2015 ~ Zot CURS 5 MECANISMUL MOLECULAR AL EXPRESIEI GENICE Expresia informatieigenetice se realizeazA in toate celulele pe baza unui flux informational, unidirecfional si universal, conform dogmei centrale a genetic Prima etapa a expresiei informatiei ereditare este sinteza de ARN (cu ajutorul unei ARN polimeraze ADN-dependente ), prin copierea informafiei din ADN; care are loc in nucleu si mitocondrii si se numeste transcriptie, A doua etapa este sinteza “unui polipetid, prin decodificarea ("traducerea") informafiei ARNm intr-o secventA caracteristic’ de aminoacizi: care are loc in citoplasma, pe ribozomi, si este denumiti translafie 1, TRANSCRIPTIA Transciptia este procesul de copiere a imformatiei genetice a unei gene, sub forma codificatd, complementara si antiparaleli, intr-o molecula de ARN. Acest proces are loc in nucleu. ARN-ul este un polimer de ribonucleotide alcatuit din 3 componente: un glucid, riboza, un rest fosfat si o baza azotatd purinica sau pirimidinicd A,G,C si U in loc de T Prin polimerizarea ribonucleotidelor in directia 5'-3" rezulta 0 monocatena de ARN in general scurti. Moleculele de ARN ‘nu au o structura helicoidala’ regulata ca a ADN-ul. in schimb, ele pot forma structuri 3-dimensionale in cazul in care ‘catena formeaz o bucld inapoi si se stabilese'legaturi intre perechi de baze in regiunile complementare a lungul catenei. Exista 4 tipuri de ARN, fiecare codificate de propriile gene: + ARNm - ARN-ul mesager: codifici secvenga de aminoacizi a unei polipeptide. + ARNr - ARN-ul ribozomal: impreuna cu proteine ribozomale, constituie ribozomi, organitele care traduc ARNm. + ARNI - ARN de transfer: aduce aminoacizii din citoplasma la ribozomi in timpul translatiei. ; + ARNsn - ARN nuclear mic: impreuna cu proteine, formeazi particule care sunt utilizate in procesarea ARN la eucariote. (Nu a fost gasit la procariote,) Pentru a sintetiza in vivo a ARNm sunt necesare: ADN ca model sau matrita pe care s& se desfaisoare sinteza . enzima ARN-polimeraza II . factori de transcriptie care orienteaza si activeazi enzima ribonucleotide activate care prin polimerizare alciituiesc catena de ARN Repo Cele doua catene ale ADN-ului, catena transcrisi (35°) si catena “de refering” (5'—3"), au o “nomenclatura” diferiti. ARNm. care se formeaza prin transcriptie. va aavea aceeasi secvenfi de nucleotide (exceptind inlocuirea T cu U) si acelasi sens (5'3') ca si catena ADN netranscrisé motiv’ pentru care aceasta se numeste catend sens iar catena transcris& este numita adesea antisens5'..ATGTTACGACGT... 3" catena ADN "sens" (netranscrisa, de referinja) 3. TACAATGCTGCA. catena ADN "antisens" (transcrisé) a Transcripjie a 5'.. AUGUUACGACGU... 3" ARN Procesul de transcriptie la eucariote se desfsoara in doud etape, determinate de structura "discontinud" a genelor. (1 formarea ARN mesager precursor (pre-ARNm) sau transcriptul primar, prin criptia integrala a genei (exoni si introni); O maturarea_pre-ARNm, printr-o série de modificiri din care rezulti ARNm matur, ce va trece in citoplasma. tran 1.1.FORMAREA ARNm PRECURSOR Formarea pre-ARNm incepe prin decondensarea zonei de ADN care confine gena sau genele ce vor fi transcrise. Acest proces, care implica interventia unor factori de transcriptie. modificarea chimicd a histonelor, va reduce gradul de compactare a filamentelor cu nucleosomi. Formarea pre-ARNm se realizeazi in trei etape. (1) Initierea transcriptiei La eucariote, ARN polimeraza, si, prin urmare, initierea transcriptiei, necesité prezenja unei secvenje promotor. Promotorii sunt regiuni ADN care se gasesc, la eucariote, la -30, -75,-90 de perechi de baze, in amonte de SIT (situsul de initiere al transcriptiei). Acesta confine'o secvenfa de nucleotide numita TATA box, situaté la 25-30 de perechi de baze in amonte de SIT. Pe TATA box se leagi proteine specifice numite TBP, care reprezinté o subunitate pentru. alti factori de transcriptie, numifi TFIID ARN polimeraza se leaga la promotor numai in prezenta mai multor factori de transcriptie. Dupa ce TFIID se legi la TATA box, prin intermediul TBP, 5 sau mai