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CULTIVOS AGRÍCOLAS
AGRÍCOLAS
II CICLO, 2018
1
Índice
Introducción 5
Práctica 1: Determinación del Potencial hídrico 7
Práctica 2: Transpiración 16
Práctica 3: Presión radical 23
Práctica 4: Conductividad hidráulica en tallos leñosos de café
Coffea arabica 30
Práctica 5: Efecto de la luz en la germinación de semillas de
lechuga y establecimiento de almácigos hidropónicos 34
Práctica 6 Cultivo de tomate (Lycopersum esculentum) en
solución nutritiva y elemento faltante 45
Práctica 7: Cultivos Hidropónicos 56
PRÁCTICA 8: Uso de la cámara de flujo laminar, confección
de soluciones madres y medios de cultivo. 69
Práctica 9: Micropropagación de Orquídeas 80
Práctica 10: Establecimiento In vitro de vainilla ( Vanilla
planifolia Andrew) 85
Práctica 11 Reguladores de crecimiento vegetal
(fitohormonas) 90
Conductividad hidráulica y grosor de los vasos del xilema en
cinco materiales de vid sometidos a déficit hídrico 99
2
Introducción
Los cultivos (granos, tubérculos, raíces, frutales, aromáticos,
medicinales entre otros) han formado parte de la dieta de los
seres humanos, indirectamente representan una alternativa para
la alimentación de otros organismos como los insectos y
roedores; los cuales son utilizados como fuente primaria de
energía. El uso que se le da a las plantas no es solo para la
alimentación, también son utilizadas como materia prima para la
industria y la obtención de combustibles. Es por ello que se debe
conocer el mecanismo de desarrollo de las plantas en general,
para determinar las técnicas de manejo adecuadas de los cultivos
con el fin de obtener productos de calidad y aprovechar al
máximo el material vegetal que se desea obtener.
A la fisiología se le conoce como la ciencia que estudia las
funciones de los seres orgánicos. Este término se deriva del
vocablo latino physilogia que significa conocimiento de la
naturaleza. Etimológicamente, se dice que la fisiología vegetal
es el conocimiento físico de las plantas.
La fisiología vegetal se encarga del estudio de los procesos que
tienen lugar en las plantas, además, estudia el funcionamiento de
las plantas y explica sus fundamentos físicos sobre las bases
estructurales a diferentes niveles: molecular, celular, de tejidos,
de órganos y de la planta como un todo. Explica los mecanismos
3
de crecimiento y desarrollo de las plantas y sus respuestas a los
agentes externos.
La fisiología vegetal mantiene relaciones con disciplinas como la
bioquímica, genética (fitomejoramiento), ecología, biología celular
y molecular, anatomía e histología, taxonomía-filogenia, entre
otras.
Existen varios factores que afectan la fisiología de las plantas,
como la herencia y el medio ambiente, procesos que regulan los
mecanismos internos y las condiciones de la planta y finalmente
determinan su crecimiento y desarrollo.
Es por ello que la forma, el tamaño y funcionamiento de la planta
resulta de una compleja serie de interacciones entre la
composición genética (tipo de raíz, tipo y estructura de las hojas,
forma y desarrollo del tallo, tipo de flor y semilla, ciclos
reproductivos y adaptación) y el ambiente (interacciones abióticas
y bióticas) en el cual creció.
Debido al aumento de la población mundial y la reducción de
disponibilidad de suelos cultivables, además de las predicciones
desfavorables para la agricultura a nivel mundial por los efectos
negativos del cambio climático, se debe buscar soluciones para
cultivar alternativamente con el fin de satisfacer la demanda
creciente de alimento, lo cual solo es posible con el correcto
conocimiento y entendimiento de la fisiología de las plantas.
4
Práctica 1. Determinación del Potencial hídrico
Introducción
5
el movimiento de difusión y el movimiento del flujo de masa
que responde al gradiente de presión.
El método de Chardakov es simple y eficiente, el cual
permite determinar la solución en la cual no ocurre cambio
en la concentración.
1- Método de Chardakov
6
Materiales y métodos
7
Cuadro 1. Valores de potencial osmótico de varias
soluciones de sacarosa a 25 °C
8
0.4 9.78
0.5 12.22
0.6 14.67
0.7 17.11
0.8 19.56
0.9 22.00
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.9
9
II- Métodos volumétrico y gravimétricos
1) agua destilada
2) sacarosa 0,1 M
3) sacarosa 0,2 M
4) sacarosa 0,4 M
5) sacarosa 0,5 M
6) sacarosa 0,6 M
7) sacarosa 0,7 M
10
Cortar con un sacabocados trozos de papa de
aproximadamente 5 cm de largo.
Medir el largo y diámetro de cada trozo.
Pesar cada trozo en forma individual.
