1. Finalidad Gel refrigerante: Producto acumulador de frío, de desconge-
La presente Guía Técnica tiene por finalidad contribuir a larniento retardado, no tóxico, no comestible y reutilizable que asegurar la calidad sanitaria indispensable en la fabricación, se emplea para mantener la cadena de frío. elaboración y expendio de alimentos y bebidas destinados Hisopo: Instrumento que tiene un extremo recubierto de al- al consumo humano y a la implementación del Sistema de godón o de rayón estéril que se utiliza humedecido con solu- Análisis de Peligros y de Puntos Críticos de Control (HACCP: ción diluyente para facilitar la recuperación bacteriana, en el Hazard Analysis and Critica] Control Points). muestreo de superficies. 2. Objetivos Manipulador de alimentos: Toda persona que a través de 2.1. Uniforrnizar los procedimientos que se deben aplicar en sus manos torna contacto directo con alimentos envasados o la selección, torna de muestras y para los análisis microbioló- no envasados, equipos y utensilios utilizados para su elabo- gicos de superficies vivas e inertes. ración y preparación o con superficies que están en contacto con los alimentos. 2.2. Establecer los límites microbiológicos para evaluar las condiciones higiénicas sanitarias de las superficies vivas e Peligro: Agente biológico, químico o físico presente en un inertes que entran en contacto con los alimentos y bebidas. alimento o superficie que está en contacto con los alimentos y que pueden ocasionar un efecto nocivo para la salud. 2.3. Proporcionar a la Autoridad Sanitaria un instrumento para evaluar la efectividad de los Programas de Higiene y Sanea- Riesgo: Probabilidad de que ocurra un efecto nocivo para miento (PHS) y de Buenas Prácticas de Higiene en la manipu- la salud y la gravedad de dicho efecto, corno consecuencia lación de los alimentos. de un peligro o peligros en los alimentos, ocasionado por el contacto con superficies vivas (manipulación) o inertes con- 3. Ambito de aplicaclón taminadas. La presente Guía Técnica es de obligatorio cumplimiento en Superficies Inertes: Son todas las partes externas y/o inter- todo el territorio nacional, para efectos de vigilancia y control nas de los utensilios que están en contacto con los alimentos, sanitario por parte de la Autoridad Sanitaria, según el ámbi- por ejemplo equipos, mobiliario, vajilla, cubiertos, tabla de to de su competencia. Asimismo, la presente Guía Técnica picar, etc. podrá ser utilizada referencialrnente por personas naturales Superficies vivas: Las partes externas del cuerpo humano o personas jurídicas en las operaciones de control sanitario que entran en contacto con el equipo, utensilios y alimentos que realicen. durante su preparación y consumo. Para efectos de la pre- 4. Procedimientos a estandarizar sente Guía se considera a las manos con o sin guantes del La presente Guía Técnica estandariza los procedimientos manipulador de alimentos. para la selección, torna de muestras y análisis microbiológi- Vigilancia sanitaria: Conjunto de actividades de observa- cos; y establece los límites microbiológicos para superficies ción y evaluación que realiza la Autoridad Sanitaria sobre las que están en contacto o relación directa con los alimentos. condiciones sanitarias de las superficies que están en contac- 5. Definiciones Operativas to con los alimentos y bebidas, en protección de la salud de Análisis mlcrobiológlco: Procedimiento que se sigue para los consumidores. determinar la presencia, identificación, y cantidad de microor- 6. Conceptos Básicos ganismos patógenos e indicadores de contaminación en una muestra. 6.1. Operaciones en campo Calidad sanitaria: Es el conjunto de requisitos microbioló- Las operaciones en campo son aquellas que se realizan en gicos, físico-químicos y organolépticos que debe cumplir un el establecimiento donde se procesan, elaboran, almacenan, alimento para ser considerado inocuo y apto para el consumo fraccionan o expenden alimentos y bebidas, sea fábrica, al- humano. macén, servicios de alimentos, quiosco, puesto, comedor, u otro. Comprende las siguientes operaciones consecutivas, Límites mlcroblológicos: Son los valores permisibles de microorganismos presentes en una muestra, que indican la realizadas por personal capacitado en la materia: aceptabilidad higiénico sanitaria de una superficie. a. Procedimiento para la selección de la muestra.
