Professional Documents
Culture Documents
Definitie
Biotehnologia este o stiinta inginereasca, pluridisciplinara ce utilizeaza materia vie pentru
degradarea, sinteza si producerea de materiale noi utilizate in activitatile umane.
Foloseste microorganisme, enzime, structuri celulare si subcelulare, biocatalizatori, tehnici de inginerie
genetica etc. Se bazeaza pe discipline fundamentale:
Genetica;
Biologie moleculara
Biochimie;
Embriologie;
Biologie celulara;
si discipline aplicative:
Inginerie chimica;
Informatica;
Robotica.
Clasificarea biotehnologiilor
Biotehnologii - rosii - medicale - obtinere de produse farmaceutice
(antibiotice, vaccinuri etc.), Farmacogenetica, Terapie genetica, Clonare etc.
- verzi - agricole (cresterea tolerantei la stresuri, micropropagare
- culturi “in vitro”, inginerie genetica, reducerea cantitatilor de pesticide utilizate, cresterea valorii
nutritionale a alimentelor, îmbunatatirea aromei, gustului si texturii alimentelor, biotehnologii
zootehnice
- albe - industriale (enzime, compusi chimici utili, compusi
biologic activi din plante, biocombustibili, bioremediere, biodegradare, bioproteine, lipide microbiene,
glucide microbiene si vegetale, vitamine microbiene, enzime in produsele agroalimentare)
- albastre - marine
1 BIOTEHNOLOGIILE CLASICE
Încă din antichitate erau utilizate, în mod empiric, unele metode biotehnologice cum ar fi
fermentaţiile cu ajutorul microorganismelor, cunoscute cu câteva milenii înainte de era noastră.
Babilonienii cunoaşteau, încă din mileniul VI î.H., modul de preparare a berii precum şi
bioconversia alcoolului etilic în acid acetic (oţet). Mai târziu, în mileniul III î.H., sumerienii cunoşteau
tehnologia fabricării a peste 20 de tipuri de bere. Descoperirile au demonstrat că majoritatea
popoarelor antice utilizau drojdiile pentru fabricarea unor produse alimentare (pâine, vin, bere etc)
precum şi bacteriile pentru obţinerea derivatelor lactate.
Progrese însemnate sunt realizate începând din secolul XVII când olandezul ANTON VAN
LEEUWENHOEK (1632- 1723) a descoperit, în anul 1680, la microscopul ce l-a inventat, existenţa
unei lumi microbiene, necunoscută până atunci. La microscopul său cu putere de mărire de circa 300
de ori, a observat micile vietăţi pe care le-a numit “animalcule”, cu forme sferice, drepte sau spiralate,
care trăiesc în apa de râu, decoctul de fân, salivă şi mustul de bere. Cercetările sale au făcut obiectul a
112 comunicări ştiinţifice, prezentate la Royal Society of London.
În secolul XIX, savantul francez LOUIS PASTEUR (1822 - 1895) a demonstrat că în procesul de
fermentaţie alcoolică are loc transformarea glucidelor în alcool etilic, cu degajare de CO2, proces care
1
furnizează energia necesară celulelor de drojdii ce se dezvoltă chiar în absenţa O 2. Concomitent
extinde studiile asupra fermentaţiilor butirică şi lactică.
În timpul primului război mondial, WEIZMANN a descoperit fermentaţia acetono- butanolică iar
produşii derivaţi i-a folosit la sinteza cauciucului sintetic (butadienă) şi a unui exploziv denumit
cordiţă. Cercetările biologului scoţian ALEXANDER FLEMING, iniţiate în anul 1929, au deschis era
microbiologiei industriale moderne, prin elaborarea bazelor de obţinere a penicilinei. A urmat
descoperirea streptomicinei de către colectivul condus de WAKSMAN (1943) şi al
chloramphenicolului creat de SMITH şi WORREL (1953). Până în anul 1959 s-au elaborat peste 4000
de antibiotice, perfecţionându-se tehnicile şi instrumentarul necesar în industria farmaceutică
(bioreactoare automatizate).
Ca rezultat al acestor descoperiri, la jumătatea anilor ’60 a apărut, cu o mare forţă de dezvoltare,
biologia industrială, capabilă să producă o schimbare fundamentală a tehnicilor de fabricare a unui
număr mare de produse alimentare, farmaceutice şi chimice. Folosind microorganisme specifice,
implicate în diferite fermentaţii anaerobe, s-au produs proteine alimentare şi furajere, aminoacizi,
aromatizanţi, acizi organici, îndulcitori alimentari, solvenţi organici, enzime, medicamente precum şi
noi surse energetice.
2 BIOTEHNOLOGIILE MODERNE
2
În S.U.A., activitatea uzinelor biotehnologice s-a concentrat, iniţial, pe producerea siropului de
fructoză prin fermentarea porumbului, realizându-se anual peste 500.000 tone High Fructose Corn
Syrup, cu multiple utilizări în industria alimentară şi farmaceutică. Fructoza are o putere de îndulcire
superioară zaharozei şi glucozei, fiind unicul glucid acceptat în alimentaţia diabeticilor. Alte programe
naţionale americane au urmărit obţinerea, prin biotehnologii, a necesarului de medicamente, vaccinuri,
acizi organici (citric, acetic, fumaric, lactic), a unor aminoacizi, a proteinelor macromoleculare şi a
drojdiilor de panificaţie. Randamentele ridicate ale biotehnologiilor americane s-au datorat aplicării în
producţie a rezultatelor celor 45 companii de inginerie genetică, orientate în direcţia recombinării
acizilor nucleici din diferite specii vegetale şi a celor circa 700 de societăţi specializate în
biotehnologii (firmele Cetus- 1970, Genentech- 1976, Eli Lilly, Genex, Genencor, Biogen, Centocor,
Immunex, Genzyme, Hybritech, Syntex etc).
În fosta U.R.S.S. existau în anii ’80 peste 100 de uzine biotehnologice dintre care 86 produceau
proteine monocelulare pentru consum zootehnic iar celelalte produceau aminoacizi, hormoni,
vitamine, antibiotice, enzime şi lipide. Ca substrat nutritiv pentru microorganisme se foloseau, cu
precădere, deşeuri cu origine forestieră, agricolă şi industrială.
În Europa de Vest programele naţionale de investiţii au stimulat apariţia unor mari uzine
biotehnologice la Braunschweig (Germania), Cambridge, Mill Hill, Porton Down, Slough (Anglia),
Delft (Olanda), Strasbourg, Compiégne, Toulouse, Rhône- Poulenc (Franţa), Pavia (Italia) etc.
În uzinele biotehnologice, bazate pe tehnici moderne de microbiologie industrială, se folosesc
bioreactoare speciale cu factori dirijaţi, cu capacităţi între 10.000-250.000 litri (cele mai frecvente de
20.000 litri). Prin perfecţionarea tehnicii de cultivare s-a ajuns la un flux continuu în care se menţin
constante condiţiile de viaţă microbiană (temperatură, pH, oxigenare, nutriţie minerală şi organică),
folosind un sistem modern de programare pe computere.
Coordonarea activităţii uzinelor biotehnologice şi elaborarea programelor naţionale de investiţii
intră în atribuţiile societăţilor specializate care devin, treptat, priorităţi locale şi naţionale, asigurând
legături indispensabile între bioştiinţe şi bioindustrii precum şi transferul de tehnologii ultramoderne.