mulfi factori de transcriptie si ARN polimeraza se ataseazi de TATA box in mai multe etape formand complexul de inifiere al transcriptiei. Unul din factorii de transcriptie, numit FTIIH, are si activitate de helicaz’ si astfel este implicataé gi in separarea celor dou catene de ADN, formand ,,bule” de wanscriptie. Cu toate acestea, doar o mica parte, sau transcriptia bazala este determinata de complexul de inijiere al transcripjiei. Alte proteine, cunoscute ca activatori sau inhibitori, impreuna cu co-activatori si co-inhibitori asociati sunt responsabili de modularea ratei de transcriptie. Deci. complexul de initiere al transcriptiei este alcatuit din: Secventa central Factori de transcripyie ARN polimeraza Activatori si inhibitori (2) Transcripjia propriuzisa (elongatia) Dupé fixarea ARN polimerazei. cele doua catene ale ADN sunt separate si catena ranscrisi 3'75S' serveste drept matrié pentru asezarea secventiala si complementar’ribonucleotidelor activate, eare vor fi apoi polimerizate de catre ARN polimerazi , formandu-se pre-ARNm, Transeriptia se face numai in sensul S'T3', deci pre-ARNm este antiparalel fafa de catena transcrisi. Pre-ARNm se desprinde treptat de pe catena transcris& si raméne fixat temporar numai la capitul 3°, Cele doud catene ale ADN se reunese treptat, sub actiunea unei topoizomeraze, si refac dublul helix. in molecula de ARNm precursor sau transcriptul primar - sunt copiati att exonii cat si introni (3) Terminarea transcriptiei Cand ARN polimeraza intélneste situsul de terminare a transcriptiei, are loc clivarea 3! a transcriptului primar. 1.2.MATURAREA ARNm PRECURSOR Cuprinde 2 etape distincte in care transcriptul primar devine disponibil in procesul translatiei: 1. modificarea extremitisilor ARNn precursor Determind cresterea stabilititii sale, faciliteazi transportul in citoplasma, recunoasterea si fixarea la subunitatea mica, ribozomala. La extremitatea 5? se adauga la primul nucleotid al transcriptului primar o molecula de 7-metil-guanozina care formeazé o structura special numita ,,bonetd”. La extremitatea 3” se adauga un rest de 50-200 nucleotide cu A, rezultind 0 coada poliadenilica. 2. procesarea sau prelucrarea ARNm precursor Transcriptul primar confine intreaga regiune central a genei inifiale, adica secvente codante; exoni si secvenfe necodante, introni. a Dupa sintez&, transcriptul primar sufera o procesare complex ce ‘const in decuparea precisa si eliminarea intronilor, urmate de reunirea exonilor care vor forma ARNm matur. Fenomenul de eliminare prin decupare al intronilor si de reunire al exonilor se numeste matisare. Intronii sunt eliminati din transcriptul primar prin clivarea unor secvente conservate numite situsuri de imbinare, Aceste situs-uri se g&sesc la capetele 5 ‘si 3° ale intronilor. Cel mai frecvent, seoventa ARN care este indepirtat’ incepe cu dinucleotidul GU 1a capatul sau 5 ', si se termind cu AG Ia capatul 3'. Aceste secvenje consens sunt critice, deoarece schimbarea uneia dintre nucleotide duce la blocarea matisdrii. O alti secventd importanté este situsul de legare, care intotdeauna contine o adenina. Matisarea se realizeazi in 3 etape si este catalizati de ribonucleoproteine nucleare mici (snRNPs, de obicei pronuntate "snurps"). in primul rand, pre-ARNm este clivat la capatul 5 ‘al intronului ca urmare atasfrii unei snRNP numit U1 la secventa sa complementara in intron, Capétul taiat ajunge apoi la situsul de legare, prin atasarea nucleotidului terminal. guanina la nucleotidul adenin& din capatul 5 ' al situsului de Jegare, pentru a forme o structurd in forma de buclé sau lasou. Urmeazi sectionarea intronului Ja jonctiunea 3°AG, indepartarea lui si unirea segmentelor de ARN exonic. Procesul este mediat de un complex ARN-proteine. numit ,,spliceosome”. in care se gasesc snRNPs impreuna cu proteine Ordinea exonilor in ADN si transcriptul primar este pastrata in ARNm matur. Dar existé o anumiti flexibilitate in utilizaree exonilor, in sensul ci in celule diferite. vor f ‘retinuti” in ARNm matur numai o parte din exoni. aljii putand fi indepartayi o data