UJI TOKSISITAS DAN ANALISIS KANDUNGAN SENYAWA MINYAK ATSIRI
RIMPANG TEMU PUTIH (Curcuma zedoaria (Berg.) Rosc.)
Wiwik Susanah Rita1, I Made Dira Swantara1, I Made Sughita2, Ni Made Puspawati1,
Lestari Mamik Setiani1
1
Jurusan Kimia FMIPA, Jurusan Ilmu dan Teknologi Pangan Fakultas Teknologi Pertanian,
2
Universitas Udayana
E-mail: wiwiksr@yahoo.com; wiwiksr@kimia.unud.ac.id
ABSTRACT
Analysis compounds and toxicity test of Curcuma
zedoaria (Berg.) Rosc. essential oil has been done. The
essential oil was extracted by steam distillation, while
the toxicity test, as a prescreening for compounds
suspected to have antitumor activity, was done by
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) against Artemia salina
Leach larvae. The toxic fraction was analyzed by Gas
Chromatography and Mass Spectroscopy (GC-MS).
Twenty Kg of temu putih was freshly steam distilled
which gave 15.30 mL (13.49 g) gold oil. The oil was then
subjected towards BSLT and the result showed the oil
was active with LC50 of 19.96 ppm. The composition
of essential oil was analyzed using GC-MS. The GC-
MS spectra showed that the essential oil of temu putih
was composed of eight major components including
camphen, β-pinen, 1,3,3-trimetil-sineol, camphor,
1-ethenyl-1-methyl-2,4-bis(1-methylethenyl)
cyclohexane, curzerene, germacron, and velleral.
Keywords: Curcuma zedoaria (Berg.) Rosc., essential
oils, toxicity, Artemia salina Leach.
PENDAHULUAN
Semakin banyaknya kasus kematian akibat
penyakit kanker menyebabkan terus dikembangkannya
obat yang dapat menghambat pertumbuhan dan
penyebaran sel kanker dalam tubuh. Keragaman
tumbuhan Indonesia memberikan potensi untuk
dikembangkannya suatu obat tradisional yang dapat
menghambat atau menghentikan pertumbuhan sel-sel
kanker. Salah satu tumbuhan yang dipercaya dapat
mengatasi perkembangan sel kanker tersebut adalah
temu putih (Curcuma zedoaria Rosc.). Bagian yang biasanya
digunakan untuk pengobatan adalah rimpangnya.
Beberapa penelitian menunjukkan bahwa rimpang
temu putih (Curcuma zedoaria) mempunyai banyak
manfaat diantaranya mempunyai aktivitas antimikroba,
yaitu antibakteri dan antijamur (Bugno et al., 2007;
Wilson et al., 2005; Ficker, et al., 2003). Seo et al., (2005)
melaporkan bahwa ekstrak air rimpang temu putih
berperanan dalam menghambat penyebaran sel kanker
melanoma B16, sementara Kim et al., (2005) menyatakan
bahwa ekstrak air rimpang temu putih tersebut dapat
digunakan untuk terapi penyakit liver kronis. Menurut
Mau et al., (2003), minyak atsiri epikurzerenon,
kurzerena, and azulenon juga berpotensi sebagai
antioksidan.
Rimpang segar temu putih pada konsentrasi 50,
100, 150, dan 200 mikrogram/mL mempunyai potensi
kematian sel kanker di atas 50 persen. Sedangkan
untuk sediaan jadi temu putih (ZF kapsul) mempunyai
potensi kematian sel kanker di bawah 50 persen pada
dosis yang sama (Gklinis, 2004). Sukmana (2006)
melaporkan bahwa pemberian ekstrak Curcuma zedoaria
pada mencit jantan dapat meningkatkan jumlah sel
mukosa kolon mencit yang mengalami apoptosis
setelah dipapar 9,10-Dimethyl-1,2-benz-(a)anthracene
(DMBA).
Rimpang temu putih mengandung 1-2,5% minyak
menguap dengan komposisi utama seskuiterpen.
Minyak menguap tersebut mengandung lebih
dari 20 komponen seperti kurzerenon (zedoarin)
yang merupakan komponen terbesar, kurzerena,
