MAKALAH KARAKTERISTIK KIMIA MATERIAL

SPEKTROFOTOMETRI

Rocardo Fiipadhlillah Chang (1606822945)

Fakhrul Ihsan Syahputra (1606871101)
Anggi Martua Simatupang (1606907013)

UNIVERSITAS INDONESIA
DEPOK 2017
I. Pendahuluan
Spektrofotometer adalah alat untuk mengukur transmitan atau absorban suatu
sampel sebagai fungsi panjang gelombang, metode ini sering disebut
spektrofotometri. Teknik analisis spektrometri merupakan cara analisis yang
paling penting dan paling khas penggunaannya. Spektrofotometri dapat dianggap
sebagai perluasan suatu pemeriksaan visual dengan studi yang lebih mendalam
dari absorbsi radiasi. Absobrsi radiasi oleh suatu sampel diukur pada berbagai
panjang gelombang dan dialirkan ke suatu perekam yuntuk menghasilkan
spektrum yang khas untuk komponen yang berbeda. Analisis kimia dengan metode
spektrofotometri didasarkan pada interaksi sinar (radiasi elektromagnetik) dengan
materi. Interaksi meliputi proses adsobrsi, emisi, refleksi, dan transmisi oleh atom-
atom atau molekul dalam suatu materi. Spektrofotometri merupakan suatu teknik
analisis kimia untuk analisis kualitatif dan kuantitatif.

II. Prinsip Dasar Spektrofotometri

Larutan sampel dikenai radiasi elektromagnetik, sehingga menyerap energi /
radiasi lalu terjadi interaksi antara radiasi elektromagnetik dengan materi
(atom/molekul). Jumlah intensitas radiasi yang diserap oleh larutan sampel
dikonversi dengan konsentrasi analit merupakan data kuantitatif. Berdasarkan jenis
materi yang berinteraksi dengan radiasi elektromagnetik, dibagi :
1. Spektrometri molekul  radiasi elektromagnetik berinteraksi dengan
molekul.
Contoh : NMR, IR, UV-Vis, XRD
2. Spektrometri atom  radiasi elektromagnetik berinteraksi dengan atom
Contoh : AAS, AFS

Istilah-istilah penting:

 Spektrofotometer  spektrometer + fotometer

 Spektrometer  menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang
tertentu
 Fotometer  alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau
diabsorpsikan
  Spektrofotometer  untuk mengukur energi secara relatif jika energi tersebut
ditransmisikan, direfleksikan atau diemisikan.

Radiasi Elektromagnetik:

 
V = 
C 
Energi Foton:

C C
E = h = h  =
  C = u
Keterangan:
V = Wave Number (cm-1)
l = panjang gelombang (nm-1)
C = kecepata cahaya = 3 x 1010 cm/sec.
u = frekuensi (Hz)
h = (Tetapan Planck) = 6.62 x 10-27 (Ergsec)
Cara Kerja Spektrofotometer:

 Sumber cahaya (Lampu): memancarkan semua warna cahaya (yaitu, cahaya

putih).
 Monokromator: memilih satu panjang gelombang dan panjang gelombang yang
dikirimkan melalui sampel.
 Detektor: mendeteksi panjang gelombang cahaya yang telah melewati sampel.
 Amplifier: meningkatkan sinyal sehingga lebih mudah untuk baca terhadap
kebisingan latar belakang.

III. Analisis Kuantitatif Spektrofotometri UV/Vis

IV. Analisis Sampel Tunggal
 Konsentrasi sampel tunggal bisa ditentukan dengan mengukur
absorbansinya dan mengaplikasikan Hukum Beer dengan metode standardisasi.
Metode standardisasi paling sering dipakai adalah kurva kalibrasi normal dan
metode adisi standar.

