Epidemiologi infeksi Brucella di

manusia, ternak dan antarmuka satwa liar di

ekosistem Katavi-Rukwa, Tanzania

Latar Belakang : Brucellosis adalah zoonosis penting kesehatan masyarakat di

seluruh dunia. Di Tanzania, penyakit ini tidak dilaporkan karena kesadaran tidak
cukup, protokol diagnostik yang tidak memadai, termasuk kurangnya tepat reagen
untuk diagnosis. Ternak dan satwa liar dianggap sumber infeksi potensial untuk
manusia; Namun,peran yang dimainkan oleh operator tersebut dalam epidemiologi
penyakit dalam ekosistem di Tanzania tidak sepenuhnya dipahami. Tujuan dari
penelitian ini adalah untuk menetapkan prevalensi anti-Brucella Antibodi pada
manusia, satwa liar dan ternak; dan prevalensi molekul Brucella spp pada sapi dan
kambing di ekosistem Katavi- Rukwa.

Hasil: Anti-Brucella Antibodi terdeteksi pada manusia di 0,6% (95% CI: 0,1, 2,1%);
sapi 6,8% (95% CI:5,4, 8,5%), kambing di 1,6% (95% CI: 0,4, 4,1%) dan kerbau 7,9%
(95% CI: 1,7, 21,4%). Salah satu dari dua singa sampel dinyatakan positif. Sapi
memiliki prevalensi lebih tinggi secara signifikan anti-Brucella Antibodi dibandingkan
untuk kambing (P <0,05). Sebuah prevalensi lebih tinggi secara signifikan ditemukan
pada perempuan dibandingkan pada sapi jantan dan dewasa dari pada sapi muda (P
<0,05). Ada kesepakatan dari 95 dan 89% pada sapi dan kambing, masing-masing,
untuk Rose Bengal piring Test (RBPT) dan enzim Kompetitif Linked Immunosorbent
Assay (c-ELISA) dalam mendeteksi Brucellainfection. Delapan (3,5%) dari 231
sampel susu yang diuji adalah forBrucellaspp positif pada Polymerase Chain Reaction
(PCR), andBrucella abortusbiovar 1 terdeteksi dalam susu sapi. Namun,no Brucella
spp terdeteksi dalam susu kambing.

Kesimpulan: Penelitian ini telah menunjukkan adanya anti-Brucella Antibodi pada

manusia, ternak, dan satwa liar di ekosistem Katavi- Rukwa. Penularan infeksi antara
satwa liar, ternak dan manusia cenderung terus karena meningkatnya aktivitas manusia
di antarmuka satwa liar manusia. Informasi ini adalah penting kontribusi untuk
pengembangan kebijakan kesehatan masyarakat di antarmuka satwa liar manusia dari
ekosistem Katavi- Rukwa.

Latar belakang
Brucellosis adalah penyakit zoonosis bakteri menular
dari importanceworldwide kesehatan masyarakat. Penyakit ini mempengaruhi hewan
domestik, satwa liar dan manusia dan
disebabkan oleh organisme Brucella [1]. Penyakit ini mempengaruhi
sistem reproduksi hewan, yang mengarah ke kerugian produktivitas yang cukup besar,
seperti produksi berkurang susu, aborsi, keturunan lemah, penurunan berat badan,
menyisihkan
dan kecaman dari hewan yang terinfeksi karena infertilitas, ketimpangan dan hambatan
untuk perdagangan dan ekspor [2].
Pada manusia, gejala tidak spesifik dan mudah
bingung dengan demam menyebabkan penyakit lain seperti malaria,
demam tifoid, demam rematik, dan arthrosis [3]. Selain itu, ada berkurang kapasitas
kerja karena sakit dari
orang yang terkena dampak, dan pemerintah menimbulkan biaya penelitian dan
program pemberantasan dan hilangnya keuangan
investasi [2]. Sumber infeksi bagi manusia terinfeksi hewan domestik, satwa liar dan
produk mereka
[4]. Penyakit ini merupakan risiko pekerjaan bagi petani, ahli bedah hewan, dan
pekerja dalam industri daging [4].
Sumber infeksi untuk hewan termasuk bahan dibatalkan, keputihan, susu dan air mani
dari terinfeksi
hewan [4]. Transmisi satwa liar terjadi melalui tumpahan
lebih dari hewan domestik dan spesies liar [5].
Kontak antara satwa liar, ternak dan manusia yang umum
antara masyarakat petani pastoral dan agro-pastoral di
Tanzania. Interaksi ini nikmat penyakit tanpa hambatan
transmisi antara satwa liar, ternak dan manusia [6].
Brucellosis adalah salah satu zoonosis yang paling luas di
dunia dan endemik di sebagian besar negara-negara Afrika [11/07].
Faktor-faktor pendorong epidemiologi penyakit di
satwa liar, ternak dan manusia di Sub Sahara Afrika (SSA)
tidak dikenal dan data yang tersedia tidak memadai [8].
Di Tanzania, wabah pertama dari brucellosis dilaporkan
di Arusha pada tahun 1927 [12]. survei sebelumnya di Tanzania memiliki
menunjukkan terjadinya penyakit pada sapi di
berbagai sistem produksi, daerah dan zona dengan tingkat individu hewan prevalensi
bervariasi dari 1 sampai 30%
[6, 12-24]. Belum ada isolasi Brucellafor
lebih dari 50 tahun yang lalu dan pada waktu itu. abortus.
melitensis diisolasi dari sapi dan ruminansia kecil
masing-masing. Pada manusia, terjadinya penyakit telah dilaporkan di berbagai
bidang termasuk: Manyara, Lake Victoria
zona, zona Barat, Arusha, Tanga Municipality, Northern
Tanzania dan Morogoro wilayah dengan prevalensi bervariasi 0,7-20,5% [25-30].
Sebuah serosurvey dilakukan di
ekosistem Serengeti menunjukkan bahwa 24 dan 17% dari kerbau dan wildebeest
masing-masing populasi yang terkena
untuk Brucellaspp [6]. Namun, tidak ada laporan sebelumnya
pada brucellosis pada manusia, ternak atau satwa liar di
Katavi-Rukwa ekosistem di mana ada perbandingan
interaksi manusia, ternak, dan binatang liar. Tujuan dari penelitian ini karena adalah
untuk menetapkan prevalensi anti-Brucella Antibodi pada manusia, ternak, dan
satwa liar (kerbau, zebra dan singa). Selain itu, molekul
prevalensi ekosistem Brucella sppincattleandgoatsintheKataviRukwa telah dibuktikan.
hasil
hasil serologi
Lima dari 340 (1,5%) tampaknya manusia diuji positif untuk Rose Bengal Plat
Test (RBPT) dan 2 (0,6%) ditemukan menjadi positif setelah screening oleh
Buffered diasamkan Plat Antigen Test (BAPA). Sampel RBPT positif
selanjutnya dikonfirmasikan oleh Rivanol hujan Uji (Riv.T) di mana 2 sampel
(0,6%) yang positif pada titer sebuah 1: 200. Delapan puluh delapan (6,5%) dari
1.351 sapi dan kambing sera diuji positif dengan RBPT. The RBPT sera positif
diuji ulang dengan c-ELISA dan 79 (5,8%) ditemukan positif. Berdasarkan
hasil c-ELISA, seroprevalensi keseluruhan pada sapi dan kambing adalah 5,8%
(95% CI: 4.6,7,2%). Seroprevalensi spesies hewan individu adalah 6,8% (95%
CI: 5,4, 8,5%) untuk ternak, dan 1,6% (95% CI:0,4, 4,1%) untuk kambing
(Tabel 1). Sebuah signifikan lebih tinggi seroprevalensi 5,2% diamati pada sapi
daripada di kambing (95% CI: 2,4-7,2, χ2= 9,0, P = 0,003) .C

