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FACULTAD DE BIOANALISIS
INMUNOLOGIA CLINICA
MANUAL DE PRACTICAS
ACADEMICA: CRODA TODD MARIA TERESA
EQUIPO:
CERON SANTIAGO TZINDILU
DAVILA HERRERA DANIEL
RODRIGUEZ SALDAÑA CYNTHIA IRAIS
CELESTINO RUSVELT
PRACTICA 1 REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCIÓN:
Las reacciones febriles son un conjunto de pruebas que sirven como su nombre lo
indica para diagnosticar enfermedades que cursan con fiebre, como Fiebre tifoidea
(Salmonella), Brucelosis (fiebre ondulante, fiebre de Malta) y Rickettsiosis (Fiebre
Q, fiebre manchada de las montañas rocallosas). Cuando el cuerpo humano es
invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos (tipo especial
de proteínas) contra ellos, los cuales pueden ser observados en muestra de
sangre del paciente y ser identificados de acuerdo a cantidad y tipo de infección.
Las infecciones se suelen adquirir en áreas con mala higiene, como zonas
después de desastre o guerras, extrema pobreza y falta de servicios de drenaje y
agua potable, epidemia de piojos y garrapatas, entre otros. No obstante, la
presencia de estos agentes infecciosos también se da en zonas urbanas donde se
consumen alimentos preparados con poca higiene y al aire libre.
PROCEDIMIENTO
TECNICA RAPIDA EN PLACA
Colocar en una placa una gota (50 ul) de suero y agregar una gota (50 ul)
de suspensión de Antígeno. Mezclar y agitar la placa en forma circular
durante 2 minutos. Observar la presencia o ausencia de aglutinación
utilizando una luz indirecta sobre fondo oscuro.
TITULACION RAPIDA EN PLACA
1) Dividir una placa de vidrio en sectores de 4 cm2 aproximadamente. 2)
Empleando las micropipetas apropiadas colocar en estos sectores 80 ul, 40
ul, 20 ul, 10 ul y 5 ul de suero límpido. Repetir el procedimiento para un
control negativo y uno positivo. 3) Colocar 1 gota de Antígeno previamente
agitado sobre cada gota de suero. 4) Mezclar el suero y el Antígeno utilizando
una varilla abarcando un área de 2 cm de diámetro aproximadamente. Debe
emplearse una varilla distinta para cada dilución de suero o la misma varilla
mezclando a partir de la muestra más diluida. 5) Agitar la placa durante 2
minutos en forma circular. 6) Observar la aglutinación utilizando luz indirecta
sobre fondo
RESULTADOS:
durante esta práctica en la muestra que utilizamos no se pudo apreciar una
aglutinación por lo que el resultado se interpreta como negativo.
CONCLUSION
en esta practica analizamos un método semi cuantitativo para la determinacion de
enfermedades que presentan procesos febrilea , el resultado fue negativo así que
no se pudo realzar los títulos en tubo.
PRACTICA 2 MONONUCLEOSIS INFECCIOSA
MÉTODO DE HEMOAGLUTINACION
INTRODUCCION:
La Mononucleososis infecciosa, "mono," "enfermedad del beso," la enfermedad de
Pfeiffer y fiebre glandular son todos los términos popularmente usados para una
enfermedad muy común causada por el virus Epstein-Barr (EBV). El 50% de los
niños se infectan por EBV antes de los 5 años, y hasta el 95% de la población
adulta se encuentra infectada. La Mononucleosis Infecciosa (MI) es una infección
viral común. La causa principal de la MI (80% de los casos) es el virus Epstein-
Barr (EBV) o el virus Herpes humano 4. El EBV pertenece a la familia herpesvirus.
El término "mononucleosis" hace referencia a un aumento en un tipo especial de
glóbulos blancos (linfocitos) en sangre en relación al resto de los componentes
sanguíneos como consecuencia de la infección por EBV.
Diagnóstico serológico de la Mononucleosis infecciosa: el diagnóstico serológico
de la infección por EBV comprende una serie de pruebas no específicas como la
detección de anticuerpos heterófilos, así como unas pruebas específicas para EBV
relacionadas con la respuesta de anticuerpos en función del tiempo frente a varios
antígenos producidos durante el ciclo de vida del virus.
Los antígenos tempranos (EA) se producen al comienzo del ciclo lítico, seguido
por la expresión de antígenos de cápside viral (VCA) al mismo tiempo que el
genoma viral. Durante el ciclo latente, los Antígenos nucleares de Epstein-Barr
(EBNA) son sintetizados así como proteínas de membrana latentes (LMP) y EBER
(short non coding ARN).
Durante la infección primaria, aparecen los anticuerpos heterófilos en el 60-80%
de los casos, los anti-EA transitorios en el 70-80% de los casos, las IgG e IgM
anti-VCA en el 100% de los casos.