V. Analisis Campuran

Analisis dua komponen atau lebih pada sampel yang sama sangat mudah
jika ada daerah dalam spektrum sampel dimana masing-masing komponen
merupakan satu-satunya spesies yang menyerap. Dalam hal ini masing-masing
komponen dapat dianalisis seolah-olah itu adalah satu-satunya spesies dalam
larutan. Sayangnya, penyerapan UV / Vis band sangat luas sehingga tidak mungkin
untuk menemukan yang sesuai dengan panjang gelombang dimana setiap
komponen campuran menyerap secara terpisah. Sebelumnya kita mengetahui
bahwa hukum Beer bersifat penjumlahan. Dengan demikian, untuk campuran dua
komponen dari X dan Y, absorbansi campuran, Am, dapat dinyatakan dengan:

..............(1)

dimana 𝜆1 adalah panjang gelombang dimana absorbansi diukur. Sejak persamaan

termasuk persyaratan untuk kedua konsentrasi X dan Y, absorbansi pada satu
panjang gelombang tidak memberikan informasi yang cukup untuk menentukan
CX atau CY. Jika kita mengukur absorbansi pada panjang gelombang kedua, 𝜆2,

..............(2)

maka CX dan CY dapat ditentukan dengan cara memecahkan persamaan (1) dan
(2).

VI. Uv-Vis Spektrofotometri Serta Aplikasinya

Pengertian Spektrofotometri uv-vis adalah pengukuran serapan cahaya di daerah
ultraviolet (200-400 nm) dan sinar tampak (400-800 nm) oleh suatu senyawa.
Serapan cahaya uv atau cahaya tampak mengakibatkan transisi elektronik, yaitu
promosi elektron-elektron dari orbital keadaan dasar yang berenergi rendah ke
orbital keadaan tereksitasi berenergi lebih tinggi. Panjang gelombang cahaya uv
atau cahaya tampak bergantung pada mudahnya promosi elektron.

Spektroskopi UV / Vis dan Inframerah

 Instrumentasi
Biasanya, seorang analis harus memilih dari beberapa instrumen dengan
desain yang berbeda, suatu instrumen yang paling cocok untuk analisis tertentu.
Desain Instrumen untuk Penyerapan Molekul UV/Vis:
1. Filter Photometer
Merupakan instrumen paling sederhana untuk UV/Vis penyerapan
molekul, yang menggunakan filter penyerapan atau filter interferensi
untuk mengisolasi pita radiasi. Filter diletakkan diantara sumber dan
sampel untuk menghindari penguraian sampel ketika terkena radiasi
energi yang lebih tinggi. Filter photometer memiliki jalur optik tunggal
antara sumber dan detektor, dan disebut instrumen sinar tunggal.
Instrumen dikalibrasi sampai 0% T saat menggunakan shutter untuk
memblokir radiasi sumber dari detektor. Setelah membuka shutter,
instrumen dikalibrasi sampai 100% T dengan menggunakan blank yang
sesuai. Blank tersebut kemudian diganti dengan sampel dan
transmitansinya diukur. Karena kekuatan kejadian sumber dan
sensitivitas detektor bervariasi dengan panjang gelombang, fotometer
harus dikalibrasi ulang ketika filter diubah. Fotometer memiliki
keunggulan yang relatif murah, kasar, dan mudah dirawat. Keuntungan
lain dari fotometer adalah portabilitasnya, sehingga mudah dibawa ke
lapangan. Kekurangan fotometer termasuk ketidakmampuan untuk
merekam spektrum penyerapan dan bandwidth efektif sumber yang
cukup besar, yang membatasi linearitas kurva kalibrasi.
 Gambar 10.25. Diagram skematis
dari sebuah filter photometer.
Analis memasukkan filter yang
dapat dilepas atau filter
ditempatkan dalam korsel,
contohnya ditunjukkan di inset
fotografi. Analis memilih filter
dengan memutar ke tempatnya.