Colocar un trozo en cada uno de los platos petri. Tapar
Después de 2, 6 y 24 horas, medir el largo de trozos, secar
cuidadosamente con papel absorbente y verificar su peso.
Resultados
Cuestionario
11
2-¿Cuál de las soluciones tiene la mayor concentración de
agua por unidad de volumen?
ANEXO
moles
2- ----------- = molaridad (M)
volumen
Ejemplos *
1) 2 gr de NaCl (de peso molecular 58,44 g
mol-1 ojo que pusimos aquí el valor exacto
del peso a diferencia y no el aproximado de
58,5) se disuelven en 100 mL de agua
¿Cuál es la molaridad de la solución?.
Si aplicamos la ecuación 3 tenemos:
M: G/PMxV
2g/58,5x0,1 L
M= 0,34
La molaridad de la solución es 0,34 M
12
2) ¿Cuántos gramos de NaCl son necesarios para obtener 500 ml
de una solución 0,2 M?
Si aplicamos la ecuación 3 tenemos:
x (0,2 M) (0,5 L) = 58,44
Práctica 2. Transpiración
Introducción
14
las caras de una hoja previamente separada de la planta y
ubíquela en condiciones naturales o en oscuridad (Fig 1.).
Lleve a cabo el mismo montaje con otra hoja. Colóquela
bajo la luz de una lámpara.
Desmontar el sistema después de una hora y revisar el
cambio de color del papel de filtro.
Resultados
Hacer un diagrama que ilustre lo observado durante el
ensayo, comente.
Cuestionario
15
Materiales y métodos
Resultados
Anotar los resultados de las observaciones. Preparar un
cuadro donde se señala la distancia recorrida por la
burbuja en cada tratamiento, en el tiempo.
Cuestionario
16
Señale los factores que retardan la transpiración en las
plantas.
¿Por qué el potómetro no se considera un método preciso
para medir la transpiración? Anote los defectos de este
método.
¿Por qué la velocidad de transpiración es generalmente
mayor en la luz que en la sombra, a pesar de que los
estomas podrían no estar cerrados en este último caso?
¿Por qué se utiliza agua sin aire en este experimento?
Figura 2. Potómetro
17
C- Transpiración. Método cuantitativo directo (Lisímetro)
1
2
3
1
2
3
1
2
3
18
Figura 3.Método cuantitativo directo Laboratorio de Fisiología
de los Cultivos Agrícolas
19
Práctica 3. Presión radical
Introducción
20
Tradicionalmente se define al agua disponible para la
planta como la diferencia entre la capacidad de campo y el
porcentaje de marchitez permanente.
21
Una vez que el agua llega al xilema es transportada
verticalmente hacia las hojas.
Si se corta un tallo de una planta herbácea, es frecuente la
exudación de líquido por la superficie del corte, en un
fenómeno llamado presión radical. A veces, en algunas
plantas se puede observar, sobre todo en días calurosos
gotas de líquido en los márgenes de las hojas (en
estructuras llamadas hidátodos). Este fenómeno se
denomina gutación y es provocado por la presión radical.
El origen de estas fuerzas está en el transporte de iones
desde el parénquima acompañante del xilema al interior
del mismo, disminuyendo así su potencial osmótico.
Aunque una presión radical de 0.1 MPa, podría ascender
al agua a 10 m, la presión radical no
se ha demostrado en
todas las especies y es circadiana y estacional. El
diferencial de presión hidrostática necesario para
transportar agua a una altura de 100 metros es de unos
3MPa, teniendo en cuenta el diferencial de presión debido
a la gravedad, por lo que la presión radical no puede
explicar esta ascensión del agua en las plantas.
Teoría de la tensión-cohesión
Procedimiento:
Resultados
-Anote las distancias recorridas por la solución en el tubo
capilar.
24
Cuadro 1. Distancia recorrida en el capilar
15
30
60
75
90
120
24 h
1 m³ : 1000000 ml
1Kg :1000g
1m : 1000mm
25
26
Práctica 4. Conductividad hidráulica en tallos leñosos de
café Coffea arábica
Introducción
La conductividad hidráulica de una porción del tejido
(madera de tallo, raíces y hojas.) es una medida de su
capacidad de conducir agua. Esta propiedad está ligada a
la capacidad de la planta de abastecer de agua a los
tejidos fotosintéticos, por lo que tiene relación directa con
la posibilidad de mantener los estomas abiertos y fijar
carbono (Hubbard et al. 2001). En especies leñosas, en las
que el agua se conduce por una red de elementos de
conducción, la resistencia de los tejidos al transporte de
agua constituye un elemento clave para comprender su
comportamiento productivo y ecológico frente a distintas
condiciones ambientales. Es por ello que la medición de
las variables relacionadas con la conductividad hidráulica
de una planta o de sus distintos órganos, se ha difundido
ampliamente en los estudios de especies leñosas, lo que
se ve facilitado por la sencillez y bajo costo de sus
mediciones.