Durante la fase de convalecencia, el 95% de los pacientes serán positivos para
IgG EBNA, mientras que algunos de ellos nunca producirán anticuerpos anti-
EBNA.
Consecuentemente, la mayoría de las pruebas serológicas más comúnmente
usadas para diagnosticar la infección EBV detectan anticuerpos IgG e IgM anti-
VCA, e IgG anti-EBNA.
MATERIALES:
1.- colocar 40 microlitros de suero problema en la placa
2.- añadir una gota del antígeno monolabtest, mezclar bien con un aplicador
extendiendo sobre toda la superficie
3.- osile suavemente la placa por 2 minutos y observe si aparece aglutinacion
INTERPRETACION:
suspensión uniforme sin aglutinación (negativo -)
Aglutinacion visible por la formacion de agregados grandes (positivo +)
RESULTADOS
En esta prueba el resultado fue negativo al no formarse la aglutinación. Por lo que
podemos decir que el paciente no presenta mononucleosis infeccionsa u otra
enfermedad que tenga que ver con la prueba.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
El resultado fue negativo ya que en ninguna resulto positivo, únicamente se marcó
la línea de control.
Samartino et al. (1997), aplicaron la técnica del antígeno buferado en placa (BPA)
como prueba tamiz en el diagnóstico de la brucelosis y obtuvieron mayor
sensibilidad al compararla con la Rosa de Bengala aunque las dos fueron
determinante para la condición de animal reaccionante.
METODO:
Método semicuantitativo, se realizaran diluciones dobles de la muestra con
solución salina (1:2, 1:4, 1:8…)y proceder para cada dilución como en la prueba
cualitativa.
Sensibilidad del método 25 UI/ml
Interpretación:
Positivo: Presencia de aglutinación
Negativo: Ausencia de aglutinación
INTERPRETACION:
INTERPRETACION:
PRÁCTICA 6 CUANTIFICACIÓN DE IgE
Cuando se desea saber si una persona es alérgica a una sustancia en particular,
se lleva a cabo un análisis de sangre de inmunoglobulina E (IgE) para detectar la
presencia de un alérgeno específico.
La reacción alérgica se produce cuando el sistema inmunológico reacciona de
manera exagerada ante algo que generalmente está presente en el ambiente y es
inocuo para la mayoría de la gente. Para proteger al cuerpo de esta "supuesta
amenaza", o alérgeno, el sistema inmunológico de una persona alérgica produce
anticuerpos denominados "inmunoglobulina E".
Los anticuerpos IgE se encuentran principalmente en los pulmones, la piel y las
membranas mucosas. Hacen que los mastocitos (un tipo de célula involucrada en
el proceso de respuesta del sistema inmunológico del organismo)
liberen/descarguen sustancias químicas, incluyendo histamina, en el torrente
sanguíneo. Son éstas sustancias químicas las que desencadenan muchos de los
síntomas alérgicos que afectan los ojos, la nariz, la garganta, los pulmones, la piel
y el tracto gastrointestinal de las personas.
Dado que hay un anticuerpo IgE específico para cada alérgeno (por ejemplo, el
IgE producido como respuesta al polen es diferente del IgE que se genera con una
picadura de abeja) el análisis de variantes específicas en la sangre suele ayudar a
determinar si se sufre de una determinada alergia.
Los reactivos esenciales requeridos para un análisis inmunoenzimometrico
incluyen anticuerpos de alta afinidad y especificidad (enzima e inmovilizados), con
diferentes y distintos reconocimientos de epítopes, en exceso y antígeno nativo.
En este procedimiento, la inmovilización toma lugar durante el análisis en la
superficie de los pozos de la microplaca a través de la interacción de
estreptavidina que cubre el pozo con el anticuerpo monoclonal anti-IgE marcado
con biotina agregado exógenamente. Después de mezclar del anticuerpo
monoclonal marcado con biotina y el suero que contiene antígeno nativo, la
reacción resultante entre el antígeno nativo y el anticuerpo es la formación de un
complejo antígeno-anticuerpo.
INTERPRETACION:
Positivo: Cuando el valor obtenido no cae en el rango de Concentraciones
obtenidos en la Curva de Calibración que se realice.
Negativo: El valor cae dentro de las concentraciones de la curva.
Valores CURVA DE CALIBRACIÓN
ABSORBANCIAS CONCENTRACIONES
.139 0
.224 5
.560 25
.767 50
1.368 150
1.458 400
RESULTADOS
Lectura Número 1= 0.541
Lectura Número 2= Ḵ 0.598 = 0.569
Lo cual indica que la cantidad de IgE se encontraría en un Concentración de 25,
en la muestra analizada, por lo tanto, sería un valor aceptable, ya que cae dentro
de los valores de la curva de calibración.