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b. Selección del método de muestreo. MÉTODO DE SUPERFICIES A MUESTREAR c. Procedimiento para la toma de muestra. MUESTREO
6.2. Operaciones analíticas Se utiliza para superficies inertes regulares e
irregulares, tales como tabla de picar, bandejas, Las operaciones analíticas son aquellas que se realizan en Método del mesas de trabajo, utensilios, cuchillas de equipos, cortadora de embutidos, cortadora de pan de un laboratorio destinado y acondicionado para el control de Hisopo molde, fajas transportadoras, tolvas, mezcladoras, la calidad sanitaria e inocuidad de los alimentos y bebidas. pisos, paredes y otros. Comprende las siguientes operaciones consecutivas, realiza- Método de la El método de la esponja se utiliza preferentemente das por personal capacitado en la materia: para muestrear superficies de mayor área. Esponja a. Determinación de los ensayos microbiológicos. Se utiliza para superficies vivas (manos) y para b. Procedimiento de análisis microbiológicos. Método del objetos pequeños o para el muestreo de superficies Enjuague interiores de envases, botellas, bolsas de plástico, c. Cálculo y expresión de resultados. etc. d. Interpretación de resultados de acuerdo a los límites mi- crobiológicos. 7.3. Procedimiento para la toma de muestra 7. Consideraciones Especificas: Operaciones en Campo 7.3.1. Método del hisopo 7.1. Procedimiento para la selección de la muestra a) Descripción: El procedimiento para seleccionar las muestras, debe estar Consiste en frotar con un hisopo estéril previamente hume- en función de los riesgos sanitarios relacionados a las dife- decido en una solución diluyente, el área determinada en el rentes etapas de la cadena alimentaria, sea la de fabricación, muestreo. la de elaboración y/o expendio. b) Materiales: En fábricas de alimentos y bebidas Hisopos de algodón u otro material equivalente, de largo a) Superficies Inertes aproximado de 12 cm. o Tubo de ensayo con tapa hermé- Se seleccionarán aquellas que están o tendrán contacto di- tica conteniendo 10 mL de solución diluyente estéril. Se recto con los alimentos que no serán sometidos a un proceso agregará una solución diluyente con neutralizante como térmico posterior u otro que disminuya la carga microbiana. alternativa. (Ver Anexo 1). b) Superficies vivas Plantilla estéril, con un área abierta en el centro de 100 cm2 (10cm x 10cm) o alternativamente, plantilla estéril, Se seleccionarán a los manipuladores de alimentos, con o sin con un área abierta en el centro de 25 cm2 (5 cm x 5 cm). guantes, que estén en contacto directo con los alimentos que no serán sometidos a un proceso térmico posterior u otro tra- Guantes descartables de primer uso. tamiento que diminuya la carga microbiana. Protector de cabello. En establecimientos de elaboración y expendio Mascarillas descartables. a) Superficies Inertes Plumón marcador indeleble (para vidrio). Se seleccionarán aquellas superficies que están en contac- Caja térmica. to con los alimentos destinados al consumo directo, como Refrigerantes. utensilios, vajilla, superficies de corte, menaje, equipos, entre otros. c) Procedimiento: b) Superficies vivas 1. Colocar la plantilla (10cm x 10cm) sobre la superficie a muestrear. Se seleccionarán las manos de los manipuladores, con o sin 2. Humedecer el hisopo en la solución diluyente y presionar guantes, que estén en contacto con los alimentos destinados al consumo directo. ligeramente en la pared del tubo con un movimiento de rotación para quitar el exceso de solución. 7.2. Selección del método de muestreo 3. Con el hisopo inclinado en un ángulo de 302, frotar 4 ve- La selección del método de muestreo debe estar en función ces la superficie delimitada por la plantilla, cada una en de las características de la superficie a muestrear. dirección opuesta a la anterior. Asegurar el hisopado en toda la superficie.