ia seroprevalence berbeda secara signifikan antara

sapi betina dan jantan (perbedaan 6,5%, 95% CI: 3,6-9,0,χ2= 13,6) (P = 0,0002)
(Gambar. 1). Namun, tidak adaperbedaan yang signifikan dalam prevalensi
antara perempuan dan kambing jantan (perbedaan 0,7%, 95% CI: -2.8-10.1, χ
2=0,1) (P = 0,75). Ada perbedaan yang signifikan dalam prevalensi antara sapi
muda dan dewasa(Perbedaan 9,1%, 95% CI: 6,7-11,4, χ2
= 28,3) (P <0,0001)(Gambar 2.); tapi tidak di kambing (perbedaan 1,8%, 95%
CI: -15.1-4.4, χ2= 0,1) (P = 0,741).Dalam kerbau, 4 dari 38 sera (10,5%) yang
positif olehRBPT, sementara dengan BAPA 3 sera (7,9%) yang positif. Atas
pengujian ulang sampel RBPT positif dengan Riv.T 3 (7,9%)ditemukan positif
(95% CI: 1,7, 21,4%) pada titer 1: 200(Tabel 2). Seroprevalensi dari Brucella
Infeksi adalahditemukan 14,3% (n = 14) pada wanita, dan 4,2% (n = 24) di
kerbau jantan dewasa. Dalam singa, hasilnya sama antara RBPT, BAPA dan
Riv.T (salah satu dari dua singa diuji ditemukan positif pada titer 1: 200).
antibodi rubellaterdeteksi di zebra (n = 2). Sebuah analisis perbandingan antara
RBPT dan cELISA adalah seperti yang disajikan pada Tabel 3 dan 4.Dalam
menyusui sapi dan kambing di mana susu sampel untuk deteksi BrucellaDNA,
6,1% (n = 231) serawere positif untuk c-ELISA. Seroprevalensi spesifik susu
sapi adalah 6,4% (n = 218). Semua susu kambing diuji (n = 13) negatif.
Hasil multipleks PCR
Delapan dari 231 sampel susu dari sapi dan kambing diuji
positif dengan Multiplex PCR. Dengan demikian, tingkat deteksi keseluruhan
pada sapi dan kambing adalah 3,5%. Tingkat deteksi yang ada di
sapi adalah 3,7% (n = 218); sementara noBrucella species yang
terdeteksi dari goat'smilk (n = 13). The Brucellaspecies terdeteksi dari sapi
adalah Brucella abortus biovar 1. Semua PCR Hasil positif ditunjukkan oleh
migrasi produk PCR untuk abortusfragments forBrucella sekitar 495-bp,
dengan IS 711-spesifik, B. abortus-specificandB. primer melitensis-khusus
yang menunjukkan bahwa itu adalah Brucella abortus biovar 1 (File tambahan
1). distribusi geografis Brucella manusia seropositif dan hewan, dan Brucella
abortus multiplex PCR sapi positif seperti yang disajikan pada Gambar 3.
Discussion
Seroprevalensi keseluruhan Brucella spp pada sapi dan
kambing adalah 5,8% berdasarkan OIE direkomendasikan konfirmasi uji c-ELISA. Hasil
seroprevalence setuju dengan hasil studi sebelumnya yang dilakukan di berbagai
bagian negara yang menunjukkan prevalensi yang berkisar 1 sampai 30% [14, 19, 22-
27]. Infeksi menyarankan paparan bakteri karena vaksinasi terhadap brucellosis
belum dilakukan di wilayah Katavi. prevalensi lebih tinggi dari penyakit itu ditunjukkan
dalam ternak dari pada kambing dengan variasi yang signifikan (P <0,05).
Hasil yang sama ditemukan dalam sebuah penelitian yang dilakukan di ekosistem
Mikumi-Selous di Timur Tanzania, di mana ternak yang withBrucellaspp
paling terinfeksi antara ruminansia domestik yang berbeda [24]. Hasilnya juga
mirip dengan temuan pada sapi, unta, dan kambing terus di bawah manajemen
pastoral di Ethiopia [31]. Serupa Temuan spesies ruminansia berbagi ekosistem
yang sama di Chad telah dilaporkan [7]. Di Nigeria seroprevalensi penyakit
lebih tinggi pada sapi daripada di kambing [32]. Temuan serupa terungkap
dalam sebuah penelitian yang dilakukan di Sudan [33]. Alasan untuk ini bisa
disebabkan untuk kerentanan terhadap B. abortus, yang merupakan satu-
satunya Brucella sppidentified dalam penelitian ini. Brucella abortusinfection
yang lebih menonjol pada sapi daripada di ruminansia kecil di daerah
penelitian. Selanjutnya, B. melitensishas pernah jarang dilaporkan di negara-
negara Afrika Timur. Selain itu, studi brucellosis dilakukan di tempat lain di
negara-negara berpenghasilan rendah Afrika dan Asia menunjukkan bahwa
sebagian besar sapi brucellosisdisebabkan oleh Brucella abortus althoughB.
Melitensis menjadi semakin umum [34].