Dacă în anul 1983 existau, pe plan mondial, 450 societăţi de biotehnologie, în următorii 10 ani s-a
ajuns la 1.700 societăţi în S.U.A., Europa şi Asia. O activitate intensă desfăşoară cele peste 60 societăţi
biotehnologice din Franţa: Immunotech, Genset, Transgéne- Mérieux, Calliope, Zymogenetics, Germe,
Coletica, Gist- Brocades, Bio- Europe etc .
Bilanţul activităţii acestor societăţi şi uzine specializate a fost prezentat la cel de al VII-lea
Congres European de Biotehnologie, ţinut la Nisa în februarie 1995, la care au participat 70 de
societăţi naţionale, inclusiv din România.
Evaluarea produselor tehnologice obţinute pe plan mondial la nivelul anului 1990 totaliza cifra
de 250 miliarde de dolari din care: 50 miliarde din producerea de etanol, 42,8 miliarde dolari din
produse agroalimentare provenite din porumb, 40,7 miliarde de dolari din antibiotice, 21,3 miliarde
dolari din vaccinuri, 7,5 miliarde dolari din aminoacizi, 6,1 miliarde dolari din hormoni, 4,6 miliarde
de dolari din acizi organici etc .
Extinderea biotehnologiilor în toate ţările dezvoltate şi slab dezvoltate, ar putea conduce nu
numai la rezolvarea unor probleme economice locale ci şi la modificări radicale în structura
industriilor alimentare, chimice şi farmaceutice, cu efecte benefice imediate, pe plan naţional şi
mondial. Alegerea profilului de activitate pentru fiecare uzină biotehnologică, din diferite sau
macrozone populate, merită o atenţie deosebită, urmărindu-se ca grefarea sistemelor tehnologice să
corespundă cu situaţiile economice şi sociale ale populaţiilor respective. Astfel, crearea de cicluri
scurte de producere a proteinelor monocelulare prin biotehnologii poate prezenta avantaje foarte mari
în rezolvarea problemei alimentaţiei umane, în dezvoltarea sectorului zootehnic, protecţia solului,
reducerea ritmului de despădurire şi valorificarea eficientă a forţei de muncă rămasă disponibilă.
Ca o imagine retrospectivă a evoluţiei biotehnologiilor clasice şi moderne se poate sublinia că
„prima revoluţie biotehnologică” lansată prin lucrările savantului LOUIS PASTEUR, a asigurat
difuzarea vaccinurilor şi a primelor antibiotice, având ca efect imediat salvarea multor vieţi omeneşti.
Cea de a „doua revoluţie biotehnologică”, declanşată de şcolile microbiologice japoneze şi americane,
în ultimele 3 decenii, a început să-şi facă simţită contribuţia benefică în asigurarea alimentaţiei şi a
dreptului la viaţă a sute de milioane de oameni, mai ales a copiilor din lumea a III- a, care mor anual
din cauza subnutriţiei cronice.
3
Progresele imense înregistrate în microbiologia mondială, după cel de al doilea război mondial,
l-au determinat pe ilustrul genetician FRANÇOIS JACOB, laureat al Premiului Nobel, să scrie: „În
câţiva ani, omul a avut surpriza să constate că, fără microorganisme, această lume n-ar fi fost ceea ce
este în prezent”.
5
hormon de creştere, obţinut prin inginerie genetică, este pur din punct de vedere chimic, foarte
omogen, liber de viroze şi cu o metionină în plus faţă de hormonul uman.
Firma Kabi Vitrum din Suedia a preluat suşa americană K-12 şi a produs hormonul pe cale
industrială astfel că 1 litru de cultură bacteriană să realizeze, în 7 ore, o cantitate de hormon egală cu
cea extrasă din 60 hipofize umane şi la un preţ de cost mai redus de 3 ori. Hormonul obţinut prin
biotehnologie poate fi folosit la stimularea creşterii, atât la oameni cât şi la animale domestice.
d. Interferonul. A fost descoperit de ISAACS şi LINDENMANN (1957), în Anglia, sub forma
unei proteine globulară, produsă de leucocitele din celula animală sau umană, având rol de apărare
antivirală şi antitumorală, atunci când un virus pătrunde în organism. Interferonul endogen, cât şi cel
administrat prin injecţii, stimulează sistemul imunitar, înhibă înmulţirea celulelor anormale şi combate
bolile de origine virală (gripă, hepatită, zona Zoster).
Întrucât producerea interferonului prin extracţii din celule sanguine şi fibroblaste este foarte
scumpă şi laborioasă, W. GILBERT (1980) din Boston (S.U.A.) a încercat procedeul de sinteză a
secvenţelor de ADN corespunzătoare unor gene modificate, pe care le-a inclus într-o plasmidă şi le-a
transferat în celulele bacteriene de Escherichia coli. Ulterior, în anul 1981, cercetători de la
universitatea Seattle-Washington, în colaborare cu firma Genentech din California, au reuşit să
transfere genele interferonului leucocitar în celulele drojdiei de bere (Saccharomyces cerevisiae) cu
genom modificat. Randamentul a devenit destul de mare în sensul că la 1 litru de mediu nutritiv de
celule de levuri s-au produs 25.000 de unităţi de interferon.
În prezent, interferonul leucocitar şi fibroblastic se produce la un preţ de cost destul de redus, în
urma reuşitei de transfer a genelor în celulele bacteriene de Escherichia coli şi Methylophilus
methylotrophus. Purificarea şi testele chimice şi farmacologice s-au făcut în unităţi de profil din
S.U.A., Japonia, Anglia, Franţa, Suedia şi Israel, urmărindu-se efectele în combaterea cancerului, prin
apărarea limfocitelor capabile să distrugă celulele canceroase. De asemenea s-a testat, cu bune
rezultate, eficacitatea în tratarea altor boli cum ar fi keratita herpetică, papilomul laringian, scleroza în
plăci, guturaiul, gripa, hepatita şi zona Zoster.
Mai recent, firma internaţională de biotehnologie Biogen din S.U.A. a reuşit să perfecţioneze o
tehnologie prin care se produce o cantitate de interferon de 1.000 de ori mai mare decât cantitatea
obţinută prin prelucrarea aceluiaşi volum de sânge uman, produsul fiind utilizat, cu mare succes, şi în
combaterea hepatitei (B, C)
e. Cortizonul- Este un hormon steroidic cu o eficacitate foarte ridicată în tratamentul
reumatismului articular. Sinteza chimică a cortizonului se realizează în 37 de etape. Folosind calea
biotehnologiilor, prin înmulţiea ciupercii Rhizopus arhizus care hidrolizează progesteronul, sinteza
cortizonului s-a redus la numai 11 etape, cu un preţ de cost mai redus de 400 de ori.
f. Hormonii sexuali. Numeroase microorganisme eucariote conţin molecule de tip hormonal care
joacă un mare rol în manifestările sexualităţii, unele dintre ele fiind de natură steroidă. O mare parte
dintre hormonii sexuali sunt sintetizaţi prin metabolismul bacterian dar, în majoritatea cazurilor,
acţiunea microbiană constă dintr-o simplă bioconversie a unui compus natural sau obţinut printr-o
sinteză chimică.
Sterozii sexuali, cu aplicaţii în chimia farmaceutică, sunt transformaţi (bioconvertiţi) prin
procese de oxidare, reducere, hidroliză, condensare şi izomerizare.
