Professional Documents
Culture Documents
Bacharel em Microbiologia
Fica aqui registrado que se trata de um estudo preliminar, que não dá respaldo científico ao uso da
ferramenta em humanos. Apesar da sua provável eficácia em um modelo animal clássico de doença
autoimune, seu mecanismo de ação e riscos em potencial não são conhecidos.
Endereço:
CEP: 21045-900
e-mail: falara@ioc.fiocruz.br
Introdução
Metodologia
Frações do sangue
A partir de uma colônia isogênica (mesmo pool genético) de camundongos BalbC NOD,
machos foram sacrificados por asfixia em câmara de CO2 e sangrados com a ajuda de uma
seringa contendo heparina como anticoagulante. O sangue foi rapidamente centrifugado a
1000g por 10 minutos, no sentido de separarmos a fração celular (que nas pranchas das
figuras 1 e 2 são abreviadas como sangue) e a fração plasmática (que nas figuras 1 e 2 são
chamadas de plasma). Ambas as frações são congeladas em freezer para uso posterior.
Solução de Heme
Neste trabalho uma solução de 10mM de heme (Fe-Protoporfirina IX) foi preparada da
tamponado a pH 7,2).
PBS
Tratamento
Utilizamos como grupo controle animais injetados com salina tamponada, utilizando-se
Resultados e discussão
Após 4 meses de tratamento, é vivível a diferença entre os animais tratados com injeções
contendo a fração celular e plasmática do sangue, quando comparados aos animais tratados
com heme e salina (figura 1 e 2). É possível observar regiões de foliculite e dermatite
autoimune, evidenciadas por setas. Na região ventral, onde tanto a pele como os folículos
pilosos são mais susceptíveis ao ataque autoimune, as diferenças são mais evidentes, tornando
clara uma maior eficácia em imunomodulação do tratamento envolvendo a fração celular
(sangue), quando comparado aos demais, incluindo-se o tratamento envolvendo a injeção
intramuscular da fração plasmática do sangue (plasma).
Por outro lado, não podemos nos abster em discutir um outro tipo celular potencialemnte
envolvido no efeito terapeutico visualizado na fração celular do sangue, as plaquetas. Um
grande numero de fatores de crescimento são porduzidos e armazenados no interior dessas
células, tais como: fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), um potente agente
quimiotático, TGF-β (transforming growth factor-â) que possui atividade imunosupressora
por evitar a ativação de linfócitos e macrofagos, fator de crescimento de fibroblasto (FGF),
IGF-1 (insulin-like growth factor-1) também reconhecido imunomodulador por aumentar a
viabilidade celular de fagocitos, dentre outros fatores de crescimento. De fato,
autohemoterapia utilizando-se apenas da fração plaquetária já é utilizada em vários tipos de
tratamento, de implantes ósseos à cura de ulcerações cutâneas, associadas ou não à diabetes
(O’Connell e cols. 2008; Sanchez e cols. 2007; Knighton e cols. 1990; Knighton e cols.
1986).
Inhibitors of the Protein Kinase CK2 Independent of Heme Oxygenase Activity. Curr
4160-4165.
Kikutani H, Makino S (1992). "The murine autoimmune diabetes model: NOD and
Knighton DR, Ciresi KF, Fiegel VD, Austin LL, Butler ELL. Classification and
repair in chronic, non healing, cutaneous ulcers using platelet-derived wound healing
Porto BN, Alves LS, Fernández PL, Dutra TP, Figueiredo RT, Graça-Souza AV, Bozza
MT. Heme induces neutrophil migration and reactive oxygen species generation
Aug 17;282(33):24430-6.
MF, Oliveira PL, Graça-Souza AV, Bozza MT, Figueiredo RT, Fernandez PL, Mourao-
Sa DS, Porto BN, Dutra FF, Alves LS, Oliveira. Characterization of heme as activator
repaired Achilles tendon tears using platelet-rich fibrin matrices. The American Journal
Protoporfirina IX) apresentam claro sinal de dermatite, com perda de pelo (setas)
Lic. En Microbiologia
Queda aquí registrado que se trata de un estudio preliminar, que no da respaldo científico al
uso de la herramienta en humanos. A pesar de su probable eficacia en un modelo animal
clásico de enfermedad autoinmune, su mecanísmo de acción y riesgos en potencial no son
conocidos.
Dirección:
CEP 21045-900
e.mail: falara@ioc.fiocruz.br
INTRODUCCIÓN
El liñaje del ratón NOD (non-obese diabetic) es ampliamente utilizado en estudios que
envuelven modulación de la respuesta inmune, fisiologia de linfocitos T reguladores y
diabetes. Los animales de ese liñaje presentan el desarrollo espontaneo de una síndrome
autoinmune, llevando en pocas semanas de vida la infiltración linfomononuclear progresiva
de las islotes de Langerhans (insulite), iniciada en la quinta semana de vida, llevando al
desarrollo del cuadro clínico de diabetes dependiente de insulina (Kikutani e Makino, 1992).
