EQUIPOS E IMPLEMENTOS LABORATORIALES

TALIA LIZANI MILTOS PEÑA

Monografía presentada a la catedra de nutrición animal 5to semestre, Universidad Nacional

De Asunción, Facultad de Ciencias Agrarias, Filial Pedro Juan Caballero.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE ASUNCION

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
CARRERA INGENIERIA AGRONOMICA
FILIAL PEDRO JUAN CABALLERO
2018

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 I- INTRODUCCION

El uso de los métodos y equipamientos laboratoriales han tenido un gran desenvolvimiento en

los últimos años transcurridos, tales métodos fueron modificados, mejorados para un resultado
más preciso, optimo y con menos tiempo de empleo en las mismas.

Su finalidad se centra en la obtención de informaciones nutricionales y minerales de los

alimentos consumidos tanto por el ser humano y por los animales.

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 II- DESARROLLO:
A- Metodo de Weende – Kjeldahl:

El método Kjeldahl se utiliza para la determinación del contenido de nitrógeno en muestras

orgánicas e inorgánicas. Desde hace más de 100 años se está utilizando el método Kjeldahl para
la determinación del nitrógeno en una amplia gama de muestras. La determinación del nitrógeno
Kjeldahl se realiza en alimentos y bebidas, carne, piensos, cereales y forrajes para el cálculo
del contenido en proteína. También se utiliza el método Kjeldahl para la determinación de
nitrógeno en aguas residuales, suelos y otras muestras.

Es un método oficial y descrito en múltiples normativas: AOAC, USEPA, ISO, DIN,

Farmacopeas y distintas Directivas Comunitarias.

El método Kjeldahl consta de tres etapas: Digestión: El nitrógeno orgánico se convierte en

NH4+, Destilación: NH3 es destilado y recogido en un recipiente receptor y Valoración donde
se determina el nitrógeno.

1- Digestión:

El objetivo del procedimiento de digestión es romper todos los enlaces de nitrógeno de la

muestra y convertir todo el nitrógeno unido orgánicamente en iones amonio (NH4+).

El carbono orgánico y el hidrógeno forman dióxido de carbono y agua. En este proceso la

materia orgánica se carboniza dando lugar a la formación de una espuma negra. Durante la
digestión, la espuma se descompone y finalmente se convierte en un líquido claro que indica
que la reacción química ha terminado. Para ello, la muestra se mezcla con ácido sulfúrico a
temperaturas entre 350 y 380 ºC. Cuánto más alta sea la temperatura, más rápido será el proceso
de digestión. La digestión también se puede acelerar con la adición de sales y catalizadores. Se
añade sulfato de potasio para aumentar el punto de ebullición del ácido sulfúrico y se añaden
catalizadores para aumentar la velocidad y la eficiencia del procedimiento de digestión.
También se pueden añadir agentes oxidantes para mejorar aún más la velocidad.

Una vez la digestión ha finalizado, se deja enfriar la muestra a temperatura ambiente, se diluye
con agua y se trasvasa a la unidad de destilación.

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2- Destilación:

Durante el proceso de destilación los iones amonio (NH4+) se convierten en amoniaco (NH3)
mediante la adición de un álcali (NaOH). El amoniaco (NH3) es arrastrado al vaso receptor por
medio de una corriente de vapor de agua. ( NH4)2SO4 + 2NaOH= 2NH3 (gas) + Na2SO4 +
2H20

El vaso receptor para el destilado se llena con una solución absorbente para capturar el gas
amoniaco disuelto.

 La solución absorbente más común es el ácido bórico [B(OH)3] en solución acuosa al

2-4%. El amoniaco es capturado cuantitativamente por la solución de ácido bórico formando
iones amonio solvatados. B(OH) 3 + NH3 + H2O= NH4+ + B(OH)4-
 También pueden utilizarse otros ácidos, dosificados con precisión, como el ácido
sulfúrico o clorhídrico para capturar el amoniaco en forma de iones amonio solvatados. H2SO4
(total) + 2NH3= SO42- + 2 NH4+
3- Valoración:

La concentración de los iones amonio capturados puede determinarse por medio de dos tipos
de valoración:

