by Sting mules of serum and const vis with SOOepe fests doe 0, snd tested cro between the sed angen ad anita. The examination of AGP West posvel cured precipitation Tie between the well of angen vite ite andthe well f seid dnduced from bh vine iad late is, Newlin activity coud be observed by having plage formative obstacle at chorialantas membrane. The higher te dition of serum the lowe he acy f pga Tormaive obstacle Based on th esl of these est onion was thatthe vis oF Mangeston Tam late was proved 8 ILT vis ‘Key words infectious Laryngitis antigen-antibody comple, plague of choriallanois membrane5, Sun Ver 208002005) -PENDAHULUAN Penyakit infectious Larygotrachels (IT) ‘merupakan peayakit infest sauran peasants pda ungest ying dicbablan oleh vies infectious Tanmgotrachets yang tears virus dla fal “Herpeviridae (Peer fal, 193). Toréan (1990) ‘menghlsfsi lebih lnjt vires peayebab ILT ke dalam subsfanit Alphesherperirinae Virus LT evan ll disolas olch Bevadete pad tain 1930, tpi baru pads tahun 1963 betas ikarakceisas saga virus herpes (Cover, 1996) Penegubsn diagnosis infohi virus ILT dapat icapai dengan uolast dn identiikat agen Penyetab penyalitIdentfiasi secara longreng ‘Sakokan dengan pongamatan morfolo! vin oleh bab ita tek nt eangattexpantng paca jumlah artikel ius yang edapst dala sample (atm ‘ral 1995; Jordan 1990) Metis scar ia langsing dapat dilatukansecaraserlogis dengan ‘mengetahiantbd views ILT “Gordan, 199). ‘hipthy “dan Hanson (1989) menyatakan ad teberapa teknika serlogis yale agar gel resis, uj newalisas ul enzyme lined Immunosorbent assay (ELISA), din ti antibod AMuoresen "dengan luoresen-uthyocyanate yang, silabelkan pads anid ses teadap virus LT BeberpatehnikHenifkasi modem ters dlembanghan sntrn Iain dengan anise genom views dengan tehnik polymerase chain reaction (WCIg dan DNA probes Teka dent eect fukup akurttetap peta bys yang eat maa ‘dan ek yang rami. ‘Uji agar gel prespitasi (AGP) Ibi dena sebagai ul imumodiisl gad ats ji Oucerony, Imerpakantcknk immo! yang pling crag igonakan untuk menganalisis antigen eibod (Kresna, 2000). Teknik ini memaingkinkan poses Visulisai komplels anigen-antibod alam est tent presiptatpadh media semi sold. Antigen ‘avn anibodi an berdifes dengan ar yang Saling Belawanan dan akbinys tetera membentuk ‘aris presipias dt ana suman antigen dan tibot. Teknik eis mune! meopakan ‘eli eats yang dapat dikeakon unt virus TILT dengan akurat, murah dan tdsh dikerakan (Gear, 1989). Terdan (1999) menegackan taba unto rpengethaladanya sito spin teadap ius LT depat ditt dengan i AGP, sdangkan Gilespie dan Timoney (1988) menyatakan baw i AGP "biast digunatan untuk” membust eis Alagnosis cept pada viusILT. Uj AGP ii lebih bersfat kaalattnarun dein telap bermanfaat nto mendetekst antibod) aya yang dupa teinekst view LT dalam sat lok 2 ‘Ujinetalisss merapakan yj yang bertjuan ‘tuk mengeabaladanja anbod nti, leh Sebab itu juga sering.disbotsebngai_ trum realaasi, Uj neti tenet diesarian pada ‘enyatan bahwa ativis ves yang termanifestas Sebagaefek stot pada Kultur sel, Test atau ematian embvio poda tur aerembrio dan gj lnis pada Bevan percabase akan dibambst leh serum an spesiic Yang disaian oleh virus yang ‘monsimulastpembentukansnbod eset (Rober fan Carter, 1976) Hal tersbut ditcastan oleh agus dan Guy 1997); Hane dan Baga (1991) Tala jt meralisel dept digunahan tuk ‘menunjubian ‘ad dan idle. antibod terhadap virus ICT. Menurt