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TECNOLÓGICA DE MORELIA
Laboratorio
Asignatura: BIOLOGÍA
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
Revisión: 3
“BIOLOGÍA”
Cuatrimestre: MAYO-AGOSTO Plan de estudios: 2015
Página 1 de 53
PREFACIO
Como parte de la intensa labor para elevar la calidad en la enseñanza, la Academia de
Biotecnología de la Universidad Tecnológica de Morelia se ha dado a la tarea de elaborar los
manuales correspondientes a las diferentes asignaturas. El presente manual incluye
procedimientos tradicionales en el campo de la Biología donde por un lado se pretende familiarizar
a los estudiantes con las técnicas propuestas. Al mismo tiempo, el contar con un Manual de
Practicas para el curso de Biología promueve que los alumnos adquieran habilidades en el manejo
técnico del material y equipos, facilitando la comprensión y aplicación de protocolos propios del
área.
OBJETIVO DE LA ASIGNATURA
GUIA DE BIOSEUGRIDAD
INSTRUCCIONES GENERALES
ü La asistencia al laboratorio es obligatoria.
No habrá reposición de prácticas en sesiones posteriores. En caso de inasistencia, ésta solo se justificará bajo la
presentación por escrito del comprobante correspondiente, sin que ello represente la calificación proporcional a la actividad.
El justificante deberá entregarse en la sesión inmediata posterior. En estos casos, la calificación práctica será 0.
EVALUACION
ü La ponderación de laboratorio corresponde a un 70% del total (SABER HACER).
ü La calificación teórica (SABER 20%) deberá ser aprobatoria, mínimo 8.0, para
acceder a la calificación practica.
ü Cada alumno deberá trabajar con una bitácora en la que incluirá el número y titulo de la
practica, objetivo de la practica, una breve introducción con reseña bibliográfica, hipótesis,
procedimiento experimental, cuestionario contestado y fuentes bibliográficas, así como la
lista de cotejo incluida en este manual.
.
ü El objetivo e hipótesis elaborarán por equipo.
ü Así mismo, si el equipo considera que alguno (s) de los integrantes no ha trabajado o
colaborado de manera adecuada en la realización dela práctica, queda bajo
responsabilidad del mismo el incluirlo en los resultados y demás a aspectos a evaluar.
ü La bitácora se revisará al inicio de cada sesión y una semana después de haber concluido
la practica.
ü El plagio o copia de algún reporte de laboratorio de otro equipo, actual o de años pasados,
o el copiado de literatura publicada sin las citas correspondientes representa una seria
violación a los derechos de autor, por lo que se tomarán las acciones pertinentes. En este
caso, se anulará la calificación del reporte del equipo (s).
ü Área de trabajo: limpiar el área de trabajo antes y después de su uso con EtOH 70%.
ü Seguridad personal: utilizar bata de laboratorio solo durante la sesión. Lavarse las manos
con agua y jabón antes de salir del laboratorio. No comer o beber en tazas dentro del
laboratorio. Emplear técnicas asépticas para el manejo de bacterias. Proteger los ojos y
manos con lentes de plástico o caretas y guantes de látex, respectivamente, cuando se
necesite. Los guantes deberán usarse una sola vez y al final depositarse en el contenedor
disponible. Se deberán utilizar zapatos cerrados y el cabello recogido durante las sesiones
practicas.
ü Riesgos biológicos: tratar todos los cultivos como potenciales patógenos. Nunca succionar
con la boca las pipetas. Siempre usar una pro-pipeta. Si un cultivo es derramado, cubrir
las sustancias con toallas de papel; verter hipoclorito abundantemente sobre las toallas;
levantarlas con cuidado y tirarlas en el contenedor adecuado. Limpiar el área con toallas
nuevas y permitir que se seque. Colocar los cultivos inservibles en un recipiente para
llevarlos al autoclave antes de desecharlos. Colocar los microtubos, puntas de plástico,
cubreobjetos, portaobjetos y pipetas Pasteur en recipientes individuales con hipoclorito
para su reutilización. Colocar los objetos de metal, material de vidrio roto, objetos de
plástico quebradizo (excepto ajugas o navajas) en los recipientes indicados. Colocar
pipetas (de 1 a 10 ml) en las cubetas indicadas. Se agregará a las diluciones bacterianas
hipoclorito durante 30 min. Los recipientes se enjuagarán con abundante agua y jabón.