Studi ini menunjukkan lebih lanjut bahwa Brucella prevalensi di

sapi betina secara signifikan lebih tinggi daripada di ternak jantan (P
<0,05). Temuan ini sesuai dengan temuan
Studi sebelumnya yang dilakukan di Ethiopia, Nigeria dan
Pakistan [8, 35, 36]. Penjelasannya adalah bahwa perempuan disimpan
untuk jangka waktu yang relatif lebih lama dalam kawanan pemuliaan
dari halnya dengan laki-laki dan meningkatkan kesempatan mereka
paparan infeksi [8]. Selanjutnya, infeksi mendapat
diaktifkan pada wanita selama kehamilan [37]. Namun,
penelitian lain tidak menemukan perbedaan dalam brucellosis seroprevalensi antara
sapi betina [35] laki dan perempuan.
Dalam penelitian ini, Brucella Seroprevalensi secara signifikan
lebih tinggi pada sapi dewasa daripada di orang-orang muda (P <0,05). SEBUAH
Pengamatan serupa telah dilaporkan sebelumnya [38].
Hal ini bisa disebabkan oleh fakta bahwa hormon seks dan
erythritol yang merangsang multiplikasi Brucellaorganisms, cenderung meningkat
konsentrasi dengan usia dan
kematangan seksual [8, 39].
Dalam penelitian ini, seroprevalensi dari Brucellainfection
pada kambing adalah 1,6% yang secara signifikan lebih tinggi dari itu
dilaporkan oleh sebuah penelitian yang dilakukan di Mikumi- Selous Ekosistem 0,5%
[24]. Studi lain yang dilakukan di
Manyara dan Arusha wilayah utara Tanzania
menunjukkan seroprevalensi secara signifikan lebih tinggi dari 6,0%
[27]. Perbedaannya mungkin karena variasi risiko
faktor dari satu lokasi geografis ke yang lain, faktor iklim dan sampling teknik [27.