El liñaje NOD fue generado por investigadores japoneses a través de la inducción de
polimorfismo en locus Idd3, asociado a la producción de IL-2, lo que provoca el
desaparecimiento de la populación de linfocitos T reguladores (Makino e cols, 1980). La
pérdida de población de linfocitos responsables por la gestión de la inmunotolerancia provoca
una variedade mayor de síndromes autoinmunes a ser observadas en el supracitado liñaje,
tales como sialites autoinmune, tireoidites autoinmune, polineuropatia periférica autoinmune
y dermatite sistémica autoinmune.
Utilisamos como grupo control animales inyectados con salina tamponada, utilizandose un
total de 20 animales para cada condición.
METODOLOGIA
Fracciones de Sangre
A partir de una colonia isogénica (mismo grupo genetico) de ratones BalbC NOD, machos
fueron sacrificados por asfixia en cámara de CO2 y sangrados con la ayuda de una jeringa con
heparina como anticuagulante. La sangre fue rapidamente centrifugada a 1000g por 10
minutos, con el sentido de separar la fracción celular(que en las placas de las figura 1 y 2 son
abreviadas como sangre) y la fracción plasmática (que en las figura 1 y 2 son llamadas de
plasma). Ambas fracciones son congeladas para uso posterior.
Solução de Heme
En éste trabajo, una solución de 10 mM de heme (Fe-Protoporfirina IX) fue preparada de la
siguiente manera: heme en polvo adquirido de la empresa Molecular Products fue
resuspendido en solución de NaOH 0.1N, y posteriormente tamponado con PBS (tapon
fosfato tamponado a pH 7,2).
PBS
Tratamiento
Utilizamos como grupo de control animales inyectados con salina tamponada, utilizandose un
total de 20 animales para cada condición.
Resultados y discusión
Después de 4 meses de tratamiento, es visíble la diferencia entre los animales tratados con
inyecciones conteniendo la fracción celular y plasmática de la sangre, cuando comparados con
los animales tratados con heme y salina (figura 1 y 2). Es posible observar regiones de
foliculite y dermatite autoinmune, evidenciadas por flechas. En la región ventral, donde tanto
la piel como los folículos pilosos son más suceptibles al ataque autoinmune, las diferencias
son más evidentes, tornando clara una mayor eficacia en imunomodulación, del tratamiento
que utiliza la fracción celular (sangre), cuando comparado con los demás, incluyendose el
tratamiento que utiliza la inyección intramuscular de la fracción plasmática de la sangre
(plasma).
Ya los animales tratados con todos los demás estímulos, presentaron, más severamente los
grupos control e heme, arrepio de pelo cuando estimulados, demostrando desconforto,
letargia, pérdida de peso y temblores. No fue observada ninguna diferencia entre el grupo de
animales estimulados com heme y el grupo control, estimulados con salina tamponada.
Los resultados obtenidos hasta el momento apuntan para un nuevo e inesperado mecanísmo
que envuelve la autohemoterapia. Sería más lógico suponer que lo mismo estuviera
directamente ligado a la liberación de heme después de la digestión proteolítica de la
hemoglobina, activando de esa manera medidores inmunes locales, tanto íntegro como
después de haber sido degradada la bilirrubina, hierro y monoxido de oxigeno. Es bien
conocido su papel de activador de migración y generación de radicales libres en neutróficos
(Porto e cols.2007;Graça-Souza e cols.2002), asi como su papel como activador de los
receptores semejantes a Toll 4 (TLR4) (Figueiredo e cols,2007).
Por otro lado no podemos nos abstener de discutir otro tipo celular potencialmente
relacionado al efecto terapéutico visualizado en la fracción celular de la sangre, las plaquetas.
Un gran número de factores de crecimiento son producidos y almacenados en el interior de
esas células, tales como: factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), un potente
agente quimiotáctico, TGF- (transforming growth factor-â), que tiene actividad
inmunosupresora por evitar la activación de linfocítos y macrófagos, factor de crecimiento de
fibroblasto (FGF), IGF-1 (insulin-like growth factor-1) también reconocido
inmunomodulador por aumentar la viabilidad celular de fagocitos, entre otros factores de
crecimiento. De hecho, autohemoterapia utilizandose apenas de la fracción plaquetaria ya es
utilizada en varios tipos de tratamientos, de implantes óseos a la cura de ulceraciones
cutáneas, asociadas o no a diabetes (O´Conell e cols. 2008;Sánchez e cols. 2007; Knigthon e
cols. 1990; Knighton e cols. 1986).
Nuevos estudios se tornan necesarios para una total comprensión del mecanísmo de acción de
la supracitada herramienta terapéutica.
Referencias Bibliográficas
Figura 1 –Visión dorsal de hembra de raton NOD de 6 meses de edad con 4 meses de
tratamiento con inyecciones intramusculares conteniendo diferentes estímulos.
Animales tratados con PBS (salina tamponada) y heme (Fe-Protoporfirina IX), presentan
señales claros de dermatite, con pérdida de pelo (Flechas) y visible arrepiamiento de los pelos.