Reacţiile de oxidare sunt de 4 tipuri: hidroxilarea, dehidroxilarea, în oxidarea grupărilor hidroxil
şi degradarea oxidativă a catenelor laterale, în urma cărora se obţin corticosteron, hidroxiprogesteron,
homoprogesteron, hidrocortizon etc. La aceste reacţii participă, după caz, microorganisme din genurile
Aspergillus, Curvularia, Fusarium, Flavobacterium, Glomerella, Mycobacterium, Pellicularia şi
Rhizopus.
Reacţiile de reducere se realizează prin hidrogenarea la nivelul grupărilor cetonice sub acţiunea
microorganismelor din speciile Rhodotorula glutinis şi Kloeckera jensenii, implicate în sinteza unor
prostaglandine (sulprostone).
Reacţiile hidrolitice au acţiune asupra esterilor, cu eliberarea grupării OH din steroid sau asupra
eterilor, cu transformarea saponinelor, în prezenţa mucegaiului Penicillium chrysogenum, activând
compuşii cu proprietăţi terapeutice.
6
2.5. BIOSINTEZA VITAMINELOR
Încă din anul 1906, HOPKINS a stabilit că în alimentaţia animalelor sunt absolut necesari
“factori accesorii” care se găsesc în drojdia de bere. Ulterior, CAZIMIR FUNK (1912) a izolat din
drojdie acidul nicotinic şi a dat denumirea de vitamine pentru acest grup de substanţe.
Majoritatea microorganismelor sunt capabile să sintetizeze toate vitaminele sau provitaminele de
care au nevoie, uneori în cantităţi mult superioare faţă de necesarul propriu, pentru procesele de
creştere. Astfel bacteria Ashbya gossypii, cultivată pe un mediu îmbogăţit în lipide, sintetizează de
20.000 de ori mai multă riboflavină (vitamina B2) faţă de necesarul propriu, iar bacteria Pseudomonas
denitrificans produce de 50.000 de ori mai multă cianocobalamină (vitamina B12) decât îi este
necesară. De altfel, vitamina B12 are ca sursă unică biosinteza microbiană. De asemenea, beta-
carotenul, precursorul vitaminei A, este sintetizat, în cantităţi foarte mari, pe cale biotehnologică.
În corpul microorganismelor s-a constatat prezenţa provitaminelor A, C şi D precum şi a
vitaminelor B1 (tiamina), B2 (riboflavina), B5 (acidul pantotenic), B12 (cianocobalamina), C (acidul
ascorbic), F (acidul folic), H (biotina), K (acidul para-aminobenzoic), PP (nicotinamida).
Vitamina B1 (tiamina, aneurina) este sintetizată de drojdii (mai ales Endomyces vernalis) şi de
mucegaiuri din genul Aspergillus. Se pare că levurile au şi capacitatea de a concentra vitamina B1
dispersată în mediul de cultură. Este indicată în numeroase afecţiuni maladive, gastro-intestinale,
renale, hepatice, diabetice, alcoolism, psihopatii, stări de nervozitate, hipertiroidie, pelagră, precum şi
după tratamente prelungite cu sulfamide şi antiobitice. Tiamina este cunoscută şi sub denumirea de
“vitamina performanţei intelectuale” deoarece are efecte pozitive asupra activităţii sistemului nervos,
asigurând creşterea randamentului intelectual.
Vitamina B2 (riboflavina). Este sintetizată de numeroase microorganisme: bacterii (Aerobacter,
Azobacter, Mycobacterium şi, mai ales, Clostridium la care riboflavina este un subprodus al
fermentaţiei acetono-butilice), levuri (mai ales Candida floreri şi Mycocandida riboflavina) şi
mucegaiuri.
S-a constatat că cele mai bune producătoare de riboflavină sunt mucegaiurile (Ashbya gossypii şi
Eremothecium ashbyii) când sunt cultivate într-un mediu agitat, suplimentat cu lipide şi la
temperatura de 300C, metabolizând riboza şi un compus triciclic flavinic. După 5 zile se obţin cantităţi
de riboflavină care ajung la 5.000- 6.000 unităţi / ml mediu de cultură şi se izolează prin cristalizare.
Conform recomandărilor O.M.S., necesarul mediu de vitamină B2 este de 0,6 mg la 1000 kcal şi este
indicată în numeroase afecţiuni ca: stomatite, dermatite, conjuctivite, cataracte, keratoze, psoriazis etc.
Riboflavina are rol determinant în fixarea fierului la nivelul hemoglobinei, în sinteza proteinelor
precum şi în degradarea lipidelor şi glucidelor.
Îmbunătăţeşte vederea prin mărimea sensibilităţii retinei şi contribuie la dezvoltarea fizică a
organismului.
Vitamina B5 (acidul pantotenic). Este produsă prin cultură de Sporobolomyces holsaticus ca
urmare a condensării beta-alaninei şi a acidului pantoic, care derivă din valină. Prin cuplări fosforilate
cu riboza şi adenina intră în structura coenzimei A, produsă de diferite bacterii. Acidul pantotenic are
rol în catabolismul glucidelor şi lipidelor, cu eliberarea energiei necesare proceselor fiziologice şi în
desfăşurarea multor reacţii enzimatice. Favorizează menţinerea structurii normale a pielii şi stimulează
creşterea şi pigmentarea părului.
Vitamina B12 (cianocobolamina). Este cel mai eficient factor de prevenire şi combatere a
anemiei pernicioase. Are un ciclu pseudoporfirinic, legat de un atom de cobalt.
Este produsă intracelular de microorganisme din genul Streptomyces şi din speciile Bacillus
megaterium şi Propionibacterium freundenreichii, începând din anul 1949. Vitamina B12 a fost
izolată prima dată din ficat de către FOLKERS şi SMITH (1948) (din o tonă de ficat au rezultat numai
28 mg vitamină B12). Cea mai importantă sursă de vitamină B12 este microflora din intestinul
rumegătoarelor sau din cecul şi colonul erbivorelor nerumegătoare. Producerea pe cale fermentativă a
fost realizată, pentru prima dată, de STOKSTAND (1948) prin cultivarea bacteriei Flavobacterium
solare. Ulterior, cercetările au progresat rapid obţinându-se culturi de Propionibacterium shermanii,
P.freundenreichii etc. care sintetizează cantităţi mari de vitamină. Mediul nutritiv este format din
glucoză, extract de drojdie, hidrolizat de caseină, săruri de cobalt etc. Necesarul uman de vitamină B 12 ,
recomandat de O.M.S., este de 2µg/ zi. Este cunoscută şi sub denumirea de “vitamina roşie” deoarece
favorizează formarea şi regenerarea globulelor roşii (hematii), prevenind anemia. Intensifică procesul
de creştere în greutate a copiilor, mărind pofta de mâncare. Menţine funcţionalitatea normală a
7
sistemului nervos, scade iritabilitatea, îmbunătăţeşte capacitatea de concentrare şi memorare la copii,
cu păstrarea echilibrului psihic. Vitamina exercită o acţiune de detoxifiere a ficatului, bazată pe
capacitatea de activare a enzimelor tiolofore. Are şi efecte lipotrofe, prin intensificarea biosintezei
colinei.