 Cuando se utiliza el ácido bórico como solución absorbente, posteriormente se lleva a

cabo una valoración ácido-base utilizando una solución estandarizada de ácido sulfúrico o
clorhídrico y una mezcla de indicadores. El rango de concentración de la solución utilizada
varía entre 0,01N a 0,5N dependiendo de la cantidad de iones amonio presentes. El punto final
de la valoración también se puede determinar potenciométricamente con un electrodo de pH.
Esta valoración se llama valoración directa. X- + B(OH)3 + H2OB(OH) 4 - + HX----- HX=
ácido fuerte (X= Cl-, etc.)
 Cuando se utiliza una solución valorada de ácido sulfúrico como solución absorbente,
el ácido sulfúrico residual (es decir, el exceso que no reacciona con NH3) se valora con una
solución estandarizada de hidróxido sódico y la cantidad de amoniaco se calcula por diferencia.
Esta valoración se llama valoración indirecta o por retroceso. H2SO4 (residual) + 2NaOH=
SO42- + 2Na+ +2H20

Esquema del proceso

Las cantidades de muestra óptimas (de 0,01 a 5 g) dependen del contenido de nitrógeno
esperado, pero también afecta la elección de la concentración del valorante. El límite de las

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cantidades de muestra normalmente necesita ser determinado experimentalmente. Debería
contener de 30 a 140 mg de N. Idealmente, el tamaño de partícula debería ser <1 mm. La
muestra debe ser homogénea y se debe moler o triturar si es necesario.

El volumen de ácido sulfúrico 98% utilizado va en función del consumo esperado de ácido
sulfúrico en la reacción redox que convierte el ácido sulfúrico en dióxido de azufre. Al final de
la digestión, debe quedar un exceso de ácido en cantidad suficiente para mantener los iones de
amonio no volátiles en solución y prevenir la pérdida de amoniaco volátil. Típicamente, para 1
g de muestra, se usan dos comprimidos de Kjeldahl de 5 g junto con 20 mL de ácido sulfúrico
al 98% y se aplican tiempos de digestión de 90 minutos. Una buena proporción es de 1 g de
mezcla de catalizador Kjeldahl por cada 2 mL de ácido sulfúrico al 98%.

El tiempo de digestión depende de la estructura química de la muestra, la temperatura, las

cantidades de sal sulfato y de catalizador.

Reactivos utilizados para el método de kjeldahl:

1- Digestión:
1.1. Catalizadores Kjeldah:

Los catalizadores están compuestos por más del 97% de una sal que provoca un aumento en la
temperatura de ebullición del ácido sulfúrico y del 1-3% de un tipo de catalizador o una mezcla
de catalizadores para aumentar la velocidad y la eficiencia del procedimiento de digestión. Los
catalizadores típicos son selenio o sales metálicas de cobre o titanio.

La selección de un determinado catalizador depende de aspectos ecológicos y tóxicos o de

razones más prácticas como el tiempo de reacción o la formación de espuma y la pulverización.
Por ejemplo, el catalizador que contiene selenio reacciona más rápido, pero es tóxico, mientras
que un catalizador que contiene cobre es considerablemente más seguro para las personas y el
medio ambiente, pero da un proceso de digestión más lento. Un compromiso ideal es el
catalizador mixto que consiste en cobre y sulfato de titanio.

En muestras que contienen agua, por ejemplo, en determinaciones de nitrógeno total Kjeldahl
(NTK), se pueden formar espuma y fuertes salpicaduras debido a las tabletas Kjeldahl. En estos
casos es apropiado utilizar una mezcla de catalizador en polvo y perlas reguladoras de
ebullición. Además, los tiempos de digestión dependen del tipo de muestra, el volumen de ácido
sulfúrico, la proporción de ácido y sal y el tipo de catalizador. Por ejemplo, las grasas, aceites

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y los compuestos heterocíclicos aromáticos se digieren más fácilmente si el catalizador contiene
selenio.

El uso de cobre como catalizador se está volviendo más común por ser más respetuoso con el
medioambiente. Actualmente, el selenio o el cobre se utilizan como catalizadores en más del
90% de las digestiones de Kjeldahl que se realizan en todo el mundo.

1.2. Ácido y oxidante para la digestión:

En aplicaciones generales de alimentos y piensos, se utiliza ácido sulfúrico al 98% para las
digestiones. Sin embargo, las aplicaciones especiales pueden requerir modificaciones en la
concentración de ácido sulfúrico o mezclas de ácidos. Como ejemplo, las determinaciones de
proteínas de la leche y derivados a menudo se llevan a cabo utilizando un ácido sulfúrico al
69% para reducir el riesgo de formación de espuma.

También se pueden añadir agentes oxidantes para mejorar aún más la velocidad. El peróxido
de hidrógeno es el más ampliamente utilizado ya que acelera la descomposición del material
orgánico y también tiene una acción antiespumante para controlar la formación de espuma
durante la digestión. Sin embargo, es extremadamente reactivo y el riesgo de pérdidas de
nitrógeno es bastante alto. Si la formación de espuma es el único problema, es mejor usar 1-3
gotas de una emulsión antiespumante comercial.