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4. En el caso de utilizar la plantilla de 5cm x 5cm, repetir c) Procedimiento: esta operación 3 veces más, en lugares diferentes de la 1. Retirar la esponja de su envoltura con la pinza estéril o misma superficie, para obtener 100 crn2. con guantes descartables o bien usar una bolsa de primer 5. Colocar el hisopo en el tubo con la solución diluyente, uso, invertida a manera de guante. quebrando la parte del hisopo que estuvo en contacto con 2. Humedecer la esponja con la solución diluyente estéril los dedos del rnuestreador, la cual debe ser eliminada. (aproximadamente 10 rnL). 6. Para superficies irregulares, en el caso de utensilios, se 3. En condiciones asépticas frotar vigorosamente el área a repetirá la operación con 3 utensilios más (total 4 corno muestrear. En el caso de superficies regulares, frotar el máximo), con el mismo hisopo, considerando el área que área delimitada por la plantilla y en las superficies irregu- está en contacto con el alimento o con la boca. lares (cuchillas, equipos, utensilios, etc), frotar abarcando 7. Si no se tornan las 4 muestras, se debe anotar en la Ficha la mayor cantidad de superficie. de Torna de Muestra. 4. Colocar la esponja en el frasco con el resto de la solución d) Conservación y Transporte de la muestra diluyente o alternativamente colocar la esponja con la Las muestras se colocarán en un contenedor isotérmico con muestra en una bolsa de plástico de primer uso. gel refrigerante, el cual se distribuirá uniformemente en la 5. Para el caso específico de utensilios se deberá repetir la base y en los laterales, para asegurar que la temperatura del operación con 3 utensilios más (total 4 corno máximo), contenedor no sea mayor de 1 O°C, a fin de asegurar la vida con la misma esponja, considerando el área que está en útil de la muestra hasta su llegada al laboratorio. El tiempo de contacto con el alimento o con la boca. transporte entre la torna de muestra y la recepción en el labo- 6. Las tazas, copas o vasos se muestrearán 2 a 3 cm alre- ratorio estará en función estricta de dicha temperatura, no de- dedor del borde por dentro y por fuera. biendo exceder las 24 horas y excepcionalmente las 36 horas. Se deberá registrar la temperatura del contenedor al colocar d) Conservación y Transporte de la muestra las muestras y a la llegada al laboratorio con la finalidad de Las muestras se colocarán en un contenedor isotérmico con asegurar que las mismas hayan sido transportadas a la tem- gel refrigerante, el cual se distribuirá uniformemente en la peratura indicada. Las temperaturas superiores a 1 OºC invali- base y en los laterales, para asegurar que la temperatura del dan la muestra para su análisis. contenedor no sea mayor de 1 OºC, a fin de asegurar la vida 7.3.2. Método de la esponja útil de la muestra hasta su llegada al laboratorio. El tiempo de a) Descripción: transporte entre la toma de muestra y la recepción en el labo- ratorio estará en función estricta de dicha temperatura, no de- Consiste en frotar con una esponja estéril, previamente hu- biendo exceder las 24 horas y excepcionalmente las 36 horas. medecida en una solución diluyente, el área determinada en el muestreo. Se deberá registrar la temperatura del contenedor al colocar las muestras y a la llegada al laboratorio con la finalidad de b) Materiales: asegurar que las mismas hayan sido transportadas a la tem- Esponja estéril de poliuretano o de celulosa, de 5cm x 5 peratura indicada. Las temperaturas superiores a 1 OºC invali- cm. dan la muestra para su análisis. Plantilla estéril, con un área en el centro de 100 crn2 (10 cm x 10 cm). 7.3.3. Método del enjuague Frascos con tapa rosca de 250 rnL de capacidad, con 100 a) Descripción: rnL de solución diluyente estéril. Dependiendo de la muestra, el método consiste en realizar un Pinzas estériles. enjuague (botellas, frascos, utensilios, similares) o inmersión Bolsas de polietileno de primer uso. (manos, objetos pequeños) en una solución diluyente. Guantes descartables de primer uso. b) Materiales: Protector de cabello. Frascos con tapa hermética de boca ancha de 250 mL de Mascarillas descartables. capacidad, con 100 rnL de solución diluyente estéril. Plumón marcador indeleble (para vidrio). Bolsas de polietileno de primer uso. Caja térmica. Pinzas estériles. Refrigerantes. Guantes descartables de primer uso.