pirokurkuzerenon, kurkumin, kurkumenon,
epikurkumenol, kurkumol (kurkumenol),
isokurkumenol, prokurkumenol, dehidrokurdon,
furanodienon, isofuranodienon, furanodiena, zederon,
dan kurdion. Selain itu mengandung flavonoid, sulfur,
gum, resin, tepung, dan sedikit lemak (Pdpersi, 2006).
Sedangkan minyak atsiri yang terdapat pada temu
putih asli India ditemukan juga 1,8-sineol (15.9%) and
germakron (9.0%) (Purkayastha et al., 2006).
Sementara itu minyak atsiri dalam rimpang temu
putih yang diperoleh di sekitar Bali memiliki aktivitas
antioksidan dengan % peredaman sebesar 64,63% pada
5 menit pertama dan 73,63% pada menit ke-60, serta
dapat menghambat pertumbuhan jamur Candida albicans
(Rita et al., 2008).
Uji toksisitas terhadap larva udang Artemia salina
L digunakan sebagai skrining awal untuk senyawa-
senyawa yang diduga mempunyai aktivitas antitumor
dan antikanker. Toksisitas yang tinggi dari senyawa
uji sangat berkorelasi dengan aktivitas senyawa
sebagai antitumor (Colegate, 1993). Uji toksisitas
ekstrak n-heksana, kloroform, dan etilasetat rimpang
temu putih terhadap larva udang Artemia salina L.
menunjukkan bahwa ekstrak n-heksana, koroform, dan
etilasetat bersifat toksik dengan LC50 berturut-turut
sebesar 125,9; 28,2; dan 302,0 ppm. (Rita, 2009). Suatu
bahan dikatakan bersifat toksik jika nilai LC50nya di
bawah 1000 ppm (Meyer et al., 1982).
The Excellence Research UNIVERSITAS UDAYANA 2011 97
 Oleh karena rimpang temu putih berpotensi sebagai
obat yang dapat digunakan untuk menyembuhkan
kanker, dan memiliki kandungan utama minyak atsiri,
maka perlu dilakukan penelitian tentang uji toksisitas
dan analisis kandungan senyawa minyak atsiri rimpang
temu putih yang diperoleh di sekitar Bali.
METODOLOGI PENELITIAN
Alat dan Bahan
Bahan yang dipergunakan dalam penelitian ini
adalah rimpang temu putih yang diperoleh di Denpasar
pada bulan Oktober 2009. Penyiapan bahan meliputi
determinasi tanaman yang dilakukan di UPT Balai
Konversi Tumbuhan Kebun Raya Eka Karya Bali,
pengumpulan bahan, pembersihan, dan pemotongan
bahan. Bahan uji yang digunakan yaitu Larva udang
Artemia salina L. Bahan kimia yang digunakan dalam
penelitian ini adalah akuades, dimetil sulfoksida
(DMSO) Merck, kalsium klorida anhidrat (CaCl2) Merck,
dan ragi.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah
pisau, timbangan, seperangkat alat destilasi uap
(destilasi stahl), botol tempat minyak atsiri, aluminium
foil, neraca analitik, pipet mikro, pipet volume, pipet
tetes, tabung reaksi, dan seperangkat alat GC-MS
QP2010S SHIMADZU.
Tempat penelitian
Penelitian ini dikerjakan di Laboratorium Penelitian
Jurusan Kimia FMIPA Universitas Udayana dan
Laboratorium Biologi Kelautan Universitas Udayana.
Identifikasi dengan GC-MS dilakukan di Laboratorium
Kimia Organik Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Isolasi minyak atsiri dengan destilasi uap
Metode yang digunakan adalah destilasi uap
(destilasi stahl). Rimpang temu putih sebanyak ± 20
kg didestilasi secara bertahap sebanyak 4 kali, dengan
setiap kali destilasi menggunakan ± 5 kg rimpang
temu putih. Rimpang temu putih dipotong kecil-kecil
kemudian dimasukkan ke dalam dandang yang telah
berisi air. Dandang yang digunakan dilengkapi dengan
kondensor, kemudian dipanaskan dengan api kecil.
Destilat yang diperoleh merupakan campuran minyak
dan air. Dimana, dengan menggunakan destilasi stahl,