2. Single-Beam Spectrophotometer
Instrumen yang menggunakan monokromator untuk pemilihan
panjang gelombang disebut spektrofotometer. Spektrofotometer yang
paling sederhana adalah instrumen sinar tunggal yang dilengkapi
dengan monokromator dengan panjang gelombang tetap.
Spektrofotometer single-beam dikalibrasi dan digunakan dengan cara
yang sama seperti fotometer. Salah satu contoh Spektrofotometer
single-beam adalah Thermo Scientific's Spectronic 20D+. The Spectronic
20D+ memiliki jangkauan 340-625 nm (950 nm bila menggunakan
detektor merah-sensitif), dan bandwidth efektif tetap 20 nm.
Spektrofotometer single-beam lainnya juga tersedia dengan bandwidth
efektif 2-8 nm.

Gambar 10.26 Diagram skematik

Spektrofotometer single-beam-
panjang gelombang tetap. Inset
fotografi menunjukkan instrumen
yang khas. Shutter ditutup sampai
sampel atau blank ditempatkan di
kompartemen sampel. Analis
secara manual memilih panjang
gelombang dengan mengatur
panjang gelombang.

3. Double-Beam Spectrophotometer
 Keterbatasan spektrofotometer single-beam fixed-wavelength
diminimalkan dengan menggunakan spektrofotometer balok ganda.
Sebuah chopper mengendalikan jalur radiasi, bergantian di antara
sampel, the blank, dan shutter. Prosesor sinyal menggunakan kecepatan
putaran chopper yang diketahui untuk menyelesaikan sinyal yang
mencapai detektor ke transmisi kosong, P0, dan sampelnya, PT. Dengan
memasukkan permukaan buram sebagai shutter, memungkinan untuk
terus menyesuaikan 0% T. Bandwidth efektif Double-Beam
Spectrophotometer dikendalikan dengan mengatur celah masuk dan
keluar monokromator. Bandwidth efektif 0,2-3,0 nm biasa terjadi.
Monokromator pemindaian memungkinkan dilakukannya rekaman

Gambar 10.27. Diagram skematik

pemindaian, Double-Beam
Spectrophotometer. Sebuah chopper
mengarahkan radiasi sumber, dengan
menggunakan jendela transparan
untuk melepaskan radiasi ke sampel
dan cermin untuk memantulkan radiasi
ke blank. Permukaan buram chopper
berfungsi sebagai shutter, yang
memungkinkan penyesuaian konstan
spektrofotometer 0% T. Penyisipan
fotografi menunjukkan instrumen yang
khas. Unit di tengah foto adalah unit
kontrol suhu yang memungkinkan
sampel dipanaskan atau didinginkan.

spektra otomatis. Double-beam instrument lebih fleksibel daripada

single-beam instrument, berguna untuk analisis kuantitatif dan
kualitatif, namun juga lebih mahal.

4. Diode Array Spectrometer

Instrumen dengan detektor tunggal hanya dapat memonitor satu
panjang gelombang pada satu waktu. Jika kita mengganti satu
photomultiplier dengan banyak fotodioda, kita dapat menggunakan
rangkaian detektor yang dihasilkan untuk merekam keseluruhan
spektrum secara bersamaan hingga 0,1 s. Dalam diode array
 spectrometer, radiasi sumber melewati sampel dan didispersikan oleh
kisi. Susunan fotodioda terletak di bidang fokus kisi-kisi, dengan setiap
dioda merekam kekuatan bercahaya di atas rentang panjang
gelombang yang sempit. Salah satu keuntungan dari diode array
spectrometer adalah kecepatan perolehan data, yang memungkinkan
untuk mengumpulkan beberapa spektrum untuk satu sampel tunggal.

Gambar 10.28. Diagram

skematik diode array
spectrometer. Penyisipan
fotografi menunjukkan
instrumen yang khas.
Perhatikan bahwa gelas 50 mL
memberi rasa skala.

