Manuscrisul acceptat

Titlu: Toxicitatea, degradarea și soarta metabolică a ibuprofenului pe diatomul apelor dulci

Navicula sp.

Autori: Tengda Ding, Mengting Yang, Junmin Zhang, Bo Yang, Kunde Lin, Juying Li, Jay Gan

PII: S0304-3894 (17) 30085-7

DOI: http://dx.doi.org/doi:10.1016/j.jhazmat.2017.02.004

Referință: HAZMAT 18359

Pentru a apărea în: Jurnalul de materiale periculoase

Data primită: 24-10-2016

Data revizuită: 22-1-2017

Data acceptată: 4-2-2017

Vă rugăm să menționați acest articol ca: Tengda Ding, Mengting Yang, Junin Zhang, Bo Yang,
Kunde Lin, Juying Li, Jay Gan, Toxicitatea, degradarea și soarta metabolică a ibuprofenului pe diatomul
apelor dulci Navicula sp., Journal of Hazardous Materials http: //
dx.doi.org/10.1016/j.jhazmat.2017.02.004

Acesta este un fișier PDF al unui manuscris needitat care a fost acceptat pentru publicare. Ca
serviciu pentru clienții noștri oferim această versiune timpurie a manuscrisului. Manuscrisul va fi supus
copierii, tipăririi și revizuirii probelor rezultate înainte de a fi publicat în forma finală. Rețineți că în timpul
procesului de producție pot fi descoperite erori care ar putea afecta conținutul și toate denunțările legale
care se referă la jurnal.

Toxicitatea, degradarea și soarta metabolică a ibuprofenului pe diatomul apelor dulci

Navicula sp.

Tengda Ding †, ‡, Mengting Yang †, Junmin Zhang †, Bo Yang †, Kunde Lin ‡, Juying Li †, *

Jay Gan§

† Shenzhen Laboratorul-cheie al Chimiei de mediu și ecologică ecologică, Colegiul de Chimie și

Ingineria Mediului, Universitatea Shenzhen, Shenzhen 518060, China

‡ Laboratorul-cheie de stat al științei mediului marin, Laboratorul-cheie al Ministerului Educației

pentru Ecosistemul Coastal și Litoral, Colegiul de Mediu și Ecologie, Universitatea Xiamen, Xiamen 361005,
China

§ Departamentul de Științe ale Mediului, Universitatea din California, Riverside, CA 92521

 *Autorul corespunzator

Juying Li

Colegiul de Chimie și Ingineria Mediului, Universitatea Shenzhen, Shenzhen 518060, China

Tel .: + 86-0755-26538657

E-mail: jyli@szu.edu.cn

1 Abstract grafic

Repere:

Ibuprofenul a prezentat toxicitate la Navicula sp. la un nivel ridicat de expunere.

Navicula sp. a inhibat semnificativ degradarea IBU la o concentrație scăzută.

Un total de 8 produse de transformare ale ibuprofenului au fost identificate prin LC-MS / MS.

Cale de transformare a ibuprofenului în Navicula sp. au fost propuse

Rezumat: Ibuprofenul (IBU) este una dintre cele mai frecvent utilizate și frecvent detectate
produse farmaceutice umane în mediul acvatic. Cu toate acestea, toxicitatea IBU asupra diatomei și a
soartei sale rămân încă necunoscute. În studiul prezent, toxicitatea IBU asupra diatomei a fost evaluată
prin rata de creștere a algelor, conținutul de clorofilă și carotenoide.

De asemenea, a fost studiată degradarea IBU, incluzând în special potențialul de formare a

produselor de degradare incomplete. Caracteristicile biochimice ale 2 Navicula sp. au fost inhibate
semnificativ la concentrații IBU de până la 50 mg L-1 după 10 zile de expunere.

Degradarea IBU a fost întârziată de Navicula sp. la scăzut (1 mg L-1), cu t1 / 2 fiind extins de la
9,6 ± 1,8 d la 12,0 ± 1,5 d, ceea ce indică faptul că Navicula sp. ar putea prelungi timpul de expunere al IBU.
Un total de 8 metaboliți au fost identificați prin LC-MS / MS și calea de degradare a IBU în Navicula sp. a
fost propusă. Hidroxilarea, acilarea, demetilarea și glucuronidarea au contribuit la reacțiile
transformatoare IBU în celulele diatomice. Aceste constatări indică prezența diatomului Navicula sp. ar
putea împiedica degradarea IBU, iar IBU și / sau metaboliții săi pot prezenta riscuri mari pentru ecosistemul
acvatic în apele naturale.

Cuvinte cheie: Ibuprofen; Toxicitate; Degradare; metaboliţi; Navicula sp.

1. Introducere

Compușii activi din punct de vedere farmaceutic (PhACs) sunt de mare preocupare datorită
potențialelor lor efecte negative asupra organismelor acvatice [1-3]. Odată cu creșterea economică rapidă
și urbanizarea din ultimii ani în China [4], PhAC-urile sunt eliberate continuu în apele naturale datorită
deversării lor continue zilnice din stațiile de tratare a apelor reziduale și sunt detectate cu o prevalență
mare în diferitele ape de apă. Ibuprofenul (IBU) este un medicament nesteroidian, antiinflamator,
analgezic și antipiretic, care este unul dintre cele mai utilizate PhACs. Sute de tone de IBU intră în mediul
acvatic prin sistemul de canalizare din cauza metabolismului său incomplet la om [6]. IBU este găsite în
apele de suprafață în intervalul de câteva ng L-1 până la μg L-1. De exemplu, până la 9,89 μg 3 L-1 a IBU a
fost detectat în Llobregat River, spaniolă [7]. IBU a fost de asemenea găsit în Pearl R Delta, China de Sud,
cu o concentrație de 685 ng L-1 [8]. IBU poate prezenta toxicitate acută organismelor acvatice la
concentrații relevante pentru mediul înconjurător, iar evacuarea continuă a IBU în mediul acvatic ar putea
prezenta efecte ecologice pe termen lung asupra organismelor nevizate care rezultă din acumularea și
expunerea cronică continuă [9, 10].