La Conductancia hidráulica (K) es una variable que
cuantifica la capacidad de conducción de agua de un
segmento o más comúnmente, de una planta entera, sin
considerar sus dimensiones. En este término influyen las
conductividades hidráulicas de todos los componentes de
la planta, desde las raíces hasta las hojas, las que
determinan una conductancia total.
27
con una manguera (figura1). Se introduce agua en el
sistema con una jeringa hasta que esté lleno el sistema,
luego se cierra la válvula, y se deja el agua circulando por
diferencia de presión desde la pipeta hacia afuera,
atravesando el tallo. Por último se establece un tiempo
determinado o bien se fija un volumen de agua, para
determinar la cantidad de agua que pasó por la pipeta en
ese tiempo, o cuánto tiempo transcurrió para pasar por la
pipeta el volumen de agua determinado.
Materiales y métodos
Cortar con una tijera para podar una ramita terminal de
15,0 cm de largo, de 0,7 a 1,5 cm de grosor con las hojas
incluidas y colocar en un balde con agua, verificar que no
tenga hojas en el segmento que se va a usar.
Seguidamente se corta de nuevo el tallo de un tamaño
mayor de las secciones que se va a usar bajo el agua.
Una vez en el laboratorio se cortan secciones de
aproximadamente 12 cm de largo (Lr). Luego limpie los
cortes con una navaja afilada y mida la longitud final de la
sección.
Ahora introduzca el tallo de café en dirección a la
conducción del agua en el sistema de mangueras. Trate de
eliminar todas la burbujas que se forman en las
mangueras, intente ahora llenar con agua el extremo de
manguera pegado a la parte distal del tallo con una pizeta.
Por último introduzca una pipeta de 1,0 ml .
Espere a que el menisco de agua se encuentre cerca del
0,0 ml ahora cuente el tiempo (en segundos) necesarios
para que menisco recorra una distancia en la pipeta. (2 ml
tres veces)
Proceda a medir la longitud de la Hoja (Lh) y el ancho (w,
por la parte más ancha) de todas las hojas de la rama:
28
determine el área foliar ( AF en M2) con la ecuación Σ(2/3
Lhx W) para láminas foliares lanceoladas
Luego proceda a calcular Kh para la ramita medida con la
siguiente fórmula:
Kh = Flujo x Lr/ P. También calcule la conductividad
especifica foliar (KAF= KH/AF
Flujo: V/t(m³/s)
1cm³ : 0.00000 1 m³
1m : 1000mm
29
Figura 1. conductímetro Laboratorio de Fisiología de los
Cultivos Agrícolas
Introducción
33
lo afectan. Es por eso que interesa evaluar el efecto de
estos factores sobre dicho proceso.
34
- Colóquelos en la mesa con luz directa, a una
temperatura cercana a 20º C.
- Verifique diariamente que el papel filtro tenga una
humedad adecuada, para evitar la desecación de
las semillas.
Evaluaciones:
- 2 y 5 días después de iniciada la prueba, efectúe
las siguientes mediciones:
Porcentaje de germinación en cada plato (Cuadro 1)
Longitud de la parte aérea de 15 plántulas seleccionadas
al azar en cada plato (Cuadro 1)
% de
germinación
35
Longitud
promedio
(mm)
Desviación
estándar de
la longitud
Cuestionario
- Discuta el efecto causado por cada tratamiento.
- Comente los resultados con base en literatura.
Discuta qué tipo de reposo presenta la especie estudiada.
36
Diariamente o según se considere conveniente, proceda a
evaluar el porcentaje de germinación y a medir la longitud
de plántula
Almácigos hidropónicos
37
1-desinfectar cajas petri con cloro al 1 % (10ml/L) y luego
se lavan
2-colocar en el interior del plato dos servilletas
3-humedecer las servilletas y escurrir el exceso de agua
4- seleccionar y colocar las semillas ordenadas sobre el
papel ( 25,50 , 100 semillas)
5- tapar con plástico adhesivo para mantener humedad
6-rotular caja con la siguiente información: nombre del
cultivo, variedad, fecha y cantidad de semillas colocadas
6- ubicar platos en lugar protegido de
la luz del sol y contaminantes
7- 8- revisar todos los días la
humedad.
Nº de semillas germinadas
--------------------------------- x 100
Nº de semillas al inicio
38
La prueba de germinación para semillas de hortalizas se
juzga de acuerdo con los siguientes criterios:
-semilla óptima (85-100% de germinación): tiene una alta
viabilidad y es adecuada para sembrar.