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Protector de cabello. Las temperaturas superiores a 1 OºC invalidan la muestra Mascarillas descartables. para su análisis. Plumón marcador indeleble (para vidrio). 8. Consideraciones Específicas: Operaciones Caja térmica. Analíticas Refrigerantes. 8.1. Selección de ensayos c) Procedimiento: Los ensayos a realizar serán según el tipo de superficie que Para manos ha sido muestreada. 1. Vaciar el diluyente del frasco ( 100 mL) en una bolsa plás- ENSAYOS SUPERFICIES VIVAS SUPERFICIES INERTES tica de primer uso. 2. Introducir las manos a muestrear hasta la altura de la mu- Indicadores Coliformes totales Coliformes totales de Higiene ñeca. Staphylococcus aureus (') 3. Solicitar al manipulador que realice un frotado de los de- (') En el caso de superficies el S. aureus es considerado un indicador de dos y particularmente alrededor de las uñas y la palma de hig.iene ya que la toxina es generada en el alimento. la mano, adicionalmente el muestreador deberá realizar la misma operación a través de las paredes de la bolsa, Se considerará la búsqueda de patógenos tales como: Sal- durante un (01) minuto aproximadamente. monella sp., Listeria sp., Vibrio cholerae, en caso signifiquen 4. Luego de retirar las manos se regresa el líquido al frasco un peligro para el proceso. Para la detección de patógenos se o se anuda la bolsa y ésta se coloca en otra bolsa para deberá tomar una muestra diferente (de la misma superficie) que esté segura; en este caso, la bolsa que se utilice a la muestreada para indicadores de higiene. debe ser estéril. 8.2. Procedimiento para el control mlcroblológlco con Para recipientes (frascos, Jarras, otros) aplicación del método del hisopo 1. Vaciar en el recipiente a muestrear una parte de la solu- Procedimiento de análisis microbiológicos ción estéril (frasco con 100 mL) y agitar vigorosamente. Sea por métodos rápidos o convencionales, los ensayos mi- 2. Regresar la solución a su frasco original. crobiológicos se realizarán utilizando métodos normalizados 3. Cerrar herméticamente el frasco para su traslado. por organismos internacionales como la Organización Inter- nacional para la Estandarización (ISO: Internacional Organi- Para objetos pequeños (piezas de equipos, otros) zation for Standardization), Métodos Oficiales de Análisis de 1. Se introduce individualmente cada objeto en el frasco o la Asociación Internacional de Químicos Analíticos Oficiales bolsa con la solución estéril y agitar vigorosamente. (AOAC: Official Methods of Analysis of the Association of 2. Luego con una pinza estéril, retirar el objeto pequeño del Official Analytical Chemists lnternational), Administración de frasco o bolsa. Alimentos y Drogas/Manual Analítico Bacteriológico (FDA/ 3. Si se muestrea más de un objeto pequeño de igual natu- BAM: Food and Drug Administration/Bacteriological Analytical raleza, se debe considerar esto en el cálculo de resulta- Manual), Comisión Internacional de Especificaciones Micro- dos a fin de evitar reportes inexactos. biológicas para Alimentos (ICMSF: Internacional Comission d) Conservación y Transporte de la muestra on Microbiological Specifications for Foods), Asociación Ame- ricana para la Salud Pública I Compendio de Métodos para el Las muestras se colocarán en un contenedor isotérmico con Análisis Microbiológico de Alimentos (APHA/CMMEF: Ameri- gel refrigerante, el cual se distribuirá uniformemente en la can Public Health Association I Compendium of Methods for base y en los laterales, para asegurar que la temperatura del the Microbiological Examination of Foods), entre otros; utili- contenedor no sea mayor de 1 OºC, a fin de asegurar la vida zando la técnica de recuento en placa. útil de la muestra hasta su llegada al laboratorio. El tiempo de transporte entre la toma de muestra y la recepción en el labo- Cálculo y expresión de resultados ratorio estará en función estricta de dicha temperatura, no de- a) Cálculo biendo exceder las 24 horas y excepcionalmente las 36 horas. Para superficies regulares: el número de colonias obtenidas Se deberá registrar la temperatura del contenedor al colocar (ufc) se multiplicará por el factor de dilución y por el volumen las muestras y a la llegada al laboratorio con la finalidad de solución diluyente utilizada en el muestreo (10 mL) y se de asegurar que las mismas hayan sido transportadas a la dividirá entre el área de la superficie hisopada o muestreada temperatura indicada. (100cm2).