A continuación, se muestra la curva de calibración obtenida, junto con el resultado
de la muestra problema, marcado como "X".
Curva de calibración
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 5 25 "X" 50 150 400
Interpretacion
Eosinófilos en el moco nasal: arriba de 20 por campo indican alergia.
Neutrófilos elevados indican la presencia de infecciones bacterianas agudas.
Principios de la Prueba
La prueba de ELISA VIH utiliza un par de antigenos recombinados del VIH para
detectar anticuerpos contra el VIH. Los anticuerpos contra el VIH, si esta presente
en la muestra de ensayo, reaccionan con los antigenos recombinados
inmovilizados en la superficie de los micropocillos.
Despues de las etapas de lavado para eliminar los anticuerpos no unidos, los
unidos se visualizan a traves de la incubacion del antigeno recombinado VIH con
otro conjugado con la enzima perooxidasa de rabano (HRP) y sustratos TMB en
una configuracion convencional ELISA sandwich.
Tecnica
1.- Depositar 50 μl del suero problema en un pozo.
2.- Añadir 50 μl de diluyente, mezclar, cubrir con cinta.
3.- Incubar a 37°c durante 45 min.
4.- Vaciar los pozos boca abajo sobre papel abs.
5.- Añadir 50 μl de conjugado.
6.- Incubar a 37°c durante 30 min.
7.- Decantar y lavar 5 veces con buffer y secar.
8.- Añadir 100 μl de TMB sustrato a cada pozo e incubar a 37°c por 10 min.
9.- Añadir 100 μl de sol.stop y mezclar.
10.- Leer a 450 nm.
Calculos
Valor de corte= 0.100 + (0.05)
Relacion de la muestra = absorbancia / valor de corte
Resultados
Absorbancia:
1.- 0.088
2.- 0.119
Interpretacion
No reactivo: < 1.0
Reactivo: > 1.0
Practica 9 VDRL Y RPR
INTRODUCCION:
La sífilis es una infección causada por la bacteria Treponema pallidum. La
infección suele contraerse por contacto sexual, por ejemplo por contacto directo
con un chancro (úlcera) sifilítico, que es una lesión indolora y sobreelevada. Las
pruebas sifilíticas más comunes son las que detectan en sangre anticuerpos
producidos en respuesta a la infección por Treponema pallidum. Algunos métodos
son capaces de detectar la propia bacteria o su material genético (ADN). Las
pruebas sifilíticas se utilizan para realizar un cribado o diagnosticar la infección por
Treponema pallidum, bacteria causante de la sífilis. Se dispone de varios tipos de
pruebas, aunque las que detectan anticuerpos son las más empleadas.
Detección de anticuerpos (serología) - estas pruebas detectan anticuerpos en
sangre y a veces en líquido cefalorraquídeo (LCR). Existen dos tipos principales
en el caso de la sífilis, pruebas no treponémicas y pruebas treponémicas
(derivadas del nombre de la bacteria). Para el cribado se puede emplear
indistintamente unas u otras, aunque en el caso de que el resultado sea positivo,
éste debe confirmarse por algún otro método que permita diagnosticar una sífilis
activa:
RPR (reagina rápida plasmática) - útil para el cribado pero también en la
monitorización del tratamiento de la sífilis. Se mide el nivel (título) de anticuerpos.
También puede emplearse para confirmar la presencia de una infección activa
cuando una primera prueba treponémica es positiva
VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) - prueba realizada en sangre, pero
principalmente en líquido cefalorraquídeo, y útil en el diagnóstico de neurosífilis
(VDRL)
METODO:
1.- Depositar 50 microlitros se suero problema en un círculo de la placa
2.- agregar 20 microlitros de Ag VDRL
3.- mezclar y agitar de 160-180 rpm 4 minutos y leer loa agregados ya sean
grandes o medianos
Agregado grande (reactivo)
Agregado mediano (reactivo debil)
Sin agregado (no reactivo)
FUNDAMENTO
Los anticuerpos antinucleares son sustancias producidas por el sistema
inmunitario que atacan los propios tejidos del cuerpo. Las pruebas analíticas de
anticuerpos antinucleares corresponden a una prueba de sangre que examina
los anticuerpos antinucleares (AAN).
El análisis se realiza a partir de una muestra de sangre. No se necesita una
preparación especial; sin embargo, ciertas drogas, incluyendo píldoras
anticonceptivas, procainamida y diuréticos tiazídicos afectan la precisión del
examen. No olvide comentarle al médico acerca de todos los medicamentos que
toma. Significado de los resultados anormales. La presencia de anticuerpos
antinucleares en la sangre puede deberse a:
Los anticuerpos antinucleares (AAN) pueden ser positivos en personas con LES,
sin que ellas mismas padezcan esta enfermedad.