-semilla regular (60-84%): se debe sembrar más semilla
para compensar la baja germinación
-semilla de mala calidad (menos del 59 % de germinación):
no se acepta para la siembra
39
poco. Al abrir la mano la muestra debe guardar la forma del
puño y la palma de la mano debe estar húmeda
Recipientes usados
Para escoger el recipiente se tiene en cuenta las
dimensiones, el costo, el material con que está construida,
durabilidad, peso y facilidad de manipulación. El número
de huecos varía para algunas hortalizas como lechuga,
repollo, coliflor y brócoli es de 288, 200 y 162 celdas
40
3-Llenado del recipiente: se coloca el sustrato y se
compacta golpeándolo suavemente sobre la mesa, luego
se rellena, se nivela raspando el sustrato con una regla
fina 4-Huequeado: El hueco se hace en el centro de cada
celda a una profundidad uniforme, que varía de 0,5 a
o.75cm para la mayoría de cultivos. En semillas muy
pequeñas, por ejemplo el apio o tabaco la siembra de las
semillas es superficial
5- siembra: las manos deben estar desinfectadas, limpias
y secas. Si la viabilidad de semillas es buena se coloca
una semilla por hueco. 6-Tapado: se hace con el mismo
sustrato sin presionar
7- Pregerminación: los recipientes con las semillas se
colocan en un lugar protegido de la luz y el viento, para
mantener la humedad homogénea
8-la duración de la pregerminación depende del cultivo:
una vez que germinan las primeras semillas se sacan los
recipientes del germinador y se colocan en el área donde
se va a desarrollar el almacigo
9- Etiquetado: anote con lápiz la variedad y la fecha de
siembra
41
Práctica 6. Cultivo de tomate (Lycopersum esculentum) en
solución nutritiva y elemento faltante
Introducción
Las sustancias minerales tienen muchas funciones en las plantas.
Entre las más importantes se encuentran las siguientes:
constituyentes de los tejidos, catalizadores en varias reacciones,
reguladores osmóticos, componentes de sistemas de
amortiguación y reguladores de la permeabilidad de las
membranas. Algunos ejemplos de minerales que contienen las
plantas: son el calcio en las paredes celulares, el magnesio en la
molécula de clorofila, el azufre en ciertas proteínas y el fósforo en
los fosfolípidos y nucleoproteínas. Aunque el nitrógeno no es un
elemento mineral, su importancia como constituyente proteico
debe ser reconocida. Varios elementos (incluido hierro, zinc y
cobre), aunque son requeridos en muy bajas cantidades, son
esenciales debido a que constituyen grupos prostéticos o
coenzimas en ciertos sistemas enzimáticos. Otros minerales,
como el manganeso y el magnesio funcionan como activadores o
inhibidores de enzimas.
Se entiende por cultivo en soluciones nutritivas el que se efectúa
en una disolución de composición química definida y no en el
suelo. La enorme capacidad de este sistema de producción se
conoce desde 1929, y a partir de ese momento se inicia su
utilización comercial. La hidroponía funda sus bases en la teoría
de que todos los factores para el crecimiento suplidos
naturalmente por el suelo pueden ser proporcionados
artificialmente mediante el uso de agua, oxígeno y sales
minerales. Este método permitió comprender mejor la función que
desempeñan los diferentes elementos minerales en el desarrollo y
crecimiento de la planta.
43
En el crecimiento y reproducción normal de la
mayoría de plantas se necesitan de 16 elementos
esenciales (3 no minerales y 13 minerales).
44
En el caso de la hidroponía 13 de ellos son aportados en
solución nutritiva mientras que el carbono (C),
hidrógeno (H) y oxígeno (O) son obtenidos del aire y
agua (macroelementos).
45
Entre las ventajas que presenta el cultivo hidropónico
se encuentran: a-no está influenciado por ningún material
sólido de soporte b- las condiciones son conocidas con
exactitud y c- reproducibles en el cultivo de las plantas.
46
hojas jóvenes, mientras que si es móvil en el interior de
la planta la deficiencia se observa en hojas viejas
(Cuadro 2.).
Móvil Inmóvil
Nitrógeno Calcio
Potasio Azufre
Magnesio Hierro
Fósforo Boro
Cloro Cobre
Sodio
Zinc
Molibdeno
Objetivo
Procedimiento
47
obtener las diferentes fórmulas nutritivas (completa y con
alguno de los elementos faltantes).
48
Cuadro 4. Preparación de las soluciones nutritivas
Resultados
50
Sin Fe
Sin
microeleme
ntos
Cuestionario
Sustratos
El sustrato no cumple la función de reservorio de
nutrientes, sus funciones son de retención de humedad,
facilitar la buena aireación y drenaje, servir de medio de
anclaje para las plantas y proteger las raíces de la luz del
sol.