Algele sunt larg dsunt distribuite și există în proporție mare de biomasă în mediul acvatic. Acestea
joacă un rol important în ecosistemul acvatic (de exemplu, componente esențiale în lanțurile alimentare
acvatice) [11]. IBU a fost raportat că accelerează creșterea cianobacteriilor și diminuează biomasa algelor
eucariote, ceea ce duce la inflorescențele algelor din apele dulci [12]. Modificările morfologice și
ultrastructurale ale algelorScenedesmus rubescens expuse la 1 mg L-1 IBU au fost de asemenea observate
în mod semnificativ [13]. Un studiu recent a indicat faptul că IBU a prezentat toxicitate pentru algele verzi
Chlorella vulgaris cu o valoare a 96-EC50 de 89,65 mg L-1 [14]. Speciile de alge Acutodesmus obliquus și
Nannochloropsis limnetica au prezentat, de asemenea, o sensibilitate crescută la IBU la concentrația> 100
mg L-1 [15]. Diatomele sunt cel mai dominant grup de alge din punct de vedere al numărului de specii și al
biomasei și reprezintă, de asemenea, un indicator al calității apei [16]. Cu toate acestea, toxicitatea IBU
asupra diatomei este încă neclară.

Xenobioticele pot suferi biodegradare (de exemplu, bioadsorbție și bioacumulare) în prezența

algelor în mediul acvatic. Biodegradarea a fost identificată ca o modalitate eficientă de a elimina IBU [17].
Diatomele au fost utilizate pentru a prezice toxicitatea și biodisponibilitatea xenobioticelor în mediile
acvatice [18]. Biodisponibilitatea poluanților, inclusiv toxicitatea acestora, depinde de capacitatea lor de a
traversa barierele biologice (de exemplu, membranele celulare) și este de obicei prezisă de concentrația
intracelulară a contaminanților. Cu toate acestea, mecanismele de biodegradare, cum ar fi bioacumularea
și bioadsorbția IBU de către celulele de diatome, nu sunt încă pe deplin înțelese. În plus, după eliberarea
în mediul înconjurător, pot apărea diferite transformări ale IBU, producând produse cu profil
ecotoxicologic diferit și comportament ecologic, conducând la efecte neașteptate asupra mediului. S-a
constatat că anumiți metaboliți ai PhAC sunt mai toxici decât părinții lor. De exemplu, s-au detectat
intermediari de degradare cu activitate biologică mai mare, cum ar fi carbamazepina-10, 11-epoxid, 17a-
etinilestradiol mono- și dibrominat hidrofobi în degradarea carbamazepinei și 17a-etinilestradiolului prin
microalge de apă dulce [19-21]. IBU acidul carboxilic și hidroxil IBU sunt principalii metaboliți detectați în
mediu și prezintă o rată mai scăzută de eliminare în instalațiile de epurare [6]. Mai mulți metaboliți IBU,
cum ar fi IBU hidroxil, IBU acetil, IBU hexozid, au fost de asemenea observate la Lemna gibba L [22]. Până
în prezent, se cunosc relativ puține despre produsele de biodegradare și transformare ale IBU în diatome.

Obiectivul acestui studiu a fost de a explora efectele IBU asupra diatomului tipic de apă dulce
Navicula sp. Și a mecanismului de biodegradare al IBU în diatome. Toxicitatea IBU asupra diatomei a fost
evaluată prin rata de creștere a algelor, conținutul de clorofilă și carotenoide într-un test de laborator de
10 zile. Absorbția IBU de către Navicula sp. a fost explorat pentru a ilustra mecanismul său de biodegradare
pe parcursul a 15 zile de incubare. Căile de degradare ale IBU în Navicula sp. a fost elucidată cu accent pe
identificarea produselor de transformare. Aceste informații vor avea implicații importante pentru a
înțelege mai bine riscul global de mediu al contaminanților în curs de dezvoltare.

2 Materiale și metode

2.1 Chimicalele

IBU au fost achiziționate de la Sigma-Aldrich (China). Metoda de calitate HPLC și acetonitrilul au

fost obținute de la Fisher Scientific (China) și respectiv EMD Millipore Corporation (USA). Acetat de amoniu
a fost obținut de la Shanghai Macklin Biochemical Co. Ltd. (China).

O soluție stoc IBU a fost preparată prin amestecarea IBU în metanol la 10 g L-1. Toate substanțele
chimice utilizate în acest studiu au fost de grad analitic.

2.2 Diatom Cultures

Navicula sp. a fost obținut de la Centrul de colectare a culturilor de alge pentru apă dulce de la
Institutul de Hidrobiologie (Colecția FACHB, Wuhan, China).

Diatomele au fost inoculate în 500 ml mediu steril D1. Mediul D1 conține (pe litru) 120 mg
NaN03, 40 mg K2HPO4, 70 mg MgS04.7H20, 20 mg CaCI2 2H2O, 80 mg KH2PO4, 100 mg Na2SiO3.9H2O,
0.2 mg MnSO4, 5 mg citrat feric, 1 ml A5 soluție și 20 ml de extracte de nămol. Soluția A5 constă din 2,86
mg L-1 H3BO3, 1,86 mg L-lMnCl2,4H20, 0,22 mg L-1 ZnS04-7H20, 0,39 mg L-1 Na2MoO4 2H2O, 0,08 mg L-
16 CuS04.5H20 și 0,05 mg L-1Co (NO3) 2, 6H2O. Extractele de nutrienți din sol au fost preparate după cum
urmează: 100 g de soluri de grădină au fost adăugate la 500 ml apă deionizată și fierte timp de 3 ore timp
de 3 zile consecutive. Soluția de sol a fost filtrată printr-o sticlă de sticlă Whatman AH [23]. Culturile au
fost incubate la 23 ± 1 ° C într-un incubator sub un regim de iluminare controlat. Lampile fluorescente au
fost utilizate ca sursă de lumină cu un ciclu automat / luminos de 12 ore / 12 ore. Iluminarea a fost
menținută la 4000 Lux.

2.3 Măsurarea creșterii celulare, a conținutului total de clorofil și carotenoid Toxicitatea IBU
asupra diatomei a fost determinată prin monitorizarea creșterii celulare, a conținutului total de clorofil și
carotenoid al Navicula sp .. Lotul experimele au fost efectuate în flacoane Erlenmeyer de 100 ml conținând
50 ml mediu D1, care a fost inoculat înainte la o densitate inițială a algelor de 3 x 105 celule. S-au adăugat
soluții stoc IBU în mediu pentru a obține concentrațiile inițiale (0, 0,1, 0,5, 1, 10, 50 și 100 mgL-1).
Flacoanele au fost incubate într-un incubator iluminant (12 h / 12 h, zi / noapte) cu o intensitate a luminii
de 4000 lux la 25 ° C timp de 10 zile. Densitatea optică a suspensiei de alge a fost efectuată la 680 nm
(OD680) pe un spectrofotometru UV-2550 (Shimadzu, Japonia). Numerele inițiale ale celulelor de diatom
s-au măsurat prin utilizarea unei camere de numărare sub un microscop luminos (Nikon, E100, Japonia ).
Rata de creștere a diatomei a fost monitorizată pe baza unei corelații între OD680 și numerele de celule
ale algelor. Numerele de celule ale lui Navicula sp. în timpul incubării a fost determinată prin următoarea
ecuație:

Numere de celule algale de Navicula sp (celule mL-1) = 555,56 x OD680 + 2,67 echiv. (1) Ratele
de creștere celulare μ (d-1) au fost calculate prin montarea numerelor de celule la funcția exponențială
an7 după cum urmează [23]: μ = ln (N / No) / t. Eq. (2) unde N0 este densitatea suspensiei de alge la
momentul zero, N este densitatea algelor timp t, iar μ este rata de creștere.
 Conținutul de clorofil din Navicula sp. a fost determinată așa cum este descris de Xiong și colab.
[21]. Pe scurt, s-a colectat o suspensie de diatom de 10 ml și s-a centrifugat la 3506 g timp de 20 min.
Peleta a fost re-suspendată cu 10 ml de metanol: H20 (9: 1, v / v) și incubată la 60 ° C într-o baie de apă
timp de 15 min. Amestecul a fost din nou centrifugat la 3506 g timp de 10 minute. Densitatea optică a
supernatantului a fost măsurată la lungimi de undă 665, 652 și 470 nm într-un spectrofotometru UV-2550
(Shimadzu, Japonia). Concentrațiile de clorofil-a, clorofil-c și carotenoid ale extractelor au fost calculate
prin ecuațiile după cum urmează [21]:

Clorofila a (mg L-1) = 16,82 A665 - 9,28 A652 Eq. (3) Clorofil c (mg L-1) = 36,92 A652 - 16,54 A665
echivalent. (4) Carotenoid (mg L-1) = (1000 A470 -1,91 Ca - 95,15 cm3) / 225 echiv. (5) unde A665, A652 și
A470 au fost absorbanțele la lungimi de undă 665, 652 și 470 nm. Ca și Cc au fost concentrațiile de clorofilă
și clorofilă c în Navicula sp.

2.4 Absorbția IBU de către Navicula sp.

Absorbția IBU de către Navicula sp. a fost efectuată în flacoane Erlenmeyer de 100 ml conținând
50 ml de mediu D1. Pe baza rezultatelor din punct de vedere al toxicității, au fost selectate trei nivele
nominale spiking8 de IBU (1, 10 și 50 mg L-1) pentru a explora absorbția IBU în Navicula sp. Toate
flacoanele s-au agitat tim1111p de 15 zile la 150 rpm la 25 ° C într-un incubator (12 h / 12 h, zi / noapte).
La 0, 2, 4, 7, 10 și 15 zile după tratament, trei replicate de soluție de 10 ml au fost transferate în tuburi de
centrifugare de 10 ml și centrifugate la 3506 g timp de 20 min. S-a determinat concentrația IBU în
supernatant. Reziduul a fost spălat și resuspendat cu 10 ml apă distilată urmată de centrifugare la 3506 g
timp de 20 min. Supernatantul a fost utilizat pentru a măsura IBU adsorbit pe suprafața celulozei
diatomice. Pelletul lăsat se extrage cu 4 ml diclormetan: metanol (1: 2, v / v) prin sonicare timp de 1 h,
urmată de centrifugare la 3506 g timp de 20 min. Nivelul IBU din supernatant a fost determinat să
reprezinte pentru acumularea în celulele microalgale. Au fost incluse două tipuri de controale: controalele
de alge netratate fără IBU în mediile D1 au fost folosite pentru a detecta orice contaminare cu IBU
provenind din altă parte în timpul experimentului; și medii controlate IBU-spiked fără Navicula sp. au fost
utilizate pentru evaluarea eliminării abiotice a IBU în mediu. Toate probele au fost filtrate prin filtre de
membrană de 0,22 μm înainte de analiză. Toate analizele s-au efectuat în triplicat.

2.5 Analiza cromatografică

Din cauza lipsei de substanțe chimice standard pentru referință, identificarea structurală a
intermediarilor IBU sa bazat pe analiza cromatogramei ionice totale (TIC) și a spectrului de masă
corespunzător. Analiza IBU și identificarea produselor sale de transformare au fost efectuate pe un sistem
HPLC Agilent 1290 (Agilent9 Technologies, Santa, CA) cuplat cu o spectrometrie de masă tandem de
ionizare prin electrospray (LC-MS / MS). Separarea cromatografică a IBU și a metaboliților săi a fost
realizată cu o coloană poroshell 120 EC-C18 (4,6 x 50 mm, mărimea particulei 2,7 pm, Agilent Technologies)
la 35 ° C. Volumul injecției și viteza de curgere au fost de 20 pL și, respectiv, de 0,3 ml / min. Eluarea a fost
efectuată prin fază mobilă constând din apă cu 0,1% NH4OAc (faza mobilă A) și acetonitril cu acid formic
0,1% (faza mobilă B). Faza mobilă a fost programată (în legătură cu faza mobilă B) după cum urmează: 0 -
0,5 min: 40% B; 0,5-4,5 min: a crescut la 90% B la 4,5 min; 4,5-4,6 min: a rămas la 90% B timp de 0,1 min;
4.6-6.0 min: a scăzut la 40% B în 0,5 min și a rămas la 40% B până la 7,0 min. Analizele s-au determinat prin
utilizarea unui detector selectiv de masă triple quad Agilent 6430 echipat cu o sursă de ionizare prin
electrospray (ESI) operată în modul ion negativ cu o tensiune capilară de 4,0 kV. Testarea gazului de
uscareratura și debitul au fost setate la 325 oC și 11 L min-1, respectiv. Presiunea nebulizatorului a fost de
35 psi. Au fost utilizate metode multiple de monitorizare a reacțiilor specifice (MRM) și datele au fost
obținute și procesate prin utilizarea software-ului Masshunter Qualitative and Quantitative (B.06.00) .

2.6.6 Analiza statistică

Toate tratamentele din acest studiu au fost efectuate în triplicat. One-way ANOVA a fost utilizată
pentru a evalua semnificația diferențelor în rata de creștere, conținutul de clorofil și carotenoid din
Navicula sp. între controale și tratamente IBU. O diferență a fost considerată statistic semnificativă la un
nivel de 0,05. Toate analizele statistice au fost efectuate cu ajutorul SPSS 16.0.