Después de la digestión y antes de la neutralización del ácido sulfúrico con hidróxido sódico
concentrado, la muestra se deja enfriar a temperatura ambiente y se diluye con agua destilada.
Esto se hace para evitar salpicaduras de la muestra debido a la ebullición provocada por el calor
de reacción desprendido al mezclar el ácido concentrado y la base. Además, si las muestras se
diluyen con 10-20 mL de agua justo después del enfriamiento, se puede evitar la cristalización.

2- Destilación:

2.1 Álcalis para neutralización y liberación de amoníaco:

La muestra ácida se neutraliza por medio de una solución concentrada de hidróxido sódico. Por
lo general, se agrega lentamente NaOH al 50% desde el cuello del matraz. Al ser más pesado,
forma una capa debajo de la mezcla de digestión ácida diluida. Generalmente, por cada 5 mL
de ácido sulfúrico concentrado usado en la digestión, se requieren 20 mL de hidróxido de sodio
al 50% para hacer que la mezcla digerida sea fuertemente alcalina (pH > 11). Los iones de
amonio se convierten en amoniaco que se transfiere al recipiente receptor por medio de
destilación al vapor.
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La destilación debería durar lo suficiente como para recuperar más del 99,5% del amoníaco en
el recipiente receptor. Un tiempo de destilación típico es de 4 minutos con una potencia de
vapor del 100%.

2.2. Soluciones para recogida del amoniaco:

El recipiente receptor para el destilado se llena con una solución absorbente para capturar el gas
amoníaco disuelto. Dependiendo del volumen de la mezcla de digestión y el método seguido,
se deben recoger de 15 a 150 mL de condensado en el matraz receptor para asegurar la
recuperación completa del nitrógeno. Las soluciones receptoras pueden ser ácido bórico, ácido
sulfúrico o ácido clorhídrico. El ácido bórico es el método de elección porque permite la
automatización.

3- Valoración:

3.1 Soluciones valoradas e indicadores:

Si la solución receptora es ácido bórico, los aniones tetrahidroxiborato formados se titulan con
una solución estándar de un ácido fuerte. Esta valoración se llama valoración directa. • La
detección del punto final se puede realizar manualmente o con una valoración colorimétrica,
utilizando una combinación de indicadores. La combinación de indicadores de rojo de metilo y
azul de metileno se utiliza con frecuencia en muchos métodos. • El punto final de la valoración
también se puede determinar potenciométricamente con un electrodo de pH. Es preferible
ajustar el pH del ácido bórico a 4,65 antes de la destilación y usar un punto final de pH 4,65
para la valoración. Si la solución receptora es un ácido clorhídrico o un ácido sulfúrico
estandarizados, el exceso de solución ácida se neutraliza exactamente mediante una solución
alcalina normalizada, como el hidróxido de sodio. El punto final se detecta con un indicador de
color, el más utilizado es el anaranjado de metilo. Esta valoración se llama valoración por
retroceso.

Cálculos

Los cálculos para él % de nitrógeno o de proteína deben tener en cuenta qué tipo de solución
receptora se utilizó y qué factores de dilución se usaron durante el proceso de destilación. En
las fórmulas siguientes, “N” representa la normalidad. “ml blanco” se refiere a los mililitros de
álcali consumidos en la valoración por retroceso de un blanco, si la solución receptora es ácido
clorhídrico o ácido sulfúrico estandarizados, o se refiere a mililitros de solución valorada de
ácido para titular un blanco si la solución receptora es ácido bórico.

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 Cuando se utiliza ácido bórico como solución receptora, la fórmula es:

% nitrógeno: (ml ácido valorante - ml blanco) x N del ácido x 1,4007sobre el peso de la muestra
en gramos

 Cuando se utiliza solución valorada de ácido como solución receptora, la fórmula es:

% nitrógeno: [(ml de ácido x N del ácido) - (ml blanco x N del álcali)] - (ml álcali x N del álcali)
x 1,4007 sobre el peso de la muestra en gramos

Si se desea determinar el % de proteína en lugar de nitrógeno, el % de N calculado se multiplica

por un factor que depende de la matriz de la muestra. Se han desarrollado muchos factores de
proteínas para usar con varios tipos de muestras.

B- Método de Van Soest:

Las células vegetales se encuentran rodeadas de una pared de celulosa y hemicelulosa, además
de una sustancia que no es carbohidrato la lignina. De estos tres está formada la fibra.