Para ello deber cumplir con las siguientes características:
estable físicamente, ser un medio sólido, inerte, proveer
buena capilaridad, liviano, de bajo costo y fácil acceso. Los
más usados son granza de arroz, arena, carbón, fibra de
coco, piedra de río, piedra volcánica, piedra pómez,
aserrín, ladrillo, estereofón, vermiculita, perlita, lana de
roca y peat moss.
El sustrato o la combinación de ellos que depende de
factores como: la disponibilidad, la planta a sembrar, el
recipiente o sistema en que se va a sembrar, el clima, las
plagas, entre otros.
Nutrientes
La solución de nutrientes consiste en los elementos que
requiere la planta para crecer y reproducirse.
Ventaja: la planta no sufre de excesos ni deficiencias, así
crecen mejor y más rápido, lo que resulta en una mayor
producción con respecto a plantas cultivadas en tierra.
53
• elementos mayores: nitrógeno (N), fósforo (P) y
potasio (K).
• elementos que la planta requiere en cantidades
medianas: azufre (S), calcio (Ca), magnesio (Mg).
• elementos menores: hierro (Fe), zinc (Zn),
manganeso (Mn), boro (B), cobre (Cu), molibdeno
(Mo).
• otros elementos útiles pero no indispensables:
cloro (Cl), sodio (Na) y silicio (Si).
• Los otros tres indispensables para las plantas son
absorbidos por medio del aire y el agua: carbón
(C), hidrógeno (H) y oxígeno (O).
54
Sistemas
Sistemas abiertos
En estos sistemas los excesos de riego son desechados,
es decir, salen del recipiente de cultivo a través de
drenajes (Figura 1a y 1b).
Ejemplos:
1) Camas o bancales
2) Columnas de bolsa plástica tubular o mangas
3) Tubos de PVC verticales u horizontales
4) Cultivos en macetas o en recipientes reutilizados
para el cultivo (galones de leche, llantas, botellas
de refresco, etc.)
55
Figura 1a. Sistema
abierto camas o bancales
Figura 1 b. Sistema
abierto bolsa tubular Sistemas cerrados
2) Raíz flotante
3) Canales de PVC o bambú en escalera o planos
4) Macetas de plástico o estereofón en columnas
56
Figura 3. Sistema cerrado, técnica de película de
nutrientes
57
Disminuyen los costos de producción al no necesitar de
sustrato, se aprovecha más eficientemente el agua y los
nutrientes.
No requiere de sistema de riego muy tecnificado que
demanden mano de obra profesional y equipos costosos
Desventajas
Almácigo
Se usan cajones y en su interior se agrega sustrato suelto
con tamaño de partícula entre 0.5 a 2.0 milímetros, como
sustrato se adiciona piedra pómez, piedra volcánica y
piedrilla de río o arena
Siembra de la semilla
Primer transplante
Segundo transplante.
Entre los 10-15 días en lechuga y 30 días en apio después
del primer transplante se pasan las plántulas a
contenedores de mayor tamaño, a la distancia adecuada
para la fase final (cuadro 1).
59
Cultivo Almácigo I transplante Transplante
definitivo
Lechuga 10-15 días 2 semanas 3.5 a 4 semanas
Apio 4 semanas 4 semanas 8 semanas
I
TRANSPLANTE
Cultiv Diámetro Distancia Grosor de
o hoyo(cm) plantas(cm) lámina
Lechu 2 8-10 0.5-1.0
ga pulgada
Apio 2 8-10 1 pulgada
II
TRANSPLANTE
Lechu 3 17-20 1 pulgada
ga
Apio 4 15 – 20 1-1.5 pulgadas
Variables
1- longitud total
2- número de hojas.
60
Las medidas se llevaran a cabo al inicio y mes y medio
después de la siembra y se realizarán en 10 plantas
por tratamiento.
Objetivo
Adquirir los conocimientos prácticos de la hidroponía en
raíz flotante para el cultivo de lechuga, con el fin de evaluar
los efectos de factores nutricionales y sus interacciones.
Sistemas abiertos
Mangas colgantes
61
Son estructuras en forma de sacos de polietileno, los más
usados corresponden a 1.0 metro de alto
Las dimensiones de estos contenedores varían de 0.5 a
2.5 metros y de diámetro entre 20 a 30 centímetros
Para el color se consideran las condiciones ambientales,
en lugares soleados se recomiendan el color plata o blanco
y negro en lugares fríos, se evita que sean transparentes
para que no crezcan algas en su interior. Las algas
compiten por luz, agua, oxígeno y nutrientes, alteran el pH
de la solución nutritiva y en su descomposición aportan
materia orgánica.
Los sacos cuentan con perforaciones en su parte inferior
para evitar los excesos de agua o de solución nutritiva.
En relación con el sustrato se prefiere que sea liviano, con
buena capilaridad para retener agua. Con partículas no
mayor a 3 milímetros de diámetro. Algunas mezclas que
dan buenos resultados en invierno son los siguientes: 6
partes de cascarillas de arroz con 4 partes de carbón, el
carbón puede sustituirse por piedra pómez, fibra de coco u
otro material liviano.