5. Sample Cells
Kompartemen sampel menyediakan lingkungan yang ketat sehingga
membatasi penambahan radiasi nyasar. Sampel biasanya berada dalam
keadaan cair atau larutan, dan ditempatkan di sel yang dibuat dengan
bahan transparan UV / Vis, seperti kuarsa, kaca, dan plastik. Sel kuarsa
diperlukan saat bekerja pada panjang gelombang <300 nm di mana
bahan lain menunjukkan penyerapan yang signifikan. Pathlength yang
paling umum adalah 1 cm (10 mm), meskipun sel dengan jarak yang
lebih pendek (sesedikit 0,1 cm) dan pathlength yang lebih panjang
(sampai 10 cm) tersedia. Pathlength yang lebih panjang berguna saat
menganalisis larutan yang sangat encer, atau untuk sampel gas. Sel
dengan kualitas terbaik memungkinkan radiasi menembus permukaan
datar pada sudut 90o, meminimalkan hilangnya radiasi menjadi
refleksi. Tabung uji sering digunakan sebagai sel sampel dengan
instrumen balok tunggal sederhana, walaupun perbedaan sifat
pathlength dan optik sel menambahkan sumber kesalahan tambahan
ke analisis.
 Gambar 10.29. Contoh sel sampel untuk spektroskopi
UV / Vis. Dari kiri ke kanan (dengan panjang lintasan
dalam tanda kurung): cuvette plastik persegi panjang
(10,0 mm), kuarsa kuarsa kuarsa (5.000 mm), kuarsa
kuarsa kuarsa (1.000 mm), kuarsa kuarsa silinder
(10.00 mm), kuarsa kuarsa silinder (100,0 mm ). Sel
sering tersedia sebagai pasangan yang cocok, yang
penting bila menggunakan instrumen double-beam.

Desain Instrumen untuk Penyerapan Inframerah:

1. Filter Photometer
Instrumen paling sederhana untuk spektroskopi serapan IR adalah
fotometer saringan yang serupa dengan yang ditunjukkan pada Gambar
10.25 untuk penyerapan UV / Vis. Instrumen ini memiliki keuntungan
dari portabilitas, dan biasanya digunakan sebagai analisa khusus untuk
gas seperti HCN dan CO
2. Double-beam Spectrophotometer
Instrumen inframerah menggunakan monokromator untuk
pemilihan panjang gelombang menggunakan optik duble-beam yang
serupa dengan yang ditunjukkan pada Gambar 10.27. Optik double-
beam lebih disukai daripada optik single-beam karena sumber dan
detektor untuk radiasi inframerah kurang stabil daripada radiasi UV /
Vis. Selain itu, lebih mudah untuk mengoreksi penyerapan radiasi
inframerah oleh uap atmosfer CO2 dan H2O saat menggunakan optik
double-beam.
3. Fourier Transform Spectrometer (FT-IR)
Monokromator diganti dengan interferometer. Karena FT-IR hanya
mencakup jalur optik tunggal, perlu untuk mengumpulkan spektrum
terpisah untuk mengkompensasi absorbansi CO2 di atmosfer dan uap
H2O. Hal ini dilakukan dengan mengumpulkan spektrum latar belakang
tanpa sampel dan menyimpan hasilnya dalam memori komputer
instrumen. Spektrum latar belakang dikeluarkan dari spektrum sampel
dengan membandingkan dua sinyal. Dibandingkan dengan desain
instrumen lainnya, FT-IR menyediakan akuisisi data yang cepat, yang
 memungkinkan peningkatan rasio signal-to-noise melalui rata-rata
sinyal.
4. Sample Cells
Spektroskopi inframerah secara rutin digunakan untuk
menganalisis sampel gas, cairan, dan padat. Sel sampel terbuat dari
bahan, seperti NaCl dan KBr, yang transparan terhadap radiasi infra
merah. Gas dianalisis menggunakan sel dengan panjang jalan kira-kira
10 cm. Pathlength yang lebih panjang diperoleh dengan menggunakan
cermin untuk melewatkan sinar radiasi melalui sampel beberapa kali.
Sampel cair dapat dianalisis dengan menggunakan berbagai sel sampel
yang berbeda (Gambar 10.32). Untuk cairan non-volatile, sampel yang
sesuai dapat disiapkan dengan menempatkan setetes cairan di antara
dua pelat NaCl, membentuk lapisan tipis yang biasanya tebalnya kurang
dari 0,01 mm. Cairan volatil harus ditempatkan di sel tertutup untuk
mencegah penguapannya.