Penelitian ini menunjukkan seroprevalensi 0,6% dari

antibodi Brucella pada manusia di Katavi-Rukwa
ekosistem. Ini lebih rendah dari yang dilaporkan sebelumnya
[25, 26]. Alasan untuk perbedaan diamati dalam
Studi mungkin disebabkan berbeda dalam kebiasaan yang
suku konsumsi susu mentah dan produk susu sebagai
serta kontak dengan hewan yang terinfeksi seperti yang dijelaskan
sebelumnya [40]. Selain itu, prevalensi di Katavi
wilayah lebih rendah daripada yang ditemukan di Morogoro Timur
Tanzania [30]. Perlu dicatat bahwa studi Morogoro adalah dilakukan dalam
pengaturan rumah sakit menargetkan orang-orang dengan
penyakit demam.
Studi menunjukkan lebih lanjut bahwa antibodi Brucella adalah
hadir di kerbau di Katavi National Park dengan seroprevalensi 7,9%, lebih
rendah dari yang tercatat
di Serengeti National Park dari 24% [6]. Perbedaan
mungkin karena tingkat yang lebih tinggi dari migrasi ke
ekosistem Serengeti dibandingkan dengan Katavi National
Taman. Dalam ekosistem Serengeti, padang rumput dan air
langka pada musim kemarau dan liar herbivora bermigrasi
luas ke berbagai daerah seperti Maasai Mara di
mencari padang rumput dan air. migrasi ini meningkat
kontak dengan ternak, dan kemungkinan binatang liar
mengambil infeksi. Perbedaannya juga dapat dijelaskan oleh fakta bahwa
ekosistem Serengeti memiliki
kepadatan lebih tinggi dari herbivora liar dibandingkan dengan Katavi
ekosistem dihasilkan menjadi infeksi meningkat karena tinggi
frekuensi kontak hewan [41]. Seroprevalensi dari
Infeksi Brucella di kerbau menunjukkan seks sebanding
pola infeksi ternak dengan perempuan menunjukkan
seropositif yang lebih tinggi dibandingkan dengan laki-laki. Namun,
sejumlah kecil kasus positif signifikansi terbatas pengujian di kerbau. Temuan
ini serupa dengan yang dilaporkan oleh peneliti lain [42]. antibodi Brucella
juga terdeteksi di salah satu dari dua singa diuji.
Ketika hasil c-ELISA dibandingkan dengan mereka yang
Rose Bengal Plat Test (RBPT), 79 sampel menunjukkan
positif di kedua tes. Meskipun 88 sampel ditemukan positif dengan RBPT,
hanya 79 sampel ditemukan positif dengan c-ELISA. analisis statistik hasil
menunjukkan kesepakatan yang sangat baik antara RBPT dan hasil tes c-ELISA
karena tes yang disepakati 95% dari waktu pada sapi (Tabel 3) dan 89% pada
kambing (Tabel 4). C-ELISA tes konfirmasi "mengurangi" jumlah
hewan positif dari 88 ke 79. Hal ini mungkin karena
cELISA penghapusan beberapa reaksi karena menyeberang bakteri bereaksi.
[2]. RBPT adalah rentan terhadap reaksi silang
dengan bakteri gram negatif lain seperti asYersinia enterocoliticaO: 9, E.coliO:
157; dan someSalmonellaspp itu,
yang dapat menyebabkan hasil positif palsu seperti yang dijelaskan sebelumnya
[1, 43]. Meskipun demikian, kedua metode ini cocok untuk mendeteksi antibodi
Brucella pada sapi dan
kambing di ekosistem Katavi-Rukwa. Selanjutnya, hasil seropositif
kemungkinan besar disebabkan oleh fieldBrucella
spp karena tes konfirmasi c-ELISA memiliki kekhususan tinggi, yang
meminimalkan positif palsu disebabkan oleh crossreacting antibodi bakteri
gram negatif lain atau karena
untuk vaksinasi.
RBPT telah divalidasi pada sapi dan ruminansia kecil dan mengungkapkan
sensitivitas tinggi, maka preferensi sebagai
tes skrining pada hewan dan brucellosis manusia [42, 44].
C-ELISA telah divalidasi pada sapi dengan relatif
spesifisitas tinggi; namun kurang sensitif dibandingkan RBPT. Itu
Tes adalah tes konfirmasi yang sangat baik untuk diagnosis brucellosis di
sebagian besar spesies mamalia [45, 46]. Kedua tes
direkomendasikan oleh OIE ternak berharga tes diagnostik [47]. The BAPA
mengungkapkan sensitivitas tertinggi dan digunakan untuk skrining sedangkan
Riv.T menunjukkan spesifisitas tertinggi dan digunakan sebagai uji konfirmasi
di kerbau. Utama batasan dari studi ini adalah bahwa tidak ada tes ini telah
divalidasi satwa liar. Mengingat ukuran sampel kecil dari dua singa dan zebra
itu tidak jelas apakah hewan-hewan ini memiliki infeksi atau tidak.
Dalam penelitian ini Brucella abortus biovar 1 terdeteksi dalam susu sapi.
biovar ini telah terdeteksi di sapi Afrika timur dan menimbulkan risiko
menyebabkan manusia Infeksi terutama di daerah pedesaan di mana susu dan
susu produk yang tidak dipasteurisasi [48]. Kolonisasi oleh Brucellaspp dari
kelenjar susu dan yang terkait lymphnodes dan akibatnya ekskresi bakteri di
susu telah dijelaskan sebelumnya [49]. akurat dan Evaluasi cepat dari status
penyakit dalam susu dan produk susu sangat penting untuk kesehatan
masyarakat. Utama keterbatasan tes ini adalah B. abortus biovars 3, 5, 6 dan 9
tidak terdeteksi oleh tes. Penelitian ini membandingkan serologi dan PCR
temuan B. abortusin darah dan susu sampel yang dikumpulkan dari
sapi perah dan kambing. Semua kambing yang diuji (n = 13) yang forB negatif.
abortuson serologi dan PCR. Hasil menunjukkan bahwa 6,4% dari ternak
sampel (n = 218) yang Ara. 3Map wilayah Katavi menunjukkan distribusi
geografis antibodi Brucella pada hewan dan manusia andBrucella abortusbiovar
1 di susu sapiAssengaet al. BMC Penelitian Veteriner (2015) 11: 189 Halaman
5 dari 11 serologis positif dan 3,7% adalah PCR positif. Semua
sampel yang diuji positif pada PCR juga diuji positif pada serologi. Proporsi
sapi seropositif ditemukan menjadi PCR penurunan positif dengan rendahnya
tingkat infeksi aktif. Hal ini menunjukkan bahwa ternak terkena B. abortus
awal kehidupan mungkin mulai pulih dari infeksi aktif setelah kehamilan
pertama mereka setelah serokonversi.Temuan serupa diamati di bison [37].
Asosiasi respon serologis dengan infeksi aktif dalam sapi yang lebih tua
mungkin menunjukkan paparan terbaru dari infeksi atau kambuhnya infeksi
kronis [37]. Penelitian ini terdeteksi antibodi Brucellaspp pada manusia,
sapi, kambing, kerbau dan singa berbagi ekosistem yang sama. Selain itu, studi
detectedBrucella abortusbiovar 1 DNA dari susu sapi. Transmisi infeksi di
antara spesies ini dalam ekosistem mungkin karena untuk mengarahkan atau
kontak tidak langsung dari spesies yang terinfeksi dan rentan melalui aerosol
dan kontaminasi pakan. Dalam Katavi-Rukwa ekosistem, satwa liar dan berbagi
penggembalaan ternak alasan serta poin penyiraman. Hewan ini mau tidak mau
mencemari lingkungan mereka selama calving dengan discharge yang mungkin
menjadi sumber infeksi ke lainnya hewan sementara manusia sering terinfeksi
melalui kontak kerja dengan hewan yang terinfeksi dan mereka dibatalkan
bahan dan keputihan. Dalam ekosistem Katavi-Rukwa, konsumsi daging bush
adalah umum dan kerbau adalah salah satu spesies utama diburu [50]. Terlepas
dari sapi, kerbau mungkin, oleh karena itu, terlibat dalam transmisi
Brucellaspp untuk manusia di daerah di mana daging kerbau adalah
dikonsumsi.