ü Tejidos animales: todos los utensilios empleados en el manejo de tejidos animales serán
tratados; el material de vidrio se lavará con abundante agua y jabón; los utensilios
cortantes se colocarán en el recipiente indicado, así como papel, guantes y otros
contaminados con estos tejidos; las diluciones se colocarán en la tarja. Disponer los
líquidos en un contenedor independiente para líquidos animales. Autoclavear antes de
desechar.
ü Material de vidrio: remover las etiquetas y marcas de plumón del vidrio antes de colocarlo
en el contenedor para material sucio. Los tubos de ensayo así como las pipetas de vidrio
se colocarán en un recipiente, independiente, con una solución de etanol al 70% antes de
llevarlos al contenedor para material sucio.
ü Disposición de cajas petri y otro material de cultivo solido: utilizar recipientes con bolsas de
plástico para el desecho de las cajas petri contaminadas y cualquier otro material solido, no
punzocortante, contaminado con cultivos bacterianos (microtubos, puntas, etc.)
ü Disposición de material cortante: desechar todos los objetos cortantes (navajas, agujas,
jeringas con agujas) en contenedores etiquetados. No reemplazar el mango de la navaja
antes de desechar (muchos accidentes ocurren al reemplazar el mango). Los
contenedores deben ser autoclaveados antes de desecharlos.
ü Operación del equipo: no utilizar los equipos a menos que se conozca el empleo exacto de
los mismos. Pedir la asistencia del técnico e instructor.
ü Dejar el área de trabajo limpia al finalizar la practica. Todos los equipos, materiales y
utensilios deberán ser regresados e su sitio original.
Programación de prácticas
Practica No. 1: USO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO
Practica No. 2: OBSERVACIÓN DE CÉLULAS PROCARIONTAS Y EUCARIONTAS
Práctica No. 3: MEMBRANA CELULAR: ESTRUCTURA Y FUNCIÓN
Practica No. 4: ACCIÓN DE LISOSOMAS
Tipo de ecosistema.
Elementos que lo conforman
Propuesta de factores susceptibles de desarrollo, con lo anterior realizara una maqueta donde
represente a un ecosistema.
CALENDARIZACIÓN DE PRÁCTICAS
No. DE 3A 3B 3C 3E 3D
PRACTICA
Las fechas mostradas son tentativas. Si existiese algun cambio éste se notificará con
anticipación re-programándose nueva fecha para la realización de la práctica.
Las fechas marcadas en amarillo corresponden a una visita de campo a Yoricostio para
todos los grupos.
PRACTICA No. 1
OBJETIVO
MARCO TEÓRICO
El microscopio es sin duda el elemento más importante para el estudio de la morfología celular. El
tipo de microscopio más utilizado es el microscopio óptico, que se sirve de la luz visible para crear
una imagen aumentada del objeto. El microscopio óptico más simple es la lente convexa doble con
una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general
se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen
aumentos mayores. Algunos microscopios ópticos pueden aumentar un objeto por encima de las
2.000 veces, lo que resulta de granutilidad considerando, por ejemplo, que una célula animal típica
mide entre 10 y 20 µm de diámetro.
e) Lentes oculares; se encuentran en la parte superior del tubo, por lo general tienen un aumento
de 8X, 10X ó 12X. Los oculares están formados generalmente por un sistema de dos lentes plano
convexas simples o compuestas, separadas por un diafragma interno. El lente inferior se denomina
"lente de campo" y tiene por función recoger la mayor cantidad de rayos divergentes que vienen del
objetivo. Tiene su foco en el diafragma y ahí la imagen es aumentada por el lente superior.
f) Lentes objetivos; se encuentran montadas en el revólver que permite su intercambio durante la
observación. Las diferentes lentes están marcadas con su aumento y la apertura numérica, vale
decir el lente tiene la marca 10:1:AN 0.25 significa que ese objetivo tiene un aumento de 10, siendo
su apertura numérica 0.25. La lupa u objetivo menor tiene un aumento de 4X, los otros
generalmente son 10X, 40X y 100X.
En ocasiones también se habla de "objetivos a seco" y de "objetivos de inmersión", haciendo
referencia a lo que se encuentra entre la preparación y el objetivo. Así el objetivo a seco se refiere
a que entre la preparación la lente existe aire, mientras que los objetivos de inmersión requieren
que exista entre la lente y la preparación una sustancia conocida como aceite de inmersión.
Instrucciones básicas
Antes de observar cualquier preparación debe tener presente que el microscopio es un instrumento
delicado. Debido a esto debe utilizarse tomando en cuenta algunas instrucciones básicas:
a) Coloque el microscopio en una posición cómoda sobre una superficie plana. Tómelo siempre del
brazo o columna. Si desea cambiar la posición del instrumento levántelo y
NO lo arrastre por el mesón
b) Es conveniente chequear la limpieza de los diferentes lentes antes de comenzar la observación
c) Encienda la lámpara, baje el condensador y abra el diafragma completamente.