Tiga contoh sel sampel IR: (a) piring

garam NaCl; (b) sel sampel fixed
pathlength (0,5 mm) dengan jendela
NaCl; (c) kartu sekali pakai dengan
jendela polietilena yang transparan
dengan IR kecuali pita serabut kuat
pada 2.918 cm-1 dan 2849 cm-1.

Analisis sampel larutan dibatasi oleh sifat penyerap IR pelarut, dengan

CCl4, CS2, dan CHCl3 merupakan pelarut yang paling umum. Solutions ditempatkan
di sel yang berisi dua jendela NaCl yang dipisahkan oleh Teflon spacer. Dengan
mengubah Teflon spacer, pathlength dari 0,015-1,0 mm dapat diperoleh.

 Aplikasi Kuantitatif
Penentuan konsentrasi analit berdasarkan penyerapan sinar ultraviolet
atau radiasi yang terlihat adalah salah satu metode analisis kuantitatif yang
paling sering ditemui. Salah satu alasan untuk popularitasnya adalah bahwa
banyak senyawa organik dan anorganik memiliki band penyerapan yang
kuat di wilayah spektrum UV / Vis dari spektrum elektromagnetik. Selain itu,
jika analit tidak menyerap radiasi UV / Vis - atau jika absorbansi terlalu
lemah - kita dapat mereaksikan dengan spesies lain yang sangat menyerap.
Misalnya, larutan encer Fe2+ tidak menyerap cahaya tampak. Mereaksikan
Fe2+ dengan o-phenanthroline, bagaimanapun, membentuk kompleks
oranye merah kompleks Fe(phen)32+ yang memiliki band absorbansi yang
luas dan kuat di dekat 500 nm.
1. Aplikasi Lingkungan
Analisis air dan air limbah sering bergantung pada penyerapan
sinar ultraviolet dan radiasi yang terlihat. Banyak dari metode ini
diuraikan pada Tabel dibawah.
Tabel Contoh Analisis Molekuler UV/Vis dari Air dan Air Limbah
Analit Metode λ (nm)
Trace Metals
Aluminium Reaksikan dengan Eriochrome cyanide R dye pada pH 535
6; membentuk kompleks merah - pink
Arsenic Reduksi menjadi AsH3 menggunakan Zn dan bereaksi 535
dengan silver diethyldithiocarbamate; membentuk
kompleks merah
Cadmium ekstrak ke dalam CHCl3 yang mengandung dithizone 518
dari sampel yang dibuat dengan NaOH; membentuk
kompleks pink – merah
Chromium Oksidasi menjadi Cr (VI) dan reaksikan dengan 540
diphenylcarbazide; membentuk produk merah –
violet
Copper Reaksikan dengan neocuprine dalam larutan netral- 457
sedikit asam dan ekstrak ke dalam CHCl3/CH3OH;
membentuk kompleks kuning
Iron Reduksi menjadi Fe2+ dan reaksikan dengan o- 510
phenanthroline; membentuk kompleks jingga - merah
 Lead Ekstrak ke dalam CHCl3 yang mengandung dithizone 510
sampel yang dibuat dengan buffer NH3/NH4+;
membentuk kompleks merah ceri
Manganese Oksidasi menjadi MnO4- dengan persulfate; 525
membentuk larutan ungu
Mercury Ekstrak ke dalam CHCl3 yang mengandung dithizone 492
dari sampel asam; membentuk kompleks jingga
Zinc Reaksikan dengan zincon pada pH 9; membentuk 620
kompleks biru
Inorganic Nonmetals
Ammonia Reaksikan dengan hypochlorite dan phenol 630