Kesimpulan
Kesimpulannya, anti-Brucella Antibodi hadir di manusia, sapi, kambing, dan kerbau di
Katavi-Rukwa ekosistem. Hal ini menunjukkan bahwa infeksi mungkin beredar dalam
spesies ini dan dipelihara dalam ekosistem. Selanjutnya, penelitian ini terdeteksi
Brucella abortus biovar 1 dalam susu sapi menunjukkan bahwa spesies ini dirilis
melalui susu dan menimbulkan risiko kesehatan masyarakat dengan konsumen susu.
prevalensi rendah kambing mungkin karena fakta bahwa. melitensis agen etiologi di
kambing relatif jarang terjadi di wilayah sub-Sahara.

metode
Deskripsi daerah penelitian
Penelitian ini dilakukan di wilayah Katavi, selatan-barat Tanzania. wilayah itu purposif
dipilih untukStudi karena kabupaten yang berbatasan dengan taman nasional dan
daerah perlindungan permainan; dan memiliki sejumlah besar hewan dan populasi
manusia. Masyarakat yang mendiami wilayah studi praktek agro-pastoral sistem
pertanian dengan berbagai ternak, yang pada waktu campuran dengan binatang liar
di Katavi National Park. wilayah ini terletak sekitar 60 30'S dan 310 30'E. penelitian ini

adalah dilakukan antara September 2012 hingga

Juli 2013 meliputi tiga kabupaten di wilayah Katavi, yang Mpanda,
Mlele dan Nsimbo. Wilayah ini memiliki hangat dan dingin kering
musim dengan variasi curah hujan dari tahun
ke tahun. Daerah ini memiliki musim hujan yang panjang yang memperpanjang
dari November hingga April dan musim kemarau yang membentang
dari Mei hingga Oktober. Keturunan ternak yang dipelihara adalah
terutama adat pendek tanduk zebu, Ankole, boran
dengan beberapa keturunan silang (adat dan eksotis). Adat domba dan kambing
keturunan juga disimpan. penduduk
terutama membudidayakan tanaman pangan (jagung, padi, ubi jalar
dan kacang-kacangan) dan tanaman (tembakau, kacang tanah, Simsim
dan bunga matahari). Meskipun bahwa agro-penggembala memiliki
pemukiman permanen, di mana mereka berlatih gratis Jenis kisaran
merumput selama musim hujan. Hewan merumput di
sisa tanaman setelah panen dan sesudahnya, hewan
ditransfer ke tanah penggembalaan yang jauh yang dikenal sebagai "kamp
merumput" selama musim kemarau. Mentransfer hewan biasanya dimulai pada
awal Agustus dan hewan
dibawa kembali pada awal November di awal
musim hujan. Katavi National Park terdiri musiman
membanjiri dataran padang rumput, hutan miombo, danau kecil
dan lahan basah rawa [50]. binatang liar yang
umumnya ditemukan di taman ini termasuk kerbau Afrika
(Syncerus caffer), gajah (Loxondata africana), Zebra
(Equus burchelli), impalas (Aepyceros Melampus), jerapah (Giraffa
camelopardalis), eland (Tourotragus kijang),
babon (Papio spp), kuda nil (Hippopotamus amphibious) dan predator seperti
singa (Panthera leo), dan
karnivora kecil lainnya [51]. Studi desain dan ukuran estimasi sampel
Sebuah studi cross-sectional dilakukan untuk menentukan
epidemiologi infeksi Brucella pada manusia dan hewan di tiga kabupaten yang
membentuk wilayah Katavi. Itu
Ukuran sampel untuk manusia dan hewan untuk serologis
studi, sampel susu dari sapi dan kambing untuk studi molekuler, dihitung
dengan rumus dari multistage
random sampling dijelaskan oleh [52]. Sampel manusia
Ukuran itu berdasarkan studi prevalensi brucellosis sebelumnya
pada manusia dari 8,3% di masyarakat pastoral pastoral dan agro di Tanzania
[27]. Untuk ternak, ukuran sampel didasarkan
pada brucellosis prevalensi kawanan 1-30% di Tanzania
[17, 25, 26] dan diasumsikan bahwa 30% dari sapi
dalam kawanan yang terinfeksi akan memiliki brucellosis. Untuk kambing,
ukuran sampel didasarkan pada brucellosis individu
prevalensi hewan 0,5-6,0% di Tanzania [24, 27] dan
diasumsikan bahwa 6% dari kambing dalam terinfeksi
kawanan akan memiliki brucellosis. Untuk sampel susu dari sapi
dan kambing untuk studi molekuler, ukuran sampel didasarkan
pada brucellosis prevalensi kawanan 5,3 dan 5,3% di susu
sapi dan kambing, masing-masing [53]. Berdasarkan asumsi ini ukuran sampel
diperkirakan untuk diharapkanPrevalensi (Pexp) dari 8,3% (manusia), 30%