El suero diluido del paciente es añadido a los pozos cubiertos con antigeno
purificado, el anticuerpo específico IgG se encuentra presente atándose al
antígeno todo aquel material que no se haya unido será lavado y desechado, la
enzima conjugada será añadida para formar el complejo antígeno anticuerpo . El
exceso de la enzima conjugada es lavada y se añade el substrato, el plato se
incuba y se deja hasta que se lleve a cabo la hidrólisis del substrato con la enzima.
La intensidad del color generado es proporcional a la cantidad de anticuerpos IgG
específicos en la muestra.
TÉCNICA
CÁLCULOS Y RESULTADOS.
1. Checar el factor de calibración (CF) valorado en la botella del frasco, este valor
puede ser que varié de lote a lote marque y cheque con seguridad en cada equipo.
2. Calcular el punto de corte valuado. Calibrador el OD del calibrador por el factor
de calibración.
3. Calcular el anticuerpo catalogado (index) por cada determinación, por división
del OD. Valuado por cada punto de corte de la muestra valuada.
RESULTADOS
INTERPRETACIONES
Interpretación
<.9 no reactivo
0, .9, 1.1 intermedio
>1.1 reactivo Punto de corte valuado = 0.477 x 0.45=0.21465
CONCLUSIÓN
BIBLIOGRAFIA
http://www.labtestsonline.es/
www.nlm.nih.gov/…us/spanish/ency/article/003535.htm
https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003535.htm
www.grupomexlab.com
PRACTICA 12
HGB-BT “TECNICA DE LA INHIBICION DE LA AGLUTINACION”
PROPÓSITO
Determinar cualitativamente la fracción beta de la Gonadotropina en
sangre por medio de la inhibición de la aglutinación.
INTRODUCCIÓN
Gonadotropina Coriónica Humana (hCG) La hCG es una hormona glicoproteica
producida en el embarazo, fabricada por el embrión en desarrollo poco después
de la concepción y más tarde por el sincitiotrofoblasto (parte de la placenta). Su
función es evitar la desintegración del cuerpo lúteo del ovario y, por ende,
mantener la producción de progesterona que es fundamental para el embarazo en
los seres humanos. (1,2,3) La hCG puede tener funciones adicionales; por
ejemplo, se cree que afecta a la tolerancia inmunológica del embarazo. Las
pruebas de embarazo más precoces se basan en la detección de hCG. (1,2,3)
Debido a que la hCG es producida también por algunos tipos de tumores, es un
importante marcador tumoral, pero no se sabe si esta producción es una causa o
un efecto de la tumorigénesis. Al igual que otras gonadotropinas, la hCG se puede
extraer de la orina de mujeres embarazadas, que es la fuente más usual y
abundante, o por recombinación genética.
FUNAMENTO
TÉCNICA
Interpretación:
Prueba positiva formación del anillo
Prueba negativa malla uniforme o rota.
Sensibilidad 1000 UI/L
CONCLUSIÓN
BIBLIOOGRAFIA
http://salud.ccm.net/faq/1604-beta-hcg-diagnostico-del-embarazo
http://www.mdsaude.com/es/2015/10/beta-hcg-hormona-del-
embarazo.html
http://www.mdsaude.com/es/2015/10/beta-hcg-hormona-del-
embarazo.html
http://elembarazo.net/foro/topic/que-es-fraccion-bata-de-hcg
PRACTICA 13
DETERMINACINO DE GRUPO SANGUINEO Y FACTOR Rh.
OBJETIVO
a) Verificar el tipo sanguíneo por medio de la detección de anticuerpos en el
suero o plasma problema.
SUSTENTO TEORICO
El más importante de los diversos sistemas de clasificación de la sangre es el del
grupo sanguíneo ABO. Los cuatro tipos sanguíneos que se contemplan en esta
clasificación son A, B, AB y O. Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos
rojos que expresan antígenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los
antígenos B en el suero de su sangre. Las personas con sangre del tipo B tienen
la combinación contraria, glóbulos rojos con antígenos de tipo B en su superficie y
anticuerpos contra los antígenos A en el suero de su sangre. Los individuos con
sangre del tipo O ó 0 (cero) no expresan ninguno de los dos antígenos (A o B) en
la superficie de sus glóbulos rojos pero tienen anticuerpos contra ambos tipos,
mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie
y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos. (“Grupo Sanguíneo” s.f.).
DESCRIPCION DE LA PRÁCTICA
B. METODO EN TUBO
OBSERVACIONES Y RESULTADOS.
Anti-A Anti-B Anti AB Anti-D
A No No No No
B No No No Si
0 Si No Si No
PRUEBA EN TUBO
CONCLUSIÓN
BIBLIOGRAFIA
http://www.labtestsonline.es/
www.nlm.nih.gov/…us/spanish/ency/article/003535.htm
https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003535.htm
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