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Para superficies irregulares: el número de colonias obtenido b) Expresión de resultados (ufc) se multiplicará por el factor de dilución y por el volumen Los resultados se expresarán: de la solución diluyente usada. - Para superficies regulares: ufc/ cm2 b) Expresión de resultados - Para superficies irregulares: ufc/ superficie muestreada (ej. Los resultados se expresarán: cuchilla de licuadora, cubierto, etc). Para superficies regulares en: ufc / cm2: c) Interpretación de resultados de acuerdo a los límites Para superficies irregulares en: ufc/ superficie muestrea- microbiológicos da (ej. cuchilla de licuadora, cuchara, etc.). Se deberá expresar la cantidad de superficies muestreadas. (ej. ufc/ SUPERFICIES INERTES 4 cucharas). MÉTODO Sup.!rficie Regular Supilrficie Irregular c) Interpretación de resultados de acuerdo a los límites ESPONJA
microbiológicos Limite de Limite Limite de
Limite Permisible ENSAYO Detección Pennisible Detección del (') del Método l'I Método <25ufc/ SUPERFICIES INERTES Coliformes wperficie < 25ufc/ <1ufc/cm2 <1 ufc/cm1 superficie totales lllleslreada METOOO ("\ muestreada i) HISOPO Superficie Regular Superficie Irregular Ausencia I Ausencia/ Ausencia I Ausencia I superficie superficie Límite de Umílede Limite Patógeno wperficie superficie Limite Permisible muestreada muestreada en ENSAYO Detección Deteccioo del Permisible lllleslreada muestreada (') en cm2 ("') cmz('") del Método Método (') <10ufc/ <10ufc/ Colfformes (') En las operaciones analíticas, estos valores son indicadores de ausencia. <0,1 ufc/cm2 <1ufclcm2 superficie superficie totales (") Para 4 utensilios. muestreada muestreada Ausencia/ Ausencia/ Ausencia / Ausencia/ (.. ') Indicar el área muestreada, la cual debe ser mayor o igual a too cm2• superficie wperticie Patógeno superficie superficie muestreada muestreada en cm2 muestreada muestreada encm2("l (") 8.4. Procedimiento para el control microbiológico con (') En las operaciones analíticas, estos valores son indicadores de ausencia. aplicación del método del enjuague (.. ) Indicar el área muestreada, la cual debe ser mayor o igual a 100 cm2. Procedimiento de análisis mlcroblológlco 8.3. Procedimiento para el control microbiológico con Sea por métodos rápidos o convencionales, los ensayos mi- aplicación del método de la esponja crobiológicos se realizarán utilizando métodos normalizados por organismos internacionales como la ISO, AOAC, FDA/ Procedimiento de análisis microbiológico BAM, ICMSF, APHA/CMMEF, entre otros; utilizando la técnica Sea por métodos rápidos o convencionales, los ensayos mi- de recuento en placa. crobiológicos se realizarán utilizando métodos normalizados Cálculo y expresión de resultados por organismos internacionales como la ISO, AOAC, FDA/ BAM, ICMSF, APHA/CMMEF, entre otros; utilizando la técnica a) Cálculo de recuento en placa. Para superficies vivas: el número de colonias obtenidas (ufc) Cálculo y expresión de resultados se multiplicará por el factor de dilución y por el volumen de solución diluyente utilizada en el muestreo (100 mL). a) Cálculo Para objetos pequeños o para el muestreo de superficies in- Para superficies regulares: el número de colonias obtenidas teriores de envases, botellas, bolsas de plástico, entre otros, (ufc) se multiplicará por el factor de dilución y por el volumen el número de colonias obtenido (ufc) se multiplica por el factor de solución diluyente utilizada en el muestreo (100 mL) y se de dilución y por el volumen de solución diluyente utilizado dividirá entre el área de la superficie muestreada (100 cm2). en el muestreo (100 mL) y se divide entre las 4 superficies Para superficies irregulares: el número de colonias obtenido muestreadas (ej. envases, bolsas de plástico). (ufc) se multiplica por el factor de dilución y por el volumen de solución diluyente utilizado en el muestreo (100 mL) y se b) Expresión de resultados divide entre las 4 superficies muestreadas (ej. cuchillas de li- Los resultados se expresarán: cuadoras, utensilios como cucharas, vasos, etc.). - Para superficies vivas: ufc/ manos.