menggunakan katalis garam mangan; membentuk
produk indophenol biru
Cyanide Reaksikan dengan chloroamine-T untuk membentuk 578
CNCl, lalu dengan asam pyridine-barbituric;
membentuk pewarna merah-biru
Fluoride Reaksikan dengan red Zr-SPADNS lake; pembentukan 570
dari ZrF62- mengurangi warna dari red lake
Chlorine Reaksikan dengan leuco crystal violet; membentuk 592
(Residual) produk biru
Nitrate Reaksika dengan Cd untuk membentuk NO2- lalu 543
reaksikan dengan sulfanilamide dan N-(1-napthyl)-
ethylenediamine; membentuk pewarna red azo
Phosphate Reaksikan dengan ammonium molybdate lalu reduksi 690
dengan SnCl2; membentuk molybdenum biru
Organics
Phenol Reaksikan dengan 4-aminoantipyrine dan K3Fe(CN)6; 460
membentuk pewarna yellow antipyrine
Anionic Reaksikan dengan pewarna kationik methylene biru 652
surfactant dan ekstrak ke dalam CHCl3; membentuk pasangan ion
biru
 Meskipun analisis kuantitatif logam di perairan dan air limbah dilakukan
terutama oleh penyerapan atom atau spektroskopi emisi atom, banyak
logam juga dapat dianalisis mengikuti pembentukan kompleks ligan logam
berwarna. Satu keuntungan dari metode spektroskopi ini adalah mudah
disesuaikan dengan analisis sampel di lapangan dengan menggunakan
filter photometer. Satu ligan yang digunakan dalam analisis beberapa logam
adalah diphenylthiocarbazone, juga dikenal sebagai dithizone. Dithizone
tidak larut dalam air, namun bila larutan dithizone dalam CHCl3 dikocok
dengan larutan berair yang mengandung ion logam yang sesuai, bentuk
kompleks logam-dithizonate berwarna yang larut dalam CHCl3.
Selektivitas dithizone dikendalikan dengan menyesuaikan pH sampel.
Sebagai contoh, Cd2+ diekstrak dari larutan yang dibuat sangat basa dengan
NaOH, Pb2+ dari larutan yang dibuat dengan buffer NH3 / NH4+, dan Hg2+
dari larutan yang sedikit asam.
2. Aplikasi Klinis
Analisis sampel klinis sering dipersulit oleh kompleksitas matriks
sampel, yang dapat menyebabkan penyerapan latar belakang yang
signifikan pada panjang gelombang yang diinginkan. Penentuan
barbiturat serum memberikan satu contoh bagaimana mengatasi
masalah ini. Tabel dibawah memberikan ringkasan beberapa metode
lain untuk menganalisis sampel klinis.
Analit Metode λ (nm)
Total serum react with NaOH and Cu2+ ; forms blue-violet 540
protein complex
Serum react with Fe3+ in presence of isopropanol, 540
cholesterol acetic acid, and H2SO4; forms blue-violet
complex
Uric acid react with phosphotungstic acid; forms 710
tungsten blue
Serum extract into CHCl3 to isolate from interferents 260
barbiturates and then extract into 0.45 M NaOH
 Glucose react with o-toludine at 100oC; forms blue- 630
green complex
Protein- decompose protein to release iodide, which 420
bound iodine catalyzes redox reaction between Ce3+ and
As3+; forms yellow colored Ce4+