(sapi), 6%

(Kambing), 5,3% (sampel susu) dengan kekuatan 80% dan 95%

confidence interval sebesar 5% presisi yang diinginkan diterapkan
menggunakan formulan = Z2 Pexp (1 -Pexp) / L2[52], di mana Z adalah
tingkat kepercayaan, L diinginkan presisi dan Pexpis diharapkan prevalensi.
Selain itu, tingkat kepercayaan 1,96 adalah bekas. Dalam penelitian ini
pengaruh desain dari 2.18 dan rho 0,09 yang digunakan seperti yang dijelaskan
sebelumnya oleh [54]. Oleh karena itu desain efek (D) dari survei dihitung
menggunakan formulaD yang = 1 + (b-1) roh [55], di mana bis rata-rata jumlah
sampel per cluster dan roh istherateofhomogeneity, setara dengan koefisien
korelasi intra-cluster (ρ) di single-stage cluster sampling. ukuran sampel yang
diperlukan untuk manusia adalah N * D yang merupakan 117 * 2.18 = 256
diperkirakan. subyek Namun, lebih manusiawi (340) diambil contohnya
Berbasis pada kepentingan masyarakat yaitu kita punya lebih relawan untuk
pengambilan sampel darah. Dari sampel perhitungan ukuran 702 sapi (323 *
2,18 (Desain efek)); dan 190 kambing (87 *2.18) yang akan dijadikan sampel
untuk studi serologi namun karena kerjasama dengan petugas agro-pastoralist
dan lapangan kami mampu sampel 1.103 sapi dan 248 kambing yang totalnya
mencapai 1351 ternak dari 36 desa. Ukuran sampel diperkirakan untuk sampel
susu yang 171 sapi dan 171 kambing, masing-masing. Namun, ukuran sampel
total untuk susu dikumpulkan dari sapi dan kambing 218 dan 13, masing-

masing.

prosedur pengambilan sampel

Sebuah sampel acak dari 36 desa dilakukan, dengan menggunakan tabel
nomor acak, dari kerangka sampling terdiri
dari daftar semua desa di wilayah studi, yang dibuat
tersedia oleh petugas peternakan kabupaten. Proporsi sampel diadopsi untuk
mendapatkan jumlah desa dari
masing-masing dari tiga kabupaten studi. Dalam setiap desa lima
rumah tangga dipilih secara acak sebagai unit sampling primer. Kriteria untuk
dimasukkan rumah tangga di
Kerangka sampling setiap rumah tangga terdiri dari penggembala
yang menjaga ternak dan / atau kambing untuk tujuan apapun. Itu
jumlah hewan yang akan dijadikan sampel dari setiap kelompok adalah
ditentukan seperti yang dijelaskan sebelumnya [52]. Pada tingkat kawanan
hewan yang akan dijadikan sampel dipilih secara acak menggunakan
tabel acak digit. Dalam hal ini delapan (8) hewan
yang sampel per rumah tangga seperti yang disarankan sebelumnya
[52]. Rasio kambing ternak sampel dari rumah tangga menjaga kedua kambing
dan sapi adalah 1: 4, didasarkan pada
rasio rata-rata kambing sapi di daerah penelitian. Dewasa
hewan seringkali sampel berkontribusi 75% sebagai
lawan hewan muda yang meliputi 25%, karena Brucellainfection tergantung
pada usia. Didalam
studi, kita mendefinisikan sapi dewasa sebagai satu berusia dua tahun
dan di atas; dan satu muda yang memiliki kurang dari dua tahun.
kambing dewasa, yang dipilih adalah orang-orang penuaan satu
tahun dan di atas; sementara yang muda memiliki kurang dari satu
tahun. Ternak dan kambing dipilih secara acak untuk
susu pengambilan sampel menggunakan multistage random sampling rumus
seperti dijelaskan di atas. Sampel susu yang diambil dari 231 sapi menyusui dan
kambing. Untuk rumah tangga terpilih subyek manusia juga sampel tanpa
status kesehatan mereka. Sebanyak 42 hewan liar sampel oportunis. Hewan-hewan
liar, termasuk kerbau itu sampel dari seluruh suaka margasatwa. Berikut persetujuan
verbal, sampel darah manusia diambildari vena brakialis menggunakan 5 ML
tabung vacutainer polos.
Sapi dan kambing yang manual terkendali dan memiliki darah
sampel yang diambil dari vena jugularis menggunakan 10 ML polos
tabung vacutainer. Kerbau ditangkap oleh melesat menggunakan
kombinasi 5-8 Mg Etorphine hidroklorida (M99
9,8 Mg / ML) (benar aneh, Afrika Selatan) dan 50-80 Mg azaperone tartrate,
sementara zebra yang bergerak menggunakan kombinasi 6-7MgM99and 80mg
azaperone.Lionswere
amobil menggunakan kombinasi 2,5 Mg / kg Ketamine
hidroklorida dan 0,1 Mg / kg medetomidine hidroklorida
(Kyron, Pty, SA). Obat itu dari jarak jauh disuntikkan menggunakan
melesat gun. Penangkal Diprenorphine hidroklorida
(M5050) (benar aneh, Afrika Selatan) digunakan untuk menghidupkan kembali
kerbau dan zebra setelah pengumpulan darah. Lions dihidupkan kembali
menggunakan antisedan (atipamezole hidroklorida) setelah
hewan telah tinggal di bawah anestesi selama lebih dari 60 menit
untuk memberikan waktu yang cukup bagi tubuh untuk memetabolisme banyak
yang ketamin HCl. Darah dari hewan-hewan ini dikumpulkan
dari vena jugularis menggunakan 10 ML tabung vacutainer polos. Itu
sampel darah dari manusia, hewan domestik dan liar
diizinkan untuk membeku dalam posisi miring dan sampel serum
dipanen setelah 24 jam. serum dipanen dipindahkan ke 1,5 ML cryovials dan
disimpan dalam Nitrogen Cair
(LN) sebelum dipindahkan ke laboratorium di
Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Sokoine
Pertanian di mana mereka werestored dalam freezer dalam ultra
(-80 ° C) sampai diuji.
Sapi dan tidak dari masing-masing rumah tangga terpilih yang
dipilih secara acak dan sampel untuk mendapatkan total 231
hewan. Sampel susu yang dikumpulkan di bawah higienis
Kondisi dari ambing sapi dan kambing dengan tangan stripping hanya sebelum
pemerahan menggunakan sekrup steril caped 50
ML tabung falcon. Setiap sampel terdiri dari sejumlah perwakilan dari susu
yang diambil dari setiap kuartal. Volume sekitar 12 ML susu sampel diambil
dari
setiap kuartal untuk memiliki total 50 ML susu dari sapi
dan 24 ML susu dari kambing. streaps pertama susu
dari setiap kuartal dibuang. Darah dikumpulkan
dari menyusui sapi dan kambing di mana susu sampel untuk deteksi
BrucellaDNA menggunakan 10 ML polos
tabung vacutainer untuk studi serologi. Sampel yang
segera disimpan di LN sebelum ditransfer ke laboratorium di Fakultas
Kedokteran Hewan, Sokoine
Universitas Pertanian untuk disimpan dalam ultra mendalam
freezer (-80 ° C) sampai diuji.