Figura 2- Visión ventral de hembras de ratones NOD de 6 meses de edad con 4 meses de
tratamiento con inyecciones intramusculares con diferentes estímulos.
La visión del vientre torna evidente la diferencia de la eficácia entre el tratamiento usando la
fracción celular de la sangre y el tratamiento usando la fracción plasmática.
En cuanto los primeros presentan ausencia total de dermatite, animales tratados con la
fracción plasmática de la sangre, presentan niveles de inflamación semejantes al grupo que
recibió heme y el grupo control (PSB). Flechas apuntan regiones donde hay pérdida de pelo,
debido a la dermatite autoinmune.
Links sobre a Auto-hemoterapia
AHT Twitter:
autohemotherapy:
http://twitter.com/autohemotherapy
AHTespanol:
http://twitter.com/AHTespanol
AHTbrasil:
http://twitter.com/AHTbrasil
AUTOHEMOTERAPIA
http://twitter.com/AUTOHEMOTERAPIA
AHT Facebook:
Auto-hemotherapy English
http://pt-br.facebook.com/people/Auto-hemotherapy-English/100001425771236
Autohemoterapia Español
http://pt-br.facebook.com/people/Autohemoterapia-Espanol/100001404622530
Autohemoterapia Brasil
http://pt-br.facebook.com/people/Autohemoterapia-Brasil/100001431861899
http://www.4shared.com/dir/4fwfRoZQ/sharing.html
http://www.geocities.ws/autohemoterapiabr/instalar_CHM_Autohemoterapia_Fatos_e_Fotos_julho_2010
.zip
http://www.geocities.ws/autohemoterapiabr/Autohemoterapia_Fatos_e_Fotos_julho_2010.zip(PDF)
http://pdfcast.org/pdf/auto-hemoterapia-por-olivares-rocha-livreto-de-2010
http://www.geocities.ws/autohemoterapiabr/AUTOHEMOTERAPIA_teu_SANGUE_te_CURA_Olivares
_Rocha_com_links_march_2010.zip
http://pdfcast.org/pdf/auto-hemoterapia-por-olivares-rocha-livreto-de-2008
http://www.geocities.ws/autohemoterapiabr/PDF_AH_Livreto_Olivares_Rocha_2008_com_links.zip
HTML:
http://www.geocities.ws/autohemoterapiabr/AH_Livreto_Olivares_Rocha.htm
http://autohemoterapia.fortunecity.com/AH_Livreto_Olivares_Rocha.htm
http://autohemoterapia.orgfree.com/AH_Livreto_Olivares_Rocha.htm
http://www.rnsites.com.br/HTML_AH_Livreto_Olivares_Rocha.zip
DVD AHT
download
Transcrição em Português:
Transcripción en Español:
Transcription in English:
http://www.4shared.com/dir/4fwfRoZQ/sharing.html
http://www.geocities.ws/autohemoterapiabr/32079658-Auto-Hemoterapia-Conversa-Com-Dr-Luiz-
Moura.pdf
http://www.geocities.ws/autohemoterapiabr/Autohemoterapia_Contribucion_para_la_Salud_Espanol.pdf
http://www.geocities.ws/autohemoterapiabr/Autohemotherapy_English_translation_version_2_2_Sept_20
09.pdf
Online
Transcrição em Português:
http://www.rnsites.com.br/auto-hemoterapia-dvd.htm(*)
(* contém recursos de navegação)
http://docs.google.com/View?docid=ddq5qwkp_60fq37qknv
Outro endereço da transcrição, em formato .doc
http://www.rnsites.com.br/dvd_dr_luiz_moura.doc
Transcripción en Español:
090616 AHT Autohemoterapia livreto Versión en ESPAÑOL
Bertha Maria Sánchez - Revisión de términos médicos Dra. Judith Acosta Arévalo:
http://www.geocities.ws/autohemoterapiabr/AUTOHEMOTERAPIA_Espanol.htm
http://autohemoterapia.fortunecity.com/AUTOHEMOTERAPIA_Espanol.htm
Transcription in English:
0 080305 TRANSCRIPTION of the DVD REVISED
version VM LM LFS with numbering. Translated by Luiz Grasso,
Review: Janet Duncan e Tanya Moore. October 2008:
http://docs.google.com/Doc?id=ddq5qwkp_61gg74q3gs
http://www.geocities.ws/autohemoterapiabr/TRANSCRIPTION_of_the_DVD.htm
http://autohemoterapia.fortunecity.com/TRANSCRIPTION_of_the_DVD.htm
http://autohemotherapy.blogspot.com/2009/05/dr-luiz-moura-dvd-lecture-english.html
http://pdfcast.org/
http://pdfcast.org/search/all/autohemoterapia
http://pdfcast.org/profile/marcelo%20fetha
http://www.scribd.com/
http://www.scribd.com/search?cat=redesign&q=autohemoterapia&x=0&y=0