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Para superficies internas: ufc/ superficie muestreada (ej. envases, bolsas de plástico, etc). NOMBRE: AGAR BAJRD·PARKER Descripción Para el aislamiento y ta difecenciación de Estafilococos en alimentos y c) Interpretación de resultados de acuerdo a los límites y Uso: materiales farmacéuticos, según Baild-Paiker(1962). microbiológicos Este medio de cultivo contiene clorurode litio y telurito para la inhibición de la flora acompañante, en tanto que et piruvato y la glicocola actúan favoreciendoselectivamente el ccecimiento de Estafilocooos. SUPERFICIES Sobre el medio de cu!Uvo, opaco por su contenido en yema de huevo, M TODO ENJUAGUE Vivas Pequeñas o Internas las colonias de Estafilococos muestran dos caracteristicas diagnósticas Limtte de Limite Limtte de Limite poc lipólisis y proteólisis, se producen halos y anillos caracierístioos y, Detección ENSAYO Permisible(') Detección Permisible r) debido a la reducción del telurilo a teluro, se desarrolla una cotooia del Método del Método Forma de <25ufc/ < 25 ufc/ negra. La reaccióo con la yema de huevo y la reducción del telurito se actuación Coliformes < 100 ufc/ < 100 ufc I superficie superficie presentan coo notable pacalelismo coo la coagulasa-positiva, y por tanto, totales manos manos muestreada muestreada " H pueden utilizacse como indice de esta última. Staphylococcus < 100 ufc/ < 100 ufc I aureus manos manos Para una demostración directa de Estafilococos coagutasa-positiva, ha Ausencia I Ausencia I Ausencia/ Ausencia/ sido recomendado por Stadhouders y col. (1976) el incorporar al medio Patógeno manos manos superficie superficie de cultivo plasma sanguíneo en lugar de yema de huevo. muestreada muestreada Smith y Bai!d-Paiker (1964) recomiendan añadir sulfametacina para (') En las operaciones analíticas, estos valores son indicadores de ausencia. inhibir el crecimiento de Proteus. (") Para 4 utensilios. Disolver 53 g en 0,95 Peptona de caseína 10,0 litros, esterilizar en Extractode carne 5,0 autoclave (15 min. a 9. ANEXO 1 Extracto de levadura 1,0 121º C), enfriar a 45· Piruvato sódico 10,0 SO'C, añad~ mezclando Cuadro Referencial sobre Preparación de Medios de Cultivo Glicina 12,0 50 ml de emulsión de Los siguientes son los medios de uso más frecuente. Existen Cloruro de litio 5,0 yema de huevo telurito otros medios reconocidos y validados por organismos interna- Agar-agar 1í.Q y, eventualmente, 50 cionales que podrán ser utilizados. 53,0 mg1litro de Aditivos: Sulfametacina. Verteren Composición: emulsión de yema de 50,0 Preparación: placas. (gil) huevo telurito (ml); pH: 6,8 ±0,2 eventualmente, En tanto que el medio sulfametacina (g) 0,05 de cultivo basal puede gua!darse de 1 a 2 meses a 4'C, el medio de cultivo completo, vertido en placas ha de ser util~ado dentro de las 24 horas siguientes a su r aración. Diluir convenientemente el material a investigar y extenderlo finamente sobre la superticie del medio de cultivo. Incubación: Desde 24 hasta 48 horas a 37'C. Empleo e Las colonias de Staph~ococcus aureus se presentan negras, lustrosas, interpretación: convexas, de 1 a 5 mm de diámetro, con borde estrecho blanquecinc, rodeado por un halo claro de 2 a 5 mm de anchura. Dentro del halo claro presencia de anillos opacos no visibles antes de las 48 horas de incubación.