3. Analisis Industri
Penyerapan molekul UV / Vis digunakan untuk analisis beragam
sampel industri termasuk obat-obatan, makanan, cat, kaca, dan logam.
Dalam banyak kasus, metode serupa dengan yang dijelaskan pada tabel-
tabel diatas. Misalnya, jumlah zat besi dalam makanan dapat ditentukan
dengan membawa besi ke dalam larutan dan menganalisis menggunakan
metode o-phenanthroline.

4. Aplikasi Forensik
Penyerapan molekul UV / Vis secara rutin digunakan untuk analisis
narkotika dan pengujian obat. Salah satu aplikasi forensik yang menarik
adalah penentuan alkohol dalam darah dengan menggunakan tes
Breathalyzer. Dalam tes ini sampel nafas 52,5 mL digelembungkan
melalui larutan asam K2Cr2O7, yang mengoksidasi etanol menjadi asam
asetat. Konsentrasi etanol dalam sampel nafas ditentukan oleh
penurunan absorbansi pada 440 nm dimana ion dikromat menyerap.
Kandungan alkohol dalam darah 0,10%, yang berada di atas batas legal,
sesuai dengan 0,025 mg etanol dalam sampel nafas.

Spektrofotometer UV-Vis pada umumnya digunakan untuk:

 Menentukan jenis kromofor, ikatan rangkap yang terkonjugasi dan ausokrom
dari suatu senyawa organik.
 Menjelaskan informasi dari struktur berdasarkan panjang gelombang
maksimum suatu senyawa.
 Mampu menganalisis senyawa organik secara kuantitatif dengan menggunakan
hukum Lambert-Beer.

Spektrofotometri UV-Vis adalah pengukuran panjang gelombang dan intensitas

sinar ultraviolet dan cahaya tampak yang diabsorbsi oleh sampel. Sinar ultraviolet
dan cahaya tampak memiliki energi yang cukup untuk mempromosikan elektron
pada kulit terluar ke tingkat energi yang lebih tinggi. Spektroskopi UV-Vis biasanya
digunakan untuk molekul dan ion anorganik atau kompleks di dalam larutan.
Spektrum UV-Vis mempunyai bentuk yang lebar dan hanya sedikit informasi
tentang struktur yang bisa didapatkan dari spektrum ini sangat berguna untuk
pengukuran secara kuantitatif. Sinar ultraviolet berada pada panjang gelombang
200-400 nm, sedangkan sinar tampak berada pada panjang gelombang 400-800
nm.

Panjang gelombang (λ) adalah jarak antara satu lembah dan satu puncak,
sedangkan frekuensi adalah kecepatan cahaya dibagi dengan panjang gelombang
(λ). Bilangan gelombang adalah (v) adalah satu satuan per panjang gelombang.
(Dachriyanus, 2004)

Kebanyakan penerapan spektrofotometri UV-Vis pada senyawa organik

didasarkan n-π* ataupun π-π* karena spektrofotometri UV-Vis memerlukan
hadirnya gugus kromofor dalam molekul itu. Transisi ini terjadi dalam daerah
spektrum (sekitar 200 ke 700 nm) yang nyaman untuk digunakan dalam
eksperimen. Spektrofotometer UV-Vis yang komersial biasanya beroperasi dari
sekitar 175 atau 200 ke 1000 nm. Identifikasi kualitatif senyawa organik dalam
daerah ini jauh lebih terbatas daripada dalam daerah inframerah. Ini karena pita
serapan terlalu lebar dan kurang terinci. Tetapi, gugus-gugus fungsional tertentu
seperti karbonil, nitro dan sistem tergabung, benar-benar menunjukkan puncak
yang karakteristik, dan sering dapat diperoleh informasi yang berguna mengenai
ada tidaknya gugus semacam itu dalam molekul tersebut. (Day & Underwood,
1986).
Panjang Gelombang:

Contoh Soal 1:
Analisis kafein dalam kopi bubuk di Kota Manado mengguakan Spektrofotometri
UV-Vis
Jawab:

 Preparasi sampel
Preparasi yang dilakukan adalah proses ekstraksi dengan menggunakan
pelarut organik. Pelarut yang digunakan yaitu kloroform. Ekstraksi dilakukan
secara berulang sehingga kafein yang dihasilkan benar-benar murni.
Penyaringan larutan setelah ekstraksi diperlukan agar diperoleh larutan yang
jernih. Larutan didiamkan sehingga terbentuk 2 lapiasan. Lapisan bawah
kloroform yang mengandung analit. Lapisan atas kloroform yang mngandung
pengotor.
 Pengenceran
Kafein dari hasil ekstraksi kemudian diencerkan. Pengenceran ini dilakukan
dengan tujuan agar konsentrasi larutan kafein yang terdapat dalam sampel
tidak terlalu pekat yang akan menimbulkan over range dalam pembacaan
menggunakan spektrofotometer.
 Pembuatan Larutan Baku Kafein
Larutan standar kafein dipipet sebanyak 2,5 mL dan dimasukkan ke dalam labu
takar 25 mL, kemudian diencerkan dengan akuades hingga garis tanda yang
digunakan sebagai larutan baku.
 Penentuan Kadar Sampel
Absorbansinya dibaca pada panjang gelombang 275 nm dengan blanko serapan
akuades dan dihitung jumlah kafein dari angka serapan masing-masing.
 Pembuatan Kurva Standar.
Larutan standar dibuat dengan mengambil : 0,05; 0,1; 0,15; 0,2; 0,25; 0,3 mL
dari larutan standar kafein 2,5 mL/25 mL yang dibuat dari larutan induk 1000
mg/L, kemudian diencerkan lagi ke dalam 5 mL akuades. Konsentrasi larutan
standar yang diperoleh berturut-turut adalah : 1; 2; 3; 4; 5; 6; 7; 8 mg/L
 Penentuan Panjang Gelombang
Pengukuran dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer uv- vis.
Larutan yang diukur tdak berwarna dan menggunakan sumber lampu
deutorium.
Mula-mula pengukuran dilakukan dengan mengukur zero base yang dilakukan
dengan mengukur blanko, kemudian dilanjutkan dengan mencari panjang
gelombang maksimum dengan cara mengukur salah satu deret standar yang

telah dibuat kemudian dibaca panjang gelombang maksimumnya.

Daerah serapan sampel kafein berada sekitar panjang gelombang 200 – 350
nm. Panjang gelombang pada absorbansi maksimum berada pada panjang
gelombang 275 nm.
 Uji Kuantitatif Kafein metode Spektrofotometri UV-Vis
Kafein yang telah diencerkan kemudian diukur absorbansinya menggunakan
spektrofotometri UV-Vis. Absorbansi dari tiap-tiap sampel dibuat kurva
sehingga dapat ditentukan persamaan (Y=mx+C) untuk mencari konsentrasi
dari masing-masing sampel.
VII. Hukum Lambert-Beer

Hukum Lambert-Beer (Beer`s law) adalah hubungan linearitas antara absorban

dengan konsentrasi larutan sampel. Konsentrasi dari sampel di dalam larutan bisa
ditentukan dengan mengukur absorban pada panjang gelombang tertentu dengan
menggunakan hukum Lambert-Beer.
Biasanya hukum Lambert-Beer ditulis dengan:

Hubungan antara Transmitansi dan Absorbansi

Transmitansi
T = I / Io
ket: I : Intensitas cahaya setelah melewati sampel
Io : Intenitas cahaya awal

Hubungan Absorbansi dengan %T

A = -logT = -log(I / Io)
-A
T = (I / Io) = 10
%T = (I / Io) x 100
A = -logT = log(1 / T)
 Menurut Dachriyanus (2004), Hukum Lambert-Beer terbatas karena sifat kimia
dan faktor instrumen. Penyebab non linearitas ini adalah:
 Deviasi koefisien ekstingsi pada konsentrasi tinggi (>0,01 M), yang disebabkan
oleh interaksi elektrostatik antara molekul karena jaraknya yang terlalu dekat.
 Hamburan cahaya karena adanya partikel dalam sampel.
 Flouresensi atau fosforesensi sampel.
 Berubahnya indeks bias pada konsentrasi yang tinggi.
 Pergeseran kesetimbangan kimia sebagai fungsi dari konsentrasi.
 Radiasi non-monokromatik; deviasi bisa digunakan dengan menggunakan
bagian datar pada absorban yaitu pada panjang gelombang maksimum.
 Kehilangan cahaya.

Daftar Pustaka
Day, R.A, dan Underwood A.L, 1998, Analisis Kimia Kuantitatif, Edisi Keenam, Penerbit
Erlangga, Jakarta, Hal 383-404
Dachriyanus, Dr, 2004, Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi, Andalas
University Press, Padang, Hal 1-2 dan 8-9
Khopkar, S.M, 1990, Konsep Dasar Kimia Analitik, Universitas Indonesia (UI-Press),
Jakarta, Hal 215-216