Para el verano se obtienen mejores resultados con las
siguientes mezclas:
5 partes de fibra de coco con 5 partes de pómez o carbón
3 partes de cascarilla de arroz con 3 partes de pómez o
carbón más 4 partes de fibra de coco.
Procedimiento
Siembra: para disminuir el autosombreo y captar más luz
se distribuyen las columnas en pata de gallo, a una
distancia de 0.8 a 1.0 metro entre columnas y de 1.0 a 1.2
metros entre hileras. Para la siembra de las plantas, se
marcan los puntos donde se van a colocar, para lo cual se
usa un triángulo equilátero de 15- 20 cm. dependiendo del
62
cultivo. El hueco donde va la planta puede ser en t
invertida, redondo o triangular con 4 cm de diámetro. El
corte del hueco se hace antes de llenar el saco, para ello
se coloca un cartón en el centro con el fin de no perforar
las bolsas por los dos lados.. Se distribuyen los agujeros
para la ubicación de las plántulas y cerca del amarre para
el riego mediante el uso de los embudos. Luego se llena la
bolsa con el sustrato, humedecido previamente, se cierra la
bolsa en la parte superior con un mecate o cordón
adecuado y por último se colocan las plántulas.
63
• Efectividad de acuerdo con el cultivo.
• Comparación entre sitios o efecto de la ubicación
(invernadero vs no invernadero).
• Ventajas y desventajas de la hidroponía.
• Ventajas y desventajas del sistema de manga.
Cuestionario
64
PRÁCTICA 8: Uso de la cámara de flujo laminar, confección
de soluciones madres y medios de cultivo.
Introducción
Para que un laboratorio de cultivo de tejidos
vegetales funcione adecuadamente se requieren de
condiciones estrictas de asepsia. Estas condiciones deben
imperar en el área de trabajo, en lo personal, en los medios
de cultivo y en los instrumentos.
65
denominan macronutrientes; los otros nutrientes restantes
o micronutrientes, se requieren en pequeñas cantidades.
67
Para recordar la cantidad que se requiere agregar por litro
de medio de cultivo recuerde dividir 1000 ml/50 = 20ml
de la solución madre /1 litro de medio.
Repita el procedimiento con los microelementos.
METODOLOGÍA
68
componentes en la preparación del medio Murashige and
Skoog (1962).
Siga los siguientes pasos para la preparación de
soluciones madres de Macronutrientes, Micronutrientes,
Vitaminas y Hierro
Reactivo
Macronutriente NH 4NO3 1650
s KNO3 1900
CaCl 22H 2O 440
MgSO4 7 H 2O 370
KH 2PO 4 170
KI 0.83
H 3BO3 6.30
Micronutrientes MnSO4 4H 2O 223.
Zn SO4 7H 2O 8.60
NaMoO4 2H 2O 0.25
CuSO4 5 H 2O 0.025
CoCl 26 H 2O 0.025
Myo-inositol 100.0
Glicina 2.0
Vitaminas
Ácido
0.5
Nicotínico
Piridoxina 0.5
Tiamina 0.1
Hierro Na 2EDTA 37.3
69
*Tenga presente que cuando los reactivos tienen
diferentes composiciones de agua a los que están en la
tabla, tiene que hacer la conversión.
Componente Reactivo
Cantidad Alícuota
en g/L
NH 4NO3 16,6
KNO3 19,0
CaCl 22H2 O
4,4
Macronutrient 100ml
MgSO4 7 H 2O 3,7
es
KH 2PO 4 1,7
KI 0,083
H 3BO3 0,0630
MnSO4 7H 2O 2.77
Micronutriente Zn SO42H 2O 0.860 10ml
s
NaMoO4 2H 2O 0.025
CuSO4 5 H 2O 0.0025
CoCl 26 H 2O 0.0025
Myo-inositol
10.0
Glicina 0.2
10ml
70
Vitaminas Ácido 0.05
nicotínico
Piridoxina 0.05
Tiamina 0.01
2-Preparación de medios
Consideraciones generales
Nutrientes.
71
suministra en forma de quelatos con el fin de prolongar su
disponibilidad en el medio de cultivo.
Los compuestos orgánicos relativamente insolubles en
agua requieren de codisolventes, por ejemplo la mayoría
de reguladores de crecimiento.
pH .
Citocininas
72
frecuencia los efectos son antagónicos: una de las dos
sustancias inhibe la acción de la otra. Son bases débiles,
por lo tanto son solubles en ácido diluido. Entre las
citocininas, las más activas son las zeatina y el 2 ip
Auxinas
Las auxinas son ácidos débiles y son solubles en
bases débiles.