3. Rezultate și discuții

3.1 Efectele IBU asupra creșterii Diatom Navicula sp.

Rata de creștere sau inhibiția este un factor cuprinzător pentru determinarea fitotoxicității
xenobioticelor la algele de apă dulce [24] și a fost cuantificat din măsurătorile biomasei algelor. Pe
parcursul celor 10 zile de incubare, rata de creștere a Navicula sp. a variat cu concentrația inițială de IBU
și timpul de expunere (Figura 1). Creșterea stimulării la concentrații scăzute (0,1-1 mg L-1) de IBU a fost
observată pe Navicula sp. Efectul diferit al IBU cu concentrații diferite asupra ratelor de creștere a Navicula
sp. poate fi explicată prin hormoză, care se caracterizează printr-o stimulare cu doză mică și o inhibare a
dozei mari. Deși s-au efectuat puține studii pentru investigarea mecanismelor moleculare și celulare
pentru relația hormonală doză-răspuns în alge, fenomenul hormonelor a fost bine documentat în diverse
organisme, inclusiv în alge pentru unele substanțe chimice [25,26]. De exemplu, Kamaya și colab. [26] a
constatat că acidul 4-hidroxibenzoic a stimulat creșterea algelor de pește verde Pseudokirchneriella
subcapitata la concentrații mai mici cuprinse între 0,1 până la 1,0 mmol / L și a prezentat toxicitate algelor
la o concentrație mai mare. În acest studiu, rata de creștere a scăzut substanțial când concentrația inițială
a IBU a fost mai mare de 50 mg L-1. De exemplu, după 2 zile de cultivare, rata de inhibare a creșterii a
crescut până la 100% la o concentrație IBU11 inițială de 50 mg L-1. În mod similar, Geiger și colab. [14] a
constatat că IBU poate inhiba în mod semnificativ rata de creștere a Chlorella vulgaris cu o valoare 48 h-
EC50 de 82,25 mg L-1 și valoarea EC50 a crescut cu creșterea timpului de expunere. În plus, rata de creștere
a Navicula sp. pot fi influențate de timpul de expunere la un nivel superior al IBU. De exemplu, rata de
creștere a algelor a fost complet inhibată în ziua 2 și a crescut la 0,22 d-1 în ziua 4 urmată de o scădere din
nou la 0,08 d-1 în ziua 7, când a fost întărită cu 100 mg IB-1. Aceste rezultate au sugerat că IBU a avut
efecte toxice asupra creșterii lui Navicula sp. la concentrații ridicate. Rezultate similare au fost descrise
pentru Chlorella vulgaris tratată cu IBU [14]. Creșterea ratei de creștere în ziua 4 și următoarea scădere în
ziua 7 a sugerat o creștere recuperată a Navicula sp. și o daună ulterioară reînnoită prin creșterea timpului
de expunere. Mecanismul de recuperare ar putea fi datorat unei realocări a resurselor pentru repararea
daunelor, care să conducă la o reducere a daunelor celulare sau să sporească rezistența IBU. Inhibarea
finală a creșterii după 7 zile poate să apară din cauza suplimentării IBU sau a potențialului său de absorbție
a produselor de transformare bioactivă cu un timp de expunere crescut sau datorită modificărilor în
distribuția subcelulară a IBU sau a metaboliților săi. Astfel, este indicat faptul că IBU poate fi o amenințare
la adresa dezvoltării Navicula sp. la o concentrație ridicată în ecosistemele acvatice.

Clorofilele joacă roluri cheie în fotosinteză, inclusiv recoltarea ușoară, transferul de energie și
conversia energiei luminoase, iar inhibarea creșterii algelor este în mod obișnuit legată de modificarea
biosintezei clorofilelor în condiții de mediu (de ex. compuși) [27]. Astfel, conținutul de clorofil din Navicula
sp. este, de asemenea, unul dintre indicatorii cei mai utilizați și mai sensibili pentru biomasa algelor.
Clorofila (Chl-a) este un răspuns comun de stres în microalge [28]. Conținutul Chl-a al Naviculasp. (p <0,05)
la 10-100 mg L-1 IBU după 10 zile de expunere (Figura 2) . Aceste constatări sugerează că IBU la concentrații
mai mari poate inhiba fotosinteza Navicula sp., Care este în concordanță cu observațiile asupra efectelor
IBU asupra microalga S. rubescens de apă dulce [13].

Carotenoizii sunt grupul de compuși bioactivi sintetizați prin fotosintetice și / sau organisme
non-fotosintetice și pot juca, de obicei, un rol protector în microalga sub stresul mediului. De exemplu,
aceștia pot reacționa cu produsele de peroxidare a lipidelor pentru a termina reacțiile în lanț sau a
dezactiva clorofila excitată pentru a curăța ROS acumulat în cloroplast [29]. Ca și clorofila, carotenoizii din
Navicula sp. Sunt semnificativ mai mari la concentrații mai mici de 1 mg L-1 și mai mici la concentrații de
peste 10 mgL-1. În general, la concentrații mari de IBU (50 și 100 mg L-1), carotenoizii nu pot dezactiva
clorofila excitată sau nu reacționează cu produsele de peroxidare a lipidelor și astfel afectează creșterea
algelor.

3.2 Degradarea IBU de către Diatom Navicula sp.

zilele de incubație, până la 60,0%, 27,2% și 19,7% IBU au fost îndepărtate prin diatomul Navicula
sp., respectiv, când concentrația inițială a fost de 1,10 și, respectiv, de 50 mg L-1 (Figura 3). Rata de
îndepărtare a scăzut pe măsură ce concentrațiile IBU au crescut, indicând faptul că o concentrație mai
mare a IBU a avut un impact negativ asupra biodegradării IBU și acest lucru se datorează probabil
capacității limitate de îndepărtare a algelor. Aceste rezultate sunt în concordanță cu observațiile raportate
anterior că cele mai mari rate de degradare obținute de C. mexicana și S. obliquus au fost găsite în mediu
modificat cu cea mai mică carbamazepină (1 mg L-1) [21]. IBU nu a prezentat o degradare în mediu cu 10
și 50 mg L-1 IBU, cu valori estimate t1 / 2 mai mari decât perioada experimentală de 15 zile (Figura 3). De
exemplu, în tratamentul cu 10 mg L-1 IBU, fracțiunea de IBU a scăzut la aproximativ 72,8% din IBU inițial
spiked în ziua 10 și apoi nu a mai scăzut. Tendințe similare au fost observate în tratamentul cu 50 mg L-1
IBU cu o eficiență de îndepărtare de 10,3% în ziua 15. Se poate explica și prin scăderea substanțială a
vitezei de creștere a diatomilor în acest tratament, conducând la o reducere semnificativă a acumulării sau
a degradării . Zou și colab. a constatat că timpul de înjumătățire al IBU a fost de aproximativ 10 zile în
lacurile suedeze cu concentrație scăzută [30]. Adăugarea de Navicula sp. a inhibat semnificativ degradarea
IBU la 1 mg L-1 (p <0,05), cu t1 / 2 estimat la 12,0 ± 1,5 zile, comparativ cu 9,6 ± 1,8 zile în controlul liber
algei, sugerând că prezența Navicula sp. ar putea prelungi timpul de stres al IBU în mediul acvatic. Este
probabil că IBU a fost preluat de Naviculasp. și apoi eliberat în apă, făcând Navicula sp. pare a fi o "casă de
poștă" pentru IBU, astfel încât existența IBU a fost extinsă în mediul acvatic. Degradarea xenobioticii ar
putea fi influențată de diferite specii de alge. De exemplu, Kumar și colab. au raportat anterior că algele
verzi verzi ar putea accelera degradarea triciclazolului în apa nedecorticată [31]. S-a observat degradarea
diclofopului de Pyrenoidosa Chlorella14 cu o valoare t1 / 2 de 8,7 zile, în timp ce valorile calculate t1 / 2
ale diclofopului în cultura Chlorella vulgaris și Scenedesmus obliquus au fost de 4,3 și respectiv 11,6 zile
[32].