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NOMBRE: CALDO DE CEREBRO- CORAZÓN (Brain Heart Broth) EMULSIÓN YEMA DE HUEVO TELURITO NOMBRE: (Egg-yolk Tellurite Emulsión) Para el cultivo de óveroos microorganismos patógeoos exigootes. la emulsión yema de huevo-telurito, se em~ea como aditivo en el Agar Descripción y Estos medios de cultivo correspooden a las recomoodaciooes de los Descripción y Baird Parker (base), y posibiltta la demostración de la actividad lecitinasa Uso: Standard Methods for lhe Examinalion of Water and Wastewater (1992). Uso: y la reduooión del telurito. Estos medios de cultivo se basan en el priocipio del Caklo Rosenow Agitar el kasco ccn lueiza preparado con trozos de cerebro (Rosenow 1919) y son adecuados con Yema de huevo 500,00 para resuspender el posible trozos el cultivo de muchas bacterias exigentes, como Estreptococos, estéril sedimento formado. 50 mL Pneu~. Meningococos y otros. Para el cultivo Gonococos hay Cloruro de sodio 4,25 de la emulsióo de yema se que añadir liquido ascíoco. Telurito potásioo 2,10 mezclan con 950 ml del Agua destilada medio de cultivo esterilizado B Caldo de cerebro-corazón es especialmente adecuado para el cultivo hasta 1000 mi y enfriado a 45-50 'C. de Estafilococos destinados al ensayo de plasma coagulasa y para la Verter e11 placas. realización de hemocultivos. B crecimiento de gémlenes anaerobios o microaerófilos resulta decisivamente mejorado por la adición al Caldo de Al tomar la emulsión del Irasco, cuidar de que se pequeñas cantidades de .A¡¡ar-agar (aprox. 0,05-0,2%). Composición: Preparación: efectúe de forma estéril. Sobre la base del Agar--0erebro-rorazón, Queiroz y col. (1987) (g.'L) desarroOaron un agar sel€ctivo para Camp~obacler pylori, Al contrario que las placas deno11'inándolo Medio Belo fbrizonte (MBH). para cuya preparación se añaden por separado la B Agar-Oelebro-oorazón, aparte de Sil aplicación en el terreno emulsión y el telurito Forma de bacteriológico, es adecuado también para el cultivo de hongos potásico, aquellas placas actuación: patógenos. El crecimiento de fibra bacteriana de acooipañamiento que se preparan con puede inhibirse notablemente por adición de 20 UI de Per.ciina y 40 ug emulsión yema de huevo- de Estreptomicina por ml de medio de cultivo. Se recomiooda la adición telurito son estables de Ciclohexinida (0,05 uglml) y de Cloranfenicol (0,5 uglml) para el aproximadamente 2 meses aislamiento selectivo de hongos exigentes, especialmente de almacenadas a 4'C. Hist~fasma capsufatum y Blastomyces, a partir de materiales policontarninados o~eto de investigación. AGAR·PEPTONA DE CASElNA-PEPTONA DE HARINA DE Este medio de cultivo es menos adecuado para el estudio de las fonnas NOMBRE: SOJA{TSA) hemolíticas (tras adición de sangre), debido a su contenido de glucosa. Diluir 40 gramos del Disolver 52 gil (Agar• medio de cultivo en Substrato aimenlicio 27,5 cerebro--Oorazón) o bien 1000 mi de agua (extracto de cerebro, 37 gil (Caldo de Peptooa de caseína 15,0 destilada, dejar extracto de corazón y Cerebro-Corazón) y Peptooa de harina de 5,0 reposar por 15 peptona) esterilizar oo autoclave soya minutos, calentar en D(t )-glucosa 2,0 (15minutosa 121•q Cloruro de sodio 5,0 baño maria hasta Agar 15.0 disolver por completo. Composición: Cloruro sódico S,O Preparación: pH: 7,4±0,2 Composición: 4o,o Preparación: Distribuir en tubitos de (gil) Hidrógenofosfato 2,5 Ambos meoos de (g.'L) 13 x 100 mm a razón disódico cultivo son Dgeramente pH: 7,3.!,0,2 de 3 ml, llevar a .A¡¡ar 1M parduscos. El caldo este1ilizar en autoclave 52,0 liene un aspecto claro, a 121'C, de 15 libras mientras que el agar de presión, durante 15 puede presentar, a minutos, dejar enlriaJ. veces, opalescencia. Los tubos destinados al cepario no necesitan Em~eo e inclinación. interpretación: De acuerdo oon la correspondioote descripción y uso.