La eficiencia de estas sustancias depende de la auxina o
citocina con que se esté trabajando. La auxina más activa
es el 2,4-D; la menos activa es el AIA
Generalmente se usan 0.3 ml de Na OH 1N o HCl 1N por
cada 10 mg de citocina o auxina.
Las soluciones madre deben mantenerse en refrigeración
o a temperatura ambiente si se conoce su estabilidad
73
Porcentaje en volumen:
Molar:
Concentración molar:
Una concentración molar (M) contiene por litro el número de
gramos que indica su peso molecular.
74
Pese 2 gramos de KOH y agréguele 35.7 ml de agua
destilada.
4-Hidróxido de potasio 0.1 N
Tome una alícuota de 2 ml de la solución de KOH al 1 N y
afore hasta 20ml con agua destilada.
5-Solución de KCL 2 M para guardar los electrodos del
potenciómetro.
Pesar 15 gramos de KCL y aforar con agua destilada hasta
100 m
Cuestionario.
75
Práctica 9: Micropropagación de Orquídeas
Introducción:
La familia orchidaceae es la más grande dentro del grupo
de las angiospermas. Su línea de evolución se ubica en el
grupo de las monocotiledóneas, ligada más estrechamente
con la familia Liliácea. Existen de 20.000 a 30.000
especies, de las cuales se han descrito 1.500 en el país,
distribuidas en 125 a 130 géneros.
Esta familia ha alcanzado su mayor diversidad y
desarrollo en los trópicos. Encontrándose los dos
principales centros de diversidad en Malasia y al norte de
Sudamérica.
Entre los factores que afectan las poblaciones de estas
plantas sobresalen los siguientes:
1- Deforestación
Uno de los aspectos que contribuyó a la deforestación
fue la actividad ganadera, que incluyó la formación de
potreros, con lo cual fue necesaria la eliminación de
árboles, destruyendo así el hábitat de estas epífitas (que
utilizan los árboles como soporte natural).
Otra actividad que contribuye a la disminución de este
recurso es la explotación irracional con fines comerciales
que llevan a cabo personas inescrupulosas con escasa o
ninguna regulación, así como el manejo inadecuado de las
plantas que poseen algunos coleccionistas aficionados.
Esta situación ha llevado a muchas de estas especies en
peligro de extinción.
76
cápsulas .El número de semillas por cápsula puede oscilar
entre 1.300 a 3.7000.000 .La gran mayoría de especies
tienen semillas indiferencias forradas de una membrana
delgada, llamada testa. Las semillas carecen de
cotiledones y endospermo. Por eso necesitan una fuente
de nutrición externa hasta que se han desarrollado lo
suficiente para sobrevivir fabricando su propio alimento.
Estos factores influencian notablemente la distribución de
las especies de orquídeas. Debido al reducido tamaño,
ligereza y abundante cantidad, las semillas son distribuidas
por el agua y el viento. Pero, como carecen de reservas
alimenticias o deben asociarse a un determinado tipo de
hongo, son muy pocas las que logran completar el ciclo.
Lo expuesto influye en que estas semillas tengan
requerimientos específicos, para su germinación y
desarrollo. La necesidad de poder asegurar la propagación
de estas plantas dio origen a la búsqueda de métodos
artificiales, capaces de sustituir la reproducción natural.
El primero en tratar el tema fue Knudson (1922) al
establecer el método simbiótico, basado en la utilización de
un medio sintético, para la germinación de semillas de
orquídeas, a la vez propicio el camino para el desarrollo de
la hibridación con lo que hizo posible la supervivencia de
plantas que sucumbiría en condiciones normales.
Existen factores que afectan la germinación de las
semillas de orquídeas, por ejemplo: 1- alta concentración
de nitrógeno en el medio de cultivo, 2- mucho azúcar en el
medio, concentraciones mayores de 25 g /L, 3-
concentraciones altas de sales, 4- Cápsulas muy verdes
con semillas que no han alcanzado la madurez fisiológica
óptima. Considerando lo anterior se llevará a cabo esta
práctica cuyo objetivo es: Dar a conocer dos técnicas para
el cultivo in vitro de orquídeas.
MATERIALES Y MÉTODOS
1- Material biológico.
77
Se utilizarán dos cápsulas verdes de 10 meses de edad.
3- Desinfección de la cápsula
78
en la cámara lave tres veces la cápsula con agua
destilada estéril.
4- Flamee la cápsula con etanol al 70%.
5- Siembra de las semillas: En este punto se
realizarán dos técnicas diferentes para la siembra
de las semillas in vitro.
Cuestionario
- Explique a que se deben las diferencias de
viabilidad que existen dentro de una misma
cápsula.
- ¿Cuál es la finalidad de inocular las semillas
mediante una película de agua?.