sunt de obicei legate de suprafețele celulare ale algelor prin bioadsorbție sau se acumulează în
interiorul celulelor prin bioacumulare [33]. Bioadsorbția IBU pe suprafețele celulare ale Navicula sp. a fost
neglijabilă sau sub limitele de detecție prin metoda utilizată atunci când concentrațiile IBU spicate au fost
<50 mg L-1, în timp ce IBU adsorbit pe peretele celular a fost detectat în mod constant în timpul incubării
la o concentrație de IBU> 50 mg L-1 (Figura 4) . IBU a fost detectat a fi de 4,0 mg g-1 în suprafața celulară
în Navicula sp. și a atins 13,1 mg g-1 în ziua 4 urmată de o scădere de 3,7 mg g-1 la 15 d în mediu modificat
cu 50 mg L-1 IBU. Scăderea IBU în stadiul ulterior al incubării poate fi atribuită metabolismului sau
desorbției sale din pereții celulelor diatomei.

Acumularea celulară a IBU-mamă în Navicula sp. a fost găsit în primele 4 zile la 1 mg L-1 sau 10
mg L-1 (Figura 4). La concentrația IBU inițială de 1 mg L-1, concentrația intracelulară a fost de 14,9 mg g-1
și, respectiv, 16,1 mg g-1 în zilele 2 și 4 în Navicula sp. Rezultatele similare au fost observate în tratamentul
cu 10 mg IBU L-1 în Navicula sp. cu o concentrație intracelulară IBU maximă de 24,3 mg g-1. Bioacumularea
a jucat un rol important în inhibarea creșterii algelor, conducând la acumularea de ROS și la întreruperea
proceselor fiziologice sau biochimice ale algelor [34, 35]. După expunerea timp de 7 zile, IBU nu a fost
detectată în interiorul celulelor, indicând faptul că viteza de creștere a algelor poate fi recuperată. Aceste
rezultate sunt în concordanță cu tendința observată a ratei de creștere.