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NOMBRE: ROJO VIOLETA BILIS AGAR (VRBA) AGUA PEPTONADA AL 0,1% (Solución diluyente para el NOMBRE: Descripción Agar selectivo para la demostración y numeración de bacterias procesamiento) y Uso: coliformes, inclusive E. ccli, según OAVIS (1951), en agua, leche, helados, carnes y otros alimentos. Disolver 1 gramo de El Violeta cristal y las sales biliaresnhiben el crecimiento sobre todo, de peptona en 1000 ml de Fonna de la flora gram-posttiva aoompañante. la degradación de la lactosa a ácido Peptona 1g agua destilada. actuación se pone de manifiesto poi el viraje a rojo del indicador de pH Rojo neutro y por una precipitación de ácidos biliares. Agua destilada 1000ml D~lribuir en frascos con lapa rooca de 250 ml en Extracto de levadura 3,0 Composición: Peptona 7,0 Disolver 39,5 glfitro y pH: 7,0 Preparación: volúmeoes de 100 ml o esterilizar con ccJidado {gil) Sales biliares 1,5 (30 minutos a vapor ~s cantidades que se Lactosa 10,0 requ~ren en cada método. fluente). Composición: Cloruro de sodio 5,0 (g/L) Rojo neutro 0,03 Preparación: ¡No esterilizar en Esterilizar durante 15 autoclave! minutos a 121ºCI 15 lilk'as Cristal violeta 0,002 El medio de cultivo Agar 15.0 preparado es claro y de presión. 41,532 1 pH :7,4 ±0,1 rojizo parduzco. Este medio de cultivo se siembra, casi siempre según el procedimiento Empleo e de vertido en placa. interpretación NOMBRE: TIOSULFATO DE SODIO (Neutralizante) Incubación: 24 horas a 37 ºC.
SOLUCIÓN AMORTIGUADORA DE FOSFATOS (Solución Diswer f O gramos de
NOMBRE: tiosuHato de sodio en 100 diluvente) Disolver el fosfato en 500 ml de ml de agua destilada. agua destilada y ajustar el pH a Para 100 ml de solooón 7,2 con hidróxido de sodio 1N. Llevar a un litro con agua TioouHato de soaio 10g diluyeote. colocar O, 1 ml destilada. Agua destilada 100ml de una solución al 10% de Composición: tiosuHato de sodio. Esterilizar du1ante 15 minutos a Preparación: (gil) 121'C. Conservar en refrigeración. Para neutralizar los KH¡P04 34 g Transferir 1,25 ml de la solución a vestigios de cloro e impedir Agua 1000 ml un matraz aforado, nevar a un litro de esta manera que destilada con agua destilada, ésta úttíma es la solución de trabajo. continué ejerciendo su acción bactericida y Composición: (gil) Preparación: Distribuir en frascos con tapa de álSl!inuya. rosca eo volúmenes de 50 mi o las canlidades que se requieren en cada método. Esterilizar a 121'C durante 15 minutos.
Para el análisis de superficies de
manos. Transferir 1,25 ml de solución concentrada a un matraz aforado de un litro, agregar un ml de octil fenol etoxilato. Llevar a un litro con agua destilada. Distribuir eo frasoos en volúmenes de 50 ml. Esterilizar a 121'C durante 15 minutos.
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