Realización de la observación
a) Aleje el objetivo de la platina y coloque la lente de aumento menor.
b) Seleccione la preparación que desea observar, revísela para asegurarse que esta se encuentra
limpia.
c) Abra la pinza del carro, coloque la preparación con el cubreobjeto hacia arriba y cierre el carro.
d) Ajuste la posición del carro de modo que la región a observar quede justo en el orificio de la
platina.
e) Usando el macrométrico acerque la lente a la preparación. Cuando logre un foco aproximado
utilice el micrométrico (gírelo lentamente) para el ajuste de precisión.
f) Si desea cambiar el aumento, gire el revólver y seleccione el nuevo objetivo a utilizar.
Debiera bastar un pequeño ajuste del micrométrico para llegar a foco, si fuera necesario reajuste la
iluminación usando el condensador. Si requiere usar el lente de inmersión NUNCA lo use como
objetivo seco, puede rayarlo
MATERIALES
• Microscopios compuestos , Portaobjetos *, Cubreobjetos*
MATERIAL BIOLÓGICO
• Cebolla*
• Jitomate*
• Adicionalmente los alumnos podrán traer material biológico diverso para su observación
REACTIVOS
• Azul de metileno
• Agua dd
PROCEDIMIENTO
- Realice el mismo procedimiento con el jitomate y las otras muestra biológicas que haya
traído.
ACTIVIDAD
CUESTIONARIO
BIBLIOGRAFÍA
PRACTICA No. 2
OBJETIVO (S)
MARCO TEÓRICO
Desde que Robert Hooke observó las celdas de corcho, otros científicos se dieron a la tarea de
investigar cómo estaban formados los seres vivos. Fueron tres de ellos quienes conformaron lo
que conocemos ahora como la Teoría Celular: el botánico Matthew Schleiden quien propuso a la
célula como la unidad estructural de las plantas, el zoólogo Theodor Schawn que hizo lo mismo
con los animales, y el médico y fisiólogo Rudolph Virchow que conjuntó las propuestas anteriores y
propuso que la célula se origina de otra célula.
Existen dos tipos de células en la naturaleza: las procarióticas (del griego πρό, pro = antes de y
κάρυον, karion = núcleo) y las eucarióticas (del griego εὖ, eu = bien y κάρυον, karyon = núcleo).
Las células comprendidas en el grupo de las bacterias y de las arqueas son procariontes. Todas
las otras formas de vida, incluyendo protozoarios, hongos, plantas y animales están compuestas
por células eucariotas.
Las células eucariotas contienen una serie de membranas internas que conforman los organelos,
que constituyen distintos compartimentos donde se llevan a cabo varias funciones, incluyendo
cloroplastos y mitocondrias (2).
La membrana celular de los procariotas está rodeada por una pared celular externa que es
elaborada por la propia célula. Ciertas células eucarióticas, incluyendo las de las plantas y hongos,
tienen una pared celular, aunque su estructura es diferente de la de las paredes celulares
procariotas. Otras células eucariotas, incluyendo las de nuestros propios cuerpos y las de otros
animales, no tienen paredes celulares (Figura 1.)
Los científicos han podido establecer que, en algún momento de la historia de la Tierra, diversos
tipos de eucariotas se escindieron de un tronco procariótico, formando ramas que evolucionaron de
manera independiente (1).
El paso de los procariotas a los primeros eucariotas (los protistas) fue una de las transiciones
evolutivas principales sólo precedida en orden de importancia por el origen de la vida. La cuestión
de cómo ocurrió esta transición es actualmente objeto de viva discusión. Una hipótesis interesante,
que gana creciente aceptación, es que se originaron células de mayor tamaño, y más complejas,
cuando ciertos procariotas comenzaron a alojarse en el interior de otras células (1).
La investigadora L. Margulis propuso el primer mecanismo para explicar cómo pudo haber ocurrido
esta asociación. La llamada "teoría endosimbiótica" (endo significa interno y simbionte se refiere a
la relación de beneficio mutuo entre dos organismos) intenta explicar el origen de cloroplastos y
mitocondrias eucariotas.