Vitamina C (acidul L-ascorbic, vitamina antiscorbutică) a fost descoperită de A. SZENT-
GYÖRGYI, în anul 1927, la nivelul cortexului glandelor suprarenale, iar biochimiştii americani KING
şi WANGH (1932) au găsit vitamina C în sucul citricelor. Acidul ascorbic este obţinut pe cale
industrială prin oxidarea substratului nutritiv cu ajutorul bacteriei Acetobacter suboxidans. D- glucoza
din substrat este transformată, prin reducere electrolitică, în D-sorbitol care se oxidează, pe cale
microbiană, în L-sorboză. Urmează tratarea cu acetonă şi formarea complexului diacetonă- L- sorboză
care este oxidat în acid 2-cetogluconic şi apoi transformat, prin fenolizare, în acid ascorbic.
Un alt procedeu de sinteză a vitaminei C are la bază oxidarea, pe cale bacteriană, a D- glucozei
în acid 5- ceto- D- gluconic, urmată de o altă oxidare a acidului L- idonic în acid 1,2- ceto- gulonic. În
aceste reacţii intervin mai multe specii din genurile Acetobacter, Aerobacter şi Pseudomonas.
Rolul fiziologic al vitaminei C este multilateral, cuprinzând majoritatea proceselor metabolice
esenţiale care au loc la nivelul organismelor. Este implicată în procesele de biosinteză a ADN,
respectiv în biosinteza substanţelor proteice din ţesuturile de creştere. Acidul ascorbic acţionează ca
transportor de hidrogen la nivel intracelular. Vitamina C stimulează sistemul imunitar şi măreşte
rezistenţa organismului la bolile infecto-contagioase şi faţă de substanţele cancerigene. Accelerează
vindecarea rănilor, regenerarea ţesuturilor, a cartilagiilor şi a oaselor. Facilitează absorbţia fierului şi
stimulează maturarea hematiilor.
Sucul de lămâie, proaspăt recoltat, serveşte la oprirea hemoragiilor scorbutice (scorbutul),
deoarece conţinutul în acid ascorbic şi bioflavonoide micşorează permeabilitatea şi măresc rezistenţa
capilarelor sanguine.
Vitamina D (calciferol-vitamina antirahitică). Este constituită din substanţe care provin prin
iradierea microsterolilor (ergosterol, zimosterol, escosterol etc). Cel mai cunoscut este ergosterolul
care a fost izolat, prima dată, din Claviceps purpurea şi ulterior din miceliile unor mucegaiuri ca
Penicillium, Fusarium şi Aspergillus. La o cultură de Aspergillus fischerii, pe un mediu nutritiv cu
10% glucoză, se obţine 1,1% ergosterol, în condiţiile unui raport optim C/N de 20/ 4.
Pe cale biotehnologică, ergosterolul se obţine prin culturi de drojdii sau micelii de Aspergillus
niger şi Penicillium notatum. Urmează operaţia de transformare a ergosterolului în vitamina D prin
iradiere cu lămpi de mercur sau cu sârmă incadescentă de magneziu. Are rol esenţial în fixarea
calciului şi fosforului cu implicaţii directe în formarea sistemului osos şi a dentiţiei, prevenind
rahitismul la copii, osteoporoza şi cariile severe. Ajută la tratarea răcelilor şi a conjuctivitelor.
Vitamina H (biotina) este sintetizată, pe cale microbiologică, în prezenţa unor microorganisme
ca: Phycomyces blakesleana, Torulopsis utilis, Hansenula anomala şi Aspergillus niger. Se prezintă
sub trei forme: bios I (mezoinozitol), bios II- A (acid pantotenic) şi bios II- B (biotina). Din mediu de
cultură, separarea se face prin filtrare şi absorbţie pe norit. Biotina este componentă a unor enzime
implicate în metabolismul proteic, lipidic şi glucidic. Ameliorează durerile musculare după oboseală
excesivă şi contribuie la menţinerea integrităţii pielii. Împiedică încărunţirea părului şi previne
alopecia (chelia).
Vitamina K (acidul para-aminobenzoic). Derivă din menadion, prin cultura algei Chlorella sau a
anumitor specii din genul Bacillus. În organismul uman contribuie la metabolismul fierului şi la
formarea hematiilor, prevenind sângerările şi hemoragiile interne prin coagularea rapidă a sângelui.
Vitamina PP (nicotinamida). Nu este realizată prin culturi de microorganisme ci este sintetizată
numai în plantele superioare. În schimb, niacina, o formă dezaminată a vitaminei PP, poate fi obţinută
prin culturi de bacterii din genul Corynebacterium. Are rol în prevenirea pelagrei şi a dermatitelor
severe, intensifică circulaţia sangvină, reduce tensiunea arterială şi atenuează tulburările gastro-
intestinale, menţinând starea de sănătate a aparatului digestiv, a creierului şi a sistemului nervos. Este o
vitamină esenţială în sinteza hormonilor sexuali (estrogeni, progesteron, testosteron), a cortizonului şi
insulinei.
Provitamina A (carotenul). Este un pigment carotenoidic de natură terpenică, sintetizat din izo-
pentil- pirofosfat. Se găseşte în anumite alge, în Mucoraceae şi în mucegaiul Choanephora. Beta-
carotenul protejează mucoasa nazală, bucală, faringiană, laringiană, traheală şi pulmonară, constituind
un bun remediu în tratamentul infecţiilor respiratorii şi emfizemului pulmonar. Are rol profilactic în
8
bolile maligne (cancer gastric şi esofagian, cancer de prostată), transformând metaboliţii cancerigeni în
substanţe mai solubile şi mai puţin nocive. Vitamina A contribuie la profilaxia tulburărilor de vedere,
este un factor în menţinerea sănătăţii pielii, părului, danturii şi gingiilor. Totodată stimulează
activitatea sistemului imunitar şi previne pigmentările cauzate de bolile ficatului sau de bătrâneţe.
Tot prin culturi microbiene pot fi produse: vitamina B6 (piridoxina), vitamina F (acidul folic) şi
acidul lipoic, fără a prezenta o mare importanţă pentru producţia industrială şi farmacologică.
Biosinteza multor vitamine pe cale biotehnologică poate fi realizată prin anumite intervenţii
genetice (mutaţii) sau prin reglarea proceselor metabolice din celulele diferitelor microorganisme.
9
3. Biotehnologiile în agricultura modernă
Intr-o lume în care creşterea populaţiei este accelerată (se preconizează că până în anul 2050
populaţia globului va număra aproximativ 10 miliarde de locuitori), iar producţia agricolă creşte într-
un ritm mai lent este necesară găsirea unor soluţii moderne prin care agricultura să asigure cantităţi
suficiente de hrană, cu o calitate corespunzătoare. Agricultura tradiţională se confruntă în prezent cu o
serie de limitări extrem de serioase:
- limitări ce ţin de piaţă: în condiţiile globalizării, regulile unei pieţe libere îngrădesc politicile
locale de preţuri, acestea fiind dictate de tendinţele şi politicile internaţionale
- resursele naturale devin, din ce în ce mai mult, factori limitativi ai dezvoltării agriculturii
tradiţionale datorită modificărilor climatice, a industrializării şi urbanizării care determină
deteriorări ale solului, apei şi a calităţii aerului.
- resursele biologice (genetice) sunt, în mod inevitabil, limitate. Astfel, deşi considerată la început
foarte eficientă, obţinerea şi eliberarea în mediu a plantelor ameliorate prin metode tradiţionale a
devenit extrem de înceată, nu fac faţă cerinţelor, iar numărul de însuşiri naturale care pot fi
îmbunătăţite prin aceste metode este foarte mic.
Specialiştii consideră că pentru depăşirea acestor probleme, pe lângă îmbunătăţirea continuă a
practicii agricole, există două soluţii: găsirea unor surse alternative de hrană (de exemplu, valorificarea
resurselor marine) sau ameliorarea plantelor prin metode biotehnologice (Altman, 1999).