minyak dapat langsung terpisah dari air. Namun,
minyak perlu dibebaskan lagi dari sisa-sisa air dengan
menambahkan CaCl2 anhidrat untuk mengikat air.
Minyak atsiri yang diperoleh dapat digunakan untuk
uji toksisitas terhadap larva udang Artemia salina L dan
dianalisis menggunakan GC-MS.
Uji toksisitas terhadap larva udang Artemia salina L.
Minyak atsiri yang telah diperoleh kemudian diuji
98 The Excellence Research UNIVERSITAS UDAYANA 2011
toksisitasnya menggunakan larva udang Artemia salina
L. Pada uji toksisitas, terlebih dahulu dibuat media
pertumbuhan larva udang dengan cara menyaring air
laut secukupnya. Air laut tersebut dimasukkan ke
dalam akuarium yang memiliki sekat berlubang dengan
satu bagian dari akuarium dibuat terang sedangkan
satu bagian lagi dibuat gelap. Telur Artemia salina L
dimasukkan pada bagian gelap, selanjutnya akuarium
disimpan pada tempat yang memiliki penerangan dan
diberi oksigen selama 48 jam.
Uji toksisitas dilakukan dengan menyiapkan 10
tabung reaksi, dimana 9 tabung digunakan untuk
tempat bahan uji dan 1 tabung untuk kontrol. Sebanyak
20 mg minyak atsiri rimpang temu putih ditimbang,
kemudian dilarutkan dalam 2 mL etanol. Selanjutnya,
larutan yang diperoleh dipipet masing-masing sebanyak
5 µL, 50 µL dan 500 µL ke dalam tabung reaksi dan
pelarutnya diuapkan selama 24 jam. Selanjutnya,
dimasukkan 1 mL air laut, 50 µL dimetil sulfoksida,
10 ekor larva udang Artemia salina L, dan setetes ragi
roti, kemudian ditambahkan air laut sampai volumenya
5 mL, sehingga konsentrasi masing-masing larutan
sebesar 10, 100, dan 1000 ppm.
Sedangkan untuk kontrol, ke dalam tabung reaksi
dimasukkan 2 mL air laut, 50 µL dimetil sulfoksida, 10
ekor larva udang Artemia salina L, dan setetes ragi roti,
kemudian ditambahkan air laut sampai volumenya 5
mL. Pengamatan dilakukan selama 24 jam. Selanjutnya,
dilakukan perhitungan terhadap larva udang Artemia
salina L yang mati dan dihitung nilai LC50.
Analisis kualitatif dengan kromatografi gas–
spektroskopi massa (GC-MS)
Minyak atsiri yang diperoleh kemudian dianalisis
dengan GC–MS untuk mengetahui komponen
penyusun minyak atsiri rimpang temu putih. Spektrum
massa yang diperoleh dibandingkan dengan spektrum
senyawa standar yang telah diketahui dalam database
yang telah terprogram pada alat GC–MS.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Minyak Atsiri
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah
20 kg temu putih yang diekstraksi dengan destilasi
uap. Destilasi dilakukan secara bertahap sebanyak 4
kali, dimana setiap destilasi digunakan ± 5 kg sampel
temu putih yang telah dibersihkan dan dipotong kecil-
kecil. Minyak atsiri yang diperoleh berwarna kuning
kental sebanyak 15,30 mL (13,49 g). Minyak atsiri yang
diperoleh memiliki densitas sebesar 0,88 g/mL, dengan
kadar minyak sebesar 0,067 % b/b, Selanjutnya, minyak
atsiri yang diperoleh digunakan untuk uji toksisitas
antitumor terhadap larva udang Artemia salina Leach.
Uji Toksisitas Minyak Atsiri menunjukkan bahwa minyak atsiri rimpang temu putih
mempunyai nilai LC50 sebesar 19,96 ppm, sehingga
Hasil uji toksisitas minyak atsiri rimpang temu
dapat dikatakan bahwa minyak atsiri rimpang temu
putih terhadap larva udang Artemia salina L. disajikan
putih berpotensi sebagai antitumor.
dalam Tabel 1 dan Gambar 1. Hasil uji toksisitas ini