En la figura 2, se muestran los sucesos mas importantes de la historia biológica durante los últimos
4.6 BA de la Tierra.
MATERIALES
• Microscopio óptico, *portaobjetos, *cubreobjetos, mechero, papel filtro, aguja enmangada o
*lanceta, asa bacteriológica, palillos de dientes*
MUESTRAS BIOLÓGICAS
• Yogurt liquido*
• Muestras de charcas de agua*
• Trozo enmohecido de fruta o pan* o un cultivo de hongos
• Tejido vegetal como fuente de células para su observación (Elodea y cebolla)*
• Células epiteliales de la mucosa bucal *
*Material aportado por el alumno
REACTIVOS
• Azul de metileno
• Alcohol
• Aceite de inmersión
• Rojo neutro
• Solución de lactofenol
• Lugol
I. CÉLULAS PROCARIONTES
PROCEDIMIENTO:
PROCEDIMIENTO:
PROCEDIMIENTO:
PROCEDIMIENTO:
ACTIVIDADES
BACTERIAS DE
YOGURT
PROTOZOARIOS
HONGOS
CS VEGETALES
CS ANIMALES
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
BIBLIOGRAFIA
2. Audesirk. 2006. Biología, ciencia y naturaleza. México. Octava edición. Editorial Prentice
Hall Hispanoamericana S.A. Páginas 30-45.
3. Curtis, 2006. Biología. Buenos aires. Séptima edición. Editorial Médica Panamericana.
Paginas 22-35.
PRACTICA No. 3
OBJETIVO (S)
MARCO TEÓRICO
Los lípidos y proteínas son componentes primordiales de las membranas biológicas, aunque los
carbohidratos también son importantes. Los lípidos más abundantes son los fosfolípidos, que al ser
moléculas anfipáticas, se disponen en una bicapa con sus colas hidrófobas apuntando hacia el
interior y sus cabezas hidrófilas apuntando hacia el exterior (Figura 1).
Aunque los lípidos y las proteínas parecen estar anclados en una posición fija en la membrana, la
estructura de la bicapa es fluida. El modelo estructural mas aceptado actualmente es el del
“Mosaico Fluido” propuesto por J.Singer y G. Nicolson en 1972, que plantea que la membrana es
un mosaico de proteínas embebidas en una matriz fluida de fosfolípidos, de tal forma que la
mayoría de éstos y algunas proteínas pueden desplazarse lateralmente por la bicapa (1). El
7
movimiento de fosofolípidos es rápido, con un cambio de posición de 10 veces por segundo, lo
que significa que un fosfolípido puede viajar unos 2 µm/seg. En el caso de algunas proteínas
también presentan un desplazamiento similar aunque algunas otras permanecen inmóviles debido
a están unidas al citoesqueleto. Una membrana permanece fluida a medida que la temperatura
decrece, hasta que finalmente los fosofolípidos se disponen en un arreglo en el que las colas se
acomodan cercanamente y la membrana se solidifica. La temperatura a la cual solidifica una
membrana también depende del tipo de lípidos que la compongan, fosofolípidos con colas
hidrocarbonadas no saturadas o fosfolípidos saturados (2).
mismas. Las moléculas hidrofóbicas, o no polares, pasan con relativa libertad a través de la capa
de lípidos, por ejemplo el dióxido de carbono o el oxígeno (figura 2). . Mientras que moléculas
hidrofílicas, o polares, incluyendo el agua, la glucosa, otros azúcares y las moléculas de mayor
tamaño, pasan a través de canales formados por proteínas transportadoras. Un ejemplo de este
tipo de proteínas son las acuaporinas, las cuales forman canales que facilitan el paso de moléculas
de agua a través de la membrana
El componente principal de la célula es el agua, que actúa como solvente (el agente que disuelve)
de solutos orgánicos e inorgánicos. El movimiento de agua a través de una membrana
selectivamente permeable se llama osmosis (difusión de agua) y sucede siempre del área de
mayor concentración de agua (con menor concentración de soluto) al área de menor concentración
de agua (con mayor concentración de soluto). El agua se moverá entonces, a favor de un gradiente
de concentración hacia el área de mayor concentración de soluto (donde hay una menor
concentración de moléculas de agua libres). Cuando la célula contiene una concentración de
solutos mayor que su ambiente externo, se dice que la célula está en una solución hipotónica, y
como consecuencia, el agua entra a la célula causando que se expanda. Si la concentración de
solutos es mayor fuera de la célula, se dice que la célula está en una solución hipertónica; la célula
pierde agua y se encoge. Si las concentraciones de soluto son iguales en ambos lados de la
membrana, se dice que la célula está en una solución isotónica, donde el movimiento neto es cero.