Barnet yang dss oleh Hanson in Bapust (1991), akuvias. novia serum suiveus ILT dapat divkur dengan mit aii ‘embeatukan pak pad membuan Krall elut yam brent, Penaian int beruja anak rlakukan peneguhan diagnosis virus ILT slat Mangeton {arm dengan identifkas!serlogle menggunakn ji AGP dan ui neta MATERI DAN METODE "Tras virus IL coat MF dan virus vaksin, ‘Thrasi bertjuah unm mengesbul ee virus, yang Berguna anak mesentan di neh alana aj aula Stok ses ILY lola MP, Stiambi dat tabung nitrogen aie dt Laboratorurs Inu Hayat, Universitas Gash Mada, hing, emodian diambil sampel 0. ml untuk dias! ‘Virus vaksin aki ILT prodkst AKO, Bland, beak Keving bekw dilantin dengan PBS 10 mi yang. mengandung pensin’ 1000 TU" pee ml, fuepromisn 100 up por ml don fngizone 5 ug per tal Dar lawn alsin tert diambil Ll emudian dencedan dengan PBS ttl sebanyak (09 mi Samgel trast dismbildari rt vin tera sebanyak 0, ml ‘Tuasi views IL iolat MF dan viru vain, ‘menggunakan ‘elur berembro. ur 9-12 hal ‘mengact metode Burleson al (199)- Kea virus Aiencerkan berighat 10" sams 10% dengan PBS Sebagal peagencer. Masingmasing eaceran Vise terebutdlnokulalan ke wt te pada memran ‘oroaantois telurayam boretio dengan dose 0 ‘ml Konto digunakan 5 butter ayn berebeio Yang linkulasi dengan PBS. Doss Infeks-30 (DI. 50) aitung dengan romos Reed éan Neneh. DIO rmerupakan penpenceran vires stiga yang manip trenginckat alts membundh rable sebanya SOR (Gureson eal, 1992).Gambar 1, Hasil yi AGP teramati gars presipiasl (anda pana) ana sumsran antigen-anibod. sumuran_ viru slat. sumuran serum anti vaksin (kontrol posi) dan c suman serum ant soa Produk serum ant vires HLT. ‘Ayam petelur stain Lohman Brown, uur 50 hai sebnya 6k dag dalam 2 kelompek, ‘masig-masing 3 ckor dun dips dalam Kanda percobaan selama site minggs. Kelompok petama ‘ipa untuk memprodust serum: ant viws IL ‘dengan vaksin aki ILT prodaksi AKO, Bela, diberkan: tees mata pada umur 38 ha dan di booster satu bulan komad Koleks serum ani Ailaokan pada mingew ke-3pasca vaksinasi dan lang setap mingau sampai mingyu ke-12 paca ‘alsinast peamas Kalompok "kde digumakan ‘unk memprodk seam soi ves LT islat MF Siok vi LT islat MF dinaivst dengan formalin 109% deigan Konsenas 0.1% di to volume supertatan yang akan diakivasi, kemudian Atinkabast pada subu 24°C selama 2-4 jam Vins ‘yang tla nati? tersebot_itambahian adorn (reund's compete advan) saya aupeentan dn diemulsikan mengaunakaa spt sap Berbuih fertaerwara "put Vaksin nak tesebut Aisiaikkan pada aya’ Kelompok keduasecara Subkutan desi 23 ml per ekor Kole sera ath isola MP tercbut'-dimbil pada" ming kes, lags seiap mings srl tinge ke? stl vali eotifkas Serolog | Uji Agar Gl resis (AGP). ‘Agi niv (pared agar) 0.3% ditrutkan alin “squadesata sri, dipanskaasampai mend Kemudian dieteskinplampelin pda obyek glas yan ditemptkan i mej dtr Lapisan ‘ying. tebe didlamkan sampsi pada" dan Aipindakn ks dans ior saw 37°C ela 24 jam (proses peapsavcoating). Kaca obyel tescbut Lemudian dianbil dan ditambahin age ‘mui 19% dslim phosphite bur sane (PBS), yan, engandang & $8 NACI cana Sr dengan pipe hur 5 mal Setelab agar mengeas dust suman ‘su di tengah dan dking da sumoran ees pola yang Spesimen viru LT iolat MF sebanyak SC snroliter dieteskan ke dalam sumeran di tengat ‘menggnakan miko pipet, sedangkan smuran sckelingnys ditsleskan serum ant solat MP dar Serum ant virus ILT (Kangol posit) sebanyak SC Imllolie" Kaca