10
Cresterea populaţiei pe continente până în 2020
Europe 0%
North Asia 51%
America 5%
Africa 35%
South America 8%
0
Developing countries World Developed countries
11
Consumul de calorii in lume (2001 - 2003)
12
4. Biotehnologiile în agricultura modernă
Prima revolutie verde, initiata dupa cel de al doilea razboi mondial de Norman Borlaug
pentru a incerca sa rezolve o parte din probleme grave ale nutriţiei omenirii pentru care a primit
Premiul Nobel pentru Pace. Cercetările au fost dezvoltate in Mexic si Filipine la grau, orez, porumb,
sorg, mei etc.
A doua revoluţie verde este considerata a fi reprezentata de Biotehnologiile moderne
14
În 2016, existau 19 tări care cultivau PMG (din totalul de 28 in care acestea sunt admise)
pe mai mult de 50000 ha, in Romania, desi exista posibilitatea de a cultiva legal porumb Bt, suprafata
cultivata cu OMG a fost zero.
15
Evolutia suprafetelor cultivate cu pricipalele modificari genetice (1996-2016)
Raportul dintre suprafetele cultivate cu plante transgenice din totalul cultivat 2016
16
Evoluţia numărului de cultivatori (companii / fermieri) de porumb modificat genetic, între 2008
– 2014, în România:
2008: 58 cultivatori
2009: 51 cultivatori
2010: 21 cultivatori
2011: 16 cultivatori
2012: 12 cultivatori
2013: 2 cultivatori
2014: 5 cultivatori
2015: 1 cultivator (o stațiune de cercetare, nici un fermier).
Evoluţia suprafeţelor cultivate cu porumb modificat genetic MON810 între 2007 – 2014:
2007: 332,5 ha.
2008: 6130,44 ha.
2009: 3243,52 ha.
2010: 822,6 ha.
2011: 588,18 ha.
2012: 216,9 ha.
2013: 834,62 ha.
2014: 770,7 ha.
2015: 2,5 ha.
2016: 0 ha
Dupa http://www.infomg.ro/web/ro/Situatia_in_Romania/
17
5. BAZELE MOLECULARE ALE INGINERIEI GENETICE
•Ereditatea: transmiterea caracterelor codificate de materialul genetic – ADN
–Celula la celulele fiice
–Individ la descendenti
•Genotip: totalitatea materialului genetic al unui organism
•Fenotip: totalitatea trasaturilor observabile ale unui organism, determinate de materialul genetic si de
mediul inconjurator
Dogma centrală a geneticii
ADN-ARN-proteine
Replicatie
ADN
Transcriere
ARN
Nucleu
. Translatie
Proteina
Citoplasma
5.1. Structura acizilor nucleici
• Compozitia chimica a ARN
– Baze azotate: adenina (A), guanina (G), citozina (C), uracilul (U)
– Riboza (monozaharid)
– Radicali fosfat
• Compozitia chimica a ADN
– Baze azotate: adenina (A), guanina (G), citozina (C), timina (T)
– Dezoxiriboza (derivat mai stabil al ribozei)
– Radicali fosfat
•Bazele purinice: A, G (dublu nucleu aromatic)
•Bazele pirimidinice: C, T, U (un singur nucleu hexagonal)
18
5.1.2. Structura acidului dezoxiribonucleic (ADN)
• ADN este format din nucleotide (A, G, C, T), ale caror pentoze sunt dezoxiriboze. Legaturile dintre
nucleotide sunt de tip fosfodiester.
• Molecula ADN este formata din 2 lanturi polinucleotidice ale caror nucleotide sunt unite intre ele, 2
cate 2, prin legaturi de hidrogen, pe toata lungimea
– Bazele azotate sunt orientate spre interior
– Ribozele si resturile fosfat formeaza un schelet exterior
• Cele 2 lanturi sunt antiparalele: extremitatea 5’ a unui lant se hibridizeaza cu extremitatea 3’ a
celuilalt lant
• Secventele lor sunt complementare: pentru ca toate nucleotidele sa poata fi hibridizate, trebuie ca
ordinea legarii lor pe un lant (secventa) sa fie complementara cu cea a lantului opus
• Lanturile polinucleotidice sunt spiralate unul in jurul celuilat dubla spirala (modelul J.D. Watson
si F.H.C. Crick, 1953)
• Cele doua lanturi unite prin legaturi de hidrogen pot fi disociate la cald: denaturarea ADN; refacerea
legaturilor: renaturarea (una din caracteristicile prin care se poate “amplifica” ADN).
• Replicarea: sinteza ADN identic cu materialul genetic al celulei, inainte de diviziunea mitotica
dublarea cantitatii de ADN
• Replicarea este semiconservativa: fiecare lant este matrita pentru sinteza lantului complementar: 1
molecula ADN 2 molecule, fiecare avand un lant vechi si unul nou sintetizat
19
5.2. Codul genetic si caracteristicile sale
Marshall Nirenberg a descifrat codul genetic in 1961, realizare pentru care a primit premiul Nobel.
Translatie
Polipeptide
Proteine Lizina Serina Valina (amino acid
sequence)
20
5.4.Structura genelor la eucariote
Caracteristicile celulelor eucariote:
Celulele au un nucleu protejat de o membrana dubla
ADN este complexat de "histone," si este organizat in cromozomi
Contin un numar fix de cromozomi in nucleu
ADN este linear
•Gena: secventa de nucleotide care contine informatia necesara sintezei unei proteine sau a unei
molecule de ARN
•Alcatuirea unei gene
1. promotorul (Elemente reglatoare) secventa situata inaintea genei, leaga ARN polimeraza si
determina locul de unde incepe transcrierea
2. Secventa codificatoare (informationala) formata dintr-o succesiune de exoni (secvente transcrise,
pastrate in ARNm si traduse sau exprimate in proteine) si introni (secvente eliminate, absente din
ARNm)
3. Secventa terminala (terminator)- O secventa semnal (AAUAAA) pentru terminarea transcrierii la
sfarsitul ultimului exon
Ingineria genetica poate fi definita ca un ansamblu de metode si tehnici care permit fie
introducerea in patrimoniul genetic al unei celule a uneia sau mai multor gene noi, “de interes”, fie
modificarea expresiei unei/unor gene prezente, deja, in celula. Genele transferate sunt denumite
“transgene”. Ingineria genetica mai este numita, uneori, si “modificare genetica”, “transformare
genetica” sau “transgeneza”, iar produsele obtinute poarta numele de “organisme modificate genetic”
(OMG) sau “organisme transgenice” (Badea, 2000).
21
SARCINILE EFA - EFA are 6 sarcini principale:
• Furnizeaza opinii stiintifice independente (pentru aspectele de siguranta alimentara,
nutritie, sanatate/bunastare a animalelor, sanatatea plantelor, organisme modificate genetic) la
cererea Comisiei, Parlamentului European (PE), Statelor Membre sau organismelor nationale
pentru alimentatie in scopul acordarii suportului pentru managementul riscului;
• Furnizeaza opinii asupra aspectelor de tehnologie alimentara pentru a sprijini
dezvoltarea reglementarilor si legislatiei problemelor de siguranta in fluxul alimentar;
• Colecteaza si analizeaza datele asupra modelelor dietetice, expune articole din
programele monitorizate si orice alte date relevante pentru orice risc potential in vederea
monitorizarii sigurantei de-a lungul lantului alimentar in UE;
• Identificarea si avertizarea timpurie a riscurilor potentiale;
• Functionarea unui sistem de alertare rapid care acopera atat alimentele, cat si furajele;
• Comunica publicului general toate sarcinile care i-au fost alocate
ROMANIA este prima tara din Balcani care a stabilit legea organismelor modificate genetic.