Las células animales funcionan óptimamente en ambientes isotónicos. En las células vegetales, sin
embargo, cuando la vacuola se llena de agua, ésta ejerce presión contra la pared celular hasta
llegar a un punto donde se impida que entre más agua (presión de turgencia) y la célula se
encuentra túrgida (firme), lo cual es el estado ideal de estas células. Por otra parte, si la célula
vegetal pierde agua, la célula sufre plasmólisis al separarse la membrana celular de la pared
celular, lo cual suele ser letal para la célula (figura 3) (3).
MATERIALES
Microscopio compuesto, Portaobjetos y cubreobjetos, Lanceta estéril, Piseta para agua destilada
Piseta con alcohol, Pipeta Pasteur, Algodón
MATERIAL BIOLÓGICO
• 4 Ramas de Elodea con agua de su medio natural (si no se consigue, sustituir por hojas de
espinaca) *
• 6 gotas de sangre humana*
• Palillos de madera*
REACTIVOS
Aceite de inmersión
PROCEDIMIENTO
NaCl al 0.6%
NaCl al 0.9%
NaCl al 1.2%
NaCl al 10%
PROCEDIMIENTO
1. Seleccionar una hoja de Elodea en buen estado y colocarla sobre un portaobjetos limpio y
seco, con el envés de la hoja hacia arriba
Adicionar unas gotas de agua de su medio, suficientes para cubrir la hoja totalmente y
poner con cuidado el cubreobjetos. Realizar la observación correspondiente al microscopio
NaCl al 0.6%
NaCl al 0.9%
NaCl al 1.2%
NaCl al 10%
PRESENTACION DE RESULTADOS
Elaborar una tabla indicando las sustancias que se han agregado, isotónica, hipotónica o
hipertónica, para cada tipo de célula observada (animal o vegetal)
Realizar esquemas de cada una de las observaciones, anotando si la célula presenta plasmólisis,
turgencia, crenación o hemólisis.
ACTIVIDADES
CUESTIONARIO
BIBLIOGRAFÍA
1. Audesirk T., Audesirk G., Byers B. Biología, Ciencia y Naturaleza. 1ª ed. México: Pearson
Educación, 2004. 592 p.
2. Campbell, N., Reece, J. Biología. 7ª ed. España: Editorial Médica Panamericana S.A.
2007. 1532 p.
3. Alberts B., Bray D. Introducción a la Biología Celular. 2ª ed. España: Editorial Médica
Panamericana S.A. 2006. 740 p.
PRACTICA No. 4
ACCIÓN DE LISOSOMAS
OBJETIVO (S)
MARCO TEÓRICO
Los lisosomas son organelos característicos de células eucariotas y forman parte del sistema de
endomembranas. Son de forma esférica u ovalado, se localizan en el citosol, tienen un tamaño
relativamente grande -0.2 a 2um y pueden llegar a los cientos. Estos organelos son formados por
el retículo endoplasmático rugoso (REr) y luego empaquetados por el complejo de Golgi. En un
principio se pensó que los lisosomas serían iguales en todas las células, pero se descubrió que
tanto sus dimensiones como su contenido son muy variables (1)
organelos, contiene una bomba de protones impulsada por ATP que introduce H+ al interior (Figura
1). A consecuencia de esto, el lisosoma tiene un pH inferior a 5.0, óptimo para el funcionamiento
de las enzimas (2). A un pH neutro como el del citoplasma (7 a 7.3) las enzimas lisosómicas son
poco activas, lo que representa un mecanismo autoprotector contra la autodigestión indeseable de
la célula, en caso de que las enzimas pudieran salir del citoplasma (Bioqímica).
Las enzimas lisosomales son capaces de digerir partículas grandes como por ejemplo bacterias y
también otras sustancias que entran en la célula ya sea por fagocitosis, u otros procesos de
endocitosis. Eventualmente, los productos finales de la digestión –aminoácidos, azúcares o
nucleótidos- son transferidos hacia el citosol, desde donde la célula puede utilizarlos o excretarlos
(2).
Figura 2. Funciones del lisosoma. Degradación por autofagia de una mitocondria; digestión de material extracelular endocitado o
fagocitado.
Los lisosomas también utilizan sus enzimas para reciclar los diferentes organelos de la célula,
englobándolas, digiriéndolos y liberando sus componentes en el citosol. De esta forma el interior
celular se está reponiendo continuamente. Este proceso se llama autofagia. Por ejemplo, las
células hepáticas se reconstituyen por completo una vez cada dos semanas (3) (Figura 2).
Otra función de los lisosomas es la digestión de detritus extracelulares en heridas y quemaduras,
preparando y limpiando el terreno para la reparación del tejido.
