La enfermedad cardiaca coronaria ( E.C.C.) sigue siendo la principal causa de morbilidad prematura.

Un factor de riesgo importante es el

incremento del colesterol plasmático. Sin embrago el colesterol por si mismo no es un elemento de predicción en el paciente individual. Otros
parámetros lipídicos como el HDL y triglicérido también son necesarios para cuantificar el riesgo de ECC con mayor precisión.
Aplicando la formula de Friedewald podemos calcular las otras lipoproteínas séricas VLDL y LDL que completan la información de predicción de
alteración vascular.

OBJETIVO
a) Determinar la concentración de colesterol total, triglicérido, HDL, LDL y VLDL.
b) Determinar el RC a través del perfil lipídico ( según Castelli )

DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL

Fundamento
El colesterol se determina por acción de la enzima colesterol éster hidrolasa y colesterol oxidasa. La primera libera el colesterol de los esteres de
colesterol, y la segunda oxida el colesterol libre produciéndose peróxido de hidrogeno, el cual en presencia de la enzima peroxidasa reacciona
con el sistema cromogénico dando origen a un compuesto coloreado que absorbe 505nm.

Colesterol ester CEH Colesterol + ácidos grasos

Colesterol + O2 CHOD Colest-4-en-3-ona + H2O2

2H2O2 + 4-AAP + p-HBA PAP Comp. Coloreado + 4H2O

Tubo N° Blanco Standard Muestra 1 Muestra 2

St-Colesterol: 200 mg/dl - 30 ul - -

Suero –Pb - - 30 ul 30 ul

Reactivo enzimático de Colesterol ml 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml

Mezclar. Incubar 10 minutos a 37°C o 20 minutos a T°ambiente

Leer en espectrofotómetro el St y Pb frente al BL a 505 nm.
Expresión
Haciendo uso del factor de Calibración, expresar el colesterol en mg/dl :
 VN = 160 - 200 mg / dl
DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS

Fundamento
Los triglicéridos presentes en la muestra, según las reacciones acopladas descritas a continuación, son un complejo coloreado que se cuantifica
por espectrofotometría.

Triglicéridos + H20 lipasa Glicerol + ácidos grasos

Glicerol + ATP Glicerol-Kinasa Glicerol-3-P + ADP

Glicerol – 3 – fosfato + O2 GPO Dihidroxiacetona fosfato + H2O2

2H2O2 + 4-aminoantipirina + 4-clorofenol Peroxidasa Quinonaimina

Esquema

Tubo N° Blanco Standard Muestra 1 Muestra 2

St-Triglicérido: 200 mg| dl - 30 ul - -

Suero -Pb - - 30 ul 30 ul

Reactivo enzimático triglicéridos ml 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml

Agitar. Incubar 10 minutos a 37°C o 20 minutos a T° ambiente

Leer en espectrofotómetro el St y Pb frente al BL a 520 nm.
Expresión

Haciendo uso del factor de Calibración, expresar los triglicéridos en mg/dl :

VN = 60 - 200 mg / dl

DETERMINACION DE COLESTEROL - HDL

Fundamento del Método

El HDL - Colesterol es obtenido precipitando selectivamente las lipopotreínas LDL y VLDL, quedando el primero en solución.
El HDL - Colesterol en solución se determina por acción de las enzimas Colesterol ester hidrolasa y Colesterol oxidasa. La primera libera el
colesterol de los ésteres de colesterol, y la segunda oxida el colesterol libre, produciéndose peróxido de hidrógeno, el cual en presencia de la
enzima peroxidasa reacciona con el sistema cromogénico dando origen a un compuesto coloreado que absorbe a 505 nm.

Colesterol ester CEH Colesterol + ácidos grasos

Colesterol +O2 CHOD Colest-4-en-3-ona + H202

2H2O2 + 4-AAP + p-HBA PAP Comp. Coloreado + 4H2O

Técnica
Precipitación: Agregar en un tubo de centrífuga 0.5 ml de reactivo precipitante HDL - colesterol y 0.2 ml de muestra (suero), mezclar y esperar 15
minutos a temperatura ambiente. Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m. o 3 minutos a 10.000 r.p.m
Colorimetría.-

LLevar el reactivo colesterol CHOD- PAP a la temperatura que se realizara el ensayo.

Tubo N° Blanco Standard Muestra 1 Muestra 2

Sobrenadante (ml) - - 0.30 0.30
Standard colesterol - 0.03 - -
(ml)
Reactivo enzimático 3.00 3.00 3.00 3.00
colesterol (ml)

Mezclar e incubar 10 minutos a 37° o 20 minutos a temperatura ambiente (20 a 25° C). Leer las absorbancias a 505 nm. llevando a cero el
espectrofotómetro con el blanco del reactivo. El color resultante es estable por lo menos 30 minutos.

Cálculos.-
HDL-Colesterol : (mg%)=F.D. x D.O. Pb

FD =76.5/D.O standard
Ecuación de Friedewald:

LDL-C (mg/dl)= C.Tot.(mg/dl)-HDL(mg/dl)-VLDL.(mg/dl)

VLDL (mg/dl) = TG
5
Esta fórmula es válida cuando los Tg son menores de 400 mg/dl.
Observaciones

- Después de centrifugar, el sobrenadante debe ser claro.

- Sueros con concentraciones de triglicéridos superior a 1000 (mg/dl) deben diluirse con suero fisiológico antes de precipitar. El

resultado obtenido se multiplica por el factor de dilución.

Interpretación del Perfil Lipídico Mínimo

LIPIDO DESEABLE RIESGO POTENCIAL ALTO RIESGO
(mg/dl)
CT < 200 200-239 >= 240

LDL < 130 130-159 >= 160

HDL : Hom : > 35 25-35 < 25

Muj : > 45 40-45 < 40

TG < 200 > 200 > 200 (*)

 (*) Si se acompaña de HDL < 35 mg/dl o relación CT/HDL >5
INFORME PRACTICA N° 8

Nombre del Alumno(s)--------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Grupo: ----------------------------------------------------------------------- Fecha: ---------------

1. Calcular , en el sujeto normal y patológico , la concentración en mg/dl del :

CT :

TG :

HDL :

LDL :

VLDL :

2. Calcular el R. C.:

CT/HDL :

LDL/HDL :

3. Describa el perfil electroforético de las lipoproteínas plasmáticas:

Origen

( - ) ( + )

--------------------------------------- ---------------------------------------------------------- --------------

Firma del Alumno Firma del Profesor Nota