Tabel 1. Hasil uji toksisitas minyak atsiri rimpang temu putih terhadap larva udang Artemia salina L.
Jumlah larva yang Jumlah larva yang
Akumulasi Akumulasi
mati hidup % kematian
Konsentrasi ppm mati hidup
1 2 3 1 2 3
10 7 6 8 3 4 2 3,7 16,6 24,18
100 10 10 10 0 0 0 8,4 5,3 61,13
1000 10 10 10 0 0 0 18,4 0 100.00
Keterangan: Jumlah larva tiap konsentrasi 10 ekor (total larva pada tiga konsentrasi adalah 30 ekor).

Gambar 1. Grafik log konsentrasi Vs % kematian minyak atsiri temu putih

Analisis Minyak Atsiri Rimpang Temu Putih dengan rimpang temu putih dengan GC memperlihatkan 19
GC-MS puncak seperti yang ditunjukkan dalam Gambar 2.

Minyak atsiri rimpang temu putih yang diperoleh
dari proses destilasi uap dianalisis komponen senyawa
yang terkandung di dalamnya dengan menggunakan
GC-MS. Kromatogram hasil analisis minyak atsiri
Masing-masing puncak diidentifikasi lebih lanjut
dengan spektrometer massa, dimana setiap senyawa
memiliki pola fragmentasi massa yang spesifik.
Identifikasi dilakukan dengan membandingkan
spektrum massa masing-masing puncak dengan
senyawa-senyawa yang sudah diketahui dan terprogram
dalam database GC-MS (WILEY 7), sehingga dapat
diduga senyawa-senyawa penyusun minyak atsiri
rimpang temu putih.

Hasil analisis spektrum massa dari kromatogram

minyak atsiri rimpang temu putih dan perkiraan
senyawa berdasarkan database WILEY 7 dapat dilihat
Gambar 2. Kromatogram hasil analisis minyak atsiri pada Tabel 2.
rimpang temu putih

The Excellence Research UNIVERSITAS UDAYANA 2011 99

Tabel 2. Senyawa-senyawa yang diduga dari masing-masing puncak pada kromatogram minyak atsiri rimpang
temu putih berdasarkan database WILEY 7.
Waktu retensi
Puncak M+ Kelimpahan (%) Senyawa yang diduga
(menit)
1 136 3,252 4,77 Kamfen
2 136 3,569 4,16 Beta pinen
3 154 4,399 7,27 1,3,3-trimetil-sineol
4 152 7,132 8,27 Kamfor
1-etenil-1-metil-2,4-bis(1-metiletenil)
7 189 14,609 4,35
sikloheksana
13 216 17,473 7,72 Kurzeren
16 218 22,238 21,85 Germakron
19 232 24,500 24, 29 Velleral

Spektrum massa dari senyawa kamfen (4,77%) dapat dilihat pada Gambar 3.

a.

b.

Gambar 3 (a) Spektrum massa puncak 1; (b) Spektrum massa database standar senyawa kamfen

Berdasarkan data dari library WILEY 7 berat pendekatan WILEY 7, maka diduga senyawa puncak 1
molekul senyawa kamfen adalah 136. Oleh karena itu adalah kamfen (2,2-dimetil-3-metilenbisiklo-heptana).
ion molekul (M+) senyawa pada puncak 1 adalah m/z
136 dengan puncak dasar pada m/z 93. Dengan melihat Spektrum massa senyawa kamfen menunjukkan
berat molekul dan pola fragmentasi berdasarkan hilangnya fragmen-fragmen seperti terlihat pada Tabel
3.
Tabel 3. Kemungkinan fragmen yang hilang dari senyawa kamfen