Ordonanta Guvernului nr. 49/2000 a stabilit infiintarea Comisiei Nationale pentru Securitate
Biologica (CNSB), care a fost abilitata sa puna in aplicare dispozitiile legislatiei nationale si
internationale referitoare la regimul activitatilor care implica utilizarea organismelor modificate
genetic prin tehnicile biotehnologiei moderne, numai dupa avizarea scrisa, emisa de Punctul Focal
National.
22
6.2. Avantajele transgenezei
Comparativ cu metodele clasice de ameliorare, transformarea prin ingineria genetica prezinta,
cel putin,doua avantaje:
- ofera posibilitatea introducerii unui singur caracter la o varietate, deja evaluata ca
performanta;
- gena transferata poate proveni din orice sursa, ceea ce extinde, practic, in mod
nelimitat, posibilitatile de ameliorare.
Ameliorarea traditionala
Donor Cultivar Cultivar nou
(mai multe gene sunt transferate)
X =
Gena dorita (hibridare)
Gena dorita
Biotehnologii
Gena dorita Cultivar comercial Cultivar nou
(numai gena de interes )
=
(transfer)
Gena de interes
23
6.3. Elementele necesare pentru modificarea genetica a plantelor:
- “gene de interes”;
- metode care sa permita patrunderea si integrarea transgenelor in nucleul celulei care va
fi la originea unei noi plante;
- - selectia plantelor in care transgena se exprima la un nivel adecvat scopului urmarit
(toleranta la erbicid, rezistenta la atacul unui daunator etc.).
24
Identificarea şi izolarea genelor se face cu ajutorul enzimelor de restricţie
4. Vectorul recombinant este introdus (de exemplu prin metoda biolistică) în celula gazdă
25
(de regulă o bacterie).
26
Obtinerea unui construct
Gena de interes
Plasmid ADN
Construct
Gene bacteriene
•antibiotic marker
•replication origin
27
recunoaştere pentru sistemul de transfer. Prin înlocuirea oncogenelor din ADN-T cu gene de interes
este posibil transferul acestora în celule vegetale ţintă, celule care nu mai dobândesc caracter tumoral
şi deci pot regenera plante transformate genetic. Genele de interes – fie ele gene marker sau raportoare
sau gene cu importanţă economică – pot fi introduse în plante fie prin linkage (legare) cu regiunea
ADN-T dezarmată prin recombinare, obţinându-se un aşa numit vector de integrare, fie prin clonarea
lor între secvenţele repetate laterale într-un replicon independent, ceea ce se numeşte vector binar.
Existenţa mai multor regiuni T în celula de Agrobacterium conduce la cotransferul acestora în celula
vegetală ţintă cu eficienţă crescută. Pe de altă parte pentru integrarea ADN-T în celula vegetală se pot
utiliza secvenţe omoloage ADN vegetal ţintă care induc, cu frecvenţă relativ scăzută, recombinarea
omologă între ADN-T şi ADN vegetal.
A. tumefaciens poate transfera ADN-T diferitelor specii de plante chiar dacă unele dintre
acestea nu formează tumori. Deşi spectrul de gazde pentru această bacteriei este limitat la plantele
dicotiledonate s-au obţinut tulpini supervirulente, capabile să infecteze eficient şi celulele plantelor
monocotiledonate. S-a deschis, astfel, calea transformării cerealelor şi prin intermediul acestui vector
bacterian. Eficienţa transformării celulei vegetale de către A. tumefaciens, variază destul de mult în
funcţie de specie, genotip sau chiar de ţesutul ţintă. Este foarte important, totodată, ca ţesutul supus
transformării să fie totipotent (omnipotent) şi deci să regenereze plante transformate genetic. De cele
mai multe ori, însă, dintr-un ţesut doar un număr limitat de celule sunt totipotente şi nu întodeauna
acestea sunt şi cele transformate de Agrobacterium. Pentru diferite specii de plante s-au identificat
metode potrivite pentru transformarea eficientă mediată de A. tumefaciens. Ca ţesuturi ţintă pot fi
utilizate: discuri sau fragmente foliare, fragmente de rădăcini, hipocotile, peţiol, cotiledoane sau
seminţe întregi. Primele plante transformate prin intermediul lui A. tumefaciens au fost regenerate în
1983, succesele iniţiale limitându-se la solanacee, în particular la sistemul model tutunul (Nicotiana
tabacum L.). Ulterior au fost transformate: soia, bumbacul, orezul, ovăzul, sorgul, trestia de zahăr,
grâul şi multe altele. Eficienţa transformării variază foarte mult de la o specie la alta în funcţie de:
identificarea metodei optime de cultură a ţesutului ţintă, condiţiile de cultură a materialului sursă, sau
suşa bacteriană utilizată. Aceşti factori afectează şi numărul de copii de ADN-T care se integrează în
genomul vegetal receptor. Predominant s-a constatat, la diferite specii de plante, integrarea unei
singure copii de ADN-T. Mai recent, cercetările au vizat descifrarea mecanismelor implicate în
colonizarea ţesuturilor vegetale de către bacterii, relevându-se noi detalii privind controlul genetic al
virulenţei bacteriene .
Agrobacterium rhizogenes a fost utilizat pentru prima oară pentru transformarea plantelor de
tutun în anul 1977. Această bacterie transferând ADN-T de pe plamida Ri determină formarea
rădăcinilor firoase pe diferite organe ale plantelor, rădăcini care pot purta gene de interes, dacă acestea
au fost integrate în ADN-T, respectiv pot regenera plante transformate genetic. O etapă intermediară,
în procesul de transformare mediată de A. rhizogenes, este cultura rădăcinilor firoase care au
capacitatea de a se alungi şi ramifica. Astfel, prin cultura rădăcinilor firoase se pot obţine metaboliţi
secundari sau pot fi realizate studii fundamentale privind creşterea şi dezvoltarea rădăcinilor. Acest
sistem experimental este foarte potrivit şi pentru analize biochimice, rădăcinile prezentând căi
biochimice mai simple şi, deci, mai uşor de analizat. Rădăcinile firoase pot fi cultivate uşor, folosind
un echipament simplu şi ieftin iar, comparativ cu suspensiile celulare, celulele radiculare sunt stabile
din punct de vedere genetic. Asemănător sistemului A. tumefaciens, bacteria A. rhizogenes poate co-
tranfera ADN-T de pe plasmida Ri şi un vector “binar”, de obicei o plasmidă mai mică. Aceasta din
urmă poate purta în ADN-T o genă marker, de exemplu o genă care conferă rezistenţă la un antibiotic,
o genă raportoare - sau marker pentru vizualizare fenotipică şi o genă cu importanţă economică.
