Titulación De IgM e IgG .

Hacer siempre en TCI Y AI (+)

Fundamento: Determinar las concentración Aproximado de Acs de tipo IgM en el suero
informando Titulo(reciproco de las diluciones que genera Aglutinación y/o Hemolisis
visible )

Uso Titulacion IgM : Creacion de antisueros

Titulacion IgG: Magnitud de inmunización en embarazo, Creación antisueros
Protocolo

Determinacion a
Determinación A
Antisuero(Evaluar
muestra(Evaluar con
con prueba Inversa
prueba Directa ABO
ABO

Grupo A  TIT. Anti B

Grupo B TiT. Anti A
Grupo O TiT Anti A,B

1.- Separar Plasma de Gr.

2.-Hacer Grupo ABO en Lamina ( 1 tubo al 50% GR PACIENTE)

3.-Según Grupo Sanguíneo

Hacer corrida de 11 tubos Graduados de la Sgte forma :
: ( 2,4,8,16,32,64,128,256,512,1024,X)
4.- Dosificar con Micropipeta 100 ul de suero fisiológico a cada tubo graduado
5.- Dosificar 100 ul de suero en estudio al tubo Nª 2 y trasvasijar con misma pipeta hasta
eliminar 100 ul al tubo X (seco)
6.- Hacer dil al 4% Gr Testigo según sea el caso y Agregar 50 ul a Cada tubo.
7.- Centrifugar y leer.

2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024

H2O
100µl
PL
100 µl
Gr(Ts)
50 µl
Control (-): 100 µl de suero fisiológico + 50 µl de Gr testigo.

Condiciones de una Tecnica efectiva /Eficiente

 Gr de no + de 5 dias Gr Testigo
 Muestra fresca
 Muestra no lipemica e ictérica ( se permite hasta cierto grado)
Material Limpio
Condiciones de la Muestra
En caso de IgG : No se ocupa Liss debido a que al Agregar un volumen adicional
que genera perturbaciones en los resultados.

Pasos que se deben realizar (Realidad en la clínica )**

 DETECCION DE AC
 TITULO DE AC
 IDENTIFICACION AC.

Lectura:
Reciproco de la dilución que genera aglutinación visible .
Rectificar hemolisis cuando es en el titulo **(Repetir)

Informe:

Titulo de Lectura Ej: 128

Titulo Verdadero Ej [128-256]
* ultimo que da hemolisis o aglutinación con el primero negativo.

Interpretación:
Se Cuantifica un Titulo X aproximado de Acs IgM( reacciona a 22ªC) o
IgG(Reacciona a 37ªC) en el suero en estudio del paciente.
 Determinacion de Hemolisisnas

Fundamento:
Determinar la presencia de Hemolisinas Mediante La Hemolisis por la Accion del
complemento En los Gr Testigos A1 y B .
Condiciones de una buena prueba
*Muestra fresca no más de 24 hrs.
Material limpio (sin detergentes)
Tº optima ( puede haber hemolisis por Tº> 37ºC)

Protocolo:
 Preparar materiales 2 tubos
 Hacer Suspensión al 4% de los Gr testigos A1 y B
 Dosificar Suero del Paciente
 Dosificar Suspensiones
 Incubar a 60 Min a 37 ªC
 Centrifugar y leer

Tubo A1 2 GOTAS DEL GR TESTIGO + 2 GOTAS DE PLASMA EN ESTUDIO

Tubo B 2 GOTAS DE GR TESTIGO + 2 GOTAS DE PLASMA EN ESTUDIO

*Hacer siempre un control (-) Con 4 gotas de suero del paciente.

Resultado se gradúa con cruces +(discreta); ++(Moderada) +++( Abundante) ;

++++(Franca).

INTERPRETACION; Hay presencia de hemolisinas en el suero del paciente.

 Tecnica de inhibición de la Hemaglutinacion
Fundamento: Determinar individuos poseen Ags solubles del sistema ABO en secreción
de saliva Mediante la inhibición de la aglutinación.

Protocolo
Obtener muestra y someterla a baño maría durante 10-15 minutos
 Centrifugar ( 5^2500 rpm)
 Recolectar sobrenadante en un tubo y eliminar sedimento.
 Colocar volumen de saliva y volumen del antisuero del grupo ABO del individuo 2:2

 Homogeniza y dejar reposar 10 min.

 Dosificar Gr testigos al 4% del grupo ABO del paciente. 2
 Centrifugar.
 Dejar reposar a TAº .
 Centrifugar y leer.

Resultados

Resultados Criterio
Persona no Secretora de sustancia ABH en saliva
+

(-) Persona Secretora de Sustancia ABH en saliva

Usos:
 Determinar Grupos Sanguíneos en Secreción
 Preparación de reactivos de alto Titulo Anti A, Anti B Por estimulación de
Sustancia A O B
 Neutralización De aglutininas para el uso de Laboratorio Anti A y Anti B igM.
 Neutralización de Ac igM anti A y anti B en estudios de Rn con EHRN

Interpretación
Prueba + Aglutinación indica ausencia de sustancias solubles ABH en la saliva:  NO
SECRETOR.
Prueba (-) Indica Presencia de sustancias Solubles ABH en saliva= SECRETOR.
 Fenotipo Rh y Genotipos más Probables
Fundamento: Los alelos del sistema Rh son trasmitidos a través de bloques o haplotipos
según la cercanía de los locis en el cromosoma 1 .
Estos Ag son D-c –E-e-C. Siendo d no demostrable solo inferible debido a la ausencia de un
anticuerpo que reconozca dicho antígeno.(Fischer- Race).

Protocolo.
 Preparar 5 tubos graduados D.C.E.c.e.
 Depositar una gota de los antisueros en sus tubos respetivos.
 Hacer una suspensión en tubo de GR del paciente
 Dosificar suspensión e incubar 37ºC X15`
 Centrifugar y leer
 Resultado + Ag correspondiente presente
 Resultado (-) Sigue el estudio

 (-) incubar 30`màs a 37ºC

 Lavarx3(con pipeta)
 Agregar Suero de coombs (2)
 Mezclar y centrifugar
 Obtener Fenotipo y Sacar genotipo.

Resultados

Fischer y Race
Complejo Antigenos Gen Factores Frecuencia
Genetico
DCe D-C-e R1 Rho- rh`-hr`` 40%
dce c-e r Hr`-hr`` 38%
DcE D-s-E R2 14%
Rho-hr`-hr``

Importancia del Estudio

 Sistema de gran polimorfismo
 Seguridad Transfusional
 Ayudo a Esclarecer la causa y Prevención de EHRN.
 Presenta carácter estructural de Membrana.
Fenotipo: DCcEe
D+
c+
E+
e+
C+

Genotipos totales: DCE Dce

dce DCE
DCE dce  Más probable
DCE Dce

Fenotipo: DCcee

D+ DCe dce  Mas probable

c+ DCe Dce
E- DCe Dce
e+ dce DCe
C+

En practico se pedirá el triplete con mayor probabilidad o el total de genotipos

probables ..
Interpretación:
Se determina el fenotipo del individuo basado en la reacción con 5 antisueros y el cálculo
del genotipo más probable.
D C E c e fenotipo Genotipo
más
probable
+ + + + + DCcEe DCe/DcE
+ + (-) + + DCcee DCe/dce
+ (-) + + + DccEe DcE/dcE
+ + (-) (-) + DCCee DCe/DCe
+ (-) + + (-) DccEE DcE/Dce
+ (-) (-) + + Dccee Dce/dce
(-) (-) (-) + + ccee dce/dce