3.3 Soarta metabolică a IBU în Navicula sp.

În timpul celor 15 zile de incubare, celulele de diatom în mediu modificate cu 10 mg L-1 IBU au
fost colectate, extrase prin amestecul de metan și diclormetan și preparate pentru identificarea
metaboliților pe un UPLC-MS / MS. Identificarea structurală tentativă a tuturor intermediarilor a fost
făcută prin examinarea ionului molecular (M - H) - și a modelului său de fragmentare. În general, în timpul
incubării s-au găsit un total de 8 metaboliți în celulele diatomei, incluzând TP 225, TP 239, TP 299, TP 313,
TP 353, TP 339, TP 369 și TP 399. Informațiile structurale și de fragmentare pentru IBU și intermediarii de
degradare ai acestuia sunt arătați în Tabelul 1. PTP 239 (M- la m / z 239, Figura S2) a fost probabil generat
de două hidroxilare succesive a IBU. Fragmentele m / z 223 și 207.1 pot fi atribuite pierderii succesive de
H2O de lalanțul izopropilic. Clusterul de ioni la m / z 148,9 pentru TP239 a indicat scindarea unei grupări
acetoxil (-CH2COOH) de TP 239. TP 313 (M- la m / z 313, Figura S3) a fost probabil generat prin hidroxilare
și o acilare ulterioară din TP 239. Fragmentele la m / z 254,9 sunt atribuite în cea mai mare parte scindării
grupării acetil. Metaboliții TP 225 și TP 299 au fost de asemenea obținuți prin procesul de hidroxilare a IBU
(figurile S4 și S5). Ionii de fragment m / z 209.3 au fost probabil rezultatul unei pierderi de hidroxil a TP
225. Ionul la m / z 255,3 a fost produsul ion după ce a pierdut o grupare carboxil. Ionul molecular al TP 399
a sugerat o greutate moleculară de 400 și a dat ionii de fragment major la m / z 193,2, corespunzând
glucuronidului (Figura S6, abundență relativă 100,0%). TP 399 a fost determinat experimental ca fiind un
metabolit conjugat cu glucuronid. Detaliile deducerii sunt disponibile în Figura S6. Ionii fragmentului la m
/ z 367,3, 337,3 și 278,0 corespunde unei pierderi consecutive de -OH în glucuronid și apoi scindarea
inelului heterociclic. Vârfurile la m / z 163.1 și 133.2 corespundeau probabil pierderii grupării carboxil și a
grupării acetoxil a părții IBU (Figura S6). Metabolitul TP 369 a fost format prin încorporarea 1-OH IBU de
hexozid. Ionii principali ai fragmentului la m / z 163,2 corespunde unei decarboxilare a 1-OH IBU (Figura
S7, abundență relativă 100,0%). Vârfurile la m / z 337,3 și 193,2 pot fi atribuite îndepărtării -OH de la
hexozidă și 1-OH IBU, respectiv. În mod similar, metaboliții TP 353 și TP 339 au fost identificați ca produse
prin combinarea IBU cu hexozidul. Ionul fragmentelor corespunde în principal clivajului IBU și hexozidului
(figurile S8 și S9). Pe baza intermediarilor de degradare identificați și a cineticii lor în timpul incubării, o
posibilă cale de degradare a IBU în Navicula sp. este propus (Figura 5). Transformarea IBU de către Navicula
sp. ar putea fi împărțite în mai multe căi subterane. Calea principală a fost oxidarea IBU la TP 239 (figura
5, reacția A). Enzimele (de exemplu, citocromul P-450, CYP 450) au jucat roluri importante în
biotransformarea compușilor xenobiotici în alge [36]. Marco-Urrea și colab. [37] a constatat că hidroxilarea
lanțului izopropilic de IBU, obținându-se 1-OH IBU, 2-OH IBU și 1, 2-dihidroxi IBU, a fost17 principala cale
de degradare pentru IBU de către Trametes Versicolor [38]. Acest lucru este în concordanță cu rezultatele
raportate anterior pentru transformarea biologică a IBU în Lemna gibba L [22]. Nivelul de detecție al TP
239 a fost relativ scăzut și a prezentat o tendință descrescătoare (Figura 6), indicând faptul că pot apărea
alte transformări. Unele intermediari ai IBU, cum ar fi 2-OH IBU, au fost raportate pentru a arăta posibila
inhibare a activității enzimelor Daphnia magna [10, 39]. Astfel, scăderea vitezei de creștere a algelor în
ziua 2 poate fi determinată de prezența TP 239, iar viteza de creștere a fost recuperată cu scăderea
nivelului de TP 239 în zilele următoare. TP 239 a fost probabil în continuare metabolizat la TP 313 (Figura
5, reacția F). Murdoch și Hay au raportat că enzimele de codificare cu cinci gene (de exemplu, ipfABDEFHI)
[40], care au funcționat ca și dioxigenaze și îndepărtarea / adăugarea grupărilor acilice, au fost probabil
implicate în catabolismul IBU. Analiza LC-MS / MS a arătat că TP 313 a fost detectat numai la 10 d (Figura
S1), sugerând că două grupări carbinol din lanțul izopropil nu au fost stabile. Scindarea hidroxilului ar
produce TP 299 la 15 zile (Figura 5, reacția G). Reacția D a condus la formarea TP 255. Reacțiile de
demethylare însoțite de carboxilare au fost găsite în timpul metabolizării IBU la om [41], indicând faptul
că o anumită cale a metabolismului IBU în alge poate fi similară. Dar acest produs nu a fost detectat în
celulele diatomice după 2 zile de expunere datorită descompunerii sale rapide. TP 369 (Figura 5, reacția E)
a fost detectată în mod consecvent după incubarea a 2 zile, sugerând că a fost stabilă în Navicula sp. în
aceste condiții. În plus, 1-OH IBU a fost de asemenea combinat cu glucuronidul pentru a forma TP 399
(Figura 4, reacția H). Conjugarea hexazidelor cu xenobiotice la plante a fost raportată pe scară largă și este
de obicei considerată a fi activarea proceselor de detoxifiere [39, 42]. Cale suplimentară a fost derivată de
la IBU, conducând la o varietate de TP-uri asemănătoare hexozidelor prin glucuronidare (Figura 5, reacția
B). Demethylația succesivă ar conduce, de asemenea, la formarea de TP 353 și TP 339, respectiv. Formarea
TP 353 și TP 339 părea a fi metaboliți majori datorită frecvenței sale mai mari de detecție și a nivelului său
exprimat prin suprafața vârfului față de alți metaboliți (Figura 6). Comparativ cu rezultatele de toxicitate
detaliate mai sus, creșterea conținutului de Chl-a după 2 zile de expunere IBU poate fi cauzată de prezența
compușilor hexozidici.4. Concluzii În studiul de față, IBU a stimulat creșterea algelor de diatomNavicula sp.
la concentrații mai mici cuprinse între 0,1 până la 1,0 mg L-1 și substanța cu intensitate ridicată de
creșterecând concentrația inițială de IBU a fost> 50 mg L-1. În plus, IBU la concentrații mai mari (> 1 mg L-
1) poate inhiba fotosinteza Navicula sp., Indicând faptul că IBU poate fi o amenințare la creșterea Navicula