analisis serologis
pengujian brucellosis pada sapi, kambing, manusia, kerbau,
zebra dan singa didasarkan pada panel tes diagnostik serologi. The Rose Bengal Plat
Test (RBPT) dan
Buffered diasamkan Plat Antigen Uji BAPA digunakan
sebagai tes skrining; cELISA dan Riv.T digunakan sebagai tes konfirmasi. RBPT yang
digunakan untuk mendeteksi antibodi Brucella pada ternak, satwa liar dan manusia
dan
telah divalidasi pada sapi dengan sensitivitas 98,1% dan
99,8% spesifisitas, dan akurasi penerimaan untuk diagnosis
di kerbau Afrika (sensitivitas 98,6% dan 99,2% spesifisitas) [42]. The BAPA (sensitivitas
97,4% dan spesifisitas
60%) telah divalidasi di ruminansia domestik [44]
sementara cELISA dapat digunakan untuk sampel uji dari berbagai
spesies secara bersamaan dan memiliki sensitivitas yang tinggi (95.2-
99,4%) dan spesifisitas (98,9-99,7%) [45, 46]. Ujian
telah divalidasi pada sapi [56]. The Rivanol Pengendapan Test (Riv.T) telah divalidasi
pada sapi dan kecil
ruminansia (sensitivitas 85% dan spesifisitas 87,6-100%)
[44, 56].
The RBPT (Central Veterinary Laboratory, New Haw,
Addelestone Surrey KT153NB, UK) digunakan untuk skrining Brucellaantibodies pada
sapi dan kambing seperti yang dijelaskan
sebelumnya [57]. Hasil dikonfirmasi oleh c-ELISA
kit diagnostik sesuai protokol yang dijelaskan oleh Animal
Kesehatan dan Badan Laboratorium Kedokteran Hewan (AHVLA)
New Haw, Addelestone Surrey KT153NB, Inggris Raya; menurut rekomendasi dari
Organisasi Kesehatan Dunia untuk kesehatan hewan [1]. Itu
optical density (OD) diukur pada 450 nm menggunakan
ELISA reader Multiscan RC Versi 6.0 (Thermo labsystem, Helsinki, Finlandia). Positif /
negatif terputus
dihitung sebagai 60% dari OD rata-rata empat sumur kontrol konjugasi. Sebuah
sampel uji memberi OD sama dengan
atau di bawah nilai ini dianggap sebagai positif. pengesahan
uji cELISA dilakukan dengan kontrol positif dan negatif sesuai instruksi produsen.
Semua
sampel yang diuji dalam rangkap dua dan di mana piring
validasi gagal prosedur diulang. sampel
dianggap positif jika itu positif bagi kedua RBPT
dan cELISA.
Pada manusia dan satwa liar, sera adalah ganda disaring oleh
RBPT dan BAPA (National Laboratory Veterinary Service,
Ames, lowa, USA). Hasil dikonfirmasi dengan Rivanol
Curah hujan Uji seperti yang dijelaskan oleh National Veterinary Layanan
Laboratorium, Ames, lowa, Amerika Serikat, menurut
Metode yang dijelaskan sebelumnya [58, 59], di mana reaktif
sampel dari RBPT atau BAPA yang serial diencerkan pada 1:25,
01:50, 1: 100 dan 1: 200 menggunakan Plat Test (SPT) solusi Standard untuk
menetapkan titer dari sera reaktif.
Rose Bengal Plat Test (Central Veterinary Laboratory, UK), digunakan untuk skrining
sera dari menyusui
sapi dan kambing di mana susu sampel deteksi forBrucellaDNA seperti yang dijelaskan
sebelumnya, [57]; dan hasil dikonfirmasi oleh c-ELISA sesuai protokol yang dijelaskan
oleh AHVLA U.K. Ekstraksi DNA dari sampel susu untuk pengujian PCR
Volume 15 ML sampel susu beku dicairkan dan disentrifugasi pada 14.000 G untuk
10mn. Supernatan, termasuk bagian whey, dipisahkan dan dibuang dan sedimen itu
mengalami ekstraksi DNA genom.The buffer lisis enzimatik dipersiapkan penyusunan
dari 20 mM Tris.Cl, pH 8, 2 mM natrium EDTA, 1,2% Triton®X-100; dan segera
sebelum digunakan, tambahkan lisozim untuk 20 Mg / ml. ekstraksi DNA dari Brucella
dilakukan menggunakan genomik pemurnian DNA kit (PureLink ™ Invitrogen,
Carlsbad, CA), sesuai instruksi pabrik.