Avantajul acestui sistem este acela că cele două tipuri de ADN-T, cel care determină dezvoltarea
rădăcinilor firoase, şi ADN-T de pe vectorul binar, se integrează de obicei pe cromozomi diferiţi în
plantele transformate şi deci, vor segrega independent în descendenţă. Un avantaj aparte al sistemului
de transformare Ri este faptul că toate celulele vegetale care integrează ADN-T de pe plasmida Ri pot
fi uşor identificate şi selectate prin prezenţa fenotipului de rădăcină firoasă. Sistemul de transformare
mediată de A. rhizogenes a fost aplicat unui mare număr de specii de plante (în jur de 200 încă în
1989), dar asemănător sistemului A. tumefaciens răspunsul optim variază în funcţie de specie, genotip
sau suşa bacteriană. Organele vegetale potrivite pentru transformarea cu A. rhizogenes sunt: fragmente
de tulpină de la plante tinere, fragmente de peţiol, fragmente foliare, segmente de hipocotile sau
cotiledoane, sau fragmente ale unor organe de rezervă cum ar fi rădăcinile de morcov sau tuberculii de
28
cartof. Uneori astfel de explante prezintă un răspuns polar, formând rădăcini firoase numai la una din
extremele explantului, rădăcini capabile să ignore forţa gravitaţională. Mai mult, există date
experimentale care sugerează efectul de piticire a plantelor indus de una dintre genele de virulenţă,
rolA, de la A. rhizogenes, efect cu importanţă practică mai ales pentru unele plante horticole
29
METODE DIRECTE
30
6.4.2.4. Utilizarea protoplastelor (protoplaştilor) pentru transferul direct de ADN
Dintre sistemele de transformare, transformarea utilizând protoplaste este una dintre metodele
de fineţe. Protoplastele sunt izolate fiecare printr-un proces mecanic sau enzimatic prin îndepărtarea
peretelui celular. Protoplastele sunt frecvent obţinute dintr-o suspensie de linii celulare, de la calus
obţinut din embrioni imaturi, inflorescenţe imature, mezocotil, frunze imature bazale şi antere.
31
6.4.2.5. ALTE METODE DE TRANSFER DIRECT AL ADN ÎN CELULELE VEGETALE
Electroforeza Migrarea ADN printr-un ţesut vegetal ţintă a fost o altă idee interesantă pentru
transferul de gene şi a fost aplicată pentru prima oară embrionilor de orz.
Principalul avantaj al metodei consta in posibilitatea de a realiza plante modificate genetic fara
parcurgerea fazei de cultura “in vitro”
32
6.5. SELECŢIA TRANSFORMANŢILOR
Selecţia este o parte importanţă a proceselor de transformare. În general, genele de interes sunt
co-integrate cu markeri selectabili pentru identificarea cu uşurinţă a celulelor recipiente transformate.
Markerii de selecţie cei mai utilizaţi conferă rezistenţă la agenţi chimici, cum ar fi antibiotice
şi erbicide.
Genele de selecţie pot fi utilizate într-o primă generaţie şi eliminate mai târziu prin încrucişare
convenţională. O posibilitate este de a obţine două ADN-T separate; una cu gene de interes şi alta cu
markeri de selecţie, în aceeaşi sau două celule diferite de Agrobacterium. Cele două ADN-T sunt
inserate în situsuri ne-link-ate în genomul plantei gazdă, permiţând mai târziu segregarea genetică.
Transformarea optimă se caracterizează printr-o singură copie a transgenei care va segrega
mendelian cu o expresie uniformă de la o generaţie la alta. Transformanţii ideali pot fi identificaţi cu
dificultate, depinzând de materialul vegetal care va fi transformat şi de cantitatea şi complexitatea
transgenelor. O genă inserată este esenţial randomizată în genom, se observă o variabilitate de la o
plantă transgenică la alta, fenomen cunoscut sub numele de „variaţie cu efect de poziţie.
Dintre genele marker cel mai mult a fost utilizată gena nptII, sau neo, genă izolată din
transpozonul Tn5 de la Escherichia coli K12. Această genă codifică neomicinfosfotransferaza –
enzima implicată în detoxificarea unor antibiotice aminoglucozidice cum ar fi:neomicina, kanamicina,
paramomicina sau geneticina. Numeroase specii de plante au fost transformate cu gena nptII, cum ar fi
tutunul, cartoful, Arabidopsis, porumbul, orezul, soia, bumbacul – ca să le amintim pe cele mai
importante. Pentru această genă ca agenţi de selecţie se utilizează cel mai mult kanamicina (50 – 100
mg/l) sau geneticina. Unele specii de plante, mai ales monocotiledonate s-au dovedit insensibile la
kanamicină, în acest caz geneticina dând rezultate mai bune. De asemenea, s-a observat că la unele
specii kanamicina poate interfera cu procesele de organogeneză, afectând eficienţa regenerării
plantelor transformate.
O altă genă marker mult utilizată este gena hpt sau hph, genă izolată tot de la bacteria E. coli
codificând enzima HPT (higromicinfosfotransferaza). Această enzimă detoxifică antibioticul
higromicină B, antibiotic faţă de care majoritatea ţesuturilor vegetale sunt foarte sensibile. De aceea,
această genă marker a fost utilizată pentru transformarea multor specii de plante, cum ar fi: tutunul,
Arabidopsis, porumbul, orezul sau gramineele perene. Higromicina este îndeosebi foarte potrivită ca
agent de selecţie pentru cereale, folosindu-se în concentraţii de 25-200 mg/l. Secvenţa codantă a genei
a fost, de asemenea, modificată pentru o expresie mai bună în celula vegtală.Dintre genele care conferă
rezistenţă la erbicide cel mai mult a fost utilizată gena bar, izolată de la bacteria Streptomyces
hygroscopicus şi gena pat de la S. viridochromogenes, ambele codificând enzima
fosfinotricinacetiltransferaza. Fosfinotricina este compusul activ cel mai mult utilizat ca erbicid de
selecţie a plantelor transformate genetic, genele amintite fiind transferate cu succes la plante ca:
tutunul, rapiţa, porumbul, orezul, grâul şi altele. O altă genă marker este gena dhfr pentru enzima
dihidrofolatreductază (DHFR), izolată tot de la E. coli de pe plasmida R67. Enzima DHFR conferă
rezistenţa la un analog al acidului folic, metotrexat, celulele vegetale fiind extrem de sensibile la
concentraţii mici ale acestui compus. Gena dhfr a fost transferată la specii cum ar fi: tutunul, petunia şi
grâul.
34
7. PRIMA GENERAŢIE DE PLANTE TRANSGENICE
Prima generaţie de plante transgenice este constituita din cultivare care au fost modificate prin
introducerea unuia sau a cel mult două caractere noi, cum sunt toleranţa la unul sau mai multe
erbicide, toleranţă la insecte sau la dăunători sau toleranţa combinată (caractere input/
tehnologice).Ponderea pierderilor produse de diferiţi factori din producţia potenţială
13
14 Productia realizata
Boli
Insecte
63
15 Buruieni
Ponderea diferitelor caractere obtinute prin transgeneza in cadrul suprafetelor total cultivate cu OMG
In anul 2002
8
17 Toleranta la
erbicide(TE)
Rezistenta la insecte(RI)
TE/RI
75
In anul 2016
28
Toletanta la erbicide(TE)
Rezistenta la insecte(RI)
58 TE/RI
24
35
7.1. PLANTE TRANSGENICE TOLERANTE LA ERBICIDE
36
Combaterea sfredelitorului porumbului
(Ostrinia nubilalis)
A) Bacillus thuringiensis
B) Bt - Porumb
Zellkern
mit DNA
Bt-Mais
Bt-Gen
Wirkstoff
Bt-Eiweiß
A doua generatie de plante transgenice se refera la noi cultivare (hibrizi, soiuri) care au modificate
caractere legate de calitatea produselor obtinute (caractere output).