Tipos de Lisosomas
Los lisosomas primarios son aquellos que sólo contienen las enzimas digestivas, mientras que
los lisosomas secundarios, por haberse fundido con una vesícula con materia orgánica,
contienen también sustratos en vía de digestión: vacuolas digestivas o heterofágicas, cuando el
sustrato procede del exterior; y vacuolas autofágicas, cuando procede del interior.
Cada lisosoma primario es una vesícula que brota del aparato de Golgi, con un contenido de
enzimas hidrolíticas sintetizadas en el RER, que pasan al aparato de Golgi por transporte vesicular,
ahí sufren una glicosilación terminal de la cual resultan con cadenas glucídicas ricas en manosa-6-
fosfato (manosa-6-P). La manosa-6-P es el marcador molecular, la “estampilla” que dirige a estas
enzimas hacia la ruta de los lisosomas. Se ha estudiado una enfermedad en la cual las hidrolasas
no llevan este marcador y no son reconocidas por las membranas del aparato de Golgi de tal forma
que son empaquetadas en vesículas de secreción para ser exocitadas. Quienes padecen esta
enfermedad acumulan hidrolasas en el medio extracelular, mientras sus células carecen de ellas
(3).
Los lisosomas secundarios tienen materiales en vías de digestión, además de enzimas. Son de
mayor tamaño y contenido heterogéneo. Las membranas lisosomales son poco comunes, porque
no sólo resisten la acción de las hidrolasas, sino que también son impermeable tanto a las enzimas
como a sus sustratos. Éstos se introducen en el lisosoma por fusión del lisosoma primario con
otras vesículas. La membrana lisosómica es permeable a los productos finales de la digestión de
bajo peso molecular. Existen diversas formas de lisosomas secundarios, según el origen de la
vesícula que se fusiona con el lisosoma primario.
Las enfermedades lisosómicas son aquellas causadas por la disfunción de alguna enzima o por la
liberación incontrolada de dichas enzimas en el citosol, lo que produce la lisis celular. También
existen enfermedades de almacenamiento lisosómico, alguna enzima del lisosoma tiene actividad
reducida o nula debido a un error genético y el substrato de dicho enzima se acumula y deposita
dentro del lisosoma que aumentan de tamaño a causa del material sin digerir, lo cual interfiere con
los procesos celulares normales (2).
MATERIALES
MATERIAL BIOLÓGICO
• Cultivo de levaduras de pan (30 ml) por grupo *
• Cultivo de ciliados (Paramecium spp.) previamente preparado, por equipo *
REACTIVOS
Solución de rojo congo al 0.4% (10 ml)
PROCEDIMIENTO
1. En tres tubos de ensayo, colocar en cada uno de ellos, 1 ml de cultivo de levaduras.
Un tubo se pone en el refrigerador durante 10 minutos. Otro se coloca en el termo baño a
30ºC, y el último se tapa con papel aluminio y se pone en un baño maría hirviendo durante
15 minutos.
2. Al termino de la exposición de cada temperatura, inmediatamente colocar a cada tubo 0.5
ml de rojo congo. Agitar cada tubo y dejar en reposo durante 5 minutos.
3. Realizar las observaciones al microscopio correspondientes a las muestras de cada uno de
los tubos, poniendo atención al grado de tinción que se presenta.
Con base en sus observaciones seleccione el cultivo de levaduras para cumplir mejor con
el objetivo de la práctica.
4. Colocar sobre un portaobjetos unas gotas del cultivo de levaduras seleccionadas
previamente con gotas de su cultivo de ciliados. Dejar dos minutos. Observar al
microsocpio y realizar un esquema inicial. Siga observando hasta visualizar de manera
análoga la función de los lisosomas en los ciliados (Paramecium), es decir el cambio de
color.
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
1. Tomando en cuenta sus observaciones experimentales, ¿Qué ocurre con las células de
levadura dentro de los ciliados y porqué? Esquematiza la secuencia de eventos
2. Discuta el mecanismo que ocurre al calentar las levaduras y al añadir el colorante.
3. ¿En qué estructura de la célula de levadura se incorpora el colorante?
4. Realice esquemas del origen y las funciones de los diversos tipos lisosomas
5. Menciona las enzimas contenidas en los lisosomas
6. ¿Cómo se logra mantener el pH en el interior de los lisosomas sin dañar la membrana
plasmática que los delimita?
7. ¿Qué tipo de transporte utiliza el Paramecio para incorporar a las levaduras?