Celulosa: componente de las paredes celulares de los árboles y otras plantas. Es una fibra
vegetal que al ser observada en el microscopio es similar a un cabello humano• Hemiceliulosa:
son polisacáridos que, excluyendo la celulosa, constituyen las paredes celulares de las plantas•
Lignina: La lignina es el constituyente intercelular incrustante o cementante de las células fi-
brosas de los vegetales.

La fibra tiene diferente valor nutritivo para los rumiantes que para los no rumiantes, dado que
la celulosa y hemicelulosa presentes en la fibra por lo general son bien digeridas y aprovechados
gracias a las enzimas producidas por la flora ruminal, mientras que estas mismas sustancias son
prácticamente no digestibles para monogástricos

Fibra Cruda: La determinación de la “fibra cruda” por el método del análisis proximal en el
esquema Weende, no es un método muy confiable para predecir y estimar la digestibilidad de
los alimentos con alto contenido de fibra.

En los años sesentas el Ph.D. Peter Van Soest desarrolló una metodología de análisis para
forrajes que al paso del tiempo demostró ser más precisa que la determinación de la fibra cruda
bajo el esquema Weende.

Bajo el esquema de trabajo de Van Soest, se obtienen 2 residuos principales cuando se somete
un forraje a análisis. – La fibra detergente neutro (FDN) a tratamiento con solución de sulfato

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lauril sódico a pH neutro, – La fibra detergente ácido (FDA) cuando la solución empleada es el
bromuro de cetil trimetil amonio en pH ácido.

La fibra detergente neutro (FDN): Es la porción de la muestra de alimento que es insoluble en

un detergente neutro, La fibra detergente ácido (FDA): Es la porción de la muestra de alimento
que es insoluble en un detergente ácido

La pared celular de las células vegetales puede ser rota usando detergentes, en este caso
específico se utiliza una solución de sulfato lauril sódico en un pH neutro. Este método no puede
aplicarse a alimentos con alto contenido de proteína, o con bajo contenido de fibra.

Se determinará la cantidad de fibra detergente neutro en una muestra de forraje, por medio de
la técnica desarrollada por Van Soest, como uno de los métodos auxiliares usados para estimar
la calidad nutritiva del forraje.

Equipo y materiales requeridos: Aparato digestor de balanza analítica. fibra. Matraz Kitasato.
Crisol Gooch., Trampa de humedad, Bomba de vacío. Fibra o lana de vidrio, Vaso Berzelius,
Desecador, Alargadera o extensión para crisol

Equipo y materiales requeridos: Reactivos. –Solución detergente neutra. –Solución de amilasa.

–Acetona. –Sulfito de sodio anhidro (sólo para muestras de subproductos animales).

Determinación de Calcio en el Alimento.

La evaluación de calcio en la dieta reviste una gran importancia ya que un desbalance con el
fósforo u otros minerales generará un bajo crecimiento.

Reactivos

 Ácido clorhídrico (1 – 3 %)
 Ácido nítrico 70%
 Hidróxido de amonio (1:1 v/v)
 Indicador de rojo de metilo (1 g en 200 ml de etanol)
 Solución de oxalato de amonio 4.2 %
 Ácido sulfúrico 98 %
 Solución estándar de permanganato de potasio 0.05N

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Materiales y Equipo

 crisoles de porcelana
 matraces volumétricos de 250 ml
 vasos de precipitado de 250 ml
 Papel filtro para análisis cuantitativos libre de cenizas

Procedimiento

Calcine en crisol de porcelana 2.5g de muestra finamente molida. Adicione 40ml de HCI y unas
gotas de HNO3 al residuo, caliente el crisol hasta ebullición, enfríe y transfiera a un matraz
volumétrico de 250ml, afore y mezcle. Pase a un vaso de precipitado 100ml de sol. para cereales
o alimentos con cereales ó 25ml para alimentos con minerales. Diluya a 100ml y adicione 2
gotas de rojo de metilo. Adicione NH4OH gota a gota hasta que vire a pardo anaranjado, luego
adicione 2 gotas de HCl para dar un color rosa. Diluya con 50ml de agua, hierva y adicione con
agitación 10ml de sol 4.2% de oxalato de amonio. Ajuste el pH con ácido para regresar al color
rosa si es necesario.