sp. la o concentrație ridicată în ecosistemele acvatice. Adăugarea de Navicula sp. a inhibat semnificativ
degradarea IBU la o concentrație scăzută, ceea ce înseamnă că el ar putea prelungi timpul de stres prin
IBU. În aceste două aspecte, introducerea continuă a IBU în apele naturale poate conduce la o acumulare
înaltă a IBU în celulele algelor și prezintă un risc potențial pentru organismele acvatice. Produsele de
conjugare a compușilor hexozidici cu IBU, cum ar fi TP 369 și TP 399, pot fi incluse în mecanismul de
detoxifiere al IBU în Navicula sp.19 TPs (de exemplu, 2-OH IBU) cu bioactivitate au fost de asemenea
detectate și pot prezenta probleme de siguranță . Activitatea altor metaboliți și efectele potențiale ale
acestora în mediul acvatic ar trebui să fie investigate în continuare. Informații de susținereDatele
complementare asociate acestui articol pot fi găsite, în versiunea online, la ... .Note Autorii nu declară un
interes financiar concurențial.Această cercetare a fost susținută financiar de Fundația Națională de Științe
Naturale din China, sub granturile nr. 21407108 și 21607106, Proiectul Științei și Tehnologiei Shenzhen
(Granturile nr. KQJSCX20160226200315 și ZDSYS201606061530079) și Fundația pentru Științele Naturale
ale SZU (Granturile nr. 827-000077 și 201444). ] ZP Jin, K. Luo, S. Zhang, Q. Zheng, H. Yang, Bioacumularea
și catabolismul prometrinei în algele verzi, Chemosphere 87 (2012) 278-284 [2] UN. Kabra, M.K. Ji, J.W.
Choi, J.R. Kim, S.P. Govindwar, B.H. Jeon, Toxicitatea atrazinei și bioacumularea și biodegradarea acesteia
într-o microalga verde, Chlamydomonas mexicana, Environ. Sci. Pollut. Res. 211 (2014) 12270-12278.20
[3] R. Tanoue, K. Nomiyama, H. Nakamura, J.W. Kim, T. Isobe, R. Shinohara, T. Kunisue, S. Tanabe,
Îndepărtarea și distribuția țesuturilor de produse farmaceutice și de îngrijire personală în pești sălbatici
proveniți din apele tratate cu apă uzată, Environ. Sci. Technol. 49 (2015) 11649-11658 [4]. L.J. Bao, K.A.
Maruya, S. A. Snyder, E.Y. Zeng, poluarea ecologică a Chinei cu poluanți organici persistenți, Environ. Pollut.
163 (2012) 100-108. [5] J. L. Liu, M.H. Wong, Produse farmaceutice și de îngrijire personală (PPCP): O
analiză a contaminării mediului în China, Environ. Int. 59 (2013) 208-224. [6] L. Ferrando-Climent, N.
Collado, G. Buttiglieri, M. Gros, I. Rodriguez-Roda, S. Rodriguez-Mozaz, D. Barceló, Studiu cuprinzător al
ibuprofenului și al metaboliților săi în experimentele lotului de nămol activ și mediul acvatic, Sci. Total
Environ. 438 (2012) 404-413. [7] A. Ginebreda, I. Munoz, M.L. De la Alda, R. Brix, J. Lopez-Doval, D. Barcelo,
Evaluarea riscului de mediu al produselor farmaceutice în râuri: Relațiile dintre indicii de pericol și indicii
diversității macroinvertebrate acvatice în râul Llobregat (NE Spania), Environ. Int. 36 (2010) 153-162 [8].
J.L. Zhao, G.G. Ying, Y.S. Liu, F. Chen, J. F. Yang, L. Wang, X.B. Yang, J.L. Stauber, M.S.J. Warne, apariția și o
evaluare a riscului la nivel de screening al produselor farmaceutice umane în sistemul Pearl River, China
de Sud, Environ. Toxicol. Chem. 29 (2010) 1377-1384. [9] N. Veldhoen, R.C. Skirrow, L.L.Y. Brown, G. Van
Aggelen, C.C. Helbing, Efectele expunerii acute la ibuprofenul nesteroidian antiinflamator pe tamponul de
rapiță nord-american (Rana catesbeiana), Environ. Sci. Technol. 48 (2014) 10439-10447.21 [10] L. Wang,
Y. Peng, X.P. Nie, B.B. Pan, P.J. Ku, S. Bao, răspunsul Gene al CYP360A, CYP314 și GST și modificări ale
întregului organism în Daphnia magna expus la ibuprofen, Comp. Biochem. Physiol. C: Pharmacol. Toxicol.
179 (2016) 49-56. [11] J.H. Guo, A. Boxall, K. Selby, Medicamentele reprezintă o amenințare pentru
producătorii primari? Cri. Rev. Environ. Sci. Technol. 45 (2015) 2565-2610. [12] I. Bácsi, V. Béres, Z. Kókai,
S. Gonda, Z. Novák, SA Nagy, G. Vasas, Efectele medicamentelor antiinflamatoare nesteroidiene asupra
cianobacteriilor și algelor în tulpini de laborator și în asamblaje naturale de alge , Environ. Pollut. 212
(2016) 508-518 [13]. I. Moro, V. Matozzo, A. Piovan, E. Moschin, F.D. Vecchia, Efectele morfo-fiziologice
ale ibuprofenului asupra Scenedesmus rubescens, Environ. Toxicol. Pharmacol. 38 (2014) 379-387 [14]. E.
Geiger, R. Hornek-Gausterer, M.T. Sacan, toxicitate unică și de amestec a produselor farmaceutice și
clorofenolilor la algele de apă dulce Chlorella vulgaris, Ecotoxicol. Environ. SAF. 129 (2016) 189-198. [15]
M. Grzesiuk, A. Wacker, E. Spijkerman, Sensibilitatea fotosintetică a fitoplanctonului la medicamentele
utilizate în mod obișnuit și dependența de statutul de fosfor celular, Ecotoxicology 25 (2016) 697-707 [16]
M.G. Potapova, D.F. Charles, diatomele bentonice în râurile SUA: distribuția de-a lungul gradienților
spațiali și de mediu, J. Biogeogr. 29 (2002) 167-187. [17] Y. Zhang, T. Lv, P.N. Carvalho, C.A. Arias, Z.H. Chen,
H. Brix, Îndepărtarea substanțelor farmaceutice ibuprofen și iohexol de către patru noispecii de plante
tlande în cultura hidroponică: absorbția plantelor și degradarea microbiană, Environ. Sci. Pollut. Res. 23
(2016) 2890-2898. [18] R.J. Wood, S.M. Mitrovic, R.P. Lim, B.J. Kefford, Cum diatomele bentonice din
cadrul a 22 comunități naturale răspund la opt erbicide comune cu diferite moduri de acțiune, Sci. Total
Environ. 557-558 (2016) 636-643 [19]. J.Y. Li, L. Dodgen, Q.F. Ye, J. Gan, cinetica de degradare și metaboliții
de carbamazepină în sol, Environ. Sci. Technol. 47 (2013) 3678-3684 [20]. H.M. Maes, S.X. Maletz, H.T.
Ratte, J. Hollender, A. Schaeffer, absorbția, eliminarea și biotransformarea 17a-etinilestradiolului de către
alga Dessmodesmus subspicatus, Environ. Sci. Technol. 48 (2014) 12354-12361. [21] J.Q. Xiong, M.B.
Kurade, R.A.I. Abou-Shanab, M.K. Ji, J. Choi, J.O. Kim, B.H. Jeon, Biodegradarea carbamazepinei utilizând
microalge de apă dulce Chlamydomonas mexicana și Scenedesmus obliquus și determinarea soiului său
metabolic, Bioresour. Technol. 205 (2016) 183-190 [22] F. Pietrini, D. Di Baccio, J. Acena, S. Perez, D.
Barcelo, M. Zacchini, expunerea la Ibuprofen în Lemna gibba L .: Evaluarea indicatorilor de creștere și