olmekferssbut emior Aiempathan dalam cawan per Yang bedeter 2¢ fm yang lapis dewgan kapas bah dor Aitempatkan di as mej dr seta dinkuasi pads su kamarsolama 24-48 jam, Ui AGP posi ile Aexbentuk gris presiptas di antarasumuran sign an antibod Beard, 1989), UpNetraisad. Proiadur yj erafisnsl mengacu mete ‘Beard (1989) yam kedua drum at vrs, liaktvas dalam penmgas sir pan sa 56°C selama’ 1 jam. Serum fenebut emudian dencedan scat ottinghat 2" smal 2" dalam st tabong ‘ak ukuran 7 ml Tap 0.5 il enceran serum at Stambabkan 0,5 onl vis ILT isolat MP yang ‘idalamaysterdapat10 ali S00’ DSO, Dosis ‘nkelasi yan dibekan dala 0,1 ml yang bert tiop inka inengadunie"vins 300” DISD (dja, Komik bad Sebeen_kontol Aigonakin seri normal sia PAS. Uy netlist dikerjakan sccaa bepasngavthmolog, dan scars silangheterlog. Uji tesebut-mengeundkan telatSain Vet XX2)2003) Gamiver 2 Hai ji netraiss tera es edematous pla thal dan meat amp i seluah penmokean ‘membran korioslantois pada pengencrsn serum anti 10 * yam berembrio wnat 9-12 hari dengan inka pada membran Koil Prosedur kerja Joka tersebut mengaca metode Burleson ct al, (1390) HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Agar Gel Preseli. Serum anti vaksin ILT yang. digunakan dalam wi AGP yang dikoekst ming ke} sampel ‘inggu ke-7 maypon serum ant sot MF yang likleks pada mings Ke saps dengan ming eT belum dapat feramatigais press. Salah ita pada. penelitian ini dicoba dengan pemekatan tigen dengan vltascaifugat berpendingn sub ‘FC dengan keceptan putt 72.000 gselama sat jm. Antigen frsutKemudiandigumakan dalam ut [AGP dengan serum yng ikacks pada ming ke- 9, dan 10, tapi gn bolum bers! terbentk tis presi, oleh karean itu serum anti yong (Boles pada minggx ke-11 dipelatkan dengan ‘proses Hopilsad) lama 24 jam. Antigen. dan fotibods yang telah dipekakan terchut Kemodian ‘igi AGP, dan eras diamat tebentkay gars resis dite sumoran antigen din antibod amber 1). Pads penliian iat tidak didesin ‘menggunakan serum" ati yang berdetatn, oleh ‘en tidal dapat tanjan gris des (ne (Of deni) teagan kemplets antigen antibod Ving TILT tersebut dapat diamati pada gars resis yang teen iatara suman antigen ‘dn antibod. 4 Laporan beberapa_peneli,menyataan twa means Kekebalan humoral iba inks virus ILT boken mekanime uta tetop sebagai Pestahanan skunder, olch sebab ita pengkurat ‘Snlem perabanan Hamoral pada ifeksvins TLT fampakaya menjadi bib slit dan diperukan ‘modifikast eknis tte sthagaimana ‘Sikonfiemasikan dalam pewliian ini. Pet jun ‘ipemarion bebe tory, bespecanan dla eberastan yj AGP anars tain Konsemst ‘niger anfibod, yt bakes bik antigen maupan ‘anibodi Taras mencapsipexbaningan yang ‘Avidias antbodh yang, menentkan ‘tobias Kompleks autigewanibod. Suh, pit dan Kelembaban jugs mempunyai peraan dalam horas ji AGP (Kies, 2000) ‘Uji Netra. asl perhitungan ter is menurat umes ‘Reed dan Moceh dal sSgai boku: ier virus Yasin ILT adalah 10 "per nl sedanghan tier iw isolat MF adalsh 10°" per ml. Nils yang Uiperooh— texebut ‘merupakan Dengsncerm vis yang mampu menginikst 50 % ‘nite, pada tur aya berembrio uma 9-12 ha. ‘Serum ant vaksin JLT dan serum ati iso MF yang digunakan dalam wh sevaisos dambil ‘oda ming ke-12setlahvaksins, al tercbut Imengaca penelitan Andrenen ef a (1989). Secara oli nt ners dam. pelt ini, bk serim anti yang dipasngkan secara_ homolog, ‘maupaneterolog, Derhasl membuktikan baba tives setlist nod teramati dengan