Dejar reposar, filtre y lave el precipitado con la solución de NH4OH (1.5%). Coloque el papel
filtro con el precipitado en un vaso, adicione una mezcla de 125ml de agua y 5ml de H2SO4,
caliente a 70°C y titule con la solución de permanganato y calcular:

Ca (%)= 0.1((ml Sol. Permanganato/Peso de la Muestra) × (Alicuota usada en ml/250)

Determinación de Fósforo

Al igual que el calcio, este mineral es indispensable para el buen desarrollo de los organismos
cultivados, debiendo estar presente en las dietas en cantidades suficientes para satisfacer las
necesidades metabólicas de los organismos. Este elemento en proteínas de origen vegetal puede
estar formando parte de fitatos, por lo cual su disponibilidad puede estar limitada, por lo que se
recomienda una determinación de ácido fítico previa al uso de tales materiales.

Reactivos

 Reactivo de Molibdato. Disuelva 40 g de molibdato de amonio 4.H2O en 400 ml de

agua caliente y enfríe. Disuelva 2 g de metavanadato de amonio en 250 ml de agua caliente,
enfríe y adicione 450 ml de ácido perclórico al 70%. Gradualmente adicione la sol. de molibdato
a la sol. de vanadato con agitación y diluya a 2 1.

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 Estándar de Fósforo. Prepare una solución stock disolviendo 8.788 g de Ortofosfato
dihidrógeno potasio en agua y llévelo a 1 1. Prepare la solución de trabajo diluyendo la sol.
stock 1 en 20 (Conc. de trabajo 0.1 mg P//ml).

Materiales y Equipo

 Espectrofotómetro para leer a 400 nm

 Matraces graduados de 100 ml

Procedimiento

Pase una alicuota como en la determinación de Ca a un matraz de 100 ml y adicione 20 ml del

reactivo de molibdovanato. Aforelo, mezcle y deje reposar por 10 min.

Transfiera alicuotas del estándar de trabajo conteniendo 0.5, 0.8, 1.0 y 1.5 mg de P en matraces
de 100 ml y trátelos como al anterior.

Lea la muestra a 400 nm ajustando el estándar de 0.5 mg a 100% de transmisión.

Determine mg de fósforo en la muestra usando una curva estándar.

Determinación de Potasio

Reactivos

 Ácido Clorhídrico concentrado.

 Solución estándar de Potasio: Para preparar solución stock (500 ppm), disuelva 0.477 g
de Cloruro de Potasio y llévelo a 500 ml con agua destilada. Para preparar el estándar de trabajo
(10 ppm), diluya 1:50.
 Aceite de oliva (puro)

Materiales y Equipo

 Crisoles de Sílice.
 Fotómetro de flama
 Mufla

Procedimiento

Secar 2 g de muestra en un crisol de sílice a 100°C para eliminar la humedad. Adicione unas
cuantas gotas de aceite de oliva y caliente sobre la flama hasta que deje de producir flama.

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Calcinar a 500°C en la mufla por 24 h, enfríe y adicione 2 ml de HCI concentrado para disolver
el residuo.

Llevar a 100 ml con agua destilada, tome 1 ml de la solución y haga una nueva dilución a 100
ml con agua destilada.

Ajustar el fotómetro de flama para que de una lectura de 100 con el estándar de 10 ppm y lea
la solución muestra.

Si la lectura no se encuentra entre 50 y 100 hacer una dilución al momento para dar una lectura
apropiada.

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 III- CONCLUSION
La necesidad de estos métodos se ve en avance. Los análisis basados en estos métodos nos
brindan una información relativa de la cantidad de nutrientes y minerales están disponibles en
ciertos alimentos.

En cría de ganados en confinamientos, estos análisis se volvieron mi necesidad imprescindible,

determinar nutrientes necesarios o recursos, organizar una dieta equilibrada para una óptima
cría de animales

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 IV- BIBLIOGRAFIA
 Consultado el 13 de agosto de 2018 (en línea), disponible en
file:///C:/Users/usuario/Desktop/brochure_A173_es.pdf
 Consultado el 13 de agosto de 2018 (en línea), disponible en
file:///C:/Users/usuario/Desktop/phone/Download/detdePC.pdf
 Consultado el 13 de agosto de 2018 (en línea), disponible en
file:///C:/Users/usuario/Desktop/Determinación de Nitrógeno por el Método
Kjeldahl/nq04r457.pdf
 Ing. Nadir Reyes Sánchez, MSc. Ing. Bryan Mendieta A, M 2000. Determinación del
valor nutritivo de los alimentos pag.34 al 37.

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V- ANEXO

Fig 1: Método de Van Soest

Fig. 2: Equipo automático para la digestión

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Fig 3: Equipo de sistema de extracción y neutralización de gases.

Fig 4: Equipo Unidad de digestión “BLOC-DIGEST”

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