8. Menciona tres enfermedades diferentes ocasionadas por el mal funcionamiento de los
lisosomas.
BIBLIOGRAFIA
1. Koolman, J. Bioquímica: texto y atlas. 3ª ed. Ed. Medica Panamericana. 2005. 488 p.
2. Alberts, B., Bray, D. Introducción a la biología celular. 2ª reimpresión. Ed. Medica
Panamericana. 2006. 740 p.
3. Devlin, T. Bioquímica, libro de texto con aplicaciones clínicas. 4ª ed. Ed. Reverte. 2004.
1216 p.
PRACTICA No. 5
OBJETIVO (S)
MARCO TEÓRICO
El ciclo celular es el período comprendido entre la formación de una célula, por división de otra
precedente, y el momento en que ella misma se divide para originar dos células hijas. Éste es un
proceso continuo característico de las células somáticas diploides (2n) eucariontes. El ciclo celular
se puede dividir en dos grandes períodos: interfase y mitosis, cada uno de los cuales se subdivide
en varias fases o etapas. La interfase se encuentra subdividida en 3 etapas:
En tanto que la mitosis comprende dos etapas principales: la cariocinesis (división nuclear) y la
citocinesis (división citoplásmica) (figura 1) (1). Durante la mitosis los cromosomas previamente
duplicados (fase S) se condensan y son visibles en forma de estructuras parecidas a hilos; el
núcleo se divide para formar dos, cada uno con el mismo número de cromosomas que el original,
los dos núcleos serán repartidos en las dos células hijas, cada una con aproximadamente la mitad
de citoplasma. Este último paso es la citocinesis, que proporciona a las dos células hijas todos los
organelos, enzimas, nutrimentos y demás moléculas que necesitan para continuar vivas
Específicamente en las plantas, la citocinesis incluye la formación de una placa y una pared celular
entre las nuevas membranas plasmáticas adyacentes de las células hijas, mientras que en las
células animales este proceso ocurre por escisión (2).
Cada mitosis única está asociada con una única división celular que produce dos células hijas
genética y cromosómicamente idénticas. Esta observación implica que si se rastreara el origen de
todas las células de un organismo multicelular, se llegaría al óvulo fecundado. Esta célula sufrió
una división celular mitótica para producir dos células genéticamente idénticas. Las divisiones
continuaron hasta producir los billones de células que compondrían a ese organismo. Sin embargo
y a pesar de que todas nuestras células tengan la misma información genética, existe un proceso
altamente complejo de diferenciación celular en el cual las células adquieren sus estructuras y
funciones especializadas (1)
ii) Metafase: El huso mitótico se hace prominente. Este consiste en una serie de fibras
microtubulares paralelas. Los cromosomas se mueven al plano ecuatorial de la célula y cada uno
queda unido a las fibras del huso por su centrómero.
iii) Anafase: Comienza cuando las cromátidas hermanas se separan, cada una moviéndose a polos
opuestos. La separación comienza por el centrómero, que también se divide cuando cada
cromátida se mueve.
iv) Telofase: La membrana nuclear se vuelve a organizar alrededor de cada núcleo hijo, los
cromosomas se desenrollan y el nucleolo reaparece. El huso desaparece y la membrana celular se
estrangula en la parte media del huso (citodiéresis), originando dos células idénticas (3).
El tejido más comúnmente utilizado para el estudio de la mitosis es el meristema de las raíces
nuevas (Figura 2).
Aunque por lo regular la mitosis y la citocinesis están acopladas pueden llevarse a cabo de forma
independiente. Ciertas células, como las tumorales, experimentan mitosis sin citocinesis. Este
proceso produce células individuales con múltiples núcleos. Un hecho interesante es que el ciclo
celular dura aproximadamente el mismo tiempo en todas las células de un mismo tipo celular pero
su duración difiere entre distintos linajes. Por ejemplo todas las neuronas se encuentran detenidas
en la etapa G1 y por lo general no se dividen de nuevo. En cambio, los eritrocitos sufren un
proceso de recambio donde son reemplazados cada segundo por 2 a 3 millones de células
precursoras. En el erizo de mar, el número de células se duplica cada dos horas (taggat).
MATERIALES
MATERIAL BIOLÓGICO
REACTIVOS
PROCEDIMIENTO
1. Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla. Al cabo de 5-6 días
aparecerán numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm. de longitud.
2. Cortar con las tijeras o una navaja los últimos 5 mm del extremo de las raicillas y
depositarlo en un vidrio de reloj o en una caja de Petri con agua destilada por 5 minutos.