- Explique detalladamente cual es la función de los
siguientes compuestos del medio en la germinación
y crecimiento de las orquídeas: Nitrógeno, Fósforo,
79
Hierro, Manganeso, Calcio, Carbohidratos y
Vitaminas.
-
Bibliografía
Anexo 1.
LITERATURA CONSULTADA
1-Hurtado, D Merino,N. 1994. Cultivo de tejidos vegetales.
México. Trillas.231 p
2-Abdelnour, A y Vincent, J. 1994. Conceptos básicos de
cultivo de tejidos vegetales. CATIE. 38p.
80
Práctica 10: Establecimiento In vitro de vainilla ( Vanilla
planifolia Andrew)
1- INTRODUCCIÓN.
Descripción
La vainilla es una orquídea epifita trepadora, sus raíces
llegan al suelo por medio de un tallo suculento, carnoso,
con entrenudos en Zig-Zag que se adhiere a los troncos y
ramas. Sus flores se encuentran en inflorescencias con
forma de racimo y son de color amarillo pálido. El fruto es
una cápsula unilocular, color amarillo pálido a la madurez
y se torna pardo oscuro hasta abrirse en dos valvas
longitudinales.
Distribución.
Se encuentra en las tierras continentales húmedas y bajas
de menos de 800 msnm, desde el sur de México hasta el
norte de Bolivia.
Reproducción.
Se cultiva por estacas o semillas, lo habitual es a partir de
estacas de alrededor de un metro y medio de largo. Para
su cultivo se usa como soporte estacones vivos
espaciados de uno a dos metros en línea y unos tres
metros entre líneas.
Importancia.
El mercado de la vainilla comprende la pastelería, fábricas
de refrescos, confección de bebidas y licores entre otros.
El mayor comprador de vainilla en México es la empresa
Coca Cola, la cual procesa las cápsulas para extraerles el
extracto.
El consumo de vainilla en el mundo es de unas 2000
toneladas y se estima que existe una demanda sin
satisfacer de más de 2.500 toneladas.
81
En el mercado internacional la demanda de vainilla natural
proviene principalmente de Francia (para uso en
repostería), Alemania, Canadá y Japón entre otros. No
obstante, el máximo importador es Estados Unidos que
consume más de la mitad de la producción mundial, para
utilizarla en la industria de helados. La tendencia de
muchos países es regresar a los productos naturales.
Es importante analizar que además, del aspecto
económico hay que tomar en cuenta el impacto positivo en
el ambiente al ser cultivado en forma orgánica y asociada a
otras especies vegetales.
82
Cuadro 1. Componentes del medio de cultivo utilizados en
la etapa de Introducción de V. planifolia.
Componentes del Cantidades
medio /l
Macroelementos 100 ml
Microelementos 10ml
Vitaminas 10ml
Fe 10ml
Tiamina-HCL 0.1 mg
Piridoxina-HCL 0.5mg
Inositol 100 mg
Ácido nicotínico 0.5 mg
Glicina 2.0 mg
Caseína hidrolizada 1.0 g
BA 0.5 mg
Sucrosa 30g
pH 5.7
Agar
Cuestionario.
La vainilla se reproduce en forma sexual y asexual; de la
forma asexual tradicionalmente se reproduce por esquejes.
Analice los dos métodos expuestos y explique las ventajas
al usar el cultivo de tejidos como herramienta en la
propagación asexual de este material.
Bibliografía.
Kononowicz, H; Janick 1984. In vitro propagation of
Vanilla planifolia h ort Science 19 (1):58-59
Gervera. E.; R Madrigal. 1981. In vitro propagation of
vainilla (Vanilla planifolia) Environ. Expt. Bot. 21: 441
83
Anexo
Cápsulas fermentadas
84
Práctica 11. Reguladores de crecimiento vegetal
(fitohormonas)
Introducción
Giberelinas
Objetivo
Estudiar el efecto de las auxinas en la dominancia apical y
el enraizamiento de estacas.
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A. Efecto del AIB en la formación de raíces
Procedimiento
Resultados
Cuadro 1. Enraizamiento en estacas
Respuesta Concentraciones
de AIB (ppm)
1.0 2.5 5.0 10 Contr
ol
Estacas sin primordios ni raíces
adventicias
88
Estacas con raíces de más de
1mm
Estacas con primordios
Nº raíces /estaca
Estacas con anormalidades
(partiduras excesivas,
engrosamiento excesivo,
necrosis)
Procedimiento
89
C. Efecto del AIA en la abscisión
Procedimiento
90
Resultados:
Anote el número de pecíolos desprendidos.
Procedimiento
Aplicar 3,0 mg/L de 6 bencil aminopurina (BAP) a una de
las hojas de vainicas en intervalos de seis días. Anotar los
cambios de coloración en las hojas producto de la
traslocación de nutrientes.
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