adaya ‘etghambatan pembenukas lei pla pata meraJ, Sain Vt. XX1C 2003) tevioslanoistelurayam teremia. Seman tn pengencern serum at seman kell penghambatan tnibodi terbadap pertmbuba vrs, Hal terebut teramatl pada semkin banyak dan teal lak yang terbentuk pada permuksan menbran korloalanois telur aya terembro, dsamping. it secara Imakroskopis membran terebut teramatl Te flemtous yang. sangat ayaa (Gambar 2). Lei tmembrantereebut dap sbagal parameter aan pertumbuban vis TL dan termatinya sktvias eri anti sped teadap virus TLT tersbut ‘merupekan indicator yong” Dermanfat untuk ‘mengetai pendedahan virus ILT (Andreaten ea, 1950) Berdusarkan asl peneliian inl dapat simpalkan baba views TLT iolat MF seca ‘erologis terbakt pos sebagl vires ILT. Pet Sakakan pevelsan lebih lnjut wok mengukor pilogenisiae seta tarltersstmolekuler virus lat Meret LUCAPAN TERIMA KASIE ‘erin sib dizampsitan bepada Drs. B. Ssrjono, MSe. Alar sqala-masukan yang telah ierkan kepada penuls. Terma Kasih Joga fisnmpaikan kepada Dickie Pasa Sajna Universitat Gadjh Mada yang telah memberkan tntuan penelitian melsutBessiowa Progam Pasca Saran. DAFTAR PUSTAKA ‘Andreasen Je, LR. Glisson, LR, Goodwin, M.A, Resurecsion RS, Villegas, P. dan Brown, J 1689. Studies of infectious Lanmgoracheis ‘Vacznes: Immunity in Layer: Avian Dis. 33: s16523 Andreasen Jey JR. Brown, J, Glison, Rs, dan Villegas, P1990. Reprodetility ofa Virus- Netrastion Test for Tfectious Laryngaacheiis View. Avian Dis. 34 185+ 2 agus, TJ. dan Guy, JS. 1997-Laryngouacheis alana Calnek, B.W., Bares, HJ, Bear, C. We, MeDougld, LR, dan Saif, YM. (ed) Digeases of Put. Teath ein, lowa State ‘University Pres, Ames, lows Hal: 527536. Beard, CW. 1989. Serologic Procsdues. Dalam Purchuce, HG, Arp, H. L., Domermuth, C. HL, dan Peace, 3. (eis). A Laboratory “Manul for the Islaion anéIentfistion ‘Avian Pathogens. Tht edition. Kendal ont Publishing Company ova, Hal: 192-20. Burleson, FG, Chamber, TM. dan. Wiedbrauk, ‘Di. 1952, Virology + Laboratory Manual ‘Academie Prt Iney San Diego. Hale 45-417 dan 6873, Cover, M. , 1996. The Barly Histor of Infectious ‘Larmgotachelis Avia Dis 40: 494500. Fatuomt, 0.0,, Reed, WM, Schwartz, DIL. dan “Tipthy,” DLN. 1995" Dual Infection of Ghicken” whith Pax and” Infectious Larygotrachetis Conimed. whith Specific Pox and Infectious is DNA DotBlt Hybridization Atsy. Avian Dis. 35: 925.930, Feone, FJ, Gibb, EP, Murphy, FA Rot, R ‘Sudden, M; J dan White, D. 0, 1993. Veterinary Virsogy” Acadene Pres, In. Hal: 337-368 Gillespie, HL, dan Timosey, LF. 1988. The Dalim" Timoney, 1, Comstock Publishing Atscites, A Division ‘of Cornell University Press, London. Hal: $91-594 dan 628-630. Hansca, LE, dan Bogus, TJ. TLarygotrcheis, dalam: " Calnek, nr HOI. Beard, CW. Reid WM. dan ‘Yoder Ir HiW (oie, Diseases of Poaly. [Ninth edion. Towa Sute Universy Press, ‘Aes, Towa. pp: 485-572. Joodan, EIT, 1990, nfesious Laryngtrachelts ‘alam Jordan, Fe.W. (ed). Poultry Diseases. The University. Pres, Cambridge, Great iin Hal: 154158. Kretno, S.B. 2000. Inunlogi: Diagnots dan Robert, A. W. dan Cater, GR. 1976. Essensa of Veterinary” Virology. | Michigan State University Press, Michigan. Hal: 22. ‘ripahy, DIN, dan Hanson, LB, 1989. ‘Larngotaceis, Dam Purchase HG. Arp, HL, Domonmuth, CH. dan Pearton, 1 (ds), A Laboatory Manual forthe Isolation find Keniietion of Avian Pathogen. Third ‘dition. ‘Kendall/Mun Publishing” Company. Towa. Hal: 85-87.