teknik PCR konvensional

Alat tes PCR yang diperkuat IS711 daerah unsur genetik dari
theBrucellagenome [60] digunakan dengan
sedikit modifikasi. Reaksi PCR dilakukan di 20μlof
Campuran reaksi sesuai instruksi mastermix mengandung 10 ml Amplitag
Emas
®
Cepat PCR Guru campuran (Terapan
kota Biosystems, Foster, USA), 0.5μl dari masing-masing B.
abortus -specific primer, B. primer melitensis khusus
dan IS711- primer spesifik, 1 ml DNA diekstraksi dan
7.5μl air bebas nuklease untuk menyelesaikan campuran
Reaksi 20μl. Campuran reaksi dibubarkan oleh vortexing dan disentrifugasi
singkat. Oligonukleotida primer
digunakan dalam penelitian ini adalah 5'TGC-CGA-TCA-CTT-AAG-G
GC-CTT-CAT-TGC-3 '(primer IS711-spesifik), 5'-GAC-G
AA-CGG-AAT-TTT-TCC-AAT-CCC-3 '(B. Abortus-spesifik primer) and5'-
AAA-TCG-CGT-CCT-TGC-TGG-T
CT-GA-3 '(B. melitensis- primer spesifik) (file tambahan
File tambahan 2). Reaksi PCR dilakukan dalam
Takara PCR Thermal Cycler (Takara Bio Inc. Jepang). Itu
Kondisi untuk amplifikasi Brucella spp adalah denaturasi awal pada suhu 95 °
C untuk 10mn, diikuti oleh
40 siklus yang terdiri dari 95 ° C selama 30-an, 55 ° C untuk 30-an, 72 ° C
selama satu menit dan perpanjangan terakhir adalah pada 72 ° C untuk
10mn. Sebuah lader DNA dengan 50-2000-bp digunakan sebagai pembuat berat
molekul. Produk yang diperkuat dianalisis dengan elektroforesis melalui
agarosegel 1,5% (Sigma
Co, USA) selama 1 jam pada 100 Volts (V) dengan 0,5 × TBE penyangga
(89 mM Tris-HCl, 89 mM asam borat, 2 mM EDTA,
pH 8). Gel diwarnai dengan Gelred (Phenix Penelitian
Produk, Candler, NC28715, Amerika Serikat) dan band
terdeteksi dengan transilluminator UV, dan difoto. Band terlihat ukuran yang
sesuai dari 495 bp forB.
abortusand 730 bp forB. melitensiswere dianggap positif. RB51 digunakan
sebagai kontrol positif bagi Brucella
abortusand Rev.1 forBrucella melitensiswhile induk
mencampur tanpa cetakan DNA digunakan sebagai kontrol negatif. Uji validasi
dilakukan dengan dua vaksin
strain notablyBrucella abortusRB51 andB. melitensis
Rev.1 sebagai kontrol positif DNA diekstraksi dari Asseng Et al. BMC Penelitian
Veteriner (2015) 11: 189 Halaman 8 dari 11 RB51 / Rev.1 dan uji dilakukan seperti
yang dijelaskan atas menggunakan reaksi PCR. Produk PCR dideteksi seperti dijelaskan
di atas. Tes ini diulang setiap kali validasi gagal. Keterbatasan utama ini Penelitian ini
B. abortus biovars 3, 5, 6 dan 9 tidak terdeteksi oleh tes.
Analisis data
Microsoft Office Excel ®
2007 (Microsoft Corporation, One
Microsoft Way, Redmond, 98052-7329, USA) digunakan dalam
menyimpan data dan menggambar grafik. Data dianalisis menggunakan
Epi-Info versi 7 (CDC Atlanta, USA) dan MedCalc
®
versi 13.0.2 (software MedCalc, Acacialaan 22, B-8400,
Ostend, Belgia). Chi square test dilakukan untuk menghitung nilai P untuk
tingkat kejadian Rubella Versus
kelompok usia yang berbeda, jenis kelamin dan spesies. Nilai P <0,05 adalah

dianggap signifikan secara statistik.

Laporan etika
Clearance etis untuk melakukan penelitian ini adalah
diberikan oleh Institutional Review Board of Sokoine
Universitas Pertanian (SUA / FVM / R.1 / 9) dan Komite Koordinasi Penelitian
Medis Nasional
Lembaga Penelitian Medis, nomor referensi
Nimr / HQ / R8a / vol.ix / 1627. Izin untuk melakukan
studi di Taman Nasional dan kawasan lindung
dicari dan diberikan oleh Tanzania Wildlife Penelitian
Institute (Tawiri) dan Petugas di Charge dari
Tanzania National Park (TANAPA). Izin untuk melakukan studi di wilayah
Katavi; dan Mpanda, Mlele
dan Nsimbo kabupaten otoritas dicari dan
diberikan oleh petugas peternakan daerah dan kabupaten untuk
studi hewan dan petugas medis regional dan kabupaten untuk studi manusia
masing-masing. Selain itu,
persetujuan verbal dicari dari masing-masing peserta setelah
penulis telah menjelaskan tujuan dari studi mereka.
Verbal persetujuan daripada ditulis dicari sejak
jumlah agro-peternak di daerah penelitian tidak
terpelajar. Penelitian ini ditaati Tanzania Hewan WelfareAct [61] Pemerintah
andtotheguidelinesadaptedtotheAustralian [62].