No m/z Kemungkinan fragmen yang hilang

1 136 M+

2 121 M+ - 15 - .CH3

3 107 M+ - 29 - .CH2 CH3

4 93 M+ - 43 - .C3H7

5 79 (M+ - 15)-28-14 - CH2

6 67 (M+ - 43)-26 - C2H2

7 53 (M+ - 15)-28-14-26 - C2H2

100 The Excellence Research UNIVERSITAS UDAYANA 2011

Senyawa kamfen memiliki struktur sebagai berikut: monoterpen hidrokarbon yang banyak terkandung
CH 3 dalam minyak atsiri. Senyawa terpena lainnya yang
muncul adalah kamfen (4,77%), 1,3,3-trimetil-sineol
CH 3 (7,27%), kamfor (8,27%), dan germakron (21,85%).
CH 2 Dengan adanya senyawa terpena dan kesinergisan
Fragmentasi yang terjadi pada senyawa kamfen komponen-komponen senyawa lain dalam minyak
sesuai dengan spektrum massa di atas dapat atsiri sehingga dapat mengoptimalkan toksisitas
diperkirakan sebagai berikut. minyak atsiri.
CH 3 CH 3

CH 3 -e
CH 3
-CH3
-15
CH 2 KESIMPULAN DAN SARAN
Η
CH 2 CH 2 CH 2
m/z 136 m/z 121
Kesimpulan
rH

H
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan
C CH -CH2CH2 CH 2
C
-28 dapat disimpulkan bahwa minyak atsiri rimpang
H

m/z 93 H
CH 2
temu putih (Curcuma zedoaria (Berg.) Rosc.) memiliki
densitas sebesar 0,88 g/mL, kadar minyak sebesar
CH 2 -CH2
H
-C2H2 0,067 % b/b, dan bersifat toksik terhadap larva udang
-26
-14
H Artemia salina Leach dengan nilai LC50 sebesar 19,96
H 2C m/z 79 m/z 53
ppm. Senyawa yang terdapat dalam minyak atsiri
Berdasarkan data dari GC-MS, maka senyawa- yaitu terdiri dari 19 senyawa dengan 8 senyawa mayor
senyawa mayor yang terdeteksi selain kamfen adalah antara lain kamfen (4,77%), beta pinen (4,16%),
beta pinen, 1,3,3-trimetil-sineol, kamfor, 1-etenil-1- 1,3,3-trimetil-sineol (7,27%), kamfor (8,27%),
metil-2,4-bis(1-metiletenil) sikloheksana, kurzeren, 1-etenil-1-metil-2,4-bis(1-metiletenil) sikloheksana
germakron, dan velleral. Struktur senyawa-senyawa (4,35%), kurzeren (7,72%), germakron (21,85%), dan
tersebut dapat dilihat pada Gambar 4. velleral (24,29%).
CH3 CH 3
CH 3
H 3C
CH 2
O
Saran
H 3C O
CH 3 H 3C

CH 2
CH 3
Saran yang dapat dikemukakan adalah perlu
CH3 H 3C
kamfen β-pinen
Me
Sineol Kamfor dilakukannya penelitian antitumor minyak atsiri
CH CH2 O

CH3
CH2=C-Me O
CMe HC CH3
CH3
rimpang temu putih (Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe)
Me
C CH3
terhadap sel tumor.
HC
H2C C
Me O
CH2=C-Me O
CH3 CH2 Me
CH3

1-etenil- Kurzerena Germakron Velleral

1-metil- UCAPAN TERIMA KASIH
2,4-bis(1-
metiletenil) Pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan
sikloheksana terima kasih kepada DP2M Ditjen Dikti sebagai
Gambar 4. struktur senyawa-senyawa mayor yang penyedia dana dan Lembaga Penelitian Universitas
terdapat dalam minyak atsiri rimpang Udayana yang telah memfasilitasi dalam penyaluran
temu putih Curcuma zedoaria (Berg) Rosc.)
dana sehingga penelitian ini dapat berlangsung. Serta
Senyawa velleral muncul dengan persentase Semua pihak yang telah membantu penulis dalam
kelimpahan terbesar yaitu 24,29%, dimana senyawa menyelesaikan penelitian ini.
ini termasuk dalam golongan azulen. Menurut Rita
et al., 2008, velleral dalam minyak atsiri menyebabkan DAFTAR PUSTAKA
minyak atsiri aktif sebagai antijamur terhadap jamur Bugno, A., Nicoletti, M.A., Almodovar, A.A.B, Pereira,
Candida albicans dan antioksidan. Senyawa β-pinen T.C., and Auricchio, M.T. 2007. Antimicrobial
juga muncul dengan persentase kelimpahan 4,16%
efficacy of Curcuma zedoaria extract as assessed
dimana senyawa ini termasuk dalam golongan
by linear regression compared with commercial