Exemple:
-modificarea continutului de amidon, proteine, zaharuri
-modificarea insusirilor de panificatie
-cresterea duratei de pastrare a fructelor
-sporirea continutului de beta-caroten
-imbunatatirea digestibilitatii furajelor
37
8.1. Modificarea procesul de coacere a fructelor
Tomatele comercializate în stare proaspătă sub numele FLAVRSAVRR sunt primul produs
alimentar recoltat de la plante transgenice care a fost aprobat pentru consum. Acest a fost primul
produs OMG comercializat pe piața SUA în 1994 și primul in Europa (UK), în 1996.În general,
tomatele sunt culese când sunt încă necoapte și tari - stadiu pe care cultivatorii îl numesc “maturitate in
verde”. Coacerea este indusă după ajungerea la destinație, printr-un tratament (gazare) cu etilenă
(hormon natural implicat în coacerea fructelor). Din cauza recoltării timpurii, aceste tomate nu au
aroma și gustul fructelor maturate pe plantă. Evident, o recoltare ceva mai târzie ar ameliora
considerabil calitatea tomatelor proaspete. În consecință, s-a procedat la modificarea genetică în sensul
păstrării consistenței după cules, fapt ce face posibilă nu numai recoltarea într-un stadiu de dezvoltare
mai avansat, când s-au acumulat și aromele specifice, ci și reducera pierderilor determinate de lovituri
în timpul transportului.Pentru modificarea procesului de coacere al tomatelor, au fost aplicate două
strategii.
38
Amidonul - glucid puternic polimerizat- are doi constituienți esențiali: amiloza și amilopectina.
Diferențele de structură moleculară le conferă acestora și proprietăți reologice foarte diferite, care sunt
exploatate în industria agroalimentară: amiloza formează ușor geluri, în timp ce amilopectina este un
agent de îngroșare foarte eficace. În amidonurile cerealelor predomină amilopectina, raportul
amiloză/amilopectină variind între 20/80 și 30/70. Având în vedere faptul că amiloza prezintă avantaje,
în prezent se încearcă “răsturnarea” acestui raport, prin inginerie genetică
39
8.7 Alte tipuri de modificări
Pentru ameliorarea calității îmbrăcăminții, în plantele furajere se introduc gene care codifică
proteine cu sulf. Proteine menite să amelioreze calitatea lânii oilor.Plantele ornamentale modificate
genetic pe piață încă din 1996: o garoafă mov- MoondustTM- obținută prin introducerea genelor ce
codifică pigmenții corespunzători într-un soi cu flori albe, precum și o garoafă care poate fi păstrată
tăiată, în vază, timp relativ îndelungat. De altfel piața este inundată de plante ornamentale cu culoarea
florilor modificată.Un interes aparte prezintă plantele modificate genetic pentru a fi folosite ca
“instrumente de bioremediere”, adică de decontaminare a terenurilor poluate natural sau contaminate
ca urmare a unor activități ale omului. Câteva exemple de asemenea plante: plopul galben, care posedă
două gene bacteriene ce-i permit să convertească mercurul ionic și metilmercurul în mercur volatil;
muștarul cu toleranță sporită la cadmiu; tutunul care posedă enzime ce degradează hidrocarburile
poluante; arborii care supraexprimă nitratreductoza, eliminând oxizii de azot ce se acumulează în
marile aglomerări urbane.
Alte proiecte interesante pentru industrie:- plante transgenice de plop, eucalipt ș.a. producătoare de
biomasă pentru obținerea etanolului;- plante transgenice cu lignina modificată pentru fabricarea mai
facilă a hârtiei;- plante de rapițî modificate pentru a produce un material plastic biodegradabil
(polimerul respectiv a fost “exprimat” și în lumenul fibrelor de bumbac).
Ingineria genetica si produsele sale au aparut numai in ultimii 25-30 de ani. De aceea, este aproape
imposibil de evaluat impactul potential al speciilor trangenice asupra mediului. Totusi, pornind de la
observatiile efectuate in situatii similare cu specii naturale, oamenii de stiinta au sugerat urmatoarele
efecte:
1. Crearea de noi daunatori: o planta de cultura care a fost modificata prin inginerie genetica
pentru a fi toleranta fata de saruri ar putea scapa (evada) din lanul de cultura, ar putea invada estuarele,
sufocand vegetatia naturala a acestui habitat.
40
2. Amplificarea problemelor cu daunatorii deja existenti: plantele de cultura sunt capabile de a
transfera gene la distante de kilometri la specii inrudite, prin polenizarea mediata de vant sau insecte,
unele dintre aceste specii putand fi buruieni cunoscute. Astfel, genele straine de la plantele de cultura
cu caractere inginerizate, cum ar fi toleranta la erbicide sau uscaciune, ar putea fi transferate la
buruieni, facandu-le si mai greu de controlat.
3. Afectarea speciilor nevizate, non-tinta: virusurile, microorganismele sau plantele modificate
genetic pentru a omora insectele daunatoare ar putea afecta si insectele utile. In experimentele de
laborator, bacteriile modificate pentru a converti reziduurile vegetale cum ar fi frunzele in alcool, cu
scopul utilizarii acestuia ca si combustibil, au determinat reducerea populatiilor de ciuperci (fungi)
benefice. In unele cazuri, au fost omorate si ierburile din zone invecinate prin otravire cu alcool.
4. Reducerea biodiversitatii prin inlocuirea speciilor native: plantele de cultura MG care au un
avantaj de supravietuire ar putea evada din campurile de cultura, ar putea invada alte ecosisteme si ar
putea inlocui alte specii. Aceasta pierdere a biodiversitatii ar putea diminua sever abilitatea
ecosistemelor sau speciilor de a raspunde cu succes la stessuri neasteptate, cum ar fi uscaciunea sau
bolile.
11. RISCURILE ASUPRA SANATATII
Principalele griji referitoare la siguranta alimentelor care contin derivate OMG se concentreaza
asupra urmatoarelor aspecte:
1. Testele analitice existente si bazele de date continand substantele toxice naturale sau nutrientii
prezenti in alimentele conventionale nu sunt adecvate pentru a testa modificarile neintentionate ale
derivatelor OMG;
2. Ingineria genetica poate afecta in mare masura toxinele, alergenii sau nutrientii din alimente;
3. Alergiile asociate alimentelor pot fi exacerbate prin inginerie genetica;
4. Folosirea genelor marker care confera rezistenta la antibiotice in unele alimente OMG ridica
probleme de sanatate.
Bibliografie selectiva:
1. Badea Elena Marcela, 2003 – Plantele transgenice în cultură, Bucureşti.
2. Banu C. şi colab., 2000 – Biotehnologii în industria alimentară. Ed. Tehnică, Bucureşti.
3. Beceanu B., 1994 – Tehnologia produselor horticole, vol I. Centrul de multiplicare U:S.A.M.V., Iaşi.
4. Bourgeois C.M., Larpent J.P., 1989 – Microbiologie alimentaire, vol. I-II. Edit. Lavoisier, Paris.
5. Danson M. J., Hough D. W., 1998 – Les enzymes de l` extreme. Biofutur.
6. Fellet P., 1998 – Aliments et industries alimentaires. Versailles, INRA Editions.
7. Simioniuc DP, 2009 – Biotehnologii, Ed. Ion Ionescu de la Brad Iasi
41