GENOTIPIZACIJSKE METODE

Neke od metoda su sekvenciranje,pirosekvenciranje,hibridizacija.

Sekvenciranje

• Danas je u upotrebi princip Sangerovog sekeniranja ili sekvenciranje sa prekidom lanca.

Metoda se temelji na terminaciji produžavanju lanaca zbog promjenjenih nukleotida kojima

nedostaje -OH skupina.

Metode sekvenciranja sa prekidom DNA lanca zahtjevaju prisustvo:

• DNA prajmera

• Deoksinukleotidtrifosfata (dNTP)

• Modificirane nukleotide (dideoksiNTP)

Pirosekvenciranje

Za razliku od Sanger metode, pirosekvenciranje NIJE elektroforetska metoda

“sekvenciranje sintezom”

Metoda omogućuje sekvenciranje jednostrukog DNA niza sintetiziranjem komplementarnog

lanca

Željeni DNA slijed se može odrediti svjetlom emitiranim nakon ugradnje sljedećeg
komplementarnog nukleotida

Hibridizacija

Hibridizacija je proces sparivanja komplementarnih lanaca DNA uspostavljanjem vodikovih

veza između komplementarnih-baza.

Definicija genotipizacije - Proces utvrđivanja razlika na genetičkom nivou između različitih

analiziranih uzoraka. Genotipizacija je važna u istraživanju gena i genske varijante povezane s bolesti.

Metode genotipizacije između ostalog koriste se za identifikaciju bakterija, kontroli širenja

patogena, porijeklu epidemije.

PFGE – ELEKTROFOREZA - metoda razdvajanja velikih molekula DNK u agaroznom gelu pri čemu se
koristi električno polje. Ovom metodom je moguće razdvojiti genome i kromosome nekih
eukariotskih organizama. „Zlatni standard“ jer je najprecizniji za detekciju razlika među sojevima
jedne vrste. Iako su razvijene i druge metode ova metoda je najpreciznija i najtočnija za utvrđivanje
razlika i sličnosti između bliskih mikroorganizama,ali se utvrđuje i nivo srodnosti odnosno udaljenosti
među sojevima.