The Excellence Research UNIVERSITAS UDAYANA 2011 101

 mouthrinses, Braz. J. Microbiol. Vol.38 no.3.\ Rita, W.S., 2009, Penapisan Fitokimia dan Uji
Toksisitas Ekstrak Rimpang Temu Putih
Colegate, S.M., and Molyneux, R.J., 1993, Bioactive (Curcuma zedoaria Rosc.), Medicina, Jurnal Ilmiah
Natural Product, CRC Press, London. Kedokteran, 40(2): 104-108.

Ficker, C.E., Smith, M.L., Susiarti, S., Leaman, D.J.,
Irawati, C., and Arnason, J.T. 2003. Inhibition
of human pathogenic fungi by members of
Zingiberaceae used by the Kenyah (Indonesian
Borneo), Journal of Ethnopharmacology, Vol. 85, Issue
2-3, p. 289-293.
Kim, D-I, Lee, T-K; Jang T-H, and Kim, C-H. 200.,
The inhibitory effect of a Korean herbal medicine,
Zedoariae rhizoma, on growth of cultured human
hepatic myofibroblast cells, Life Sciences, Vol. 77,
Issue 8, pp. 890-906.
Mau, J.L, Lai, E.Y.C., Wang, N-P, Chen, C-C; Chang,
C-H, and Chyau, C-C. 2003. Composition and
antioxidant activity of the essential oil from
Curcuma zedoaria, Food Chemistry, Volume 82,
Issue 4, Pages 583-591.
Meyer, B.N, Ferrigni, N.R, and McLaughlin. 1982.
Brine Shrimp: A Convenient General Bioassay for
Active plant Constituents, Journal of Planta Medical
Research, Volume 45, pp. 31-34.
Seo, W-G, Hwang J-C, Kang, S-K; Jin, U-H, Suh, S-J,
Moon, S-K, and Kim, C-H. 2005. Suppressive
effect of Zedoariae rhizoma on pulmonary
metastasis of B16 melanoma cells, Journal of
Ethnopharmacology, Vol. 101, Issue 1-3, p.249-257.
Sukmana, J. (2006), Efek Curcuma zedoaria terhadap
Peningkatan Apotosis Sel Mukosa Kolon Mencit
Jantan yang Terpapar 9,10-dimethyl-1, 2- benz(a)
anthracene, Master Theses dari JIPTUNAIR,
Copyright © 2006 by Airlangga University Library,
Surabaya, http://adln.lib.unair.ac.id/go.php?id=jiptunair-
gdl-s2-2007-sukmanajud-6312&PHPSESSID=5a6769
dff38e0f3f4b3b91df43575469, akses 11/02/2008.
Wilson, B., Abraham, G., Manju, V.S., Mathew,
M., Vimala, B., Sundaresan, S., and Nambisan,
B. 2005. Antimicrobial Activity of Curcuma
zedoaria and Curcuma malabarica tubers, Journal of
Ethnopharmacology, Vol. 99, Issue 1, 147-151.

Pdpersi, 2006, Temu Putih (Curcuma zedoria [Berg.]

Rosc.), http//www.pdpersi.co.id./temu putih.
Akses 12/02/2008.

Purkayastha, J., Nath, S. C. and Klinkby, N. 2006,

Essential Oil of the Rhizome of Curcuma zedoaria
(Christm.) Rosc. Native to Northeast India,
Journal of Essential Oil Research: JEOR, Mar/Apr
2006.

Rita, W. S., Puspawati, N. M, Marlin Wijayanti, N.

P, 2008, Aktivitas Antijamur dan Antioksidan
Minyak Atsiri Rimpang Temu Putih (Curcuma
zedoaria Rosc.), Proceeding SNHKI, ISBN 978-979-
8286-83-4.

102 The Excellence Research UNIVERSITAS UDAYANA 2011