fitotoxic, detectarea ibuprofenului și identificarea metaboliților săi în plante și în mediu, J. Hazard. Mater.
300 (2015) 189-193. [23] J.Y. Zhang, Y.Y. Ni, T. Ding, C.L. Zhang, Rolul acidului humic în toxicitatea
arsenitului la diatomul Navicula sp., Environ. Sci. Pollut. Res. 21 (2014) 4366-4375. [24] OECD 201, orientări
OCDE pentru testarea substanțelor chimice: alge și cianobacterii de apă dulce, test de inhibare a creșterii.
Organizația pentru Cooperare și Dezvoltare Economică, Paris, 2011. [25] M.Z. Hashmi, Naveedullaha, H.
Shen, S.j. Zhu, C.N. Yu, C.F. Shen. Creșterea, bioluminescența și răspunsurile hormonale ale
comportamentului la pământ la substanțele chimice anorganice și / sau organice: O analiză. Environ. Int.
64 (2014) 28-39. [26] Y. Kamaya, S. Tsuboi, T. Takada, K. Suzuki. Stimularea creșterii și inhibarea23 a
acidului 4-hidroxibenzoic și a câtorva compuși înrudiți pe alga verde de apă dulce Pseudokirchneriella
subcapitata. Arc. Environ. Contam. Toxicol. 51 (2006) 537-541 [27]. X. Nie, W. Xiang, J. Chen, Z. Vladimir,
T. Un răspuns al algelor de apă dulce Chlorella vulgaris la acidul triclorizocianuric și ciprofloxacina Environ.
Toxicol. Chem., 27 (2008) 168-173 [28] I. Pancha, K. Chokshi, R. Maurya, K. Trivedi, S.K. Patidar, A. Ghosh,
S. Mishra, stres oxidativ indus de salinitate, potențial crescut de producție a biocarburanților de
microalgaScenedesmus sp. CCNM 1077, Bioresour. Technol. 189 (2015) 341-348. [29] C. Paliwal, I. Pancha,
T. Ghosh, R.K. Maurya, K. Chokshi, S.V.V. Bharadwaj, S. Ram, S. Mishra, Acumularea selectivă a
carotenoidelor prin variația mediilor nutritive și salinitatea în Synechocystis sp. CCNM 2501, Bioresour.
Technol. 197 (2015) 363-368 [30] H.Y. Zou, M. Radke, A. Kierkefaard, M. McLachlan, Variația temporală a
persistenței chimice într-un lac suedez evaluat prin comparație, Environ. Sci. Technol. 49 (2015) 9881-
9888. [31] N. Kumar, I. Mukherjee, B. Sarkar, R.K. Paul, Degradarea triciclazolului: Efectul umidității, tipului
de sol, dioxidului de carbon ridicat și algelor verzi verzi (BGA), J. Hazard. Mater. 321 (2017) 517-527. [32]
X Y. Cai, W.P. Liu, M.Q. Jin, K.D. Lin, Relația dintre toxicitatea diclofop-metil și degradarea în culturile de
alge, Environ. Toxicol. Chem. 26 (2007) 970-975. [33] S. Zhang, D. H. Lin, F.C. Wu, Efectul materiei organice
naturale asupra bioacumulației și toxicității clorbenzenelor asupra algelor verzi, J. Hazard. Mater. 311
(2016) 186-193. [34] K. Lin, L.J. Luo, P. Wang, T.G. Luan, N.F.Y. Tam, Efectele metalelor asupra biosorbției24
și biodegradarea hidrocarburilor aromatice policiclice mixte de către o alge verde de apă dulce
Selenastrum capricornutum, Bioresour. Technol. 101 (2010) 6950-6961. [35] A.V. Dordio, M. Belo, D.M.
Teixeira, A.J.P. Carvalho, C.M.B. Dias, Y. Picó, A.P. Pinto, Evaluarea absorbției și metabolizării
carbamazepinei de către Typha spp. o planta cu potential de utilizare in tratamentul fitoterapiei, Bioresour.
Technol. 102 (2011) 7827-7834. [36] F. Thies, T. Backhaus, B. Bossmann, L. H. Crimme, Biotransformarea
xenobiotică în algele verzi unicelulare, Plant Physiol. 112 (1996) 361-370 [37] E. Marco-Urrea, M. Pérez-
Trujillo, T. Vicent, G. Caminal, Abilitatea rotfungi albe pentru îndepărtarea produselor farmaceutice
selectate și identificarea produselor de degradare a ibuprofenului de către Trametes versicolor,
Chemosphere 74 (2009) 765-772. 38] J.B. Quintana, S. Weiss, T. Reemtsma, Căi și metaboliți ai degradării
microbiene a produselor farmaceutice acide selectate și apariția lor în apele reziduale municipale tratate
cu reactor cu membrană, Water Res. 39 (2005) 2654-2664. [39] M. Parolini, A. Binelli, A. Provini, Efecte
cronice induse de ibuprofen asupra bivalvei de apă dulce Dreissena polymorpha, Ecotoxicol. Environ. SAF.
74 (2011) 1586-1594. [40] R. W. Murdoch, A. G. Hay, Caracterizarea genetică și chimică a degradării
ibuprofenului de către Sphingomonas Ibu-2. Microbiology, 159 (2013) 621-632. [41] C. Zwiener, S. Seeger,
T. Glauner, F. H. Frimmel, Metabolde la biodegradarea reziduurilor farmaceutice ale ibuprofenului în
reactoarele cu biofilm și experimentele pe loturi, Anal. Bioanal. Chem. 372 (2002) 569-575. [42] P.
Schroder, C. Collins, Enzime de conjugare implicate în metabolizarea xenobiotică a xenobioticelor organice
în plante, Int. J. Phytoremed. 4 (2002) 247-265.25 Legende figura: Figura 1 Efectul concentrației inițiale a
IBU asupra ratei de creștere a Navicula sp. în ziua 2 (a), în ziua 4 (b), în ziua 7 (c) și în ziua 10 (d). Barele de
eroare reprezintă eroarea standard a mediei (n = 3). Asteriscul * indică diferențe semnificative (p <0,05)
între control și tratament. Figura 2 Efectul IBU asupra conținutului de clorofil-a, clorofil-c și carotenoid în
Navicula sp. după 10 zile de cultivare. Barele de eroare reprezintă eroarea standard a mediei (n = 3).
Asteriscul * indică diferențe semnificative (p <0,05) între control și tratament. Figura 3 Biodegradarea IBU
în prezența / absența Navicula sp. la expunerea la 1 mg L-1 IBU (a), expunerea de 10 mg L-1 IBU (b) și
expunerea la IBU de 50 mg L-1 (c). Barele de eroare reprezintă eroarea standard a mediei (n = 3). Diferitele
litere indică diferențe semnificative (p <0,05) între control și tratament. Figura 4 Acumularea celulară sau
celulele delimitate de IBU de către Navicula sp. sub diferite concentrații IBU. Barele de eroare reprezintă
eroarea standard a mediei (n = 3). Figura 5 Căi propuse pentru metabolismul IBU de către Navicula sp. în
timpul fazei de creștere. Reacțiile sunt marcate cu litere (A-H). Figura 6 Tendințele zonei de vârf ale TP 239,
TP 353, TP 369 și TP 339 în timpul perioadei de incubare a Navicula sp. expus la IBU la 10 mg L-126 Figura
1 27 Figura 2 28 Figura 3 29 Figura 4 30 Figura 5 31 Figura 6 32 Tabelul 1 Identificarea produselor de
transformare IBU formate în Navicula sp. Rezultatele produsului Produsul m / z Fragmente Timp de
structură chimică (min) 74,8, 149,1, TP 239 4,55 239,1 207,1, 223,1 TP 313 5,92 313,3 254,9TP 225 6,76
225,1 209,3TP 299 8,06 299,3 237,3, 255,3TP399 6,28 399,3 161,0, 193,2 163,1, 193,2, TP 369 6,75 369,3
337,3TP 353 6,40 353,3 177,2, 163,2TP 339 7,45 339,3 163,2a Structura propusă confirmată pe baza
interpretării spectrelor de ion de produs33