3. Maceración y Tinción: para ello elimine el agua destilada y añada aproximadamente unos 2
cm3 de la orceína acética clorhídrica.
4. Dejar el colorante durante 10 min. Este paso es muy sensible al tiempo transcurrido.
5. Tomar la caja petri con las pinzas y calentarla suavemente a la llama del mechero,
evitando la ebullición y esperar hasta que se emitan vapores tenues.
6. Con las pinzas finas tomar con cuidado una raíz y colocarla sobre un porta, cortar con una
hojilla y conservar los 2 mm terminales del lado del meristema y eliminar el resto de la raíz.
El meristema se distingue por ser más blanco. ES MUY IMPORTANTE NO DEJAR
NUNCA QUE EL MATERIAL SE SEQUE EN EL PORTAOBJETOS.
7. Tapar el preparado con un cubreobjetos teniendo cuidado que no entre aire.
8. Colocar sobre la lámina una almohadilla de hojas de papel de filtro o una servilleta
absorbente y presione con la yema del dedo pulgar, primero suavemente y luego mas
intenso, contra la superficie plana y uniforme de una mesa, con cuidado de no romper la
lámina. Técnica de squash.
9. Aspirar con papel filtro el exceso de colorante
10. Realice las observaciones bajo el microscopio y localice las cuatro fases principales de la
mitosis y células en interfase.
RESULTADOS
- Utilizando aumento mediano y para tres campos diferentes cuente las células que se encuentran
en cada una de las fases de la mitosis: Profase, metafase, anafase, telofase y también las que
aparecen en interfase.
Interfase
Profase
Metafase
Anafase
Telofase
Calcule el índice mitótico (IM) utilizando los datos anteriores, de acuerdo a la siguiente fórmula:
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
BIBLIOGRAFIA
1. Audesirk, T. Biología: ciencia y naturaleza. 2ª ed. Ed. Pearson Educación. 2004. 592 p.
2. Starr, C., Taggat, R. Biología, la unidad y la diversidad de la vida. 10ª ed. Ed. Cengage
learning editores. 2004. 406 p.
3. Campbell, N., Reece, J. Biología. 7ª ed. España: Editorial Médica Panamericana S.A.
2007. 1532 p.
Práctica No. 6
OBJETIVO (S)
MARCO TEÓRICO
MATERIALES Y EQUIPO
Cámara de flujo laminar, autoclave, balanza, potenciómetro, cajas petri, frascos de vidrio estériles,
matraz y botellas de vidiro de 1 lt, probeta, pinzas, micropipetas, bisturies, tijeras, mecheros
bunsen, papel abosorbente, algodón
MATERIAL BIOLÓGICO
REACTIVOS
Solución de hipoclorito de sodio al 10%, solución de azida de sodio 1mM, 3mM, 5mM y 7mM
diluida en solución buffer, solución buffer pH 3 a base de KHP03 (0.4M) y ácido ortofosfórico de
pH3 filtrado, agua destilada esterilizada,
PROCEDIMIENTO
V. PRESENTACIÓN DE RESULTADOS
RESULTADOS
CONCLUSIONES Y DISCUSIÓN
CUESTIONARIO
1. Define el termino mutación
2. ¿A qué se le conoce como organismo silvestre?
3. ¿Qué es un agente mutagénico?
4. Describe las propiedades de la azida de sodio
5. Elabora una tabla con los diferentes tipos de agentes mutagénicos así como sus efectos y
ejemplos de ellos.
6. Enlista los factores a considerar para el uso de agentes mutagénicos
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
- Tl (lmM): Se diluyeron 3.25 mg de azida sódica en 50ml dela solución buffer previamente
mencionada.
- T2 (3mM): Se diluyeron 9.75 mg de azida sódica en 50ml dela solución buffer previamente
mencionada.
- T3 (5mM): Se diluyeron 16.25 mg de azida sódica en 50ml dela solución buffer previamente
mencionada.
- T4 (7mM): Se diluyeron 22.75 mg de azida sódica en 50ml dela solución buffer previamente
mencionada
BIBLIOGRAFÍA
Adamu, A.; Aliyu, H. 2007. Morphogical effects of sodium azide on tomato (Lycopersicon
esculentum Mili). Science World Joumal. Nigeria. 2(4). Páginas: 9-12
Ali, A., Yubey K., Deka, U., Tomar, S. 2014. Effect of Sodium Azide on Seed Germination and
Related Agro-Metrical Traits in M Lentil ( 1 Lens culinaris Medik.) Generation. World Joumal of
Agricultural Sciences. India. 10 (3). Páginas: 95-102.